CN113917046A

CN113917046A - 东俄洛紫菀或缘毛紫菀的检测方法

Info

Publication number: CN113917046A
Application number: CN202111397337.7A
Authority: CN
Inventors: 张志锋; 苏学燕
Original assignee: Southwest Minzu University
Current assignee: Southwest Minzu University
Priority date: 2021-11-23
Filing date: 2021-11-23
Publication date: 2022-01-11
Anticipated expiration: 2041-11-23
Also published as: CN113917046B

Abstract

本发明提供了一种采用UPLC对东俄洛紫菀或缘毛紫菀的检测方法。本发明在UPLC中采用特定的色谱条件，可以在东俄洛紫菀或缘毛紫菀中有效分离检测出12个以上的色谱峰，并可以对其中12个色谱峰进行定性和定量检测，为东俄洛紫菀或缘毛紫菀的质量控制提供了有效的方法。

Description

东俄洛紫菀或缘毛紫菀的检测方法

技术领域

本发明涉及对天然植物药物的分析方法。

背景技术

藏紫菀主要以菊科紫菀属的多种植物入药，来源丰富，为典型的多基原藏药材，李彪等研究发现仅青藏甘南地区就分布有菊科药用植物 28 属 70 余种，具有较高的挖掘研究潜力，黎维平等通过对菊科紫菀属植物进行生物学研究后，得出对青藏高原的紫苑属类群开展研究的必要性。紫菀属植物是分类学上公认的“困难类群”，其作为藏紫菀的主要来源也面临着基原混乱的问题，不利于藏紫菀药材总体质量的控制和评价，临床用药的安全和有效得不到保障。

发明内容

基于目前藏紫菀用药的混乱，本发明拟提供一种关于藏紫菀中各品种的检测方法。本发明中主要涉及东俄洛紫菀或缘毛紫菀的检测。

缘毛紫菀（拉丁学名：Aster souliei Franch.）为菊科紫菀属多年生草本植物。根状茎粗壮，木质。茎单生或与莲座状叶丛丛生，直立，高5-45厘米。头状花序在茎端单生，瘦果卵圆形，稍扁，基部稍狭。产于四川、甘肃、云南、西藏。生于高山针林外缘、灌丛及山坡草地。海拔2700-4000米。

东俄洛紫菀（Aster tongolensis Franch.），是菊科紫菀属的植物，是中国的特有植物。主要分布于我国甘肃、四川、云南、青海的一种观赏类菊花，以其清雅的花色和典致的色泽而闻名。该种为多年生草本，头状花序，舌片蓝色或浅红色，瘦果倒卵圆形。除此之外东俄洛紫菀还有温肺下气，祛痰止咳和利尿的药理作用，所以也可以作为药物使用。

95版藏药标准中，藏紫菀仅收载了缘毛紫菀。而本次藏药标准起草中，将东俄洛紫菀也收载其中。但两者是否存在差异，如何对两种药材进行区分，仍然是一个问题。

基于上述问题，本发明提供了东俄洛紫菀或缘毛紫菀的检测方法，包括如下内容：

（1）取待检药材，60~80%乙醇提取，醇提物上大孔树脂，依次用10-20%、60-80%乙醇洗脱，收集60-80%乙醇洗脱液，浓缩干燥得到粗提物；

（2）将粗提物采用UPLC进行检测，色谱条件如下：

色谱柱：C18

流动相：乙腈（A）-0.01~0.5% 甲酸水溶液（B）；梯度洗脱程序为，0～5 min，10%～12% A；5～19 min，12%～16% A；19～26 min，16%～24% A；26～28 min，24%～24% A；28～30min，24%～ 30%A；35～45 min，30%～45% A。

本发明中某些实施方式中，色谱柱尺寸为：2.1×100 mm，1.8 µm。

流动相流速、柱温、进样量等可以按照UPLC的相关规定进行调整。

本发明某些实施方式中，流动相流速为0.2 mL·min^-1。

本发明某些实施方式中，柱温 35±2℃。

UPLC检测，可以采用190-400nm波长进行扫描，根据色谱图出峰情况进行选择。本发明某些实施方式中，检测波长325 ±5nm。

本发明对药材进行提取时，提取时使用的乙醇可以选择60%、65%、70%、75%、或80%乙醇等浓度。大孔树脂洗脱时，10-20%的乙醇可以选择10%、15%、20%等浓度。60-80%乙醇可以选择60%、65%、70%、75%、80%等浓度。

