CN116075312A - 肠道发育促进用组合物、肺功能改善用组合物和免疫功能增强用组合物 - Google Patents
肠道发育促进用组合物、肺功能改善用组合物和免疫功能增强用组合物 Download PDFInfo
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Abstract
可提供:肠道发育促进用组合物、肺功能改善用组合物或免疫功能增强用组合物,其包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。细菌优选为长双歧杆菌婴儿亚种M‑63(NITE BP‑02623)。
Description
技术领域
本发明涉及肠道发育促进用组合物、和肠道疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物。本发明涉及肺功能改善用组合物、和肺部疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物。本发明涉及免疫功能增强用组合物。
背景技术
消化道是从口连接肛门的长管,期间分为口腔、咽、食道、胃、小肠(十二指肠、空肠、回肠)、大肠(盲肠、阑尾、升结肠、横结肠、降结肠、乙状结肠、直肠)。包括小肠和大肠在内的肠道具有消化食物、吸收营养的功能。肠道正常发育对于个体的成长和维持健康而言是重要的。
已知通过摄取一部分双歧杆菌和乳酸菌来调节肠道环境而有助于人的健康。例如专利文献1(日本特开2014-111668号公报)中,公开了含有短乳杆菌和乳铁蛋白作为有效成分的经口组合物改善排便次数、排便量。
肺炎是感染细菌、病毒等病原微生物而在肺部引发炎症的疾病。肺炎尤其多发于未满18岁的儿童和75岁以上的成人,成为新生儿、婴儿、幼儿死亡的主要原因。作为代表性的肺炎的症状,可列举出发热、咳嗽、痰、呼吸困难、全身倦怠感、胸痛等。以肺炎为代表的肺部疾病会导致肺功能的降低。
已知:肠道具有防止成为异物的物质侵入身体的阻隔功能、并且是保护身体免受病原菌影响的免疫器官。据说整个身体70%的免疫细胞聚集在肠中,对整个身体的健康具有重要的作用。
指出一部分乳酸菌可能与免疫功能有关。专利文献2(日本特开2012-158568号公报)中,公开了乳酸菌抑制关节的炎症。专利文献3(日本特开2018-177740号公报)中,公开了乳酸菌的代谢物控制细胞因子产生。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开2014-111668号公报
专利文献2:日本特开2012-158568号公报
专利文献3:日本特开2018-177740号公报
发明内容
发明要解决的问题
本发明的目的在于,提供:促进肠道的发育的新型组合物、和肠道疾病的预防、治疗或减轻症状的新型组合物。本发明的目的还在于,提供:改善肺功能的新型组合物、和肺部疾病的预防、治疗或减轻症状的新型组合物。本发明的目的还在于,提供:增强免疫功能的新型组合物。
用于解决问题的方案
本发明涉及以下示例的[1]~[14]。
[1]一种组合物,其为肠道发育促进用组合物,包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
[2]根据[1]所述的组合物,其促进肠道的皱襞形成。
[3]一种组合物,其为肠道疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物,包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
[4]根据[3]所述的组合物,其中,前述肠道疾病是起因于肠道发育缺陷或肠道功能下降的疾病。
[5]根据[1]~[4]中任一项所述的组合物,其为饮食品组合物。
[6]根据[1]~[5]中任一项所述的组合物,其中,前述细菌为长双歧杆菌婴儿亚种M-63(NITE BP-02623)。
[7]根据[1]~[6]中任一项所述的组合物,其中,前述细菌为活菌。
[8]根据[1]~[7]中任一项所述的组合物,其还包含母乳低聚糖。
[9]根据[1]~[8]中任一项所述的组合物,其为配方奶粉或配方液态奶。
[10]一种肠道发育促进剂、或肠道疾病的预防、治疗或症状减轻剂,其包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
[11]属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的用于促进肠道发育、或用于肠道疾病的预防、治疗或症状减轻的应用。
[12]一种属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌,其用于促进肠道发育、或用于肠道疾病的预防、治疗或症状减轻。
[13]属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌在制造肠道发育促进用组合物、或制造肠道疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物中的应用。
[14]一种促进肠道发育的方法、或肠道疾病的预防、治疗或症状减轻的方法,其包括向哺乳动物给予属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的工序。
本发明还涉及以下示例的[15]~[27]。
[15]一种组合物,其为肺功能改善用组合物,包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
[16]一种组合物,其为肺部疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物,包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
[17]根据[16]所述的组合物,其中,前述肺部疾病为肺炎。
[18]根据[15]~[17]中任一项所述的组合物,其为饮食品组合物。
[19]根据[15]~[18]中任一项所述的组合物,其中,前述细菌为长双歧杆菌婴儿亚种M-63(NITE BP-02623)。
[20]根据[15]~[19]中任一项所述的组合物,其中,前述细菌为活菌。
[21]根据[15]~[20]中任一项所述的组合物,其还包含母乳低聚糖。
[22]根据[15]~[21]中任一项所述的组合物,其为配方奶粉或配方液态奶。
[23]一种肺功能改善剂、或肺部疾病的预防、治疗或症状减轻剂,其包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
[24]属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的用于肺功能改善、或肺部疾病的预防、治疗或症状减轻的应用。
[25]一种属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌,其用于肺功能改善、或肺部疾病的预防、治疗或症状减轻。
[26]属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌在制造肺功能改善用组合物、或制造肺部疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物中的应用。
[27]一种改善肺功能的方法、或肺部疾病的预防、治疗或症状减轻的方法,其包括向哺乳动物给予属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的工序。
本发明还涉及以下示例的[28]~[41]。
[28]一种组合物,其为免疫功能增强用组合物,包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
[29]根据[28]所述的组合物,其控制细胞因子的产生。
[30]根据[29]所述的组合物,其中,前述细胞因子包括选自由白细胞介素-6、白细胞介素-8、单核细胞趋化因子、干扰素-β、干扰素-γ组成的组中的至少1种。
[31]根据[28]所述的组合物,其抑制病原微生物感染。
[32]根据[28]~[31]中任一项所述的组合物,其为饮食品组合物。
[33]根据[28]~[32]中任一项所述的组合物,其中,前述细菌为长双歧杆菌婴儿亚种M-63(NITE BP-02623)。
[34]根据[28]~[33]中任一项所述的组合物,其中,前述细菌为活菌。
[35]根据[28]~[34]中任一项所述的组合物,其还包含母乳低聚糖。
[36]根据[28]~[35]中任一项所述的组合物,其为配方奶粉或配方液态奶。
[37]一种免疫功能增强剂,其包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
[38]属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的用于增强免疫功能的应用。
[39]一种属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌,其用于增强免疫功能。
[40]属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌在制造免疫功能增强用组合物中的应用。
