KR100717898B1

KR100717898B1 - 복주머니란 종자의 발아 및 휴면 타파 방법

Info

Publication number: KR100717898B1
Application number: KR1020050109609A
Authority: KR
Inventors: 윤종선; 박재성; 김익환; 이철희; 홍의연; 윤태; 박성규; 이우영
Original assignee: 충청북도 (관리부서:충청북도 농업기술원)
Priority date: 2005-11-16
Filing date: 2005-11-16
Publication date: 2007-05-14

Abstract

본 발명은 복주머니란 종자의 발아 및 휴면 타파 방법에 관한 것으로, 타가수분 후 50~86일 된 복주머니란 종자를 수정MS고체배지에 파종하고 4± 1℃에서 60일간 저온 처리 후 암 조건으로 기내에서 무균적으로 발아를 시키거나 혹은 타가수분 후 50~86일 된 복주머니란 종자를 암 조건에서 액체 진탕배양에 의해 기내에서 무균 발아시킨 결과, 발아율이 향상되는 효과를 나타냈다.

또한, 본 발명의 복주머니란의 휴면아의 휴면타파방법에 따라 수정MS고체배지에서는 240일간, 수정MS액체배지에서는 180일간 배양하여 얻은 휴면아를 명 조건에서 60일간 수정MS액체배지에서 진탕 배양한 결과, 휴면성이 타파되어 온실에서 성공적으로 재배되는 효과를 나타냈다. 상기 방법은 휴면이 타파된 복주머니란 어린 묘를 얻을 수 있는 혁신적인 방법이다. 이러한 방법으로 복주머니란의 종자 발아 및 휴면성을 타파하여 복주머니란을 번식하게 된다면 멸종 위기에 처해있는 우리나라 자생식물인 복주머니란을 보존하고, 서식지를 복원할 수 있을 뿐만 아니라 원예용으로도 개발할 수 있으므로 의미가 대단히 크다고 할 수 있다.

복주머니란, 종자, 고체배양, 액체배양, 휴면아, 휴면타파

Description

복주머니란 종자의 발아 및 휴면 타파 방법{Methods of seed germination and bud dormancy-breaking of lady's slipper orchid, Cypripedium macranthum Sw.}

도 1은 복주머니란이 개화한 상태를 나타낸 사진도이다.

도 2는 복주머니란을 타가수분하고 60일 경과 후 형성된 자방의 모습을 나타낸 사진도이다.

도 3은 복주머니란의 미성숙 종자(좌)와 성숙한 종자(우)를 비교한 사진도이다.

도 4는 복주머니란의 종자를 실체현미경으로 40×로 확대하여 촬영한 사진도이다.

도 5는 복주머니란 종자에서 구형의 원괴체가 형성된 모습을 나타낸 사진도이다(실체현미경으로 20×로 확대 촬영).

도 6은 복주머니란 원괴체에서 신초가 출현한 모습을 나타낸 사진도이다(실체현미경으로 20×로 확대 촬영).

도 7은 복주머니란 원괴체에서 뿌리와 흡입모가 형성된 모습을 나타낸 사진도이다(실체현미경으로 10×로 확대 촬영).

도 8은 복주머니란의 휴면아와 뿌리가 잘 형성된 모습을 나타낸 사진도이다.

도 9는 복주머니란을 타가수분한 후 50일 경과된 종자를 수정MS고체배지에 파종하여 저온처리하고, 120일간 암 상태로 배양한 결과를 나타낸 것이다.

도 10은 복주머니란을 타가수분한 후 60일 경과된 종자를 수정MS고체배지에 파종하여 저온처리하고, 120일간 암 상태로 배양한 결과를 나타낸 것이다.

도 11은 복주머니란을 타가수분한 후 86일 경과된 종자를 수정MS고체배지에 파종하여 저온처리하고, 120일간 암 상태로 배양한 결과를 나타낸 것이다.

도 12는 복주머니란을 타가수분한 후 60일 경과된 종자를 수정MS고체배지에 파종하여 저온처리하고, 240일간 암 상태로 배양한 결과를 나타낸 것이다.

도 13은 복주머니란을 타가수분한 후 60일 경과된 종자를 수정MS액체배지에 파종하고, 100일간 암 상태로 배양한 결과를 나타낸 것이다.

