KR101753164B1 - Nk 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법 - Google Patents
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- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
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Abstract
본 발명은 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법에 관한 것으로, 탈지분유 3 중량부를 기준으로, 우유 70~85 중량부, 정제수 11~27 중량부를 50℃~60℃에서 혼합하는 우유 혼합단계;상기 우유 혼합단계에서 혼합된 우유조성물을 90℃ 내지 100℃에서 25분 내지 35분간 살균하는 살균단계; 상기 살균단계에서 살균된 우유조성물을 8℃ 내지 12℃로 냉각하는 냉각단계; 상기 냉각단계에서 냉각된 우유조성물에 발효 유산균과 Lactobacillus casei, Bifidobacterium animalis ssp. lactis, 김치유래 열처리 유산균을 접종하는 유산균 접종단계; 상기 유산균 접종단계를 거친 우유조성물을 2시간 동안 10℃에서 37℃로 상승시키며 배양하는 예비 배양단계; 상기 예비 배양단계를 거친 우유조성물을 37℃에서 5시간 동안 배양하는 본 배양단계; 상기 본 배양단계를 거친 우유조성물을 10℃로 냉각시키는 냉각단계;를 포함하되, 상기 유산균 접종단계에서 접종되는 발효 유산균은 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus 중 어느 하나 이상이고, 상기 유산균 접종단계에서 접종되는 김치유래 열처리 유산균은 김치에서 발생된 Lactobacillus plantarum인 기술을 제공함으로써 NK 세포 활성을 증진하는 발효 유산균이 함유된 조성물을 이용하여 다양한 음용수 또는 식품 등에 첨가하여 사람들이 쉽게 접하고, 섭취할 수 있어 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방할 수 있는 효과가 있다.
또한, NK 세포의 변화를 통하여 면역력이 증진할 뿐만 아니라 EPS의 함량이 일반 우유조성물보다 10배 가량 높아 효소를 활성시키는 등의 다양한 효과를 볼 수 있다.
그리고, 유산균의 함량이 높아 기능성 식품으로 상품성이 매우 높아 섭취자의 건강을 개선시킬 수 있는 효과도 있다.
또한, NK 세포의 변화를 통하여 면역력이 증진할 뿐만 아니라 EPS의 함량이 일반 우유조성물보다 10배 가량 높아 효소를 활성시키는 등의 다양한 효과를 볼 수 있다.
그리고, 유산균의 함량이 높아 기능성 식품으로 상품성이 매우 높아 섭취자의 건강을 개선시킬 수 있는 효과도 있다.
Description
본 발명은 NK 세포 활성을 증진하는 유산균을 이용한 조성물의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 NK 세포의 활성을 증진시켜 인플루엔자바이러스 감기 질환을 예방하고 면역을 증강시킬 수 있는 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
최근 현대인들은 중증 급성 호흡기 증후군(Severe Acute Respiratory Syndrome)인 사스(SARS), 신종인플루엔자(Influenza A virus subtype H1N1)인 신종플루, 중동 호흡기 증후군(Middle East Respiratory Syndrome)인 메르스(MERS) 등의 각종 바이러스성 질병에 노출되고 있다.
특히, 면역력이 약한 어린이나 노약자들은 바이러스 감염에 취약하여 바이러스의 노출로 인한 바이러스성 질병에 감염되거나 사망하는 문제점이 있다.
이러한 바이러스에 의하여 감염되거나 각종 질병에 걸리는 환자가 늘어나고, 바이러스 관련 의료비가 상승하자 현대인들의 면역력 증진에 관심이 높아지고 있다.
이러한 관심으로 인하여 최근에는 각종 식품, 의약 분야에서 면역력 증진에 관련된 상품을 개발하고, 출시하고 있지만 영양제, 의약품 등의 경우에는 정해진 시간에 매일 챙겨먹어야 하는 번거러움 때문에 꾸준히 섭취하기 힘들뿐만 아니라 면역력 증진에 좋은 채소, 과일 등의 식품들은 별도의 조리를 해서 먹어야 하는 어려움으로 일반인들이 쉽게 섭취하기 힘든 문제점도 있다.
관련 선행기술로는 공개특허공보 제10-2010-0013252호(발명의 명칭:불가리스 더블 이펙트 공법에 의해 유산균 및 비피더스균의 증식이 향상된 발효유 제조방법, 공개일자: 2011년 08월 18일) 및 공개특허공보 제10-2016-0098749호(발명의 명칭:단일공정 발효유의 제조공정, 공개일자: 2016년 08월 19일)가 있다.
본 발명은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하기 위해 창안된 것으로, NK 세포의 활성을 증진시키는 발효 유산균이 함유된 조성물의 제조공정을 제공함으로써 면역을 증강시킬 수 있는 NK 세포의 활성을 증진시켜 인플루엔자바이러스 감기 질환을 예방하고 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 다른 목적은 본 발명의 특징을 통해 이해될 수 있으며, 본 발명의 실시 예를 통해 보다 분명하게 알 수 있고, 특허청구범위에 나타난 수단 및 조합에 의해 실현될 수 있다.
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본 발명에 따른 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법은, 탈지분유 3 중량부를 기준으로, 우유 70~85 중량부, 정제수 11~27 중량부를 50℃~60℃에서 혼합하는 우유 혼합단계; 상기 우유 혼합단계에서 혼합된 우유조성물을 90℃ 내지 100℃에서 25분 내지 35분간 살균하는 살균단계; 상기 살균단계에서 살균된 우유조성물을 8℃ 내지 12℃로 냉각하는 냉각단계; 상기 냉각단계에서 냉각된 우유조성물에 발효 유산균과 Lactobacillus casei, Bifidobacterium animalis ssp . lactis, 김치유래 열처리 유산균을 접종하는 유산균 접종단계; 상기 유산균 접종단계를 거친 우유조성물을 2시간 동안 10℃에서 37℃로 상승시키며 배양하는 예비 배양단계; 상기 예비 배양단계를 거친 우유조성물을 37℃에서 5시간 동안 배양하는 본 배양단계; 상기 본 배양단계를 거친 우유조성물을 10℃로 냉각시키는 냉각단계;를 포함하여 이루어진다.
본 발명에 따른 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법에 있어서, 상기 유산균 접종단계에서 접종되는 발효 유산균은 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium , Streptococcus thermophilus, Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus 중 어느 하나 이상인 기술적 특징을 갖는다.
본 발명에 따른 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법에 있어서, 상기 예비 배양단계의 상기 발효 유산균은 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium , Streptococcus thermophilus이며, 혼합비율이 1:1:8인 기술적 특징을 갖는다.
본 발명에 따른 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법에 있어서, 상기 본 배양단계의 상기 발효 유산균은 Lactobacillus debrueckii subsp . bulgaricus , Streptococcus thermophilus이며, 혼합비율이 1:9인 기술적 특징을 갖는다.
본 발명에 따른 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법에 있어서, 상기 유산균 접종단계에서 접종되는 김치유래 열처리 유산균은 김치에서 발생된 Lactobacillus plantarum인 기술적 특징을 갖는다.
본 발명에 따른 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법에 있어서, 상기 유산균 접종단계에서 접종되는 발효 유산균의 중량부는 탈지분유 3 중량부를 기준으로, 혼합비율 1:1:8인 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium , Streptococcus thermophilus이 0.0015~0.003 중량부, 혼합비율 1:9인 Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus, Streptococcus thermophilus이 0.0015~0.003 중량부가 되는 기술적 특징을 갖는다.
본 발명에 따른 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법에 있어서, 상기 예비 배양단계와 본 배양단계를 거친 우유조성물은 EPS의 함량이 본 배양단계만 거친 우유조성물보다 10배 높은 기술적 특징을 갖는다.
본 발명은 상기와 같은 과제의 해결 수단을 통해 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물 및 이의 제조방법을 제공함으로써 NK 세포 활성을 증진하는 발효 유산균이 함유된 조성물을 이용하여 다양한 음용수 또는 식품 등에 첨가하여 사람들이 쉽게 접하고, 섭취할 수 있어 인플루엔자바이러스 감기 질환을 예방할 수 있는 효과가 있다.
또한, NK 세포의 변화를 통하여 면역력이 증진할 뿐만 아니라 EPS의 함량이 일반 우유조성물보다 10배 가량 높아 효소를 활성시키는 등의 다양한 효과를 볼 수 있다.
그리고, 유산균의 함량이 높아 기능성 식품으로 상품성이 매우 높아 섭취자의 건강을 개선시킬 수 있는 효과도 있다.
도 1은 본 발명에 따른 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법의 순서도,
도 2는 도 1에 따른 배양된 유산균의 EPS 함량을 측정하는 방법을 나타내는 순서도.
도 2는 도 1에 따른 배양된 유산균의 EPS 함량을 측정하는 방법을 나타내는 순서도.
후술하는 본 발명에 대한 상세한 설명은, 본 발명이 실시될 수 있는 특정 실시 예를 예시로서 도시하는 첨부 도면을 참조한다. 이들 실시 예는 당업자가 본 발명을 실시할 수 있기에 충분하도록 상세히 설명된다. 본 발명의 다양한 실시 예는 서로 다르지만 상호 배타적일 필요는 없음이 이해되어야 한다. 예를 들어, 여기에 기재되어 있는 특정 형상, 구조 및 특성은 일 실시 예에 관련하여 본 발명의 기술적 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 다른 실시 예로 구현될 수 있다. 또한, 각각의 개시된 실시 예 내의 개별 구성요소의 위치 또는 배치는 본 발명의 기술적 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 변경될 수 있음이 이해되어야 한다. 따라서, 후술하는 상세한 설명은 한정적인 의미로서 취하려는 것이 아니며, 본 발명의 범위는 그 청구항들이 주장하는 것과 균등한 모든 범위와 더불어 첨부된 청구항에 의해서만 한정된다. 도면에서 유사한 참조부호는 여러 측면에 걸쳐서 동일하거나 유사한 기능을 지칭한다.
도 1은 본 발명에 따른 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법의 순서도이고, 도 2는 도 1에 따른 배양된 유산균의 EPS 함량을 측정하는 방법을 나타내는 순서도이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
NK 세포는 자연살해(Natural Killer) 세포로 바이러스 감염 세포, 암세포를 공격하며, 림프구에 속하지만 주조직적합성복합체(MHC) class I분자가 표면에 없는 세포만 비 특이적으로 공격하는 특성이 있어 선천성 면역계에 속한다.
그리고, 선천성 면역체계는 병원체가 인체에 들어오면 병원체-관련패턴이 대식세포(면역활성물질을 분비하는 세포), 호중구(병원체 세균을 표식하는 보체단백질의 도움으로 대식작용을 하는 세포), 수지상세포의 TL수용체에 결합하여 염증반응을 일으킨다.
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실시예
1> 조성물의 제조
탈지분유 3kg에, 50℃~60℃ 가온된 우유 70~85kg 정제수 11~27kg을 순서대로 첨가하여 혼합한다.
혼합물을 90℃~100℃에서 25~35분간 살균을 하고, 8℃~12℃로 냉각한다.
그리고, 냉각된 혼합물에 발효 유산균과 Lactobacillus casei , Bifidobacterium animalis ssp . lactis , 김치유래 열처리 유산균을 접종하며, 유산균 접종한 혼합물을 2시간 동안 10℃에서 37℃로 상승시키며 예비 배양을 한다.
그 후, 예비 배양을 거친 혼합물을 37℃에서 5시간 동안 본 배양하고, 유산균을 배양한 혼합물을 10℃로 냉각시킨다.
상기 실시예 1에서 접종되는 발효 유산균은 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium, Streptococcus thermophilus , Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus 중 어느 하나 이상이다.
즉, 발효 유산균은 단계적으로 1:1:8의 비율로 혼합된 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium 및 Streptococcus thermophilus을 냉각된 혼합물에 접종하고, Lactobacillus debrueckii subsp . bulgaricus과 Streptococcus thermophilus을 1:9로 혼합하여 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium , Streptococcus thermophilus을 접종한 혼합물에 접종한다.
1:1:8의 비율로 혼합된 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium 및 Streptococcus thermophilus과 1:9의 비율로 혼합된 Lactobacillus debrueckii subsp. bulgaricus과 Streptococcus thermophilus을 단계적으로 접종함으로써 발효 유산균을 한꺼번에 접종하는 것보다 효과적으로 배양된다.
그리고, 실시예 1에서 접종되는 발효 유산균은 탈지분유 3kg를 기준으로, 혼합비율 1:1:8인 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium , Streptococcus thermophilus이 0.0015~0.003kg, 혼합비율 1:9인 Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, Streptococcus thermophilus이 0.0015~0.003kg이 첨가된다.
실시예 1에서 접종되는 김치유래 열처리 유산균은 김치에서 발생된 Lactobacillus plantarum이다.
Lactobacillus plantarum(락토바실러스 플란타룸)은 발효식품 또는 혐기성 식물에서 발견되는 유산균으로, 사람의 타액에서 처음 분리되었으며, 식품보존에 중요한 역할을 하고, 과민성 대장증후군, 대장염 등 다양한 치료에 효과가 있다.
또한, Lactobacillus plantarum(락토바실러스 플란타룸)은 병원균을 파괴하고, 중요한 영양소, 비타민, 산화 방지제를 유지하는 기능뿐만 아미노산을 생산하는 기능이 있다.
그리고, 실시예 1에서 예비 배양과 본 배양을 거친 유산균은 본 배양만 거친 유산균의 배양보다 EPS 합량이 10배 높으며, 발효로 인한 풍미가 개선된다.
EPS는 Exopolysaccharide의 약자로, 세포들이 스스로 생산한 세포외 고분자 물질이라고 하며, 세포 외부의 유전자, 단백질, 다당류로 이루어진 고분자 복합체이다.
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실시예
2> 두 단계로 나뉜 유산균 배양
1단계는 혼합비율 1:1:8인 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium , Streptococcus thermophilus을 10℃에서 시작하여 37℃까지 2시간 배양을 진행하고, 2단계는 37℃에서 5시간 배양 혼합비율 1:9인 Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus , Streptococcus thermophilus의 접종하여 배양하고, 배양완료 후, 10℃로 냉각한다.
두 단계로 나뉜 유산균 배양 거친 배양은 최종적으로 EPS함량이 25~30mg/kg 생성된다.
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비교예
1> 일반적인 유산균 배양
2:1:7 배양비로 혼합된 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium , Streptococcus thermophilus을 발효유에 한꺼번에 접종하여 배양온도 37~42℃에서 7~12시간동안 배양이 진행된다.
그리고, 최종 생성된 EPS 함량은 1.5~3.0mg/kg 생성된다.
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실시예
3> 기능성 발효유 제조
탈지분유 3kg에, 우유 혼합 50℃~60℃ 가온된 우유 70~85kg, 정제수 11~27kg을 순서대로 첨가하여 혼합한다.
혼합물을 90℃~100℃에서 25~35분간 살균을 하고, 8℃~12℃로 냉각한다.
그리고, 냉각된 혼합물에 발효 유산균과 Lactobacillus casei , Bifidobacterium animalis ssp . lactis , 김치유래 열처리 유산균을 접종하며, 유산균 접종한 혼합물을 2시간 동안 10℃에서 37℃로 상승시키며 예비 배양을 한다.
그 후, 예비 배양을 거친 혼합물을 37℃에서 5시간 동안 배양하고, 유산균을 배양한 혼합물을 10℃로 냉각시킨다.
시럽은 50℃~60℃에서 액상과당, 프락토올리고당, 백설탕, 펙틴 및 요구르트향과 원료를 혼합하여, 121℃에서 2~3초간 살균하여 10℃로 냉각시켜, 10℃로 냉각한 혼합물과 혼합하여 150bar에서 균질처리하여 10℃에서 저장하고 포장한다.
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실험예
1> 조성물의 동물실험
탈지분유 3kg에, 우유 혼합 50℃~60℃ 가온된 우유 70~85kg, 정제수 11~27kg을 순서대로 첨가하여 혼합한다.
혼합물을 90℃~100℃에서 25~35분간 살균을 하고, 8℃~12℃로 냉각한다.
그리고, 냉각된 혼합물에 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium , Streptococcus thermophilus이 혼합된 발효 유산균 0.0022kg과 Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus , Streptococcus thermophilus으로 혼합된 발효 유산균 0.0015kg, Lactobacillus casei 0.0016kg, Bifidobacterium animalis ssp . lactis 0.0016kg, 김치유래 열처리 유산균을 접종하며, 유산균 접종한 혼합물을 2시간 동안 10℃에서 37℃로 상승시키며 예비 배양을 한다.
그 후, 예비 배양을 거친 혼합물을 37℃에서 5시간 동안 배양하고, 유산균을 배양한 혼합물을 10℃로 냉각시켜 제조한다.
그리고, 제조한 조성물을 아래의 조건에 맞춰 동물에 투여한다.
체중 60kg, BSA가 1.6m²이고, Km factor가 37인 사람이 동결건조된 조성물 29g을 섭취하는 조건을 동물에게 적용하면, 체중 20g, BSA 0.007m²이고, Km factor가 3인 쥐에게 동결건조된 조성물을 150mg에 해당한다.
하지만, 실제 조성물의 투여량은 용해도와 쥐의 섭취 가능한 양을 고려하여 아래의 표 1과 같이 투여하였다.
8주령의 수컷쥐를 7일간 순화하고, 21일간 경구투여하여 감염실에 3일간 순화, 5일동안 바이러스에 감염시켜 조사하는 과정으로 총 35일 동안 실험한다.
또한, 실험에서 사용되는 바이러스는 근치사량(1/2 LD50)인 PR8 바이러스로 비강에 주입한다. (실험예 2 참조)
여기서 사용되는 PR8 바이러스는 A/PR/8/34(H1N1) 인플루엔자바이러스로 실험적으로 가장 널리 사용되는 바이러스이며, mouse-adapted strain으로서 기존의 인플루엔자 연구를 통하여 in vivo와 in vitro 감염시스템이 잘 구축되어 있다.
| 그룹 | 건조물양 | 열처리 유산균량 | 건조물내 총당량 | 투여량 |
| 대조군(식염수) | - | - | - | 0.2ml |
| 우유 | 30mg | - | 24mg | 0.2ml |
| 요구르트 | 36mg | 0.5mg | 24mg | 0.2ml |
| 요구르트+열처리유산균 | 36mg | 2.5mg | 24mg | 0.2ml |
상기 표 1은 실험에 이용되는 그룹별 투여량에 관한 표이다.
상기 표 2는 혈액 내의 바이오마커를 분석한 결과로, 요구르트+열처리유산균-PR8그룹이 선천 면역과 관련된 세포인 호중구가 증가한 것으로 평가되었다.
호중구란 주로 골수에서 만들어지는 과립백혈구(과립구)의 일종으로 단핵구와 같은 계열의 세포로, 조직이 손상되거나 미생물에 감염되면 그 부위에 최초로 도달하는 백혈구이다.
상기 표 3은 혈액 내의 질소산화물(NO)의 함량을 나타내는 표로, 요구르트-PR8그룹과 요구르트+열처리유산균-PR8그룹이 대조군 수준의 수치를 보여주고 있다.
즉, 염증유발 시 발현되는 인자인 질소화합물(NO)이 요구르트-PR8 및 요구르트+열처리 유산균-PR8 그룹에서 억제되는 것을 볼 수 있다.
상기 표 4는 비장 조직 내 면역활성물질 발현을 나타내는 표로, 비장을 적출하여 mRNA 분리 및 cDNA을 합성하여 real time PCR 확인한 결과이다.
즉, 표 4는 요구르트-PR8그룹이 유의적으로 증가하고 있는 것을 보여주고 있다.
상기 표 5는 비장 조직 내 자연살해(NK)세포 활성를 나타내는 표로, 비장을 적출하여 비장세포 분리하고, YAC-1을 표적세포로 하여 함께 배양 후, LDH를 측정을 하였다.
그 결과, PR8 그룹에 비해 요구르트+김치유래 열처리 유산균-PR8그룹에서 유의적으로 자연살해 세포 활성이 증가한 결과가 측정되어 선천면역 증가가 확인되었다.
LDH는 젖산탈수소효소(Lactate dehydrogenase)로 당분해과정의 마지막 단계에 작용하는 효소로, 신체의 모든세포에 있는 효소이며, 주로 간, 심장, 골격근, 뇌, 적혈구 등에 많이 분포하고 있다.
즉, 실험예 1의 결과로 인하여 조성물을 21일동안 투여하여, 인플루엔자바이러스가 감염된 쥐의 생존율을 개선시키는 효과가 나타났으며, 비장조직의 면역활성물질이 증가가 관찰되었다.
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실험예
2>
반수치사량
(LD
50
) 측정 실험
상기 실험예 2의 방법은 상기 실시예 1의 투여될 바이러스 양을 결정하기 위한 것으로, PR8 바이러스의 5, 50, 500, 5000, 50000 TCID50/마우스의 다양한 용량으로 약 12주령 BALB/c 마우스에 비강내로 (intranasal route) 감염시킨다. (N=5)
그리고, 감염 후 21일에 최종적으로 도출되는 생존율(mortality)을 측정하여 이 결과를 기반으로 LD50를 결정한다.
실험 결과, 102.17 TCID50의 LD50를 도출하였으며, PR8 바이러스를 약 12주령 마우스(N=5)에 5, 50, 500, 5000, 50000 TCID50로 비강 감염시키고, 감염 후 21일에 확인되는 생존율을 이용하여 LD50를 측정하였다.
상기 표 6은 바이러스 감염을 통해 결정된 LD50의 그래프이다.
<
실험예
3> 동물의 생존율실험
실험예 3은 상기 실시예 1에 의해 제조된 조성물을 함유한 기능성 요구르트, 기능성 요구르트+ PR8 바이러스, PR8 바이러스, 우유+ PR8 바이러스의 군으로 나누어 약 8주령의 쥐에게 21일 동안 경구투여한다.
그리고 A/PR/8/34을 LD50용량으로 쥐에게 INTRANASAL 감염시켜 시간 경과에 따른 쥐의 생존률을 관찰한다.
상기 표7은 실험예 3의 결과를 나타내는 표로, 실시예 1에 의해 제조된 조성물을 섭취한 쥐가 생존율이 높은 것으로 나타난다.
<
실험예
4> 조성물의 임상실험
상기 실시예 1에 의해 제조된 조성물이 함유된 기능성 요구르트와 대조군인 우유를 1일 1회, 84일 동안 120ml씩 경구 섭취하여 실험한다.
| 대조군 | 시험군 |
| 우유 | 기능성 요구르트 |
상기 표 8은 무작위로 배정된 대조군과 시험군이 섭취하는 조성물의 종류를 나타내는 표이다.
또한, 실험에 참여자의 선정기준은 만 60세 이상의 합병증이 없는 건강하고, 말초혈액의 백혈구 수치가 4×103/㎕ ~ 10×103/㎕에 해당하는 자이다.
임상실험은 70명의 시험자가 대조군 섭취 36명, 시험군 섭취 34명으로 나뉘어 84일동안 섭취기를 거쳐 결과를 확인한다.
| 우유 섭취군 (36명) | 기능성요구르트 섭취군(34명) |
| 6명(16.7%)-8건 | 4명(11.8%)-4건 |
| 감기증상이 있는 6명중 2명이 두차례의 감기증상이 나타남. | - |
상기 표 9는 실험예 4의 실험 중에 나타난 감기 증상에 대한 설문 내용으로, 기능성요구르트 섭취군을 섭취한 실험자들이 시험군을 섭취한 실험자보다 임상기간 중에 감기 증상이 더 적게 나타나는 것을 보여준다.
상기 표 10은 NK(면역)세포의 활성도를 나타내는 표로, Effector cell : Target cell = 2.5:1의 조건에서 84일동안 시험군을 섭취하였을 때, 섭취 전에 비하여 면역세포 활성도가 유의적으로 증가하였으며, 대조군에 비하여 세포 활성도의 변화값도 높았다는 것을 보여준다.
상기 표 11은 12주간 우유 또는 기능성요구르트를 섭취한 섭취군의 면역관련 Cytokine(IL-12)을 나타내는 그래프이다.
상기 표 12는 12주간 우유 또는 기능성요구르트를 섭취한 섭취군의 면역관련 Cytokine(IFN-γ)를 비교하는 그래프이다.
즉, 실험예 4의 결과를 종합하면, 일반적인 우유보다 본원 발명의 조성물이 함유된 기능성 요구르트가 감기바이러스 감염 예방과 NK(면역)세포의 활성도를 증가시키는 효과가 있는 것을 판단할 수 있다.
이상에서는 본 발명을 바람직한 실시 예에 의거하여 설명하였으나, 본 발명 의 기술적 사상은 이에 한정되지 아니하고 청구항에 기재된 범위 내에서 변형이나 변경 실시가 가능함은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명백한 것이며, 그러한 변형이나 변경은 첨부된 특허청구범위에 속한다 할 것이다.
Claims (14)
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- 탈지분유 3 중량부를 기준으로, 우유 70~85 중량부, 정제수 11~27 중량부를 50℃~60℃에서 혼합하는 우유 혼합단계;
상기 우유 혼합단계에서 혼합된 우유조성물을 90℃ 내지 100℃에서 25분 내지 35분간 살균하는 살균단계;
상기 살균단계에서 살균된 우유조성물을 8℃ 내지 12℃로 냉각하는 냉각단계;
상기 냉각단계에서 냉각된 우유조성물에 발효 유산균과 Lactobacillus casei, Bifidobacterium animalis ssp. lactis, 김치유래 열처리 유산균을 접종하는 유산균 접종단계;
상기 유산균 접종단계를 거친 우유조성물을 2시간 동안 10℃에서 37℃로 상승시키며 배양하는 예비 배양단계;
상기 예비 배양단계를 거친 우유조성물을 37℃에서 5시간 동안 배양하는 본 배양단계;
상기 본 배양단계를 거친 우유조성물을 10℃로 냉각시키는 냉각단계;를 포함하되,
상기 유산균 접종단계에서 접종되는 발효 유산균은 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus 중 어느 하나 이상이고,
상기 유산균 접종단계에서 접종되는 김치유래 열처리 유산균은 김치에서 발생된 Lactobacillus plantarum인 것을 특징으로 하는 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법. - 삭제
- 제8항에 있어서,
상기 예비 배양단계의 상기 발효 유산균은 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium, Streptococcus thermophilus이며, 혼합비율이 1:1:8인 것을 특징으로 하는 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법. - 제8항에 있어서,
상기 본 배양단계의 상기 발효 유산균은 Lactobacillus debrueckii subsp . bulgaricus, Streptococcus thermophilus이며, 혼합비율이 1:9인 것을 특징으로 하는 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법. - 삭제
- 제8항에 있어서,
상기 유산균 접종단계에서 접종되는 발효 유산균의 중량부는 탈지분유 3 중량부를 기준으로, 혼합비율 1:1:8인 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium , Streptococcus thermophilus이 0.0015~0.003 중량부, 혼합비율 1:9인 Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus , Streptococcus thermophilus이 0.0015~0.003 중량부가 되는 것을 특징으로 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법. - 제8항에 있어서,
상기 예비 배양단계와 본 배양단계를 거친 우유조성물은 EPS의 함량이 본 배양단계만 거친 우유조성물보다 10배 높은 것을 특징으로 하는 NK 세포 활성을 통한 인플루엔자바이러스 감기 질환 예방과 면역 증강용 발효 조성물의 제조방법.
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| KR101174974B1 (ko) * | 2010-02-12 | 2012-08-17 | 남양유업 주식회사 | 유산균 및 비피더스균의 증식이 향상된 발효유 제조방법 |
-
2016
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| CN113913352B (zh) * | 2021-11-29 | 2023-04-11 | 微康益生菌(苏州)股份有限公司 | 一株产弹性胞外多糖的嗜热链球菌及其培养方法与应用 |
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