CN113980954A - 一种病毒rna保护剂及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种病毒RNA保护剂及其制备方法与应用，属于RNA保护剂制备技术领域。所述病毒RNA保护剂包括以下组分：异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、β‑巯基乙醇、聚乙二醇200、曲拉通X‑100和柠檬酸钠。该保护剂可以对采集的体液病毒RNA样本进行良好的保护，尤其在夏季高温(如35℃)下能够在较长时间内保持病毒RNA的完整性，因此具有良好的实际应用之价值。
Description
技术领域
本发明属于RNA保护剂制备技术领域，具体涉及一种病毒RNA保护剂及其制备方法与应用。
背景技术
本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
病毒(Virus)是由一种核酸分子(DNA或RNA)与蛋白质(Protein)构成的非细胞形态。病毒体积非常微小，结构及其简单，但具有高度的寄生性，完全依赖宿主细胞的能量和代谢系统。根据遗传物质病毒可分为DNA病毒、RNA病毒、蛋白质病毒(如:朊病毒不含核酸，仅有蛋白质构成)。自然界中存在很多RNA病毒，比如猪蓝耳病毒(PRRSV)、猪水疱疹病毒(SVDV)、SARS病毒、新型冠状病毒(2019-nCoV)等。
高质量、完整性的病毒RNA样本是疾病诊断与防治的重要前提，然而细胞内源性RNA酶和环境中外源性RNA酶的广泛存在使得待测样本中的RNA在存储运、输过程中很容易降解，从而导致检测不到RNA，造成检测结果的“假阴性”。尤其是在夏季高温下，待测病毒RNA样品一旦从生物体中分离很快降解。因此，如何在运输和储存过程中保护病毒样本RNA不降解，成为样本采集后重点关注的问题。
常规条件下，取样后立刻将样品进行液氮保存才能确保RNA结构的完整性，用于下一步实验研究。然而，在实际采样操作中，尤其是流行病学大规模调查时，样本的采集并不是在实验室中进行，很难做到所有样品即刻全部能够液氮保存。因此，提供一种室温甚至夏季高温下保存RNA病毒的保护剂，至关重要。
发明内容
针对现有技术中的不足，本发明的目的在于提供及一种病毒RNA保护剂及其制备方法与应用。该保护剂可以对采集的体液病毒RNA样本进行良好的保护，尤其在夏季高温环境下能够在较长时间内保持病毒RNA的完整性，因此具有良好的实际应用之价值。
本发明的第一个方面，提供病毒RNA保护剂，包括以下组分：异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、β-巯基乙醇、聚乙二醇200(PEG 200)、曲拉通100(Triton X-100)和柠檬酸钠。
病毒RNA保护剂的pH值为7-8；进一步的，病毒RNA保护剂的pH值为7.5。
异硫氰酸胍和β-巯基乙醇共同作用可以抑制RNase的活性。
异硫氰酸胍和十二烷基肌氨酸钠共同作用可以使蛋白质变性，释放RNA。
柠檬酸钠：它可以控制反应体系的离子强度，同时还有一定的缓冲作用，保证体系PH的相对稳定状态；另外在采集血液样本时还可以防止血液凝固。
聚乙二醇200作为粘度调节剂，可以降低离心剪切力对RNA造成的破坏，保证RNA的完整性。同时具有沉淀病毒颗粒剂、沉淀核酸的作用，还可以抑制微生物的生长。
曲拉通X-100是一种非离子型表面活性剂，即可以溶解细胞膜蛋白有利于蛋白质与RNA的分离，还可以很好地对核酸特别是单链的RNA起到保护作用。
上述保护剂各组成成分协同配合，从而使得最终制备得到的病毒RNA保护剂对RNA样本具有良好的保护作用，特别是适于在高温天气下(35℃及以上)使用，能够有效防止病毒RNA样本的降解。
本发明的第二个方面，提供病毒RNA保护剂的制备方法，所述制备方法包括：
将组分异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、聚乙二醇200、曲拉通X-100和柠檬酸钠溶解于水中，定容后按比例添加β-巯基乙醇即得。
其中，所述水为灭菌DEPC水。
本发明的第三个方面，提供上述病毒RNA保护剂在体外核酸样本保存中的应用。