도 14는 복주머니란을 타가수분한 후 60일 경과된 종자를 수정MS액체배지에 파종하고, 160일간 암 상태로 배양한 결과를 나타낸 것이다.

도 15는 복주머니란을 타가수분한 후 60일 경과된 종자를 수정MS액체배지에 파종하고, 180일간 암 상태로 배양한 결과를 나타낸 것이다.

도 16은 수정MS액체배지의 명 조건에서 복주머니란 휴면아의 휴면을 타파하기 위해 진탕배양하는 모습을 나타낸 것이다.

도 17은 수정MS액체배지의 명 조건에서 60일간 진탕 배양하여 휴면이 타파되고 잎과 뿌리가 발달한 모습(삼각플라스크 내부)을 나타낸 것이다.

도 18은 수정MS액체배지의 명 조건에서 60일간 진탕 배양하여 휴면이 타파되고 잎과 뿌리가 발달한 모습(밖에 꺼낸 것)을 나타낸 것이다.

도 19는 휴면을 타파하기 위해 수정MS액체배지의 암 조건에서 60일간 진탕 배양한 결과를 나타낸 것이다(휴면아는 거의 자라지 못하였으나, 뿌리가 잘 발달된 모습).

도 20은 휴면이 타파된 복주머니란의 어린 묘를 화분(내부 직경 110mm, 높이 113mm)에 심고 온실에서 재배한 모습을 나타낸 것이다.

본 발명은 복주머니란 종자의 발아 및 휴면 타파 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 타가수분 후 시일이 경과된 복주머니란 종자를 수정MS고체배지 또는 수정MS액체배지에 파종하여 저온처리 후 암 조건에서 기내배양하여 종자를 발아시키는 방법과 휴면아를 명 조건에서 수정MS액체배지에서 진탕배양하여 휴면성을 타파하는 방법에 관한 것이다.

복주머니란(福주머니蘭, Lady's slipper, 학명 Cypripedium macranthum Sw.)은 난초과에 속하는 다년생 식물로서 순 우리말로는 개불알꽃 또는 복주머니꽃 이라고 한다. 복주머니란은 산기슭에서는 그늘에서 자라지만 산위로 올라가면서 양지 쪽 풀밭에서 자라며, 근경이 옆으로 자라나가 마디에서 뿌리가 내리고 초장은 25~40cm 이며 다세포의 털이 있다. 잎은 3~5개이고, 연한 홍자색의 꽃이 5~7월에 원줄기 끝에 1개가 피며, 특징인 순판(lip)이 주머니 같은 형태를 하고 있어서 우리나라의 야생란 가운데 가장 관상 가치가 높은 것 중의 하나이다.

복주머니란은 전국의 산에 자생하지만 근경이 옆으로 퍼져나가는 방식으로 번식을 하기 때문에 번식 속도가 느린 편이다. 또한 초장이 작기 때문에 주변의 나무나 숲의 그늘에 가려 생육이 불량하고 자연 도태되는 경향이 있으며, 자생식물에 대한 관심이 높아짐에 따라 애호가들의 무분별한 남획으로 개체수가 줄어들어 멸종위기에 처해 있는 실정이다.

복주머니란의 자방 내부에는 수 만개의 종자가 있으나 배유가 없어서 자연 상태에서는 발아가 거의 불가능한 것으로 알려져 있다. 복주머니란은 우리나라의 귀중한 자생식물로서 멸종 위기에 처해 있는 희귀식물일 뿐만 아니라 관상가치가 높아 원예용으로 개발할 가치가 높기 때문에 조직배양 기술을 이용하여 복주머니란 종자를 인공배지에 파종하여 발아시키고자 국내에서 많은 사람이 연구를 한바 있으나 뚜렷한 성과는 없었다.

따라서 우리나라의 귀중한 자생식물이면서 멸종 위기에 처해 있고 원예용으로 개발할 가치가 높은 복주머니란의 종자 발아 배지, 종자 발아 방법 및 휴면아의 휴면 타파 방법 등을 개발하여 복주머니란 종자의 기내 배양에 의한 번식 방법을 확립고자 본 발명을 수행하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 종래 기술의 단점을 개선한 복주머니란의 종자 발아 방법을 제공하고자 한다.

