CN114057808A

CN114057808A - 一种三桠苦寡糖的制备及其应用

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Publication number: CN114057808A
Application number: CN202111217859.4A
Authority: CN
Inventors: 蓝文健; 熊峰; 梁惠娴
Original assignee: Sun Yat Sen University
Current assignee: Sun Yat Sen University
Priority date: 2021-10-19
Filing date: 2021-10-19
Publication date: 2022-02-18
Anticipated expiration: 2041-10-19
Also published as: CN114057808B

Abstract

本发明提供了一种三桠苦寡糖的制备及其应用。本发明以三桠苦为原料，经过脱脂、提取、醇沉、除蛋白、脱色等步骤成功制备得到三桠苦寡糖，通过特定控制提取过程中的料液比、微波时间和微波功率等各参数，使得三桠苦寡糖的提取率接近5％，且三桠苦寡糖表现出优异的抗氧化和抗肿瘤活性，为抗氧化、抗肿瘤产品的制备提供一种天然、新型的成分选择。

Description

一种三桠苦寡糖的制备及其应用

技术领域

本发明属于医药技术领域。更具体地，涉及一种三桠苦寡糖的制备及其应用。

背景技术

寡糖是生物界中分布极广、含量较多的一类生物分子，寡糖除了能作为能量的主要来源之外，还具有抗氧化、抗肿瘤、降血压、抗炎、肠道菌群调节等活性，因此，从植物体内提取寡糖的方法成为了当今的研究热点，如专利CN201610055322.5公开了从高麦芽中提取寡糖的方法，又如专利CN201811427737.6公开了从大豆中提取寡糖的方法。然而，寡糖的生物活性受其分子量、单糖组成、聚合度、链结构等因素影响，且结构的不同造成其生物活性的差异。这种差异与原料来源、提取方法有着十分密切的联系。

三桠苦为芸香科蜜茱萸属植物，是我国传统中草药，主要分布于我国沿海及东南亚地区，且有着悠久的食用历史，如作为广东凉茶重要组成成分等。在过去数十年研究中发现，三桠苦的脂溶性成分如挥发油、生物碱、黄酮及香豆素类等表现出良好的抗炎、抗病毒、抗菌及抗肿瘤等活性。然而，三桠苦中的总糖含量达到30％以上，其主要活性成分为寡糖，但目前尚未有从三桠苦中提取出寡糖的相关研究报道。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明旨在提供一种三桠苦寡糖的制备及其应用。本发明通过特定控制提取过程中的料液比、微波时间和微波功率等各参数，获得三桠苦寡糖的提取率接近5％。

本发明的另一目的是提供上述三桠苦寡糖在制备抗氧化、抗肿瘤的产品中的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种三桠苦寡糖，按照如下步骤制备得到：

S1.将三桠苦粉碎，加入浓度为85～95％的乙醇，加热回流提取、过滤、干燥；

S2.向步骤S1所述干燥得到的三桠苦粉末中加水至料液比为10～30mL/g，以420～700W的功率进行微波辅助提取2～6min，提取液浓缩得到浓缩液；

S3.将步骤S2所得浓缩液进行醇沉、除蛋白、脱色处理即得到三桠苦寡糖。

本发明在单因素实验基础上，采用Deign-expert 12.0软件进行Box-Behnken优化设计，以三桠苦寡糖的提取率为响应值，以料液比、微波时间和微波功率进行三因素三水平的优化设计，优化得到最佳的提取条件，使得三桠苦寡糖的提取效率保持在较高的水平。

步骤S1所述干燥是为了去除三桠苦粉末中残留的乙醇；步骤S2所述浓缩是为了步骤S3更好实现醇沉效果，若不浓缩直接进行醇沉，由于固形物含量不高，会影响醇沉效果，且浪费醇沉溶剂。

优选地，步骤S1所述粉碎前还需将三桠苦洗净、干燥；所述粉碎后还需过筛。进一步优选地，所述干燥的温度为45～55℃，所述过筛为过20～80目筛。最优选地，所述干燥的温度为45℃，所述过筛为过40目筛。

