CN108997509B - 一种分心木多糖、分心木多糖的制备方法及用途 - Google Patents
一种分心木多糖、分心木多糖的制备方法及用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108997509B CN108997509B CN201810819937.XA CN201810819937A CN108997509B CN 108997509 B CN108997509 B CN 108997509B CN 201810819937 A CN201810819937 A CN 201810819937A CN 108997509 B CN108997509 B CN 108997509B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polysaccharide
- diaphragma juglandis
- diaphragma
- diaphragmatic
- fucose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
Abstract
本发明公开了一种分心木多糖的制备方法,将分心木粉碎成粉末作为原料,经浸提、浓缩、沉淀、除蛋白质、冻干制得分心木粗多糖,将分心木粗多糖纯化制得分心木多糖。本发明还公开了一种分心木多糖及用途。
Description
技术领域
本发明涉及分心木多糖技术领域,具体提供一种分心木多糖、分心木多糖的制备方法及用途。
背景技术
随着社会经济的不断发展,人们的生活水平得到很大的提高,随之富贵病等疾病也逐年增多。近年来,多糖及其衍生物在疾病防治中的作用引起了研究者们的关注,随着多糖研究技术的快速发展,多糖研究异军突起,国际科学界甚至提出了21世纪是多糖的世纪。许多植物多糖都可用于防止糖尿病及其并发症,还可促进胃溃疡愈合及修复,具有降血脂、抗辐射等多种生物活性,且应用于人体毒副作用较小,多糖及其衍生物已成为近年来天然产物研究的热点之一。因此,开发多糖资源、表征其结构、研究其药理活性等具有及其重要的现实意义。
目前发现糖尿病、动脉粥样硬化等多种疾病都与血管钙化相关,血管钙化的发生发展机制主要由持续高血糖、糖基化终产物(AGEs)堆积、氧化应激等,而分心木传统用药中用于治疗肾病,且疗效较好,有文献研究分心木可改善肾小球毛细血管的通透性。目前,分心木的药理研究进行了补肾、抗氧化、降血糖、降血脂、抗病毒、抗感染、抗炎、镇痛等多种生物活性。目前,国内学者仅从分心木中分离出两种酸性多糖,且仅进行了抗氧化活性研究,有必要对其进行深入研究。
发明内容
本发明的技术任务是针对上述存在的问题,提供一种分心木多糖的制备方法。
本发明进一步提供了一种分心木多糖。
本发明进一步还提供了一种分心木多糖的用途。
为实现上述目的,本发明提供了如下技术方案:
一种分心木多糖的制备方法,将分心木粉碎成粉末作为原料,经浸提、浓缩、沉淀、除蛋白质、冻干制得分心木粗多糖,将分心木粗多糖纯化分离制得分心木多糖。
作为优选,该方法具体包括以下步骤:
S1:将干燥的分心木粉碎成粉末,水浸提,过滤出残渣得滤液;
S2:将滤液浓缩,加入有机溶剂,放置22-24h后,离心收集沉淀;
S3:用有机溶剂洗涤沉淀至溶液中无色,将沉淀置于通风处挥发至无味;
S4:将无味的沉淀溶解于分液漏斗中,重复加入除蛋白质试剂去除蛋白质,直至多糖中无蛋白质,得到分心木多糖水溶液;
S5:将分心木多糖水溶液冷冻干燥后得分心木粗多糖;
S6:将分心木粗多糖分离纯化得分心木多糖。
取干燥的分心木药材用粉碎机粉碎成粉末,过60目标准筛,加入蒸馏水。将浸提过的分心木过滤去除残渣后合并滤液,经旋转蒸发仪浓缩。加入有机溶剂放置22-24h后,3000rpm转速下离心10min,收集沉淀。
本发明中有机溶剂可以选用无水乙醇、苯乙烯、卤代烃等,优先选用无水乙醇。
所述除蛋白质试剂选用Sevag液,Sevag液由三氯甲烷和正丁醇混合制备而成,优选的,三氯甲烷与正丁醇的体积比为4:1。
作为优选,步骤S1水浸提过程中,分心木粉末与蒸馏水的料液比为1:35-1:45,将分心木粉末在80-90℃下浸提2-4次,每次浸提2-4h。
作为优选,步骤S2中,将滤液在45-55℃下浓缩,加入3-5倍体积的有机溶剂,搅拌均匀后放置22-24h,离心收集沉淀。