본 발명의 다른 목적은 복주머니란의 휴면아의 휴면성을 타파하는 개선된 방법을 제공하고자 한다.

본 발명의 상기 목적은 타가수분 후 50일, 60일 또는 86일 된 복주머니란 종자를 수정MS고체배지에 파종하고 4℃에서 60일간 저온 처리후 암 조건으로 기내에서 무균적으로 발아시켰으며, 타가수분 후 50일, 60일 또는 86일된 복주머니란 종자를 암 조건에서 액체 진탕배양에 의해 기내에서 무균 발아시키고, 수정MS고체배지에서는 240일간, 수정MS액체배지에서는 180일간 배양하여 휴면아를 얻었고, 휴면아를 명 조건에서 60일간 수정MS액체배지에서 진탕 배양하여 휴면성을 타파하여 온실에서 재배함으로써 달성하였다.

본 발명은 타가수분한 복주머니란 종자를 수정MS고체배지에 파종 및 저온처리하는 단계; 상기 종자를 암 조건에서 기내배양하는 단계; 상기 타가수분한 복주머니란 종자를 암 조건에서 액체배양하여 기내배양하는 단계; 및 휴면아를 명 조건에서 수정MS액체배지에서 진탕배양하여 휴면성을 타파하는 단계로 구성된다.

본 발명에서 휴면아는 휴면 상태의 어린싹을 말한다.

본 발명 복주머니란 종자의 무균 발아 및 휴면 타파를 위한 수정 MS배지는NH₄NO₃412.50 mg/L, MgSO₄ 45.14 mg/L, KNO₃ 47.50 mg/L, KH₂PO₄ 42.50 mg/L, CaCl₂ ZnSO₄·7H₂O 83.01 mg/L, ZnSO₄·7H₂O 2.15 mg/L, Na₂MoO₄·2H₂O 0.02 mg/L, MnSO₄·H₂O 4.23 mg/L, KI 0.21 mg/L, H₃BO₃ 1.55 mg/L, FeNaEDTA 9.18 mg/L, CuSO₄·5H₂O 0.07 mg/L, CoCl₂·6H₂O 0.07 mg/L, 글리신(Glycine) 0.50 mg/L, 미오-이노시톨(myo-Inositol) 25.00 mg/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.13 mg/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.13 mg/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 0.25 mg/L, 설탕 10g/L 및 코코넛워터 100mL/L를 첨가하고 나머지는 정제수를 넣어 총 1L가 되도록 하며, 최종 pH 5.8로 조정하여 제조함을 특징으로 한다..

본 발명 복주머니란의 타가수분 후 50∼86일 된 복주머니란 종자를 수정 MS배지에 한천을 첨가한 고체배지에 파종하고 4±1℃에서 60일간 저온 처리 후 암 조건으로 120일간 기내에서 무균 발아시킴을 특징으로 한다.

본 발명의 실시예에 따르면, 복주머니란의 종자 발아 방법은 타가수분 후 50∼86일 된 복주머니란 종자를 25±1℃의 암 조건에서 80회/분의 속도로 100일간 액체 진탕배양하여 기내에서 무균 발아시킴을 특징으로 한다.

본 발명의 실시예에 따르면, 복주머니란의 휴면아 휴면타파방법은 복주머니란의 휴면아를 25±1℃로 유지되는 배양실에서 1500lux로 16시간 일장시간을 가지는 명 조건에서 80회/분의 속도로 60일간 액체 진탕배양에 의해 휴면을 타파함을 특징으로 한다.

이하, 본 발명의 구체적인 구성 및 작용은 실시예에 의해 더욱 상세히 설명한다. 단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 권리범위가 이들에만 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1: 복주머니란 종자 무균 발아 시험

복주머니란 꽃이 개화한 후(도 1), 3~5일에 손으로 자가수분 또는 타가수분을 시켰다. 복주머니란은 인공수분 후 100~120일 정도면 자방의 표면이 갈색으로 변하고 종자가 완숙되며, 완숙되면 휴면에 들어가서 발아시키기 어려운 특성이 있 기 때문에, 종자가 완숙되기 전인 인공수분 후 50일, 60일 및 86일에 자방을 수확하여 파종하였다.

