CN114736251B - 金丝皇菊的提取单体皇菊素b及其提取方法和应用 - Google Patents

金丝皇菊的提取单体皇菊素b及其提取方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114736251B
CN114736251B CN202210286891.6A CN202210286891A CN114736251B CN 114736251 B CN114736251 B CN 114736251B CN 202210286891 A CN202210286891 A CN 202210286891A CN 114736251 B CN114736251 B CN 114736251B
Authority
CN
China
Prior art keywords
extraction
gradient elution
extract
chrysanthemums
subjecting
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210286891.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114736251A (zh
Inventor
王炜
蒋赛
王梦云
彭彩云
李斌
盛文兵
袁汉文
田星
欧阳瑶力
刘石峰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hunan University of Chinese Medicine
Original Assignee
Hunan University of Chinese Medicine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hunan University of Chinese Medicine filed Critical Hunan University of Chinese Medicine
Priority to CN202210286891.6A priority Critical patent/CN114736251B/zh
Publication of CN114736251A publication Critical patent/CN114736251A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114736251B publication Critical patent/CN114736251B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/18—Acyclic radicals, substituted by carbocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification
    • C07H1/08—Separation; Purification from natural products
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及中药技术，公开了一种金丝皇菊的提取单体皇菊素B及其提取方法和应用。金丝皇菊的提取单体皇菊素B如式(I)所示，其提取方法包括以下步骤：将金丝皇菊花经干燥、粉碎后，与提取溶剂I混合进行提取得到提取液，将提取液浓缩后得到提取浸膏；将提取浸膏依次经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后进行浓缩得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏；将乙酸乙酯浸膏进行梯度洗脱分离I得到组分Fr.1‑Fr.M，将组分Fr.7进行梯度洗脱分离II得到组分Fr.7.1‑Fr.7.N，将组分Fr.7.5进行梯度洗脱分离III得到组分Fr.7.5.1‑Fr.7.5.Q，将组分Fr.7.5.4过凝胶柱得到组分Fr.7.5.4.1‑Fr.7.5.4.P，将组分Fr.7.5.4.4过半制备高效液相分离。皇菊素B具有良好的抗氧化能力。

Description

金丝皇菊的提取单体皇菊素B及其提取方法和应用
技术领域
本发明涉及中药技术，具体涉及一种金丝皇菊的提取单体皇菊素B及其提取方法和应用。
背景技术
菊花为菊科植物菊花的干状头状花序，是我国的传统名花，其集观赏、食用和保健于一身，具有巨大的开发利用价值。《神农本草经》记载菊花“久服利血气，轻身耐老延年”，药典记载其性凉、味甘、苦，微寒，有散风清热、平肝明目、清热解毒的作用。
金丝皇菊属于菊花的一种，发源于位于江西西北部奉新县，不仅具有很好的观赏价值，而且气味芬芳，属药、茶两用佳品，更因其个大形美、口感清香甘甜被誉为菊花中的上品。金丝皇菊中黄酮素的含量极高，且富含多种氨基酸、维生素和微量元素，具有“香、甜、润”三大特点，还有散风热、清肝明目等功效，深受消费者的青睐。
