CN114177116A

CN114177116A - 一种水杨酸纳米组合物及其制备方法和应用

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Publication number: CN114177116A
Application number: CN202111266430.4A
Authority: CN
Inventors: 刘卫; 何益飞; 鲁旺旺; 陈家玲; 刘倩; 王曦; 吴航航; 吴雨桐; 沈慧慧
Original assignee: Guangzhou Jiyan Cosmetics Technology Co ltd; Wuhan Best Carrier Biotechnology Co ltd
Current assignee: Guangzhou Jiyan Cosmetics Technology Co ltd; Wuhan Best Carrier Biotechnology Co ltd
Priority date: 2021-10-28
Filing date: 2021-10-28
Publication date: 2022-03-15
Anticipated expiration: 2041-10-28
Also published as: CN114177116B

Abstract

本发明提供了一种水杨酸纳米组合物，成分为：6～50wt％的水杨酸，1～20wt％的液体脂质，所述液体脂质为甘油三酯，1～20wt％的天然植物油脂，1～20wt％的乳化剂，10～40wt％的助乳化剂，余量为水。本发明提供的水杨酸纳米组合物中含有甘油三酯，在粉刺等炎症部位，脂肪酶可通过降解甘油三酯纳米载体基质材料，触发纳米载体分解释放水杨酸，实现控制释放，本发明提供的水杨酸纳米组合物可在角质层缓释，在炎症部位快速控释。本发明还提供了一种水杨酸纳米组合物的制备方法和应用。

Description

一种水杨酸纳米组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，尤其涉及一种水杨酸纳米组合物及其制备方法和应用。

背景技术

水杨酸是一种脂溶性的有机酸，化学式为C₇H₆O₃。存在于自然界的柳树皮、白珠树叶及甜桦树中，是重要的精细化工原料，可用于阿司匹林等药物的制备。在化妆品行业，水杨酸具有剥脱角质，光滑皮肤，淡化色斑的功效，其主要通过溶解角质层间粘合质，使未能正常脱落的老旧角质细胞脱落，起到加快角质层脱落和黑色素代谢的作用，可用于美白产品中。水杨酸还能用于清除粉刺痤疮，主要依赖于其能够通过皮脂腺深入毛孔，溶解油脂，清除黑头粉刺，改善毛孔堵塞情况，此外，水杨酸对于毛囊炎症及致使皮肤化脓或感染的痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌等有抑菌和杀菌作用，能够有效改善和治疗痤疮。

水杨酸溶解度极低，护肤品中很难达到有效浓度，很多水杨酸产品只是概念性添加，成分浓度不够，产品效果不佳。高浓度的水杨酸对皮肤有很强的刺激性，尽管目前护肤品中水杨酸添加浓度通常是0.5～2％，但仍有不少消费者反应使用后会产生红斑、瘙痒或刺痛等现象。水杨酸由于其溶解度低难以添加于水基化妆品产品中，对化妆品基质体系降粘，或者添加后容易产生析出、高温稳定性差等问题不利于化妆品的应用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种水杨酸纳米组合物及其制备方法和应用，本发明提供的水杨酸纳米组合物载药量高，包裹的高浓度水杨酸能在角质层缓慢释放，延长了水杨酸的作用时间，在炎症部位快速释放，显著增强了抗炎祛痘效果。

本发明提供了一种水杨酸纳米组合物，成分为：

6～50wt％的水杨酸；

1～20wt％的液体脂质，所述液体脂质为甘油三酯；

1～20wt％的天然植物油脂；

1～20wt％的乳化剂；

10～40wt％的助乳化剂；

余量为水。

优选的，所述液体脂质选自辛酸/癸酸甘油三酯、棕榈酸甘油三酯、1,3- 二油酸-2-棕榈酸甘油三酯、肉豆蔻酸甘油三酯、辛酸/癸酸/琥珀酸甘油三酯、二十二烷酸甘油三酯、甘油三(乙基己酸)酯、氢化椰油酸甘油酯、油酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/癸酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/癸酸/月桂酸甘油三酯和辛酸/癸酸/硬脂酸甘油三酯中的一种或几种。

优选的，所述天然植物油脂选自茶籽油、葡萄籽油、橄榄油、杏仁油、鳄梨油、山茶花油、麦芽油、亚麻籽油、霍霍巴籽油、夏威夷果油和金盏花油中的一种或几种。

优选的，所述乳化剂选自卵磷脂、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-10二棕榈酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、硬脂酰乳酰乳酸钠、山梨醇月桂酸酯和椰油基葡糖苷中的一种或几种。

优选的，所述助乳化剂选自月桂醇聚醚-23、二乙二醇单乙基醚、PPG- 26-丁醇聚醚-26、十三烷醇聚醚-12、1,3-丙二醇、1,2-戊二醇、1,2-己二醇、二丙二醇、甘油和丁二醇中的一种或几种。

优选的，所述水杨酸纳米组合物的粒径为10～100nm。

本发明提供了一种上述技术方案所述的水杨酸纳米组合物的制备方法，包括：

将水杨酸、液体脂质、天然植物油脂和部分助乳化剂混合，得到油相；

将乳化剂、剩余助乳化剂和水混合，得到水相；

将所述油相与水相混合乳化后进行微米化处理，得到微米级分散体；

将所述微米级分散体进行纳米化处理，得到水杨酸纳米组合物。

优选的，所述得到油相过程中混合后还包括：

将得到的混合物进行低压均质处理。

优选的，所述低压均质处理的压力为200～600bar。

本发明提供了一种化妆品，包括：上述技术方案所述的水杨酸纳米组合物。

本发明提供的水杨酸纳米组合物能在皮肤持续缓释，并能靶向输送至粉刺等炎症部位，在炎症部位控制释放，其机理为：水杨酸纳米组合物能通过细胞间脂质渗透进角质层，随着时间的推移，包裹的高浓度水杨酸会扩散出去，实现持续缓释，进而延长水杨酸的作用时间；在粉刺等炎症部位血管通透性增强，内皮细胞之间间隙增大，因此纳米载体可通过炎症区松弛的血管输送至病灶部位并在病灶部位大量聚集，实现水杨酸在炎症部位的被动靶向输送；皮肤上有非常活跃的特殊酶，如脂肪酶，脂肪酶是一类特殊的酯酶，能水解甘油三酯为脂肪酸、二酸甘油酯及甘油等，本发明中的液体脂质为甘油三酯，脂肪酶可通过降解甘油三酯纳米载体基质材料，触发纳米载体分解释放水杨酸；在粉刺等炎症部位，脂肪酶的活性会明显提高，因此纳米载体可以集中在炎症部位释放水杨酸，实现快速控制释放，显著提高祛痘消炎效果。

本发明提供的水杨酸纳米组合物及其水稀释液在4℃、45℃、10℃紫外线辐照(光照度4000lux)、常温各放置3个月后，纳米组合物的性状及粒径、粒径分布PDI未发生显著性变化，纳米组合物的水稀释液未发生析出结晶、团聚等现象，本发明提供的水杨纳米组合物及其水稀释液稳定性好。