[41]一种增强免疫功能的方法,其包括向哺乳动物给予属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的工序。
发明的效果
根据本发明,可以提供:促进肠道的发育的新型组合物、肠道疾病的预防、治疗或减轻症状的新型组合物、改善肺功能的新型组合物、肺部疾病的预防、治疗或减轻症状的新型组合物、和增强免疫功能的新型组合物。
附图说明
图1是实验1中的、M-63给药组的猪肠道内腔面的照片。
图2是实验1中的、对照组的猪肠道内腔面的照片。
图3是实验2中的、M-63给药组的猪肺的右中叶和后叶腹面的照片。
图4是实验2中的、对照组的猪肺的右中叶和后叶腹面的照片。
图5是实验3中的、M-63给药组的猪大肠的CD8免疫染色照片。
图6是实验3中的、对照组的猪大肠的CD8免疫染色照片。
具体实施方式
<肠道发育促进剂和肠道发育促进用组合物>
本发明的肠道发育促进剂包含属于长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacteriumlongum subsp.infantis)的细菌。本发明的肠道发育促进剂能够促进已摄取或给予的对象的肠道的发育。
本发明的一实施方式的组合物为肠道发育促进用组合物,其包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。本发明的肠道发育促进用组合物可以包含本发明的肠道发育促进剂,也可以是本发明的肠道发育促进剂本身。本发明的肠道发育促进用组合物能够促进已摄取或给予的对象的肠道的发育。
本说明书中,肠道包括小肠和大肠。肠道是担任食物的消化和营养的吸收的器官。小肠包括十二指肠、空肠和回肠。自小肠的粘膜层中分泌出消化酶,在胃中被消化的食物被消化为氨基酸、葡萄糖、甘油酯、脂肪酸等最终的分解物。小肠反复收缩和松弛,边使混合了食物和消化液的混合物移动边吸收。该运动有助于将消化液和食物混合,并且增加食物与粘膜的接触,改善吸收效率。小肠自内侧起由粘膜、粘膜下层、肌层和浆膜这4层构成。在小肠内腔,以围绕内腔方式设置有大量皱襞(环状襞),在皱襞的表面存在无数的绒毛,它们有助于小肠的粘膜的表面积的增加。环状襞由粘膜和粘膜下组织构成。小肠还具有作为免疫器官的功能,在小肠内表面散在有淋巴集结(派尔集合淋巴结)。树突状细胞、T细胞、B细胞等主要的免疫细胞集中存在于派尔集合淋巴结上。这些肠道免疫细胞群对侵入的病原细菌抗原产生免疫球蛋白A,起到防止病原细菌穿过肠壁侵入体内的作用。
大肠包括盲肠、阑尾、升结肠、横结肠、降结肠、乙状结肠和直肠。大肠吸收水和盐类,通过蠕动运动使内容物向直肠移动。大肠分泌粘液,大肠自内侧起由粘膜、粘膜下层、肌层和浆膜这4层构成。大肠中,有3根从盲肠到乙状结肠行进的结肠带(大网带、结肠间膜带和自由带),其构成外纵行肌。由于结肠带的收缩,而在大肠内腔形成皱襞(半月皱襞)。大量肠道细菌附着于低氧浓度的大肠中,形成肠道菌群。已知肠道菌群对宿主的健康产生较大影响。作为受到肠道菌群影响的症状/疾病,可列举出便秘、腹泻、过敏性肠道综合症、炎症性肠道疾病、代谢疾病、感染症、食物中毒、过敏症、以大肠癌为主的恶性肿瘤等。
肠道的发育使肠道具有用于更好地发挥上述肠道的功能的特征。肠道的发育包括使肠道具有用于更好地发挥肠道中的食物的消化和营养吸收功能的结构性特征。具体而言,肠道的发育包括:肠道的皱襞的形成(特别是小肠的环状襞的形成)、绒毛的形成、粘液的分泌、平滑肌(纵行肌和环状肌)的发育、蠕动运动的调节、消化道激素的分泌调节、调节蠕动运动和激素分泌等的固有神经系统的发育、消化液的分泌调节、肠道菌群的形成等。这些可能会互相影响。例如,肠道的皱襞的形成不充分时,肠道的表面积减少,因此存在于肠道的内腔侧的细胞数也减少,可能会引起例如吸收营养的肠道上皮细胞、分泌粘液的杯状细胞、免疫细胞、肠道细菌等的减少和未发育。肠道的发育的促进有助于个体的成长、体重增加、良好的营养状态的维持、健康增进、排便次数和排便量的改善、肠壁的阻隔功能的强化、肠道免疫功能的改善、过敏症的预防,也有可能脑肠互动对大脑产生影响(焦虑的减轻、认知功能的改善/降低的抑制)。
哺乳动物中,营养补给系统自出生起从经胎盘转移到经肠。新生儿在出生后不久就开始摄取母乳,直至断奶为止的期间从母乳摄取营养成分,断奶后转为固体食物。伴随着该营养摄取形态的转移,肠道和肠粘膜的形态、以及营养的消化吸收机制也发生变化。婴幼儿由于身体未成熟,因此在婴幼儿期促进肠道的发育对于婴幼儿的成长是重要的。另外,从肠道的发育还有助于增强免疫力的观点出发,肠道的发育对于免疫功能不充分的婴幼儿而言是重要的。
另一方面,作为肠道发育不充分的原因之一,可列举出肠道炎症。认为特别是在婴幼儿发生肠道炎症时,肠道皱襞形成、绒毛的形成等容易发育不全。
<肠道疾病的预防、治疗或症状减轻剂、和肠道疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物>
本发明的肠道疾病的预防、治疗或症状减轻剂包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。本发明的肠道疾病的预防、治疗或症状减轻剂在已摄取或给予的对象中能够实现肠道疾病的预防、治疗或减轻症状。
本发明的一实施方式的组合物为肠道疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物,其包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。本发明的肠道疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物可以包含本发明的肠道疾病的预防、治疗或症状减轻剂,也可以是本发明的肠道疾病的预防、治疗或症状减轻剂本身。本发明的肠道疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物在已摄取或给予的对象中能够实现肠道疾病的预防、治疗或减轻症状。减轻症状包括:伴随疾病的症状的缓解、疾病发展的延迟、直至状态恢复为止的期间的缩短。
本说明书中,肠道疾病是指小肠和大肠中的疾病。作为小肠的疾病,没有特别限定,例如可列举出小肠肿瘤、消化道出血、克罗恩病、肠套叠、消化道间质瘤、吸收不良综合征、白塞病等。作为大肠的疾病,没有特别限定,例如可列举出大肠癌、息肉、大肠憩室炎、急性阑尾炎、过敏性肠道综合症、溃疡性大肠炎、缺血性大肠炎、克罗恩病炎等。
肠道疾病是起因于例如肠道发育缺陷或肠道功能下降的疾病,包括上述的肠道的发育或功能不充分时所产生的疾病。在这样的肠道疾病中,包括过敏性肠道综合症、炎症性肠道疾病、代谢疾病、感染症、食物中毒、过敏症、以大肠癌为主的恶性肿瘤等。炎症性肠道疾病中,除了由外部因素、例如细菌等微生物感染、外伤、热/寒冷/放射线/药物等物理刺激和化学物质所引起的炎症之外,还包括克罗恩病、溃疡性大肠炎、坏死性肠炎、白塞病等。
若预防、治疗肠道疾病或减轻症状,则预测会发生在肠道内的营养吸收的改善、肠道运输的速度降低、食欲的增强、体重的增加、体重减少的抑制、过敏症疾病的预防/症状的减轻、大脑焦虑状态的减轻、认知功能的改善/降低的抑制等。
<肺功能改善剂和肺功能改善用组合物>
本发明的肺功能改善剂包含属于长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longumsubsp.infantis)的细菌。本发明的肺功能改善剂能够改善已摄取或给予的对象的肺功能。
本发明的一实施方式的组合物为肺功能改善用组合物,其包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。本发明的肺功能改善用组合物可以包含本发明的肺功能改善剂,也可以是本发明的肺功能改善剂本身。本发明的肺功能改善用组合物能够改善已摄取或给予的对象的肺功能。
肺是具有将空气中的氧气摄入体内、并将二氧化碳排出至体外的作用的器官。从口和鼻吸入的空气通过咽、气管、支气管到达细支气管末端的肺泡。肺泡是气体交换的场所,向在散布到肺泡中的毛细血管中流动的红细胞中供给氧气的同时排出二氧化碳。本说明书中,肺功能主要指气体交换功能,肺功能的改善具体包括:肺容积的提高、肺容积的降低抑制、肺泡的形状和伸缩性的维持、血氧浓度的提高、血中二氧化碳浓度的降低、气喘/闷气的改善、咳嗽/痰/发热的改善、胸部疼痛/压迫感的减轻、呼吸困难的避免等方式。
<肺部疾病的预防、治疗或症状减轻剂、和肺部疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物>
本发明的肺部疾病的预防、治疗或症状减轻剂包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。本发明的肺部疾病的预防、治疗或症状减轻剂能够在已摄取或给予的对象中实现肺部疾病的预防、治疗或减轻症状。
本发明的一实施方式的组合物为肺部疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物,其包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。本发明的肺部疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物可以包含本发明的肺部疾病的预防、治疗或症状减轻剂,也可以是本发明的肺部疾病的预防、治疗或症状减轻剂本身。本发明的肺部疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物在已摄取或给予的对象中能够实现肺部疾病的预防、治疗或减轻症状。减轻症状包括:伴随疾病的症状的缓解、疾病发展的延迟、直至状态恢复为止的期间的缩短。
