CN114107522A - 斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记及鉴定方法和试剂盒 - Google Patents
斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记及鉴定方法和试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及分子生物学技术对物种种质鉴定的定性检测方法，具体说是斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记及鉴定方法和试剂盒。斑石鲷雌鱼与雄鱼染色体的特异性标记的核苷酸序列为SEQ ID NO:1（Xfm ID Nm:1）和SEQ ID NO:2（Ym ID Nm:1）所示碱基。该方法利用一对引物在遗传雄性个体中扩增出635bp和925bp两个相差290bp的DNA片段，在遗传雌性个体中仅扩增出635bp的单一DNA片段，并可以通过琼脂糖凝胶电泳分辨，缩短了准确鉴定斑石鲷遗传性别的时间，提升了性别检测效率。在斑石鲷性别鉴定、高雄苗种制备和家系选育上具有重要的意义和应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学技术对物种种质鉴定的定性检测方法，具体说是斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记及鉴定方法和试剂盒。
背景技术
斑石鲷隶属于鲈形目（Perciformes），石鲷科（Oplegnathidae），石鲷属（Oplegnathus），主要分布于西太平洋温热带海域，喜栖息于10-100m水深的岩礁、砂砾、贝藻丛生的海区，为恋礁性底栖鱼类；幼鱼具有在夏、秋季随着海藻漂移生态习性。肉食性，齿锐利，可咬碎贝类或海胆等坚硬的外壳（孟庆闻等，1995）。斑石鲷皮下含有丰富的胶原蛋白、多种氨基酸及不饱和脂肪酸，口感独特，在日本料理中具有“刺身绝品”之誉；另外，斑石鲷体态优美，鱼身光泽银纹与黑褐色斑点结合，被人们称之为“梦幻之鱼”，受垂钓爱好者及消费者的青睐，是一种具有较高食用和观赏价值的海产鱼类（高小强等，2018）。目前人工繁育的斑石鲷市场销售价格达到了200元/斤，同时由于斑石鲷具有摄食贝壳食性特点，可以清理养殖网箱网衣，节约了人力资源和网衣清理成本，经济效益和生态效益极其显著。斑石鲷又是我国本土自然种类，其资源开发及可持续利用具长效性，养殖前景广阔。
斑石鲷雌鱼染色体核型为2n=48，含有46条端着丝粒染色体和1对亚中部着丝粒染色体，遗传性别类型为（X1X1X2X2）；雄鱼染色体核型为2n=47，含有44条端着丝粒染色体和1对亚中部着丝粒染色体以及1条巨大的异形染色体，遗传性别类型为（X1X2Y）（薛蕊等，2016）。石鲷科鱼类在养殖过程中存在显著的雌雄生长二态性，雄鱼生长速度快于雌鱼，斑石鲷高雄苗种和全雄苗种的制备将促进斑石鲷养殖产业的提质增效，开展斑石鲷苗种遗传性别快速鉴定技术的研发将有助于斑石鲷优良雄性种质的储备（肖志忠，2015）。由于斑石鲷生殖周期较长（3~4年），在幼鱼和成鱼时期无法通过外部形态特征对斑石鲷性别进行准确鉴定，而在斑石鲷人工繁育和人工选育构建家系过程中都需要选择优质雌雄亲鱼并实现性别的精确鉴定，因此，建立斑石鲷雌、雄遗传性别快速鉴定方法是实现斑石鲷高雄苗种制备，提升斑石鲷遗传育种进程和优质苗种规模化生产的重要手段。
目前已报道的斑石鲷雌、雄遗传性别的鉴定采用的是“三体法”即三条引物联合扩增分析，由于该方法采用的三条引物的退火温度不同，造成目的条带扩增效率不一致、扩增产物不稳定；同时该方法设计的遗传雄性个体特异性目的条带大小为222个碱基（bp），极易同PCR扩增过程中的产生引物二聚体（10~250bp）混淆；另外由于该方法中雄性个体另外两条目的条带仅相差12个碱基（bp），导致在常规琼脂糖凝胶电泳上两条目的带的区分度差。因此，挖掘斑石鲷新的遗传性别特异分子标记，建立斑石鲷雌雄遗传性别高效、快捷鉴定的分子技术成为斑石鲷人工选育和养殖产业亟待解决的技术难题。
发明内容
本发明的目的在于一种斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记及其快速鉴定的方法。
为实现上述目的，本发明采用技术方案为：