本发明制得的核酸样本保存液适用于采样后咽拭子、鼻拭子或特定部位组织样本的保存，储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验，适用于各类基因检测及相关研究。所述核酸包括核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。特别适合于病毒(如RNA病毒)核酸样本的保存。
因此，更具体的，所述核酸样本包括但不限于口腔液、鼻腔液、血液和精液等。经试验证明，与目前商用保护剂相比，其可以在35℃的高温下保持病毒RNA在72小时以内无明显变化，因此特别适于高温下(35℃以上)保存病毒RNA的完整性。
上述一个或多个技术方案的有益技术效果：
上述技术方案提供病毒RNA保护剂能够有效保证样本中的病毒核酸完整性，特别适于在高温天气(35℃)下对样本的运输和保存，特别适于条件相对恶劣的环境下使用，因此具有良好的实际应用之价值。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为实施例1中模拟夏季高温35℃存放条件下，口腔液样品中病毒含量动态变化图；
图2为实施例2中模拟夏季高温35℃存放条件下，口腔液样品中病毒含量动态变化图；
图3为实施例3中模拟夏季高温35℃存放条件下，口腔液样品中病毒含量动态变化图；
图4为实施例4中模拟夏季高温35℃存放条件下，精液样品中病毒含量动态变化图；
图5为实施例5中模拟夏季高温35℃存放条件下，血液样品中病毒含量动态变化图；
图6为对比例1中，模拟夏季高温35℃下，与实施例3相比去掉异硫氰酸胍后口腔液样品中病毒含量动态变化图；
图7为对比例1中，模拟夏季高温35℃下，与实施例3相比去掉PET 200后口腔液样品中病毒含量动态变化图；
图8为对比例1中，模拟夏季高温35℃下，与实施例3相比去掉β-巯基乙醇后口腔液样品中病毒含量动态变化图；
图9为对比例1中，模拟夏季高温35℃下，与实施例3相比去掉曲拉通X-100后口腔液样品中病毒含量动态变化图；
图10为对比例1中，模拟夏季高温35℃下，与实施例3相比去掉十二烷基肌氨酸钠后口腔液样品中病毒含量动态变化图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
现结合具体实例对本发明作进一步的说明，以下实例仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或按照试剂公司所推荐的条件；下述实施例中所用的试剂、耗材等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
如前所述，常规条件下，取样后立刻将样品进行液氮保存才能确保RNA结构的完整性，用于下一步实验研究。然而，在实际采样操作中，尤其是流行病学大规模调查时，样本的采集并不是在实验室中进行，很难做到所有样品即刻全部能够液氮保存。因此，提供一种室温甚至夏季高温下保存RNA病毒的保护剂，至关重要。
有鉴于此，本发明的一个典型具体实施方式中，提供一种病毒RNA保护剂，包括以下组分：异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、β-巯基乙醇、聚乙二醇200(PEG 200)、曲拉通100(Triton X-100)和柠檬酸钠。
本发明的又一具体实施方式中，所述病毒RNA保护剂由以下浓度的组分组成：
异硫氰酸胍300-450g/L、十二烷基肌氨酸钠5-15g/L、β-巯基乙醇6-7ml/L、聚乙二醇200 90-100ml/L、曲拉通X-100 10-20ml/L和柠檬酸钠7-8g/L。
进一步的，所述体液病毒RNA保护剂中，各个组分的浓度为：硫氰酸胍400-450g/L、十二烷基肌氨酸钠5-7g/L、β-巯基乙醇6.5-7ml/L、聚乙二醇20097-100ml/L、曲拉通X-10010-13ml/L和柠檬酸钠7-7.5g/L。
进一步的，所述体液病毒RNA保护剂中，各个组分的浓度为：硫氰酸胍450g/L、十二烷基肌氨酸钠5g/L、β-巯基乙醇7ml/L、聚乙二醇200 100ml/L、曲拉通X-100 10ml/L和柠檬酸钠7.35g/L。