本说明书中,肺部疾病是指肺部的疾病。作为肺部的疾病,没有特别限定,例如可列举出感染性疾病、间质性肺部疾病、肺气肿、肺肿瘤、过敏性肺部疾病等。
肺部疾病例如为肺炎,认为本发明的肺部疾病的预防、治疗或症状减轻剂、和肺部疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物尤其对肺炎有效。肺炎包括例如由细菌和病毒等微生物所致的感染症、结核、肺痈、真菌病、过敏性肺炎、间质性肺炎等。作为引起肺炎的病毒,可列举出鼻病毒、冠状病毒、MERS冠状病毒、SARS冠状病毒、RS病毒、流感病毒、副流感病毒、腺病毒、人偏肺病毒等。作为引起肺炎的细菌,可列举出肺炎球菌、流感菌、肺炎支原体、金黄色葡萄球菌、衣原体属菌、军团菌属菌等。例如肺炎支原体是在城市中容易感染的细菌,破坏上呼吸道/气管/支气管/肺泡等的粘膜,引发肺炎。若感染肺炎支原体,则容易感染其他细菌和病毒等,病变也容易变得严重。在感染症中,也有很多如肺炎支原体那样没有疫苗的感染症。本发明的肺部疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物即使对于没有疫苗、难以预防的感染症也能够预防、治疗或减轻症状。
若预防、治疗肺部疾病或减轻症状,则可期待食欲的增强、个体的成长、体重的增加、体重减少的抑制等。另外,肺部疾病会引起上述的肺功能的降低,因此肺部疾病的预防、治疗或症状减轻能够提高肺功能或抑制肺功能的降低。
肺炎之类的肺部疾病对于免疫功能并不完全的婴幼儿而言可能成为特别致命的感染症,因此肺部疾病的预防、治疗或症状减轻对于婴幼儿是重要的。由于肺部疾病而发生肺泡的萎缩等病变时,即使在疾病治愈后肺泡的形状也无法恢复正常。从这方面考虑,在婴幼儿等身体的成长期,肺部疾病的预防、治疗或症状减轻是重要的。
<免疫功能增强剂和免疫功能增强用组合物>
本发明的免疫功能增强剂包含属于长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacteriumlongum subsp.infantis)的细菌。本发明的免疫功能增强剂能够增强已摄取或给予的对象的免疫功能。
本发明的免疫功能增强用组合物包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。本发明的免疫功能增强用组合物可以包含本发明的免疫功能增强剂,也可以是本发明的免疫功能增强剂本身。本发明的免疫功能增强用组合物能够增强已摄取或给予的对象的免疫功能。
若提高免疫功能,则不易患有感染症,能够降低恶性肿瘤的风险、或不易发生过敏症症状。若提高免疫功能,则即使在发生了这些的情况下,也能够减轻症状、或延迟症状的发展、或缩短直至状态恢复为止的期间。
本说明书中,免疫功能包括天然免疫和获得性免疫。免疫功能增强具体包括:免疫细胞(包括巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞、T细胞、B细胞和NK细胞)的激活和适当的抑制、免疫细胞的分化控制、细胞因子的产生控制(包括产生促进和抑制。)、病毒感染的抑制、细菌感染的抑制、真菌感染的抑制、寄生虫的清除、抗体产生的促进等方式。细胞因子包括炎症性细胞因子和抗炎性细胞因子。
巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞等吞噬细胞吞噬并分解病原体等。NK细胞释放出细胞毒性因子,破坏感染了病原体的宿主细胞。B细胞产生抗体进行病原体的灭活等。在这种免疫细胞的激活和抑制中,细胞因子担负着重要的作用。细胞因子包括趋化因子、干扰素、白细胞介素和肿瘤坏死因子等。辅助T细胞可以分为Th1细胞、Th2细胞和Th17细胞。Th1细胞参与细胞免疫,释放出以IFN-γ为主的细胞因子而激活NK细胞、巨噬细胞。Th2细胞参与体液免疫,释放出以IL-4为主的细胞因子而促进抗体产生。
趋化因子是引起白细胞等的转移、参与炎症形成的分泌蛋白,由其结构分为CC、CXC、C、CX3C这4个亚家族。属于CC亚家族的单核细胞趋化因子(Monocyte chemotacticprotein 1:MCP1)在单核细胞、巨噬细胞和内皮细胞中表达。MCP1除了在急性心肌炎的患者的血清中增加之外,报道了在缺血、出血、外伤、感染、低氧症、包括末梢神经损伤在内的多种类型的中枢神经系统(CNS)病变中上调。还启示MCP1参与银屑病、慢性类风湿性关节炎、动脉粥样硬化症等以单核细胞浸润为特征的疾病。
白细胞介素-6(IL-6)由包括T细胞、巨噬细胞在内的各种细胞产生。IL-6在炎症反应中发挥重要的作用,进行例如IL-8、MCP-1等趋化因子的产生亢进、ICAM-1、VCAM-1等细胞粘附分子的表达亢进、B细胞向抗体产生细胞的分化促进、控制性T细胞的抑制。白细胞介素-8(IL-8)由巨噬细胞、上皮细胞和血管内皮细胞等产生。IL-8诱导中性粒细胞向感染部位的转移、且诱导吞噬作用。
干扰素由细胞分泌以应对病毒等病原体的侵入。作为干扰素,已知I型干扰素、II型干扰素、III型干扰素。作为I型干扰素的干扰素-α和β(IFN-α、β)在T细胞、B细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等大多数细胞中产生,特别对抗病毒应答是重要的。IFN-α和β激活巨噬细胞和NK细胞。作为II型干扰素的干扰素-γ(IFN-γ)由T细胞和NK细胞等分泌。IFN-γ增强炎症、促进巨噬细胞和树突状细胞等吞噬作用。
本发明的免疫功能增强用组合物或免疫功能增强剂可以控制包含选自由白细胞介素-6、白细胞介素-8、单核细胞趋化因子、干扰素-β、干扰素-γ组成的组中的至少1种细胞因子的产生。本发明的组合物或制剂可以促进炎症性细胞因子的产生。本发明的组合物或制剂可以促进包含选自由白细胞介素-6、白细胞介素-8、单核细胞趋化因子、干扰素-β、干扰素-γ组成的组中的至少1种细胞因子的产生。
本发明的免疫功能增强用组合物或免疫功能增强剂能够抑制病毒、细菌、真菌等病原微生物感染。感染了病原微生物的细胞被杀伤性T细胞和NK细胞等清除。CD8为杀伤性T细胞的标记物,可以用作病原微生物感染的指标。CD8表达量多时病原微生物感染多,CD8表达量少时可以判断抑制了病原微生物感染。
通过促进上述细胞因子的产生,从而不仅提高肠道而且提高全身的免疫功能。其结果,能够实现在全身、中枢神经系统、呼吸系统、消化系统、尿路、皮肤、淋巴结等各种部位的由病原微生物所致的感染症的预防、治疗或减轻症状。
婴幼儿由于免疫功能未完全发育,因此增强免疫功能对于婴幼儿而言尤为重要。
<属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌>
属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌是革兰氏阳性的专性厌氧杆菌。作为属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌,只要不损害本发明的效果,就可以任意选择公知或未知的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌中的1种或2种以上。长双歧杆菌婴儿亚种有时也简称为婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)。作为属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌,可列举出长双歧杆菌婴儿亚种BCCM LMG23728、长双歧杆菌婴儿亚种M-63(NITE BP-02623)等。
长双歧杆菌婴儿亚种BCCM LMG23728可以由比利时的保藏机构-比利时微生物协调保藏中心(BCCM)(地址:比利时、B-1000布鲁塞尔Shiatsu Street街(STREET CUP街)8)获得。
长双歧杆菌婴儿亚种M-63(NITE BP-02623)在2018年1月26日以NITE BP-02623的保藏号在独立行政法人产业技术综合研究所专利微生物保藏中心(现在的国家技术评估学会,专利微生物保藏中心(NPMD)(邮政编码292-0818千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室)进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。长双歧杆菌婴儿亚种BCCM LMG23728和长双歧杆菌婴儿亚种M-63(NITE BP-02623)为实质上相同的细菌。
长双歧杆菌婴儿亚种M-63的菌形状是杆菌或分支状的多态形,不形成芽胞,也没有运动性。在BL琼脂培养基平板上涂布该菌,若在厌氧状态下37℃培养48小时,则形成不透明的圆形半球状的具有光泽的菌落。长双歧杆菌婴儿亚种M-63针对阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、蜜二糖、棉子糖、松二糖具有发酵性。
作为本发明的组合物或制剂中所含的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌,还可以包含与上述保藏菌株实质上相同的细菌。作为与保藏菌株实质上相同的细菌,例如包括以保藏菌株作为母菌株的衍生菌株。作为衍生菌株,包括由保藏菌株育种而得到的菌株和由保藏菌株自然生成的菌株。