抗氧化是指抗氧化自由基的简称，英文Anti-Oxidant，人体因为与外界的持续接触，包括呼吸(氧化反应)、外界污染、放射线照射等因素不断地在人体体内产生自由基。科学研究表明，癌症、衰老或其它疾病大都与过量自由基的产生有关联，抗氧化类药物可减少氧自由基对血管壁的损害，从而起到抗动脉样硬化的作用，具有抗氧化作用的化妆品也能起到美容保养的作用，因此，研究抗氧化药物或化妆品具有重要意义。
虽然金丝皇菊的作用较多，但是尚未发现金丝皇菊具有抗氧化的作用。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的问题，提供一种金丝皇菊的提取单体皇菊素B及其提取方法和应用，该皇菊素B具有良好的抗氧化能力。
为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种金丝皇菊的提取单体皇菊素B，所述皇菊素B的结构式如式(I)所示：
本发明第二方面提供一种金丝皇菊的提取单体皇菊素B的提取方法，包括以下步骤：
(1)将金丝皇菊花与提取溶剂I混合进行提取得到提取液，将所述提取液浓缩后得到提取浸膏；
(2)将所述提取浸膏依次经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后进行浓缩得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏；
(3)将所述乙酸乙酯浸膏进行梯度洗脱分离I得到组分Fr.1-Fr.M，将所述组分Fr.7进行梯度洗脱分离II得到组分Fr.7.1-Fr.7.N，将所述组分Fr.7.5进行梯度洗脱分离III得到组分Fr.7.5.1-Fr.7.5.Q，将所述组分Fr.7.5.4过凝胶柱得到组分Fr.7.5.4.1-Fr.7.5.4.P，将所述组分Fr.7.5.4.4过半制备高效液相分离得到如式(I)所示的皇菊素B；
其中，M≥11，N≥8，Q≥8，P≥9，
优选地，步骤(1)中所述金丝皇菊花与提取溶剂I混合的过程包括：将所述金丝皇菊花经干燥、粉碎处理后，与所述提取溶剂I混合。
优选地，步骤(1)中所述提取溶剂I为乙醇-水溶液。
优选地，所述提取溶剂I中乙醇与水的体积比为10-20：1。
优选地，所述提取的次数为2-3次，每次所述提取的过程中所述提取溶剂I与所述金丝皇菊花的质量比为3-8：1、提取时间为4-6天。
优选地，步骤(2)中所述石油醚、所述乙酸乙酯和所述正丁醇各自与所述提取浸膏的质量比为3-8：1。
优选地，步骤(3)中所述梯度洗脱分离I的过程包括：将所述乙酸乙酯浸膏装样硅胶柱，然后用洗脱剂I进行梯度洗脱，再经点板合并得到所述组分Fr.1-Fr.M。
优选地，所述洗脱剂I为二氯甲烷-甲醇溶液。
优选地，所述梯度洗脱中二氯甲烷与甲醇的体积比依次为100:1，50:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1，0:1。
优选地，步骤(3)中所述梯度洗脱分离II的过程包括：将所述组分Fr.7过反相柱，用洗脱剂II进行梯度洗脱，再经点板合并得到所述组分Fr.7.1-Fr.7.N。
优选地，所述洗脱剂II为甲醇-水溶液。
优选地，所述梯度洗脱中甲醇与水的体积比依次为0:1，1:9，2:8，3:7，4:6，5:5，6:4，7:3，8:2，9:1，1:0。
优选地，步骤(3)中所述梯度洗脱分离III的过程包括：将所述组分Fr.7.5过硅胶柱，用洗脱剂III进行梯度洗脱得到所述组分Fr.7.5.1-Fr.7.5.Q；
优选地，所述洗脱剂III为石油醚-乙酸乙酯溶液。
优选地，所述梯度洗脱中石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，0:1。
优选地，所述凝胶柱的洗脱液为甲醇。
优选地，所述半制备高效液相分离的流动相为乙腈-水溶液，所述流动相的流速为2-4mL/min。
本发明第三方面提供上述的金丝皇菊的提取单体皇菊素B、上述的提取方法得到的金丝皇菊的提取单体皇菊素B在制备抗氧化药物中的应用。
通过上述技术方案，本发明的有益效果为：本发明采用多次硅胶柱梯度洗脱和半制备高效液相分离技术，从金丝皇菊花中分离、纯化得到一种新的单体化合物——皇菊素B，并利用现代波谱方法确定皇菊素B的结构，鉴定为1'-O-苯乙基-4'-O-E-咖啡酰基-β-D-葡萄糖苷(1'-O-phenethyl-4'-O-E-caffeoyl-β-D-glucopyranoside)；经ABTS+自由基清除活性筛选，发现皇菊素B具有良好的抗氧化能力，可以用于制备抗氧化的药物，还可以用于制备抗氧化、抗衰老的化妆品，因此，其具有良好的应用前景。
有关本发明的其他优点以及优选实施方式的技术效果，将在下文的具体实施方式中进一步说明。
附图说明
图1是实施例1中组分JS-3-1-30的HR-ESI-MS谱图；
图2是实施例1中组分JS-3-1-30的IR谱图；