与市售水杨酸-水凝胶和水杨酸-多糖接枝物两种改性水杨酸相比，本发明提供的水杨酸纳米组合物对皮肤无刺激性，安全性更高；与水溶液、凝胶、精华等基质的配伍性及稳定性更优；具有更好的缓释效应，能延长水杨酸在角质层的作用时间；可以在炎症部位高浓度释放水杨酸，实现控制释放；抑菌效果更优。

附图说明

图1为本发明实施例10制备的水杨酸纳米组合物在常温、4℃、45℃、10℃ 紫外线辐照(光照度4000lux)条件下放置3个月前后状态图；

图2为本发明实施例10制备的水杨酸纳米组合物的水稀释液在常温、 4℃、45℃、10℃紫外线辐照(光照度4000lux)条件下放置3个月前后状态图；

图3为游离水杨酸、水杨酸-407水凝胶、水杨酸-多糖接枝物和实施例8制备的水杨酸纳米组合物体外释放百分比检测结果；

图4为水杨酸-407水凝胶、水杨酸-多糖接枝物、以及实施例8、对比例 4、对比例5制备的水杨酸纳米组合物在胰脂肪酶作用下体外释放百分比检测结果；

图5为对比例10制备的FITC标记纳米组合物的细胞摄取检测结果；

图6为对比例10制备的FITC标记纳米组合物的细胞靶向能力检测结果。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员经改进或润饰的所有其它实例，都属于本发明保护的范围。应理解，本发明实施例仅用于说明本发明的技术效果，而非用于限制本发明的保护范围。实施例中，所用方法如无特别说明，均为常规方法。

本发明提供了一种水杨酸纳米组合物，成分为：

6～50wt％的水杨酸；

1～20wt％的液体脂质，所述液体脂质为甘油三酯；

1～20wt％的天然植物油脂；

1～20wt％的乳化剂；

10～40wt％的助乳化剂；

余量为水。

在本发明中，所述水杨酸的质量含量优选为10～40％，更优选为 25～35％，最优选为30％。

在本发明中，所述水杨酸具有剥脱角质，光滑皮肤，淡化色斑的功效，可用于美白产品中用于清除粉刺，改善毛孔堵塞情况，水杨酸对于毛囊炎症及致使皮肤化脓或感染的痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌等有抑菌和杀菌作用，能够有效改善和治疗痤疮。

本发明提供的水杨酸纳米组合物中水杨酸载药量高，在化妆品基质中少量添加就能得到含2％的水杨酸成品，能够防止化妆品基质体系降黏；现有水杨酸包裹技术中水杨酸载药量低，要得到2％的水杨酸成品，需添加高含量的载体到化妆品基质中，对化妆品基质体系影响较大，还会严重降黏。

本发明提供的水杨酸纳米组合物载药量高，能以任意比例溶解于水中，易于添加到化妆品基质中，解决了水杨酸溶解度低、对化妆品基质体系降粘、高温下稳定性差等难以应用于护肤品中的问题。

在本发明中，所述液体脂质的质量含量优选为2～15％，更优选为 5～10％，最优选为6～8％。

在本发明中，所述液体脂质优选选自辛酸/癸酸甘油三酯、棕榈酸甘油三酯、1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯、肉豆蔻酸甘油三酯、辛酸/癸酸/琥珀酸甘油三酯、二十二烷酸甘油三酯、甘油三(乙基己酸)酯、氢化椰油酸甘油酯、油酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/癸酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/癸酸/月桂酸甘油三酯和辛酸/癸酸/硬脂酸甘油三酯中的一种或几种；更优选选自辛酸/癸酸甘油三酯、棕榈酸甘油三酯、1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯、辛酸/癸酸/琥珀酸甘油三酯、油酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/癸酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/癸酸/ 月桂酸甘油三酯和辛酸/癸酸/硬脂酸甘油三酯中的一种或几种，最优选选自辛酸/癸酸甘油三酯、棕榈酸甘油三酯、1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯、辛酸/ 癸酸/琥珀酸甘油三酯、油酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/癸酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/癸酸/月桂酸甘油三酯和辛酸/癸酸/硬脂酸甘油三酯中的两种。

在本发明中，所述液体脂质优选选自辛酸/癸酸甘油三酯、油酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/癸酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/癸酸/月桂酸甘油三酯和辛酸/癸酸/硬脂酸甘油三酯中的一种。

在本发明中，所述液体脂质更优选选自辛酸/癸酸甘油三酯和油酸/亚油酸甘油三酯的组合物，或辛酸/癸酸甘油三酯和辛酸/癸酸/月桂酸甘油三酯的组合物，或辛酸/癸酸甘油三酯和辛酸/癸酸/亚油酸甘油三酯的组合物。在本发明中，上述两种液体脂质组合物具有协同作用，两者同时使用能使纳米组合物具有更好的控释效应。

在本发明中，液体脂质为脂肪酸甘油三酯，在脂肪酶活性高的炎症部位，脂肪酸甘油三酯能被脂肪酶水解，进而使纳米组合物释放出水杨酸，实现控释；亚油酸、亚麻酸具有一定的抗炎、抗刺激作用，痤疮患者大量分泌的皮脂稀释了皮肤上的亚油酸，亚油酸相对缺乏在粉刺形成中有一定推进作用，油酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/癸酸/亚油酸甘油三酯被脂肪酶水解后能产生相应的亚油酸，对粉刺痤疮的清除起到一定的辅助作用。

本发明采用纳米药物靶向载体制剂技术制备的水杨酸纳米组合物，能渗透进皮肤角质层并在角质层持续缓释，延长了水杨酸的作用时间；纳米组合物可通过炎症区松弛的血管输送至粉刺痤疮等部位并大量聚集，实现水杨酸在炎症部位的被动靶向输送；在脂肪酶活性高的炎症部位，纳米组合物中的甘油三酯被脂肪酶水解进而释放出水杨酸，实现控释，有效减小了水杨酸的刺激性，显著增强了其抗炎祛痘效果。

在本发明中，所述天然植物油脂的质量含量优选为2～15％，更优选为 5～10％，最优选为6～8％。

在本发明中，所述天然植物油脂优选选自茶籽油、葡萄籽油、橄榄油、杏仁油、鳄梨油、山茶花油、麦芽油、亚麻籽油、霍霍巴籽油、夏威夷果油和金盏花油中的一种或几种；更优选选自茶籽油、葡萄籽油、橄榄油、杏仁油、山茶花油、亚麻籽油、霍霍巴籽油、夏威夷果油和金盏花油中的一种或几种；最优选选自茶籽油、葡萄籽油、橄榄油、杏仁油、山茶花油、亚麻籽油、霍霍巴籽油、夏威夷果油和金盏花油中的两种。

