CN113100071A - 一种皱果桉的微扦插快繁育苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及育苗技术领域，特别涉及一种皱果桉的微扦插快繁育苗方法。该方法包括：将茎段接种于M1培养基进行初代培养，直至叶腋萌发长出绿芽；将所得无菌繁殖体绿芽接种于M1培养基进行增殖培养，获得丛生芽；将芽从基部切下，分株接种于M2培养基进行壮苗培养，然后驯化炼苗；将幼苗速沾生根剂，移植到育苗基质中；移植后管理；培养25～35天后，期间逐步增加光照，直至全光照培育，出圃种植。本发明使用植物组织培养快繁来实现工厂化生产的育苗基数，再结合微扦插繁育技术，培育出完整植株的工厂化育苗方法，能有效的缩短育苗时间，降低生产成本，具有培养周期短、苗木生长旺盛、生根率高、移植成活率高的特点。
Description
技术领域
本发明涉及育苗技术领域，特别涉及一种皱果桉的微扦插快繁育苗方法。
背景技术
皱果桉(Corymbia.ptychocarpa)是一种热带树种，原产于澳大利亚西北部和昆士兰州等地方。也叫红冠桉，中等乔木，高8-12m，原产地花期时间长，从9月到次年3月，大型的头状花序，花朵直径可达7厘米，花色为耀眼的绯红色，形态优美独特，色彩艳丽，盛花期非常美丽壮观，是一种优良的观花树种。
皱果桉繁殖方式一般为播种，由于我国引种和驯化成功时间不久，没有种子繁殖基地，主要是从澳大利亚进口种子，而皱果桉的种壳木质化程度较高，取出种子非常困难，因此价格非常高。现有技术中，由于种子繁育的苗木性状变异大，不能保持原有品种的优良性状。目前的繁殖方法还有扦插、嫁接等无性繁殖手段，但是，传统的无性繁殖方法育苗用的材料数量有限，成活率极低，这种方法繁殖速度慢，从而严重制约了皱果桉的推广。
公布号CN 103749311 A的发明专利公开了一种皱果桉组织培养快速繁殖的育苗方法。该发明选择皱果桉优良成年大树为外植体材料，在无菌条件下用HgCl2灭菌消毒当年新生枝条含叶腋的茎段或顶芽，对皱果桉进行离体培养，建立无菌快繁体系。通过改进培养基成分和调控植物外源激素以及瓶苗的驯化和移植等技术手段，形成了一套完整的皱果桉组培快繁技术。但该技术是一种纯植物组织培养技术，用增殖培养瓶苗直接诱导生根，虽缩短了培养周期，但生根率较低，80％左右。用已生根的瓶苗移植平均成活率可以达到95.79％，但是，由于瓶内生根率低，从综合高效的角度，还达不到理想的要求。综合各项指标，邹果桉最优育苗方法是简化生产环节和节约育苗时间的微扦插育苗方法，其次是一种邹果桉组织培养快繁育苗方法。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种皱果桉的微扦插快繁育苗方法。该方法能有效的缩短皱果桉育苗时间，降低生产成本，具有培养周期短、苗木生长旺盛、生根率高、移植成活率高的特点。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种皱果桉的微扦插快繁育苗方法，包括如下步骤：
(1)对成年树进行环割促萌，将萌发的嫩枝条作为外植体材料制备带有1～2个腋芽的茎段，消毒；
(2)将茎段接种于M1培养基进行初代培养，直至叶腋萌发长出绿芽；
(3)取绿芽接种于M1培养基，诱导出腋芽和不定芽，得到无菌繁殖体；
(4)将无菌繁殖体接种于M1培养基进行增殖培养，获得丛生芽；将丛生芽分割转接至增殖培养基，进行继代增殖培养；
(5)丛生芽高15mm以上时，将芽从基部切下，分株接种于M2培养基进行壮苗培养，然后驯化炼苗，得到驯化后的幼苗；
(6)将幼苗速沾生根剂，移植到育苗基质中，育苗基质由黄心土、椰糠、活性炭组成；
(7)移植后管理；
(8)培养25～35天后，期间逐步增加光照，直至全光照培育，当苗木生长到25～35厘米高时出圃种植；