优选地，步骤S1所述乙醇与三桠苦粉末的料液比为5～15mL/g。最优选地，步骤S1所述乙醇与三桠苦粉末的料液比为10mL/g。

优选地，步骤S1所述加热回流提取为在70～90℃下，加热回流提取1.5～2.5h。最优选地，步骤S1所述加热回流提取为在80℃下加热回流提取2h。

优选地，步骤S1所述乙醇的浓度为90％。

优选地，步骤S1所述回流提取的过程重复3次，可实现更好的脱脂效果。

优选地，步骤S2所述料液比为20～30mL/g。

优选地，步骤S2所述微波辅助提取的功率为560～700W；步骤S2所述微波辅助提取的时间为4～6min。

最优选地，所述料液比为28mL/g，所述微波辅助提取的功率为630W，所述微波辅助提取的时间为6min。

优选地，步骤S3所述醇沉为向所述浓缩液中加入无水乙醇，至乙醇的终浓度为70～85％，再于2～8℃下，静置24～48h，离心。

进一步优选地，所述醇沉为向所述浓缩液中加入无水乙醇，至乙醇的终浓度为80％，再于4℃下，静置24h，离心。

进一步优选地，所述无水乙醇与三桠苦浓缩液的体积比为3～5:1。最优选地，所述无水乙醇与三桠苦浓缩液的体积比为4:1。

更优选地，所述离心得到的沉淀还加水进行复溶，去除沉淀中的乙醇，浓缩、冷冻干燥，该冷冻干燥的操作有利于后续除蛋白过程的定量控制。

优选地，所述除蛋白前将三桠苦粗寡糖配置成浓度为30～60mg/mL的水溶液。最优选为50mg/mL。

优选地，步骤S3所述除蛋白为采用Sevage法进行。进一步采用Sevage试剂(氯仿和正丁醇的体积比为4:1)。

优选地，步骤S3所述除蛋白重复8～12次。最优选重复10次。

优选地，步骤S3所述脱色为采用AB-8型大孔树脂柱层析进行。所述脱色是为了提高所述三桠苦寡糖的纯度。更优选地，所述AB-8型大孔树脂柱层析的流速为2～3mL/min，洗脱液体积为三桠苦寡糖溶液上样体积的3～5倍。最优选地，所述AB-8型大孔树脂柱层析的流速为2mL/min，洗脱液体积为三桠苦寡糖溶液上样体积的4倍。

优选地，所述脱色后，还进行后处理。

进一步优选地，所述后处理为浓缩、干燥。

更优选地，所述干燥为冷冻干燥。

作为一种优选地可实施方式，所述三桠苦寡糖按照如下步骤制备得到：

S1.将三桠苦洗净、45～55℃下烘干、粉碎、过20～80目筛，加入浓度为85～95％的乙醇，使乙醇与三桠苦的体积质量比为5～15mL/g，在70～90℃下加热回流提取1.5～2.5h，重复3次、过滤、干燥；

S2.向步骤S1所述干燥得到的三桠苦粉末中加水至料液比为10～30mL/g，以420～700W的功率进行微波辅助提取2～6min，离心、提取液浓缩得到浓缩液；

S3.向步骤S2所得浓缩液中加入无水乙醇，至乙醇的终浓度为70～85％，再于2～8℃下，静置24～48h，离心，取沉淀加水复溶、浓缩、冷冻干燥后将三桠苦寡糖配置成浓度为30～60mg/mL的水溶液，采用Sevage法进行除蛋白处理，重复8～12次；最后采用AB-8型大孔树脂柱层析进行脱色处理(流速为2～3mL/min，洗脱液体积为三桠苦寡糖溶液上样体积的3～5倍)，浓缩、冷冻干燥，即得到所述三桠苦寡糖。

此外，本发明通过对获得的三桠苦寡糖进行抗氧化、抗肿瘤实验，结果表明本发明制备得到的三桠苦寡糖对DPPH、OH和ABTS自由基清除率的IC₅₀值分别为0.16mg/mL、1.20mg/mL和0.98mg/mL。当三桠苦寡糖浓度达到0.6mg/mL时，对Sjsa-1和MDA-MB-231细胞的活力抑制率分别达到45.45％和63.47％，表现出优异的抗氧化和抗肿瘤活性。因此，上述三桠苦寡糖在制备抗氧化、抗肿瘤的产品中的应用也应在本发明的保护范围之内。

优选地，所述产品为日化用品或药品。

本发明具有以下有益效果：

本发明对三桠苦进行大量针对性研究，经过脱脂、提取、醇沉、除蛋白、脱色等步骤成功制备得到三桠苦寡糖，通过特定控制提取过程中的料液比、微波时间和微波功率等各参数，使工艺稳定性和提取效率均保持在较高的水平，提取率接近5％。