本发明使用的大孔树脂，主要使用非极性大孔树脂或者弱极性大孔树脂。例如使用二乙烯苯为骨架结构的树脂。

本发明某些实施方式中，大孔树脂选自HP-20、HP-21等。

本发明中若使用对照品，还可以使用如下对照品：新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 B、异绿原酸 A、灯盏花甲素、异绿原酸 C、槲皮素、芹菜素、山奈酚。

本发明可以通过供试品中色谱峰进行对比，对东俄洛紫菀或缘毛紫菀进行定性测定，也可以通过外标法等方法测定东俄洛紫菀或缘毛紫菀中各成分的含量，进行定量测定。

本发明在UPLC中采用特定的色谱条件，可以在东俄洛紫菀或缘毛紫菀中有效分离检测出12个以上的色谱峰，并可以对其中12个色谱峰进行定性和定量检测，为东俄洛紫菀或缘毛紫菀的质量控制提供了有效的方法。

附图说明

图1 东俄洛紫菀与缘毛紫菀的色谱图，其中，1：隐绿原酸；2：绿原酸；3：新绿原酸；4：芦丁；5：异槲皮苷；6：异绿原酸 B；7：异绿原酸 A；8：灯盏花甲素；9：异绿原酸 C；10：槲皮素；11：芹菜素；12：山奈酚

具体实施方式

实施例1 东俄洛紫菀与缘毛紫菀的检测方法

色谱条件：

色谱柱：（2.1×100 mm，1.8 µm）ACQUITY UPLC R HSS C18；流动相：乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）；梯度洗脱，0～5 min，10%～12% A；5～19 min，12%～16% A；19～26 min，16%～24% A；26～28 min，24%～24% A；28～30min，24%～ 30%A；35～45 min，30%～45% A；体积流量 0.2 mL.min-1；柱温 35℃；检测波长325 nm

提取与分离

分别称取东俄洛紫菀及缘毛紫菀药材各 300g，加 1000ml 70%乙醇回流提

取 3 次，时间均为 1h，减压浓缩得提取物。加入蒸馏水溶解，之后经 HP-20

大孔树脂分离，先用 15%乙醇洗脱，弃去，再用 70%乙醇洗脱，收集洗脱液，

浓缩，干燥，得东俄洛紫菀及缘毛紫菀粗提物 14.84g、21.79g。

对照品溶液的制备

精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 B、异

绿原酸 A、灯盏花甲素、异绿原酸 C、槲皮素、芹菜素、山奈酚对照品适量，加甲醇定容，摇匀，得到质量浓度分别为 2.496、2.160、2.0635、2.176、2.214、2.020、2.720、2.160、2.080、1.097、1.012、1.024 mg.mL-1 的混合对照品溶液。

供试品溶液的制备精密称取东俄洛紫菀及缘毛紫菀粗提物约 1 g，置于 100 mL锥形瓶中，加入 70%甲醇溶液 25 mL，摇匀，超声提取 30 min，过滤，取上清液，过 0.22 µm微孔滤膜，即得供试品溶液。