M1培养基的组成为：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、NaMoO2·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、Na2EDTA、FeSO4·7H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、烟酸硫胺素、甘氨酸、蔗糖、卡拉胶、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、水；
M2培养基的组成为：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、NaMoO2·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、Na2EDTA、FeSO4·7H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、烟酸硫胺素、抗坏血酸、生物素、甘氨酸、蔗糖、卡拉胶、6-苄基腺嘌呤、3-吲哚丁酸、萘乙酸、水。
作为优选，每升M1培养基由以下含量的组分配制而成，pH调至5.6～6.0：
优选地，每升M1培养基由以下含量的组分配制而成，pH调至5.8：
作为优选，每升M2培养基由以下含量的组分配制而成，pH调至5.6～6.0：
优选地，每升M2培养基由以下含量的组分配制而成，pH调至5.8：
作为优选，成年树为花色艳红、花序大、花量多、杆型通直、树冠好看、生长健壮的成年优树。
作为优选，消毒为：用流水冲洗干净，然后用0.1％的氯化汞消毒灭菌3～10分钟后，再用无菌水洗4次。
作为优选，初代培养的条件为：20～30℃，每日光照8～12小时，光照强度800～2000lx的条件下培养15～30天。
作为优选，增殖培养的条件为：20～30℃，每日光照8～12小时，光照强度在800～3000lx的条件下培养15～30天。
作为优选，壮苗培养的条件为：20～30℃，每日光照8小时，光照强度在1000lx条件下培养一周。
作为优选，驯化炼苗的条件为：75％遮荫条件下的温室中，每日光照12小时，光照强度在10000lx条件下炼苗20～30天。
作为优选，育苗基质中，黄心土、椰糠与活性炭的重量比为1：1：0.1。
作为优选，移植后管理如下：
光温控制：温室要求75％的遮光网，苗床用农膜覆盖的小拱棚保湿，白天10:00～17:00再用75％的遮光网遮光；小拱棚内温度保持在25-28℃；待小苗长出新根新芽后，逐步增加光照强度、打开农膜通风透气；
水分管理：移植后的两周内保持基质湿润，拱棚内空气相对湿度保持在90％以上；之后逐步控制水分，基质湿度50％～60％；
营养液管理：移植一周后，喷施营养液，待幼苗长出新叶新根生长稳定后，再用磷酸二氢钾和尿素的混合液喷施，每隔7～10天喷施一次；
病虫害防治：移植后2～4天用多菌灵或甲基托布津消毒灭菌，每隔10～15天一次。
本发明提供了一种皱果桉的微扦插快繁育苗方法。该方法包括：对成年树进行环割促萌，将萌发的嫩枝条作为外植体材料制备带有1～2个腋芽的茎段，消毒；将茎段接种于M1培养基进行初代培养，直至叶腋萌发长出绿芽；取绿芽接种于M1培养基，诱导出腋芽和不定芽，得到无菌繁殖体；将无菌繁殖体接种于M1培养基进行增殖培养，获得丛生芽；将丛生芽分割转接至增殖培养基，进行继代增殖培养；丛生芽高15mm以上时，将芽从基部切下，分株接种于M2培养基进行壮苗培养，然后驯化炼苗，得到驯化后的幼苗；将幼苗速沾生根剂，移植到育苗基质中，育苗基质由黄心土、椰糠、活性炭组成；移植后管理；培养25～35天后，期间逐步增加光照，直至全光照培育，当苗木生长到25～35厘米高时出圃种植。本发明具有如下技术效果：