一种斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记，斑石鲷雌鱼与雄鱼染色体的特异性标记的核苷酸序列为SEQ ID NO:1（Xfm ID Nm:1）和SEQ ID NO:2（Ym ID Nm:1）所示碱基。
所述斑石鲷雌鱼与雄鱼染色体的特异性标记SEQ ID NO:1所示碱基为斑石鲷雌鱼X1染色体与斑石鲷雄鱼异形染色体Y同源片段，为斑石鲷雌、雄遗传性别共有DNA特征标记；且，所述SEQ ID NO:1所示碱基序列第164位点和221位点之间插入序列片段，即为SEQ IDNO:2所示碱基序列，其为斑石鲷雄鱼Y染色体特有的DNA标记。
一种鉴定斑石鲷雌雄遗传性别的方法，其特征在于，
（1）PCR扩增：取待测斑石鲷，提取基因组DNA；以所得基因组DNA为模板，采用斑石鲷遗传性别特异性引物对，进行PCR扩增，并将所得PCR扩增产物与权利要求1所述的斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记进行对比；
（2）结果判断：从待测斑石鲷的基因组DNA中扩增出635bp（SEQ ID NO:1所示碱基）和925bp（SEQ ID NO:2所示碱基）两个DNA片段，即为判断该待测斑石鲷为斑石鲷遗传雄性个体（X1X2Y）；
或，待测斑石鲷的基因组DNA中仅扩增出635bp（SEQ ID NO:1所示碱基）的单一DNA片段，即为判断该待测斑石鲷为斑石鲷遗传雌性（X1X1X2X2）。
所述斑石鲷遗传性别特异性引物对，
ChXY_F:1 : 5’-AAACAGAGGACATTCAAGCCG-3’；
ChXY_R:2 : 5’-GTTGCTGCCCTTCTTGCGT-3’。
一种检测权斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记的遗传性别特异性引物，
ChXY_F:1 : 5’-AAACAGAGGACATTCAAGCCG-3’；
ChXY_R:2 : 5’-GTTGCTGCCCTTCTTGCGT-3’。
一种鉴定斑石鲷雌雄遗传性别的试剂盒，所述试剂盒含所述的遗传性别特异性引物。
本发明所具有的优点：
本发明通过斑石鲷雌雄全基因组测序和染色体结构，获得了斑石鲷雄鱼异形染色体Y与雌鱼X1、X2染色体同源且有显著染色体结构插入区域，发现了斑石鲷雌、雄共享且雄性特有的DNA标记，并将该片段运用到了斑石鲷遗传性别鉴定；
本发明方法可以快速、准确和高效的区分斑石鲷遗传性别，该方法在斑石鲷雌雄遗传性别中都会扩增出共有条带（635bp），但该方法同时会在斑石鲷遗传雄性个体中扩增出一条特异目的条带（925bp），而在斑石鲷雌性个体中不能扩增出该925bp的DNA条带，共有条带（635bp）极易与引物二聚体区分，同时与雄性遗传特异性条带相差290bp，可以采用琼脂糖凝胶电泳快速准确的分辨带型，实现了斑石鲷遗传性别快速精确鉴定，该方法极度方便适用于斑石鲷工厂化、网箱以及池塘等多元化养殖及苗种繁育场地的性别鉴定操作。本发明高效、快速精准鉴定斑石鲷遗传性别的方法，对于斑石鲷高雄苗种制备，提升斑石鲷遗传育种进程和优质苗种规模化生产具有重要的意义和应用价值。
附图说明
图1：本发明获得的X染色体ChX1F/M与Y染色体ChYM核苷酸序列比对图，引物位置用单横下划线表示；Consensus代表ChX1F/M和ChYM序列一致性，小写字母表示，空白区域表示两者碱基缺失或不一致序列；……：代表插入缺失序列；双横下划线代表缺失序列所在区域。
图2：本发明X染色体ChX1F/M与Y染色体ChYM核苷酸序列同源插入差异DNA片段模式图，引物位置用F和R表示；相同空白区域代表同源区域，斜线填充区域代表插入位点信息。
图3：本发明斑石鲷雌雄个体PCR产物1.5%琼脂糖凝胶电泳结果图，M：DL 2000 DNAMarker；♂：生理雄鱼；♀：生理雌鱼；图中呈现两条带（635bp和925bp）的个体为遗传雄鱼，并且生理性别组织学鉴定为雄鱼，呈现单条带（635bp）的个体为遗传雌性，生理性别组织学鉴定为雌性。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本发明，并不局限于本发明。
本发明基于斑石鲷Y染色体特有DNA标记和与雌鱼X1染色体共有的DNA特征标记来确定遗传性别类型：