病毒RNA保护剂的pH值为7-8；进一步的，病毒RNA保护剂的pH值为7.5。
异硫氰酸胍和β-巯基乙醇共同作用可以抑制RNase的活性。
异硫氰酸胍和十二烷基肌氨酸钠共同作用可以使蛋白质变性，释放RNA。
柠檬酸钠：它可以控制反应体系的离子强度，同时还有一定的缓冲作用，保证体系PH的相对稳定状态；另外在采集血液样本时还可以防止血液凝固。
聚乙二醇200作为粘度调节剂，可以降低离心剪切力对RNA造成的破坏，保证RNA的完整性。同时具有沉淀病毒颗粒剂、沉淀核酸的作用，还可以抑制微生物的生长。
曲拉通X-100是一种非离子型表面活性剂，即可以溶解细胞膜蛋白有利于蛋白质与RNA的分离，还可以很好地对核酸特别是单链的RNA起到保护作用。
上述保护剂各组成成分协同配合，从而使得最终制备得到的病毒RNA保护剂对RNA样本具有良好的保护作用，特别是适于在高温天气下(35℃及以上)能够有效防止RNA样本的降解。
本发明的第二个方面，提供病毒RNA保护剂的制备方法，所述制备方法包括：
将组分异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、聚乙二醇200、曲拉通X-100和柠檬酸钠溶解于水中，定容后按比例添加β-巯基乙醇即得。
其中，所述水为灭菌DEPC水。
本发明的第三个方面，提供上述病毒RNA保护剂在体外核酸样本保存中的应用。
本发明制得的核酸样本保存液适用于采样后咽拭子、鼻拭子或特定部位组织样本的保存，储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验，适用于各类基因检测及相关研究。所述核酸包括核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。特别适合于病毒(如RNA病毒)核酸样本的保存。
因此，更具体的，所述样本包括但不限于口腔液、鼻腔液、血液和精液等。经试验证明，与目前商用保护剂相比，其可以在35℃的高温下保持病毒RNA在72小时以内无明显变化，因此特别适于高温下(35℃以上)保存病毒RNA的完整性。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中为注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件进行。
实施例1
体液病毒RNA保护剂的制备
本实施例的病毒RNA保护剂配方1包括如下组分和浓度：异硫氰酸胍300g/L、十二烷基肌氨酸钠15g/L、β-巯基乙醇7ml/L、聚乙二醇200 90ml/L、曲拉通X-100 20ml/L和柠檬酸钠8g/L。体系pH值调整至7.5。
本实施例的病毒RNA保护剂的制备方法如下：
(1)在已经过DEPC处理的100mL烧杯中加入已灭菌的DEPC水70mL。
(2)分别取异硫氰酸胍30g、十二烷基肌氨酸钠1.5g、PEG200 9ml、曲拉通X-1002ml和柠檬酸钠0.8g依次加入上述溶液中，待到所有组分溶解后，将溶液pH值调整至7.5。
(3)然后，将溶液转移到100mL容量瓶中，定容至100mL。
(4)最后，在上述溶液中加入β-巯基乙醇0.7ml，得到病毒RNA保护剂。
口腔液样本的采集与保存
口腔液中由于存在口腔上皮细胞和唾液腺来源的白细胞，可以提取RNA样本。但是口腔液成分复杂，含有大量的RNA酶、蛋白等多种有机物。特别是夏季高温下，口腔液样品中的病毒RNA会很快降解。为阐述本发明的病毒RNA保护剂的效果，我们以口腔液病毒RNA为例进行进行样本采集与保存。
将采集口腔液的的专用棉绳套装悬挂于猪栏中，让猪自由咀嚼30min，收集棉绳，挤压至塑料袋中，剪断收集袋一角，将口腔液装至5ml离心管中，备用。
为阐述本发明的体液病毒RNA保护剂的效果，我们以猪蓝耳病毒为例进行验证。为保证每份检测的口腔液样品中有足够的病毒，我们提前准备好活的蓝耳病毒，将活蓝耳病毒与新鲜口腔液混合。
按照2ml保护剂+病毒0.5ml+新鲜口腔液2.5ml比例配置模拟样品，并进行分装。将分装的样品放置于35℃水浴锅中以模拟夏季高温环境，分别在0h、24h、48h、72h各取样一次，每次3个重复进行核酸检测。