本发明制备得到的三桠苦寡糖还表现出优异的抗氧化和抗肿瘤活性，为抗氧化、抗肿瘤产品的制备提供一种天然、新型的成分选择。

附图说明

图1是单因素实验中料液比对三桠苦寡糖提取率的影响结果图。

图2是单因素实验中微波时间对三桠苦寡糖提取率的影响结果图。

图3是单因素实验中微波功率对三桠苦寡糖提取率的影响结果图。

图4A是微波时间与料液比的交互作用对三桠苦寡糖提取率的影响图；图4B是微波功率与料液比的交互作用对三桠苦寡糖提取率的影响图；图4C是微波功率与微波时间的交互作用对三桠苦寡糖提取率的影响图。

图5是三桠苦寡糖的分子量分布测定图。

图6是三桠苦寡糖的XRD分析图。

图7是三桠苦寡糖的扫描电镜图。

图8是三桠苦寡糖的体外抗氧化活性分析图。

图9是三桠苦寡糖的体外肿瘤细胞增殖活性影响图。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

三桠苦：产自广东省梅州市大埔县。

实施例1响应面法优化微波辅助提取三桠苦寡糖工艺

一、样品预处理

将三桠苦洗净、45℃下烘干、粉碎、过40目筛，加入浓度为95％的乙醇，使乙醇与三桠苦粉末的料液比为10mL/g，在80℃下加热回流提取2h，重复3次，过滤，干燥。

二、单因素试验

预处理后三桠苦粉末加水调节料液比，进行微波辅助提取。以三桠苦寡糖的提取率为指标，采用单因素实验设计方案考察各因素(料液比、微波时间和微波功率)对三桠苦寡糖提取率的影响。提取过程中料液比参数为10、20、30、40、50mL/g，微波时间参数为2、4、6、8、10min，微波功率参数为140、280、420、560、700W。

单因素实验结果如图1～3所示，其中图1是料液比对三桠苦寡糖提取率的影响结果图，图2是微波时间对三桠苦寡糖提取率的影响结果图，图3是微波功率对三桠苦寡糖提取率的影响结果图。从图1～3可知，在单因素实验中，料液比的最佳参数是20mL/g，微波时间的最佳参数是4min，微波功率的最佳参数是560W。因此，选择20mL/g、4min和560W参数作为响应面设计优化的中心点，进行后续的提取参数优化实验。

三、响应面法优化设计

在单因素实验的基础上，采用Deign-expert 12.0软件进行Box-Behnken优化设计，以三桠苦寡糖的提取率为响应值，分别以料液比(A)、微波时间(B)和微波功率(C)进行三因素三水平的优化设计，获得最佳的提取条件。试验设计因素及水平如表1所示。

表1 Box-Behnken设计因素及水平表

以料液比(A)、微波时间(B)和微波功率(C)，三桠苦寡糖的提取率为响应值(Y)，试验方案及结果见表2。

表2 Box-Behnken试验设计及结果

根据表2中数据进行多元回归拟合分析，得到相应变量(料液比、微波时间和微波功率)与响应值(三桠苦寡糖提取率)之间的多元二次回归方程：

Y＝-0.29A²-0.20B²-0.08C²+0.31AB+0.09AC-0.16BC+0.24A+0.24B+0.22C+4.73

通过回归模型的方差分析(表3)，该模型的p<0.0001，表明回归模型显著；失拟项p＝0.887>0.05，不显著，回归方程模型相关系数R²＝0.96，模型校正系数R²Adj＝0.92，说明本实验拟合二次方程模型具有显著性好、实验误差较小、可信度较高的优点，可用来分析和预测三桠苦寡糖的提取工艺条件。回归模型中一次项A、B、C及交互项AB影响极显著(p<0.01)，可见，微波功率、提取时间和料液比对三桠苦寡糖的提取率都有极显著影响(p<0.01)。由方差分析中各因素的F值大小反映各因素对实验指标的影响程度，各因素对寡糖的影响大小依次为:提取时间(B)＞料液比(A)＞微波功率(C)。响应面模型优化料液比、微波时间和微波功率两两因素交互作用对三桠苦寡糖提取率的影响如图4所示，A、B、C的二次项系数均为负数，表示该模型存在最大值，且优化三桠苦寡糖的最佳提取工艺参数为：料液比27.85mL/g、微波时间5.99min和微波功率658.94W。