图3是实施例1中组分JS-3-1-30的1H-NMR谱图；
图4是实施例1中组分JS-3-1-30的13C-NMR谱图；
图5是实施例1中组分JS-3-1-30的Dept谱图；
图6是实施例1中组分JS-3-1-30的HSQC谱图；
图7是实施例1中组分JS-3-1-30的HMBC谱图；
图8是实施例1中组分JS-3-1-30的1H-1H COSY谱图；
图9是实施例1中D-葡萄糖衍生物的HPLC谱图；
图10是实施例1中L-葡萄糖衍生物的HPLC谱图；
图11是实施例1中组分JS-3-1-30的酸水解衍生物的HPLC谱图。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明第一方面提供了一种金丝皇菊的提取单体皇菊素B，所述皇菊素B的结构式如式(I)所示：
本发明提供的金丝皇菊的提取单体——皇菊素B为浅黄色固体，薄层色谱(TLC)在254nm紫外下有荧光；高分辨电喷雾质谱(HR-ESI-MS)：m/z 469.1481[M+Na]+(计算值C23H26O9Na，469.1475)，确定其分子式为C23H26O9，不饱和度为11；红外谱图(IR谱图)显示该化合物含有羟基(3363cm-1)，烯烃(1680cm-1)和芳香烃(701cm-1)等基团。
皇菊素B的核磁共振谱图特征为：
1H-NMR(600MHz，CD3OD)：δH 7.59(1H，d，J＝15.6Hz，H-7”)，7.27(4H，m，H-2，3，56)，7.18(1H，m，H-4)，7.05(1H，d，J＝2.4Hz，H-2”)，6.96(1H，dd，J＝7.8，2.4Hz，H-6”)，6.78(1H，d，J＝7.8Hz，H-5”)，6.30(1H，d，J＝16.2Hz，H-8”)，4.85(1H，m，H-4')，4.38(1H，d，J＝7.8Hz，H-1')，4.12(1H，m，H-8a)，3.79(1H，m，H-8b)，3.64(1H，m，H-3')，3.63(1H，m，H-6'a)，3.55(1H，m，H-6'b)，3.52(1H，m，H-5')，3.31(1H，m，H-2')，2.96(2H，m，H-7)。
13C-NMR(150MHz，CD3OD):δC 168.6(C-9”)，149.7(C-4”)，147.6(C-7”)，146.9(C-3”)，140.0(C-1)，130.0(C-3，5)，129.4(C-2，6)，127.7(C-1”)，127.2(C-4)，123.1(C-6”)，116.5(C-5”)，115.2(C-2”)，114.7(C-8”)，104.4(C-1')，76.2(C-5')，75.8(C-3')，75.3C-2')，71.8(C-8)，72.5(C-4')，62.5(C-6')，37.2(C-7)。
本发明第二方面提供一种金丝皇菊的提取单体皇菊素B的提取方法，包括以下步骤：
(1)将金丝皇菊花与提取溶剂I混合进行提取得到提取液，将所述提取液浓缩后得到提取浸膏；
(2)将所述提取浸膏依次经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后进行浓缩得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏；
(3)将所述乙酸乙酯浸膏进行梯度洗脱分离I得到组分Fr.1-Fr.M，将所述组分Fr.7进行梯度洗脱分离II得到组分Fr.7.1-Fr.7.N，将所述组分Fr.7.5进行梯度洗脱分离III得到组分Fr.7.5.1-Fr.7.5.Q，将所述组分Fr.7.5.4过凝胶得到组分Fr.7.5.4.1-Fr.7.5.4.P，将所述组分Fr.7.5.4.4过半制备高效液相分离得到如式(I)所示的皇菊素B；
其中，M≥11，N≥8，Q≥8，P≥9，
根据本发明，优选地，步骤(1)中所述金丝皇菊花与提取溶剂I混合的过程包括：将所述金丝皇菊花经干燥、粉碎处理后，与所述提取溶剂I混合。本发明中金丝皇菊花指的是菊科菊属菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)——金丝皇菊的花朵部分，其具体的干燥、粉碎可以采用本领域内常规的干燥和粉碎的方式，例如干燥可以采用烘干、晒干或者真空干燥等方式，粉碎可以采用粉碎机、研磨等方式后经过筛得到。
根据本发明，步骤(1)和步骤(2)中浓缩的方式均可以采用减压蒸馏的方式，也可以采用其他常规的浓缩方式。
根据本发明，提取溶剂I可以采用低级脂肪醇或者低级脂肪醇的水溶液，其中，低级脂肪醇可以是甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇等。为了提高皇菊素B从金丝皇菊花中溶出与提取的效果，优选地，步骤(1)中所述提取溶剂I为乙醇-水溶液。进一步优选地，所述提取溶剂I中乙醇与水的体积比为10-20：1。