方法学考察

线性关系考察分别吸取混合对照品溶液 0.1、0.5、1、1.5、2、2.5µL，按

“色谱条件 ”项下色谱条件进样测定。以峰面积为纵坐标（Y），浓度为横坐标

（X），进行线性回归分析，结果见表1，12 种成分在相应范围内线性关系良好。

表1缘毛紫菀、东俄洛紫菀 12 种化学成分标准曲线及线性范围

精密度精密吸取混合对照品溶液, 连续进样 6 次, 以 12 种成分的峰面积

值计算 RSD 值。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 B、

异绿原酸 A、灯盏花甲素、异绿原酸 C、槲皮素、芹菜素、山奈酚的 RSD 分别

为 0.68%、0.25%、0.48%、0.98%、0.84%、0.68%、0.62%、0.82%、0.76%、0.88%、

0.94%、0.98%，结果表明该方法精密度良好。

重复性称取粉末 6 份，每份约 1g，按照“供试品溶液的制备”项下方法制备

成供试品溶液 6 份，按照“色谱条件 ”项下条件，各精密吸取 1µL 测定，计算各峰面积 RSD 值。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 B、异绿原酸 A、灯盏花甲素、异绿原酸 C、槲皮素、芹菜素、山奈酚的 RSD 分别为 1.46%、1.82%、0.56%、0.88%、0.92%、0.64%、1.78%、0.68%、1.32%、0.89%、0.64%、1.24%，结果表明该方法的重复性良好。

稳定性取供试品溶液，分别于制备后 0、4、8、12、24h 进样分析，计算

各成分峰面积 RSD 值。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿

原酸 B、异绿原酸 A、灯盏花甲素、异绿原酸 C、槲皮素、芹菜素、山奈酚的 RSD

分别为 0.78%、1.88%、2.36%、1.78%、2.34%、1.56%、1.24%、0.88%、3.66%、

0.89%、0.88%，结果表明供试品溶液在 24h 内基本良好。

加样回收率称取样品粉末 6 份，每份约 0.5g，分别加入与待测成分含量相

近的各对照品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备成供试品溶液，按照“色谱条件 ”项下条件分别精密吸取 1µL 测定，并计算 12 个待测成分的加样回收率及RSD。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 B、异绿原酸A、灯盏花甲素、异绿原酸C、槲皮素、芹菜素、山奈酚的加样回收率分别为 88.98%、98.12%、94.56%、103.82%、106.78%、89.89%、96.54%、116.34%、89.96%、94.28%、102.56%，RSD 分别为 0.98%、0.66%、1.78%0.78%、1.88%、0.89%、2.56%、1.78%、0.66%、0.78%、0.89%，结果表明回收率均符合要求。

各成分的含量检测：

根据上述方法，对样品中各成分进行检测，结果如下：

表2 缘毛紫菀、东俄洛紫菀 12 中成分含量测定结果 mg/g

D代表东俄洛紫菀，Y代表缘毛紫菀。

由上述含量测定可知：

东俄洛紫菀与缘毛紫菀在隐绿原酸、绿原酸、新绿原酸、芦丁等多种成分含量上存在显著差异：东俄洛紫菀隐绿原酸、绿原酸、新绿原酸含量显著高于缘毛紫菀，而其芦丁含量却显著低于缘毛紫菀。

Claims

1.东俄洛紫菀或缘毛紫菀的检测方法，其特征在于：

包括如下内容：

取待检药材，60~80%乙醇提取，醇提物上大孔树脂，依次用10-20%、60-80%乙醇洗脱，收集60-80%乙醇洗脱液，浓缩干燥得到粗提物；

将粗提物采用UPLC进行检测，色谱条件如下：

色谱柱：C18

流动相：乙腈（A）-0.01~0.5% 甲酸水溶液（B）；梯度洗脱程序为，0～5 min，10%～12%A；5～19 min，12%～16% A；19～26 min，16%～24% A；26～28 min，24%～24% A；28～30min，24%～ 30%A；35～45 min，30%～45% A。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述色谱柱尺寸为：2.1×100 mm，1.8µm。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：流动相流速为0.2 mL·min^-1。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：柱温 35±2℃。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：检测波长325 ±5nm。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：提取和洗脱使用的乙醇浓度为65~75%。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：大孔树脂选自HP-20。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：还包括使用如下对照品：新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 B、异绿原酸 A、灯盏花甲素、异绿原酸 C、槲皮素、芹菜素、山奈酚。

9.东俄洛紫菀或缘毛紫菀中如下化合物含量的检测方法，其特征在于：所述化合物选自新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 B、异绿原酸 A、灯盏花甲素、异绿原酸 C、槲皮素、芹菜素、山奈酚中的一种或多种，采用权利要求1-9任意一项所述的方法，并通过外标法检测各化合物的含量。

10.一种区分鉴定东俄洛紫菀和缘毛紫菀的方法，其特征在于：采用权利要求1-9任意一项所述的方法进行检测，并将色谱峰进行对比。