为了阐述本发明的体液病毒RNA保护剂的效果，以现有的一种商品用核酸保护剂为对照(CK)，以生理盐水为阴性对照。
具体试验设计如下：
表1.试验设计
猪蓝耳病口腔液病毒RNA的提取及荧光定量PCR鉴定
以猪口腔液蓝耳病毒为例阐述本发明的病毒RNA保护剂的效果。
试验方法：
(1)猪蓝耳病毒口腔液RNA的提取按照杭州博日病毒RNA提取试剂盒说明书进行操作。
(2)本实施例中的PCR鉴定是对上述模拟样品中提取到的病毒RNA进行荧光定量PCR鉴定，分别对模拟样本保存0h、24h、48h和72h后提取到的蓝耳病毒RNA作为模板进行荧光定量PCR扩增，荧光定量PCR鉴定方法根据一步法荧光定量RT-PCR试剂盒(北京全式金生物)进行。
实验结果：模拟夏季高温35℃下本发明体液病毒RNA保护剂(配方1)与商品保护剂对比试验，结果如图1所示：
结果显示：
(1)各组配置完毕后立即检测，各组检测数据无显著差异(P>0.05)。
(2)模拟夏季高温35℃存放24小时、48小时、72小时后检测，本发明病毒RNA保护剂样品中病毒含量均显著高于生理盐水和对照。
(3)0-72小时检测结果显示，本发明病毒RNA保护剂样品中病毒含量在0小时、24小时、48小时无显著变化，在72小时后显著下降。
实施例2
体液病毒RNA保护剂的制备
本实施例的体液病毒RNA保护剂配方2包括如下组分和浓度：异硫氰酸胍400g/L、十二烷基肌氨酸钠10g/L、β-巯基乙醇7ml/L、聚乙二醇200 95ml/L、曲拉通X-100 15ml/L和柠檬酸钠7.5g/L。体系pH值调整至7.5。
本实施例的体液病毒RNA保护剂的制备方法如下：
(1)在已经过DEPC处理的100mL烧杯中加入已灭菌的DEPC水70mL。
(2)分别取异硫氰酸胍40g、十二烷基肌氨酸钠1.0g、PEG 200 9.5ml、曲拉通X-1001.5ml和柠檬酸钠0.75g依次加入上述溶液中，待到所有组分溶解后，将溶液pH值调整至7.5。
(3)然后，将溶液转移到100mL容量瓶中，定容至100mL。
(4)最后，在上述溶液中加入β-巯基乙醇0.7ml，得到病毒RNA保护剂。
口腔液样本的采集与保存：试验设计与方法同实施例1。
猪蓝耳病口腔液病毒RNA的提取及荧光定量PCR鉴定：同实施例1。
实验结果：模拟夏季高温35℃下本发明体液病毒RNA保护剂(配方2)与商品保护剂对比试验，结果如图2所示：
结果显示：
(1)各组配置完毕后立即检测，各组检测数据无显著差异(P>0.05)。
(2)模拟夏季高温35℃存放24小时、48小时、72小时后检测，本发明体液病毒RNA保护剂样品中病毒含量均显著高于对照组和生理盐水组。
(3)0-72小时检测结果显示，本发明病毒RNA保护剂样品中病毒含量在0小时、24小时、48小时无显著变化，在72小时后显著下降。
实施例3
体液病毒RNA保护剂的制备
本实施例的病毒RNA保护剂配方3包括如下组分和浓度：异硫氰酸胍450g/L、十二烷基肌氨酸钠5g/L、β-巯基乙醇7ml/L、聚乙二醇200 100ml/L、曲拉通X-100 10ml/L和柠檬酸钠7.35g/L。体系pH值调整至7.5。
本实施例的体液病毒RNA保护剂的制备方法如下：
(1)在已经过DEPC处理的100mL烧杯中加入已灭菌的DEPC水70mL。
(2)分别取异硫氰酸胍45g、十二烷基肌氨酸钠0.5g、PEG 200 10ml、曲拉通X-1001ml和柠檬酸钠0.735g依次加入上述溶液中，待到所有组分溶解后，将溶液pH值调整至7.5。
(3)然后，将溶液转移到100mL容量瓶中，定容至100mL。
(4)最后，在上述溶液中加入β-巯基乙醇0.7ml，得到病毒RNA保护剂。
口腔液样本的采集与保存：试验设计与方法同实施例1。
猪蓝耳病口腔液病毒RNA的提取及荧光定量PCR鉴定：同实施例1。
实验结果：模拟夏季高温35℃下本发明体液病毒RNA保护剂(配方3)与商品保护剂对比试验，结果如图3所示：
结果显示：
(1)各组配置完毕后立即检测，各组检测数据无显著差异(P>0.05)。
(2)模拟夏季高温35℃存放24小时、48小时、72小时后检测，本发明病毒RNA保护剂样品中病毒含量均显著高于对照组和生理盐水组。
(3)0-72小时检测结果显示，本发明病毒RNA保护剂样品中病毒含量在0小时、24小时、48、72小时无显著变化。
