CN114145230A - 一种诱导丹参产生丛生芽苗的繁殖方法 - Google Patents

一种诱导丹参产生丛生芽苗的繁殖方法 Download PDF

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邓洁琼
李钰
叶霄
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彭芳
袁灿
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Abstract

本发明提供了一种诱导丹参产生丛生芽苗的繁殖方法，包括枝条处理、愈伤组织诱导、丛生芽诱导、根部诱导、种苗驯化、移栽。本发明运用植物的全能性，以丹参扦插枝条甚至是叶片为材料，以带菌的育苗土为基质，在密闭的环境中提供光照和雾化的营养液的方法满足植物诱导愈伤组织、丛生芽、生根所需的光照、营养、激素和空气等环境条件，短时间内低成本扩繁出大量优质或脱毒的丹参丛生芽苗，满足市场需求。该方法保证了母本材料的优良特性，扩繁系数可达到14，整个过程30‑40天，实用简便。最显著的特征是采用雾培的方式在无糖的带菌基质上进行。

Description

一种诱导丹参产生丛生芽苗的繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种诱导丹参产生丛生芽苗的繁殖方法，属于农业生产领域。
背景技术
丹参为唇形科植物，根茎入药，具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈之功效，是一味重要的中药材。生产上的繁殖方式有种子繁殖、根段繁殖、组培繁殖，各有其弊端。种子繁殖不能稳定保持母本优良的现状，根段繁殖不能隔断根际根茎病虫害的传播，组培繁殖的成本较高。
中江丹参为四川省的道地药材，不结或结很少的种子，只能采用根段进行繁殖。近年来由于连作障碍、根际病虫害不能根除、品种退化等原因，严重制约着中江丹参产业的发展，急需大量脱毒优质的丹参新品种。而在培育优质中江丹参过程中同样也遇到了扩繁速率低，成本高的问题。
针对以上的生产实际问题，急需一种高效快速的丹参种苗繁育方式。
发明内容
鉴于上述不足，本发明提供了一种诱导丹参产生丛生芽苗的繁殖方法，运用植物的全能性，以丹参扦插枝条甚至是叶片为材料，在营养充足的带菌育苗基质上，在密闭的环境中提供光照和雾化的营养液的方法满足植物诱导愈伤组织、丛生芽、生根所需的光照、营养、激素和空气等环境条件，短时间内低成本扩繁出大量丹参产生丛生芽苗满足优质或脱毒的丹参种苗。具体步骤如下：
一种诱导丹参产生丛生芽苗的繁殖方法，包括：
(1)枝条处理：
在早晨或阴天，剪取枝叶生长旺盛无病健壮枝条作为诱导丛生芽的枝条，再将枝条剪成含茎节带叶的茎段，在茎段的形态学上端斜切或划伤，增加创伤表面积，以便形成更多的愈伤组织，得预处理枝条备用；
(2)愈伤组织诱导：
使用含有杀菌剂的前处理液浸泡预处理枝条30-90min，将茎段斜放于装有育苗土的穴盘上，将穴盘放于密闭的环境中，再辅以愈伤组织诱导雾化液雾化培养；
(3)丛生芽诱导：
愈伤组织诱导5-10天后，丹参茎段的形态学上端创伤成了一层愈伤组织，使用丛生芽诱导雾化液雾化培养，促进愈伤组织分化成丛生芽；
(4)根部诱导：
丛生芽诱导6-18天后，丹参茎段的形态学上端创伤的愈伤组织形成了高2-3cm的芽丛，使用根诱导雾化液雾化培养，促进丛生芽基部长出根，形成新的植株；
(5)种苗驯化：
根部诱导4-8天后，降低培养环境的湿度后，停止喷雾2天，促进植株的纤维化，增加施肥，进行壮苗培养；
(6)移栽：
种苗驯化7天后，将具有根的丛生芽植株从枝条上取下，移栽至穴盘上，再培育成符合移栽大田的种苗。
进一步的，步骤(1)所述枝条剪取前一天还包括喷施叶面肥、杀虫以及表面消毒处理。