表3回归模型方差分析

注：ns，不显著；*，P<0.05；**，P<0.01。

四、模型验证实验

根据响应面法优化设计得到的最佳参数，结合到实际实验中的可操作性，调整实验参数为：料液比28mL/g、微波时间6min和微波功率630W，进行3次重复试验，得到三桠苦寡糖的提取率为4.90±0.21％，与回归方程计算理论值4.92％相吻合，即采用响应面法优化本发明优化的三桠苦寡糖的工艺参数具有实践指导意义。

实施例2三桠苦寡糖的制备

S1.将三桠苦洗净、45℃下烘干、粉碎、过40目筛，加入浓度为90％的乙醇，使乙醇与三桠苦粉末的料液比为10mL/g，在80℃下加热回流提取2h，重复3次，过滤，干燥；

S2.向步骤S1所述干燥得到的三桠苦粉末中加水至料液比为28mL/g，在功率630W下进行微波辅助提取6min，离心、提取液浓缩得到浓缩液；

S3.向步骤S2所得浓缩液中加入无水乙醇，至乙醇的终浓度为80％，再于4℃下，静置24h，离心，得到的沉淀加水复溶，去除沉淀中的乙醇、浓缩、冷冻干燥后将三桠苦寡糖配置成浓度为50mg/mL的水溶液，用氯仿和正丁醇的体积比为4:1的Sevage试剂进行除蛋白处理，重复10次；最后采用AB-8型大孔树脂柱层析进行脱色处理(流速为2mL/min，洗脱液体积为三桠苦寡糖溶液上样体积的4倍)，浓缩、冷冻干燥，即得到所述三桠苦寡糖。

实施例3三桠苦寡糖的制备

S1.将三桠苦洗净、45℃下烘干、粉碎、过80目筛，加入浓度为95％的乙醇，使乙醇与三桠苦粉末的料液比为5mL/g，在70℃下加热回流提取2.5h，重复3次，过滤，干燥；

S2.向步骤S1所述干燥得到的三桠苦粉末中加水至料液比为30mL/g，以560W的功率进行微波辅助提取6min，离心、提取液浓缩得到浓缩液；

S3.向步骤S2所得浓缩液中加入无水乙醇，至乙醇的终浓度为70％，再于8℃下，静置36h，离心，得到的沉淀还加水进行复溶，再去乙醇、浓缩、冷冻干燥后将三桠苦寡糖配置成浓度为30mg/mL的水溶液，用氯仿和正丁醇的体积比为4:1的Sevage试剂进行除蛋白处理，重复12次；最后采用AB-8型大孔树脂柱层析进行脱色处理(流速为3mL/min，洗脱液体积为三桠苦寡糖溶液上样量体积的5倍)，浓缩、冷冻干燥，即得到所述三桠苦寡糖。

实施例4三桠苦寡糖的制备

S1.将三桠苦洗净、55℃下烘干、粉碎、过20目筛，加入浓度为85％的乙醇，使乙醇与三桠苦粉末的料液比为15mL/g，在90℃下加热回流提取1.5h，重复3次，过滤，干燥；

S2.向步骤S1所述干燥得到的三桠苦粉末中加水至料液比为20mL/g，以700W的功率进行微波辅助提取4min，离心、提取液浓缩得到浓缩液；

S3.向步骤S2所得浓缩液中加入无水乙醇，至乙醇的终浓度为85％，再于2℃下，静置48h，离心，得到的沉淀还加水进行复溶，再去乙醇、浓缩、冷冻干燥后将三桠苦寡糖配置成浓度为60mg/mL的水溶液，用氯仿和正丁醇的体积比为4:1的Sevage试剂进行除蛋白处理，重复8次；最后采用AB-8型大孔树脂柱层析进行脱色处理(流速为2mL/min，洗脱液体积为三桠苦寡糖溶液上样量体积的3倍)，浓缩、冷冻干燥，即得到所述三桠苦寡糖。