根据本发明，对金丝皇菊花进行提取的次数、提取溶剂的用量和时间没有特殊的限定，能够将包括皇菊素B在内的物质进行有效提取即可。优选地，所述提取的次数为2-3次，每次所述提取的过程中所述提取溶剂I与所述金丝皇菊花(干重)的质量比为3-8：1、时间为4-6天。在进行多次提取时，将每次获得的提取液合并后，进行浓缩得到提取浸膏。
根据本发明，在提取溶剂I对金丝皇菊花进行提取后，通过固液分离的方式获得提取液，例如采用过滤、离心的方式。
根据本发明，步骤(2)中提取浸膏在利用石油醚进行萃取前，与适量水混合进行悬浮，以提高石油醚、乙酸乙酯和正丁醇的萃取效率。优选地，步骤(2)中所述石油醚、所述乙酸乙酯和所述正丁醇各自与所述提取浸膏的质量比为3-8：1。
根据本发明，优选地，步骤(3)中所述梯度洗脱分离I的过程包括：将所述乙酸乙酯浸膏装样硅胶柱，然后用洗脱剂I进行梯度洗脱，再经点板合并得到所述组分Fr.1-Fr.M。本发明中，硅胶柱选用本领域内常规的硅胶柱，可以商购或者自行制备获得。
根据本发明，优选地，所述洗脱剂I为二氯甲烷-甲醇溶液；
根据本发明，优选地，所述梯度洗脱中二氯甲烷与甲醇的体积比依次为100:1，50:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1，0:1。
根据本发明，优选地，步骤(3)中所述梯度洗脱分离II的过程包括：将所述组分Fr.7过反相柱，用洗脱剂II进行梯度洗脱，再经点板合并得到所述组分Fr.7.1-Fr.7.N。本发明中，反相柱选用本领域内常规的反相柱，可以商购或者自行制备获得。
根据本发明，优选地，所述洗脱剂II为甲醇-水溶液。
根据本发明，优选地，所述梯度洗脱中甲醇与水的体积比依次为0:1，1:9，2:8，3:7，4:6，5:5，6:4，7:3，8:2，9:1，1:0。
根据本发明，优选地，步骤(3)中所述梯度洗脱分离III的过程包括：将所述组分Fr.7.5过硅胶柱，用洗脱剂III进行梯度洗脱得到所述组分Fr.7.5.1-Fr.7.5.Q。本发明中，硅胶柱选用本领域内常规的硅胶柱，可以商购或者自行制备获得。
根据本发明，优选地，所述洗脱剂III为石油醚-乙酸乙酯溶液。
根据本发明，优选地，所述梯度洗脱中石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，0:1。
根据本发明，凝胶柱可以采用Sephadex LH-20，优选地，所述凝胶柱的洗脱液为甲醇。
根据本发明，半制备高效液相分离可以采用本领域内常规的方法和仪器设备进行；优选地，所述半制备高效液相分离的流动相为乙腈-水溶液，所述流动相的流速为2-4mL/min。流动相中乙腈与水的体积比可以根据实际分离的效果进行调节；示例性地，流动相中乙腈与水的体积比为28:72。
根据本发明一种特别优选的实施方式，金丝皇菊的提取单体皇菊素B的提取方法，包括以下步骤：
(1)将金丝皇菊花经干燥、粉碎后，与乙醇-水溶液(乙醇与水的体积比为19：1)混合进行2-3次提取，每次提取的过程中提取溶剂I与金丝皇菊花的质量比为3-8：1、时间为4-6天，经固液分离后得到提取液，将提取液浓缩后得到提取浸膏；
(2)将步骤(1)得到的提取浸膏加入适量水悬浮后，依次经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后进行浓缩得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏，其中，石油醚、乙酸乙酯和正丁醇各自与提取浸膏的质量比为3-8：1；
(3)将步骤(2)得到的乙酸乙酯浸膏装样硅胶柱，然后以二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂I进行梯度洗脱(二氯甲烷与甲醇的体积比依次为100:1，50:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1，0:1)，再经点板合并得到所述组分Fr.1-Fr.M；将组分Fr.7过反相柱，以甲醇-水溶液为洗脱剂II进行梯度洗脱(甲醇与水的体积比依次为0:1，1:9，2:8，3:7，4:6，5:5，6:4，7:3，8:2，9:1，1:0)，再经点板合并得到所述组分Fr.7.1-Fr.7.N；将组分Fr.7.5过硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯溶液为洗脱剂III进行梯度洗脱(石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，0:1)得到组分Fr.7.5.1-Fr.7.5.Q，然后将组分Fr.7.5.4过Sephadex LH-20(100％甲醇为洗脱液)，再经点板合并得到组分Fr.7.5.4.1-7.5.4.P；将组分Fr.7.5.4.4过用半制备高效液相(乙腈与水按体积比为28:72混合作为流动相，流速为2-4mL/min)分离得到皇菊素B。