本说明书中“实质上相同的细菌”是指同属或同种的细菌,16S rRNA基因的碱基序列与该细菌的16S rRNA基因的碱基序列具有98%以上、优选具有99%以上、更优选具有100%的同一性,并且优选与该细菌具有相同的菌学性质的细菌。实质上相同的细菌也可以是如下细菌:(1)利用RAPD(随机扩增多态性DNA,Randomly Amplified Polymorphic DNA)法或PFGE(脉冲场凝胶电泳,Pulsed-field gel electrophoresis)法判定为相同菌株的细菌(记载于Probiotics in food/Health and nutritional properties and guidelinesforevaluation 85第43页);(2)仅具有源自该细菌株的基因,不具有外源基因,DNA的同一性为95%以上的细菌;或者,(3)由该细菌株育种而得到(包括基因工程改变、突变、自发突变)的具有相同性状的细菌。
本发明的组合物或制剂中所含的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌可以是活菌或死菌,也可以是活菌和死菌这两者,但优选为活菌。也将在存活状态下摄取或给予而对宿主带来有益作用的微生物称为益生菌。死菌可以是破碎物。只要不损害本发明的效果,就可以在培养后进行加热或冷冻干燥等追加操作。追加操作优选活菌的存活率高者。
本发明的组合物或制剂中所含的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌可以适宜变更在双歧杆菌属细菌(双歧杆菌)的培养中通常使用的方法来进行培养。培养温度可以为例如25~50℃,优选为30~40℃。培养优选在厌氧条件下进行,例如可以边通入二氧化碳等厌氧气体边进行培养。培养基的pH只要是能够培育该细菌的范围就没有特别限定,例如为pH6.0~8.0。
作为培养本发明的组合物或制剂中所含的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的培养基,没有特别限定,可以根据需要适宜变更该细菌的培养中通常使用的培养基来使用。作为培养基的碳源,例如可以根据同化性使用半乳糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、纤维素二糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、淀粉、淀粉水解物、废糖蜜等糖类。作为培养基的氮源,例如可以使用氨、硫酸铵、氯化铵、硝酸铵等铵盐类、硝酸盐类等。作为培养基的无机盐类,例如可以使用氯化钠、氯化钾、磷酸钾、硫酸镁、氯化钙、硝酸钙、氯化锰、硫酸亚铁等。培养基中也可以使用淀粉、大豆粉、脱脂大豆粕、肉提取物、酵母提取物等有机成分。作为已制备的培养基,例如可以适宜使用MRS培养基。
属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌可以用于肠道发育促进、肠道疾病的预防、治疗或症状减轻、肺功能改善、肺部疾病的预防、治疗或症状减轻、或免疫功能增强。属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌由于长期用于食品、药剂中等,并且由于作为有益菌存在于动物的肠道中,因此可期待对生物体的高安全性。另外,由于认为不易发生副作用、依赖性,因此能够长期、连续地摄取,因此应用对象能够轻松地摄取。
只要不妨碍肠道发育促进效果、肠道疾病的预防、治疗或症状减轻效果、肺功能改善效果、肺部疾病的预防、治疗或症状减轻效果、和免疫功能增强效果,本发明的组合物或制剂就可以包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌以外的细菌。作为本发明的组合物或制剂中可以包含的细菌,例如可列举出其他双歧杆菌属细菌和乳酸菌。作为其他双歧杆菌属细菌,例如可列举出两歧双歧杆菌、长双歧杆菌长亚种、青春双岐杆菌、假小链双歧杆菌、动物双歧杆菌乳亚种、短双歧杆菌、伪长双歧杆菌等。作为乳酸菌,可列举出副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、加氏乳杆菌等。
本发明的组合物或制剂也可以包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的培养物。培养物可以经稀释或浓缩。细菌的培养物中,可以包含细菌的分泌物和代谢物。
<饮食品组合物>
本发明的组合物可以广泛用作药物、饮食品和饲料。组合物优选通过经口或经管摄取,更优选经口摄取。组合物可以以药物或饮食品的形态日常摄取。本发明的组合物优选为饮食品组合物。本发明的饮食品组合物能够安全且轻松地促进肠道的发育、实现肠道疾病的预防、治疗或减轻症状、促进肺功能的改善、肺部疾病的预防、治疗或减轻症状的、或增强免疫功能。
本发明的饮食品组合物为液体、糊剂状、固体、粉末等形态均可,还包括压片糖、流质食品等形态。作为本发明的饮食品组合物,例如可列举出小麦粉制品、速食品、农产加工品、水产加工品、畜产加工品、乳/乳制品、油脂类、基础调味料、复合调味料/食品类、冷冻食品、糖果类、饮料、除这些以外的市售品等。
作为小麦粉制品,例如可列举出面包、通心粉、意大利细面条、面类、蛋糕混合料、油炸粉、面包粉等。作为速食品类,例如可列举出方便面、杯面、蒸煮/烹调食品、烹调罐头、微波用食品、速食汤/炖菜、速食大酱汤/吸入物、罐装浓汤、冻/干食物、其它速食品等。作为农产加工品,例如可列举出农作物罐头、水果罐头、果酱(jam)/橘子酱(Marmalade)类、咸菜、煮豆类、农产品干物类、谷物(谷物加工品)等。作为水产加工品,例如可列举出水产罐头、鱼肉火腿/香肠、水产糜类制品、水产鱼贝类、佃煮类等。作为畜产加工品,例如可列举出畜产罐头/糊剂类、畜肉火腿/香肠等。作为乳/乳制品,例如可列举出发酵乳、加工乳、乳饮料、酸奶类、乳酸菌饮料类、乳酪、冰淇淋类、配方奶粉类、奶油、其它乳制品等。作为油脂类,例如可列举出黄油、人造奶油类、植物油等。作为基础调味剂,例如可列举出酱油、大酱、沙司(Sauce)类、西红柿加工调味剂、味醂类、食醋类等,作为复合调味剂/食品类,可列举烹调混合料、咖喱的原料类、鱼露类、沙拉(dressing)类、面汤类、香辛料类、其它复合调味剂等。作为冷冻食品,例如可列举出材料冷冻食品、半烹调冷冻食品、经烹调的冷冻食品等。作为点心类,例如可列举出焦糖、冰糖、口香糖、巧克力、曲奇(cookie)、饼干(biscuits)、蛋糕(cake)、馅饼(pie)、小吃(snack)、薄脆饼(cracker)、日本点心、米点心、豆点心、西式甜点、其它点心等。作为饮料,例如可列举出碳酸饮料、天然果汁、果汁饮料、带有果汁的清凉饮料、果肉饮料、带有果粒的果实饮料、蔬菜系饮料、豆奶、豆奶饮料、咖啡饮料、茶饮料、粉末饮料、浓缩饮料、运动饮料、营养饮料、酒精饮料、其它嗜好饮料等。作为上述以外的市售食品,例如可列举出婴儿食品、米饭伴侣、茶泡饭海带等。
饮食品组合物中的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的含量没有特别限定,可以基于每天的摄取量进行适宜选择。饮食品组合物中的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的含量例如优选为1×106~1×1012cfu/g或1×106~1×1012cfu/mL,更优选为1×107~1×1011cfu/g或1×107~1×1011cfu/mL,进一步优选为1×108~1×1010cfu/g或1×108~1×1010cfu/mL。单位cfu为colony forming units的缩写,是菌落形成单位。细菌为死菌时,cfu/g或cfu/mL可以替换成个细胞/g或个细胞/mL。
饮食品组合物中的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的含量只要不损害本发明的效果就可以任意地设定。饮食品组合物中的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的含量相对于饮食品组合物的最终组合物可以设定为0.3质量%~5.0质量%。
对于饮食品组合物的摄取量,作为给予或摄取对象的每1kg体重的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的量,优选1×106~1×1012cfu/天,更优选1×107~1×1011cfu/天,进一步优选1×108~1×1010cfu/天。该细菌为死菌时,cfu/天可以替换成个细胞/天。
饮食品组合物也可以是配方奶粉或配方液态奶。作为配方奶粉或配方液态奶,可列举出婴儿用配方奶粉或配方液态奶、较大婴儿用配方奶粉或配方液态奶、低出生体重儿用配方奶粉或配方液态奶、小儿用配方奶粉或配方液态奶、成人用配方奶粉或配方液态奶、高龄者用配方奶粉或配方液态奶、过敏症用配方奶粉或配方液态奶、乳糖不耐症用配方奶粉或配方液态奶、先天代谢异常用配方奶粉或配方液态奶等。饮食品组合物特别优选为婴儿用配方奶粉或配方液态奶、较大婴儿用配方奶粉或配方液态奶、低出生体重儿用配方奶粉或配方液态奶、小儿用配方奶粉或配方液态奶。