作为优选,步骤S6中,通过DEAE Sephadex A-25阴离子交换柱色谱进行分离纯化,依次用蒸馏水、0.05-1mol/L的NaCl溶液连续线性梯度洗脱,控制流速为0.5-1.5mL/min,收集洗脱液,采用硫酸-苯酚法跟踪监测洗脱液成分,合并同一洗脱峰的洗脱液,将洗脱液冷冻干燥制得分心木多糖。
以DEAE Sephadex A-25为填料装柱,用蒸馏水溶解分心木多糖,依次用蒸馏水、0.05-1mol/L NaCl做流动相,洗脱冲柱,控制洗脱流速为1mL/min,自动部分收集器收集洗脱流分,每个试管接样量为3mL。采用硫酸-苯酚法跟踪监测成分,合并相似流分,以试管号为横坐标,分心木粗多糖洗脱流分的吸光值为纵坐标作洗脱曲线,依据洗脱曲线合并同一洗脱峰的各试管洗脱液,冷冻干燥制得分心木多糖。
作为优选,步骤S6中,通过Sephadex G-75凝胶柱色谱进行分离纯化,用蒸馏水洗脱,控制流速为0.5-1.5mL/min,收集洗脱液,采用硫酸-苯酚法跟踪监测,合并同一洗脱峰的洗脱液,将洗脱液冷冻干燥制得分心木多糖。
以Sephadex G-75为填料装柱,用蒸馏水溶解分心木多糖P4a和P5a,上柱,蒸馏水洗脱,控制洗脱流速为1mL/min,自动部分收集器收集洗脱流分,每个试管接样量为3mL,采用硫酸-苯酚法跟踪监测成分,合并相似流分,以试管号为横坐标,分心木粗多糖洗脱流分的吸光值为纵坐标作洗脱曲线,依据洗脱曲线合并同一洗脱峰的各试管洗脱液,冷冻干燥制得分心木多糖。
本发明中得到两种含量较多的分心木多糖,分别为P4a和P5a。
一种分心木多糖,由以下单糖组成,甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖,各单糖的摩尔比为甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖:岩藻糖=1:10~25.2:1~15.3:40~75.5:10~22.1:10~26.9:1~10;
分心木多糖的相对分子质量为1000~8000Da。
本发明中采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化法来测定单糖的组成,样品P4a的HPLC即高效液相色谱法分析结果显示:通过保留时间确定样品P4a中含有的甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖七种单糖的摩尔数之比为甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖:岩藻糖=1:10~25.2:1~15.3:40~75.5:10~22.1:10~26.9:1~10。
本发明中优选的甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖:岩藻糖=1:23.1:11.4:72.2:19.9:25.7:2.6。
采用凝胶渗透色谱(GPC)法来测定多糖的相对分子质量,分心木多糖P4a的相对分子量为7015Da。
一种分心木多糖,由以下单糖组成,甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖,各单糖的摩尔比为甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖:岩藻糖=1:10~37.8:10~29.7:50~82.7:1~15.3:10~23.5:1~10;
分心木多糖的相对分子质量为10000~15000Da。
本发明中采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化法来测定单糖的组成,样品P5a的HPLC即高效液相色谱法分析结果显示:通过保留时间确定样品P5a中含有的甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖七种单糖的摩尔数之比为甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖:岩藻糖=1:10~37.8:10~29.7:50~82.7:1~15.3:10~23.5:1~10。
本发明中优选的甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖:岩藻糖=1:36.2:26.7:82.7:12.3:21.9:2.5。
采用凝胶渗透色谱(GPC)法来测定多糖的相对分子质量,分心木多糖P5a的相对分子量为13057Da。