在本发明中，所述天然植物油脂优选选自橄榄油、亚麻籽油、霍霍巴籽油和金盏花油中的一种。

在本发明中，所述天然植物油脂更优选选自亚麻籽油和霍霍巴籽油的组合物，或杏仁油和山茶花油的组合物，或橄榄油和金盏花油的组合物。

在本发明中，所述天然植物油脂具有很强的保湿效果，能够有效缓解水杨酸造成的皮肤干燥问题，并且对水杨酸的溶解起到辅助作用。天然植物油脂具有较好的皮肤保湿、舒缓等功效，能够有效缓解水杨酸造成的皮肤干燥问题。同时，许多天然油脂具有各种护肤功效，如杏仁油能够软化、紧致、清洁、润泽皮肤；霍霍巴油与人体皮脂成分类似，可以用于治疗皮肤问题，还能够有效防止表层水分流失增加皮肤水润度；山茶花油含有油酸成分，具有抗氧化的作用，还对过敏性皮肤有很强的治愈效果；鳄梨油含有丰富的蛋白质、氨基酸及维生素，可以帮助皮肤维持水润柔滑，促进结合组织胶原蛋白的增加和皮肤再生；金盏花油可以用于治疗受损皮肤、具有很强的再生、抗炎功效。而且，天然植物油脂对水杨酸的溶解起到辅助作用，与液体脂质可以协同增效，更好地溶解水杨酸，使纳米载体具有高浓度的水杨酸。

在本发明中，所述乳化剂的质量含量优选为2～15％，更优选为5～10％，最优选为6～8％。

在本发明中，所述乳化剂选自优选选自卵磷脂、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-10二棕榈酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、硬脂酰乳酰乳酸钠、山梨醇月桂酸酯和椰油基葡糖苷中的一种或几种；更优选选自卵磷脂、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、硬脂酰乳酰乳酸钠、山梨醇月桂酸酯和椰油基葡糖苷中的一种或几种；最优选选自卵磷脂、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、硬脂酰乳酰乳酸钠、山梨醇月桂酸酯和椰油基葡糖苷中的两种。

在本发明中，所述乳化剂优选选自卵磷脂、聚甘油-10肉豆蔻酸酯和聚氧乙烯氢化蓖麻油中的一种。

在本发明中，所述乳化剂更优选选自聚甘油-10肉豆蔻酸酯和聚氧乙烯氢化蓖麻油的组合物，或硬脂酰乳酰乳酸钠和山梨醇月桂酸酯的组合物，或卵磷脂和聚氧乙烯氢化蓖麻油的组合物。

在本发明中，所述助乳化剂的质量含量优选为10～40％，更优选为 15～35％，更优选为20～30％，最优选为25％。

在本发明中，所述助乳化剂优选选自月桂醇聚醚-23、二乙二醇单乙基醚、PPG-26-丁醇聚醚-26、十三烷醇聚醚-12、1,3-丙二醇、1,2-戊二醇、1,2- 己二醇、二丙二醇、甘油和丁二醇中的一种或几种；更优选选自月桂醇聚醚- 23、二乙二醇单乙基醚、PPG-26-丁醇聚醚-26、1,3-丙二醇、1,2-戊二醇、 1,2-己二醇、二丙二醇和丁二醇中的一种或几种；最优选选自二乙二醇单乙基醚、PPG-26-丁醇聚醚-26、1,3-丙二醇、1,2-戊二醇、1,2-己二醇、二丙二醇和丁二醇中的两种或三种。

在本发明中，所述助乳化剂更优选选自1,3-丙二醇和1,2-戊二醇的组合物，或二乙二醇单乙基醚和丁二醇的组合物，或1,3-丙二醇和1,2-己二醇的组合物，或1,3-丙二醇和二乙二醇单乙基醚的组合物。

在本发明中，所述助乳化剂最优选选自1,3-丙二醇、1,2-己二醇和1,2-戊二醇的组合物，或二乙二醇单乙基醚、PPG-26-丁醇聚醚-26和二丙二醇的组合物，或1,3-丙二醇、1,2-戊二醇和二乙二醇单乙基醚的组合物。在本发明中，上述助乳化剂组合物具有协同作用，上述助乳化剂组合使用能提高水杨酸的溶解性，进而提高纳米组合物的载药量。

在本发明中，所述助乳化剂既能够提高油水界面膜的柔顺性和牢固性，又可增加乳化剂的溶解性，协助乳化剂调节亲油亲水平衡值，降低界面张力从而使纳米乳自发形成，降低整个体系的黏度，还能改善水杨酸的溶解性和水分散性，进而使本发明提供的水杨酸纳米组合物具有较高的水杨酸载药量。

在本发明中，所述水优选为纯化水。

在本发明中，所述水杨酸纳米组合物的粒径优选为10～100nm，更优选为10～50nm，最优选为10～30nm。

本发明采用纳米乳作为载体，纳米乳粒径更小，具有更好的抗炎功效。

将乳化剂、剩余助乳化剂和水混合，得到水相；

在本发明中，所述油相制备过程中的混合优选在水浴的条件下进行；所述混合的温度优选为20～70℃，更优选为30～60℃，最优选为40～50℃。

在本发明中，所述制备油相过程中混合后优选还包括：

将得到的混合物进行低压均质处理，得到油相。

在本发明中，所述低压均质处理能够提高水杨酸的溶解性，从而进一步提高纳米组合物中水杨酸的载药量。

在本发明中，所述低压均质处理过程中的压力优选为200～600bar，更优选为300～500bar，最优选为400bar；循环次数优选为1～10次，更优选为2～8 次，最优选为3～5次；温度优选为20～70℃，更优选为30～60℃，最优选为 40～50℃。

在本发明中，所述部分助乳化剂和剩余助乳化剂的质量比优选为 (1～30)：(1～10)，更优选为(5～25)：(2～8)，最优选为(10～20)： (3～6)。

在本发明中，所述水相制备过程中的混合优选在水浴条件下进行；所述混合的温度优选为20～70℃，更优选为30～60℃，最优选为40～50℃。

在本发明中，所述混合乳化的方法优选包括：

将所述水相滴加到所述油相中。

在本发明中，所述滴加的速度优选为1～10滴/秒，更优选为3～6滴/秒，最优选为4～5滴/秒。

在本发明中，所述混合乳化优选在搅拌的条件下进行；所述搅拌的速度优选为400～800r/min，更优选为500～700r/min，最优选为600r/min；所述混合乳化的温度优选为20～70℃，更优选为30～60℃，最优选为40～50℃。

在本发明中，所述微米化处理的方法优选包括：高速剪切乳化。

在本发明中，所述高速剪切乳化过程中的剪切转速优选为3000～10000 rpm，更优选为4000～8000rpm，最优选为5000～7000rpm；剪切时间优选为 1～10min，更优选为3～8min，最优选为4～6min。

在本发明中，所述微米化分散体粒径优选为1～100微米，更优选为1～50 微米，更优选为5～40微米，更优选为10～30微米。

在本发明中，所述纳米化处理的方法优选包括：

高压均质处理或高速微射流处理。

在本发明中，所述高压均质处理过程中的压力优选为600～1500bar，更优选为700～1200bar，最优选为800～1000bar；循环次数优选为1～10次，更优选为2～8次，最优选为3～5次；温度优选为20～70℃，更优选为30～60℃，最优选为40～50℃。

在本发明中，所述高速微射流处理过程中的压力优选为6000～16000 psi，更优选为8000～14000psi，最优选为10000～12000psi；循环次数优选为 1～10次，更优选为2～8次，最优选为3～5次；温度优选为20～70℃，更优选为 30～60℃，最优选为40～50℃。