实施例4
体液病毒RNA保护剂的制备：方法同实施例3
公猪精液样本的采集与保存：
人工采集成年公猪精液装至经过DEPC处理的5ml离心管中。为保证每份检测的样品中有足够的病毒，将提前准备好的活蓝耳病毒与新鲜精液混合。按照2ml保护剂+病毒0.5ml+新鲜精液2.5ml比例配置模拟样品，并进行分装。将分装的样品放置于35℃水浴锅中以模拟夏季高温环境，分别在0h、24h、48h、72h各取样一次，每次3个重复进行核酸检测。试验设计同实施例1。
猪蓝耳病精液病毒RNA的提取及荧光定量PCR鉴定：同实施例1。
实验结果：模拟夏季高温35℃下本发明体液病毒RNA保护剂(配方3)与商品保护剂对比试验，结果如图4所示：
结果显示：
(1)各组配置完毕后立即检测，各组检测数据无显著差异(P>0.05)。
(2)模拟夏季高温35℃存放24小时、48小时、72小时后检测，本发明体液病毒RNA保护剂样品中病毒含量均显著高于对照组和生理盐水组。
(3)0-72小时检测结果显示，本发明体液病毒RNA保护剂样品中病毒含量在0小时、24小时、48、72小时无显著变化。
实施例5
体液病毒RNA保护剂的制备：方法同实施例3
血液样本的采集与保存：
使用一次性采血针采取前腔静脉丛血至经过DEPC处理的5ml离心管中。为保证每份检测的样品中有足够的病毒，将提前准备好的活蓝耳病毒与新鲜血液混合。按照2ml保护剂+病毒0.5ml+新鲜血液2.5ml比例配置模拟样品，并进行分装。将分装的样品放置于35℃水浴锅中以模拟夏季高温环境，分别在0h、24h、48h、72h各取样一次，每次3个重复进行核酸检测。试验设计同实施例1.
猪蓝耳病血液病毒RNA的提取及荧光定量PCR鉴定：同实施例1
实验结果：模拟夏季高温35℃下本发明体液病毒RNA保护剂(配方3)与商品保护剂对比试验，结果如图5所示：
结果显示：
(1)各组配置完毕后立即检测，各组检测数据无显著差异(P>0.05)。
(2)模拟夏季高温35℃存放24小时、48小时、72小时后检测，本发明体液病毒RNA保护剂样品中病毒含量均显著高于对照组和生理盐水组。
(3)0-72小时检测结果显示，本发明体液病毒RNA保护剂样品中病毒含量在0小时、24小时、48、72小时无显著变化。
对比例1
体液病毒RNA保护剂的制备：对比例1与实施例3相比，省略异硫氰酸胍，其他组分的浓度相同。
口腔液样本的采集与保存：试验设计与方法同实施例1。
猪蓝耳病口腔液病毒RNA的提取及荧光定量PCR鉴定：同实施例1。
实验结果：模拟夏季高温35℃下，与实施例3相比去掉异硫氰酸胍后口腔液样品中病毒含量对比试验，结果如图6所示：
结果显示：
(1)各组配置完毕后立即检测，各组检测数据无显著差异(P>0.05)。
(2)模拟夏季高温37℃存放24小时、48小时、72小时后检测，与实施例3相比去掉异硫氰酸胍后口腔液样品中病毒含量显著下降(P<0.05)。该结果说明异硫氰酸胍在本发明保护剂中有着重要的作用。
对比例2
体液病毒RNA保护剂的制备：对比例2与实施例3相比，省略PEG 200，其他组分的浓度相同。
口腔液样本的采集与保存：试验设计与方法同实施例1。
猪蓝耳病口腔液病毒RNA的提取及荧光定量PCR鉴定：同实施例1。
实验结果：模拟夏季高温35℃下，与实施例3相比去掉PEG 200后口腔液样品中病毒含量对比试验，结果如图7所示：
结果显示：
(1)各组配置完毕后立即检测，各组检测数据无显著差异(P>0.05)。
(2)模拟夏季高温37℃存放24小时、48小时、72小时后检测，与实施例3相比去掉PEG 200后口腔液样品中病毒含量显著下降(P<0.05)。该结果说明PEG 200在本发明保护剂中有着重要的作用。
对比例3
体液病毒RNA保护剂的制备：对比例3与实施例3相比，省略β-巯基乙醇，其他组分的浓度相同。
口腔液样本的采集与保存：试验设计与方法同实施例1。
猪蓝耳病口腔液病毒RNA的提取及荧光定量PCR鉴定：同实施例1。
实验结果：模拟夏季高温35℃下，与实施例3相比去掉β-巯基乙醇后口腔液样品中病毒含量对比试验，结果如图8所示：
结果显示：
(1)各组配置完毕后立即检测，各组检测数据无显著差异(P>0.05)。