组合物可以根据其种类包含各种添加物。组合物优选包含母乳低聚糖。母乳低聚糖是人乳中所含的除乳糖外的三糖以上的寡糖的统称。哺乳动物的乳具有乳糖-N-四糖(LNT)、乳糖-N-新四糖(LNnT)、乳糖-N-六糖(LNH)、乳糖-N-新六糖(LNnH)等12系列的核心骨架。通过在这些骨架添加路易斯a,b,x、α2-3/2-6N-乙酰神经氨酸,从而使糖链有100种变化。在母乳中包含10~20g/L母乳低聚糖,母乳低聚糖可以包含130种以上的寡糖。
作为组合物中所含的母乳低聚糖,只要是属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌能利用的寡糖,只要不损害本发明的效果,就可以任意选择公知或未知的母乳低聚糖中的1种或2种以上而使用。作为母乳低聚糖,例如可列举出L-岩藻糖、乳糖-N-岩藻五糖I、乳糖-N-岩藻五糖II、2’-岩藻糖基乳糖、3’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-岩藻五糖III、3’-岩藻糖基乳糖-N-六糖、乳糖-N-二岩藻六糖I、乳糖-二岩藻四糖、乳糖-二岩藻六糖I、乳糖-二岩藻六糖II、乳糖-N-四糖、二岩藻糖基唾液酸基乳糖-N-六糖(Difucosyl syalyllacto-N-hexaose)、唾液酸基乳糖-N-四糖、岩藻基唾液酸基乳糖-N-六糖I(Fucosylsyalyl lacto-N-hexaose I)、3’-岩藻糖基乳糖-N-四糖(Fuc 1,2Gal,Fuc 1,4Gal NAC)、乳糖-N-新四糖、3’-唾液酸基-3-岩藻糖基乳糖、二唾液酸单岩藻糖基乳糖-N-新六糖、单唾液酸单岩藻糖基乳糖-N-八糖、唾液酸基乳糖-N-岩藻六糖II、二唾液酸基乳糖-N-岩藻五糖II、二唾液酸单岩藻糖基乳糖-N-四糖、2’-唾液酸基乳糖、2’-唾液酸基乳糖胺、3’-唾液酸基乳糖、3’-唾液酸基乳糖胺、6’-唾液酸基乳糖、6’-唾液酸基乳糖胺、唾液酸基乳糖-N-新四糖c、单唾液酸基乳糖-N-六糖、二唾液酸基乳糖-N-六糖I、单唾液酸基乳糖-N-新六糖I、单唾液酸基乳糖-N-新六糖II、二唾液酸基乳糖-N-新六糖、二唾液酸基乳糖-N-四糖、二唾液酸基乳糖-N-六糖II、唾液酸基乳糖-N-四糖a、二唾液酸基乳糖-N-六糖I、唾液酸基乳糖-N-四糖b、2’-岩藻糖基乳糖-N-六糖、3’-岩藻糖基乳糖-N-新六糖、2’-岩藻糖基-N-乙酰葡糖胺、乳糖-N-岩藻五糖V、乳糖-N-六糖、对乳糖-N-六糖、乳糖-N-新六糖、对乳糖-N-新六糖、单岩藻糖基乳糖-N-六糖II、同质异构岩藻糖基化乳糖-N-六糖(1)、同质异构岩藻糖基化乳糖-N-六糖(3)、同质异构岩藻糖基化乳糖-N-六糖(2)、二岩藻糖基-对乳糖-N-新六糖、二岩藻糖基-对乳糖-N-六糖、2’3’-二岩藻糖基乳糖-N-六糖、乳糖-N-新八糖、对乳糖-N-八糖、异乳糖-N-八糖、乳糖-N-八糖、单岩藻糖基乳糖-新八糖、单岩藻糖基乳糖-N-八糖、二岩藻糖基乳糖-N-八糖I、二岩藻糖基乳糖-N-八糖II、二岩藻糖基乳糖-N-新八糖II、二岩藻糖基乳糖-N-新八糖I、乳糖-N-十糖、三岩藻基乳糖-N-新八糖、三岩藻基乳糖-N-八糖、三岩藻基-异乳糖-N-八糖、乳糖-N-二岩藻六糖II、唾液酸基-乳糖-N-四糖a、唾液酸基-乳糖-N-四糖b、唾液酸基-乳糖-N-四糖c、唾液酸基-岩藻糖基-乳糖-N-四糖I、唾液酸基-岩藻糖基-乳糖-N-四糖II、二唾液酸基-乳糖-N-四糖、乳糖-N-新四糖等及它们的组合。本发明的组合物优选包含选自2’-岩藻糖基乳糖(以下也称为“2’-FL”。)、乳糖-N-岩藻五糖I(以下也称为“LNFPI”。)、乳糖-N-二岩藻六糖I(以下也称为“LNDFP I”。)和乳糖-N-四糖(以下也称为“LNnT”。)中的至少1种。
2’-FL和LNnT具有双歧杆菌增殖活性,已知通过选择性地用于双歧杆菌,从而作为双歧杆菌的增殖因子发挥作用,对于双歧杆菌主导的肠道菌群的形成是重要的。另外,由于能够合成母乳低聚糖,因此产业上可利用。
对于母乳低聚糖的添加方法,只要不损害本发明的效果就没有特别限定,例如使母乳低聚糖液态或粉末化后添加并混合,能够制造本发明的组合物。
母乳低聚糖的含量只要不损害本发明的效果就可以任意地设定。本发明中,组合物中的母乳低聚糖的含量相对于组合物的最终组合物可以设定为0.3质量%~5.0质量%。
组合物可以进一步包含益生元。益生元是指:通过使大肠内的特定细菌的增殖和活性选择性地发生变化,从而对宿主产生有利的影响,改善宿主的健康的难消化性食品成分。益生元只要不损害本发明的效果就没有特别限制,例如优选乳酮糖、棉子糖、低聚半乳糖、低聚果糖、低聚大豆糖、低聚乳果糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、低聚咖啡豆甘露糖、葡糖酸、聚葡萄糖、菊糖等,其中,更优选乳酮糖、棉子糖、低聚半乳糖等,进一步优选乳酮糖、棉子糖和低聚半乳糖。
对于本发明的饮食品组合物的制造,本领域技术人员可以利用公知的方法进行,可以通过将属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌添加至公知的饮食品中而制造,也可以混合在饮食品的原料中而制造新型饮食品组合物。食品组合物的制造中除了添加和混合属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的工序之外,可以适宜组合成型工序、杀菌工序、发酵工序、烧成工序、干燥工序、冷却工序、造粒工序、包装工序等来进行。属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌也可以作为发酵乳制造用发酵剂使用。
组合物的制造中的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的含量没有特别限定,例如优选为1×106~1×1012cfu/g或1×106~1×1012cfu/mL,更优选为1×107~1×1011cfu/g或1×107~1×1011cfu/mL,进一步优选为1×108~1×1010cfu/g或1×108~1×1010cfu/mL。细菌为死菌时,cfu/g或cfu/mL可以替换成个细胞/g或个细胞/mL。
肠道发育促进用饮食品组合物和肠道疾病的预防、治疗或症状减轻用饮食品组合物可以以标示了肠道发育、肠道疾病的预防、治疗或症状减轻等保健用途的饮食品的形式来提供/销售。这样的标示没有特别限定,例如可列举出“促进肠道的发育”、“改善营养吸收能力”、“助消化”、“增加体重”、“促进成长”、“抑制肠道炎症”、“预防肠道疾病”、“预防/治疗感染症”、“预防/治疗食物中毒”、“预防/治疗食物过敏症”、“预防/治疗特应性皮炎”、“预防/治疗过敏性鼻炎”、“预防/治疗哮喘”、“预防/治疗焦虑症”、“改善认知功能/抑制认知功能降低”。“标示”行为中包括用于向需求者通知上述用途的全部行为,只要是能唤起/类推前述用途的表现,无论标示的目的、标示的内容、标示的对象物/介质等如何,全部均属于本发明的“标示”行为。
肺功能改善用饮食品组合物和肺部疾病的预防、治疗或症状减轻用饮食品组合物可以以标示了肺功能改善、肺部疾病的预防、治疗或症状减轻等保健用途的饮食品的形式来提供/销售。这样的标示没有特别限定,例如可列举出“改善肺的功能”、“帮助肺的发育”、“促进成长”、“预防肺部疾病”、“预防肺炎”、“抑制肺的炎症”、“维持肺的健康”、“保护肺免受感染”。
免疫功能增强用饮食品组合物可以以标示了免疫功能增强等保健用途的饮食品的形式来提供/销售。这样的标示没有特别限定,例如可列举出“提高免疫功能”、“提高免疫力”、“预防感冒”、“增进健康”、“抑制病毒感染”、“抑制细菌感染”、“抑制真菌感染”、“清除寄生虫”、“不易疲劳”、“缓解寒意”。
标示内容优选为得到行政等许可的标示(例如,基于行政规定的各种制度而得到许可、并以基于该得到许可的形态进行的标示等)。另外优选在包装、容器、商品目录、宣传手册、POP等销售现场的宣传材料、其他文件等中带有这样的标示内容。
“标示”还可列举出作为健康食品、功能性食品、经肠营养食品、特殊用途食品、保健功能食品、特定保健用食品、营养功能食品、功能性标示食品、药物用准药品等的标示。其中特别是被消费者厅许可的标示、例如可列举出特定保健用食品、营养功能食品、或者被功能性标示食品相关制度或与其相似的制度许可的标示等。具体而言,可以列举出作为特定保健用食品的标示、作为带有条件的特定保健用食品的标示、作为功能性标示食品的标示、对身体的构造、功能产生影响的内容的标示、疾病风险降低标示、基于科学根据的功能性的标示等。
<药物组合物>
药物组合物只要含有属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌就没有特别限制。药物组合物可以直接使用属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌,也可以配混生理上可接受的液体或制剂载体而制造。
药物组合物的剂型没有特别限制,可以制成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂等固体制剂;溶液剂、糖浆剂、悬浮剂、乳剂等液体制剂、栓剂、软膏剂等。在进行制剂时,可以使用在通常的制剂化中使用的制剂载体。另外,药物组合物也可以含有具有公知的或未来会发现的肠道发育促进作用、肠道疾病的预防、治疗或症状减轻作用、肺功能改善作用、肺部疾病的预防、治疗或症状减轻作用、或免疫功能增强作用的成分。