基于上述提供的金丝皇菊的提取单体皇菊素B，经验证，其具有良好的抗氧化能力，本发明第三方面提供了上述的金丝皇菊的提取单体皇菊素B、上述的提取方法得到的金丝皇菊的提取单体皇菊素B在制备抗氧化药物中的应用。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
以下实施例中，核磁共振分析采用Bruker AV-600核磁共振光谱仪，紫外光谱分析采用Hewlett-Packard 8452AUV-vis紫外光谱仪，红外光谱分析采用Bruker Tensor 27和MIRacleATR FT-IR红外分析仪，高效液相色谱分析采用美国Agilent 1260高效液相色谱仪，半制备高效液相分离采用美国Agilent1260，Agilent ZORBAX XDB C18色谱柱(9.4×250mm，5μm)；金丝皇菊花采自湖南省永州市宁远县，经湖南中医药大学药学院王炜教授鉴定为菊科菊属菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)，D-葡萄糖和L-葡萄糖采购自默克公司，ABTS试剂盒采购自索莱宝(Solarbio)公司，点板采用青岛海洋化工厂生产的GF254薄层板，规格为20×20cm；在无特别说明的情况下，其他试剂和原料均为常规的市售品。
以下实施例中，在无特别说明的情况下，室温为25±5℃。
实施例1
(1)取9.9kg金丝皇菊花，经干燥、粉碎后，用乙醇-水溶液(乙醇与水的体积比为19：1)浸提2次，每次浸提的过程中乙醇-水溶与金丝皇菊花干重的质量比为5：1、浸提时间为5天，两次浸提后分别进行过滤，合并滤液得到提取液，将提取液进行减压浓缩得到提取浸膏；
(2)将步骤(1)得到的提取浸膏加入适量水悬浮，依次用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取得到各部位提取物，再分别进行浓缩得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏，其中，石油醚、乙酸乙酯和正丁醇各自与提取浸膏的质量比为5：1；
(3)将步骤(2)得到的乙酸乙酯浸膏(475.87g)装样硅胶柱，然后以二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂I进行梯度洗脱(洗脱剂I中二氯甲烷与甲醇的体积比依次为100:1，50:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1，0:1)，再经点板合并得到11个组分，分别为组分Fr.1-Fr.11；
将组分Fr.7(30.46g)过反相柱，以甲醇-水溶液为洗脱剂II进行梯度洗脱(洗脱剂II中甲醇与水的体积比依次为0:1，1:9，2:8，3:7，4:6，5:5，6:4，7:3，8:2，9:1，1:0)，再经点板合并得到8个组分，分别为组分Fr.7.1-Fr.7.8；
将组分Fr.7.5(1.73g)过硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯溶液为洗脱剂III进行梯度洗脱(洗脱剂III中石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，0:1)，经点板合并得到组分Fr.7.5.1-Fr.7.5.8；然后将组分Fr.7.5.4(430.4mg)过Sephadex LH-20凝胶柱(100％甲醇为洗脱液)，再经点板合并得到组分Fr.7.5.4.1-7.5.4.9；组分Fr.7.5.4.4(15.6mg)用半制备高效液相(乙腈与水按体积比为28:72混合作为流动相，流速为3mL/min)分离得到第一个化合物JS-3-1-30(5.1mg，tR＝22.3min；CH3CN/H2O，28:72)。
化合物JS-3-1-30为浅黄色固体；薄层色谱(TLC)在254nm紫外下有荧光；组分JS-3-1-30的高分辨电喷雾质谱(HR-ESI-MS)分析结果见图1，HR-ESI-MS谱图显示m/z469.1481[M+Na]+(计算值C23H26O9Na，469.1475)，确定其分子式为C23H26O9，不饱和度为11；红外(IR)分析结果见图2，IR谱图显示该化合物含有羟基(3363cm-1)，烯烃(1680cm-1)和芳香烃(701cm-1)等基团。
化合物JS-3-1-30的核磁共振(NMR)分析结果见图3-图8，NMR谱图显示：
1H-NMR(600MHz，CD3OD)：δH 7.59(1H，d，J＝15.6Hz，H-7”)，7.27(4H，m，H-2，3，56)，7.18(1H，m，H-4)，7.05(1H，d，J＝2.4Hz，H-2”)，6.96(1H，dd，J＝7.8，2.4Hz，H-6”)，6.78(1H，d，J＝7.8Hz，H-5”)，6.30(1H，d，J＝16.2Hz，H-8”)，4.85(1H，m，H-4')，4.38(1H，d，J＝7.8Hz，H-1')，4.12(1H，m，H-8a)，3.79(1H，m，H-8b)，3.64(1H，m，H-3')，3.63(1H，m，H-6'a)，3.55(1H，m，H-6'b)，3.52(1H，m，H-5')，3.31(1H，m，H-2')，2.96(2H，m，H-7)。