本发明使用植物组织培养快繁来实现工厂化生产的育苗基数，再结合微扦插繁育技术，培育出完整植株的工厂化育苗方法，能有效的简化培育环节，缩短育苗时间，降低生产成本，实现具有培养周期短、苗木生长旺盛、生根率高、移植成活率高的特点，而且操作方法简便可行，使皱果桉实行工厂化快速育苗，大量推广使用该树种，进而绿化、美化城市，提供可靠的优质种苗。
本发明通过壮苗和驯化培养，可获得大批量微扦插用苗材料，在微扦插技术支持下，把控好移植各个技术环节，移植成活率率可达到95.6％，与常规组织培养育苗移植成活率96.68％和一种皱果桉组织培养快速繁殖的育苗方法95.79％没有显著差别，却可以简化3-2个育苗环节，缩短45-15天育苗时间。苗木出圃率为91.1％与常规组织培养育苗92.7％没有显著差异，比一种皱果桉组织培养快速繁殖的育苗方法出圃率78.4％提高了12.7％。
具体实施方式
本发明公开了一种皱果桉的微扦插快繁育苗方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明技术步骤如下：
(1)选优：
在引种实验林地，选择花色艳红，花序大，花量多，杆型通直，树冠好看，生长健壮，具有观赏价值的成年优树为繁育对象，进行环割促萌。
(2)外植体材料选择：
采摘环割后萌发的无病虫害、无机械损伤的嫩枝条，作为繁殖用的外植体材料，修剪成带有1～2个腋芽的茎段，用流水冲洗干净，然后用0.1％的氯化汞消毒灭菌3～10分钟后，再用无菌水洗4次，接种于初代培养基中。
(3)建立无菌繁殖体：
将处理好的外植体一瓶一段接种于初代培养基中，放置在室温20～30℃，每日光照8～12小时，光照强度800～2000lx的条件下培养15～30天，叶腋萌发长出绿芽，剪取绿芽接种于增殖培养基上，诱导出的腋芽和不定芽能够连续生长繁殖，完成无菌繁殖体的建立。
(4)增殖培养：
将无菌繁殖体接种于增殖培养基中，放置在室温20～30℃，每日光照8～12小时，光照强度在800～3000lx的条件下培养15～30天后，芽丛增殖倍数3～4倍，在无菌条件下再将其分割转接，经过反复继代增殖培养扩大繁殖量。
(5)壮苗培养与驯化炼苗：
丛生芽高约15mm以上时，将芽从基部切下，分株接种于M2培养基中，放置在室温20～30℃，每日光照8小时，光照强度在1000lx条件下培养一周，再放置到75％遮荫条件下的温室中促根并驯化炼苗，每日光照12小时，光照强度在10000lx条件下炼苗20～30天，当瓶苗高30mm以上，叶片展开，叶色浓绿，茎芽生长健壮，苗茎木质化程度高，有60％以上的苗已经开始长出根原基。
改良培养基M2使瓶苗生长旺盛，可以在短时间内批量培育出整齐一致的繁殖材料，微扦插育苗技术通过壮苗和驯化炼苗，节省了幼苗在瓶内诱导生根的培育过程，简化组织培养育苗程序，节省育苗时间30天左右。
(6)配制育苗基质：
将黄心土与椰糠按照重量份比例混合，在混合基质中添加一定比例的活性炭，将充分混合后的基质填装到荫棚内的育苗杯中，用0.1％浓度的高锰酸钾水溶液淋透基质，对基质进行消毒灭菌，24小时后再用水淋透基质备用。
黄心土：椰糠：活性炭按1：1：0.1的比例配制。
(7)移植：
将瓶中已驯化好的幼苗小心取出，洗净黏在苗上的培养基，速沾生根剂，移植到填满基质的育苗杯中，每一杯种植一株苗，覆土深度刚好盖住根原基，压紧基质，使苗和基质紧密接触，移植完成后喷雾浇定苗水。
(8)移植后的管理：
瓶苗在移植后一个月的光温控制、水份管理、营养液管理和病虫害防治：
光温控制：温室要求75％的遮光网避免阳光直射，苗床用农膜覆盖的小拱棚保湿，白天10：00～5：00再用75％的遮光网遮光。小拱棚内温度保持在30℃以内(25～28℃)，温度过高时，可喷雾通风降温。待小苗长出新根新芽后，逐步增加光照强度、打开农膜通风透气，以适应外界环境条件。
