CN113917032B

CN113917032B - 一种检测南鹤虱或南鹤虱提取物中有关物质含量的方法

Info

Publication number: CN113917032B
Application number: CN202111196017.5A
Authority: CN
Inventors: 郑鑫杰; 张碧茜; 刘岱琳; 张静泽
Original assignee: Tianjin Modern Innovation Traditional Chinese Medicine Technology Co ltd; Beijing Tcmages Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Tianjin Modern Innovation Traditional Chinese Medicine Technology Co ltd; Beijing Tcmages Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2021-10-14
Filing date: 2021-10-14
Publication date: 2023-10-20
Anticipated expiration: 2041-10-14
Also published as: CN113917032A

Abstract

本发明提供了一种检测南鹤虱或南鹤虱提取物中有关物质含量的方法，其包括：(a)制得供试品溶液，并以木犀草素‑7‑O‑葡萄糖醛酸苷作为对照品，制得对照品溶液；(b)分别对所述供试品溶液和所述对照品溶液进行高效液相色谱检测；其中，所述高效液相色谱检测的条件包括：在347nm的波长下，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂，以甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，采用梯度洗脱的方式洗脱。本发明的方法采用高效液相色谱法对南鹤虱或南鹤虱提取物中有关物质的含量进行检测，提高了检测效率，具有准确度好、精密度高、专属性强、稳定性好的优势。

Description

一种检测南鹤虱或南鹤虱提取物中有关物质含量的方法

技术领域

本发明属于中药分析和检测技术领域。具体地，本发明涉及一种检测南鹤虱或南鹤虱提取物中有关物质含量的方法。

背景技术

南鹤虱配方颗粒由南鹤虱水提取物制备，具有杀虫消积的功效，其主治蛔虫病、蛲虫病、绦虫病、虫积腹痛、以及小儿疳积等。南鹤虱也是常用的维药，主要用于性欲减退、湿寒性胃病、尿闭、以及闭经等症，主治湿寒性或黏液质性疾病，如小便不利、性欲减退、肝硬化腹水、经水不下、痰多咳嗽、肾脏结石和膀胱结石等。

2020年版《中国药典》记载有南鹤虱的质量标准，但未建立有关物质含量测定标准，文献中也鲜有这方面的相关报道。

因此，有必要开发高效、准确且稳定地分析和检测南鹤虱或南鹤虱提取物中有关物质含量的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测南鹤虱或南鹤虱提取物中有关物质含量的方法。该方法以木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷作为指标成分，采用高效液相色谱法对南鹤虱或南鹤虱提取物中有关物质的含量进行检测，提高了检测效率，具有准确度好、精密度高、专属性强、稳定性好的优势，符合中药质量标准研究的技术要求。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

一种检测南鹤虱或南鹤虱提取物中有关物质含量的方法，其包括：

(a)制得供试品溶液，并以木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷作为对照品，制得对照品溶液；

(b)分别对所述供试品溶液和所述对照品溶液进行高效液相色谱检测；

其中，所述高效液相色谱检测的条件包括：

在347nm的波长下，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂，以甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，采用梯度洗脱的方式洗脱。

在本发明的方法中，所述色谱柱可以采用例如ACQUITYHSS T3(2.1mm×100mm，1.8μm)。

优选地，在步骤(a)中，制得供试品溶液的方法包括：

使供试品溶解于甲醇中并定量，经超声提取、过滤后获得。

优选地，所述供试品溶液的浓度为3mg/mL～13mg/mL，更优选地为8mg/mL。在本发明的方法中，供试品溶液的浓度可以选择例如3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、以及以上点值中任意两个组成的范围内的任意点值。

优选地，所述对照品溶液的浓度为15μg/mL～35μg/mL，更优选地为25μg/mL。

优选地，所述超声提取在390W～520W的功率和30kHz～50kHz的频率下进行20min～40min。在本发明的方法中，所述超声提取例如可以在390W、400W、410W、420W、430W、440W、450W、470W、490W、500W、510W、或520W的功率下，并在30kHz、35kHz、40kHz、45kHz、或50kHz的频率下进行20min、25min、30min、35min、或40min。

优选地，所述甲酸水溶液的体积浓度为0.05％～0.18％，优选地为0.1％。

优选地，以所述流动相A和所述流动相B的体积分数计，所述梯度洗脱的程序包括：

0min～4min，以5％流动相A-95％流动相B洗脱；

4min～10min，以5％～15％流动相A-95％～85％流动相B洗脱；

10min～19min，以15％流动相A-85％流动相B洗脱；

19min～23min，以15％～22.5％流动相A-85％～77.5％流动相B洗脱；

23min～35min，以22.5％～40％流动相A-77.5％～60％流动相B洗脱；

35min～37min，以40％～5％流动相A-60％～95％流动相B洗脱；

37min～40min，以5％流动相A-95％流动相B洗脱。

其中，在4min～10min的洗脱时段内，流动相A的体积分数可以选择5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、以及以上点值中任意两个组成的范围内的任意点值；流动相B的体积分数则可以根据流动相A的体积分数对应地选择。