首先通过采用第三代PacBio全基因组测序技术完成了斑石鲷雌、雄全基因组测序及组装，获得了斑石鲷雌、雄染色体水平的高质量基因组；通过基因组生物信息学分析方法获知斑石鲷雌鱼X1和X2染色体与斑石鲷雄鱼异形染色体Y同源且有大片段插入区域，X1染色体上DNA片段长度为635bp，命名为ChX1F/M，其序列为Xfm ID Nm:1，异形染色体Y上的DNA片段长度为925bp，包含了与X1同源序列和插入序列，命名为ChYM，其序列为Ym ID Nm:1；在与ChX1F/M同源的ChX1F/M第164位点和221位点之间发现了两个大片段插入序列，大小分别为230bp和60bp，其中雄鱼异形染色体Y区域（ChYM）DNA序列比雌鱼X1染色体同源DNA区域（ChX1F/M）多插入了290bp大小的DNA序列，这个片段即为斑石鲷雄鱼Y染色体特有的DNA标记，而ChX1F/M则为斑石鲷雌雄遗传性别共有DNA特征标记。
本发明斑石鲷雌雄遗传性别快速鉴定的方法；具体检测方法，是确定待检测的斑石鲷是否存在Ym ID Nm:1的核苷酸片段（925bp）；通过PCR引物进行快速鉴定；所述实现斑石鲷遗传性别的精确鉴定，上下游引物序列分别为：
ChXY_F:1 : 5’-AAACAGAGGACATTCAAGCCG-3’(Xfm ID Nm:2)
ChXY_R:2 : 5’-GTTGCTGCCCTTCTTGCGT-3’(Xfm ID Nm:3)
其中在斑石鲷遗传雄性个体（X1X2Y）中扩增出635bp和925bp两个DNA片段，925bp片段为遗传雄性特有标记片段；而在斑石鲷遗传雌性（X1X1X2X2）个体中仅扩增出635bp的单一DNA片段。
实施例1斑石鲷雌、雄共享且雄性特有DNA标记的筛选及验证
斑石鲷Y染色体雌雄同源且含大片段插入目标DNA序列的发现：
本发明所用的雄鱼异形染色体（neoY）DNA序列及雌鱼的X1染色体DNA序列，来自中国科学院海洋研究所海水鱼类增养殖与繁育技术研究室李军研究团队委托广州基迪奥生物科技有限公司采用第三代PacBio全基因组测序技术完成了斑石鲷雌、雄全基因组测序及组装，组装结果与已公布的斑石鲷基因组信息基本一致（CNP0001488，Li et al., 2021）。采用比较基因组生物信息学分析斑石鲷雌雄基因组序列可见（参见图1），斑石鲷雌鱼X1染色体与斑石鲷雄鱼异形染色体Y同源且有大片段插入DNA片段，其中X1染色体上DNA片段长度为635bp，命名为ChX1F/M，其SEQ ID NO:1序列为Xfm ID Nm:1：
SEQ ID NO:1（Xfm ID Nm:1）：
AAACAGAGGACATTCAAGCCGGTACAAAAGGTAAACTCAGATCAACATTATGAAACAGTGTTATCTTAGAAATACCACTTTTTAGTAAAGGTCAGTCACAACAGCATTTAAAATGGCAAAATTTCACAGTAAAATTAATTTCACTATACAGTAGGCTAATAGCTACTAGCTCGCAAGCTTTTTTCCCCTCTTCAGTAACTGTTGATTGAATAAAATGATTGCCATTGTGACCACATAGTGTAAGCCATTAGCTCACCAGCTACAGTAGTTCACCAACTAGCCCTGTGAGTAGTCCCTACATTAACCTCCACCATTAACTGTTTCATGAAATCGCACATATGAATTTTGCTGTGCCACTTTCTGGTGTGACCGTGCCTTTGATTCTTTAGAACAAACCTTTTGTAATTCCAATATTGCTATCAATTCTCCCACAGTACACAAAAAAATGCTACCTTTTAGACCAAGAAATGATTTCCAATCTTTTGTGTACACAGCATACCCTGGACCTCCATCAGCACCAAAGGTTGTCAGTGCCTTCAAGGACTGCATCAACCTCTCTTGGTCTCCTCCAGCCAACACTGGAGGAACCAATATTCTGGGATACAACCTTGAAAAAACGCAAGAAGGGCAGCAAC。
而在雄鱼异形染色体Y上的DNA片段长度为925bp，其包含了与X1同源序列和插入序列，命名为ChYM，其SEQ ID NO:2序列为Ym ID Nm:1：
SEQ ID NO:2（Ym ID Nm:1）：