在本发明中，所述水杨酸纳米组合物在化妆品中的质量含量优选为 1～20％，更优选为5～10％，最优选为6～8％。

在本发明中，所述化妆品优选具有美白、淡斑、祛痘、去黑头、缩小毛孔等功效。

在本发明中，所述化妆品的形式包括但不限于化妆水、膏霜、膏霜、乳液、面膜和凝胶。

本发明对所述化妆品的制备方法没有特殊的限制，可直接将所述水杨酸纳米组合物添加于各类美白、淡斑、祛痘、去黑头、缩小毛孔等化妆品的基质中，使用方便。

本发明通过纳米药物靶向载体制剂技术将高浓度水杨酸负载于纳米载体中，以此制备的纳米组合物载药量高，能以任意比例溶解于水中，并且在能在皮肤中缓释、控释，极大程度减小了水杨酸的刺激性，进而可增加水杨酸在化妆品中的添加量。

下面结合实施例对本发明提供的水杨酸纳米组合物进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。以下实施例，如无特殊说明，所提及的百分含量均为相应组分在水杨酸纳米组合物中所占质量的比例。

实施例1

将6wt％水杨酸、2wt％甘油三(乙基己酸)酯、8wt％茶籽油、3wt％月桂醇聚醚-23、4wt％十三烷醇聚醚-12在温度为20℃水浴条件下混合溶解，在压力为200bar的条件下进行低压均质处理，循环1次，得到油相；

将2wt％聚甘油-10二棕榈酸酯、3wt％1,3-丙二醇与72wt％水混合，在温度为20℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相；

将上述水相以2滴/秒的速度滴加至油相中并在400r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为3000rpm的条件下高速剪切乳化1min，得到微米级分散体；

将上述微米级分散体在20℃、压力为800bar的条件下进行高压均质处理，循环8次，冷却至室温，得到水杨酸纳米组合物。

采用Zetasizer Nano-ZS90激光粒度仪对本发明实施例1制备的水杨酸纳米组合物的粒径进行检测，检测结果为，本发明实施例1制备的水杨酸纳米组合物粒径为12.5nm。

实施例2

将15wt％水杨酸、4wt％油酸/亚油酸甘油三酯、20wt％葡萄籽油、10wt％PPG-26-丁醇聚醚-26在温度为30℃水浴条件下混合溶解，在压力为300 bar的条件下进行低压均质处理，循环2次，得到油相；

将18wt％聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、5wt％甘油与28wt％水混合，在温度为30℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相；

将上述水相以1滴/秒的速度滴加至油相中并在400r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为4000rpm的条件下高速剪切乳化3min，得到微米级分散体；

将上述微米级分散体在30℃、压力为900bar的条件下进行高压均质处理，循环6次，冷却至室温，得到水杨酸纳米组合物。

按照实施例1的方法对本发明实施例2制备的水杨酸纳米组合物的粒径进行检测，检测结果为，本发明实施例2制备的水杨酸纳米组合物的粒径为15.5 nm。

实施例3

将20wt％水杨酸、5wt％辛酸/癸酸/亚油酸甘油三酯、12wt％鳄梨油、 10wt％1,2-己二醇、5wt％1,2-戊二醇在温度为40℃水浴条件下混合溶解，在压力为400bar的条件下进行低压均质处理，循环3次，得到油相；

将8wt％卵磷脂、5wt％1,3-丙二醇与35wt％水混合，在温度为40℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相；

将上述水相以4滴/秒的速度滴加至油相中并在500r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为5000rpm的条件下高速剪切乳化2min，得到微米级分散体；

将上述微米级分散体在40℃、压力为1000bar的条件下进行高压均质处理，循环4次，冷却至室温，得到水杨酸纳米组合物。

按照实施例1的方法对本发明实施例3制备的水杨酸纳米组合物的粒径进行检测，检测结果为，本发明实施例3制备的水杨酸纳米组合物粒径为24.7 nm。

实施例4

将25wt％水杨酸、5wt％辛酸/癸酸甘油三酯、5wt％辛酸/癸酸/月桂酸甘油三酯、6wt％麦芽油、10wt％二乙二醇单乙基醚、5wt％1,2-戊二醇在温度为 50℃水浴条件下混合溶解，在压力为400bar的条件下进行低压均质处理，循环4次，得到油相；

将6wt％聚甘油-10肉豆蔻酸酯、6wt％聚氧乙烯氢化蓖麻油、10wt％1,3- 丙二醇与22％水混合，在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相；

将上述水相以3滴/秒的速度滴加至油相中并在500r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为6000rpm的条件下高速剪切乳化4min，得到微米级分散体；

将上述微米级分散体在50℃、压力为1100bar的条件下进行高压均质处理，循环5次，冷却至室温，得到水杨酸纳米组合物。

按照实施例1的方法对本发明实施例4制备水杨酸纳米组合物的粒径进行检测，检测结果为，本发明实施例4制备的水杨酸纳米组合物粒径为30.4 nm。

实施例6

将35wt％水杨酸、3wt％棕榈酸甘油三酯、3wt％1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯、5wt％橄榄油、5wt％金盏花油、15wt％1,2-己二醇、10wt％1,2-戊二醇在温度为60℃水浴条件下混合溶解，在压力为500bar的条件下进行低压均质处理，循环6次，得到油相；

将2wt％卵磷脂、4wt％聚氧乙烯氢化蓖麻油、10wt％1,3-丙二醇与8wt％水混合，在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相；

将上述水相以6滴/秒的速度滴加至油相中并在600r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为7000rpm的条件下高速剪切乳化5min，得到微米级分散体；

将上述微米级分散体在60℃、压力为10000psi的条件下进行高速微射流处理，循环5次，冷却至室温，得到水杨酸纳米组合物。

按照实施例1的方法，对本发明实施例6制备的水杨酸纳米组合物的粒径进行检测，检测结果为，本发明实施例6制备的水杨酸纳米组合物粒径为64.6 nm。

实施例7

将45wt％水杨酸、5wt％肉豆蔻酸甘油三酯、7wt％辛酸/癸酸/琥珀酸甘油三酯、2wt％亚麻籽油、3wt％霍霍巴籽油、20wt％1,2-戊二醇在温度为70℃水浴条件下混合溶解，在压力为600bar的条件下进行低压均质处理，循环8 次，得到油相；

将10wt％聚氧乙烯氢化蓖麻油、5wt％1,3-丙二醇与3wt％水混合，在温度为70℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相；

将上述水相以8滴/秒的速度滴加至油相中并在700r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为9000rpm的条件下高速剪切乳化7min，得到微米级分散体；

将上述微米级分散体在70℃、压力为12000psi的条件下进行高速微射流处理，循环3次，冷却至室温，得到水杨酸纳米组合物。

按照实施例1的方法，对本发明实施例7制备的水杨酸纳米组合物的粒径进行检测，检测结果为，本发明实施例7制备的水杨酸纳米组合物粒径为91.3 nm。

实施例8

将30wt％水杨酸、9wt％辛酸/癸酸甘油三酯、9wt％油酸/亚油酸甘油三酯、1wt％杏仁油、1wt％山茶花油、10wt％1,2-己二醇、10wt％1,2-戊二醇、在温度为50℃水浴条件下混合溶解，在压力为400bar的条件下进行低压均质处理，循环5次，得到油相；