자방의 껍질은 진한 녹색으로 길이가 25~45mm, 직경이 약 10mm로 자가수분과 타가수분간에는 형태적으로 큰 차이는 없었다(도 2).

자방 내부에 있는 복주머니란 종자는 완전히 미성숙한 것은 백색이고, 성숙할 수록 갈색으로 변하였다(도 3).

종자 발아용 기본 배지는 종자가 기내에서 발아하는 데 많은 영양분이 필요하지 않다고 판단되어 MS(Murashige & Skoog, 1962) 배지의 무기염류와 비타민류의 함량을 약 1/4로 줄인 수정 MS배지를 사용하였으며, 설탕은 10g/L, 코코넛 워터(미국 시그마사)는 100mL/L를 첨가하였고, 배지의 pH를 5.8로 조정하였다(표 1).

수정MS고체배지의 경우 한천 8g/L을 사용하였고, 모든 배지는 121℃에서 15분간 멸균하여 사용하였다. 상기 수정MS고체배지는 1회용 페트리디쉬(지름 100mm, 높이 40mm)에 50mL씩 분주하였고, 수정MS액체배지는 500mL 삼각플라스크에 100mL씩 분주하였다.

자방을 70% 에틸 알콜에 30초간 침지한 후, 3% 차아염소산 나트륨 용액에 7분간 침지하여 자방 표면을 살균하고 멸균수에 세척하였다. 종자 파종은 자방을 열개한 후 수정MS고체배지와 수정MS액체배지 모두 처리 당 500립 정도씩 3반복으로 파종하였다. 배양 방법은 명 조건 배양과 암 조건 배양으로 하였고, 암 조건 배양은 알루미늄 호일로 싸서 빛을 완전히 차단하였다.

수정MS고체배지에 종자를 파종한 경우 4±1℃에서 60일간 저온 처리를 한 후 25±1℃로 유지되는 배양실에서 명 조건(3,000 lux, 16시간 일장) 또는 암 조건으로 배양하였다.

수정MS액체배지에 종자를 파종한 경우 저온처리를 하지 않고, 25±1℃로 유지되는 배양실에서 명 조건(3,000 lux, 16시간 일장) 또는 암 조건에서 80회/분 속도로 진탕 배양하였다. 수정MS액체배지는 1개월 마다 묶은 배지를 쏟아내고 멸균수로 종자와 플라스크 내부를 2회 세척한 뒤 새로 조제한 배지를 넣었다.

발아 과정을 1주일 간격으로 육안과 실체 현미경을 사용하여 관찰하였다. 발아율 조사는 종피 속에 있는 배(胚)가 자라서 길이 0.5∼1mm의 원괴체가 형성된 것을 발아한 기준으로 설정하여 수정MS고체배지의 경우 저온처리가 끝난 후 120일간 배양한 후에 조사하였고, 수정MS액체배지는 100일간 배양 후 조사하였다.

복주머니란 종자의 무균 발아 및 휴면 타파에 사용된 수정 MS배지

구분	성 분 명	사 용 량
다량 원소	NH₄NO₃	412.50 mg/L
	MgSO₄	45.14 mg/L
	KNO₃	47.50 mg/L
	KH₂PO₄	42.50 mg/L
	CaCl₂	83.01 mg/L
미량 원소	ZnSO₄·7H₂O	2.15 mg/L
	Na₂MoO₄·2H₂O	0.02 mg/L
	MnSO₄·H₂O	4.23 mg/L
	KI	0.21 mg/L
	H₃BO₃	1.55 mg/L
	FeNaEDTA	9.18 mg/L
	CuSO₄·5_H2O	0.07 mg/L
	CoCl₂·6H₂O	0.07 mg/L
아미노산, 비타민	Glycine	0.50 mg/L
	myo-Inositol	25.00 mg/L
	Nicotinic acid	0.13 mg/L
	Pyridoxine HCl	0.13 mg/L
	Thiamine HCl	0.25 mg/L
기타	설탕	10 g/L
	코코넛 워터	100 mL/L
	배지의 pH	5.8

복주머니란 종자는 크기가 매우 작으며(도 4), 발아 과정은 종피 속에 있는 배가 자라서 길이 0.5∼1mm의 원괴체가 형성되었고(도 5), 원괴체에서 신초가 먼저 출현하였으며(도 6), 그 후 뿌리가 출현하였고, 신초는 생장 속도가 느렸지만 뿌리는 생장 속도가 빨랐으며(도 7), 뿌리가 어느 정도 발달한 뒤 신초가 자라서 휴면아로 발달하였다(도 8).