13C-NMR(150MHz，CD3OD):δC 168.6(C-9”)，149.7(C-4”)，147.6(C-7”)，146.9(C-3”)，140.0(C-1)，130.0(C-3，5)，129.4(C-2，6)，127.7(C-1”)，127.2(C-4)，123.1(C-6”)，116.5(C-5”)，115.2(C-2”)，114.7(C-8”)，104.4(C-1')，76.2(C-5')，75.8(C-3')，75.3C-2')，71.8(C-8)，72.5(C-4')，62.5(C-6')，37.2(C-7)。
在1H-NMR谱图中，推测存在1个苯乙基基团[δH 7.27(4H，m)，7.18(1H，m)，4.12(1H，m)，3.79(1H，m)，2.96(2H，m)]；1个咖啡酰基基团[δH 7.05(1H，d，J＝2.4Hz)，6.96(1H，dd，J＝7.8，2.4Hz)，6.78(1H，d，J＝7.8Hz)，δH 7.59(1H，d，J＝16.2Hz)and 6.30(1H，d，J＝16.2Hz)]；1个葡萄糖苷基团[δH 4.85(1H，overlapped)，4.38(1H，d，J＝7.8Hz)，3.64(1H，m)，3.63(1H，m)，3.55(1H，m)，3.52(1H，m)and 3.31(1H，m)]。
在13C NMR谱中显示有23个碳信号，推测存在1个酯基(δc 168.6)，14个芳香碳(2个苯基和1个烯烃基团)，5个连氧次甲基碳(δC 104.4，76.2，75.8，75.2和72.5)和2个连氧亚甲基碳(δC 71.8和62.5)，具体数据见表1。
表1
将化合物JS-3-1-30进行酸水解及高效液相色谱法分析：
a、取1.0mg组分JS-3-1-30，加入10mL浓度为2mol/L的盐酸溶液，在80℃水浴加热回流5h，然后将回流得到的溶液减压浓缩至干得到反应产物；
b、将反应产物加入适量的水溶解，用乙酸乙酯萃取后得到水层溶液，将水层溶液减压浓缩至干后加入无水吡啶1mL溶解，再加入2mg的L-半胱氨酸甲酯，然后置于60℃烘箱内反应1h后，再加入2mg异硫氰酸酯盐，继续置于60℃烘箱内反应1h，得到反应液；
c、将反应液取出放冷，过0.22μm微孔滤膜，进高效液相色谱(HPLC)进行分析，HPLC色谱条件为：C18反相色谱柱，流动相：25％乙腈-0.05％乙酸水，检测波长λ＝250nm，流速v＝0.8mL/min，进样量10μL；
取D-葡萄糖和L-葡萄糖作为标准品，分别按上述步骤a-步骤c的衍生化方法进行处理，并进行HPLC分析。
化合物JS-3-1-30、D-葡萄糖和L-葡萄糖的衍生物HPLC谱图如图9-图11所示，D-葡萄糖衍生物的出峰时间为17.0min，L-葡萄糖衍生物的出峰时间为15.6min，组分JS-3-1-30的酸水解衍生物的出峰时间为17.27min，与D-葡萄糖衍生物出峰时间相似，故确定该化合物的糖苷为D-葡萄糖苷(tR＝17.27min)。
根据以上HR-ESI-MS谱图、IR谱图、NMR谱图以及HPLC谱图的数据，通过分子量和HMBC谱中H-2，6(δH 7.27)和C-4(δC 127.2)远程相关性，推测组分JS-3-1-30的结构为1'-O-苯乙基-4'-O-E-咖啡酰基-β-D-葡萄糖苷(1'-O-phenethyl-4'-O-E-caffeoyl-β-D-glucopyranoside)，结构式如式(I)所示，并命名为皇菊素B；经Scifinder检索，确定该化合物为新化合物，
化合物JS-3-1-30的1H-1H COSY，HMBC相关性如式(II)所示，
实施例2化合物JS-3-1-30的ABTS+自由基清除活性筛选
采用ABTS+自由基清除法(ABTS试剂盒)评价金丝皇菊花中分离得到的化合物JS-3-1-30的抗氧化能力。
将化合物JS-3-1-30配制成浓度分别为1.0、0.5、0.2、0.1、0.05mmol/L的溶液，阳性对照药维生素C(Vc)配制成浓度分别为1.0、0.8、0.6、0.4、0.2mmol/L的溶液，各取10μL分别独立地添加到96孔板中，再分别取190μL的ABTS+溶液添加到96孔板的各孔中，混匀后在室温下避光静置6min，然后检测96孔板的各孔在405nm处的吸光度(A)，计算自由基清除率和IC50值，结果见表2，
自由基清除率＝[A空白-(A测定-A对照)]/A空白；
表2的数据显示，组分JS-3-1-30具有ABTS+自由基清除活性，其IC50为15.32±1.80μM/L，强于阳性对照药Vc的IC50(22.00±1.29μM/L)。因此，化合物JS-3-1-30具有良好的抗氧化能力，可以用于制备抗氧化的药物，还可以用于制备抗氧化、抗衰老的化妆品。
表2
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种金丝皇菊的提取单体皇菊素B，其特征在于，所述皇菊素B的结构式如式（I）所示：