(2)模拟夏季高温37℃存放24小时、48小时、72小时后检测，与实施例3相比去掉β-巯基乙醇后口腔液样品中病毒含量显著下降(P<0.05)。该结果说明β-巯基乙醇在本发明保护剂中有着重要的作用。
对比例4
体液病毒RNA保护剂的制备：
对比例4与实施例3相比，省略曲拉通X-100，其他组分的浓度相同。
口腔液样本的采集与保存：试验设计与方法同实施例1
猪蓝耳病口腔液病毒RNA的提取及荧光定量PCR鉴定：同实施例1。
实验结果：模拟夏季高温35℃下，与实施例3相比去掉曲拉通X-100后口腔液样品中病毒含量对比试验，结果如图9所示：
结果显示：
(1)各组配置完毕后立即检测，各组检测数据无显著差异(P>0.05)。
(2)模拟夏季高温37℃存放24小时、48小时、72小时后检测，与实施例3相比去掉曲拉通X-100后口腔液样品中病毒含量显著下降(P<0.05)。该结果说明曲拉通X-100在本发明保护剂中有着重要的作用。
对比例5
体液病毒RNA保护剂的制备：对比例5与实施例3相比，省略十二烷基肌氨酸钠，其他组分的浓度相同。
口腔液样本的采集与保存：试验设计与方法同实施例1。
猪蓝耳病口腔液病毒RNA的提取及荧光定量PCR鉴定：同实施例1。
实验结果：模拟夏季高温35℃下，与实施例3相比去掉十二烷基肌氨酸钠后口腔液样品中病毒含量对比试验，结果如图10所示：
结果显示：
(1)各组配置完毕后立即检测，各组检测数据无显著差异(P>0.05)。
(2)模拟夏季高温37℃存放24小时、48小时、72小时后检测，与实施例3相比去掉十二烷基肌氨酸钠后口腔液样品中病毒含量显著下降(P<0.05)。该结果说明十二烷基肌氨酸钠在本发明保护剂中有着重要的作用。
本发明未尽事宜为公知技术。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种病毒RNA保护剂，其特征在于，包括以下组分：异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、β-巯基乙醇、聚乙二醇200、曲拉通100和柠檬酸钠。
2.如权利要求1所述的病毒RNA保护剂，其特征在于，所述病毒RNA保护剂由以下浓度的组分组成：
异硫氰酸胍300-450g/L、十二烷基肌氨酸钠5-15g/L、β-巯基乙醇6-7ml/L、聚乙二醇200 90-100ml/L、曲拉通X-100 10-20ml/L和柠檬酸钠7-8g/L。
3.如权利要求2所述的病毒RNA保护剂，其特征在于，所述病毒RNA保护剂由以下浓度的组分组成：硫氰酸胍400-450g/L、十二烷基肌氨酸钠5-7g/L、β-巯基乙醇6.5-7ml/L、聚乙二醇200 97-100ml/L、曲拉通X-100 10-13ml/L和柠檬酸钠7-7.5g/L；
优选的，所述病毒RNA保护剂由以下浓度的组分组成：硫氰酸胍450g/L、十二烷基肌氨酸钠5g/L、β-巯基乙醇7ml/L、聚乙二醇200 100ml/L、曲拉通X-100 10ml/L和柠檬酸钠7.35g/L。
4.如权利要求1-3任一项所述的病毒RNA保护剂，其特征在于，病毒RNA保护剂的pH值为7-8。
5.如权利要求4所述的病毒RNA保护剂，其特征在于，病毒RNA保护剂的pH值为7.5。
6.权利要求1-5任一项所述病毒RNA保护剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
将组分异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、聚乙二醇200、曲拉通X-100和柠檬酸钠溶解于水中，定容后按比例添加β-巯基乙醇即得。
7.如权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述水为灭菌DEPC水。
8.权利要求1-5任一项所述病毒RNA保护剂在体外核酸样本保存中的应用。
9.如权利要求8所述应用，其特征在于，所述核酸样本包括口腔液、鼻腔液、血液和精液。
10.如权利要求8所述应用，其特征在于，所述应用环境为常温或高温，所述高温为35℃及以上。
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