药物组合物中的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的含量没有特别限定,可以根据剂型并基于每天的摄取量或给药量进行适宜选择。药物组合物中的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的含量例如优选为1×106~1×1012cfu/g或1×106~1×1012cfu/mL,更优选为1×107~1×1011cfu/g或1×107~1×1011cfu/mL,进一步优选为1×108~1×1010cfu/g或1×108~1×1010cfu/mL。细菌为死菌时,cfu/g或cfu/mL可以替换成个细胞/g或个细胞/mL。
对于药物组合物的给药量,作为给药对象的每1kg体重的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的量,优选1×106~1×1012cfu/天,更优选1×107~1×1011cfu/天,进一步优选1×108~1×1010cfu/天。细菌为死菌时,cfu/天可以替换成个细胞/天。药物组合物的给予方法可以是经口给药或非经口给药。药物组合物的给予可以一天一次,也可以分多次。
另外,作为制剂载体,可以根据剂型使用各种有机或无机的载体。作为固体制剂的情况的载体,例如可列举出赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂、矫味矫臭剂等。
作为赋形剂,例如可列举出乳糖、白糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇等糖衍生物;玉米淀粉、马铃薯淀粉、α-淀粉、糊精、羧甲基淀粉等淀粉衍生物;结晶纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙等纤维素衍生物;阿拉伯胶;葡聚糖;普鲁兰多糖;轻质无水硅酸、合成硅酸铝、偏硅酸铝酸镁等硅酸盐衍生物;磷酸钙等磷酸盐衍生物;碳酸钙等碳酸盐衍生物;硫酸钙等硫酸盐衍生物等。
作为结合剂,例如除了上述赋形剂以外还可列举出明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、Macrogol等。
作为崩解剂,例如除了上述赋形剂以外还可列举出交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯基吡咯烷酮等经化学修饰的淀粉或纤维素衍生物等。
作为润滑剂,例如可列举出滑石;硬脂酸;硬脂酸钙、硬脂酸镁等硬脂酸金属盐;硅胶;胶状硅酸镁铝(VEEGUM)、鲸蜡等蜡类;硼酸;甘醇;富马酸、己二酸等羧酸类;苯甲酸钠等羧酸钠盐;硫酸钠等硫酸盐类;亮氨酸;月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁等月桂基硫酸盐;硅酸酐、硅酸水合物等硅酸类;淀粉衍生物等。
作为稳定剂,例如可列举出对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等对羟基苯甲酸酯类;氯丁醇、苯甲醇、苯乙醇等醇类;苯扎氯铵;乙酸酐;山梨酸等。
作为矫味矫臭剂,可列举例如甜味剂、酸味剂、香料等。需要说明的是,作为经口给药用的液体制剂所使用的载体,可列举水等溶剂、矫味矫臭剂等。
药物组合物可以单独给药,也可以与其他药物、例如其他肠道发育促进用药物、肠道疾病的预防、治疗或症状减轻用药物、肠调节剂、胃肠剂、针对其他肠道疾病的药物、肺功能改善用药物、肺部疾病的预防、治疗或症状减轻用药物、免疫功能增强用药物、抗生剂、病毒抑制剂、抗炎症剂、镇痛剂等组合使用。
<饲料组合物>
作为本发明的饲料组合物,例如可列举出宠物食品、家畜饲料和养殖鱼饲料等。饲料组合物可以通过在通常的饲料或其原料、例如谷类、粕类、糠类、鱼粉、骨粉、油脂类、脱脂粉乳、乳清、矿物质饲料、和酵母类等中混合属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌而制造。例如青贮那样,经过基于添加的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的发酵工序,也可以制造饲料组合物。所制造的饲料组合物可以经口向通常的哺乳动物、家畜类、养殖鱼类、和观赏动物等给予。
饲料组合物中的属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的含量可根据饲料组合物的形态、给药对象进行适宜设定,例如优选为1×106~1×1012cfu/g或1×106~1×1012cfu/mL,更优选为1×107~1×1011cfu/g或1×107~1×1011cfu/mL,进一步优选为1×108~1×1010cfu/g或1×108~1×1010cfu/mL。细菌为死菌时,cfu/g或cfu/mL可以替换成个细胞/g或个细胞/mL。
<促进肠道的发育或肠道疾病的预防、治疗或症状减轻的方法>
促进肠道的发育或肠道疾病的预防、治疗或症状减轻的方法包括向哺乳动物给予属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的工序。属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌可以以上述的包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的组合物的形态给予。
作为哺乳动物,可列举出人、牛、绵羊、山羊、猪、狗、猫、马等。给药对象可以是婴幼儿,也可以是人的婴幼儿。婴幼儿包括婴儿和幼儿,进而详细而言,包括婴儿、幼儿和新生儿,进而详细而言,包括婴儿、幼儿、新生儿、未成熟儿、早产儿和低出生体重儿。在婴幼儿期之后也可以继续给予。通过对婴幼儿给予属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌,从而使肠道的该细菌容易增殖,容易得到肠道发育促进效果和肠道疾病的预防、治疗或症状减轻效果。
<改善肺功能或肺部疾病的预防、治疗或症状减轻的方法>
改善肺功能或肺部疾病的预防、治疗或症状减轻的方法包括向哺乳动物给予属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的工序。属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌可以以上述的包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的组合物的形态给予。
通过对婴幼儿给予属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌,从而使肠道的该细菌容易增殖,容易得到肺功能改善效果和肺部疾病的预防、治疗或症状减轻效果。
<增强免疫功能的方法>
增强免疫功能的方法包括向哺乳动物给予属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的工序。属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌可以以上述的包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的组合物的形态给予。
通过对婴幼儿给予属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌,从而使肠道的该细菌容易增殖,容易得到免疫功能增强效果。
本说明书中,婴儿是指处于婴儿期的孩子,婴儿期是指:对象为人的情况,自出生时起未满1岁(即将满1岁之日的前一天)。婴儿期是指:以母乳等乳作为主要的营养源的时期。
本说明书中,幼儿是指处于幼儿期的孩子,幼儿期是指:对象为人的情况,自满1岁之日起到进入学龄期之前的期间。幼儿期优选指:自满1岁之日起到即将满6岁之日和小学入学日中任意的较早日的前一天为止。
对于本发明的组合物或制剂,对象为人的情况,优选在自出生时起到进入学龄期之前为止摄取或给予。对于本发明的组合物或制剂,对象为人的情况,更优选在自出生时起到未满3岁(即将满3岁之日的前一天)摄取或给予,进一步优选在婴儿期摄取或给予,更进一步优选在自满3个月起到未满1岁(即将满1岁之日的前一天)摄取或给予。
对于对象为人以外的哺乳动物时的该时期,换算为与这些相当的时期即可。
对象为人时的“婴儿期”,大鼠的情况,相当于从出生时起到满20天龄。以下同样地,牛的情况,相当于从出生时起到满10周龄之日的前一天。山羊的情况,相当于从出生时起到满10周龄之日的前一天。绵羊的情况,相当于从出生时起到满12周龄之日的前一天。猪的情况,相当于从出生时起到满8周龄之日的前一天。猴子的情况,相当于从出生时起到满14周龄之日的前一天。狗的情况,相当于从出生时起到满6周龄之日的前一天。猫的情况,相当于从出生时起到满6周龄之日的前一天。小鼠的情况,相当于从出生时起到满20天龄。仓鼠的情况,相当于从出生时起到满20天龄。豚鼠的情况,相当于从出生时起到满20天龄。