AAACAGAGGACATTCAAGCCGGTACAAAAGGTAAATTCAGACCAATATTATGAAACAGTGTTATCTTAGAAATACCACTTTTTAGTAAAGGTCGGTCACAACGGCATTTAAAATGGCAAAATTTCACAGTAAAATTAATTTCACTATAGAGTAGGCTAATAGCTGCGACTGGTAGATTTACATGTAGGAGCAAAGAAAATCTGCACAGATTTCTTGTATTGAGTTCAACTTTGGTGAACAAGCAGTGTTGACAGTGTTGACAGTGTTGACGTTTGAAGAGAACGGAGAACTGAAGAGTCCAAAATGGAGGACGCTACTGTAGCTTTCCAGtTGTGTTATaCTGCTCCGCAAAAGAGGCAGGATTGGCAGACAGTTATGAGACAGGAGTCAAGCTACTAGCTCGCAAGTTTTTTTCTCCTCTTCAGTAACTGTTGATTGAATAAAATGATGTACAATCATGAGAACGAAGTAAATGCCACAGTAGAGAGAAAATAGAAGAAGATTTGGAGAGCCATTGTGACCACATAGTGTTAGCCGTTAGCTCACCAGCTACAGTAGTTCACCAACTATAACTGTGAGTAGTCCCTACATTAGTCTCCACCATTAACTGTTTCATGAAATCGCACATATGAATTTTGCTGTGCCACTTTCTGGTGTGACCGTGCCTTTGATTCTTCAGAACAAACCTTTTGTAATTCCAACATTGGTATCAATTCTCCCACAATACACAAAAAAATGCTACCTTTTAGACCAAGAAATTATTTCCAATCTTTKGTGTACACAGCATACCCTGGACCTCCATCAGCACCAAAGATTGTCAGTGCCTTTAAGGACTGCATCAACCTCTCTTGGTCTCCTCCAGCCAACACTGGAGGAAGCAATATTCTGGGATACAACCTTGAAAAAACGCAAGAAGGGCAGCAAC。
雌雄基因组DNA序列比对显示在雌鱼ChX1F/M的第164位点和222位点之间发现了两个大片段插入序列，大小分别为230bp和60bp，其中雄鱼异形染色体Y区域（ChYM）DNA序列比与雌鱼X1染色体同源DNA区域（ChX1F/M）多插入了290bp大小的DNA序列，这个片段即为斑石鲷雄鱼Y染色体特有的DNA标记，其存在与否可用来鉴别斑石鲷雌雄遗传性别，而ChX1F/M则为斑石鲷雌雄遗传性别共有DNA特征标记，如图2所示。
雄性特有DNA标记的序列验证：基于雄鱼Y染色体Ym ID Nm:1核苷酸序列与雌鱼同源X1染色体上Xfm ID Nm:1核苷酸序列特征，设计两条引物。选择组织学鉴定已知生理性别的雌、雄斑石鲷DNA，同时使用ChXY_F:1、ChXY_R:2两条引物进行PCR扩增，反应条件及程序如下：PCR反应体系为25µL，包括5.0µL 10×Buffer；4.0µL dNTP（2.5mmol/L）；0.5µL rTaq酶（5U/µL）；1.0µL ChXY_F:1；1.0 µL ChXY_R:2；2.0µL DNA模板，11.5µL ddH2O；混匀后离心。PCR扩增程序：95℃ 3mins，61℃（-1℃，3个循环） 30s，72℃ 1min30s，3个循环；95℃30s，59.5℃ 30s，72℃ 1min30s，28个循环；72℃ 10min，15℃保存。PCR产物经1.5%的琼脂糖凝胶电泳可以分辨出雌、雄个体存在差异。将雌雄差异片段产物割胶回收并通过PMD18-T载体转化至感受态细胞中，挑取阳性克隆送至青岛派森诺基因生物技术有限公司测序。测序结果验证了雌雄X、Y染色体同源且含大片段插入目标DNA序列片段。
实施例2斑石鲷雌、雄遗传性别鉴定技术的建立与应用
对于来自山东烟台莱州市莱州明波水产有限公司养殖的斑石鲷（其中，12尾表型为雌鱼，12尾表型为雄鱼）进行遗传性别鉴定：
高质量DNA提取：使用天根海洋动物DNA提取试剂盒提取斑石鲷鳍条DNA，用0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定基因组DNA的完整性，采用紫外分光光度计测量DNA上清的OD值，调整使得DNA浓度至60ng/µL，于-20℃冻存备用。
PCR反应体系及Touch down PCR扩增鉴定：使用斑石鲷性别特异的DNA片段引物ChXY_F:1、ChXY_R:2通过PCR方法检测斑石鲷遗传性别。PCR反应体系25µL：10×Buffer 5.0µL、dNTP 4.0µL、rTaq酶（5U/µL）0.5µL、上下游引物（ChXY_F:1和ChXY_R:2）各1µL、DNA模板2.0µL、ddH2O 11.5µL。Touch down PCR扩增程序：95℃ 3mins，61℃（-1℃，3个循环） 30s，72℃ 1min30s，3个循环；95℃ 30s，59.5℃ 30s，72℃ 1min30s，28个循环；72℃ 10min，15℃保存。每个待检测的PCR样品中加入10×Loading Buffer 3.0µL，使用1.5%的琼脂糖凝胶电泳，在110V恒压电压下30分钟，凝胶成像可清晰的分辨斑石鲷雌雄遗传性别（参见图3）。