水分管理：移植后的两周内要保持基质湿润，拱棚内空气相对湿度保持在90％以上，防止叶片失水。之后逐步控制水分，基质湿度控制在60％左右，促进新根新芽发生，30天生根率可达到95％以上。
营养液管理：移植一周后，喷施营养液，待幼苗长出新叶新根生长稳定后，再用磷酸二氢钾和尿素按比例的混合液喷施，每隔7～10天喷施一次。
病虫害防治：移植后第三天选用多菌灵或甲基托布津(800-1000)倍液喷雾消毒灭菌，可有效防止病菌滋生，之后每隔10～15天喷雾一次，密切关注虫害，及时发现，及早防治，以提高成活率。
(9)幼苗培育：
培养一个月后的幼苗生长稳定，期间逐步打开遮光网，最后实现全光照培育，当苗木生长到25～35厘米高时，根系生长已很发达了，育苗杯内根系团结在一起，就可出圃种植。
育苗基质用黄心土和椰糠1:1混合，不用泥炭土不仅节省有限资源的使用和避免浪费，而且基质的通透性和持水性良好，有利于苗木的生长，在基质中添加活性物质活性炭，有利于改善基质环境，促进苗木根系生长。
通过壮苗和驯化培养，可获得大批量微扦插用苗材料，在微扦插技术支持下，把控好移植各个技术环节，生根率可达到95％以上，与常规组织培养育苗生根率没有显著差别，却可以缩短1个月生产时间。移植成苗率提高10％以上。
本发明中所用试剂或材料均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1皱果桉利用组培技术实现快繁
在引种实验林地，选择花色艳红，花序大，花量多，杆型通直，树冠好看，生长健壮，具有观赏价值的成年优树为繁育对象，进行环割促萌。
采摘环割后萌发的无病虫害、无机械损伤的嫩枝条，修剪成带有1～2个腋芽的茎段，用流水冲洗干净，然后用0.1％的氯化汞消毒灭菌3～10分钟后，再用无菌水洗4次，作为培养材料的外植体。
将外植体一瓶一段接种于初代培养基中，放置在室温20～30℃，每日光照8～12小时，光照强度800～2000lx的条件下培养15～30天，叶腋萌发长出绿芽，剪取绿芽接种于培养基上，诱导出的腋芽和不定芽能够连续生长繁殖，完成无菌繁殖体的建立。
初代培养基M1每升体积的启动培养基由以下含量的组分配制而成，pH调至5.8：
实施例2皱果桉壮苗培养与驯化炼苗
丛生芽高约15mm以上时，将芽从基部切下，分株接种于M2培养基中，放置在室温20～30℃，每日光照8小时，光照强度在1000lx条件下培养一周，再放置到75％遮荫条件下的温室中促根并驯化炼苗，每日光照12小时，光照强度在10000lx条件下炼苗20～30天，当瓶苗高3cm以上，叶片展开，叶色浓绿，茎芽生长健壮，苗茎木质化程度高，有60％以上的苗已经开始长出根原基。
M2培养基每升体积的壮苗培养基由以下含量的组分配制而成，pH调至5.8：
实施例3皱果桉微扦插育苗
一、配制育苗基质：
将黄心土与椰糠按照重量份比例混合，在混合基质中添加一定比例的活性炭，将充分混合后的基质填装到荫棚内的育苗杯中，用0.1％浓度的高锰酸钾水溶液淋透基质，对基质进行消毒灭菌，24小时后再用水淋透基质备用。
黄心土：椰糠：活性炭按1：1：0.1的比例配制。
二、移植：
将瓶中已驯化好的幼苗小心取出，洗净黏在苗上的培养基，速沾生根剂，移植到填满基质的育苗杯中，每一杯种植一株苗，移植覆土深度刚好盖住苗基部，压紧基质，使苗和基质紧密接触，移植完成后喷雾浇定苗水。
生根剂：使用外源生长调节剂吲哚丁酸和萘乙酸混合使用，IBA+NAA(吲哚丁酸+萘乙酸)浓度为100mg/L+50mg/L。
三、移植后的管理：
瓶苗在移植后一个月的光温控制、水份管理、营养液管理和病虫防治：
1、光温控制：温室要求75％的遮光网避免阳光直射，苗床用农膜覆盖的小拱棚保湿，白天10:00～17:00再用75％的遮光网覆盖小拱棚。拱棚内温度保持在25-28℃，温度过高时，可喷雾通风降温。待小苗长出新根新芽后，逐步增加光照强度、打开农膜通风透气，以适应外界环境条件。