此外,采用红外光谱(IR)研究分心木多糖的结构。取适量分心木多糖样品于玛瑙研钵中,混合KBr研磨均匀,压片,在400-4000cm-1范围内扫描,以单独的KBr片作为空白对照进行红外光谱分析。通过分析分心木多糖P4a的红外光谱图可知,分心木多糖P4a的存在分子内和分子外O-H、C-H、糖醛酸、-CHO和C-O。通过分析分心木多糖P5a的红外光谱图可知,分心木多糖P5a存在分子内和分子外O-H、C-H、糖醛酸、-CHO、C-O和α-吡喃环式葡萄糖苷键。
一种分心木多糖在抑制α-葡萄糖苷酶活性的应用。
一种分心木多糖在抑制AGEs形成活性的应用。
附图说明
图1是分心木多糖P4a纯度测定的洗脱曲线示意图;
图2是分心木多糖P5a纯度测定的洗脱曲线示意图;
图3是分心木多糖P4a的紫外光谱图;
图4是分心木多糖P5a的紫外光谱图;
图5是分心木多糖P4a的红外光谱图;
图6是分心木多糖P5a的红外光谱图;
图7是分心木多糖P4a的分子量测定谱图;
图8是分心木多糖P5a的分子量测定谱图;
图9是分心木多糖P4a的单糖组成测定谱图;
图10是分心木多糖P5a的单糖组成测定谱图。
具体实施方式
下面将结合附图和实施例,对本发明的分心木多糖、分心木多糖的制备方法及用途作进一步详细说明。
实施例1
一、分心木粗多糖的提取
1、取干燥的分心木药材用粉碎机粉碎,过60目标准筛,按照分心木粉末与蒸馏水的质量体积比为1:40加入蒸馏水,85℃下浸提3次,每次浸提3h。
2、过滤除去残渣后合并滤液,经旋转蒸发仪在50℃下浓缩至一定体积,加入浓缩后4倍体积的无水乙醇,搅拌均匀后于4℃放置24h。3000rpm转速下离心10min,收集沉淀,用无水乙醇洗涤沉淀至醇溶液中无颜色,将沉淀摊开,放于通风处挥发至无醇味。
3、将无醇味的沉淀溶解于分液漏斗中,加入等体积的Sevag液,震荡混合后放置,待混合液分层(上层为多糖水溶液,下层为Sevag液,中间层则为变性的蛋白质),由下出口弃去Sevag液和变性蛋白沉淀,重复以上步骤反复抽提直至无中间层,即分心木多糖中无蛋白质。将上层多糖水溶液由分液漏斗上出口倒出,冷冻干燥后即得脱蛋白后的分心木粗多糖。其中,Sevag液由三氯甲烷和正丁醇以体积比为4:1制得。
二、分心木粗多糖的分离纯化
以DEAE Sephadex A-25为填料装柱,依次用蒸馏水、0.5mol/LNaCl溶液溶解分心木多糖P4a和P5a,上柱,控制洗脱流速1mL/min洗脱,自动部分收集器收集洗脱流分,每个试管接样为3mL,采用硫酸-苯酚法跟踪监测成分,合并相似流分,以试管号为横坐标,分心木粗多糖洗脱流分的吸光值为纵坐标作洗脱曲线,依据洗脱曲线合并同一洗脱峰的各试管洗脱液,冷冻干燥制得分心木多糖。
实施例2
一、分心木粗多糖的提取
1、取干燥的分心木药材用粉碎机粉碎,过60目标准筛,按照分心木粉末与蒸馏水的质量体积比为1:40加入蒸馏水,85℃下浸提3次,每次浸提3h。
2、过滤除去残渣后合并滤液,经旋转蒸发仪在50℃下浓缩至一定体积,加入浓缩后4倍体积的无水乙醇,搅拌均匀后于4℃放置24h。3000rpm转速下离心10min,收集沉淀,用无水乙醇洗涤沉淀至醇溶液中无颜色,将沉淀摊开,放于通风处挥发至无醇味。
3、将无醇味的沉淀溶解于分液漏斗中,加入等体积的Sevag液,震荡混合后放置,待混合液分层(上层为多糖水溶液,下层为Sevag液,中间层则为变性的蛋白质),由下出口弃去Sevag液和变性蛋白沉淀,重复以上步骤反复抽提直至无中间层,即多糖中无蛋白质。将上层多糖水溶液由分液漏斗上出口倒出,冷冻干燥后即得脱蛋白后的分心木粗多糖。其中,Sevag液由三氯甲烷和正丁醇以体积比为4:1制得。
二、分心木粗多糖的分离纯化
以Sephadex G-75为填料装柱,用蒸馏水溶解分心木多糖P4a和P5a,上柱,控制洗脱流速,自动部分收集器收集洗脱流分,每个试管接样为3mL,采用硫酸-苯酚法跟踪监测成分,合并相似流分,以试管号为横坐标,分心木粗多糖洗脱流分的吸光值为纵坐标作洗脱曲线,依据洗脱曲线合并同一洗脱峰的各试管洗脱液,冷冻干燥制得分心木多糖。
本发明中,得到两种含量较多的分心木多糖,分别为P4a和P5a。
实施例3
分心木多糖P4a和P5a的纯度的测定
多糖是生物大分子(分子量>1000Da),其纯度的含义不等同于常说的小分子化合物(分子量<1000Da),一般情况下,习惯称纯的多糖为一定相对分子质量范围的相对均一组分,即相对分子质量满足连续的对称的分布曲线。
