CN113913352B - 一株产弹性胞外多糖的嗜热链球菌及其培养方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一株产弹性胞外多糖的嗜热链球菌及其培养方法与应用，所述产弹性胞外多糖的嗜热链球菌命名为(Streptococcus thermophilus)ST81菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15752，保藏日期为2018年5月11日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本发明首次筛选到一株能够产出具有弹性的胞外多糖的嗜热链球菌，将所述产弹性胞外多糖的嗜热链球菌应用于制备发酵乳产品，赋予了产品良好的弹性，显著提高了产品的黏度，改善了产品质构，提高了产品稳定性，避免了果胶、琼脂等稳定剂的额外添加，制备得到的产品弹性好、稠而不粘、不拉丝、不糊口，吞咽感良好，具有重要的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，涉及一株产胞外多糖的嗜热链球菌及其培养方法与应用，具体涉及一株产弹性胞外多糖的嗜热链球菌及其培养方法与应用。
背景技术
乳酸菌胞外多糖(EPS)是乳酸菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的一类糖类化合物，有的依附于微生物细胞壁形成荚膜，称为荚膜多糖；有的则进入培养基形成粘液，称为粘液多糖，是微生物适应环境的产物。嗜热链球菌胞外多糖大部分为异型多糖，种类繁多，结构复杂，现在报道的嗜热链球菌胞外多糖在发酵乳中的含量菌株差异比较大，含量在45-340mg/L。嗜热链球菌胞外多糖的结构单元种类较多，据初步统计有九种以上，单糖组成主要为葡萄糖、半乳糖、氨基半乳糖和鼠李糖，半乳糖为唯一共有的单糖组成。
嗜热链球菌是酸奶发酵剂的主发酵菌株，它产生的胞外多糖赋予搅拌型酸奶细腻爽滑的质构。胞外多糖对产品质构的改善，其本质是嗜热链球菌产生的胞外多糖作为一类高分子聚合物可以与酪蛋白结合，改变酪蛋白酸变性后的粗糙结构，同时增加产品的黏度，提高产品保水性。因此嗜热链球菌常用于发酵乳的制备中。
例如CN110938566A公开了一株嗜热链球菌及其在发酵乳中的应用，嗜热链球菌Streptococcus thermophilus Cz-03保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO.17958。以该嗜热链球菌Cz-03为发酵菌株，其在用于制备发酵乳的发酵过程中，产生的乙醛含量浓度高，发酵终止后酸度增长缓慢，具有很好的工业应用前景。
CN108220201A公开了一种嗜热链球菌Streptococcus thermophilus Benshit 及其应用。该嗜热链球菌Streptococcus thermophi lus Benshit从新疆奶疙瘩中筛出，其保藏编号为CGMCC No.12098。嗜热链球菌Streptococcus thermophilus Benshit在乳糖为主要碳源时，EPS产量可达到160mg/L；其作为发酵剂用于单独生产EPS，或作为发酵剂用于生产嗜热链球菌发酵乳制品。
然而现有技术中的嗜热链球菌所产胞外多糖的虽黏度较大但弹性较差，制备得到的发酵乳虽然稠厚但吞咽起来比较糊口，感官体验不佳，在货架期的稳定性也不太好。
因此如何筛选出一株产弹性胞外多糖的嗜热链球菌，并将其应用于发酵乳的制备中，以赋予产品良好的弹性，提高产品的黏度，改善产品质构，提高产品稳定性具有重要的应用价值。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一株产胞外多糖的嗜热链球菌及其培养方法与应用，具体提供一株产弹性胞外多糖的嗜热链球菌及其培养方法与应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一株产弹性胞外多糖的嗜热链球菌，所述产弹性胞外多糖的嗜热链球菌命名为(Streptococcus thermophilus)ST81菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15752，保藏日期为2018年5月11日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1 号院3号。
本发明提供的嗜热链球菌具有产弹性胞外多糖的优良特性，将所述产弹性胞外多糖的嗜热链球菌应用于制备发酵乳产品，赋予了产品良好的弹性，显著提高了产品的黏度，改善了产品质构，提高了产品稳定性。
第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的产弹性胞外多糖的嗜热链球菌的培养方法，所述培养方法包括将嗜热链球菌接种于M17培养基或MRS培养基上进行培养保存。