在19min～23min的洗脱时段内，流动相A的体积分数可以选择15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、22.5％、以及以上点值中任意两个组成的范围内的任意点值；流动相B的体积分数则可以根据流动相A的体积分数对应地选择。

在35min～37min的洗脱时段内，流动相A的体积分数可以选择40％、38％、36％、35％、32％、30％、25％、22％、20％、15％、10％、8％、7％、6％、5％、以及以上点值中任意两个组成的范围内的任意点值；流动相B的体积分数则可以根据流动相A的体积分数对应地选择。

优选地，流动相的流速为0.15mL/min～0.5mL/min，优选地为0.25mL/min。

优选地，所述色谱柱的柱温为30℃～40℃，优选地为35℃。

优选地，所述有关物质包括木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、木犀草素、木犀草素-7-O-新橙皮糖、槲皮素、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖、木犀草素-7-O-葡萄糖中的至少一种。

优选地，所述供试品溶液和所述对照品溶液的进样量为0.4μL～0.6μL，更优选地为0.5μL。

在本发明的方法中，高效液相色谱的系统适用性实验应当使得满足：按木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷峰计算，理论板数不低于3000。

在本发明的方法中，优选地，所述南鹤虱提取物为南鹤虱配方颗粒。

本发明至少具有如下有益效果：

本发明提供了检测南鹤虱或南鹤虱提取物中有关物质含量的方法，其以木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷作为指标成分，采用高效液相色谱法对南鹤虱或南鹤虱提取物中有关物质的含量进行检测，提高了检测效率，能够较好地反映南鹤虱或南鹤虱提取物中有关物质的含量，具有准确度好、精密度高、专属性强、稳定性好的优势，符合中药质量标准研究的技术要求。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1为实施例1中南鹤虱配方颗粒的高效液相色谱图；

图2为实施例2中木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷含量测定准确度考察的高效液相色谱图；

图3为实施例3中木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷含量测定12h稳定性考察的高效液相色谱图；

图4为实施例4中木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷含量测定专属性实验的高效液相色谱图；

图5为实施例5中木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷含量测定的标准曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

本发明实施例中所采用的试剂与试药、仪器的信息如下所列。

试剂与试药：乙腈(天津渤化化学试剂有限公司，20210220，色谱纯)；甲酸(东京化成工业株式会社，3C7ON-NJ，色谱纯)；木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷(批号：AF21020501)，购自成都埃法生物科技有限公司。

仪器：分析天平(赛多利斯，SQP QUINTIX224-1CN，德国)；Agilent 1290Infinity超高效液相色谱仪(配有DAD检测器、控温型柱温箱、控温型自动进样器，美国)；高速台式离心机(SIGMA，1-14，德国)；超纯水仪(CASCADA，PALL，美国)；超声波清洗仪(天津奥特赛恩斯，AS20500BT，中国)。

实施例1

供试品溶液的制备：取南鹤虱配方颗粒供试品0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理(功率520W；频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，备用。

对照品溶液的制备：取木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成25μg/mL的对照品溶液，备用。

按照以下色谱条件，对所述供试品溶液和对照品溶液进行高效液相色谱检测：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.8μm)；以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，按照以下表1中所列的程序进行梯度洗脱；柱温为35℃；流速为0.25mL/min；检测波长为347nm；进样量为0.5μL；系统适用性实验应当使得满足：按木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷峰计算，理论板数不低于3000。

图1示出了本实施例所得的高效液相色谱图，其中A为南鹤虱配方颗粒色谱图。B为对照品色谱图，1(S)号峰为木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷峰。

表1梯度洗脱程序

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0～4	5	95
4～10	5→15	95→85
			10～19	15	85
19～23	15→22.5	85→77.5
			23～35	22.5→40	77.5→60
35～37	40→5	60→95
			37～40	5	95

实施例2准确度考察

准确度系指采用本发明的方法所测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率(％)表示。

取南鹤虱配方颗粒的木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷提取物供试品，按对照品量与所取提取物供试品中待测定成分量之比为0.5:1、1:1、1.5:1分别加入对照品进行加样(n＝9)，制备供试品溶液，并按照如实施例1中描述的色谱条件进行高效液相色谱检测，检测结果取平均值，结果参见图2和表2。结果表明，加样回收试验中，木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷平均回收率为99.2％，RSD为6.62％，符合药品质量标准分析方法验证指导原则(《中国药典》2020年版四部通则9101)要求。图2中A为对照品的色谱图，B为0.5:1比例下加样的色谱图，C为1:1比例下加样的色谱图，D为1.5:1比例下加样的色谱图，1号峰为木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷峰。