将5wt％硬脂酰乳酰乳酸钠、10wt％山梨醇月桂酸酯、10wt％1,3-丙二醇与5％水混合，在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相；

将上述水相以5滴/秒的速度滴加至油相中并在500r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为5000rpm的条件下高速剪切乳化5min，得到微米级分散体；

将上述微米级分散体在50℃、压力为9000psi的条件下进行高速微射流处理，循环6次，冷却至室温，得到水杨酸纳米组合物。

按照实施例1的方法，对本发明实施例8制备的水杨酸纳米组合物的粒径进行检测，检测结果为，本发明实施例8制备的水杨酸纳米组合物粒径为42.9 nm。

实施例9

将40wt％水杨酸、5wt％二十二烷酸甘油三酯、10wt％氢化椰油酸甘油酯、3wt％亚麻籽油、4wt％霍霍巴籽油、15wt％二乙二醇单乙基醚在温度为 60℃水浴条件下混合溶解，在压力为500bar的条件下进行低压均质处理，循环7次，得到油相；

将4wt％聚甘油-10肉豆蔻酸酯、3wt％聚氧乙烯氢化蓖麻油、5wt％1,3-丙二醇与11wt％水混合，在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相；

将上述水相以7滴/秒的速度滴加至油相中并在700r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为8000rpm的条件下高速剪切乳化8min，得到微米级分散体；

将上述微米级分散体在60℃、压力为11000psi的条件下进行高速微射流处理，循环4次，冷却至室温，得到纳米组合物。

按照实施例1的方法，对本发明实施例9制备的水杨酸纳米组合物的粒径进行检测，检测结果为，本发明实施例9制备的水杨酸纳米组合物粒径为87.3 nm。

实施例10

将50wt％水杨酸、8wt％辛酸/癸酸/月桂酸甘油三酯、3wt％亚麻籽油、 20wt％二乙二醇单乙基醚在温度为70℃水浴条件下混合溶解，在压力为600 bar的条件下进行低压均质处理，循环10次，得到油相；

将6wt％聚甘油-10肉豆蔻酸酯、10wt％丁二醇与3wt％水混合，在温度为 70℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相；

将上述水相以10滴/秒的速度滴加至油相中并在800r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为10000rpm的条件下高速剪切乳化10min，得到微米级分散体；

将上述微米级分散体在70℃、压力为13000psi的条件下进行高速微射流处理，循环2次，冷却至室温，得到水杨酸纳米组合物。

按照实施例1的方法，对本发明实施例10制备的水杨酸纳米组合物的粒径进行检测，检测结果为，本发明实施例10制备的水杨酸纳米组合物粒径为 98.3nm。

实施例11

将10wt％水杨酸、7wt％辛酸/癸酸/硬脂酸甘油三酯、10wt％亚麻籽油、 5wt％霍霍巴籽油、10wt％1,2-己二醇、5wt％1,2-戊二醇在温度为50℃水浴条件下混合溶解，在压力为600bar的条件下进行低压均质处理，循环4次，得到油相；

将4wt％聚氧乙烯氢化蓖麻油、5wt％1,3-丙二醇与44wt％水混合，在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相；

将上述微米级分散体在50℃、压力为9000psi的条件下进行高速微射流处理，循环5次，冷却至室温，得到水杨酸纳米组合物。

按照实施例1的方法，对本发明实施例11制备的水杨酸纳米组合物的粒径进行检测，检测结果为，本发明实施例11制备的水杨酸纳米组合物粒径为 14.9nm。

实施例12

将实施例7～10制备得到的水杨酸纳米组合物及其水稀释液(质量分数为 10％)置于密闭容器中，在常温、4℃、45℃、10℃紫外线辐照(光照度4000 lux)条件下各放置3个月，检查样品在贮存前后各条件下的性状，测试水杨酸纳米组合物在贮存前后各条件下的粒径，实验结果如表1所示，实施例10制得的水杨酸纳米组合物及其水稀释液在贮存前后外观如图1、图2所示。

表1实施例7～10制备的水杨酸纳米组合物及其水稀释液稳定性试验结果

由表1可知，本发明实施例制备的水杨酸纳米组合物无团聚、分层现象，粒径在10～100nm之间，满足实际应用要求。水杨酸纳米组合物及其水稀释液在常温、4℃、45℃、10℃紫外线辐照(光照度4000lux)条件下各放置3 个月后也未出现团聚分层现象，并且纳米组合物粒径未发生显著性变化，仍然满足实际应用需求，尤其在活性成分浓度高的情况下载体和水稀释液仍然较稳定，未发现结晶析出现象，无活性成分泄漏。由图1、图2可知，实施例 10制备的水杨酸纳米组合物及其水稀释液在贮存前后外观基本不变，无变色、无析出、无分层现象。因此，本发明提供的水杨酸纳米组合物具有良好的稳定性，并且能稳定复配于水剂产品中。

对比例1

制备空白霜剂：将5wt％辛酸/癸酸甘油三酯、5wt％白油、2wt％十六十八醇、2wt％硬脂醇聚醚-2、2wt％硬脂醇聚醚-21于75℃水浴中加热熔融后得到油相；

将5wt％1,3-丙二醇、0.15wt％卡波姆和余量的纯化水于75℃水浴溶解，得到水相；

于75℃条件下将上述油相以5滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为800rpm，混合完成后于10000rpm转速下剪切乳化3min，加入 0.15wt％三乙醇胺，继续剪切2min，冷却后加入0.5wt％苯氧乙醇，搅拌均匀，得到空白霜剂。

实施例13

将市售产品两种改性水杨酸：水杨酸-407水凝胶和水杨酸-多糖接枝物与实施例7～10制备的水杨酸纳米组合物样品，分别与对比例1中的空白霜剂按照质量百分含量比1:9进行复配，进行皮肤刺激性试验：

取健康家兔42只，体重(2.0±0.2)kg，随机分为7组，每组动物6只，于实验前24h将家兔背部皮肤两侧去毛，去毛后24h检查去毛皮肤是否受伤，受伤皮肤不宜做皮肤刺激性试验。每天涂抹使用实验样品霜剂3次，连续涂抹7 天，同时涂抹空白霜剂(不给予任何药物)进行对照，观察试验结果，试验结果如表2所示。

表2两种改性水杨酸和实施例7～10制备的样品霜剂及空白组皮肤刺激性观察结果

“+”家兔皮肤充血、红肿；“++”表示充血、红肿现象仍在，但有增加趋势； “—”表示无充血、红肿现象。

根据表2中的试验结果可以看出，使用实施例7～10制备的水杨酸纳米组合物制备的复合霜剂及空白霜剂涂抹于家兔皮肤后均无充血、红肿现象，说明本发明提供的水杨酸纳米组合物对皮肤没有刺激性；使用水杨酸-407水凝胶和水杨酸-多糖接枝物制备的复合霜剂涂抹于家兔皮肤后皮肤有充血、红肿现象，并且充血、红肿现象持续存在，说明这两种改性水杨酸对皮肤有一定的刺激性。