如图3所示，在斑石鲷雌（X1X1X2X2）、雄（X1X2Y）遗传性别中都会扩增出共有条带（635bp），与此同时在斑石鲷遗传雄性（X1X2Y）个体中还会扩增出一条特异目的条带（925bp），而在斑石鲷雌性个体中不能扩增出该925bp的DNA条带，且共有条带（635bp）极易与引物二聚体区分，可见采用本发明方法，本实验开发的性别特异分子标记适用于养殖斑石鲷和野生斑石鲷种质遗传性别的快速鉴定，具有普适性。
序列表
<110> 中国科学院海洋研究所
<120> 斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记及鉴定方法和试剂盒
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 635
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
aaacagagga cattcaagcc ggtacaaaag gtaaactcag atcaacatta tgaaacagtg 60
ttatcttaga aataccactt tttagtaaag gtcagtcaca acagcattta aaatggcaaa 120
atttcacagt aaaattaatt tcactataca gtaggctaat agctactagc tcgcaagctt 180
ttttcccctc ttcagtaact gttgattgaa taaaatgatt gccattgtga ccacatagtg 240
taagccatta gctcaccagc tacagtagtt caccaactag ccctgtgagt agtccctaca 300
ttaacctcca ccattaactg tttcatgaaa tcgcacatat gaattttgct gtgccacttt 360
ctggtgtgac cgtgcctttg attctttaga acaaaccttt tgtaattcca atattgctat 420
caattctccc acagtacaca aaaaaatgct accttttaga ccaagaaatg atttccaatc 480
ttttgtgtac acagcatacc ctggacctcc atcagcacca aaggttgtca gtgccttcaa 540
ggactgcatc aacctctctt ggtctcctcc agccaacact ggaggaacca atattctggg 600
atacaacctt gaaaaaacgc aagaagggca gcaac 635
<210> 2
<211> 925
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
aaacagagga cattcaagcc ggtacaaaag gtaaattcag accaatatta tgaaacagtg 60
ttatcttaga aataccactt tttagtaaag gtcggtcaca acggcattta aaatggcaaa 120
atttcacagt aaaattaatt tcactataga gtaggctaat agctgcgact ggtagattta 180
catgtaggag caaagaaaat ctgcacagat ttcttgtatt gagttcaact ttggtgaaca 240
agcagtgttg acagtgttga cagtgttgac gtttgaagag aacggagaac tgaagagtcc 300
aaaatggagg acgctactgt agctttccag ttgtgttata ctgctccgca aaagaggcag 360
gattggcaga cagttatgag acaggagtca agctactagc tcgcaagttt ttttctcctc 420
ttcagtaact gttgattgaa taaaatgatg tacaatcatg agaacgaagt aaatgccaca 480