종자의 발아 속도는 동일한 자방 내의 종자라 할지라도 배의 발육 정도에 따라 차이가 컸으며, 수정MS액체배지보다 수정MS고체배지에서 차이가 더 컸다. 즉, 수정MS고체배지의 경우, 배양 15일 후부터 배가 자라서 원괴체가 형성되기 시작하여 빠른 것은 30일이면 길이 2mm의 원괴체로 발달하였다.

종피 속에 있는 배가 자라서 길이 0.5∼1mm의 원괴체가 형성된 것을 발아의 기준으로 정하고(도 5), 수정MS고체배지에서의 발아율을 조사한 결과는 표 2와 같다. 수정MS고체배지에 종자를 파종하고 120일간 배양하였을 때, 명 조건 배양의 경우 모든 처리에서 배가 비대되지 않아서 원괴체를 형성하지 못하였다.

암 조건 배양의 경우 자가수분에서는 발아가 되지 않았으나 타가수분에서는 수분 후 50일, 60일 및 86일에 파종한 경우 각각 4.3%, 16.1% 및 1.5%가 발아하였다. 타가수분 50일 후에 파종한 것과 타가수분 60일 후에 파종한 것은 배양 30일 후부터 원괴체가 형성되기 시작하였다. 타가수분 50일 후에 파종한 것은 배가 너무 미성숙하여 발아율이 낮았으며, 타가수분 86일에 파종한 경우 배는 잘 성숙하였으나 원괴체가 형성되는 속도가 느렸고, 발아율도 매우 낮았다(도 9, 도 10 및 도 11).

이상의 결과에서 볼 때, 복주머니란 종자의 발아를 위해서는 타가수분을 해야하고, 타가수분 후 50일경에 파종을 해도 발아할 수 있지만 60일경에 파종하는 것이 가장 좋으며, 빛은 필요하지 않은 것으로 나타났다. 따라서 복주머니란 종자를 수정MS고체배지에 파종하여 발아시킬 경우 타가수분 후 60일 경과된 종자를 수정MS고체배지에 파종하여 저온처리한 후 암 조건에서 배양하는 방법이 바람직하였다.

수정MS고체배지에서 복주머니란 종자의 발아율 (%)

인공수분 방식	인공수분 후 일 수	명 조건 배양	암 조건 배양
자가수분	50일	0	0
	60일	0	0
	86일	0	0
타가수분	50일	0	4.3
	60일	0	16.1
	86일	0	1.5

수정MS액체배지에 종자를 파종하고 100일간 진탕 배양하였을 때 명 조건 배양의 경우 모든 처리에서 배가 자라지 않아 원괴체로 발달하지를 못하였다. 암 조건 배양의 경우 자가 수분 종자에서는 발아가 되지 않았으며, 타가 수분 종자에서는 인공수분 후 50일, 60일 및 86일에 파종한 경우 각각 21.7%, 64.2% 및 4.6%가 발아하여 수정MS고체배지에서 보다 발아율이 크게 높았으며, 인공수분 후 60일 종자에서 발아율이 가장 높았다(표 3).

수정MS고체배지에서 복주머니란 종자의 발아는 천천히 이루어졌고, 종자 개체 간에 차이가 매우 컸으며, 생장이 느려 휴면아(휴면 상태의 어린 싹)가 형성되는데 240일 이상이 소요되었다(도 12).

수정MS액체배지에서는 수정MS고체배지에 비하면 발아가 빠르고 비교적 균일하였다. 그러나, 수정MS액체배지에서도 종자 개체 간에 차이가 있어 먼저 발아한 것은 신초와 뿌리가 형성되었지만 느린 것은 원괴체 형성 단계인 것도 있었다(도 13). 수정MS액체배지에서 160일 배양한 결과 휴면아는 노란색이었고, 뿌리는 흰색으로 구분이 되었으며, 특히 뿌리의 발달이 매우 양호하였다(도 14). 뿌리가 많이 발달함에 따라 양분의 흡수가 많아서 수정MS고체배지에서 보다 생장이 빨랐고, 배양 후 180일이면 대부분 휴면아가 형성되어 수정MS고체배지보다 약 60일 정도 빨랐다(도 15).