对比例2

制备空白凝胶：将0.3wt％卡波姆980、5wt％丙二醇、3wt％丁二醇与 90.9wt％水在75℃水浴下混合溶解，冷却后加入0.3wt％三乙醇胺和0.5wt％苯氧乙醇，搅拌均匀，得到空白凝胶。

对比例3

制备空白精华：将0.15wt％卡波姆941、5wt％丙二醇、3wt％丁二醇与 91.2wt％水在75℃水浴下混合溶解，冷却后加入0.15wt％三乙醇胺和0.5wt％苯氧乙醇，搅拌均匀，得到空白精华。

实施例14

将市售产品水杨酸-407水凝胶和水杨酸-多糖接枝物两种改性水杨酸与实施例8～10制备的水杨酸纳米组合物样品进行水溶液、凝胶(按照对比例2方法制备)、精华(按照对比例3方法制备)复配(各样品质量百分含量为 10％)，测试各样品复配性能及稳定性。复配样品置于密闭容器中，在常温、4℃、45℃、10℃紫外线辐照(光照度4000lux)条件下各放置3个月，检查样品在贮存前后各条件下的外观，实验结果如表3所示。

表3水杨酸-407水凝胶、水杨酸-多糖接枝物和实施例8～10制备的水杨酸纳米组合物复配试验结果

从表3可以看出，水杨酸-407水凝胶和实施例8～10制备的水杨酸纳米组合物与水溶液、精华、凝胶复配性能较好，都是透明状态，而水杨酸-多糖接枝物与凝胶复配呈浑浊状态，配伍性较差；各样品在常温、4℃、45℃、10℃紫外线辐照(光照度4000lux)条件下各放置3个月后，实施例8～10制备的水杨酸纳米组合物与水溶液、精华、凝胶复配样品皆透明无析出，稳定性良好，而水杨酸-407水凝胶和水杨酸-多糖接枝物在4℃、45℃、10℃紫外线辐照(光照度 4000lux)条件下都有样品出现浑浊、析出现象，复配样品稳定性较差。实验表明，本发明提供的水杨酸纳米组合物与市场上改性水杨酸相比，配伍性和稳定性更优。

实施例15纳米组合物缓释行为研究

采用透析袋法来研究纳米组合物对水杨酸的体外释放行为，根据药典的指导，选择满足漏槽条件的含有20％丙二醇水溶液作为释放介质。透析袋 (截留分子量为3500Da)在使用前先用超纯水煮沸5min并用50％乙醇溶液浸泡过夜。取游离水杨酸、水杨酸-407水凝胶、水杨酸-多糖接枝物和实施例 8制备的水杨酸纳米组合物的分散液5g置于透析袋中(用水稀释各样品至水杨酸浓度相同)，两端用透析袋夹子封口，放入含有80mL释放介质的蓝口瓶中，并将蓝口瓶放置于摇床中，在37℃下，100rpm振荡12h，分别于1、 2、4、6、8、10和12h取样1mL，并随即补充相同体积的释放介质。采用 HPLC法测定不同时间点的取样中水杨酸的浓度，计算累积释放百分比。实验结果如图3所示。

实施例8制备的水杨酸纳米组合物与游离水杨酸浓度相同，由图3可知，纳米组合物释放速率比游离水杨酸明显减缓，说明水杨酸经纳米包载后呈现出缓释效应，水杨酸纳米组合物能通过细胞间脂质渗透进角质层，随着时间的推移，包裹的高浓度水杨酸会扩散出去，实现持续缓释，进而延长水杨酸的作用时间；由图3可知，与市售产品水杨酸-407水凝胶、水杨酸-多糖接枝物相比，实施例8制备的水杨酸纳米组合物缓释效果更为显著，缓释性能更优。

对比例4

在水杨酸纳米组合物的制备过程中，将液体脂质定为18wt％辛酸/癸酸甘油三酯，其他制备步骤及原料的添加量与实施例8相同。

对比例5

在水杨酸纳米组合物的制备过程中，将液体脂质定为18wt％油酸/亚油酸甘油三酯，其他制备步骤及原料的添加量与实施例8相同。

实施例16纳米组合物控释行为研究

采用透析袋法来研究脂肪酶对水杨酸纳米组合物的体外释放行为以及液体脂质对纳米组合物控释行为的影响。根据药典的指导，选择满足漏槽条件的含有20％丙二醇水溶液作为释放介质。透析袋(截留分子量为3500Da)在使用前先用超纯水煮沸5min并用50％乙醇溶液浸泡过夜。取含0.1％胰脂肪酶的水杨酸-407水凝胶、水杨酸-多糖接枝物、以及实施例8、对比例4、对比例 5制备的水杨酸纳米组合物分散液5g分别置于透析袋中，两端用透析袋夹子封口，放入含有80mL释放介质的蓝口瓶中，并将蓝口瓶放置于摇床中，在37℃下，100rpm振荡12h，分别于1、2、4、6、8、10和12h取样1mL，并随即补充相同体积的释放介质。采用HPLC法测定不同时间点的取样中水杨酸的浓度，计算累积释放百分比。实验结果如图4所示。

实施例8和对比例4、对比例5制备水杨酸纳米组合物中液体脂质总含量相同，对比例4、对比例5为单一液体脂质，实施例8为混合液体脂质，由图4 可知，在接收介质中添加了脂肪酶模拟炎症环境后，与对比例4、对比例5相比，实施例8纳米组合物释放水杨酸速率明显加快，说明辛酸/癸酸甘油三酯和油酸/亚油酸甘油三酯具有协同作用，两者同时使用比单独使用时纳米组合物的控释效果更好；在模拟的炎症环境下，与市售产品水杨酸-407水凝胶、水杨酸-多糖接枝物比较，本发明提供的水杨酸纳米载体释放水杨酸速率更快。说明在脂肪酶存在的条件下，市售产品水杨酸-407水凝胶、水杨酸-多糖接枝物无控释效应，而实施例8制得的水杨酸纳米组合物中的甘油三酯能被脂肪酶水解进而释放出水杨酸，使水杨酸在炎症部位高浓度释放，实现控释。

对比例6

在水杨酸纳米组合物的制备过程中，将助乳化剂定为30wt％1,2-己二醇 (20wt％用于油相，10wt％用于水相)，其他制备步骤及原料的添加量与实施例8相同。

对比例7

在水杨酸纳米组合物的制备过程中，将助乳化剂定为30wt％1,2-戊二醇 (20wt％用于油相，10wt％用于水相)，其他制备步骤及原料的添加量与实施例8相同。

对比例8

在水杨酸纳米组合物的制备过程中，将助乳化剂定为30wt％1,3-丙二醇 (20wt％用于油相，10wt％用于水相)，其他制备步骤及原料的添加量与实施例8相同。

对比例9

在水杨酸纳米组合物的制备过程中，将油相低压均质处理步骤去掉，其他制备步骤及原料的添加量与实施例8相同。

实施例17

采用超滤离心法测定实施例8、对比例6～9制备的纳米组合物的载药量，研究助乳化剂和制备工艺对载药量的影响，并观察对比例6～9制备的纳米组合物的稳定性情况。

纳米组合物中游离水杨酸含量测定：精密称取适量纳米组合物，加入超滤离心管样品池中，置于常温，18000r/min离心30min后收集滤液，用HPLC 法检测滤液中游离水杨酸含量；纳米组合物中水杨酸总药量测定：精密称取纳米组合物，加适量乙醇破乳，至溶液澄清透明，容量瓶定容后用滤膜过滤，用HPLC法检测水杨酸总药量；按下列公式计算载药量，实验结果如表4 所示。