测定过程中,将溶胀好的Sephadex G-75填料装柱(26×650mm),纯净水平衡三个柱体积。分别称取10mg精制后的分心木多糖P4a和P5a,溶于2mL纯净水中,上柱,控制流速为1mL/min洗脱,每个试管3mL接样,采用硫酸-苯酚法监测成分。以试管号为横坐标,吸光值为纵坐标作洗脱曲线。如图1所示,分心木多糖P4a的洗脱曲线为单一峰,符合正态分布,P4a为均一多糖。如图2所示,分心木多糖P5a的洗脱曲线为单一峰,符合正态分布,P5a为均一多糖。
另外,对分心木多糖P4a和P5a进行紫外全光谱扫描,各称取5mg的分心木多糖P4a和P5a,配置成1mg/mL的水溶液,于紫外分光光度计中全波长(190~1100nm)扫描。如图3所示,分心木多糖P4a的紫外光谱图在紫外光区260nm和280nm处均无吸收,说明分心木多糖P4a组分中不含蛋白质、多肽和核酸,且在可见光区也没有吸收峰,说明其不含色素。如图4所示,分心木多糖P5a的紫外光谱图在紫外光区260nm和280nm处均无吸收,说明分心木多糖P5a组分中不含蛋白质、多肽和核酸,且在可见光区也没有吸收峰,说明其不含色素。
实施例4
分心木多糖P4a和P5a的结构鉴定
(1)分心木多糖P4a和P5a的红外光谱分析
红外光谱(IR)是研究糖结构的重要手段之一,主要用于不同糖的鉴别、糖键上主要取代基的识别、糖苷键及糖构型的识别等。各取1mg分心木多糖P4a和P5a样品于玛瑙研钵中,混合KBr研磨均匀,压片,在400~4000cm-1范围内扫描,以单独的KBr片作为空白对照进行红外光谱分析。
如图5所示,在3405cm-1处的强宽峰为糖O-H伸缩振动产生,表明分心木多糖P4a存在分子内和分子外氢键。2938cm-1为C-H伸缩振动吸收峰。1742cm-1处的吸收为糖醛酸对应的吸收峰。1612cm-1处的吸收峰为-CHO以及糖醛酸残基上-COOH的C=O的伸缩振动吸收峰。1412cm-1和1331cm-1处的吸收峰为C-H的变形振动吸收峰。1016cm-1为C-O伸缩振动吸收峰。
如图6所示,在3423cm-1处的强宽峰为糖O-H伸缩振动产生,表明分心木多糖P5a存在分子内和分子间氢键。2931cm-1为C-H伸缩振动吸收峰。1744cm-1处的吸收为糖醛酸对应的吸收峰。1620cm-1处的吸收峰为-CHO以及糖醛酸残基上-COOH的C=O的伸缩振动吸收峰。1421cm-1和1330cm-1处的吸收峰为C-H的变形振动吸收峰。1016cm-1为C-O伸缩振动吸收峰。在845cm-1处有一个弱的吸收峰,它是α-吡喃环式葡萄糖苷键的特征吸收,说明P5a中的葡萄糖残基具有α-异头构型。
(2)分心木多糖P4a和P5a的相对分子质量的测定
本发明中采用凝胶渗透色谱(GPC)法来测定多糖的相对分子质量。如图7所示,分心木多糖P4a的相对分子质量为7015Da。如图8所示,分心木多糖P4a的相对分子质量为13057Da。
实施例5
分心木多糖P4a和P5a的单糖组成测定
本发明中,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化法来测定单糖的组成。
如图9所示,分心木多糖P4a的HPLC分析结果显示:通过保留时间确定分心木多糖P4a中含有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖七种单糖,七种单糖的摩尔数之比为甘露糖︰鼠李糖︰葡萄糖︰半乳糖︰木糖︰阿拉伯糖︰岩藻糖=1︰23.1︰11.4︰72.2︰19.9︰25.7︰2.6。如图10所示,分心木多糖P5a的HPLC分析结果显示:通过保留时间确定分心木多糖P5a中含有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖七种单糖,七种单糖的摩尔数之比为甘露糖︰鼠李糖︰葡萄糖︰半乳糖︰木糖︰阿拉伯糖︰岩藻糖=1︰36.2︰26.7︰82.7︰12.3︰21.9︰2.5。
实施例6
分心木多糖P4a和P5a抑制α-葡萄糖苷酶活性鉴定
(1)反应溶液的配置
a、磷酸盐缓冲液
先配置0.2mol/L的Na2HPO4和NaH2PO4母液,然后按配比Na2HPO4:NaH2PO4=49:51,配置0.2mol/L、pH=6.8的磷酸盐缓冲液(PBS),进而稀释成0.025mol/L、pH=6.8的PBS溶液,备用。
b、底物PNPG溶液
称取37.66mg PNPG于50mL容量瓶中,加适量PBS溶液溶解后定容至刻度,配置成2.5mmol/L的PNPG溶液,备用。
c、Na2CO3溶液
称取216mg Na2CO3于10mL容量瓶,加适量蒸馏水溶解后定容至刻度,制得到0.2mol/L的Na2CO3溶液,备用。