优选地，所述培养的温度为37-45℃，例如37℃、37.5℃、38℃、38.5℃、 39℃、39.5℃、40℃、40.5℃、41℃、41.5℃、42℃、42.5℃、43℃、43.5℃、44℃、 44.5℃、45℃等。
优选地，所述培养时体系的pH为6.5-7.5，例如6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、 7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5等。
第三方面，本发明提供如第一方面所述的产弹性胞外多糖的嗜热链球菌或如第二方面所述的产弹性胞外多糖的嗜热链球菌的培养方法在制备发酵食品中的应用。
第四方面，本发明提供一种含弹性胞外多糖的发酵乳，所述含弹性胞外多糖的发酵乳的制备原料包括如第一方面所述的产弹性胞外多糖的嗜热链球菌和待发酵乳。
优选地，所述含弹性胞外多糖的发酵乳的制备原料还包括保加利亚乳杆菌 LB42和/或乳双歧杆菌BLa80。
在发酵乳中进一步添加保加利亚乳杆菌LB42和乳双歧杆菌BLa80，两种菌剂相互配合，协同增效，有利于发酵过程的进行，促进了嗜热链球菌ST81的生长，进一步提高了产品稳定性，改善了发酵乳产品质构，提升了产品的感官体验。
第五方面，本发明提供一种如第四方面所述的含弹性胞外多糖的发酵乳的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
(1)将产弹性胞外多糖的嗜热链球菌采用斜面培养基进行活化；
(2)将步骤(1)活化后的产胞外多糖的嗜热链球菌置于液体培养基中进行厌氧培养，得种子培养液；
(3)将步骤(2)得到的种子培养液接种于待发酵乳，厌氧发酵，即得。
优选地，步骤(1)所述斜面培养基包括M17培养基或MRS培养基。
优选地，步骤(1)所述斜面培养基的pH为6.5-7.5，例如6.5、6.6、6.7、 6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5等。
优选地，步骤(1)所述活化的温度为37-45℃，例如37℃、37.5℃、38℃、 38.5℃、39℃、39.5℃、40℃、40.5℃、41℃、41.5℃、42℃、42.5℃、43℃、43.5℃、 44℃、44.5℃、45℃等。所述活化的时间为24-72h，例如24h、28h、32h、36 h、40h、44h、48h、52h、56h、60h、64h、68h、72h等。
优选地，步骤(2)所述液体培养基包括M17培养基或MRS培养基。
优选地，步骤(2)所述培养的温度为37-42℃，例如37℃、37.5℃、38℃、 38.5℃、39℃、39.5℃、40℃、40.5℃、41℃、41.5℃、42℃等。所述培养的时间为16-24h，例如16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h、24h等。
优选地，步骤(3)所述种子培养液在待发酵乳中的接种量为1-3％，例如 1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2％、2.1％、 2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3％等。
优选地，步骤(3)所述接种后，厌氧发酵前还包括接种保加利亚乳杆菌LB42 和/或乳双歧杆菌BLa80。
优选地，所述保加利亚乳杆菌LB42在待发酵乳中的接种量为(0.1-2)×105 CFU/mL；
优选地，所述乳双歧杆菌BLa80在待发酵乳中的接种量为(0.1-2)×105 CFU/mL；
上述(0.1-2)中的具体数值例如0.1、0.2、0.5、0.7、1、1.2、1.5、1.7、2等。
优选地，步骤(3)所述发酵的温度为37-45℃，例如37℃、37.5℃、38℃、 38.5℃、39℃、39.5℃、40℃、40.5℃、41℃、41.5℃、42℃、42.5℃、43℃、43.5℃、 44℃、44.5℃、45℃等。所述发酵的时间为4-8h，例如4h、4.5h、5h、5.5h、 6h、6.5h、7h、7.5h、8h等。
本发明所述的数值范围不仅包括上述列举的点值，还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的嗜热链球菌具有产弹性胞外多糖的优良特性，将所述产弹性胞外多糖的嗜热链球菌应用于制备发酵乳产品，可赋予产品良好的弹性，显著提高产品的黏度，改善产品质构，提高产品稳定性，从而避免了果胶、琼脂等稳定剂的额外添加。由所述嗜热链球菌制备得到的发酵乳含弹性胞外多糖，黏度高，黏性模量大，抗剪切力能力强，稳定性好，稠厚、弹性好、弹而不粘、不糊口、不拉丝，感官体验良好。此外，在发酵乳中进一步添加保加利亚乳杆菌LB42和乳双歧杆菌BLa80，两种菌剂相互配合，协同增效，有利于发酵过程的进行，促进了嗜热链球菌ST81的生长，进一步提高了产品稳定性，改善了发酵乳产品质构，提升了产品的感官体验。