2、水分管理：移植后的两周内要保持基质湿润，拱棚内空气相对湿度在90％以上，防止叶片失水。之后逐步控制基质水分，基质湿度控制在50-60％，促进新根新芽发生，30天生根率可达到95％以上。
3、营养液管理：移植7天喷施营养液，之后每隔5天喷施一次，待幼苗长出新叶新根后，再用磷酸二氢钾和尿素按比例混合肥液喷施，每隔7-10天喷施一次。
营养液：为硝酸铵、硝酸钙、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁混合水溶液喷施。配方：硝酸铵4克、硝酸钙2克、硝酸钾1克、磷酸二氢钾2克、硫酸镁1克分别溶解后定容于10升水里，pH值调整到6.5。
混合肥液：磷酸二氢钾∶尿素＝1∶1混合，浓度0.3％水溶液喷施。
4、病虫防治：移植后第三天用多菌灵或甲基托布津(800-1000)倍液喷雾消毒灭菌，可有效防止病菌滋生，之后每隔10～15天喷雾一次。密切关注虫害，及时发现，及早防治，以提高成活率。
5、幼苗培育：
幼苗培育一个月，逐步打开遮光网，最后实现全光照培育，混合肥液浓度可增加一倍喷施，当苗木生长到25～35厘米高时，根系生长已很发达了，育苗杯内根系团结在一起，就可出圃种植。
实施例4皱果桉微扦插育苗
1、本试验采用育苗基质是：黄心土：椰糠：活性炭按1：1：0.1的比例配制。
2、本试验采用生根剂：是2种外源植物生长调节剂(吲哚丁酸和萘乙酸)单独使用或混合使用，配制成5种生根剂，用清水作对照，每个处理100株，重复3次。40天调查成苗率。各处理浓度如下：
1#吲哚丁酸：100mg/L
2#萘乙酸：100mg/L
3#吲哚丁酸+萘乙酸：100mg/L+100mg/L
4#吲哚丁酸+萘乙酸：50mg/L+100mg/L
5#吲哚丁酸+萘乙酸：100mg/L+50mg/L
6#清水。
表1植物生长调节剂对生根的影响
表1结果显示，采用本实施例的技术措施进行微扦插育苗后，平均生根率和平均根数具有明显的效果，5#>4#>3#>1#>2#>6#，综合分析以5#外源生长调节剂具有较大的优势。6#处理在不加任何外源生长调节剂的情况下，说明经过壮苗的芽在改良后的基质中平均生根率也能达到73％以上。
实施例5不同生根剂对邹果桉微扦插的影响
1、本试验采用育苗基质是：黄心土：椰糠：活性炭按1：1：0.1的比例配制。
2、本试验采用3种生根剂：强力生根粉稀释50倍(A)、根太阳稀释50倍(B)与5#生长调节剂(C)速沾5秒钟。
3、微扦插用苗：经组织培养壮苗驯化的芽苗。每个处理30株，重复3次。60天调查成苗率。
表2不同生根剂对邹果桉微扦插的影响
| 生根剂 | 平均生根率(％) | 平均根数(条) | 出圃率(％) |
| A | 54.44 | 2.11 | 47.78 |
| B | 67.78 | 1.89 | 53.33 |
| C | 90.00 | 3.45 | 87.78 |
表2结果显示平均生根率C>B>A、平均生根条数C>A>B、出圃率C>B>A，植物生长调节剂5#吲哚丁酸+萘乙酸：100mg/L+50mg/L是本试验的最优配方。
实施例6邹果桉扦插育苗对比试验
1、本试验采用育苗基质是：黄心土：椰糠：活性炭＝1：1：0.1的比例配制。
2、本试验采用生根剂：
微扦插用：吲哚丁酸+萘乙酸：100mg/L+50mg/L
硬枝扦插和嫩枝扦插用：吲哚丁酸+萘乙酸：500mg/L+200mg/L
3、外植体材料来源：
1)硬枝扦插：在选优的成年大树的中上部，采取当年生半木质化枝条，穗条剪成长10厘米左右，带2-4个叶腋，修剪叶片留1/3，上切口距叶腋1.5厘米，剪成平口，下切口剪成斜面。每个处理30株，重复3次。60天调查成苗率。
2)嫩枝扦插：将组培苗培育成扦插用母株，剪取半木质化带顶芽的枝条，长度10厘米左右，留2-4片叶，修剪叶片留1/3，切口剪成斜面。每个处理30株，重复3次。60天调查成苗率。