进一步的，步骤(2)所述前处理液包括：
杀菌剂，0.1-0.5mg/L的生长素、0-2.0mg/L的分裂素、0-1倍的MS培养基大量元素、1倍的MS培养基铁盐、1倍的MS培养基微量元素、1倍的MS培养基有机物、0-20g/L的蔗糖。
进一步的，步骤(2)所述前处理液包括：
步骤(2)所述愈伤组织诱导雾化液包括：
0.1-0.5mg/L的生长素、0-2.0mg/L的分裂素、0-1倍的MS培养基大量元素、1倍的MS培养基铁盐、1倍的MS培养基微量元素。
进一步的，所述杀菌剂为800倍液的多灵菌；所述生长素包括但不限于：NAA、IBA、IAA；所述分裂素包括但不限于：6-BA、TDZ、KT。
进一步的，步骤(2)所述培养条件为：
每日雾化处理20-80次，每次5-60s，保持相对湿度90％以上，环境温度15-40℃。
进一步的，步骤(3)所述丛生芽诱导雾化液包括：
0-0.3mg/L的生长素、0.5-3.0mg/L的分裂素、0-1倍的MS培养基大量元素、1倍的MS培养基铁盐、1倍的MS培养基微量元素。
进一步的，所述生长素包括但不限于：NAA、IBA、IAA；所述分裂素包括但不限于：6-BA、TDZ、KT。
进一步的，步骤(3)所述培养条件为：
每日雾化处理20-80次，每次5s-60s，保持相对湿度90％以上，环境温度15-40℃。
进一步的，步骤(4)所述生根诱导雾化液包括：
0-2.0mg/L的生长素、0-1倍的MS培养基大量元素、1倍的MS培养基铁盐、1倍的MS培养基微量元素。
进一步的，所述生长素包括但不限于：NAA、IBA。
进一步的，步骤(4)所述培养条件为：
每日雾化处理20-80次，每次5-60s，保持相对湿度90％以上，环境温度15-40℃。
进一步的，步骤(5)所述湿度降低至自然环境湿度。
本发明还公开了一种根据上述任一繁殖方法得到的丹参丛生芽苗。
本发明的有益效果在于：
1、本发明能够有效避免根际病虫害的问题。本发明采用的材料为丹参的地上部分，能够有效避免根部的病虫害，减少病虫害的发生。
2、本发明能够显著降低成本。与组培脱毒苗相比，本发明使用的基质是可不必高温灭菌的带菌育苗土，培养环境可以为室外或室内，设施要求和日常管理要求不高，没有污染，生产出的丛生芽比组培苗健壮，成活率高。如果使用组培的方式培育脱毒丹参，结合本发明，扩繁脱毒丹参种苗能够显著降低脱毒种苗的成本。
3、本发明能够显著减少育苗周期。本发明的育苗周期30-40天，与组培的周期相当，比根段、种子繁殖时间短，理论上在人工气候条件小1株丹参苗使用本发明进行扩繁在1年内扩繁9次，产生上万株与母本一样的种苗。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的应用原理作进一步的描述。
实施例1：中江丹参产生丛生芽苗的繁殖方法
(1)枝条处理
在早晨或阴天，剪取枝叶生长旺盛无病健壮枝条作为诱导丛生芽的枝条。剪取前一天喷施叶面肥、杀虫处理，以提高枝条的活性。再将枝条剪成含茎节带叶的茎段，在茎段的形态学上端斜切或划伤，增加创伤表面积，以便形成更多的愈伤组织。
(2)愈伤组织诱导
将茎段浸泡在前处理液中30min，前处理液的成分为800倍多菌灵，0.2mg/L的NAA、0.4mg/LIBA、0.5倍的MS培养基大量元素、1倍的MS培养基铁盐、1倍的MS培养基微量元素、1倍的MS培养基有机物、10g/L的蔗糖。茎段斜放于装有育苗土的穴盘上，使用多菌灵进行喷水消毒后，将穴盘放于密闭的环境中进行光照雾化培养，温度28℃。在雾化液中添加含0.5mg/L的NAA、1/2MS培养基大量元素、1倍的MS培养基铁盐、1倍MS培养基微量元素，定时雾化喷于植物上，温度20℃，促进伤口产生愈伤组织。
(3)丛生芽诱导