附图说明
图1是实施例1、对比例2-4提供的发酵乳的流变学测试结果图。
图2是实施例1提供的发酵乳的抗剪切能力测试结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述实施例所涉及的保加利亚乳杆菌LB42保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其分类命名为德式乳杆菌保加利亚亚种 Lactobacillus delbruecliisubsp.bulgaricus，其保藏编号为CGMCC No.15751，保藏日期为2018.05.11，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。乳双歧杆菌BLa80保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其分类命名为动物双歧杆菌乳亚种Bifidobacterium animalissubsp.Lactis，其保藏编号为 CGMCC NO.15410，保藏日期为2018.03.05，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路 1号院3号。
制备例1
本制备例提供一种产胞外多糖的嗜热链球菌ST81，其分离筛选方法如下：
将酸马奶在M17平板上进行单菌落划线，挑取单菌落接种到5mL的灭菌先牛奶中，观察发酵乳的质构。
其培养保存方法如下：
将分离筛选后的产弹性胞外多糖的嗜热链球菌接种于M17培养基，在pH 7.0、37℃下培养保存。
对筛选得到的嗜热链球菌ST81进行16S rDNA分子生物学鉴定。挑取单菌落，利用无菌水混匀，加入细菌通用引物，进行菌落PCR扩增，对其基因序列进行测定。其16S rDNA碱基序列如下：
GGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAAC GCTGAAGAGAGGAGCTTGCTCTTCTTGGATGAGTTGCGAACGGGTGAGTA ACGCGTAGGTAACCTGCCTTGTAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGC TAATACCGCATAACAATGGATGACACATGTCATTTATTTGAAAGGGGCAATT GCTCCACTACAAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTAGGTGAGGTAATG GCTCACCTAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACA CTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAA TCTTCGGCAATGGGGGCAACCCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAG AAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTAAGTCAAGAACGGGTGTGAGA GTGGAAAGTTCACACTGTGACGGTAGCTTACCAGAAAGGGACGGCTAACT ACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTA TTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTGATAAGTCTGAAGTTAAAGGCT GTGGCTCAACCATAGTTCGCTTTGGAAACTGTCAAACTTGAGTGCAGAAG GGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGA ACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCG AAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAA ACGATGAGTGCTAGGTGTTGGATCCTTTCCGGGATTCAGTGCCGCAGCTAA CGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAA GGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAA GCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCGATGCTATTTCTAGAG ATAGAAAGTTACTTCGGTACATCGGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCA GCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTAT TGTTAGTTGCCATCATTCAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTAATAA ACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTG GGCTACACACGTGCTACAATGGTTGGTACAACGAGTTGCGAGTCGGTGAC GGCGAGCTAATCTCTTAAAGCCAATCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACT CGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGT GAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTGGAGCCAGCCGCCTAAGGT GGGACAGATGATTGGGGTGAAGTCGT
实施例1
本实施例提供一种含弹性胞外多糖的发酵乳，其制备方法如下：
(1)将嗜热链球菌ST81采用M17培养基进行活化，接种量为1×106 CFU/mL，活化条件为：pH 7.0，37℃，48h。
(2)将步骤(1)活化后的嗜热链球菌ST81接种到M17培养基中，接种量为1×106CFU/mL，在37℃下厌氧培养16h，得菌液。以6000rpm的转速离心10min收集菌体，用与离心前的菌液等体积的生理盐水重悬，得种子培养液。
(3)将步骤(2)得到的种子培养液与脱脂牛奶以2％的接种量进行接种，在42℃下厌氧发酵5h，即得含弹性胞外多糖的发酵乳。
实施例2
本实施例提供一种含弹性胞外多糖的发酵乳，其制备方法如下：
(1)将嗜热链球菌ST81采用M17培养基进行活化，接种量为1×106 CFU/mL，活化条件为：pH 6.5，40℃，60h。
(2)将步骤(1)活化后的嗜热链球菌接种到M17培养基中，接种量为1 ×106CFU/mL，在39℃下厌氧培养20h，得菌液。以7000rpm的转速离心10min 收集菌体，用与离心前的菌液等体积的生理盐水重悬，得种子培养液。
(3)将步骤(2)得到的种子培养液与脱脂牛奶以2％的接种量进行接种，在38℃下厌氧发酵7h，即得含弹性胞外多糖的发酵乳。
实施例3
本实施例提供一种含弹性胞外多糖的发酵乳，其制备方法如下：
(1)将嗜热链球菌ST81采用改良MRS培养基进行活化，接种量为1×106 CFU/mL，活化条件为：pH 7.5，43℃，24h。
(2)将步骤(1)活化后的嗜热链球菌接种到MRS培养基中，接种量为1 ×106CFU/mL，在42℃下厌氧培养18h，得菌液。以8000rpm的转速离心10min 收集菌体，用与离心前的菌液等体积的生理盐水重悬，得种子培养液。
(3)将步骤(2)得到的种子培养液与脱脂牛奶以2％的接种量进行接种，在45℃下厌氧发酵4h，即得含弹性胞外多糖的发酵乳。
实施例4
本实施例提供一种含弹性胞外多糖的发酵乳，其制备方法与实施例1的区别仅在于将步骤(3)改为：将步骤(2)得到的种子培养液与脱脂牛奶以2％的接种量进行接种，再将保加利亚乳杆菌LB42以1.2×105CFU/mL的接种量接种到脱脂牛奶中，在42℃下厌氧发酵5h，即得含弹性胞外多糖的发酵乳。其他步骤参照实施例1。
实施例5
本实施例提供一种含弹性胞外多糖的发酵乳，其制备方法与实施例1的区别仅在于将步骤(3)改为：将步骤(2)得到的种子培养液与脱脂牛奶以2％的接种量进行接种，再将乳双歧杆菌BLa80以1.2×105CFU/mL的接种量接种到脱脂牛奶中，在42℃下厌氧发酵5h，即得含弹性胞外多糖的发酵乳。其他步骤参照实施例1。
实施例6
本实施例提供一种含弹性胞外多糖的发酵乳，其制备方法与实施例1的区别仅在于将步骤(3)改为：将步骤(2)得到的种子培养液与脱脂牛奶以2％的接种量进行接种，再将保加利亚乳杆菌LB42和乳双歧杆菌BLa80分别以0.2×105和1×105CFU/mL的接种量接种到脱脂牛奶中，在42℃下厌氧发酵5h，即得含弹性胞外多糖的发酵乳。其他步骤参照实施例1。
对比例1
本对比例提供一种发酵乳，其与实施例1的区别仅在于将“嗜热链球菌 ST81”替换为“不产胞外多糖的嗜热链球菌A(购自科汉森)”，其制备方法参照实施例1。
对比例2
本对比例提供一种发酵乳，其与实施例1的区别仅在于将“嗜热链球菌 ST81”替换为“产胞外多糖的嗜热链球菌B(购自科汉森)”，其制备方法参照实施例1。
对比例3