3)微扦插：经组织培养壮苗驯化的芽苗。每个处理100株，重复3次。60天调查成苗率。
表3扦插生根对比表
表3结果显示：硬枝扦插的生根率极低3.33％，嫩枝扦插的生根率和成苗率也很低不足40％，严重制约了皱果桉的推广应用。利用组培快繁的优势，通过壮苗和驯化培养，可在短期内获得大批量微扦插用苗材料，微扦插育苗技术的突破使生根率可达到95％以上，与常规扦插育苗技术有显著优势。
实施例7邹果桉组培育苗方法对比试验
1、邹果桉常规组织培养育苗方法(A)：育苗程序有(1)建立无菌繁殖体、(2)继代增殖培养30天、(3)复壮培养30天、(4)诱导生根30天、(5)瓶苗驯化15天、(6)瓶苗移植、(7)幼苗管理到出圃60天等七个环节，从继代增殖培养到苗木出圃需要大约165天时间。
2、一种邹果桉组培快繁育苗方法(B)：育苗程序有(1)建立无菌繁殖体、(2)继代增殖培养30天、(3)诱导生根30天、(4)瓶苗驯化15天、(5)瓶苗移植、(6)幼苗管理到出圃60天等六个环节，从继代增殖培养到苗木出圃需要大约135天时间。
3、邹果桉微扦插育苗方法(C)：育苗程序有(1)建立无菌繁殖体、(2)继代增殖培养30天、(3)复壮培养及瓶苗驯化相结合30天、(4)瓶苗移植、(5)幼苗管理到出圃60天等五个环节，从继代增殖培养到苗木出圃需要大约120天时间。
4、试验材料：
A：经继代培养、复壮培养、诱导生根、驯化的瓶苗，每瓶10株，用100瓶，计1000株(包括已生根和未生根)。
B：经继代培养、诱导生根、驯化的瓶苗，每瓶10株，用100瓶，计1000株(包括已生根和未生根)。
C：经继代培养、复壮培养同时驯化的瓶苗，每瓶10株，共100瓶，计1000株(包括已生根和未生根)。
移植前统计瓶苗生根率，移植30天统计成活率，60天统计出圃率。
表4邹果桉组培育苗方法对比试验
表4结果显示：1、瓶苗生根率：A、B、C分别是96.5％、87.7％、32.9％，三种方法有显著差异；2、移植成活率：A、B、C分别是96.68％、95.79％、95.6％，三种方法无明显差异；3、苗木出圃率：A、C、B分别是92.7％、91.1％、78.4％，A与C的差异不显著；4、育苗环节：A、B、C分别是7个环节、6个环节、4个环节；5、育苗时间：A、B、C分别是165天、135天、120天。三种方法差异较大，C生产环节最简化，育苗时间最短，比A简化3个环节，节省45天，比B简化2个环节，节省15天；B比A简化1个环节，节省30天。
综合各项指标，邹果桉最优育苗方法是简化生产环节和节约育苗时间的微扦插育苗方法，其次是组培快繁育苗方法。常规组织培养育苗方法虽然在瓶苗生根率、移植成活率及苗木出圃率都较高，但优势并不明显，且生产环节繁多，育苗时间太长。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种皱果桉的微扦插快繁育苗方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)对成年树进行环割促萌，将萌发的嫩枝条作为外植体材料制备带有1～2个腋芽的茎段，消毒；
(2)将茎段接种于M1培养基进行初代培养，直至叶腋萌发长出绿芽；
(3)取绿芽接种于M1培养基，诱导出腋芽和不定芽，得到无菌繁殖体；
(4)将无菌繁殖体接种于M1培养基进行增殖培养，获得丛生芽；将丛生芽分割转接至增殖培养基，进行继代增殖培养；
(5)丛生芽高15mm以上时，将芽从基部切下，分株接种于M2培养基进行壮苗培养，然后驯化炼苗，得到驯化后的幼苗；
(6)将幼苗速沾生根剂，移植到育苗基质中，所述育苗基质由黄心土、椰糠、活性炭组成；
(7)移植后管理；
(8)培养25～35天后，期间逐步增加光照，直至全光照培育，当苗木生长到25～35厘米高时出圃种植；