表2木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷加样回收试验数据

实施例3稳定性考察

取南鹤虱配方颗粒的提取物，按照实施例1中描述的方法和色谱条件制备供试品溶液并进行高效液相色谱检测，在0h、3h、6h、9h、12h分别进样测定，将峰面积作为指标，考察样品在12h内的检测稳定性，结果参见图3和表3。

表3供试品溶液检测的稳定性考察

时间/h	木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷峰面积mAU*min
		0	54.62
3	61.49
		6	54.13
9	55.08
		12	54.8
RSD/％	0.70

图3中A为0h的色谱图，B为3h的色谱图，C为6h的色谱图，D为9h的色谱图，E为12h的色谱图，1号峰为木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷峰。结果表明，对于木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷含量测定，供试品溶液12h内峰面积RSD为0.09％，稳定性良好。

实施例4专属性考察

取配方颗粒辅料适量，按照南鹤虱配方颗粒含量测定项中供试品制备方法制备供试品，取南鹤虱配方颗粒供试品溶液，木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷标准品溶液，辅料溶液，按照实施例1中描述的方法和色谱条件制备供试品溶液并进行高效液相色谱检测，结果见图4。

图4中A为对照品的色谱图，B为辅料溶液色谱图(缺南鹤虱阴性样品色谱图)，C为南鹤虱样品色谱图，1号峰为木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷峰。图4中结果表明，木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷对应色谱峰在缺阴性位置处无干扰峰，含量测定专属性良好。

实施例5含量测定物质定量的方法

取木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷501.75μg的溶液。吸标准溶液，分别稀释浓度为标准溶液浓度的1％、2％、10％、25％、50％、100％的木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷标准溶液，按照实施例1中描述的方法和色谱条件制备供试品溶液并进行高效液相色谱检测。

如图5中所示，以峰面积为横坐标X，浓度为纵坐标Y，拟合木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷标准曲线，拟合结果如下：Y＝0.1118X-0.6385(n＝6)，R2＝0.9991。结果表明，木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷在10.035～1003.5ng范围内线性关系良好。

以上所述，仅是本发明的几个示例性实施例，并非对本发明做任何形式的限制。虽然本发明以较佳的实施例揭示如上，然而并非用以限制本发明。任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，利用上述揭示的技术内容做出些许的变动或修饰均等同于等效实施案例，均属于本发明技术方案范围内。

Claims

1.一种检测南鹤虱或南鹤虱提取物中有关物质含量的方法，其包括：

其中，所述高效液相色谱检测的条件包括：

在347nm的波长下，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂，以甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，采用梯度洗脱的方式洗脱，

其中，以所述流动相A和所述流动相B的体积分数计，所述梯度洗脱的程序包括：

0min～4min，以5％流动相A-95％流动相B洗脱；

4min～10min，以5％～15％流动相A-95％～85％流动相B洗脱；

10min～19min，以15％流动相A-85％流动相B洗脱；

19min～23min，以15％～22.5％流动相A-85％～77.5％流动相B洗脱；

23min～35min，以22.5％～40％流动相A-77.5％～60％流动相B洗脱；

35min～37min，以40％～5％流动相A-60％～95％流动相B洗脱；

37min～40min，以5％流动相A-95％流动相B洗脱，

所述有关物质为木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤(a)中，制得供试品溶液的方法包括：

使供试品溶解于甲醇中并定量，经超声提取、过滤后获得。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述供试品溶液的浓度为3mg/mL～13mg/mL。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述供试品溶液的浓度为8mg/mL。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述对照品溶液的浓度为15μg/mL～35μg/mL。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述对照品溶液的浓度为25μg/mL。

7.根据权利要求2所述的方法，其中，所述超声提取在390W～520W的功率和30kHz～50kHz的频率下进行20min～40min。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述甲酸水溶液的体积浓度为0.05％～0.18％。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述甲酸水溶液的体积浓度为0.1％。

10.根据权利要求1或2所述的方法，其中，流动相的流速为0.15mL/min～0.5mL/min。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，流动相的流速为0.25mL/min。

12.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述色谱柱的柱温为30℃～40℃。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述色谱柱的柱温为35℃。

14.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述供试品溶液和所述对照品溶液的进样量为0.4μL～0.6μL。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述供试品溶液和所述对照品溶液的进样量为0.5μL。