式中，W_t为水杨酸总药量，W_f为游离水杨酸含量，W_s为载体总量。

表4实施例8、对比例6～9制备的纳米组合物载药量

样品	载药量/％
		实施例8	29.78
对比例6	22.64
		对比例7	21.51
对比例8	14.72
		对比例9	18.37

实施例8和对比例6～8制备的纳米组合物中助乳化剂总量相同，对比例6 含30wt％1,2-己二醇，制备完毕后，对比例6载药量为22.64％，且对比例6在常温放置10天后有水杨酸颗粒析出；对比例7含30wt％1,2-戊二醇，制备完毕后，对比例7载药量为21.51％，且对比例7在常温放置18天后有水杨酸颗粒析出；对比例8含30wt％1,3-丙二醇，制备完毕后，对比例8有部分水杨酸直接析出，对比例8载药量为14.72％；实施例8含10wt％1,2-己二醇、10wt％1,2-戊二醇、10wt％1,3-丙二醇，由表4可知，与对比例6～8相比，实施例8载药量明显高于对比例6～8，为29.78％，且放置过程中稳定性良好。研究表明，在本发明中，助乳化剂1,2-己二醇、1,2-戊二醇、1,3-丙二醇具有协同作用，助乳化剂共同使用能提高水杨酸的溶解性，进而提高纳米组合物的载药量和稳定性。

对比例9油相去掉低压均质处理步骤后其纳米组合物载药量仅为 18.37％，且纳米组合物常温放置3天有水杨酸颗粒析出，实施例8载药量明显高于对比例9，说明低压均质处理步骤能提高水杨酸的溶解性，对水杨酸的载药量以及稳定性有重要的影响。

实施例18纸片扩散法测定抑菌圈

制备菌液：用接种环沾取少许已活化的培养基表面的痤疮丙酸杆菌 (ATCC6919)，加入无菌生理盐水，用无菌吸管用力吹打使细菌均匀分散于无菌生理盐水中，调整细菌浓度与0.5麦氏比浊管(1.5×10⁸CFU/mL)相似，继续用生理盐水稀释100倍，使其浓度达到约1×10⁶CFU/mL。

接种平板：平板接种时，用沾取菌液的灭菌拭子分别在培养皿边缘相对四点涂菌，每点开始划线涂菌至培养皿的1/2，接着找到第2点，继续划线至培养皿的1/2，如此依次划线，至菌悬液均匀密布于整个培养皿，再加盖放置约5min。

贴纸片：固定好后，将圆形滤纸片(d＝6mm)贴到培养基表面，每个培养皿贴4片滤纸片，垂直滴加5μL游离水杨酸(水杨酸含量与实施例8相同)、水杨酸-407水凝胶、水杨酸-多糖接枝物和实施例8制备的水杨酸纳米组合物至滤纸片上。

孵育：把贴好药敏纸片的平皿放进37℃温箱培养，培养过夜后取出平板，用游标卡尺测量抑菌环的直径，抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限，记录。实验结果如表5所示。

表5各样品抑菌圈直径比较

样品	抑菌圈直径(mm)
		对照	0
游离水杨酸	7.23
		实施例8	9.49
水杨酸-407水凝胶	8.64
		水杨酸-多糖接枝物	8.98

由表5可知，在6mm纸片上加入同体积的游离水杨酸和实施例8制备的水杨酸纳米组合物后，抑菌圈平均大小分别为7.23mm、9.49mm，说明水杨酸经纳米包载后抑菌效果显著提升；加入同体积的水杨酸-407水凝胶和水杨酸- 多糖接枝物后，抑菌圈平均大小分别为8.64mm、8.98mm，说明实施例8制备的水杨酸纳米组合物抑菌效果优于市售产品水杨酸-407水凝胶和水杨酸-多糖接枝物。

对比例10

制备FITC标记纳米组合物：将30wt％水杨酸、9wt％辛酸/癸酸甘油三酯、9wt％油酸/亚油酸甘油三酯、1wt％杏仁油、1wt％山茶花油、20wt％1,2- 己二醇在温度为50℃水浴条件下混合溶解，在压力为400bar的条件下进行低压均质处理，循环5次，得到油相；

将0.5wt％FITC、5wt％硬脂酰乳酰乳酸钠、10wt％山梨醇月桂酸酯、 10wt％1,3-丙二醇与4.5wt％水混合，在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相；

将上述微米级分散体在50℃、压力为9000psi的条件下进行高速微射流处理，循环6次，冷却至室温，得到FITC标记纳米组合物。

实施例19对炎症细胞靶向性研究

采用激光共聚焦和流式细胞技术分析纳米组合物对LPS活化巨噬细胞的靶向能力。首先，5×10⁴个/mL RAW 264.7细胞接种于6孔板，应用含有双抗的DMEM、10％FBS，37℃培养箱培养12h。接着，1μg/mL LPS刺激细胞24 小时后，去除培养基，分别加入对比例10中FITC标记的水杨酸纳米组合物和游离FITC在培养基中，分别孵育2小时、4小时。共孵育纳米组合物后，1500 rpm离心收集细胞，再洗两遍细胞，应用共聚焦观察炎症细胞的摄取能力，应用流式细胞仪分析细胞的靶向能力。实验结果如图5、图6和表6所示。

表6流式细胞术检测RAW 264.7细胞荧光强度

采用激光共聚焦显微镜观察RAW 264.7细胞对纳米组合物的摄取情况，结果见图5。在图中可以观察到，游离FITC溶液处理组的绿色荧光多聚集于 RAW 264.7细胞的细胞膜区域，在细胞质中少有分布且荧光强度很弱；而对比例10制得的FITC标记纳米组合物处理组有明显绿色荧光与红色荧光的重叠，且荧光强度明显比游离FITC溶液处理组强，表明对比例10制得的FITC标记纳米组合物能够有效地将FITC递送入RAW 264.7细胞且广泛分布于细胞质中。由表6和图6可知，采用流式细胞仪分析细胞的靶向能力，对比例10制得的FITC标记纳米组合物处理组的RAW 264.7细胞平均荧光强度(MFI)明显高于游离FITC溶液处理组。孵育2h和4h后，与游离FITC溶液组MFI(2269 和2575)相比，用对比例10制得的FITC标记纳米组合物的MFI分别为4318和 4826，其MFI分别提高了90.3％和87.4％。细胞摄取实验和细胞靶向实验结果表明，对比例10制得的FITC标记纳米组合物能够显著提高RAW264.7细胞对其包载物的细胞摄取和胞内积蓄。