따라서 복주머니란 종자의 발아는 타가수분 후 60일 경과된 종자를 수정MS액체배지에 파종하여 암 조건 상태에서 진탕배양 하는 방법이 가장 좋은 방법이었다.

수정MS액체배지(진탕배양)에서 복주머니란 종자의 발아율 (%)

인공수분 방식	인공수분 후 일 수	명 조건 배양	암 조건 배양
자가수분	50일	0	0
	60일	0	0
	86일	0	0
타가수분	50일	0	21.7
	60일	0	64.2
	86일	0	4.6

실시예 2: 복주머니란 휴면아의 휴면 타파 시험

복주머니란 종자가 발아하여 뿌리와 싹이 형성되더라도 더 이상 자라지 않고 휴면 상태에 들어가기 때문에 온실에서 재배하기 전에 휴면성을 타파(극복)해야 한다.

야생화 종자의 휴면을 타파(극복)하기 위해서는 보통 4℃에서 30~90일간 저온 처리를 하는 것이 일반적인 방법이다. 복주머니란 종자 역시 발아하여 뿌리와 싹이 형성되더라도 더 이상 자라지 않고 휴면 상태에 들어가기 때문에 온실에서 재배하기 전에 휴면성을 타파해야 한다.

본 실시예에서는 저온처리를 하는 대신에 수정MS액체배지에 휴면아를 넣고 진탕배양하여 휴면을 타파하는 새로운 방법을 시도하였다(도 16).

휴면 타파용 기본 배지는 복주머니란 종자의 무균 발아 시험에 사용한 배지와 같은 배지로서, MS 배지(1962)의 무기염류와 비타민류의 함량을 약 1/4로 줄인 수정 MS 배지를 사용하였고, 설탕은 10g/L, 코코넛 워터(미국 시그마사)는 100mL/L를 첨가하였고, 배지의 pH는 5.8로 조정하였다(표 1).

배지는 한천을 넣지 않은 수정MS액체배지로 하였으며, 100mL 삼각 플라스크에 25mL씩 분주하였고, 121℃에서 15분간 멸균하여 사용하였다. 수정MS액체배지에서 180일간 배양한 휴면아를 삼각 플라스크당 저온처리를 하지 않은 상태로 2~3개씩 넣은 다음, 처리 당 40개씩 배양하였다.

배양 방법은 80회/분 속도로 진탕 배양하였고, 25±1℃로 유지되는 배양실에서 명 조건(3,000 lux, 16시간 일장) 또는 암 조건으로 하였으며, 암 조건은 삼각 플라스크를 알루미늄 호일로 싸서 완전 차광을 하였다. 휴면 타파 비율 조사는 60일간 배양한 후에 조사하였으며, 휴면아가 자라서 녹색을 띄고 잎이 1개 출현한 것을 휴면이 타파(극복)된 것으로 하였다.

60일간 배양한 후에 휴면아가 녹색을 띄고 잎이 1개 출현한 것을 휴면이 타파된 것으로 하여 휴면 타파 비율을 조사하였다(표 4).

명 조건(1,500lux, 16시간 일장) 배양에서 80회/분 속도로 진탕 배양한 경우 92.5%가 휴면 타파되어 대부분 길이 1~5cm의 새 싹이 형성되고 뿌리의 발달이 양호하였다(도 17 및 18). 그러나, 암 조건 배양에서는 휴면아가 0.5cm 정도 자랐으나 대부분 흰색을 띄고 7.5% 만이 휴면이 타파되었으며, 뿌리가 많이 발달하였다(도 19).

휴면 타파는 보통 4℃에서 30~90일간 저온 처리를 하는 것이 일반적인 방법이지만, 복주머니란에서는 저온처리를 하는 대신에 수정 MS액체배지 명 조건에서 진탕 배양함으로써 휴면을 효과적으로 타파(극복)할 수 있었다.