经过1周左右，丹参茎段的形态学上端创伤成了一层愈伤组织后，将雾化液的成分改成0.2mg/L NAA和1.5mg/L 6-BA及1/2倍MS培养基大量元素、1倍MS培养基铁盐、1倍MS培养基微量元素，定时喷施于枝条表面，促进愈伤组织分化成丛生芽。
(4)根部诱导
经过2周左右，丹参茎段的形态学上端创伤的愈伤组织形成了高2-3cm的芽丛，将雾化液的成分改成0.2mg/L IBA及1/4MS培养基大量元素、1倍MS培养基铁盐、1倍培养基微量元素，定时喷施于枝条表面，促进丛生芽基本长出根，从而形成新的植株。
(5)种苗驯化
经过1周左右的生根诱导后，减少或停止喷雾2天后，逐步减少培养环境的湿度，促进植株的纤维化，并且增加肥料的施用，进行壮苗培养。
(6)移栽
经过1周的驯化后，将具有根的丛生芽植株从枝条上扯下，移栽到穴盘上，再培育成能够移栽大田的种苗。
实施例2：中江丹参脱毒组培苗产生丛生芽苗的繁殖方法
(1)枝条处理
使用的材料为脱毒的中江丹参组培苗经过田间种植或驯化的枝条或叶片。在早晨或阴天，剪取枝叶生长旺盛无病健壮枝条作为诱导丛生芽的枝条。剪取前一天喷施叶面肥、杀虫处理，以提高枝条的活性。再将枝条剪成含茎节带叶的茎段，在茎段的形态学上端斜切或划伤，增加创伤表面积，以便形成更多的愈伤组织。
(2)愈伤组织诱导
将茎段浸泡在含800倍多菌灵，0.3mg/L的NAA、1/2倍MS培养基大量元素、1倍MS培养基铁盐、1倍MS培养基微量元素、1倍MS培养基有机物、20g/L的蔗糖的前处理液中60min，斜放于装有育苗土的穴盘上，将穴盘放于密闭的环境中进行光照雾化培养，温度28℃，定时雾化愈伤组织诱导雾化液喷于植物上，促进伤口产生愈伤组织。在愈伤组织诱导雾化液中添加含0.4mg/L的NAA(吲哚乙酸)、1/2MS培养基大量元素、1倍MS培养基铁盐、MS培养基微量元素。
(3)丛生芽诱导
经过1周左右，丹参茎段的形态学上端创伤成了一层愈伤组织后，将雾化液的成分改成丛生芽诱导雾化液，定时喷施于枝条表面，促进愈伤组织分化成丛生芽，丛生芽诱导雾化液含有0.2mg/L NAA和1.5mg/L 6-BA及1/2MS培养基大量元素、1倍MS培养基铁盐、1倍MS培养基微量元素。
(4)根部诱导
经过2周左右，丹参茎段的形态学上端创伤的愈伤组织形成了高2-3cm的芽丛，将雾化液的成分改成根诱导雾化液，定时喷施于枝条表面，促进丛生芽基部长出根，从而形成新的植株。根诱导雾化液的成分包含0.2mg/LIBA、1/4MS培养基大量元素、1倍MS培养基铁盐、1倍MS培养基微量元素。
(5)种苗驯化
经过1周左右的生根诱导后，逐步减少培养环境的湿度，停止喷雾2天后，促进植株的纤维化，并且增加肥料的施用，进行壮苗培养。
(6)移栽
经过1周的驯化后，将具有根的丛生芽植株从枝条上扯下，移栽到穴盘上，再培育成能够移栽大田的脱毒中江丹参种苗。
对比例1
根段繁殖丹参种苗
根段繁殖使用的是丹参的根段进行繁殖，1年一次一般在冬季进行，利用的是天然的环境条件，繁殖效率低。本发明使用的是丹参的茎段，本发明能够有效避免根际病虫害的问题。本发明采用的材料为丹参的地上部分，能够有效避免根部的病虫害，减少病虫害的发生。只要有茎段即可进行繁殖，繁殖的环境是在人工营造的高湿度，温度较恒定的环境中，同时给予一定的启动营养元素和激素，诱导茎段产生丛生芽，再在丛生芽基部诱导产生根，繁殖效率高，一年四季都可进行扩繁。
对比例2
组培繁殖丹参种苗
组培技术具有许多优点，但也有一定的缺点。如需要在无菌的环境中，不能有污染；设备要求高，需要灭菌锅、超净工作台、培养室；对人员要求也高。而本发明在有菌的环境中进行，长时间的培养不添加糖分、有机物，通过茎段上的叶片进行光合作用提供糖分；在增加湿度的同时，是利用了组培中常用的诱导激素，促进植物的定向代谢，诱导产生丛生芽和根，从而增加丹参的繁殖速率。可在有菌的环境中进行，不需要组培过程中的设备和培养环境，对人员的要求也不高。