gtagagagaa aatagaagaa gatttggaga gccattgtga ccacatagtg ttagccgtta 540
gctcaccagc tacagtagtt caccaactat aactgtgagt agtccctaca ttagtctcca 600
ccattaactg tttcatgaaa tcgcacatat gaattttgct gtgccacttt ctggtgtgac 660
cgtgcctttg attcttcaga acaaaccttt tgtaattcca acattggtat caattctccc 720
acaatacaca aaaaaatgct accttttaga ccaagaaatt atttccaatc tttkgtgtac 780
acagcatacc ctggacctcc atcagcacca aagattgtca gtgcctttaa ggactgcatc 840
aacctctctt ggtctcctcc agccaacact ggaggaagca atattctggg atacaacctt 900
gaaaaaacgc aagaagggca gcaac 925
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
aaacagagga cattcaagcc g 21
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gttgctgccc ttcttgcgt 19
Claims (6)
1.一种斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记，其特征在于，斑石鲷雌鱼与雄鱼染色体的特异性标记的核苷酸序列为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示碱基。
2.按权利要求1所述的斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记，其特征在于，所述斑石鲷雌鱼与雄鱼染色体的特异性标记SEQ ID NO:1所示碱基为斑石鲷雌鱼X1染色体与斑石鲷雄鱼异形染色体Y同源片段，为斑石鲷雌、雄遗传性别共有DNA特征标记；且，所述SEQ ID NO:1所示碱基序列第164位点和221位点之间插入序列片段，即为SEQ ID NO:2所示碱基序列，其为斑石鲷雄鱼Y染色体特有的DNA标记。
3.一种鉴定斑石鲷雌雄遗传性别的方法，其特征在于，
（1）PCR扩增：取待测斑石鲷，提取基因组DNA；以所得基因组DNA为模板，采用斑石鲷遗传性别特异性引物对，进行PCR扩增，并将所得PCR扩增产物与权利要求1所述的斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记进行对比；
（2）结果判断：从待测斑石鲷的基因组DNA中扩增出635bp和925bp两个DNA片段，即为判断该待测斑石鲷为斑石鲷遗传雄性个体X1X2Y；
或，待测斑石鲷的基因组DNA中仅扩增出635bp的单一DNA片段，即为判断该待测斑石鲷为斑石鲷遗传雌性X1X1X2X2。
4.按权利要求3所述的鉴定斑石鲷雌雄遗传性别的方法，其特征在于，所述斑石鲷遗传性别特异性引物对为：
ChXY_F:1 : 5’-AAACAGAGGACATTCAAGCCG-3’；
ChXY_R:2 : 5’-GTTGCTGCCCTTCTTGCGT-3’。
5.一种检测权利要求1所述的斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记的遗传性别特异性引物，其特征在于，
ChXY_F:1 : 5’-AAACAGAGGACATTCAAGCCG-3’；
ChXY_R:2 : 5’-GTTGCTGCCCTTCTTGCGT-3’。
6.一种鉴定斑石鲷雌雄遗传性别的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含权利要求5所述的遗传性别特异性引物。
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| GR01 | Patent grant | ||
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