实施例20抗炎实验研究

测试样品：将实施例8～10制备的水杨酸纳米组合物用DMEM培养液稀释 800倍得到的纳米组合物培养样品，对应编号1、2、3号；取水杨酸作为游离活性原料，利用DMEM培养液稀释，至其百分含量与1号样品相同，作为游离对照组，对应编号4号。

将RAW 264.7细胞以每孔1×10⁴个细胞的密度接种到96孔板中，置于 37℃、5％CO₂细胞培养箱中培养24h。培养结束后吸出细胞板中的培养基，实验分为空白对照组、模型组和给药组，除空白对照组外，每孔加入1 mg/mL的LPS建立细胞炎症模型，给药组中分别加入测试样品，空白对照组加入等体积的无血清培养基，继续培育48h。48h后收集细胞上清液，按照 ELISA试剂盒说明书要求进行炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β检测，计算细胞上清液TNF-α、IL-6和IL-1β的含量。实验结果如表7所示。

表7各测试样品炎症因子含量测定结果

样品名称	空白对照	模型组	1号样品	2号样品	3号样品	4号样品
							TNF-α/pg·mL<sup>-1</sup>	23.4	453.8	349.3	307.6	276.1	396.4
IL-6/pg·mL<sup>-1</sup>	46.8	539.4	357.6	298.1	255.2	429.7
							IL-1β/pg·mL<sup>-1</sup>	33.1	497.6	297.4	261.8	226.4	416.8

由表7可知，与模型组比较，实施例8、9、10制得的纳米组合物(1～3 号样品)均能显著抑制RAW 264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和IL-1β，说明本发明制备的水杨酸纳米组合物能有效降低炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β含量，且与游离活性物(4号样品)TNF-α、IL-6和IL-1β比较，实施例8制备的水杨酸纳米组合物(1号样品)对TNF-α、IL-6和IL-1β水平的降低具有显著性差异(P<0.05)，表明水杨酸经纳米包载后能更有效地降低TNF- α、IL-6和IL-1β含量，抗炎效果更优。

对比例11

在水杨酸纳米组合物的制备过程中，将高速微射流处理的压力定为5000 psi，其他制备步骤及原料的添加量与实施例10相同。

实施例21

测试样品：将实施例8、9、10以及对比例11分别与对比例1中的空白霜剂按照质量百分含量比4:96进行复配，得到的纳米组合物复合霜剂分别定为 5、6、7、8号样品，配置与5号样品中水杨酸含量相同的游离原料霜剂，定为9号样品，以及对比例1制备的空白霜剂。

选取50名年龄在25～55岁之间的女性受试者，签署知情同意书后随机分为5组，分别对应5种测试样品，每组10人。在14d内，每组志愿者在早晚清洁面部后，分别每天两次在面部涂抹测试样品。在0d和14d，使用嫦娥抗衰机器人面部图像分析仪检测受试者面部皮肤油脂、卟啉及毛孔等指标，油脂、卟啉及毛孔抑制效果以10分制满分来进行评分，最好为10分，最差为0 分。测试结果如表8所示。

表8受试者面部皮肤油脂、卟啉及毛孔抑制效果测试结果

组别	对比例1	5号样品	6号样品	7号样品	8号样品	9号样品
							油脂抑制效果	3	8	9	9	7	6
卟啉抑制效果	4	7	8	9	7	6
							毛孔抑制效果	3	8	8	8	6	5

根据表8的结果可以看出，对比例1制得的空白霜剂油脂、卟啉及毛孔抑制效果均不佳；实施例8～10制备的水杨酸纳米组合物复合霜剂(5、6、7号样品)油脂、卟啉及毛孔抑制效果都在7分以上，去油脂、缩小毛孔效果较理想，说明本发明制备的水杨酸纳米组合物具有优异的去油脂、缩小毛孔、祛痘效果；9号样品为水杨酸含量与5号样品(实施例8)相同的游离普通霜剂，与9号样品相比，5号样品油脂、卟啉及毛孔抑制效果均更优，说明水杨酸经纳米包载后在角质层能缓慢释放，在炎症部位能控制释放，去油脂、缩小毛孔、抗炎祛痘效果得到提升。

对比例11中纳米组合物制备时将高速微射流处理的压力设置为5000psi (小于6000psi)，其他步骤和原料的添加与实施例10相同，得到的纳米组合物粒径测试结果为153.7nm，说明高速微射流处理的压力过小会导致纳米组合物粒径增大，纳米化工艺步骤对粒径的大小有重要影响；根据表8的结果可以看出7号样品(实施例10)油脂、卟啉及毛孔抑制效果均更优于8号样品(对比例11)，表明本申请纳米组合物粒径小，抗炎、去油脂效果更好。

由以上实施例可知，本发明制备的水杨酸纳米组合物载药量高，易溶于水中，解决了水杨酸溶解度低、基质降粘、高温稳定性差等难以应用于水剂护肤品中的问题；包裹的高浓度水杨酸能在角质层缓慢释放，延长了水杨酸的作用时间，并能在痤疮等炎症部位靶向聚集、控制释放，有效减小了水杨酸的刺激性，显著增强了其抗炎祛痘效果。

以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种水杨酸纳米组合物，成分为：

6～50wt％的水杨酸；

1～20wt％的液体脂质，所述液体脂质为甘油三酯；

1～20wt％的天然植物油脂；

1～20wt％的乳化剂；

10～40wt％的助乳化剂；

余量为水。

2.根据权利要求1所述的水杨酸纳米组合物，其特征在于，所述液体脂质选自辛酸/癸酸甘油三酯、棕榈酸甘油三酯、1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯、肉豆蔻酸甘油三酯、辛酸/癸酸/琥珀酸甘油三酯、二十二烷酸甘油三酯、甘油三(乙基己酸)酯、氢化椰油酸甘油酯、油酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/癸酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/癸酸/月桂酸甘油三酯和辛酸/癸酸/硬脂酸甘油三酯中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的水杨酸纳米组合物，其特征在于，所述天然植物油脂选自茶籽油、葡萄籽油、橄榄油、杏仁油、鳄梨油、山茶花油、麦芽油、亚麻籽油、霍霍巴籽油、夏威夷果油和金盏花油中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的水杨酸纳米组合物，其特征在于，所述乳化剂选自卵磷脂、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-10二棕榈酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、硬脂酰乳酰乳酸钠、山梨醇月桂酸酯和椰油基葡糖苷中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的水杨酸纳米组合物，其特征在于，所述助乳化剂选自月桂醇聚醚-23、二乙二醇单乙基醚、PPG-26-丁醇聚醚-26、十三烷醇聚醚-12、1,3-丙二醇、1,2-戊二醇、1,2-己二醇、二丙二醇、甘油和丁二醇中的一种或几种。

6.根据权利要求1所述的水杨酸纳米组合物，其特征在于，所述水杨酸纳米组合物的粒径为10～100nm。

7.一种权利要求1所述的水杨酸纳米组合物的制备方法，包括：

将乳化剂、剩余助乳化剂和水混合，得到水相；

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述得到油相过程中混合后还包括：

将得到的混合物进行低压均质处理。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述低压均质处理的压力为200～600bar。

10.一种化妆品，包括：权利要求1所述的水杨酸纳米组合物。