(2)α-葡萄糖苷酶液
用适量PBS将酶干粉(100U)溶解于50mL容量瓶定容后的2U/mL的母液,然后取酶液用PBS稀释成0.1U/mL的酶液,备用。
(3)样品溶液
分别称取分心木多糖P4a和P5a样品,以蒸馏水溶解,分别配置成1000、100、10、1μg/mL系列样品溶液,备用。
将实验分为空白组、对照组、样品空白组和样品组,按表1的剂量于96孔板中依次加入pH=6.8的PBS溶液、样品溶液和PNPG底物,每组设3个平行。混匀后于37℃水浴保温10min,取出后再加入37℃水浴的酶溶液,充分混合后于37℃水浴反应20min,结束后取出,加入Na2CO3溶液中止反应。用酶标仪在405nm下测定吸光度。采用阿卡波糖为阳性对照。
表1各反应物添加剂量和顺序
由于PNPG在α-葡萄糖苷酶的作用下发生水解反应,生成PNP和葡萄糖,PNP在405nm处有最大吸收,测定其吸光度,根据公式计算出各待测样品的酶抑制率及IC50值。
酶抑制率的公式为:抑制率%=[(AC-AB)-(AS-ASB)]/AC-AB
式中:AC--对照组的吸光值;AB--空白组的吸光值;
AS--样品组的吸光值;ASB--样品空白组的吸光值。
IC50(half maximal inhibitory concentration)是指被测量的拮抗剂的半抑制浓度。它能指示某一药物或者物质(抑制剂)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物质,比如酶,细胞受体或是微生物)的半量。在酶活力抑制方面,一定浓度的药物可以抑制葡萄糖苷酶活力,使之下降50%,该浓度称为50%抑制浓度,即该酶此时的活性是其原有活性的一半。IC50值可以用来衡量药物抑制该酶作用的强弱,即抑制作用越强,该数值越低。
经计算,阿卡波糖的IC50值为0.032±0.002μg/mL,P4a的IC50值为192.1±0.825μg/mL,P5a的IC50值为55.7±0.942μg/mL。
由以上可知,分心木多糖P4a和P5a的IC50值分别为192.1±0.825μg/mL和55.7±0.942μg/mL,表现出良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,分心木多糖具有潜在的降血糖活性。
实施例7
分心木多糖P4a和P5a抑制AGEs形成活性鉴定
向含有10mg/mL牛血清白蛋白的50mmol/mLPBS(pH=7.4)缓冲液中加入0.2mol/L的葡萄糖,并加入0.02%叠氮化钠,以防止长菌。取上述反应混合物3mL与各浓度的分心木多糖P4a和P5a样品溶液1mL混合。在37℃孵育14天后,用荧光分光光度计(激发波长:350nm,发射波长:420nm,狭缝:2.0nm)测定反应液的荧光强度。根据公式计算出各待测样品的酶抑制率及IC50值。每个样品做三个平行,以氨基胍盐酸盐作阳性对照。
酶抑制率的公式为:抑制率%=[(AC-AB)-(AS-ASB)]/AC-AB
式中:AC--对照组的吸光值;AB--空白组的吸光值;
AS--样品组的吸光值;ASB--样品空白组的吸光值。
IC50(half maximal inhibitory concentration)是指被测量的拮抗剂的半抑制浓度。它能指示某一药物或者物质(抑制剂)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物质,比如酶,细胞受体或是微生物)的半量。在AGEs形成抑制方面,一定浓度的药物可以抑制AGEs的形成,IC50值可以用来衡量药物抑制AGEs形成作用的强弱,即抑制作用越强,该数值越低。
经计算,氨基胍盐酸盐的IC50值为31.265±0.942μg/mL,分心木多糖P4a的IC50值为117.5±0.618μg/mL,P5a的IC50值为85.6±1.362μg/mL。
由以上可知,分心木多糖P4a和P5a的IC50值分别为117.5±0.618μg/mL和85.6±1.362μg/mL,表现出良好的抑制AGEs形成活性。
以上所述的实施例,只是本发明较优选的具体实施方式,本领域的技术人员在本发明技术方案范围内进行的通常变化和替换都应包含在本发明的保护范围内。
Claims (9)
1.一种分心木多糖的制备方法,其特征在于:将分心木粉碎成粉末作为原料,经浸提、浓缩、沉淀、除蛋白质、冻干制得分心木粗多糖,将分心木粗多糖纯化分离制得分心木多糖,具体包括以下步骤:
S1:将干燥的分心木粉碎成粉末,水浸提,过滤出残渣得滤液;