本对比例提供一种发酵乳，其与实施例1的区别仅在于将“嗜热链球菌 ST81”替换为“产胞外多糖的嗜热链球菌C(购自丹尼斯克)”，其制备方法参照实施例1。
对比例4
本对比例提供一种发酵乳，其与实施例1的区别仅在于将“嗜热链球菌 ST81”替换为“产胞外多糖的嗜热链球菌D(购自萨科)”，其制备方法参照实施例1。
对比例5
本对比例提供一种发酵乳，其与对比例1的区别仅在于，在发酵乳中加入质量百分含量为1％的琼脂，其他步骤参照对比例1。
对比例6
本对比例提供一种发酵乳，其与对比例1的区别仅在于，在发酵乳中加入质量百分含量为1％的果胶，其他步骤参照对比例1。
测试例1
黏性模量测试
对实施例1、对比例2-4提供的发酵乳进行流变学测试(TA流变仪，ARES G2)。
结果如附图1所示，实施例1的发酵乳的黏性模量最大，说明与现有技术中的产胞外多糖的嗜热链球菌相比，由本发明提供的嗜热链球菌ST81制备得到的发酵乳具有更佳的黏性。实施例2和3的结果与实施例1类似。
测试例2
机械稳定性测试
对实施例1提供的发酵乳进行抗剪切能力测试(TA流变仪，ARES G2)。
结果如附图2所示，由嗜热链球菌ST81制备得到的发酵乳抗剪切能力强，在受到较大外力干扰后，仍然能快速恢复其原有黏度，利于产业化过程中的产品黏度保持，机械稳定性强。实施例2和3的结果与实施例1类似。
测试例3
黏度及稳定性测试；
将实施例1-6、对比例1-6提供的发酵乳在货架期(10℃冷藏21天)的黏度变化进行测试。采用黏度计(proRheo R180)测定产品黏度。结果见表1。
表1
结果表明：与各对比例相比，实施例1-6提供的发酵乳的初始黏度较大，在货架期内的黏度变化较小，说明本发明的嗜热链球菌ST81用于制备发酵乳时可显著增大发酵乳的黏度并提高其稳定性，而且其提高产品的黏度和稳定性的效果相较于现有技术中的嗜热链球菌更加显著。使用本发明的嗜热链球菌ST81制备得到的发酵乳本身的黏度较大且稳定性较好，避免了果胶、琼脂等稳定剂的额外添加。其中实施例6的发酵乳产品相较于实施例1的产品稳定性较好，说明在发酵乳中进一步添加保加利亚乳杆菌LB42和乳双歧杆菌BLa80时，两种菌剂相互配合，协同增效，有利于发酵过程的进行，促进了嗜热链球菌ST81的生长，进一步提高了发酵乳产品的稳定性。
测试例4
感官评价；
选取志愿者20名组成评价小组，该小组成员都经过专业的食品感官分析和评价培训，对实施例1-6、对比例1-4提供的发酵乳进行感官评价并打分。评价指标如下：
质构：粗糙0-3分；细腻4-6分；
稠厚度：稀薄0-3分；稠厚4-6分；
吞咽起来是否糊口：粘、糊口：0-3分；不粘、不糊口4-6分；
吞咽感觉是否有弹性：无弹性或弹性差：0-3分；弹性好：4-6分。
各组评分结果见表2。
表2
| 组别 | 质构 | 稠厚度 | 是否糊口 | 弹性 |
| 实施例1 | 5.5 | 5.6 | 5.6 | 5.3 |
| 实施例2 | 5.5 | 5.5 | 5.5 | 5.6 |
| 实施例3 | 5.7 | 5.6 | 5.5 | 5.5 |
| 实施例4 | 5.6 | 5.7 | 5.6 | 5.6 |
| 实施例5 | 5.7 | 5.6 | 5.6 | 5.7 |
| 实施例6 | 6.0 | 6.0 | 5.8 | 5.9 |
| 对比例1 | 2.5 | 2.2 | 6.0 | 0.8 |
| 对比例2 | 5.0 | 5.1 | 4.1 | 2.2 |
| 对比例3 | 5.1 | 5.3 | 4.2 | 2.8 |
| 对比例4 | 5.2 | 5.5 | 4.4 | 1.9 |
结果表明：与各对比例相比，实施例1-6提供的发酵乳产品质构细腻、稠厚，且吞咽感良好，弹而不粘、不糊口，感官体验较佳，说明本发明的嗜热链球菌 ST81用于制备发酵乳时可显著改善产品质构，提升产品的感官体验。其中实施例6的发酵乳产品相较于实施例1、4、5的产品在质构和感官体验上有了较大提升，说明在发酵乳中进一步添加保加利亚乳杆菌LB42和乳双歧杆菌BLa80 时，两种菌剂相互配合，协同增效，有利于发酵过程的进行，促进了嗜热链球菌ST81的生长，进一步改善了发酵乳产品质构，提升了产品的感官体验。
综上所述，本发明提供的嗜热链球菌ST81具有产弹性胞外多糖的优良特性，将所述产弹性胞外多糖的嗜热链球菌应用于制备发酵乳产品，赋予了产品良好的弹性、显著提高了产品的黏度，改善了产品质构，提高了产品稳定性，从而避免了果胶、琼脂等稳定剂的额外添加。由所述嗜热链球菌制备得到的发酵乳含弹性胞外多糖，黏度大，抗剪切力强，稳定性好，在货架期间均表现出稠厚、不拉丝的优异特征，且吞咽感良好，弹而不粘、不糊口，感官体验较佳。此外，在发酵乳中进一步添加保加利亚乳杆菌LB42和乳双歧杆菌BLa80时，两种菌剂相互配合，协同增效，有利于发酵过程的进行，促进了嗜热链球菌ST81的生长，进一步提高了产品稳定性，改善了发酵乳产品质构，提升了产品的感官体验。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一株产弹性胞外多糖的嗜热链球菌及其培养方法与应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