实验例1三桠苦寡糖的分子量分布测定

对实施例2得到的三桠苦寡糖进行分子量分布测定。取10μL三桠苦寡糖水溶液(1mg/mL)，置于1.5mL的Ep管中，加入40μL的1-(4-氰基苯基)-4-哌啶碳酰肼溶液(1×10^- ⁸mol/L)，再加入10μL冰醋酸的乙醇溶液，在90℃下进行水浴，敞口反应至溶液完全挥干，冷却后加入100μL的50％乙腈溶液完全溶解，点靶，进行MALDI-TOF-MS分析。

为了避免基质对测量结果影响，在MALDI-TOF-MS实验中偏转500Da以下的小分子。三桠苦寡糖分子量分布分析结果如图5所示，由于寡糖缺乏碱性位点，在MALDI-TOF MS中不容易质子化，相反，它们倾向于形成碱金属相关离子峰。在正离子模式质谱中，三桠苦寡糖主要被观察到与钠离子和钾离子形成离子峰，且两峰之间相差16Da，这差异与Na和K的原子质量之差一致。因此，三桠苦寡糖的主要分子量分布范围在500～1200Da之间，分子量在1200～1500Da的峰强度很低，说明本发明方法制备得到的三桠苦寡糖的主要分子量分布范围是500～1200Da。

实验例2三桠苦寡糖的XRD分析

对实施例2得到的三桠苦寡糖进行XRD分析。将三桠苦寡糖置于样品台上，用载玻片将样品压平，采用荷兰帕纳科公司的XPert3 Power型多功能X-射线衍射仪，在Cu靶，λ＝1.54056A，2θ角扫描范围为5°～90°，扫描速度为0.6565°/s下测定，得到图6所示的XRD分析结果。

结果显示，三桠苦寡糖2θ在20°左右出现较宽的衍射峰，表现为低结晶度，表明该三桠苦寡糖内部属于无定型结构。根据晶体衍射布拉格公式2dsinθ＝nλ，可知当n＝1，

时，三桠苦寡糖的晶格间距分别为4.37nm。

实验例3三桠苦寡糖的扫描电镜分析

对实施例3得到的三桠苦寡糖进行扫描电镜分析。将微量三桠苦寡糖粉末置于贴有导电胶的样品台上，喷金40s后，采用HITACHI公司的SU5000型扫描电镜仪进行测定，得到图7所示的扫描电镜图。

结果显示，三桠苦寡糖表面呈现片状，表面凹凸不平且密集多孔，这可能与微波辐射作用于糖苷键的方式不同有关。

实验例4三桠苦寡糖的抗氧化活性分析

对实施例4得到的三桠苦寡糖进行抗氧化活性分析，包括DPPH自由基、OH自由基和ABTS自由基的清除能力及还原能力。分别制备成0.2、0.4、0.6、0.8和1.0mg/mL的三桠苦寡糖水溶液，作为实验组；并取VC作为阳性对照。

DPPH自由基清除实验：分别移取2.0mL的三桠苦寡糖溶液和0.04mg/mL DPPH-无水乙醇溶液，充分混匀，避光反应30min，在波长517nm处测定其吸光度A_i，同时测定无水乙醇和DPPH-无水乙醇溶液等体积混合液吸光度A_C，无水乙醇和样品液等体积混合液的吸光度A_j，在其他条件不变下，以VC为阳性对照。DPPH自由基清除率(％)＝[1-(A_i-A_j)/A_C]×100％。

OH自由基清除实验：试管中依次加入9mmol/L的FeSO₄和9mmol/L的水杨酸-乙醇溶液各1mL，摇匀，后加入1mL不同浓度的三桠苦寡糖溶液，最后加入8.8mmol/L的H₂O₂溶液1mL启动反应，37℃水浴中保持30min，后冷却至室温，在波长510nm测吸光度为A₁，蒸馏水替换三桠苦寡糖溶液的吸光度为A₂，蒸馏水替换H₂O₂的吸光度为A₃，以Vc为阳性对比。OH自由基清除率＝[A2-(A₁-A₃)]/A₂×100％。

ABTS自由基清除实验：按试剂说明书配置ABTS工作液。在96孔板中，分别加入200uL ABTS工作液和20uL不同浓度的三桠苦寡糖溶液，培育6min后，在734nm处测定吸光度为A₁，蒸馏水替换三桠苦寡糖溶液的吸光度为A₂，蒸馏水替换ABTS工作液吸光度为A₃，以VC为阳性对比。ABTS自由基清除率＝[A_2-(A₁-A₃)]/A₂×100％。