S2:将滤液浓缩,加入有机溶剂,放置22-24h后,离心收集沉淀;
S3:用有机溶剂洗涤沉淀至溶液中无色,将沉淀置于通风处挥发至无味;
S4:将无味的沉淀溶解于分液漏斗中,重复加入除蛋白质试剂去除蛋白质,直至多糖中无蛋白质,得到分心木多糖水溶液;
S5:将分心木多糖水溶液冷冻干燥后得分心木粗多糖;
S6:将分心木粗多糖分离纯化得分心木多糖;
制备的分心木多糖由以下单糖组成,甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖,其中各单糖的摩尔比为甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖:岩藻糖=1:10~25.2:1~15.3:40~75.5:10~22.1:10~26.9:1~10或甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖:岩藻糖=1:10~37.8:10~29.7:50~82.7:1~15.3:10~23.5:1~10。
2.根据权利要求1所述的分心木多糖的制备方法,其特征在于:步骤S1水浸提过程中,分心木粉末与蒸馏水的料液比为1:35-1:45,将分心木粉末在80-90℃下浸提2-4次,每次浸提2-4h。
3.根据权利要求1或2所述的分心木多糖的制备方法,其特征在于:步骤S2中,将滤液在45-55℃下浓缩,加入3-5倍体积的有机溶剂,搅拌均匀后放置22-24h,离心收集沉淀。
4.根据权利要求3所述的分心木多糖的制备方法,其特征在于:步骤S6中,通过DEAESephadexA-25阴离子交换柱色谱进行分离纯化,依次用蒸馏水、0.05-1mol/L的NaCl溶液连续线性梯度洗脱,控制流速为0.5-1.5mL/min,收集洗脱液,采用硫酸-苯酚法跟踪监测洗脱液成分,合并同一洗脱峰的洗脱液,将洗脱液冷冻干燥制得分心木多糖。
5.根据权利要求3所述的分心木多糖的制备方法,其特征在于:步骤S 6中,通过Sephadex G-75凝胶柱色谱进行分离纯化,用蒸馏水洗脱,控制流速为0.5-1.5mL/min,收集洗脱液,采用硫酸-苯酚法跟踪监测成分,合并同一洗脱峰的洗脱液,将洗脱液冷冻干燥制得分心木多糖。
6.一种分心木多糖,其特征在于:由以下单糖组成,甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖,各单糖的摩尔比为甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖:岩藻糖=1:10~25.2:1~15.3:40~75.5:10~22.1:10~26.9:1~10;
分心木多糖的相对分子质量为1000~8000Da。
7.一种分心木多糖,其特征在于:由以下单糖组成,甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖,各单糖的摩尔比为甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖:岩藻糖=1:10~37.8:10~29.7:50~82.7:1~15.3:10~23.5:1~10;
分心木多糖的相对分子质量为10000~15000Da。
8.权利要求6或7所述的分心木多糖在抑制α-葡萄糖苷酶活性的应用。
9.权利要求6或7所述的分心木多糖在抑制AGEs形成活性的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810819937.XA CN108997509B (zh) | 2018-07-24 | 2018-07-24 | 一种分心木多糖、分心木多糖的制备方法及用途 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810819937.XA CN108997509B (zh) | 2018-07-24 | 2018-07-24 | 一种分心木多糖、分心木多糖的制备方法及用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108997509A CN108997509A (zh) | 2018-12-14 |
CN108997509B true CN108997509B (zh) | 2021-01-01 |
Family
ID=64596903