本发明通过人为制造高湿度、温度恒定、激素定向诱导的人工环境条件，使用丹参的茎段进行丛生芽诱导，再在丛生芽基部诱导根，从而形成丹参植株幼苗，繁殖周期短、设备简单、繁殖效率高，可规模化应用于实际生产。与现有的繁殖技术具有很大的不同，具有显著的创新性。
本发明能够有效避免根际病虫害的问题。本发明采用的材料为丹参的地上部分，能够有效避免根部的病虫害，减少病虫害的发生。
本发明能够显著降低成本。与组培脱毒苗相比，本发明使用的基质是可不必高温灭菌的带菌育苗土，培养环境可以为室外或室内，设施要求和日常管理要求不高，没有污染，生产出的丛生芽比组培苗健壮，成活率高。如果使用组培的方式培育脱毒丹参，结合本发明，扩繁脱毒丹参种苗能够显著降低脱毒种苗的成本。
本发明能够显著减少育苗周期。本发明的育苗周期30-40天，与组培的周期相当，比根段、种子繁殖时间短，理论上在人工气候条件小1株丹参苗使用本发明进行扩繁在1年内扩繁9次，产生上万株与母本一样的种苗。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种诱导丹参产生丛生芽苗的繁殖方法，包括：
(1)枝条处理：
将生长旺盛无病枝条剪成含茎节带叶的茎段，在茎段的形态学上端斜切或划伤，得预处理枝条备用；
(2)愈伤组织诱导：
使用含有杀菌剂的前处理液浸泡预处理枝条30-90min，将茎段斜放于装有育苗土的穴盘上，将穴盘放于密闭的环境中，再辅以愈伤组织诱导雾化液雾化培养；
(3)丛生芽诱导：
愈伤组织诱导5-10天后，使用丛生芽诱导雾化液雾化培养，促进愈伤组织分化成丛生芽；
(4)根部诱导：
丛生芽诱导6-18天后，使用根诱导雾化液雾化培养，促进丛生芽基部长出根，形成新的植株；
(5)种苗驯化：
根部诱导4-8天后，降低培养环境的湿度至自然环境湿度后，停止喷雾2天，增加施肥，进行壮苗培养；
(6)移栽：
种苗驯化7天后，将具有根的丛生芽植株从枝条上取下，移栽至穴盘上，再培育成符合移栽大田的种苗。
2.根据权利要求1所述的繁殖方法，其中：
步骤(1)所述枝条剪取前一天还包括喷施叶面肥、杀虫以及表面消毒处理。
3.根据权利要求1所述的繁殖方法，其中：
步骤(2)所述前处理液包括：
杀菌剂800倍液的多菌灵，0.1-0.5mg/L的生长素、0-2.0mg/L的分裂素、0-1倍的MS培养基大量元素、1倍的MS培养基铁盐、1倍的MS培养基微量元素、1倍的MS培养基有机物、0-20g/L的蔗糖。
4.根据权利要求1所述的繁殖方法，其中：
步骤(2)所述愈伤组织诱导雾化液包括：
0.1-0.5mg/L的生长素、0-2.0mg/L的分裂素、0-1倍的MS培养基大量元素、1倍的MS培养基铁盐、1倍的MS培养基微量元素。
5.根据权利要求1所述的繁殖方法，其中：
步骤(2)所述培养条件为：
每日雾化处理20-80次，每次5-60s，保持相对湿度90％以上，温度15-40℃。
6.根据权利要求1所述的繁殖方法，其中：
步骤(3)所述丛生芽诱导雾化液包括：
0-0.3mg/L的生长素、0.5-3.0mg/L的分裂素、0-1倍的MS培养基大量元素、1倍的MS培养基铁盐、1倍的MS培养基微量元素。
7.根据权利要求1所述的繁殖方法，其中：
步骤(3)所述培养条件为：
每日雾化处理20-80次，每次5-60s，保持相对湿度90％以上，温度15-40℃。
8.根据权利要求1所述的繁殖方法，其中：
步骤(4)所述生根诱导雾化液包括：
0-2.0mg/L的生长素、0-1倍的MS培养基大量元素、1倍的MS培养基铁盐、1倍的MS培养基微量元素。
9.根据权利要求1所述的繁殖方法，其中：
步骤(4)所述培养条件为：
每日雾化处理20-80次，每次5-60s，保持相对湿度90％以上，环境温度15-40℃。
10.一种根据权利要求1～9所述任一繁殖方法得到的丹参丛生芽苗。
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