式（I）。
2.一种金丝皇菊的提取单体皇菊素B的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将金丝皇菊花与提取溶剂I混合进行提取得到提取液，将所述提取液浓缩后得到提取浸膏，所述提取溶剂I为乙醇-水溶液，其中乙醇与水的体积比为10-20：1；
（2）将所述提取浸膏依次经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后进行浓缩得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏；
（3）将所述乙酸乙酯浸膏进行梯度洗脱分离I得到组分Fr.1-Fr.11，将所述组分Fr.7进行梯度洗脱分离II得到组分Fr.7.1-Fr.7.8，将所述组分Fr.7.5进行梯度洗脱分离III得到组分Fr.7.5.1-Fr.7.5.8，将所述组分Fr.7.5.4过凝胶柱得到组分Fr.7.5.4.1-Fr.7.5.4.9，将所述组分Fr.7.5.4.4过半制备高效液相分离得到如式（I）所示的皇菊素B；
其中，所述梯度洗脱分离I的过程包括：将所述乙酸乙酯浸膏装样硅胶柱，然后用洗脱剂I进行梯度洗脱，再经点板合并得到所述组分Fr.1-Fr.11，所述洗脱剂I为二氯甲烷-甲醇溶液，所述用洗脱剂I进行梯度洗脱中二氯甲烷与甲醇的体积比依次为100:1，50:1，20:1，10: 1，5:1，2:1，1:1，0:1；所述梯度洗脱分离II的过程包括：将所述组分Fr.7过反相柱，用洗脱剂II进行梯度洗脱，再经点板合并得到所述组分Fr.7.1-Fr.7.8，所述洗脱剂II为甲醇-水溶液，所述用洗脱剂II进行梯度洗脱中甲醇与水的体积比依次为0:1，1:9，2:8，3:7，4:6，5:5，6:4，7:3，8:2，9:1，1:0；所述梯度洗脱分离III的过程包括：将所述组分Fr.7.5过硅胶柱，用洗脱剂III进行梯度洗脱得到所述组分Fr.7.5.1-Fr.7.5.8，所述洗脱剂III为石油醚-乙酸乙酯溶液，所述用洗脱剂III进行梯度洗脱中石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，0:1；所述凝胶柱的洗脱液为甲醇，所述半制备高效液相分离的流动相为乙腈-水溶液；
式（I）。
3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤（1）中所述金丝皇菊花与提取溶剂I混合的过程包括：将所述金丝皇菊花经干燥、粉碎处理后，与所述提取溶剂I混合。
4.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤（1）中所述提取的次数为2-3次，每次所述提取的过程中所述提取溶剂I与所述金丝皇菊花的质量比为3-8：1、提取时间为4-6天。
5.根据权利要求2至4中任意一项所述的提取方法，其特征在于，步骤（2）中所述石油醚、所述乙酸乙酯和所述正丁醇各自与所述提取浸膏的质量比为3-8：1。
6.根据权利要求2至4中任意一项所述的提取方法，其特征在于，所述流动相的流速为2-4mL/min。
7.权利要求1所述的金丝皇菊的提取单体皇菊素B在制备抗氧化药物中的应用。
CN202210286891.6A 2022-03-22 2022-03-22 金丝皇菊的提取单体皇菊素b及其提取方法和应用 Active CN114736251B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210286891.6A CN114736251B (zh) 2022-03-22 2022-03-22 金丝皇菊的提取单体皇菊素b及其提取方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210286891.6A CN114736251B (zh) 2022-03-22 2022-03-22 金丝皇菊的提取单体皇菊素b及其提取方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114736251A CN114736251A (zh) 2022-07-12
CN114736251B true CN114736251B (zh) 2024-04-19

Family

ID=82277848

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210286891.6A Active CN114736251B (zh) 2022-03-22 2022-03-22 金丝皇菊的提取单体皇菊素b及其提取方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114736251B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108484695A (zh) * 2018-04-08 2018-09-04 湖南中医药大学 一种从密蒙花中同时提取苯乙醇苷和黄酮类化合物的方法