SEQUENCE LISTING
<110> 微康益生菌（苏州）股份有限公司
<120> 一株产弹性胞外多糖的嗜热链球菌及其培养方法与应用
<130> 2021-11-22
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1484
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 1
ggctcaggac gaacgctggc ggcgtgccta atacatgcaa gtagaacgct gaagagagga 60
gcttgctctt cttggatgag ttgcgaacgg gtgagtaacg cgtaggtaac ctgccttgta 120
gcgggggata actattggaa acgatagcta ataccgcata acaatggatg acacatgtca 180
tttatttgaa aggggcaatt gctccactac aagatggacc tgcgttgtat tagctagtag 240
gtgaggtaat ggctcaccta ggcgacgata catagccgac ctgagagggt gatcggccac 300
actgggactg agacacggcc cagactccta cgggaggcag cagtagggaa tcttcggcaa 360
tgggggcaac cctgaccgag caacgccgcg tgagtgaaga aggttttcgg atcgtaaagc 420
tctgttgtaa gtcaagaacg ggtgtgagag tggaaagttc acactgtgac ggtagcttac 480
cagaaaggga cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtc ccgagcgttg 540
tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca ggcggtttga taagtctgaa gttaaaggct 600
gtggctcaac catagttcgc tttggaaact gtcaaacttg agtgcagaag gggagagtgg 660
aattccatgt gtagcggtga aatgcgtaga tatatggagg aacaccggtg gcgaaagcgg 720
ctctctggtc tgtaactgac gctgaggctc gaaagcgtgg ggagcgaaca ggattagata 780
ccctggtagt ccacgccgta aacgatgagt gctaggtgtt ggatcctttc cgggattcag 840
tgccgcagct aacgcattaa gcactccgcc tggggagtac gaccgcaagg ttgaaactca 900
aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg 960
aagaacctta ccaggtcttg acatcccgat gctatttcta gagatagaaa gttacttcgg 1020
tacatcggtg acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa 1080
gtcccgcaac gagcgcaacc cctattgtta gttgccatca ttcagttggg cactctagcg 1140
agactgccgg taataaaccg gaggaaggtg gggatgacgt caaatcatca tgccccttat 1200
gacctgggct acacacgtgc tacaatggtt ggtacaacga gttgcgagtc ggtgacggcg 1260
agctaatctc ttaaagccaa tctcagttcg gattgtaggc tgcaactcgc ctacatgaag 1320
tcggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcac gccgcggtga atacgttccc gggccttgta 1380
cacaccgccc gtcacaccac gagagtttgt aacacccgaa gtcggtgagg taaccttttg 1440
gagccagccg cctaaggtgg gacagatgat tggggtgaag tcgt 1484
Claims (11)
1.一种含弹性胞外多糖的弹而不粘的发酵乳，其特征在于，所述含弹性胞外多糖的弹而不粘的发酵乳的制备原料包括产弹性胞外多糖的嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）、德式乳杆菌保加利亚亚种（Lactobacillus delbrueclii subsp.bulgaricus）LB42、动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp. Lactis）BLa80和待发酵乳，所述待发酵乳为脱脂牛奶；
所述产弹性胞外多糖的嗜热链球菌命名为ST81菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15752，保藏日期为2018年5月11日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；
所述德式乳杆菌保加利亚亚种LB42的保藏编号为CGMCC No.15751，保藏日期为2018.05.11，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；
所述动物双歧杆菌乳亚种BLa80的保藏编号为CGMCC NO.15410，保藏日期为2018.03.05，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.一种如权利要求1所述的含弹性胞外多糖的弹而不粘的发酵乳的制备方法，其特征在于，所述含弹性胞外多糖的弹而不粘的发酵乳的制备方法包括如下步骤：
（1）将产弹性胞外多糖的嗜热链球菌采用斜面培养基进行活化；
（2）将步骤（1）活化后的产胞外多糖的嗜热链球菌置于液体培养基中进行厌氧培养，得种子培养液；
（3）将步骤（2）得到的种子培养液、德式乳杆菌保加利亚亚种LB42和动物双歧杆菌乳亚种BLa80接种于待发酵乳，厌氧发酵，即得。
3.如权利要求2所述的含弹性胞外多糖的弹而不粘的发酵乳的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述斜面培养基包括M17培养基或MRS培养基。
4.如权利要求2所述的含弹性胞外多糖的弹而不粘的发酵乳的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述斜面培养基的pH为6.5-7.5。
5.如权利要求2所述的含弹性胞外多糖的弹而不粘的发酵乳的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述活化的温度为37-45℃，所述活化的时间为24-72 h。
6.如权利要求2所述的含弹性胞外多糖的弹而不粘的发酵乳的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述液体培养基包括M17培养基或MRS培养基。
7.如权利要求2所述的含弹性胞外多糖的弹而不粘的发酵乳的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述培养的温度为37-42℃，培养的时间为16-24 h。
8.如权利要求2所述的含弹性胞外多糖的弹而不粘的发酵乳的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述种子培养液在待发酵乳中的接种量为1-3%。
9.如权利要求2所述的含弹性胞外多糖的弹而不粘的发酵乳的制备方法，其特征在于，所述德式乳杆菌保加利亚亚种LB42在待发酵乳中的接种量为(0.1-2)×105 CFU/mL。
10.如权利要求2所述的含弹性胞外多糖的弹而不粘的发酵乳的制备方法，其特征在于，所述动物双歧杆菌乳亚种BLa80在待发酵乳中的接种量为(0.1-2)×105 CFU/mL。
11.如权利要求2所述的含弹性胞外多糖的弹而不粘的发酵乳的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述发酵的温度为37-45℃，所述发酵的时间为4-8 h。
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|---|---|---|---|
| CN202111435617.2A CN113913352B (zh) | 2021-11-29 | 2021-11-29 | 一株产弹性胞外多糖的嗜热链球菌及其培养方法与应用 |
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|---|---|---|---|
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