对于对象为人时的“幼儿期”,大鼠的情况,相当于从满21天龄到满5周龄之日的前一天。以下同样地,牛的情况,相当于从满10周龄到满1岁之日的前一天。山羊的情况,相当于从满10周龄到满1岁之日的前一天。绵羊的情况,相当于从满12周龄到满1岁之日的前一天。猪的情况,相当于从满8周龄到满4个月龄之日的前一天。猴子的情况,相当于从满14周龄到满1.5岁之日的前一天。狗的情况,相当于从满6周龄到满6个月龄之日的前一天。猫的情况,相当于从满6周龄到满6个月龄之日的前一天。小鼠的情况,相当于从满21天龄到满5周龄之日的前一天。仓鼠的情况,相当于从满21天龄到满5周龄之日的前一天。豚鼠的情况,相当于从满21天龄到满5周龄之日的前一天。
对于对象为人时的“满3岁”,大鼠的情况,相当于满4周龄。以下同样地,牛的情况,相当于满6个月龄。山羊的情况,相当于满6个月龄。绵羊的情况,相当于满6个月龄。猪的情况,相当于满3个月龄。猴子的情况,相当于满9个月龄。狗的情况,相当于满3个月龄。猫的情况,相当于满3个月龄。小鼠的情况,相当于满4周龄。仓鼠的情况,相当于满4周龄。豚鼠的情况,相当于满4周龄。
对于对象为人时的“满3个月”,大鼠的情况,相当于满5天龄。以下同样地,牛的情况,相当于满2.5周龄。山羊的情况,相当于满2.5周龄。绵羊的情况,相当于满3周龄。猪的情况,相当于满2周龄。猴子的情况,相当于满3周龄。狗的情况,相当于满1.5周龄。猫的情况,相当于满1.5周龄。小鼠的情况,相当于满5天龄。仓鼠的情况,相当于满5天龄。豚鼠的情况,相当于满5天龄。
对于对象为人时的“满1岁”,大鼠的情况,相当于满21天龄。以下同样地,牛的情况,相当于满10周龄。山羊的情况,相当于满10周龄。绵羊的情况,相当于满12周龄。猪的情况,相当于满8周龄。猴子的情况,相当于满14周龄。狗的情况,相当于满6周龄。猫的情况,相当于满6周龄。小鼠的情况,相当于满21天龄。仓鼠的情况,相当于满21天龄。豚鼠的情况,相当于满21天龄。
实施例
以下列举实施例对本发明进一步更详细地说明,但本发明不限定于这些。
向每个实验组提供5头LWD系统的去势雄猪用于试验,在宫城大学食产业学部的大棚猪舍饲养。猪在4周龄时导入,进行1周驯化后,自5周龄时起开始进行试验。作为基础饲料的抗菌剂无添加饲料,根据生育时期使用JA ZEN-NOH KITANIHON KUMIAI FEED CO.,LTD.的“HPチャレンジハイミルクワンR”、“八幡平Aマッシュ”、“产直猪肥育B”或“产直猪肥育C”。M-63给药组的猪,在5~16周龄时1天1次经口给予将长双歧杆菌婴儿亚种M-63株(以下称为“M-63”。)粉末悬浮于灭菌PBS(-)中而得到的液体。M-63的给药量为1.0×1011cfu/60kg/天,根据体重的增加,每周递增,对照组的猪中,代替M-63粉末,给予了将与M-63粉末等量的木薯淀粉悬浮于灭菌PBS(-)而得到的液体。
<实验1>
在19周龄时解剖猪,取出消化道。将M-63给药组和对照组的猪肠道内腔面的照片分别示于图1和图2。M-63给药组的猪小肠和大肠中,与对照组的猪相比皱襞的数量增加,促进了肠道的发育。认为M-63给药组的猪与对照组的猪相比,使肠道疾病、特别是由肠道发育缺陷或功能下降引起的疾病得到了预防、治疗或症状减轻。
对每10cm的小肠长轴方向截面的环状襞的顶点进行计数,求出平均环状襞数/cm求出。环状襞的顶点的计数中,每头猪进行3个部位。将结果示于表1。与对照组的猪相比,M-63给药组的猪的环状襞数显著增加。
[表1]
平均环状襞数(每1cm) | 标准偏差 | |
M-63给药组 | 0.733 | 0.137 |
对照组 | 0.507 | 0.144 |
将M-63给药组和对照组的猪15周龄时的平均体重示于表2。示出M-63给药组的猪的体重增加比对照组的猪更良好的倾向。
[表2]
平均体重(kg) | 标准偏差 | |
M-63给药组 | 72.0 | 32.5 |
对照组 | 64.3 | 18.0 |
<实验2>
解剖19周龄的猪,取出肺。将M-63给药组和对照组的猪肺的右中叶和后叶腹面的照片分别示于图3和图4。对照组的猪肺中,变为红褐色,观察到萎缩的部位(图中,用虚线包围的位置)。肺组织的变色认为是由淤血所致。对照组的猪的肺容积降低,认为在一部分肺中功能已消失。这些发现是猪支原体肺炎典型的病变。M-63给药组的猪与对照组的猪相比,病变部位小,肺部疾病得到预防、治疗或症状得到减轻。
按照肺的前叶、中叶、后叶和副叶分别用肉眼确认病变的面积,将对应于病变面积的点数相加,计算出每个个体的肺病变评分。肺病变评分参照Opriessnig T.et al,VelPathol,2004 Nov;41(6):624-40,依据表3所示的点数进行计算。将结果示于表4。与对照组的猪相比,M-63给药组的猪的肺病变评分显著低。
[表3]
[表4]
肺病变评分 | 标准偏差 | |
M-63给药组 | 1.500 | 0.707 |
对照组 | 3.000 | 0.707 |
<实验3>
解剖19周龄时的猪,测定了大肠组织中的细胞因子基因的表达量。细胞因子表达量通过实时PCR检测mRNA量而求出。作为内参,使用G3PDH。在提取RNA时,使用ISOGENII(NIPPON GENE CO.,LTD.),使用PrimeScript Rtase(Takara Bio Inc.)进行实时PCR。检测中使用的引物示于序列表。
如表5~9所示,与对照组的猪相比,M-63给药组的猪中IL-6、IL-8、MCP-1、IFN-β和IFN-γ的表达量升高。可知:通过给予M-63而激活细胞因子的表达,改善了免疫功能。
[表5]
IL-6表达量 | 标准偏差 | |
M-63给药组 | 1.005 | 0.226 |
对照组 | 0.831 | 0.035 |
[表6]
IL-8表达量 | 标准偏差 | |
M-63给药组 | 0.996 | 0.220 |
对照组 | 0.842 | 0.036 |
[表7]
MCP-1表达量 | 标准偏差 | |
M-63给药组 | 1.017 | 0.212 |
对照组 | 0.828 | 0.021 |
[表8]
IFN-β表达量 | 标准偏差 | |
M-63给药组 | 0.977 | 0.213 |
对照组 | 0.806 | 0.038 |
[表9]
IFN-γ表达量 | 标准偏差 | |
M-63给药组 | 0.849 | 0.180 |
对照组 | 0.707 | 0.022 |
依据以下的方法,进行猪肠道的CD8免疫染色。
(1)冷冻块的制作
1.用PBS充分清洗小肠和大肠部组织,用擦拭纸去除多余的水分。
2.在包埋容器中注入Tissue-Tek O.C.T compound(Sakura Finetek Japan Co.,Ltd.)至8成量,使组织沉淀。
3.浸渍于液氮中,使其瞬间冷冻,制成冷冻块。直至分析时为止,冷冻块保管在-80℃下。
(2)组织切片的制作
1.使用低温恒温器(Themmo Scientific公司)将冷冻块切出薄片,制作了冷冻切片。
2.将冷冻切片粘接在带有APS涂层的载玻片(松浪硝子株式会社)上,作为冷冻组织切片样品。直至分析时为止,组织切片样品保管在一80℃下。
(3)荧光免疫染色
1.在用拒水笔(LIQUID BLOCKER SUPER PAP PEN)包围在切片的周边的情况下,注入TBS-Ca(Tris-Cl 6.06g、CaCl2 0.147g、NaCl 8.8g、pH7.6),充分冲洗O.C.T。
2.注入4%多聚甲醛溶液,在室温下固定15分钟。
3.用TBS-Ca冲洗固定液后,在-20℃下进行30分钟甲醇处理,再次置换为TBS-Ca。
4.将载玻片放入湿润箱中,将5%脱脂乳/TBS-Ca注入拒水笔中,静置1小时。
5.注入TBS-Ca,静置3分钟后进行冲洗。
6.用5%脱脂乳/TBS-Ca稀释一次抗体,利用与4.相同的方法注入载玻片上后,在室温下静置1小时。
7.注入TBS-Ca,静置3分钟后进行冲洗。将该操作重复2次。
8.用5%脱脂乳/TBS-Ca稀释二次抗体,利用与4.相同的方法注入载玻片上后,在室温下静置30分钟。
9.注入TBS-Ca,静置3分钟后进行冲洗。将该操作重复3次。
10.滴加EntellanTMnew,用盖玻片封入后,使用荧光显微镜进行观察和拍摄。
将一次抗体和二次抗体示于表10。
[表10]
使用抗体 | 稀释倍率 | |
一次抗体 | 小鼠抗牛CD8抗体(Bio-Rad公司) | 1/50 |
二次抗体 | Alexa Flour 488山羊抗小鼠(invitrogen公司) | 1/750 |
将M-63给药组和对照组的猪小肠派尔集合淋巴结周边的CD8免疫染色结果分别示于图5和图6。图中的箭头所示的细胞是CD8的表达特别强的细胞。对照组的猪观察到CD8的强表达,但M-63给药组中抑制了CD8的表达。
另外,利用落射荧光和DIC用显微镜,以相同的分辨率(1040×1388像素)测定CD8抗体(abcam公司、抗CD8α抗体[76-2-11](FITC)(ab24883))的荧光,将测定了CD8的表达面积的结果示于表11。与对照组的猪相比,M-63给药组的CD8的表达面积减少。CD8为杀伤性T细胞的标记物,示出M-63给药组与对照组相比,病毒感染的细胞少。可知:通过给予M-63,病毒感染被抑制,免疫功能得到了改善。
[表11]
CDB表达面积(像素) | |
M-63给药组 | 22058 |
对照组 | 102982 |
序列表
<110> 森永乳业株式会社(Morinaga Milk Industry Co., Ltd.)
<120> 肠道发育促进用组合物、肺功能改善用组合物和免疫功能增强用组合物
<130> 9201255WO01
<150> JP 2020-089635