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810819937.XA Active CN108997509B (zh) | 2018-07-24 | 2018-07-24 | 一种分心木多糖、分心木多糖的制备方法及用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108997509B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111704639B (zh) * | 2020-06-03 | 2021-09-03 | 江南大学 | 核桃分心木中酚酸葡萄糖苷类化合物的分离方法及应用 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104725520A (zh) * | 2015-03-13 | 2015-06-24 | 凤庆县裕泽谷核桃专业合作社 | 一种分心木酸性多糖及其制备和应用 |
CN105777926A (zh) * | 2016-03-22 | 2016-07-20 | 天津大学 | 一种从核桃中综合提取有效成分的方法 |
CN106387168A (zh) * | 2016-12-01 | 2017-02-15 | 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 | 一种核桃分心木降脂保健茶的制备方法 |
CN108030010A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-05-15 | 梁国柱 | 一种分心木速溶粉及其制备方法 |
CN108210556A (zh) * | 2018-03-15 | 2018-06-29 | 东北林业大学 | 一种分心木中活性成分的提取方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2489712C (en) * | 2002-06-21 | 2016-07-12 | University Of Utah Research Foundation | Crosslinked compounds and methods of making and using thereof |
-
2018
- 2018-07-24 CN CN201810819937.XA patent/CN108997509B/zh active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104725520A (zh) * | 2015-03-13 | 2015-06-24 | 凤庆县裕泽谷核桃专业合作社 | 一种分心木酸性多糖及其制备和应用 |
CN105777926A (zh) * | 2016-03-22 | 2016-07-20 | 天津大学 | 一种从核桃中综合提取有效成分的方法 |
CN106387168A (zh) * | 2016-12-01 | 2017-02-15 | 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 | 一种核桃分心木降脂保健茶的制备方法 |
CN108030010A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-05-15 | 梁国柱 | 一种分心木速溶粉及其制备方法 |
CN108210556A (zh) * | 2018-03-15 | 2018-06-29 | 东北林业大学 | 一种分心木中活性成分的提取方法 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
《Effect of Aqueous Extract of Walnut Septum on Blood Glucose and Pancreatic Structure in Streptozotocin-Induced Diabetic Mouse》;FARZANEH DEHGHANI等;《IRANIAN JOURNAL OF PHARMACOLOGY & THERAPEUTICS》;20120131;第11卷(第1期);10-14 * |
《分心木酸性多糖SJP-2的理化性质及其抗氧化活性研究》;邵双双等;《食品工业科技》;20160331(第05期);第60页1.2节实验方法部分 * |