M1培养基的组成为：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、NaMoO2·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、Na2EDTA、FeSO4·7H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、烟酸硫胺素、甘氨酸、蔗糖、卡拉胶、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、水；
M2培养基的组成为：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、NaMoO2·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、Na2EDTA、FeSO4·7H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、烟酸硫胺素、抗坏血酸、生物素、甘氨酸、蔗糖、卡拉胶、6-苄基腺嘌呤、3-吲哚丁酸、萘乙酸、水。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，每升M1培养基由以下含量的组分配制而成，pH调至5.6～6.0：
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，每升M2培养基由以下含量的组分配制而成，pH调至5.6～6.0：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述消毒为：用流水冲洗干净，然后用0.1％的氯化汞消毒灭菌3～10分钟后，再用无菌水洗4次。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述初代培养的条件为：20～30℃，每日光照8～12小时，光照强度800～2000lx的条件下培养15～30天。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述增殖培养的条件为：20～30℃，每日光照8～12小时，光照强度在800～3000lx的条件下培养15～30天。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述壮苗培养的条件为：20～30℃，每日光照8小时，光照强度在1000lx条件下培养一周。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述驯化炼苗的条件为：75％遮荫条件下的温室中，每日光照12小时，光照强度在10000lx条件下炼苗20～30天。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述育苗基质中，黄心土、椰糠与活性炭的重量比为1：1：0.1。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于，所述移植后管理如下：
光温控制：温室要求75％的遮光网，苗床用农膜覆盖的小拱棚保湿，白天10:00～17:00再用75％的遮光网遮光；小拱棚内温度保持在25-28℃；待小苗长出新根新芽后，逐步增加光照强度、打开农膜通风透气；
水分管理：移植后的两周内保持基质湿润，拱棚内空气相对湿度保持在90％以上；之后逐步控制水分，基质湿度50％～60％；
营养液管理：移植一周后，喷施营养液，待幼苗长出新叶新根生长稳定后，再用磷酸二氢钾和尿素的混合液喷施，每隔7～10天喷施一次；
病虫害防治：移植后2～4天用多菌灵或甲基托布津消毒灭菌，每隔10～15天一次。
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