还原能力实验：取0.5mL的三桠苦寡糖溶液于试管，依次加入0.5mL的1％K₃Fe(CN)₆溶液与0.5mL PBS溶液(0.2mo1/L，pH＝6.7)，于50℃水浴反应20min后立即冷却，依次加入0.5mL 10％TCA溶液，0.5mL 0.1％FeCl₃溶液和2.0mL去离子水，充分摇匀，静置10min，在波长700nm下测定其吸光度值，以VC作为阳性对照。

抗氧化活性测试结果如图8所示，随着浓度的增大，三桠苦寡糖对OH自由基和ABTS自由基的清除能力及还原能力越来越强，对DPPH自由基的清除能力在0.4mg/mL左右接近饱和水平，可见，三桠苦寡糖的抗氧化活性与浓度呈现依赖性，其抗氧化活性随着浓度增大而增强。DPPH、OH和ABTS自由基清除率的IC₅₀值分别为0.16mg/mL、1.20mg/mL和0.98mg/mL。

实验例5三桠苦寡糖的对肿瘤细胞增殖活力的影响

对实施例3得到的三桠苦寡糖进行肿瘤细胞增殖活力评估。分别制备成0、0.05、0.1、0.2、0.4、和0.6mg/mL的三桠苦寡糖水溶液，对Sjsa-1(购自广州吉妮欧生物科技有限公司)和MDA-MB-231肿瘤细胞(购自武汉普诺赛生命科技有限公司)细胞处理24h后，采用CCK-8试剂盒对细胞增殖活力进行评估。

三桠苦寡糖对肿瘤细胞增殖活力的影响如图9所示，随着浓度的增大，Sjsa-1和MDA-MB-231细胞的存活率越来越低，说明本发明制备得到的三桠苦寡糖可剂量依赖性地降低Sjsa-1和MDA-MB-231细胞的活力，表明三桠苦寡糖可用于抗肿瘤。此外，本发明三桠苦寡糖对MDA-MB-231细胞的活性抑制效果优于对Sjsa-1细胞的活性抑制效果，在浓度为600μg/mL时，三桠苦寡糖对Sjsa-1和MDA-MB-231细胞的抑制率可高达45.45％和63.47％。

综上所述，本发明以三桠苦为原料，经过脱脂、提取、醇沉、除蛋白、脱色等步骤成功制备得到三桠苦寡糖，通过特定控制提取过程中的料液比、微波时间和微波功率等各参数，使得三桠苦寡糖的提取效率保持在较高的水平，且该三桠苦寡糖还表现出优异的抗氧化和抗肿瘤活性，为抗氧化、抗肿瘤产品的制备提供一种天然、新型的成分选择。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种三桠苦寡糖，其特征在于，所述三桠苦寡糖按照如下步骤制备得到：

S2.向步骤S1所述干燥得到的三桠苦粉末加水至料液比为10～30mL/g，以420～700W的功率进行微波辅助提取2～6min，提取液浓缩得到浓缩液；

2.根据权利要求1所述三桠苦寡糖，其特征在于，步骤S2所述料液比为20～30mL/g。

3.根据权利要求1所述三桠苦寡糖，其特征在于，步骤S2所述微波辅助提取的功率为560～700W；步骤S2所述微波辅助提取的时间为4～6min。

4.根据权利要求2或3所述三桠苦寡糖，其特征在于，所述料液比为28mL/g；所述微波辅助提取的功率为630W；所述微波辅助提取的时间为6min。

5.根据权利要求1所述三桠苦寡糖，其特征在于，步骤S3所述醇沉为向所述浓缩液中加入无水乙醇，至乙醇的终浓度为70～85％，再于2～8℃下，静置24～48h，离心。

6.根据权利要求1所述三桠苦寡糖，其特征在于，步骤S3所述除蛋白为采用Sevage法进行。

7.根据权利要求1所述三桠苦寡糖，其特征在于，步骤S3所述脱色为采用AB-8型大孔树脂柱层析进行。

8.根据权利要求7所述三桠苦寡糖，其特征在于，所述脱色后，还进行后处理。

9.根据权利要求8所述三桠苦寡糖，其特征在于，所述后处理为浓缩、干燥。

10.权利要求1～9任一所述三桠苦寡糖在制备抗氧化、抗肿瘤的产品中的应用。