《新疆核桃隔膜多糖提取、分离纯化及抗氧化活性研究》;高莉;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》;20110215(第02期);正文第28-31页第2.2-2.4节,第47页4.3节 * |
《核桃仁提取物抑制糖苷酶活性成分的研究》;付田等;《天然产物研究与开发》;20091231;第21卷(第B05期);198-200 * |
《核桃仁种皮多糖的提取及抑菌作用的研究》;刘安军等;《现代食品科技》;20100628;第26卷(第4期);362-365 * |
《核桃隔膜多糖的分离纯化及单糖组成分析》;高莉等;《食品科学》;20110309;第31卷(第21期);182-185 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN108997509A (zh) | 2018-12-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108752497A (zh) | 巴戟天水提物、寡糖和多糖制备,及其应用 | |
CN107011453B (zh) | 一种维药恰麻古多糖及其提取方法和应用 | |
CN113004432A (zh) | 一种铁皮石斛寡糖、铁皮石斛寡糖衍生物及其制备方法和应用 | |
CN103070912B (zh) | 一种苦参总黄酮提取物及其制备方法、质量检测方法 | |
CN110540603B (zh) | 知母多糖及其制备方法、鉴定方法和应用 | |
CN108997509B (zh) | 一种分心木多糖、分心木多糖的制备方法及用途 | |
CN108530430A (zh) | 酯型儿茶素吡咯烷生物碱及其制备方法和应用 | |
CN111681715A (zh) | 一种覆盆子质量标志物及其制备方法 | |
CN108392485B (zh) | 硫酸化甘露葡萄糖醛酸寡糖在制备治疗或预防神经退行性疾病药物中的应用 | |
CN112321742A (zh) | 一种云芝胞外多糖的分离纯化及其结构表征 | |
CN114957497B (zh) | 一种滇龙胆酸性多糖及其制备方法与应用 | |
CN102276754B (zh) | 红芪多糖中的硫酸酯葡聚糖及其制备方法和应用 | |
CN115869345B (zh) | 一种神农香菊黄酮类化合物及其制备方法和应用 | |
CN113717296B (zh) | 一种杜仲酸性多糖、提取方法及其在制备抗结肠癌药物中的应用 | |
CN115073619B (zh) | 一种绞股蓝中性多糖及其提取方法和抗新冠病毒的应用 | |
CN113861301B (zh) | 一种非淀粉百合多糖nslp-1及其应用 | |
CN102327324B (zh) | 一种桑叶总碱提取物及其制备方法和其用途 | |
US11369627B2 (en) | Myrtle polysaccharide P1, the separation method thereof and the use in preparing hypolipidemic drugs therefor | |
WO2005054299A1 (fr) | Polysaccharide, sa preparation et son utilisation | |
CN112794923A (zh) | 川芎多糖及其制备方法、鉴定方法和应用 | |
DE19600301C2 (de) | Durch Cyclooligomerisierung des einfachen Kohlensuboxids C¶3¶O¶2¶ aufgebaute makrocyclische Verbindungen, Verfahren zu deren Herstellung und Gewinnung sowie deren Verwendung | |
CN115141288B (zh) | 知母活性多糖、知母粗多糖及制备方法和应用 | |
CN108570113A (zh) | 肿节风浸膏残渣多糖、其制备方法及用途 | |
CN108623698B (zh) | 瓜蒌皮寡/多糖glp-1-1、其制备方法及用途 | |
CN110655586B (zh) | 一种啤酒花糖聚合物及其制备方法与应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |