CN110999786A - 梨组织培养幼苗生根及驯化方法 - Google Patents

梨组织培养幼苗生根及驯化方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种梨组织培养幼苗生根及驯化方法。该方法包括以下步骤：1)生根培养；1.1)在继代4周后，选择生长势健壮的组培苗，切除植株下部愈伤组织和多余的叶片，保留植株上半部约2～3cm，移入生根培养基中；1.2)每瓶2～3株，放置培养间中进行4d暗培养，培养温度为25±2℃，之后进行光照培养，光源为日光灯，光照强度2000lx，光周期16h；2)开盖驯化；进行生根培养的组培苗在一周左右开始出现生根，约40d左右组培苗生根完成；驯化时先将瓶盖拧松，一天后将瓶盖打开三分之一，三天后将瓶盖打开三分之二；3)水培驯化：开盖驯化7d后，进行水培驯化；4)基质移栽：待幼苗长至5cm以上，将其移栽到基质中。本发明可提高生根率、移栽成活高。

Description

梨组织培养幼苗生根及驯化方法
技术领域
本发明涉及植物种植技术领域，尤其是一种梨组织培养幼苗生根及驯化方法。
背景技术
植物离体快繁技术是目前常用的创建新种质的方法。梨属植物离体快繁已经广泛应用，但仍然存在很多缺点：梨作为直根性植物，组培苗生根困难，现有的生根配方生根率较低，且生根苗移栽成活率低，主要是由于移栽时，组培苗经过开盖驯化后就直接转入基质培养，幼嫩的根系无法从基质中获得充沛的营养，导致生长点坏死，使得梨属组培苗即使成功生根，也难以应用于生产。
发明内容
本发明为解决背景技术中存在的技术问题，而提供一种高生根率、移栽成活高的梨组织培养幼苗生根及驯化方法。
本发明的技术解决方案是：本发明为一种梨组织培养幼苗生根及驯化方法,其特征在于：该方法包括以下步骤：
1)生根培养；
1.1)在继代4周后，选择生长势健壮的组培苗，切除植株下部愈伤组织和多余的叶片，保留植株上半部约2～3cm，移入生根培养基中；
1.2)每瓶2～3株，放置培养间中进行4d暗培养，培养温度为25±2℃，之后进行光照培养，光源为日光灯，光照强度2000lx，光周期16h；
2)开盖驯化；
进行生根培养的组培苗在一周左右开始出现生根，约40d左右组培苗生根完成；驯化时先将瓶盖拧松，一天后将瓶盖打开三分之一，三天后将瓶盖打开三分之二；
3)水培驯化：开盖驯化7d后，进行水培驯化；
4)基质移栽：待幼苗长至5cm以上，将其移栽到基质中。
优选的，步骤3)的具体步骤如下：
3.1)首先选取质地紧密的泡沫板，裁剪至可以漂浮在水培盆中，在泡沫板上用打孔器打出直径约为3cm的圆孔；
3.2)将生根苗从瓶中取出，轻轻洗去培养基，去除黄化的叶子，用圆柱形海绵固定好苗子放至泡沫板的小孔中，确保植株根系可以完全舒展在营养液中，植株根系直接接触营养液可以促进养分吸收；
3.3)水培移栽过程中要注意保持空气湿度，防止叶片萎蔫；全部移栽完成后，在透明罩内喷水，用透明罩将水培盆完全罩住，保持湿度为90％以上，放至培养间，培养温度为25±2℃，光照强度2000lx，光周期16h；
3.4)待幼苗顶端有新芽长出，将营养液浓度调整为二分之一浓度，并逐步降低空气湿度，直至保湿罩完全摘除，植株完全适应自然环境；
优选的，步骤3.3)中培养期间每隔半小时通氧一小时，为防止根系腐烂，水培营养液15d更换一次，以保持养分充足。
优选的，步骤4)的具体步骤如下：
4.1)按照进口基质：蛭石：珍珠岩＝6:1:1配置，用水拌匀，达到手握成团，松手散开的状态即可；
4.2)在阴凉的环境中，将幼苗从营养液移至基质中，种植时，保证植株根系舒展在基质中，清理干净叶片、生长点等部位残留的基质；
4.3)种植完成后，用二分之一浓度营养液浇灌，每两天浇一次，直至新的顶芽萌发，之后逐步减少营养液浇灌次数。
优选的，步骤1.1)中生长势健壮的组培苗为高度3cm或以上，茎粗0.4mm以上，叶片浓绿，生长点无坏死，叶片无萎蔫的组培苗。
优选的，步骤1.2)中要根据不同品种，选用适宜的生长素浓度和组合进行培养，适宜的生长素可以促进植株生根；每瓶2～3株，放置培养间中进行4d暗培养，培养温度为25±2℃，之后进行光照培养，光源为日光灯，光照强度2000lx，光周期16h。
优选的，步骤1.2)中以梨属植物库尔勒香梨为例，适宜培养基配方为：1/2MS+1.5mg/L、IAA+0.5mg/L、IBA+20g/L、蔗糖+7g/L、琼脂，PH＝5.8。
本发明具有以下优点：
1、采用全新的生根配方。本发明重新选择生长素的浓度和组合，调整暗培养时间，使组培苗达到95.9％的高生根率。
2、建立新的驯化体系。本发明组培苗生根后先进行基础的开盖驯化，之后将其转入霍格兰营养液中进行水培驯化，使植株根系直接接触养分，促进吸收；驯化期间的空气湿度进行梯度性降低，直至植株完全适应自然环境，可以防止叶片萎蔫；之后再将植株转入基质中培养，此时植株地上部高度增加叶片增多，光合作用增强，地下部有健壮的根系吸收营养，可以完全进行自养，从而提高移栽成活率。
具体实施方式
本方法是利用新的配方对组培苗进行生根培养，之后对生根苗进行驯化，从而提高梨属植物组培苗移栽成活率，具体步骤如下：
1)生根培养；
1.1)在继代4周后，选择生长势健壮(高度3cm或以上，茎粗0.4mm以上，叶片浓绿，生长点无坏死，叶片无萎蔫)的组培苗，切除植株下部愈伤组织和多余的叶片，保留植株上半部约2～3cm，移入培养基中；
1.2)要根据不同品种，选用适宜的生长素浓度和组合进行培养，适宜的生长素可以促进植株生根；以梨属植物库尔勒香梨为例，适宜培养基配方为：1/2MS+1.5mg/L、IAA+0.5mg/L、IBA+20g/L、蔗糖+7g/L、琼脂，PH＝5.8；每瓶2～3株，放置培养间中进行4d暗培养，培养温度为25±2℃，之后进行光照培养，光源为日光灯，光照强度2000lx，光周期16h；
2)开盖驯化；
进行生根培养的组培苗在6～8d开始出现生根，38～42d组培苗生根完成；驯化时先将瓶盖拧松，一天后将瓶盖打开三分之一，三天后将瓶盖打开三分之二；
3)水培驯化：开盖驯化7d后，进行水培驯化；
3.1)首先选取质地紧密的泡沫板，裁剪至可以漂浮在水培盆中，在泡沫板上用打孔器打出直径约为3cm的圆孔；
3.2)将生根苗从瓶中取出，轻轻洗去培养基，去除黄化的叶子，用圆柱形海绵固定好苗子放至泡沫板的小孔中，确保植株根系可以完全舒展在营养液中，植株根系直接接触营养液可以促进养分吸收；
3.3)水培移栽过程中要注意保持空气湿度，防止叶片萎蔫；全部移栽完成后，在透明罩内喷水，用透明罩将水培盆完全罩住，保持湿度为90％以上，放至培养间，培养温度为25±2℃，光照强度2000lx，光周期16h；培养期间每隔半小时通氧一小时，为防止根系腐烂，水培营养液15d更换一次，以保持养分充足；
3.4)待幼苗顶端有新芽长出，将营养液浓度调整为二分之一浓度，并逐步降低空气湿度，直至保湿罩完全摘除，植株完全适应自然环境；
4)基质移栽；
待幼苗长至5cm以上，将其移栽到基质中；
4.1)按照进口基质：蛭石：珍珠岩＝6:1:1配置，用水拌匀，达到手握成团，松手散开的状态即可；
4.2)在阴凉的环境中，将幼苗从营养液移至基质中，种植时，保证植株根系舒展在基质中，清理干净叶片、生长点等部位残留的基质；
4.3)种植完成后，用二分之一浓度营养液浇灌，每两天浇一次，直至新的顶芽萌发，之后逐步减少营养液浇灌次数。
经实验表明，本发明方法的平均生根率和移栽成活率如下表：
Figure BDA0002297827440000041
以上仅为本发明公开的具体实施方式，但本发明公开的保护范围并不局限于此，本发明公开的保护范围应以权利要求的保护范围为准。

Claims (7)

1.一种梨组织培养幼苗生根及驯化方法,其特征在于：该方法包括以下步骤：
1)生根培养；
1.1)在继代4周后，选择生长势健壮的组培苗，切除植株下部愈伤组织和多余的叶片，保留植株上半部约2～3cm，移入培养基中；
1.2)每瓶2～3株，放置培养间中进行4d暗培养，培养温度为25±2℃，之后进行光照培养，光源为日光灯，光照强度2000lx，光周期16h；
2)开盖驯化；
进行生根培养的组培苗在一周左右开始出现生根，约40d左右组培苗生根完成；驯化时先将瓶盖拧松，一天后将瓶盖打开三分之一，三天后将瓶盖打开二分之一；
3)水培驯化：开盖驯化7d后，进行水培驯化；
4)基质移栽：待幼苗长至5cm以上，将其移栽到基质中。
2.根据权利要求1所述的梨组织培养幼苗生根及驯化方法，其特征在于：所述步骤3)的具体步骤如下：
3.1)首先选取质地紧密的泡沫板，裁剪至可以漂浮在水培盆中，在泡沫板上用打孔器打出直径约为3cm的圆孔；
3.2)将生根苗从瓶中取出，轻轻洗去培养基，去除黄化的叶子，用圆柱形海绵固定好苗子放至泡沫板的小孔中，确保植株根系可以完全舒展在营养液中，植株根系直接接触营养液可以促进养分吸收；
3.3)水培移栽过程中要注意保持空气湿度，防止叶片萎蔫；全部移栽完成后，在透明罩内喷水，用透明罩将水培盆完全罩住，保持湿度为90％以上，放至培养间，培养温度为25±2℃，光照强度2000lx，光周期16h；
3.4)待幼苗顶端有新芽长出，将营养液浓度调整为二分之一浓度，并逐步降低空气湿度，直至保湿罩完全摘除，植株完全适应自然环境。
3.根据权利要求2所述的梨组织培养幼苗生根及驯化方法，其特征在于：所述步骤3.3)中培养期间每隔半小时通氧一小时，为防止根系腐烂，水培营养液15d更换一次，以保持养分充足。
4.根据权利要求3所述的梨组织培养幼苗生根及驯化方法，其特征在于：所述步骤4)的具体步骤如下：
4.1)按照进口基质：蛭石：珍珠岩＝6:1:1配置，用水拌匀，达到手握成团，松手散开的状态即可；
4.2)在阴凉的环境中，将幼苗从营养液移至基质中，种植时，保证植株根系舒展在基质中，清理干净叶片、生长点等部位残留的基质；
4.3)种植完成后，用二分之一浓度营养液浇灌，每两天浇一次，直至新的顶芽萌发，之后逐步减少营养液浇灌次数。
5.根据权利要求1或2或3或4所述的梨组织培养幼苗生根及驯化方法，其特征在于：所述步骤1.1)中生长势健壮的组培苗为高度3cm或以上，茎粗0.4mm以上，叶片浓绿，生长点无坏死，叶片无萎蔫的组培苗。
6.根据权利要求5所述的梨组织培养幼苗生根及驯化方法，其特征在于：所述步骤1.2)中要根据不同品种，选用适宜的生长素浓度和组合进行培养，适宜的生长素可以促进植株生根；每瓶2～3株，放置培养间中进行4d暗培养，培养温度为25±2℃，之后进行光照培养，光源为日光灯，光照强度2000lx，光周期16h。
7.根据权利要求6所述的梨组织培养幼苗生根及驯化方法，其特征在于：所述步骤1.2)中以梨属植物库尔勒为例，适宜培养基配方为：1/2MS+1.5mg/L、IAA+0.5mg/L、IBA+20g/L、蔗糖+7g/L、琼脂，PH＝5.8。
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