<151> 2020-05-22
<150> JP 2020-089636
<151> 2020-05-22
<150> JP 2020-089637
<151> 2020-05-22
<160> 12
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> G3PDH Fwd
<400> 1
cctcccgctt cgctctct 18
<210> 2
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> G3PDH Rev
<400> 2
gctggcgacg caaaaga 17
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> IL-6 Fwd
<400> 3
tggataagct gcagtcacag 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> IL-6 Rev
<400> 4
attatccgaa tggccctcag 20
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> IL-8 Fwd
<400> 5
gctctctgtg aggctgcagt t 21
<210> 6
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> IL-8 Rev
<400> 6
tttatgcact ggcatcgaag tt 22
<210> 7
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> MCP-1 Fwd
<400> 7
acagaaagag tcaccagcag caa 23
<210> 8
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> MCP-1 Rev
<400> 8
gcccgcgatg gtcttg 16
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> IFN-β Fwd
<400> 9
agttgcctgg gactcctcaa 20
<210> 10
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> IFN-β Rev
<400> 10
cctcagggac ctcaaagttc at 22
<210> 11
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> IFN-γ Fwd
<400> 11
tggtagctct gggaaactga atg 23
<210> 12
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> IFN-γ Rev
<400> 12
ggctttgcgc tggatctg 18
Claims (41)
1.一种组合物,其为肠道发育促进用组合物,包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
2.根据权利要求1所述的组合物,其促进肠道的皱襞形成。
3.一种组合物,其为肠道疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物,包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
4.根据权利要求3所述的组合物,其中,所述肠道疾病是起因于肠道发育缺陷或肠道功能下降的疾病。
5.根据权利要求1~4中任一项所述的组合物,其为饮食品组合物。
6.根据权利要求1~5中任一项所述的组合物,其中,所述细菌为长双歧杆菌婴儿亚种M-63(NITE BP-02623)。
7.根据权利要求1~6中任一项所述的组合物,其中,所述细菌为活菌。
8.根据权利要求1~7中任一项所述的组合物,其还包含母乳低聚糖。
9.根据权利要求1~8中任一项所述的组合物,其为配方奶粉或配方液态奶。
10.一种肠道发育促进剂、或肠道疾病的预防、治疗或症状减轻剂,其包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
11.属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的用于促进肠道发育、或用于肠道疾病的预防、治疗或症状减轻的应用。
12.一种属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌,其用于促进肠道发育、或用于肠道疾病的预防、治疗或症状减轻。
13.属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌在制造肠道发育促进用组合物、或制造肠道疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物中的应用。
14.一种促进肠道发育的方法、或肠道疾病的预防、治疗或症状减轻的方法,其包括向哺乳动物给予属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的工序。
15.一种组合物,其为肺功能改善用组合物,包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
16.一种组合物,其为肺部疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物,包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
17.根据权利要求16所述的组合物,其中,所述肺部疾病为肺炎。
18.根据权利要求15~17中任一项所述的组合物,其为饮食品组合物。
19.根据权利要求15~18中任一项所述的组合物,其中,所述细菌为长双歧杆菌婴儿亚种M-63(NITE BP-02623)。
20.根据权利要求15~19中任一项所述的组合物,其中,所述细菌为活菌。
21.根据权利要求15~20中任一项所述的组合物,其还包含母乳低聚糖。
22.根据权利要求15~21中任一项所述的组合物,其为配方奶粉或配方液态奶。
23.一种肺功能改善剂、或肺部疾病的预防、治疗或症状减轻剂,其包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
24.属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的用于肺功能改善、或肺部疾病的预防、治疗或症状减轻的应用。
25.一种属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌,其用于肺功能改善、或肺部疾病的预防、治疗或症状减轻。
26.属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌在制造肺功能改善用组合物、或制造肺部疾病的预防、治疗或症状减轻用组合物中的应用。
27.一种改善肺功能的方法、或肺部疾病的预防、治疗或症状减轻的方法,其包括向哺乳动物给予属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的工序。
28.一种组合物,其为免疫功能增强用组合物,包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
29.根据权利要求28所述的组合物,其控制细胞因子的产生。
30.根据权利要求29所述的组合物,其中,所述细胞因子包括选自由白细胞介素-6、白细胞介素-8、单核细胞趋化因子、干扰素-β、干扰素-γ组成的组中的至少1种。
31.根据权利要求28所述的组合物,其抑制病原微生物感染。
32.根据权利要求28~31中任一项所述的组合物,其为饮食品组合物。
33.根据权利要求28~32中任一项所述的组合物,其中,所述细菌为长双歧杆菌婴儿亚种M-63(NITE BP-02623)。
34.根据权利要求28~34中任一项所述的组合物,其中,所述细菌为活菌。
35.根据权利要求28~34中任一项所述的组合物,其还包含母乳低聚糖。
36.根据权利要求28~35中任一项所述的组合物,其为配方奶粉或配方液态奶。
37.一种免疫功能增强剂,其包含属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌。
38.属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的用于增强免疫功能的应用。
39.一种属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌,其用于增强免疫功能。
40.属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌在制造免疫功能增强用组合物中的应用。
41.一种增强免疫功能的方法,其包括向哺乳动物给予属于长双歧杆菌婴儿亚种的细菌的工序。
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