따라서, 복주머니란 휴면아의 휴면을 타파하기 위해서는 명 조건에서 액체 진탕 배양하는 것이 효과적인 방법이었다.

액체 진탕 배양에서 복주머니란 종자의 휴면 타파 비율 (%)

광 조건	휴면 타파 비율(%)
명 조건	92.5
암 조건	7.5

실험예 1: 휴면성이 타파된 복주머니란의 온실 재배

상기 실시예 2의 방법에 따라 휴면성이 타파된 복주머니란의 어린 묘를 온실에서 성공적으로 재배할 수 있었다. 밑바닥에는 직경 2~3mm의 난석을 3cm 두께로 깔고, 원예용 상토와 펄라이트를 2:1로 혼합한 토양으로 휴면성이 타파된 어린 묘를 화분(내부 직경 110mm, 높이 113mm)에 심고, 햇빛의 50%가 차광되며 최고 25℃, 최저 18℃로 유지되는 온실에서 1주일간 투명 비닐을 덮어주어 습도가 잘 유지되는 상태에서 경화처리를 하였다. 경화처리 후 비닐을 벗기고 햇빛의 50%가 차광되며 최고 25℃, 최저 18℃로 유지되는 온실에서 재배한 결과 잎이 2개까지 자라는 것을 확인하였다(도 20).

상기 실시예를 통해 살펴본 바와 같이, 본 발명은 복주머니란 종자의 발아 및 휴면 타파 방법에 관한 것으로, 타가수분 후 50∼86일 된 복주머니란 종자를 고체배지(수정MS고체배지)에 파종하고 4±1℃에서 60일간 저온 처리 후 암 조건으로 기내에서 무균적으로 발아를 시키거나 혹은 타가수분 후 50∼86일 된 복주머니란 종자를 암 조건에서 액체 진탕배양에 의해 기내에서 무균 발아시킨 결과, 발아율이 향상되는 효과를 나타냈다.

따라서, 본 발명은 원예산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

Claims

종자 발아용 MS 배지에 있어서,

NH₄NO₃ 412.50 mg/L, MgSO₄ 45.14 mg/L, KNO₃ 47.50 mg/L, KH₂PO₄ 42.50 mg/L, CaCl₂ZnSO₄·7H₂O 83.01 mg/L, ZnSO₄·7H₂O 2.15 mg/L, Na₂MoO₄·2H₂O 0.02 mg/L, MnSO₄·H₂O 4.23 mg/L, KI 0.21 mg/L, H₃BO₃ 1.55 mg/L, FeNaEDTA 9.18 mg/L, CuSO₄·5H₂O 0.07 mg/L, CoCl₂·6H₂O 0.07 mg/L, 글리신(Glycine) 0.50 mg/L, 미오-이노시톨(myo-Inositol) 25.00 mg/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.13 mg/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.13 mg/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 0.25 mg/L, 설탕 10g/L 및 코코넛워터 100mL/L를 첨가하고 나머지는 정제수를 넣어 총 1L가 되도록 하며, 최종 pH 5.8로 조정함을 특징으로 하는 복주머니란 종자의 무균 발아 및 휴면 타파를 위한 수정 MS배지.
종자 발아 방법에 있어서,

타가수분 후 50∼86일 된 복주머니란 종자를 제1항 기재의 수정 MS배지에 한천을 첨가한 고체배지에 파종하고 4±1℃에서 60일간 저온 처리 후 암 조건으로 120일간 기내에서 무균 발아시킴을 특징으로 하는 복주머니란 종자 발아 방법.
종자 발아 방법에 있어서,

타가수분 후 50∼86일 된 복주머니란 종자를 25±1℃의 암 조건에서 80회/분의 속도로 100일간 제1항 기재의 수정 MS배지를 사용하여 액체 진탕배양하여 기내에서 무균 발아시킴을 특징으로 하는 복주머니란 종자 발아 방법.
휴면아의 휴면타파방법에 있어서,

복주머니란의 휴면아를 25±1℃로 유지되는 배양실에서 1500lux로 16시간 일장시간을 가지는 명 조건에서 80회/분의 속도로 60일간 제1항 기재의 수정 MS배지를 사용하여 액체 진탕배양하여 휴면을 타파함을 특징으로 하는 복주머니란 휴면아 휴면타파방법.