CN111574573A (zh) * 2020-05-21 2020-08-25 深圳市人民医院 十五种苯乙醇苷类化合物及其分离纯化方法与应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108484695A (zh) * 2018-04-08 2018-09-04 湖南中医药大学 一种从密蒙花中同时提取苯乙醇苷和黄酮类化合物的方法
CN111574573A (zh) * 2020-05-21 2020-08-25 深圳市人民医院 十五种苯乙醇苷类化合物及其分离纯化方法与应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Identification of antioxidant constituents of the aerial part of Plantago asiatica using LC–MS/MS coupled DPPH assay;Jong Hoon Ahn等;Phytochemistry Letters;第26卷;20-24 *
Radical Scavenger Activity of Phenylethanoid Glycosides in FMLP Stimulated Human Polymorphonuclear Leukocytes: Structure-Activity Relationships;Jorg Heilmann等;Planta Medica;第66卷;746-748 *
Synthetic phenylethanoid glycoside derivatives as potent neuroprotective agents;Ying-Guo Liu等;European Journal of Medicinal Chemistry;第95卷;313-323 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114736251A (zh) 2022-07-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106916193B (zh) 一种从紫荆叶中提取阿福豆苷的方法
CN109942649B (zh) 一种吲哚苷类化合物及其提取分离方法和应用
CN116606273B (zh) 具有美白作用的黄花夹竹桃黄酮的制备方法
CN110343045B (zh) 芳基四氢萘型木脂素类化合物及制备和应用
CN115850218B (zh) 一种乌药烷型倍半萜二聚体及其制备方法与应用
CN114736251B (zh) 金丝皇菊的提取单体皇菊素b及其提取方法和应用
CN113666894B (zh) 一种从老鹰茶中提取分离呋喃酮类化合物的方法及其应用
CN114507264B (zh) 金丝皇菊的提取单体皇菊素a及其提取方法和应用
CN112194704B (zh) 一种甾体皂苷类化合物及其制备方法和应用
CN111217873B (zh) 一种倍半萜苷单体化合物及其制备方法与应用
CN111620917B (zh) 一种异牡荆素-2″-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、其制备方法及应用
CN114933617A (zh) 二苯甲酮二聚体化合物的制备方法
CN114835668A (zh) 青龙衣中一种环醚型二芳基庚烷的制备方法和应用
CN113698446A (zh) 马齿苋中一种生物碱类化合物及其提取分离方法
CN115925760A (zh) 金丝皇菊中提取的咖啡酰基糖苷类化合物及其提取方法和应用
CN114507264A (zh) 金丝皇菊的提取单体皇菊素a及其提取方法和应用
CN114177164B (zh) 白花败酱蒽醇i的制备方法及其应用
CN113912657B (zh) 马齿苋中三种吲哚类生物碱及其提取分离方法与用途
CN115304651B (zh) 一种从泡桐叶中提取毛蕊花糖苷的方法
CN110251552B (zh) 一种龙脷叶总黄酮的制备方法
CN111072738B (zh) 一种从林檎中同时分离纯化得到白杨素-5-葡萄糖苷和白杨素的方法
CN111484411B (zh) 艾叶抗炎有效成分的提取方法和应用
CN113527326A (zh) 一种鞣花单宁类化合物castacrenin D的制备方法及应用
CN107056857B (zh) 一种黄酮类化合物及其制备方法与应用
CN118745138A (zh) 马齿苋中一种酰胺羧酸化合物及其提取分离方法与用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant