CN111971055A - 母乳成分增强用组合物 - Google Patents

Abstract

提供能用于母乳成分增强用组合物等特定用途的组合物。一种组合物，其含有双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌作为有效成分。

Description

母乳成分增强用组合物

技术领域

本发明涉及能用于母乳成分增强用组合物等特定用途的组合物。

背景技术

已知长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、短双歧杆菌(Bifidobacteriumbreve)等所谓的双歧杆菌为益生菌。例如报道了：通过向对象给予双歧杆菌，从而该对象的母乳中免疫相关微小RNA(miRNA)、免疫相关基因的mRNA的量增加或减少，由此对母乳的免疫调节作用产生影响(专利文献1～2)。另外，已知：通过向对象给予包含双歧杆菌的益生菌，从而在该对象的母乳中抑制IL-10、TGF-β等的孩子的变态反应发病的成分的量增大(非专利文献1)。

已知低聚果糖等难消化性低聚糖为益生元。例如，已知难消化性低聚糖促进双歧杆菌等有益的细菌的增殖。另外，报道了：通过向对象给予低聚果糖，从而在该对象的母乳中白细胞介素27(IL-27)的量增大，因此能够预防摄取了该母乳的新生儿的变态反应发病(专利文献3)。

CCL28为一种CC趋化因子，在大肠、唾液腺、乳腺、支气管的粘膜组织的上皮细胞上恒久地表达。由于CCL28通过CCR10而引起IgA产生细胞的迁移而促进IgA产生、具有抗菌活性，因此可认为CCL28在粘膜组织中的自然免疫和获得性免疫中起到重要的作用(非专利文献2)。另外，CCL28基因缺损小鼠的肠道内微生物菌群与野生型小鼠的肠道内微生物菌群的构成不同，因此可认为CCL28也参与肠道内微生物菌群的形成(非专利文献3)。因此，可认为CCL28显示出预防感染病原菌、病毒的效果、调节肠道内微生物菌群的效果。迄今为止，报道了：在动物实验中，通过摄取芽孢杆菌属细菌、大肠杆菌而可促进小肠中CCL28的表达(非专利文献4～5)。另外，在母乳中也分泌有CCL28，可认为有助于预防乳腺炎(非专利文献6)。进而，报道了：在感染了HIV的婴儿中，所摄取的母乳中的CCL28的浓度越高则存活率越高(非专利文献7)。基于这些情况，可认为母乳中包含的CCL28的增加也可能预防在婴儿中的感染。

半乳凝素-9已知是对β-半乳糖苷具有高亲和性的属于凝集素家族的一种蛋白质，具有抑制变态反应发病的效果(非专利文献8)。另外，已知通过摄取包含益生菌的奶粉而使血清中的半乳凝素-9浓度上升(非专利文献9)。然而，尚不知晓通过摄取益生菌使母乳中的半乳凝素-9浓度上升的情况。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO2011/007815

专利文献2：WO2012/096272

专利文献3：日本特开2013-245174号公报

非专利文献

非专利文献1：Baldassarre ME et al.Nutrients 8(11).(2016)

非专利文献2：Mohan T et al.Int Immunopharmacol.51:165-170.(2017)

非专利文献3：Matsuo K et al.J Immunol.200(2):800-809.(2018)

非专利文献4：Yang GY et al.Vet Res.47(1):71(2016)

非专利文献5：Meurens F et al.PLoS One.2(7):e677.(2007)

非专利文献6：Pallister KB et al.PLoS One.10(9):e0138084.(2015)

非专利文献7：Castelletti E et al.PLoS One.2(10):e969.(2007)

非专利文献8：Seki M et al.Clin Immunol.127(1):78-88.(2008)

非专利文献9：de Kivit S et al.Allergy.67(3):343-52.(2012)

发明内容

发明要解决的问题

本发明的课题在于提供能用于母乳成分增强用组合物等特定用途的组合物。

用于解决问题的方案

本发明人等发现：通过将长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)和短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)与低聚果糖等益生元组合并经口给予对象，从而使母乳中的特定成分的量增大。另外，本发明人等发现：通过将短双歧杆菌等双歧杆菌属细菌经口给予对象，从而母乳中的半乳凝素-9的量增大。另外，本发明人等发现：通过将短双歧杆菌等双歧杆菌属细菌向对象经口给予，从而可促进CCL28的分泌。本发明人等基于这些见解，以至完成了本发明。

即，本发明可以如下示例。

本发明的一个方式为母乳成分增强用组合物，其含有双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌作为有效成分。

前述组合物的优选的方式是：前述母乳成分为选自热休克蛋白、趋化因子、干扰素和凝集素中的至少1种成分。

前述组合物的优选的方式是，前述母乳成分为选自HSP70、CCL8、CCL21、CCL28、IFN-γ和半乳凝素9中的至少1种成分。

本发明的一个方式为母乳中的半乳凝素9增强用组合物，其含有双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌作为有效成分。

本发明的一个方式为CCL28分泌促进用组合物，其含有双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌作为有效成分。

前述组合物的优选的方式是，还含有益生元。

前述组合物的优选的方式是，前述益生元为低聚糖。

前述组合物的优选的方式是，前述益生元为低聚果糖。

前述组合物的优选的方式是，前述双歧杆菌属细菌为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)和/或短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)。

前述组合物的优选的方式是，前述双歧杆菌属细菌为长双歧杆菌和短双歧杆菌。

前述组合物的优选的方式是，前述双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。

前述组合物的优选的方式是，前述长双歧杆菌为长双歧杆菌BB536(NITE BP-02621)。

前述组合物的优选的方式是，前述短双歧杆菌为短双歧杆菌M-16V(NITE BP-02622)。

前述组合物的优选的方式是，向孕产妇或哺乳期妇女给予。

前述组合物的优选的方式是，出于对第二对象的下述(1)～(3)中任一目的而向第一对象给予来使用，其中所述第二对象要被给予第一对象的母乳：

(1)变态反应的预防和/或治疗；

(2)感染症的预防和/或治疗；

(3)肠道内微生物菌群的调节。

前述组合物的优选的方式是，前述第一对象为孕产妇或哺乳期妇女，前述第二对象为婴儿。

前述组合物的优选的方式是饮食品组合物。

本发明的一个方式为增强母乳成分的方法，其包括向对象给予双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌的工序。

前述方法的优选的方式是，前述母乳成分为选自热休克蛋白、趋化因子、干扰素和凝集素中的至少1种成分。

前述方法的优选的方式是，前述母乳成分为选自HSP70、CCL8、CCL21、CCL28、IFN-γ和半乳凝素9中的至少1种成分。

本发明的一个方式为增强母乳中的半乳凝素9的方法，其包括向对象给予双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌的工序。

本发明的一个方式为促进CCL28的分泌的方法，其包括向对象给予双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌的工序。

前述方法的优选的方式是，还包括向对象给予益生元的工序。

前述方法的优选的方式是，前述益生元为低聚糖。

前述方法的优选的方式是，前述益生元为低聚果糖。

前述方法的优选的方式是，前述双歧杆菌属细菌为长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)和/或短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)。

前述方法的优选的方式是，前述双歧杆菌属细菌为长双歧杆菌和短双歧杆菌。

前述方法的优选的方式是，前述双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。

前述方法的优选的方式是，前述长双歧杆菌为长双歧杆菌BB536(NITE BP-02621)。

前述方法的优选的方式是，前述短双歧杆菌为短双歧杆菌M-16V(NITE BP-02622)。

前述方法的优选的方式是，前述对象为孕产妇或哺乳期妇女。

本发明的一个方式为母乳成分增强用奶粉的制造方法，其包括下述工序(A)～(C)：

(A)用含有乳成分的培养基培养双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌，得到培养物的工序；

(B)将前述培养物供于喷雾干燥和/或冷冻干燥，得到菌体粉末的工序；

(C)将前述菌体粉末和益生元混合，得到母乳成分增强用奶粉的工序。

本发明的一个方式为母乳成分增强用奶粉的制造方法，其包括下述工序(A)：

(A)将益生元、双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌和乳成分混合，得到奶粉的工序。

前述方法的优选的方式是，前述乳成分为乳蛋白。

前述方法的优选的方式是，前述乳蛋白为选自由乳清、乳清水解物、酪蛋白组成的组中的至少1种成分。

本发明的一个方式为母乳成分增强用营养强化剂的制造方法，其包括下述工序(A)和(B)：

(A)将益生元、双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌和赋形剂混合，得到混合物的工序；

(B)将前述混合物压片的工序。

前述方法的优选的方式是，前述双歧杆菌属细菌为长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)和/或短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)。

前述方法的优选的方式是前述益生元为低聚果糖。

前述方法的优选的方式是前述奶粉或前述营养强化剂通过对孕产妇或哺乳期妇女给予而使用。

附图说明

图1是示出短双歧杆菌M-16V株的摄取对母乳中的CCL28浓度所产生的影响的图。

具体实施方式

以下对本发明进行详细地说明。

＜1＞有效成分

本发明中，利用双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌作为有效成分。

本发明中，进而还可以利用益生元作为有效成分。

即，统称为双歧杆菌属细菌和益生元(对于益生元，仅是作为有效成分而利用的情况)，也称为“有效成分”。

有效成分还可以是例如长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)和益生元的组合。

在一个方式中，通过利用有效成分、具体而言通过向对象给予有效成分，从而能够使该对象中母乳的特定成分含量增大。即，在一个方式中，通过利用有效成分、具体而言通过向对象给予有效成分，从而在该对象中可以得到母乳中的特定成分的含量增大的效果。也将相同效果称为“母乳成分增强效果”。另外，也将母乳中的特定成分的含量增大称为“母乳成分的增强”。也将如此增大了特定成分的含量的母乳称为“本发明的母乳”。本发明的母乳具体而言是给予了有效成分的对象的母乳、即给予了有效成分的对象所产生的母乳。有效成分具体而言可以以后述的“本发明的方法”中记载的方式向对象给予。

作为特定成分(被增强的母乳成分)，可列举出蛋白质。作为蛋白质，可列举出热休克蛋白、趋化因子、干扰素、凝集素。作为热休克蛋白，可列举出HSP70。作为趋化因子，可列举出CC趋化因子。作为CC趋化因子，可列举出CCL8(也称为“MCP-2”)、CCL21(也称为“6Ckine”)、CCL28(也称为“MEC”)。作为干扰素，可列举出干扰素γ(IFN-γ)。作为凝集素，可列举出半乳凝素。作为半乳凝素，可列举出半乳凝素9(Galectin-9)。即，作为特定成分，可具体列举出HSP70、CCL8、CCL21、CCL28、IFN-γ、半乳凝素-9。在一个方式中，作为特定成分，可特别列举出热休克蛋白、趋化因子、干扰素。另外，在一个方式中，作为特定成分，可进一步特别列举出HSP70、CCL8、CCL21、IFN-γ。例如，有效成分为长双歧杆菌、短双歧杆菌和益生元的组合的情况，作为特定成分，可特别列举出热休克蛋白、趋化因子、干扰素。另外，例如，有效成分为长双歧杆菌、短双歧杆菌和益生元的组合的情况，作为特定成分，可进一步特别列举出HSP70、CCL8、CCL21、IFN-γ。另外，在一个方式中，作为特定成分，可特别列举出CCL28。另外，在一个方式中，作为特定成分，可特别列举出半乳凝素-9。作为特定成分，可以增大1种成分的含量，还可以增大2种或2种以上的成分的含量。需要说明的是，在一个方式中，本发明中，可以排除特定成分为白细胞介素的情况、特别是为白细胞介素27(IL-27)或白细胞介素10(IL-10)的情况。另外，在一个方式中，本发明中，可以排除特定成分为RNA的情况。例如，在有效成分不是长双歧杆菌、短双歧杆菌和益生元的组合的情况下，本发明中，可以排除特定成分为RNA的情况。

另外，在一个方式中，通过利用有效成分、具体而言通过向对象给予有效成分，从而能够促进CCL28的分泌。即，在一个方式中，通过利用有效成分、具体而言通过向对象给予有效成分，从而可以得到促进CCL28的分泌的效果。也将相同效果称为“CCL28分泌促进效果”。作为分泌，可列举出粘膜组织中的分泌、乳腺中的分泌、向母乳中的分泌。通过促进粘膜组织中的CCL28分泌，从而可以得到例如抗菌效果、抗病毒效果、免疫功能的活化等效果。作为免疫功能的活化，可列举出IgA分泌促进。通过抗菌效果、抗病毒效果或免疫功能的活化而能够预防和/或治疗例如感染症。作为感染症，可列举出感染性肠胃炎、上呼吸道感染、口腔感染、子宫感染、乳腺炎。另外，通过促进粘膜组织中的CCL28分泌，从而能够例如调节肠道内微生物菌群。另外，通过促进乳腺中的CCL28分泌，从而能够预防和/或治疗例如乳腺炎。在一个方式中，本发明中，可以排除通过将双歧杆菌属细菌转移至乳腺来预防和/或治疗乳腺炎的情况。另外，通过促进向母乳中的CCL28分泌，从而能够增大母乳中的CCL28含量。这种母乳中的CCL28含量的增大也是母乳成分增强的一个例子。另外，如此增大了CCL28含量的母乳也是本发明的母乳的一个例子。

另外，通过利用本发明的母乳，具体而言通过向对象给予本发明的母乳，从而在该对象中可以得到各种效果。也将这样的效果称为“本发明的母乳的效果”。需要说明的是，为了便于说明，也将给予有效成分的对象称为“第一对象”，将给予本发明的母乳的对象称为“第二对象”。即，本发明的母乳是给予有效成分后的第一对象的母乳，本发明的母乳的效果是在第二对象中得到的效果。本发明的母乳的效果还可以是与所增强的母乳成分的种类、含量相符的效果。例如，作为在增强HSP70等热休克蛋白时所期待的效果，可列举出促进消化道的发育、促进消化道的紧密连接的形成、消化道的屏障功能的维持(Liedel JL.etal.,Mother's milk-induced Hsp70 expression preserves intestinal epithelialbarrier function in an immature rat pup model.Pediatr Res.2011 May；69(5 Pt1):395-400.)。另外，作为增强例如CCL8、CCL21、CCL28等趋化因子时所期待的效果，可列举出抗菌效果、抗病毒效果、免疫功能的活化(Gong W.et al.,Monocyte chemotacticprotein-2 activates CCR5 and blocks CD4/CCR5-mediated HIV-1entry/replication.J Biol Chem.1998 Feb 20；273(8):4289-92.；Yang D.et al.,Manychemokines including CCL20/MIP-3alpha display antimicrobial activity.J LeukocBiol.2003 Sep；74(3):448-55.；Yuan Lin et al.,CCL21 CancerImmunotherapy.Cancers (Basel).2014 Jun；6(2):1098-1110.)。作为免疫功能的活化，可列举出IgA分泌促进。通过抗菌效果、抗病毒效果、或免疫功能的活化而能够预防和/或治疗例如感染症。作为感染症，可列举出感染性肠胃炎、上呼吸道感染、口腔感染、子宫感染、乳腺炎。另外，作为增强CCL8、CCL21、CCL28等趋化因子时所期待的效果，还可列举出肠道内微生物菌群的调节。另外，作为增强例如IFN-γ等干扰素时所期待的效果，可列举出Th1型免疫应答的诱导、变态反应的抑制。另外，作为增强例如半乳凝素-9等凝集素时所期待的效果，可列举出变态反应的抑制。作为变态反应的抑制，可列举出变态反应的预防、治疗。本发明的母乳具体而言可以以后述的“本发明的母乳的利用”记载的方式向对象给予。

母乳成分增强效果可以通过测定给予有效成分时的母乳中的特定成分的含量来加以确认。母乳成分增强效果具体而言可以通过测定未给予有效成分时与给予有效成分时的母乳中的特定成分的含量并进行比较来加以确认。即，在与未给予有效成分时相比、给予有效成分时母乳中的特定成分的含量增大的情况下，能够判断可以得到母乳成分增强效果。特定成分的含量例如可以利用化合物的定量中使用的公知的方法进行确认。作为这样的方法，例如可列举出GC/MS、NMR、ELISA、多项目同时检测系统(Multiplex)等。

另外，本发明的母乳的效果可以通过测定与给予本发明的母乳时的该效果相对应的现象的有无或程度来加以确认。本发明的母乳的效果具体而言可以通过测定与未给予本发明的母乳时和给予本发明的母乳时的该效果相对应的现象的有无或程度并进行比较来加以确认。

另外，CCL28分泌促进效果或由此获得的效果可以通过与母乳成分增强效果或本发明的母乳的效果同样地进行确认。

另外，本发明提供有效成分在与母乳成分增强效果、CCL28分泌促进效果相伴的用途中的应用。即，本发明例如提供如下应用：母乳成分增强用的有效成分的应用、用于促进CCL28的分泌的有效成分的应用、用于得到通过促进CCL28的分泌而获得的效果的有效成分的应用、用于得到本发明的母乳的效果的有效成分的应用、用于制造本发明的母乳的有效成分的应用、及用于制造母乳成分增强用组合物、本发明的组合物的有效成分在用于促进CCL28的分泌的组合物等中的应用。另外，本发明提供用于与母乳成分增强效果、CCL28分泌促进效果相伴的用途的有效成分。即，本发明例如提供如下有效成分：用于增强母乳成分的有效成分、用于促进CCL28的分泌的有效成分、用于得到通过促进CCL28的分泌而获得的效果的有效成分、用于得到本发明的母乳的效果的有效成分、用于制造本发明的母乳的有效成分、及用于制造母乳成分增强用组合物、CCL28分泌促进用的组合物等本发明的组合物的有效成分。

另外，作为有效成分组合使用多种成分时，本发明提供用于与其它有效成分组合使用的各有效成分的应用。另外，组合使用多种成分作为有效成分时，本发明提供用于与其它有效成分组合使用的各有效成分。为了用于与母乳成分增强效果、CCL28分泌促进效果相伴的用途，各有效成分还可以与其它有效成分组合使用。

有效成分和本发明的母乳均可以以治疗目的加以利用，还可以以非治疗目的加以利用。即，上述示例那样的效果只要没有特别声明，则可以以治疗目的获得，也可以以非治疗目的获得。非治疗目的的情况，本说明书中提及的“治疗”可以解释为“改善”。“治疗目的”是指包括例如对人体进行用于治疗的处置行为，特别是意味着作为医疗行为而实施的情况。“非治疗目的”不包括例如对人体进行用于治疗的处置行为，特别是不意味着作为医疗行为而实施的情况。作为非治疗目的，可列举出健康增进、美容等目的。

＜双歧杆菌属细菌＞

双歧杆菌属细菌只要可以得到母乳成分增强效果等期望的效果就没有特别限制。具体而言，对于双歧杆菌属细菌，只要通过单独使用或与其它有效成分组合使用而可以得到母乳成分增强效果等期望的效果就没有特别限制。作为双歧杆菌属细菌，可列举出长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)、角双歧杆菌(Bifidobacterium angulatum)、齿双歧杆菌(Bifidobacterium dentium)、假小链双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)、动物双歧杆菌(Bifidobacteriumanimalis)、假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)、嗜热双歧杆菌(Bifidobacterium thermophilum)。作为双歧杆菌属细菌，可特别列举出长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp.Lactis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)。作为双歧杆菌属细菌，可进一步特别列举出短双歧杆菌。作为双歧杆菌属细菌，可以使用1种细菌，还可以组合使用2种或2种以上的细菌。即，作为双歧杆菌属细菌，例如还可以使用长双歧杆菌和/或短双歧杆菌。在一个方式中，作为双歧杆菌属细菌，特别是还可以组合使用长双歧杆菌和短双歧杆菌。

长双歧杆菌中还包括长双歧杆菌长亚种(B.longum subsp.longum)、长双歧杆菌婴儿亚种(B.longum subsp.infantis)、长双歧杆菌猪亚种(B.longum subsp.suis)等分类为长双歧杆菌的任意亚种的菌株。动物双歧杆菌中还包括动物双歧杆菌乳亚种(B.animalis subsp.lactis)等分类为动物双歧杆菌的任意亚种的菌株。假长双歧杆菌中还包括假长双歧杆菌球形亚种(B.pseudolongum subsp.globosum)、假长双歧杆菌假长亚种(B.pseudolongum subsp.pseudolongum)等分类为假长双歧杆菌的任意亚种的菌株。

长双歧杆菌只要可以得到母乳成分增强效果等期望的效果就没有特别限制。具体而言，对于长双歧杆菌，只要通过单独使用或与其它有效成分组合使用而可以得到母乳成分增强效果等期望的效果就没有特别限制。作为长双歧杆菌，可具体列举出BB536(BAA-999,NITE BP-02621)、ATCC 15697、ATCC 15707、ATCC 25962、ATCC 15702、ATCC 27533、M-63、BG7、DSM 24736、SBT 2928、NCC 490(CNCM I-2170)、NCC 2705(CNCM I-2618)。作为长双歧杆菌，可特别列举出BB536。作为长双歧杆菌，可以使用1种菌株，还可以使用2种或2种以上的菌株。

短双歧杆菌只要可以得到母乳成分增强效果等期望的效果就没有特别限制。具体而言，对于短双歧杆菌，只要通过单独使用或与其它有效成分组合使用而可以得到母乳成分增强效果等期望的效果就没有特别限制。作为短双歧杆菌，可具体列举出M-16V(NITEBP-02622)、MCC1274(B-3,FERM BP-11175)、ATCC 15700、B632(DSM 24706)、Bb99(DSM13692)、ATCC 15698、DSM 24732、UCC2003、YIT4010、YIT4064、BBG-001、BR-03、C50、R0070。作为短双歧杆菌，可特别列举出M-16V、DSM 24732、BBG-01。作为短双歧杆菌，可进一步特别列举出M-16V。作为短双歧杆菌，可以使用1种菌株，还可以使用2种或2种以上的菌株。

作为两歧双歧杆菌，可具体列举出ATCC 29521、OLB6378、BF-1。作为青春双歧杆菌，可具体列举出ATCC 15703。作为齿双歧杆菌，可具体列举出DSM 20436。作为动物双歧杆菌，可具体列举出DSM 10140、Bb-12、DN-173 010、GCL2505、CNCM I-3446。作为假长双歧杆菌，可具体列举出JCM 5820、ATCC 25526。作为嗜热双歧杆菌，可具体列举出ATCC 25525。

长双歧杆菌BB536于2018年1月26日在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(NITE)(现在的国家技术评估学会，专利微生物保藏中心、邮政编码：292-0818、地址：日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室)以NITE BP-02621的保藏编号进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。

短双歧杆菌M-16V于2018年1月26日在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(NITE)(现在的国家技术评估学会，专利微生物保藏中心、邮政编码：292-0818、地址：日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室)以NITE BP-02622的保藏编号进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。

这些菌株例如可以从美国典型培养物保藏中心(American Type CultureCollection：ATCC,Address:12301 Parklawn Drive,Rockville,Maryland 20852 P.O.Box1549,Manassas,VA 20108,United States of America)、比利时微生物协调保藏中心Belgian Coordinated Collections of Microorganisms：BCCM,Address:Rue de laScience 8,1000Brussels,Belgium)、或保藏有各菌株的保藏机构获得。

需要说明的是，以上述示例的菌株名特定的菌株不限定于以该菌株名保藏、注册于规定的机构的菌株本身(以下为了便于说明，也称为“保藏菌株”)，还包括与其实质上同等的菌株(“衍生株”或“诱变菌株”)。即，例如，“长双歧杆菌BB536”不限定于以BB536的保藏编号保藏于上述保藏机构的菌株本身，还包括与其实质上同等的菌株。对于各菌株，“与上述保藏菌株实质上同等的菌株”是指：属于与上述保藏菌株相同的种，通过单独使用或与其它有效成分组合使用而可以得到母乳成分增强效果等期望的效果，进而其16SrRNA基因的碱基序列相对于上述保藏菌株的16SrRNA基因的碱基序列、优选具有99.86％以上、更优选具有99.93％以上、进一步优选具有100％的同一性，且优选具有与上述保藏菌株相同的菌学性质的菌株。对于各菌株，与上述保藏菌株实质上同等的菌株例如还可以是以该保藏菌株为亲本菌株的衍生株。作为衍生株，可列举出由保藏菌株经育种的菌株、由保藏菌株自然生长的菌株。作为育种方法，可列举出基于基因工程学方法的修饰、基于突变处理的修饰。作为突变处理，可列举出X射线的照射、紫外线的照射、以及基于N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)、甲磺酸乙酯(EMS)和甲磺酸甲酯(MMS)等诱变剂的处理。作为由保藏菌株自然生长的菌株，可列举出在使用保藏菌株时自然生长的菌株。作为这样的菌株，可列举出通过保藏菌株的培养(例如传代培养)而自然生长的突变株。衍生株可以通过1种修饰来构建，还可以通过2种或2种以上的修饰来构建。

作为双歧杆菌属细菌，可以使用市售品，还可以使用通过适宜制造而获得的细菌。作为市售品，例如可列举出森永乳业株式会社制的长双歧杆菌长亚种BB536、短双歧杆菌M-16V。另外，双歧杆菌属细菌的菌体可以通过对双歧杆菌属细菌进行培养而容易地获得。培养方法只要能使双歧杆菌属细菌增殖就没有特别限制。作为培养方法，例如可以直接使用或进行适宜修改地使用双歧杆菌属细菌的培养中通常使用的方法。培养温度例如可以为25～50℃，优选为35～42℃。培养可以优选在厌氧条件下实施，例如可以边通入二氧化碳等厌氧气体边实施培养。另外，培养还可以在液体静置培养等微好氧条件下实施。例如可以将双歧杆菌属细菌增殖至期望的程度来实施培养。

培养中使用的培养基只要使双歧杆菌属细菌增殖就没有特别限制。作为培养基，例如可以直接、或进行适宜修改地使用双歧杆菌属细菌的培养中通常使用的培养基。即，作为碳源，例如可以根据同化性而使用半乳糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、纤维素二糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、淀粉、淀粉水解物、黑糖蜜等糖类。作为氮源，例如可以使用氨、硫酸铵、氯化铵、硝酸铵等铵盐类、硝酸盐类。另外，作为无机盐类，例如可以使用氯化钠、氯化钾、磷酸钾、硫酸镁、氯化钙、硝酸钙、氯化锰、硫酸亚铁等。另外，作为培养基成分，还可以使用蛋白胨、大豆粉、脱脂大豆粕、肉提取物、酵母提取物等有机成分。另外，作为培养基成分，还可以使用乳成分。作为乳成分，可列举出乳蛋白。作为乳蛋白，可列举出酪蛋白、乳清、它们的分解物。这些成分可以单独使用或适宜组合加以利用。另外，作为双歧杆菌属细菌的培养中通常使用的培养基，可具体列举出梭菌强化培养基(Reinforced Clostridial medium)、MRS培养基(de Man,Rogosa,and Sharpe medium)、mMRS培养基(modified MRS medium)、TOSP培养基(TOS propionate medium)、TOSP Mup培养基(TOS propionate mupirocinmedium)。

作为双歧杆菌属细菌，可以没有特别限制地使用双歧杆菌属细菌的菌体或含有其的级分。即，作为双歧杆菌属细菌，例如，可以直接使用通过培养而得到的培养物，可以将培养物稀释或浓缩来使用，还可以使用由培养物回收的菌体。另外，只要不损害母乳成分增强效果等期望的效果，就可以在培养后进行加热、冷冻干燥等各种追加操作。追加操作优选菌体的存活率高者。即，作为双歧杆菌属细菌，可具体列举出双歧杆菌属细菌的培养物、由相同培养物回收的菌体、它们的稀释物、浓缩物、干燥物等处理物。菌体可以是活菌体，还可以是死菌体。菌体例如可以是由活菌体形成的菌体，可以是由死菌体形成的菌体，还可以是活菌体与死菌体的混合物。在一个方式中，菌体可以以含有活菌体的形态使用。在一个方式中，菌体例如可以是由活菌体形成的菌体，还可以是活菌体与死菌体的混合物。例如，有效成分为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)和益生元的组合的情况下，菌体还可以以含有活菌体的形态使用。

作为在利用活菌体时能利用的处理，可列举出菌液冷冻法、喷雾干燥法(Spraydry method)、冷冻干燥法、油柱成型法(Oil-drop method)。死菌体例如可以通过将活菌体供于杀菌处理而制备。作为杀菌处理，可列举出加热处理、喷雾干燥法(Spray drymethod)、蒸煮杀菌法、冷冻干燥法、UHT杀菌法、加压杀菌法、高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法、流通蒸汽消毒法、电磁波杀菌法、电子射线灭菌法、高频灭菌法、辐射线灭菌法、紫外线杀菌法、环氧乙烷气体灭菌法、过氧化氢气体等离子体灭菌法、酒精杀菌法、福尔马林固定法、电解水处理法。作为加热处理，可列举出在70～100℃下10～60分钟的加热。

＜益生元＞

“益生元”可以指：在肠道内能够使有益的细菌选择性地增殖的难消化性的食品成分。作为有益的细菌，可列举出双歧杆菌属细菌。即，作为益生元，特别优选使双歧杆菌属细菌选择性地增殖的成分。作为益生元，可以使用1种成分，还可以组合使用2种或2种以上的成分。

益生元只要可以得到母乳成分增强效果等期望的效果、具体而言只要通过与双歧杆菌属细菌(例如，长双歧杆菌和/或短双歧杆菌)的组合使用而可以得到母乳成分增强效果等期望的效果就没有特别限制。作为益生元，可列举出低聚糖、食物纤维、葡糖酸。作为低聚糖，可列举出半乳寡聚糖、低聚果糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、棉子糖、乳酮糖、半乳蔗糖、大豆低聚糖、咖啡低聚糖。另外，作为低聚糖，可列举出母乳低聚糖。作为母乳低聚糖，可列举出2’-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、2’,3-二岩藻糖基乳糖、乳糖-N-三糖II、乳糖-N-四糖、乳糖-N-新四糖、乳糖-N-岩藻五糖I、乳糖-N-新岩藻五糖、乳糖-N-岩藻五糖II、乳糖-N-岩藻五糖III、乳糖-N-岩藻五糖V、乳糖-N-新岩藻五糖V、乳糖-N-二岩藻六糖I、乳糖-N-二岩藻六糖II、6’-半乳糖寡糖、3’-半乳糖寡糖、乳糖-N-六糖和乳糖-N-新六糖等中性母乳低聚糖、3’-唾液乳糖、6’-唾液乳糖、3-岩藻糖基-3’-唾液乳糖、二唾液酸基-乳糖-N-四糖等酸性母乳低聚糖。低聚糖的长度例如可以为3～10残基、3～7残基或3～5残基。作为低聚果糖，可列举出1个或1个以上的果糖残基通过β(2→1)键与蔗糖的果糖残基键合的低聚果糖。作为低聚果糖，可具体列举出1-蔗果三糖(1-kestose；也称为“GF₂”)、蔗果四糖(nystose；也称为“GF₃”)、1^F-β-蔗果五糖(1^F-beta-fructofuranosylnystose；也称为“GF₄”)。低聚果糖例如可以包含选自GF₂、GF₃和GF₄中的1种、2种或全部3种。作为食物纤维，可列举出聚葡萄糖、菊糖。作为益生元，可特别列举出低聚糖。作为益生元，可进一步特别列举出低聚果糖。

作为益生元，可以使用市售品，还可以使用适宜制造而获得的益生元。益生元的制造方法没有特别限制。益生元可以通过例如化学合成、酶反应、发酵法、提取法、或它们的组合而制造。益生元还可以精制至期望的程度。即，作为益生元，可以使用精制品，还可以使用含有益生元的材料。作为益生元，例如可以使用纯度为50％(w/w)以上、70％(w/w)以上、90％(w/w)以上、或95％(w/w)以上的益生元。

＜2＞本发明的组合物

本发明的组合物为含有上述的有效成分的组合物。

即，本发明的组合物为含有双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌的组合物。

本发明的组合物还可以进一步含有益生元。

本发明的组合物例如可以是含有长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)和益生元的组合物。

本发明的组合物可以向对象给予来加以利用。本发明的组合物具体而言可以以后述的“本发明的方法”记载的方式向对象给予。给予本发明的组合物的对象是第一对象(给予有效成分的对象)的一个例子。本发明的组合物例如可以为了得到上述示例那样的效果而利用。

在一个方式中，通过利用本发明的组合物、具体而言通过向对象给予本发明的组合物，从而能够增大该对象中母乳中的特定成分的含量，即可以得到母乳成分增强效果。即，本发明的组合物可以是母乳成分增强用组合物。在一个方式中，本发明的组合物可以是含有长双歧杆菌、短双歧杆菌和益生元的母乳成分增强用组合物。另外，在一个方式中，本发明的组合物可以是含有双歧杆菌属细菌的母乳中的半乳凝素-9增强用组合物。

另外，在一个方式中，通过利用本发明的组合物、具体而言通过向对象给予本发明的组合物，从而能够促进该对象中CCL28的分泌，即，可以得到CCL28分泌促进效果。即，本发明的组合物可以是CCL28分泌促进用组合物。即，在一个方式中，本发明的组合物可以是含有双歧杆菌属细菌的CCL28分泌促进用组合物。另外，本发明的组合物(具体而言，CCL28分泌促进用组合物)可以是用于得到通过促进CCL28的分泌而获得的效果的组合物。即，本发明的组合物(具体而言，CCL28分泌促进用组合物)例如可以是抗菌用、抗病毒用或免疫功能活化用的组合物。另外，本发明的组合物(具体而言，CCL28分泌促进用组合物)例如可以是IgA分泌促进用组合物。另外，本发明的组合物(具体而言，CCL28分泌促进用组合物)例如可以是感染症的预防和/或治疗用组合物。另外，本发明的组合物(具体而言，CCL28分泌促进用组合物)例如可以是乳腺炎的预防和/或治疗用组合物。需要说明的是，在一个方式中，还可以从本发明的组合物(具体而言，CCL28分泌促进用组合物)中排除通过使双歧杆菌属细菌转移至乳腺而可预防和/或治疗乳腺炎的情况。另外，本发明的组合物(具体而言，CCL28分泌促进用组合物)例如可以是母乳中的CCL28增强用组合物。

另外，通过利用本发明的母乳、具体而言向对象给予本发明的母乳，从而在该对象中可以得到本发明的母乳的效果。即，本发明的组合物可以是用于通过利用本发明的母乳而获得本发明的母乳的效果的组合物。换言之，本发明的组合物可以是出于在给予第一对象的母乳(本发明的母乳)的第二对象中得到本发明的母乳的效果的目的而用于向第一对象给予的组合物。即，本发明的组合物例如可以是出于第二对象中的促进消化道的发育、促进消化道的紧密连接的形成、或消化道的屏障功能的维持的目的而用于向第一对象给予的组合物。另外，本发明的组合物例如可以是出于第二对象中的抗菌效果、抗病毒效果、或免疫功能的活化的目的而用于向第一对象给予的组合物。另外，本发明的组合物例如可以是出于第二对象中的IgA分泌促进的目的而用于向第一对象给予的组合物。另外，本发明的组合物例如可以是出于第二对象中的感染症的预防和/或治疗的目的而用于向第一对象给予的组合物。另外，本发明的组合物例如可以是出于第二对象中的肠道内微生物菌群的调节的目的而用于向第一对象给予的组合物。另外，本发明的组合物例如可以是出于第二对象中的Th1型免疫应答的诱导的目的而用于向第一对象给予的组合物。另外，本发明的组合物例如可以是出于第二对象中的变态反应的抑制的目的而用于向第一对象给予的组合物。

对于给予本发明的组合物的对象，可以适用关于“本发明的方法”中的给予有效成分的对象的记载。即，作为给予本发明的组合物的对象，可列举出人(即人类女性)等雌性的哺乳动物。另外，作为给予本发明的组合物的对象，人的情况可列举出孕产妇、哺乳期妇女。

对于给予本发明的母乳的对象，可以适用关于“本发明的母乳的利用”中的给予本发明的母乳的对象的记载。即，作为给予本发明的母乳的对象，可列举出人等哺乳动物。另外，作为给予本发明的母乳的对象，人的情况可列举出婴儿、幼儿。

另外，组合使用多种成分作为有效成分时，如上所述各有效成分可以与其它有效成分组合使用。即，本发明的组合物的其它方式还可以是含有选自有效成分中的至少1种成分(也称为“选择成分”)的组合物，且与选自有效成分中的剩余成分(也称为“余量成分”)组合使用的组合物。本发明的组合物的其它方式例如可以是含有选自长双歧杆菌、短双歧杆菌和益生元中的至少1种成分的组合物，且与选自长双歧杆菌、短双歧杆菌和益生元中的剩余成分组合使用的组合物。对于本发明的组合物的其它方式，除了含有选择成分、且与余量成分组合使用之外，可以适用上述的本发明的组合物的记载。本发明的组合物的其它方式例如可以为了获得上述示例那样的效果而利用。余量成分可以在给予组合物之前向对象给予，可以与组合物同时向对象给予，还可以在给予组合物后向对象给予。对于组合使用的时机，可以适用关于“本发明的方法”中的有效成分的给予的记载。

本发明的组合物例如还可以是饮食品组合物、药物组合物或饲料组合物。即，本发明例如可以提供用于母乳成分增强用途、CCL28分泌促进用途等上述示例的用途的饮食品组合物；用于母乳成分增强用途、CCL28分泌促进用途等上述示例的用途的药物组合物；或用于母乳成分增强用途、CCL28分泌促进用途等上述示例的用途的饲料组合物。还可以将这些组合物分别称为“本发明的饮食品组合物”、“本发明的药物组合物”和“本发明的饲料组合物”。

本发明的组合物可以由有效成分组成，还可以含有除有效成分以外的成分。

除有效成分以外的成分只要不损害母乳成分增强效果等期望的效果就没有特别限制。作为除有效成分以外的成分，可以根据本发明的组合物的利用方式利用可接受的成分。作为除有效成分以外的成分，例如可以利用配混在饮食品、药物或饲料中而被利用的成分。作为除有效成分以外的成分，可具体列举出对于后述的饮食品组合物、药物组合物或饲料组合物所示例的成分。作为除有效成分以外的成分，可以使用1种成分，还可以组合使用2种或2种以上的成分。

本发明的组合物中的各成分(即，有效成分和任选其它成分)的含量、含量比只要可以得到母乳成分增强效果等期望的效果就没有特别限制。本发明的组合物中的各成分的含量、含量比可以根据有效成分的种类、其它成分的种类、组合物的种类、形状(剂型)和用法、给予对象的种类、年龄和健康状态等各条件进行适宜设定。

本发明的组合物中的双歧杆菌属细菌的含量例如可以是1×10⁴cfu/g以上、1×10⁵cfu/g以上、1×10⁶cfu/g以上、或1×10⁷cfu/g以上，可以是10¹³cfu/g以下、10¹²cfu/g以下、或1×10¹¹cfu/g以下，可以是这些组合的范围。另外，本发明的组合物中的双歧杆菌属细菌的含量例如可以是1×10⁴cfu/mL以上、1×10⁵cfu/mL以上、1×10⁶cfu/mL以上、或1×10⁷cfu/mL以上，可以是10¹³cfu/mL以下、10¹²cfu/mL以下、或1×10¹¹cfu/mL以下，可以是这些组合的范围。本发明的组合物中的双歧杆菌属细菌的含量具体而言例如可以是1×10⁴～1×10¹³cfu/g或1×10⁴～1×10¹³cfu/ml，可以是1×10⁶～1×10¹²cfu/g或1×10⁶～1×10¹²cfu/ml，可以是1×10⁷～1×10¹¹cfu/g或1×10⁷～1×10¹¹cfu/ml。另外，对于组合物中的双歧杆菌属细菌的含量，例如本发明的组合物为饮食品组合物时，优选为1×10⁴～1×10¹³cfu/g或1×10⁴～1×10¹³cfu/ml，更优选为1×10⁷～1×10¹¹cfu/g或1×10⁷～1×10¹¹cfu/ml。另外，对于本发明的组合物中的双歧杆菌属细菌的含量，例如本发明的组合物为药物组合物时，优选为1×10⁴～1×10¹³cfu/g或1×10⁴～1×10¹³cfu/ml，更优选为1×10⁷～1×10¹¹cfu/g或1×10⁷～1×10¹¹cfu/ml。另外，对于本发明的组合物中的双歧杆菌属细菌的含量，例如本发明的组合物为饲料组合物时，优选为1×10⁶～1×10¹²cfu/g或1×10⁶～1×10¹²cfu/ml，更优选为1×10⁷～1×10¹¹cfu/g或1×10⁷～1×10¹¹cfu/ml。需要说明的是，使用2种或2种以上的双歧杆菌属细菌时，上述示例的本发明的组合物中的双歧杆菌属细菌的含量可以是这2种或2种以上的双歧杆菌属细菌的总含量，还可以是各自的含量。即，具体而言，组合使用长双歧杆菌和短双歧杆菌作为双歧杆菌属细菌时，本发明的组合物中的长双歧杆菌和短双歧杆菌的含量各自可以是例如上述示例的本发明的组合物中的双歧杆菌属细菌的含量的范围。“cfu”表示colony forming unit(菌落形成单位)。有效成分为死菌体时，“cfu”可以替换为“cells”。

本发明的组合物中的益生元的含量例如可以是1％(w/w)以上、5％(w/w)以上、或10％(w/w)以上，可以是90％(w/w)以下、70％(w/w)以下、50％(w/w)以下、30％(w/w)以下、20％(w/w)以下、10％(w/w)以下、或5％(w/w)以下，还可以是这些不矛盾的组合的范围。本发明的组合物中的益生元的含量具体而言例如可以是1％(w/w)～90％(w/w)，可以是1％(w/w)～70％(w/w)，可以是1％(w/w)～50％(w/w)，可以是1％(w/w)～20％(w/w)。另外，对于本发明的组合物中的益生元的含量，例如本发明的组合物为饮食品组合物时，优选为1～70％(w/w)。另外，对于本发明的组合物中的益生元的含量，例如本发明的组合物为药物组合物时，优选为1～70％(w/w)。另外，对于本发明的组合物中的益生元的含量，例如本发明的组合物为饲料组合物时，优选为1～70％(w/w)。需要说明的是，使用2种或2种以上的益生元时，上述示例的本发明的组合物中的益生元的含量还可以是这2种或2种以上的益生元的总含量。另外，在使用含有益生元的材料时，只要没有特别声明则益生元的含量是基于该材料中的益生元本身的量计算出的值。

另外，本发明的组合物中的各有效成分的含量例如可以以得到后述那样的各有效成分的给予量的方式进行设定。

本发明的组合物的形状没有特别限制。作为本发明的组合物的形状，可以根据本发明的组合物的利用方式采用可接受的形状。作为本发明的组合物的形状，可具体列举出对于后述的饮食品组合物、药物组合物、或饲料组合物所示例那样的形状。

有效成分和其它成分可以彼此混合而包含在本发明的组合物中，还可以各自独立地或以任意的组合独立地包含在本发明的组合物中。例如，本发明的组合物含有多种有效成分(例如，长双歧杆菌、短双歧杆菌和益生元)时，本发明的组合物可以以各自独立包装的、该多种有效成分的套装的形式来提供。在此情况下，将该多种有效成分进行适宜组合并向对象给予即可。

＜饮食品组合物＞

本发明的饮食品组合物只要含有有效成分就没有特别限制。本发明的饮食品组合物可以以液态、膏状、凝胶状固体、粉末等任意的形状来提供。

饮食品组合物例如可以是饮食品本身，还可以是用于制造饮食品的材料。作为这样的材料，可列举出调味剂、食品添加物、其它饮食品原料。可列举出饮食品组合物，可具体列举出面包、通心粉、意大利细面条、面类、蛋糕混合料、油炸粉、面包粉等小麦粉产品；方便面、杯面、蒸煮/烹调食品、烹调罐头、微波用食品、速溶汤/日式炖菜、速溶大酱汤/吸入物、罐装浓汤、冻/干食物、其它速食品等速食食品类；农作物罐头、水果罐头、果酱(jam)/橘子酱(Marmalade)类、咸菜、煮豆类、农产品干物类、谷物(谷物加工品)等农产加工品；水产罐头、鱼肉火腿/香肠、水产糜类产品、水产鱼贝类、佃煮类等水产加工品；畜产罐头/糊剂类、畜肉火腿/香肠等畜产加工品；加工乳、乳饮料、酸奶类、乳酸菌饮料类、乳酪、冰激凌类、配方奶粉类、奶油、其它乳制品等乳/乳制品；黄油、人造奶油类、植物油等油脂类；酱油、大酱、沙司(Sauce)类、西红柿加工调味剂、味醂类、食醋类等基础调味剂；烹调混合料、咖喱的原料类、鱼露类、沙拉(dressing)类、面汤类、香辛料类、其它复合调味剂等复合调味剂/食品类；材料冷冻食品、半烹调冷冻食品、经烹调的冷冻食品等冷冻食品；焦糖、糖果、软糖、口香糖、巧克力、曲奇(cookie)、饼干(biscuits)、蛋糕(cake)、馅饼(pie)、小吃(snack)、薄脆饼(cracker)、日本点心、米点心、豆点心、西式甜点、压片糖、其它点心等点心类；碳酸饮料、天然果汁、果汁饮料、带有果汁的清凉饮料、果肉饮料、带有果粒的果实饮料、蔬菜系饮料、豆奶、豆奶饮料、咖啡饮料、茶饮料、粉末饮料、浓缩饮料、运动饮料、营养饮料、酒精饮料、其它嗜好饮料等嗜好饮料类；流质食品、婴儿食品、米饭伴侣、茶泡饭海带等其它市售食品等；育儿用配方奶粉；经肠营养食品；特殊用途食品、保健功能食品(特定保健用食品、营养功能食品、功能性标示食品)；营养辅助食品等。另外，饮食品组合物可以是营养强化剂，例如可以是压片状的营养强化剂。饮食品组合物为营养强化剂时，对于每一天的饮食量和摄取卡路里，可以摄取有效成分而不对其它食品产生影响。

本发明的饮食品组合物可以通过将有效成分与其它成分组合而制造。也将对有效成分与其它成分进行组合的操作称为“有效成分的添加”。本发明的饮食品组合物的制造方法没有特别限制。本发明的饮食品组合物除了添加有效成分以外例如可以使用与通常的饮食品同样的原料并利用与通常的饮食品同样的方法来制造。在将本发明的饮食品组合物制造成用于制造调味剂、食品添加物、其它饮食品原料等饮食品的材料的情况也是同样。有效成分的添加可以在饮食品组合物的制造工序的任意阶段实施。有效成分的添加例如可以在饮食品组合物的制造过程中或制造后实施。即，例如，还可以在预先制备的饮食品中添加有效成分而制成本发明的饮食品组合物。另外，还可以经过基于所添加的有效成分(特别是双歧杆菌属细菌)的发酵工序来制造饮食品组合物。作为经过发酵工序而制造的饮食品组合物，可列举出乳酸菌饮料、发酵乳等发酵制品。即，有效成分(特别是双歧杆菌属细菌)例如还可以用作发酵制品的制造用的起子。另外，有效成分还可以在之后添加在所制造的发酵制品中。

另外，还可以使用本发明的饮食品组合物来进一步制造其它饮食品组合物。即，例如，以调味剂、食品添加物、其它饮食品原料等用于制造饮食品的材料的形式提供本发明的饮食品组合物时，可以通过在饮食品的原料中添加本发明的饮食品组合物来制造其它饮食品组合物。如此制造的其它饮食品组合物也是本发明的饮食品组合物的一个方式。对于本发明的饮食品组合物的添加，可以适用关于有效成分在制造饮食品组合物中的添加的记载。

本发明的饮食品组合物可以以标示出为母乳成分增强用的等上述示例那样的用途的饮食品组合物(例如饮食品、其材料)的形式贩卖。换言之，本发明的饮食品组合物可以标示出“母乳成分增强用”等语句。需要说明的是，所标示的语句不限定于表示母乳成分增强用的等上述示例那样的用途的语句，可以是表示通过在上述示例那样的用途中的组合物的利用而产生的效果的语句。例如，作为在母乳成分增强用这样的用途中的组合物的利用而产生的效果，可列举出本发明的母乳的效果。

前述“标示”行为包括用于使需要者知悉上述用途的全部行为，只要是可想起或类推上述用途的标示则不论标示目的、标示内容、标示对象物/介质等如何，均相当于本发明的“标示”。然而，标示优选通过需要者直接意识到上述用途的表现方式来标示。

作为标示，具体而言可以示例出对在本发明的饮食品组合物的商品或商品的包装上记载了上述用途的物品进行转让、交货、为了转让或交货而进行展示、进口的行为；在与商品有关的广告、价格表或交易文件中记载上述用途并展示或发布、或在以这些为内容的信息中记载上述用途并通过电磁方法(互联网等)进行提供的行为；等特别优选标示在包装、容器、商品目录、宣传手册、POP等销售现场的宣传材料、其他文件等中。

另外，作为标示，优选为得到行政等许可的标示(例如，基于行政规定的各种制度而得到许可、并以基于这样的许可的形态进行的标示)。作为这样的标示，例如可以示例出作为保健功能食品、健康食品、功能性食品、经肠营养食品、特殊用途食品、营养辅助食品、准药物等的标示，还可以示例出其他经消费厅许可的标示。作为其他经消费厅许可的标示，特定保健用食品、营养功能食品、功能性标示食品或与这些类似的制度许可的标示。作为经消费厅许可的标示，具体而言，可以示例出作为特定保健用食品的标示、作为附加条件的特定保健用食品的标示、主旨为对身体的结构、功能带来影响的标示、降低疾病风险的标示、基于科学根据的功能性的标示等。作为经消费厅许可的标示，更具体而言，可以示例出作为关于健康增进法中规定的特别用途标示的许可等的内阁府令(平成二十一年八月三十一日内閣府令第五十七号)所确定的特定保健用食品的标示(特别是保健用途的标示)及与其类似的标示等。

本发明的食品组合物具体而言例如可以是母乳成分增强用奶粉。母乳成分增强用奶粉例如可以利用以下的方法而制造。

即，本发明提供母乳成分增强用奶粉的制造方法，其包括下述工序(A)～(C)：

(A)用含有乳成分的培养基培养双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌，得到培养物的工序；

(B)将前述培养物供于喷雾干燥和/或冷冻干燥，得到菌体粉末的工序；

(C)将前述菌体粉末和益生元混合，得到母乳成分增强用奶粉的工序。

另外，本发明提供母乳成分增强用奶粉的制造方法，其包括下述工序(A)：

(A)将益生元、双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌和乳成分混合，得到奶粉的工序。

另外，本发明的食品组合物具体而言例如可以是母乳成分增强用营养强化剂。母乳成分增强用营养强化剂例如可以利用以下的方法而制造。

即，本发明提供乳成分增强用营养强化剂的制造方法，其包括下述工序(A)和(B)：

(A)将益生元、双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌和赋形剂混合，得到混合物的工序；

(B)将前述混合物压片的工序。

上述任意的制造方法中均可以适宜组合使用除上述工序中提及的成分以外的成分。

＜药物组合物＞

本发明的药物组合物只要含有有效成分就没有特别限制。作为本发明的药物组合物，例如，可以直接使用有效成分，还可以将有效成分进行适宜制剂化而使用。

本发明的药物组合物的剂型没有特别限制。作为剂型，可具体列举出片剂、丸剂、散剂、液剂、悬浮剂、乳剂、颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂和栓剂等。另外，进行制剂化时，可以使用赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂、矫味矫臭剂、稀释剂、表面活性剂和溶剂等生理上可接受的添加剂。这些添加剂可以根据剂型等各条件进行适宜选择。作为添加剂，可列举出各种有机成分和无机成分。

作为赋形剂，可列举例如：乳糖、白糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇等糖衍生物；玉米淀粉、马铃薯淀粉、α-淀粉、糊精、羧甲基淀粉等淀粉衍生物；结晶纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙等纤维素衍生物；阿拉伯胶；葡聚糖；普鲁兰多糖；轻质无水硅酸、合成硅酸铝、偏硅酸铝酸镁等硅酸盐衍生物；磷酸钙等磷酸盐衍生物；碳酸钙等碳酸盐衍生物；硫酸钙等硫酸盐衍生物等。

作为结合剂，例如除了上述赋形剂以外还可列举：明胶；聚乙烯基吡咯烷酮；Macrogol等。

作为崩解剂，例如除了上述赋形剂以外还可列举：交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯基吡咯烷酮等经化学修饰的淀粉或纤维素衍生物等。

作为润滑剂，可列举例如：滑石；硬脂酸；硬脂酸钙、硬脂酸镁等硬脂酸金属盐；硅胶；胶状硅酸镁铝(VEEGUM)、鲸蜡等蜡类；硼酸；甘醇；富马酸、己二酸等羧酸类；苯甲酸钠等羧酸钠盐；硫酸钠等硫酸盐类；亮氨酸；月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁等月桂基硫酸盐；硅酸酐、硅酸水合物等硅酸类；淀粉衍生物等。

作为稳定剂，可列举例如：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等对羟基苯甲酸酯类；氯代丁醇、苯甲醇、苯乙醇等醇类；苯扎氯铵；乙酸酐；山梨酸等。

作为矫味矫臭剂，可列举例如甜味剂、酸味剂、香料等。

＜饲料组合物＞

本发明的饲料组合物只要含有有效成分就没有特别限制。作为饲料组合物，可列举出宠物食品、家畜饲料。本发明的饲料可以以粉末状、颗粒状、碎片状、粒料状、立方体状、膏状、液态等任意的形状来提供。

本发明的饲料组合物可以通过将有效成分与其它成分组合来制造。也将对有效成分与其它成分进行组合的操作称为“有效成分的添加”。本发明的饲料组合物的制造方法没有特别限制。本发明的饲料组合物除了添加有效成分以外例如可以使用与通常的饲料同样的原料并利用与通常的饲料同样的方法来制造。有效成分的添加可以在饲料组合物的制造工序的任意阶段实施。有效成分的添加例如可以在饲料组合物的制造过程中或制造后实施。即，例如，还可以在预先制备的饲料中添加有效成分而制成本发明的饲料组合物。另外，还可以经过基于所添加的有效成分(特别是双歧杆菌属细菌)的发酵工序来制造饲料组合物。作为经过发酵工序而制造的饲料组合物，可列举出青贮(silage)。

＜3＞本发明的方法

本发明的方法是包括向对象给予上述的有效成分的工序的方法。也将相同工序称为“给予工序”。

即，本发明的方法是包括向对象给予双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌的工序的方法。

本发明的方法还可以进一步包括向对象给予益生元的工序。

本发明的方法例如可以是包括向对象给予长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)和益生元的工序的方法。

在一个方式中，通过利用本发明的方法、具体而言通过向对象给予有效成分，从而能够增大该对象中母乳中的特定成分的含量，即可以得到母乳成分增强效果。即，本发明的方法还可以是增强母乳成分(母乳中的特定成分)的方法。在一个方式中，本发明的方法可以是包括向对象给予长双歧杆菌、短双歧杆菌和益生元的工序的增强母乳成分的方法。另外，在一个方式中，本发明的方法可以是包括向对象给予双歧杆菌属细菌的工序的、增强母乳中的半乳凝素-9的方法。

另外，在一个方式中，通过利用本发明的方法、具体而言通过向对象给予有效成分，从而能够促进该对象中CCL28的分泌、即可以得到CCL28分泌促进效果。即，本发明的方法可以是促进CCL28的分泌的方法。即，在一个方式中，本发明的方法可以是包括向对象给予双歧杆菌属细菌的工序的促进CCL28的分泌的方法。另外，本发明的方法(具体而言，促进CCL28的分泌的方法)可以是为了得到通过促进CCL28的分泌而获得的效果而实施的方法。即，本发明的方法(具体而言，促进CCL28的分泌的方法)例如可以是得到抗菌效果的方法、得到抗病毒效果的方法、或使免疫功能活化的方法。另外，本发明的方法(具体而言，促进CCL28的分泌的方法)例如可以是促进IgA的分泌的方法。另外，本发明的方法(具体而言，促进CCL28的分泌的方法)例如可以是预防和/或治疗感染症的方法。另外，本发明的方法(具体而言，促进CCL28的分泌的方法)例如可以是预防和/或治疗乳腺炎的方法。需要说明的是，在一个方式中，可以从预防和/或治疗乳腺炎的方法中排除通过使双歧杆菌属细菌转移至乳腺中而预防和/或治疗乳腺炎的情况。另外，本发明的方法(具体而言，促进CCL28的分泌的方法)例如可以是增强母乳中的CCL28的方法。

另外，通过利用本发明的母乳、具体而言通过向对象给予本发明的母乳，从而在该对象中可以得到本发明的母乳的效果。即，本发明的方法可以是为了通过利用本发明的母乳而获得本发明的母乳的效果而实施的方法。换言之，本发明的方法可以是出于在给予第一对象的母乳(本发明的母乳)的第二对象中得到本发明的母乳的效果的目的而对第一对象所实施的方法。即，本发明的方法例如可以是出于第二对象中的促进消化道的发育、促进消化道的紧密连接的形成、或消化道的屏障功能的维持的目的而对第一对象所实施的方法。另外，本发明的方法例如可以是出于第二对象中的抗菌效果、抗病毒效果、或免疫功能的活化的目的而对第一对象所实施的方法。另外，本发明的方法例如可以是出于第二对象中的IgA分泌促进的目的而对第一对象所实施的方法。另外，本发明的方法例如可以是出于第二对象中的感染症的预防和/或治疗的目的而对第一对象所实施的方法。另外，本发明的方法例如可以是出于第二对象中的肠道内微生物菌群的调节的目的而对第一对象所实施的方法。另外，本发明的方法例如可以是出于第二对象中的Th1型免疫应答的诱导的目的而对第一对象所实施的方法。另外，本发明的方法例如可以是出于第二对象中的变态反应的抑制的目的而对第一对象所实施的方法。

需要说明的是，“向对象给予有效成分”可以与“让对象摄取有效成分”为同义。摄取可以是自发地摄取(自由摄取)，还可以是强制地摄取(强制摄取)。即，给予工序具体而言例如可以是将有效成分配混在饮食品、饲料中并供给于对象，由此让对象自由摄取有效成分的工序。给予可以是经口给予，还可以是非经口给予。给予通常可以是经口给予。作为非经口给予，可列举出经管给予、直肠道内给予。

有效成分的给予方式(例如，给予对象、给予时期、给予期间、给予次数、给予量、其它给予的条件)只要可以得到母乳成分增强效果等期望的效果就没有特别限制。有效成分的给予方式可以根据有效成分的种类、给予对象的种类、年龄和健康状态等各条件进行适宜设定。

给予有效成分的对象只要可以得到母乳成分增强效果等期望的效果就没有特别限制。作为给予有效成分的对象，可列举出哺乳动物。作为哺乳动物，可列举出人、牛、绵羊、山羊、水牛、驯鹿、驴、骆驼、狗、猫、猪、马。作为哺乳动物，尤其可列举出人。哺乳动物可以是雄性，还可以是雌性。哺乳动物尤其可以是雌性。即，作为哺乳动物，进而尤其可列举出人类女性。在至少以得到与母乳成分增强效果等母乳相关的效果的目的的情况下，作为给予有效成分的对象，可选择能够产生母乳的对象(即雌性的哺乳动物)。

有效成分例如可以日常给予，还可以在特定的期间进行给予。有效成分例如可以在产生母乳之前的期间预先给予，可以在产生母乳的期间给予，还可以在这两者的期间给予。在产生母乳之前的期间预先给予有效成分的情况，在之后产生了母乳的期间可以得到母乳成分增强效果。作为特定的期间，可列举出妊娠前的期间、妊娠期、产后期、哺乳期。作为特定的期间，尤其可列举出妊娠期、产后期、哺乳期。即，作为给予有效成分的对象，人的情况可列举出孕产妇、哺乳期妇女。“孕产妇”是指处于从妊娠开始起至产后1年为止的期间的女性。“哺乳期妇女”是指正进行母乳育儿的女性。有效成分例如可以在妊娠前开始进行给予，但期望的是至少在妊娠期、产后期或哺乳期进行给予。人的情况，具体而言例如可以在从妊娠前的时间点起至哺乳结束为止的期间、从妊娠开始或判定时间点起至哺乳结束为止的期间、从妊娠第26周起至哺乳结束为止的期间、或从妊娠第26周起至产后1个月为止的期间给予有效成分。例如在以得到与母乳成分增强效果等母乳相关的效果的目的的情况下，可以在上述那样的期间给予有效成分。另外，例如除以得到与母乳成分增强效果等母乳相关的效果的目的的情况以外，可以在上述那样的期间给予有效成分。另外，例如还可以在希望得到由有效成分的给予带来的效果的期间给予有效成分。另外，有效成分可以在上述示例的期间的全部期间内持续给予有效成分，还可以仅在一部分期间给予有效成分。“一部分期间”是指可以是例如上述示例的期间的全部期间的10％以上、20％以上、30％以上、50％以上、70％以上或90％以上的期间。有效成分例如可以每1天给予1次，还可以每1天分成多次来给予。另外，有效成分例如可以每天给予，还可以几天或几周给予1次。各给予时的有效成分的给予量可以是恒定的或非恒定的。

双歧杆菌属细菌的给予量例如可以是2×10⁶cfu/kg/天以上、2×10⁷cfu/kg/天以上、或2×10⁸cfu/kg/天以上，可以是1×10¹²cfu/kg/天以下、1×10¹¹cfu/kg/天以下、1×10¹⁰cfu/kg/天以下、或1×10⁹cfu/kg/天以下，可以是这些组合的范围。在一个方式中，双歧杆菌属细菌的给予量例如优选为2×10⁶cfu/kg/天～1×10¹²cfu/kg/天，更优选为2×10⁷cfu/kg/天～1×10¹¹cfu/kg/天，进一步优选为2×10⁸cfu/kg/天～1×10¹⁰cfu/kg/天。另外，在一个方式中，双歧杆菌属细菌的给予量例如优选为2×10⁶cfu/kg/天～1×10¹¹cfu/kg/天，更优选为2×10⁷cfu/kg/天～1×10¹⁰cfu/kg/天，进一步优选为2×10⁷cfu/kg/天～1×10⁹cfu/kg/天。有效成分为死菌体时，“cfu”可以替换为“cells”。需要说明的是，使用2种或2种以上的双歧杆菌属细菌时，上述示例的双歧杆菌属细菌的给予量可以是这2种或2种以上的双歧杆菌属细菌的总给予量，还可以是各自的给予量。即，具体而言，组合使用长双歧杆菌和短双歧杆菌作为双歧杆菌属细菌时，长双歧杆菌和短双歧杆菌的给予量各自可以是例如上述示例的双歧杆菌属细菌的给予量的范围。

另外，益生元的给予量例如可以是0.02g/kg/天以上、0.05g/kg/天以上、或0.1g/kg/天以上，可以是0.6g/kg/天以下、0.4g/kg/天以下、或0.2g/kg/天以下，可以是这些组合的范围。益生元的给予量例如优选为0.02g/kg/天～0.6g/kg/天，更优选为0.05g/kg/天～0.4g/kg/天。需要说明的是，使用2种或2种以上的益生元时，上述示例的益生元的给予量可以是这2种或2种以上的益生元的总给予量。另外，在使用含有益生元的材料时，只要没有特别声明，则益生元的给予量是基于该材料中的益生元本身的量而计算出的值。

有效成分例如可以直接向对象给予，还可以制成含有有效成分的、饮食品组合物、药物组合物、饲料组合物等组合物向对象给予。对于含有有效成分的组合物，可以适用本发明的组合物的记载。使用多种有效成分时，这些有效成分可以在预先混合的状态下向对象给予，还可以各自独立地向对象给予。在将有效成分各自独立地向对象给予时，有效成分可以同时或非同时向对象给予。将有效成分非同时向对象给予的情况，有效成分的给予顺序(例如，双歧杆菌属细菌的给予与益生元的给予的顺序)没有特别限制。将有效成分非同时向对象给予的情况，一部分有效成分的给予与余量有效成分的给予的间隔(例如，双歧杆菌属细菌的给予与益生元的给予的间隔)只要可以得到母乳成分增强效果的期望的效果就没有特别限制。一部分有效成分的给予与余量有效成分的给予的间隔(例如，双歧杆菌属细菌的给予与益生元的给予的间隔)例如可以是6小时以内、3小时以内或1小时以内。另外，有效成分可以单独给予，还可以与其它成分组合进行给予。作为其它成分，可列举出药物、药物组合物、饮食品、饮食品组合物、饲料、饲料组合物。这些其它成分可以是或不是母乳成分增强用途、CCL28分泌促进用途等上述示例的用途中使用的成分。

例如还可以利用本发明的组合物(即通过给予本发明的组合物)来向对象给予有效成分。即，本发明的方法的一个方式可以是包括向对象给予本发明的组合物的工序的方法。“有效成分的添加”中还包括本发明的组合物的添加。本发明的组合物的给予方式(例如，给予对象、给予时期、给予期间、给予次数、给予量、其它给予的条件)只要可以得到母乳成分增强效果的期望的效果就没有特别限制。本发明的组合物的给予方式可以根据有效成分的种类、含量、其它成分的种类、含量、组合物的种类、形状(剂型)、给予对象的种类、年龄和健康状态等各条件进行适宜设定。关于上述那样的有效成分的给予方式的记载也可以适用向对象给予本发明的组合物的情况。即，本发明的组合物例如可以向上述示例那样的对象给予。另外，本发明的组合物的给予量例如可以以可以得到上述示例那样的有效成分的给予量的方式进行设定。另外，在使用多种有效成分、且这些有效成分各自独立地包含在本发明的组合物中的情况下，这些有效成分可以彼此混合后向对象给予，还可以各自独立地向对象给予。另外，本发明的组合物可以单独给予，还可以与药物、药物组合物、饮食品、饮食品组合物、饲料、饲料组合物等其它成分组合进行给予。

需要说明的是，利用本发明的方法还可以得到本发明的母乳。因此，本发明的方法的一个方式可以是制造本发明的母乳的方法。本发明的方法的一个方式更具体而言可以是包括如下工序的制造本发明的母乳的方法，所述工序包括：向对象给予有效成分的工序、及得到本发明的母乳的工序。本发明的母乳例如可以利用挤奶等的、用于回收母乳的通常的方法由对象获得。

＜4＞本发明的母乳的利用

本发明的母乳可以向对象给予而利用。本发明的母乳例如可以为了得到本发明的母乳的效果而利用。

本发明的母乳例如可以直接向对象给予，或适宜供于浓缩、稀释、分级、加热、冷冻、干燥等处理后向对象给予。这些处理只要不损害本发明的母乳的效果就没有特别限制。例如，进行分级的情况，获得可以得到本发明的母乳的效果的级分并向对象给予即可。作为这样的级分，可列举出含有增强了的母乳成分的级分。另外，本发明的母乳例如可以制成含有本发明的母乳的、饮食品组合物、药物组合物、饲料组合物等组合物向对象给予。本发明的含有母乳的组合物可以由本发明的母乳组成，还可以含有除本发明的母乳以外的成分。除本发明的母乳以外的成分只要不损害本发明的母乳的效果就没有特别限制。另外，本发明的含有母乳的组合物中的各成分(即，本发明的母乳和任意地其它成分)的含量、含量比只要可以得到本发明的母乳的效果就没有特别限制。本发明的含有母乳的组合物中的各成分的含量、含量比可以根据增强了的母乳成分的种类、其它成分的种类、组合物的种类、形状(剂型)和用法、给予对象的种类、年龄和健康状态等各条件进行适宜设定。此外，对于本发明的含有母乳的组合物，例如，除了代替上述的有效成分或在上述的有效成分的基础上含有本发明的母乳以外，可以适用本发明的组合物的记载。

给予本发明的母乳的对象没有特别限制。作为给予本发明的母乳的对象，可列举出哺乳动物。对于哺乳动物，如上所述。给予本发明的母乳的对象例如可以是成熟个体，还可以是未成熟个体。给予本发明的母乳的对象尤其可以是未成熟个体。给予本发明的母乳的对象具体而言可以是处于从出生起至断奶为止的期间的个体。作为给予本发明的母乳的对象，人的情况可列举出婴儿、幼儿。作为给予本发明的母乳的对象，人的情况尤其可列举出婴儿。“婴儿”是指出生后小于1年的孩子。“幼儿”是指从出生后1年起至上小学为止的孩子。另外，作为给予本发明的母乳的对象，人的情况，可列举出出生后小于7年、小于6年、小于5年、小于4年、小于3年、小于2年或小于1年的孩子。给予本发明的母乳的对象可以是或不是与产生本发明的母乳的个体属于相同种的对象(例如，该个体的孩子)。例如，还可以将由人得到的母乳向人给予。即，具体而言例如，通过对人实施本发明的方法，并让该人对孩子进行哺乳，从而该孩子可以得到本发明的母乳的效果。另外，例如，还可以将由除牛等人以外的哺乳类得到的母乳向人给予。

本发明的母乳的给予方式(例如，给予量、给予时期、给予期间、给予次数、其它给予的条件)只要可以得到本发明的母乳的效果就没有特别限制。本发明的母乳的给予方式可以根据增强了的母乳成分的种类、给予对象的种类、年龄和健康状态等各条件进行适宜设定。本发明的母乳的给予量例如可以设定为给予对象通常摄取乳的量。本发明的母乳例如可以日常地进行给予，还可以在特定的期间进行给予。作为特定的期间，可列举出从出生后至断奶为止的期间。此外，对于本发明的母乳的给予，例如，除了代替上述的有效成分或在上述的有效成分的基础上给予本发明的母乳以外，可以适用本发明的方法中的有效成分的给予的记载。

实施例

以下使用实施例对本发明进行进一步具体地说明，但本发明不限定于这些实施例。

〔实施例1〕

对于长双歧杆菌BB536株(NITE BP-02621；以下也称为“BB536”)和短双歧杆菌M-16V株(NITE BP-02622；以下也称为“M-16V”)，分别在MRS Broth中加入有0.05％半胱氨酸盐酸盐的培养基中以37℃厌氧培养12小时。回收两株的菌体，均以成为5×10⁹cfu/ml的方式悬浮于灭菌PBS中，制备了菌体悬浮液(含有BB536+M-16V的PBS)。

制备低聚果糖(FOS)(和光纯药株式会社制)的5％水溶液，通过0.22μm的过滤器过滤进行灭菌。

从Sankyo Labo Service Corporation,Inc.购入11周龄的无菌ICR小鼠(雄性/雌性)。

进行1周驯化饲养后，将雌性小鼠(12周龄)分为2个组(合生元组和无菌组)。对于合生元组，经口给予含有BB536+M-16V的PBS 200μl(菌数各1×10⁹cfu，总计为2×10⁹cfu)，给予后使其自由摄取经灭菌的5％FOS溶液，由此使给予的细菌固定。对于无菌组，未给予含有BB536+M-16V的PBS，使其自由摄取灭菌自来水。在14周龄时间点进行交配并使其分娩。在分娩第14天后向腹腔内给予I.U.催产素(Sigma公司制)，在15分钟后在异氟烷麻醉下进行挤奶，得到乳样品。通过离心分离从得到的乳样品中去除细胞和脂质，得到脱脂乳。使用ELISA法或多项目同时检测系统(Multiplex)(全部为R&D Systems公司制)测定了得到的脱脂乳中的HSP70(Heat Shock Protein 70)浓度、IFN-γ浓度、CCL8浓度、CCL21浓度。

将结果示于表1～4。合生元组与无菌组相比，母乳中的HSP70、IFN-γ、CCL8和CCL21的浓度增加。即，证实了通过组合使用上述细菌和低聚果糖而能够增强母乳成分。

[表1]

表1.分娩后第14天的脱脂乳中HSP70浓度(ng/ml)

[表2]

表2.分娩后第14天的脱脂乳中IFN-γ浓度(pg/ml)

[表3]

表3.分娩后第14天的脱脂乳中CCL8浓度(pg/ml)

[表4]

表4.分娩后第14天的脱脂乳中CCL21浓度(pg/ml)

〔制造例1〕

将短双歧杆菌M-16V株和长双歧杆菌BB536株分别接种至MRS液体培养基3mL中，在37℃下进行16小时厌氧培养后，将培养液浓缩，进行冷冻干燥，得到细菌的冷冻干燥粉末(菌末)。将菌末、乳清蛋白浓缩物(Whey protein concentrate；WPC)和低聚果糖均匀地混合而得到组合物。将该组合物20g溶解于200g的水中，得到能用于母乳成分增强用组合物等特定用途的组合物。通过将该组合物向孕产妇或哺乳期妇女等对象给予，从而可以得到母乳成分的量增加等效果。

〔制造例2〕

将短双歧杆菌M-16V株和长双歧杆菌BB536株分别接种至MRS液体培养基3mL中，在37℃下进行16小时厌氧培养后，将培养液浓缩，进行冷冻干燥，得到细菌的冷冻干燥粉末(菌末)。将菌末、乳蛋白浓缩物的干燥粉末(MPC480、Fonterra公司制、蛋白质含量80质量％、酪蛋白蛋白质：乳清蛋白＝约8：2)和低聚果糖均匀地混合而得到组合物。将该组合物20g溶解于200g的水中，得到能用于母乳成分增强用组合物等特定用途的组合物。通过将该组合物向孕产妇或哺乳期妇女等对象给予，从而可以得到母乳成分的量增加等效果。

〔制造例3〕

将短双歧杆菌M-16V株和长双歧杆菌BB536株分别接种至MRS液体培养基3mL中，在37℃下进行16小时厌氧培养后，将培养液浓缩，进行冷冻干燥，得到细菌的冷冻干燥粉末(菌末)。接着，将菌末、低聚果糖和结晶纤维素投入搅拌造粒机中进行混合。然后，加入纯化水进行造粒，将造粒物干燥，以含有细菌、益生元和赋形剂而成的造粒物的形态得到能用于母乳成分增强用组合物等特定用途的组合物。通过将该组合物向孕产妇或哺乳期妇女等对象给予，从而可以得到母乳成分的量增加等效果。

[制造例4]

以下示出添加了短双歧杆菌M-16V株和长双歧杆菌BB536株的发酵乳的制造法的一个例子。

首先，在乳原料中混合根据需要的水、其它成分，优选进行均质化处理，进行加热杀菌处理，得到杀菌乳制剂。均质化处理和加热杀菌处理可以通过常规方法来进行。

接着，将乳酸菌起子添加(接种)至杀菌乳制剂中，保持在规定的发酵温度使其发酵。通过发酵而可形成凝乳。作为乳酸菌起子，例如可以使用保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)等在酸奶制造中通常使用的乳酸菌。若pH达到目标值，则通过搅拌将所形成的凝乳破碎，冷却至10℃以下而得到发酵乳。通过冷却至10℃以下，从而使乳酸菌的活性降低而能够抑制酸的生成。

接着，对发酵乳进行加热处理而得到加热后发酵乳(经加热处理的发酵乳)。通过对发酵乳进行适度地加热，从而能够降低乳酸菌的活性而抑制酸的产生。由此，能够抑制在之后的制造工序中和/或带有双歧杆菌和益生元的浓缩发酵乳的保存中的pH的降低，其结果能够改善双歧杆菌的存活率。

接着，在加热后发酵乳中添加短双歧杆菌M-16V株、长双歧杆菌BB536株和低聚果糖，得到带有双歧杆菌和益生元的发酵乳。短双歧杆菌M-16V株和长双歧杆菌BB536株的添加量相对于各自加热后发酵乳优选1×10⁷～1×10¹¹CFU/ml，更优选1×10⁸～1×10¹⁰CFU/ml。

接着，进行带有双歧杆菌和益生元的发酵乳的浓缩，得到带有双歧杆菌和益生元的浓缩发酵乳。浓缩可以利用公知的浓缩方法进行。作为浓缩方法，可列举出离心分离法、膜分离法。例如，在离心分离法中，去除被浓缩物(带有双歧杆菌和益生元的发酵乳)中的乳清，可以得到固体成分浓度得到提高的带有双歧杆菌和益生元的浓缩发酵乳。通过让孕产妇或哺乳期妇女等对象摄取如上述那样得到的浓缩发酵乳，从而可以得到母乳成分的量增加等效果。

[制造例5]

以下示出添加了短双歧杆菌M-16V株和长双歧杆菌BB536株的配方奶粉的制造法的一个例子。

将脱盐牛乳乳清蛋白粉末(MIRAI Inc.制)10kg、牛乳酪蛋白粉末(Fonterra公司制)6kg、乳糖(MIRAI Inc.制)48kg、矿物混合物(富田制药株式会社制)920g、维生素混合物(田边制药株式会社制)32g、以及作为益生元成分的低聚果糖(Yakult PharmaceuticalIndustry Co.,Ltd.制)900g、乳酮糖(森永乳业株式会社制)500g、棉子糖(日本甜菜制糖社制)500g和半乳寡聚糖液糖(Yakult Pharmaceutical Industry Co.,Ltd.制)900g溶解于温水300kg中，进而在90℃下进行10分钟加热溶解，添加调制脂肪(TAIYO YUSHI CORP.制)28kg并进行均质化。然后，进行杀菌、浓缩的工序并喷雾干燥，制备含低聚糖的配方奶粉约95kg。在其中，将短双歧杆菌M-16V株和长双歧杆菌BB536株的2株添加至MRS液体培养基3mL中，在37℃下进行16小时厌氧培养，将培养液浓缩，进行冷冻干燥后加入用淀粉冲淡而得到的菌末(2个菌总计为1.8×10¹¹cfu/g)100g而制备混合了双歧杆菌/低聚糖的配方奶粉约95kg。将混合了双歧杆菌/低聚糖的配方奶粉溶解于水中，在制成作为标准配方乳浓度的总固体成分浓度14％(w/v)的乳制剂时，乳制剂中的双歧杆菌数2个菌总计为2.7×10⁹cfu/100ml。通过让孕产妇或哺乳期妇女等对象摄取如上述那样得到的混合了双歧杆菌/低聚糖的配方奶粉，从而可以得到母乳成分的量增加等效果。

〔实施例2〕

本实施例中，研究了哺乳期妇女摄取双歧杆菌属细菌对从该哺乳期妇女采集到母乳中的CCL28浓度产生的影响。

＜对象和方法＞

将产后第1个月～第6个月的期间内的任意2个月之间持续每天摄取了短双歧杆菌M-16V株(Baby bifidus、森永乳业；以下也称为“M-16V”)5×10⁹～1×10¹⁰个的哺乳期妇女作为摄取组(n＝11)。另外，将没有M-16V摄取习惯的哺乳期妇女作为对照组(n＝11)。摄取组中，在从M-16V的摄取开始的2天前起至前一天采集母乳并作为“摄取第0个月”。摄取组中，进而，在此M-16V的摄取开始起至第1个月和第2个月采集母乳。另外，对照组中，在与摄取组的情况大致一致的时机在产后采集母乳。在摄取组与对照组之间未观察到被检者背景出现大的差异(表5)。

[表5]

表5.被检者背景

※关于对照组的年龄、怀胎周数，11名中9名的数据。

将母乳以12000G、30分钟、4℃进行离心分离，回收除了脂肪层和沉淀物以外的乳清，用于CCL28的测定。CCL28的测定使用Human CCL28 DuoSet ELISA(R&D System)和DuoSet ELISA辅助试剂盒2(R&D System)来实施。

＜结果＞

将结果示于图1。“摄取第0个月”中，未观察到摄取组与对照组之间存在CCL28浓度差异。另一方面，“摄取第1个月”和“摄取第2个月”中，摄取组的CCL28浓度与对照组的CCL28浓度相比，为显著高值。由此，启示出通过摄取M-16V等双歧杆菌属细菌，使母乳中的CCL28浓度增加。

另外，可认为母乳中的CCL28浓度的增加是通过促进由存在于乳腺的粘膜上皮细胞分泌CCL28所致的。此处，分泌CCL28的粘膜上皮细胞不限于乳腺而存在于全身。由此，可认为双歧杆菌属细菌的摄取不限于促进乳腺中的CCL28分泌，而广泛引起CCL28的分泌促进。

〔实施例3〕

本实施例中，研究了通过使哺乳期妇女摄取双歧杆菌属细菌对由该哺乳期妇女采集的母乳中的半乳凝素-9浓度产生的影响。

＜对象和方法＞

将产后第1个月～第6个月的期间内的任意2个月之间持续每天摄取了短双歧杆菌M-16V株(Baby bifidus、森永乳业；以下也称为“M-16V”)5×10⁹～1×10¹⁰个的哺乳期妇女作为摄取组(n＝11)。另外，将没有M-16V摄取习惯的哺乳期妇女作为对照组(n＝11)。摄取组中，在从M-16V的摄取开始的2天前起至前一天采集母乳并作为“摄取第0个月”。摄取组中，进而，从M-16V的摄取开始起在第1个月和第2个月采集母乳。另外，对照组中，在与摄取组的情况大致一致的时机在产后采集母乳。在摄取组与对照组之间未观察到被检者背景出现大的差异(表6)。

[表6]

表6.被检者背景

※关于对照组的年龄、怀胎周数，11名中9名的数据。

将母乳以12000G、30分钟、4℃进行离心分离，回收除了脂肪层和沉淀物以外的乳清，用于半乳凝素-9的测定。半乳凝素-9的测定使用人体磁性Luminex分析(HumanMagnetic Luminex Assay)(R&D System)来实施。以摄取第0个月的母乳中的半乳凝素-9浓度为基准，计算出摄取第1个月和第2个月的母乳中的半乳凝素-9浓度的变化率。对于变化率，利用摄取组和对照组进行组间比较。

＜结果＞

将变化率的算出结果示于表7。对于摄取第2个月的半乳凝素-9浓度与摄取第0个月时的半乳凝素-9浓度显著(变化率为150％以上)增高的被检者数，通过χ2次方检验利用摄取组和对照组进行比较。将其结果示于表8。对于半乳凝素-9浓度显著(变化率为150％以上)增加的被检者数，在摄取组和对照组之间存在显著差异。由此，启示出通过摄取M-16V等双歧杆菌属细菌，从而使母乳中的半乳凝素-9浓度增加。

[表7]

表7.摄取第0个月的以半乳凝素-9浓度为基准时的变化率

摄取组

S1

S2

S3

S4

S5

S6

S7

S8

S9

S10

S11

0个月

100％

100％

100％

100％

100％

100％

100％

100％

100％

100％

100％

1个月

183％

98％

383％

134％

138％

167％

-

72％

-

81％

78％

2个月

187％

41％

75％

176％

298％

180％

66％

217％

185％

201％

19％

对照组

C1

C2

C3

C4

C5

C6

C7

C8

C9

C10

C11

0个月

100％

100％

100％

100％

100％

100％

100％

100％

100％

100％

100％

1个月

69％

71％

70％

-

94％

48％

12％

-

88％

163％

199％

2个月

122％

95％

84％

101％

89％

91％

17％

94％

41％

199％

167％

[表8]

表8.X2次方检验的结果

〔制造例6〕

将短双歧杆菌M-16V株接种在MRS液体培养基3mL中，在37℃下进行16小时厌氧培养后，将培养液浓缩，进行冷冻干燥，得到细菌的冷冻干燥粉末(菌末)。将菌末和乳清蛋白浓缩物(Whey protein concentrate；WPC)均匀地混合而得到组合物。将该组合物20g溶解于200g的水中，得到能用于母乳成分增强用组合物等特定用途的组合物。通过将该组合物向孕产妇或哺乳期妇女等对象给予，从而可以得到母乳成分的量增加等效果。

〔制造例7〕

将短双歧杆菌M-16V株接种于MRS液体培养基3mL中，在37℃下进行16小时厌氧培养后，将培养液浓缩，进行冷冻干燥，得到细菌的冷冻干燥粉末(菌末)。将菌末和乳蛋白浓缩物的干燥粉末(MPC480、Fonterra公司制、蛋白质含量80质量％、酪蛋白蛋白质：乳清蛋白＝约8：2)均匀地混合而得到组合物。将该组合物20g溶解于200g的水中，得到能用于母乳成分增强用组合物等特定用途的组合物。通过将该组合物向孕产妇或哺乳期妇女等对象给予，从而可以得到母乳成分的量增加等效果。

〔制造例8〕

将短双歧杆菌M-16V株接种在MRS液体培养基3mL中，在37℃下进行16小时厌氧培养后，将培养液浓缩，进行冷冻干燥，得到细菌的冷冻干燥粉末(菌末)。接着，将菌末和结晶纤维素投入搅拌造粒机中进行混合。然后，加入纯化水进行造粒，将造粒物干燥，以含有细菌和赋形剂而成的造粒物的形态得到能用于母乳成分增强用组合物等特定用途的组合物。通过将该组合物向孕产妇或哺乳期妇女等对象给予，从而可以得到母乳成分的量增加等效果。

[制造例9]

以下示出添加了短双歧杆菌M-16V株的发酵乳的制造法的一个例子。

首先，在乳原料中混合根据需要的水、其它成分，优选进行均质化处理，进行加热杀菌处理，得到杀菌乳制剂。均质化处理和加热杀菌处理可以通过常规方法来进行。

接着，将乳酸菌起子添加(接种)至杀菌乳制剂中，保持在规定的发酵温度使其发酵。通过发酵而可形成凝乳。作为乳酸菌起子，例如可以使用保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)等在酸奶制造中通常使用的乳酸菌。若pH达到目标值，则通过搅拌将所形成的凝乳破碎，冷却至10℃以下而得到发酵乳。通过冷却至10℃以下，从而使乳酸菌的活性降低而能够抑制酸的生成。

接着，对发酵乳进行加热处理而得到加热后发酵乳(经加热处理的发酵乳)。通过对发酵乳进行适度地加热，从而使乳酸菌的活性降低而能够抑制酸的生成。由此，能够抑制之后的制造工序中和/或带有双歧杆菌的浓缩发酵乳的保存中的pH的降低，其结果能够改善双歧杆菌的存活率。

接着，在加热后发酵乳中添加短双歧杆菌M-16V株而得到带有双歧杆菌的发酵乳。短双歧杆菌M-16V株的添加量相对于加热后发酵乳优选1×10⁷～1×10¹¹CFU/ml，更优选1×10⁸～1×10¹⁰CFU/ml。

接着，进行带有双歧杆菌的发酵乳的浓缩，得到带有双歧杆菌的浓缩发酵乳。浓缩可以利用公知的浓缩方法进行。作为浓缩方法，可列举出离心分离法、膜分离法。例如，在离心分离法中，去除被浓缩物(带有双歧杆菌的发酵乳)中的乳清，可以得到固体成分浓度得到提高的带有双歧杆菌的浓缩发酵乳。通过让孕产妇或哺乳期妇女等对象摄取如上述那样得到的浓缩发酵乳，从而可以得到母乳成分的量增加等效果。

[制造例10]

以下示出添加了短双歧杆菌M-16V株的配方奶粉的制造法的一个例子。

将脱盐牛乳乳清蛋白质粉末(Future Inc.制)10kg、牛乳酪蛋白粉末(Fonterra公司制)6kg、乳糖(Future Inc.制)48kg、矿物质混合物(富田制药株式会社制)920g、维生素混合物(田边制药株式会社制)32g溶解于温水300kg中，进而在90℃下进行10分钟加热溶解，添加调制脂肪(太阳油脂株式会社制)28kg并进行均质化。然后，进行灭菌、浓缩的工序并进行喷雾干燥，制备配方奶粉约92kg。在其中，将短双歧杆菌M-16V株添加至MRS液体培养基3mL中，在37℃下进行16小时厌氧培养，将培养液浓缩，进行冷冻干燥后添加用淀粉冲淡而得到的菌末(0.9×10¹¹cfu/g)100g而制备双歧杆菌配混配方奶粉约92kg。将双歧杆菌配混配方奶粉溶解于水中，在制成作为标准配方乳的总固体成分浓度14％(w/v)的乳制剂时，乳制剂中的双歧杆菌数为1.35×10⁹cfu/100ml。通过让孕产妇或哺乳期妇女等对象摄取以上述那样得到的双歧杆菌配混配方奶粉，从而可以得到母乳成分的量增加等效果。

产业上的可利用性

根据本发明，可以提供能用于母乳成分增强用组合物等特定用途的组合物。

Claims (39)

1.一种母乳成分增强用组合物，其含有双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌作为有效成分。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述母乳成分为选自热休克蛋白、趋化因子、干扰素和凝集素中的至少1种成分。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，所述母乳成分为选自HSP70、CCL8、CCL21、CCL28、IFN-γ和半乳凝素9中的至少1种成分。

4.一种母乳中的半乳凝素9增强用组合物，其含有双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌作为有效成分。

5.一种CCL28分泌促进用组合物，其含有双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌作为有效成分。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的组合物，其还含有益生元。

7.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述益生元为低聚糖。

8.根据权利要求6或7所述的组合物，其中，所述益生元为低聚果糖。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的组合物，其中，所述双歧杆菌属细菌为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)和/或短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的组合物，其中，所述双歧杆菌属细菌为长双歧杆菌和短双歧杆菌。

11.根据权利要求1～9中任一项所述的组合物，其中，所述双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。

12.根据权利要求9或10所述的组合物，其中，所述长双歧杆菌为长双歧杆菌BB536(NITE BP-02621)。

13.根据权利要求9～12中任一项所述的组合物，其中，所述短双歧杆菌为短双歧杆菌M-16V(NITE BP-02622)。

14.根据权利要求1～13中任一项所述的组合物，其向孕产妇或哺乳期妇女给予。

15.根据权利要求1～14中任一项所述的组合物，其出于对第二对象的下述(1)～(3)中任一目的而向第一对象给予来使用，其中所述第二对象要被给予第一对象的母乳，

(1)变态反应的预防和/或治疗；

(2)感染症的预防和/或治疗；

(3)肠道内微生物菌群的调节。

16.根据权利要求15所述的组合物，其中，所述第一对象为孕产妇或哺乳期妇女，所述第二对象为婴儿。

17.根据权利要求1～16中任一项所述的组合物，其为饮食品组合物。

18.一种增强母乳成分的方法，其包括向对象给予双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌的工序。

19.根据权利要求18所述的方法，其中，所述母乳成分为选自热休克蛋白、趋化因子、干扰素和凝集素中的至少1种成分。

20.根据权利要求18或19所述的方法，其中，所述母乳成分为选自HSP70、CCL8、CCL21、CCL28、IFN-γ和半乳凝素9中的至少1种成分。

21.一种增强母乳中的半乳凝素9的方法，其包括向对象给予双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌的工序。

22.一种促进CCL28的分泌的方法，其包括向对象给予双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌的工序。

23.根据权利要求18～22中任一项所述的方法，其还包括向对象给予益生元的工序。

24.根据权利要求23所述的方法，其中，所述益生元为低聚糖。

25.根据权利要求23或24所述的方法，其中，所述益生元为低聚果糖。

26.根据权利要求18～25中任一项所述的方法，其中，所述双歧杆菌属细菌为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)和/或短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)。

27.根据权利要求18～26中任一项所述的方法，其中，所述双歧杆菌属细菌为长双歧杆菌和短双歧杆菌。

28.根据权利要求18～26中任一项所述的方法，其中，所述双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。

29.根据权利要求26或27所述的方法，其中，所述长双歧杆菌为长双歧杆菌BB536(NITEBP-02621)。

30.根据权利要求26～29中任一项所述的方法，其中，所述短双歧杆菌为短双歧杆菌M-16V(NITE BP-02622)。

31.根据权利要求18～30中任一项所述的方法，其中，所述对象为孕产妇或哺乳期妇女。

32.一种母乳成分增强用奶粉的制造方法，其包括下述工序(A)～(C)：

(A)用含有乳成分的培养基培养双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌，得到培养物的工序；

(B)将所述培养物供于喷雾干燥和/或冷冻干燥，得到菌体粉末的工序；

(C)将所述菌体粉末和益生元混合，得到母乳成分增强用奶粉的工序。

33.一种母乳成分增强用奶粉的制造方法，其包括下述工序(A)：

(A)将益生元、双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌和乳成分混合，得到奶粉的工序。

34.根据权利要求32或33所述的方法，其中，所述乳成分为乳蛋白。

35.根据权利要求32～34中任一项所述的方法，其中，所述乳蛋白为选自由乳清、乳清水解物、酪蛋白组成的组中的至少1种成分。

36.一种母乳成分增强用营养强化剂的制造方法，其包括下述工序(A)和(B)：

(A)将益生元、双歧杆菌(Bifidobacterium)属细菌和赋形剂混合，得到混合物的工序；

(B)将所述混合物压片的工序。

37.根据权利要求32～36中任一项所述的方法，其中，所述双歧杆菌属细菌为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)和/或短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)。

38.根据权利要求32～37中任一项所述的制造方法，其中，所述益生元为低聚果糖。

39.根据权利要求32～38中任一项所述的方法，其中，所述奶粉或所述营养强化剂通过向孕产妇或哺乳期妇女给予来使用。

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