CN113912611A

CN113912611A - 一种替格瑞洛有关物质i及其制备方法

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Publication number: CN113912611A
Application number: CN202111368783.5A
Authority: CN
Inventors: 顾坚雄; 夏海建; 陈豪; 孔佳辉
Original assignee: Zhejiang Yongtai Handxin Pharmaceutical Technology Co ltd; Zhejiang Yongtai Pharmaceutical Co ltd; ZHEJIANG YONGTAI TECHNOLOGY CO LTD
Current assignee: Zhejiang Yongtai Handxin Pharmaceutical Technology Co ltd; Zhejiang Yongtai Pharmaceutical Co ltd; ZHEJIANG YONGTAI TECHNOLOGY CO LTD
Priority date: 2021-11-18
Filing date: 2021-11-18
Publication date: 2022-01-11

Abstract

本发明公开了一种替格瑞洛有关物质I及其制备方法，属于有机合成药物化学领域。所述有关物质I为2‑(((3aR，4S，6R，6aS)‑6‑(7‑((1R，2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙基)氨基)‑5‑(丙基硫基)‑3H‑[1,2,3]三唑基[4,5‑d]嘧啶‑3‑基)‑2,2‑二甲基四氢‑4H‑环戊基[d][1,3]二氧基‑4‑氧基)亚硝酸乙酯，其结构式如下，其制备方法简单，原料易得，反应条件温和，安全系数高，得到的有关物质I纯度高，并且该方法可操作性强，易于在实验室操作，有利于杂质标准品的研究。

Description

一种替格瑞洛有关物质I及其制备方法

技术领域

本发明属于有机合成药物化学领域，具体涉及一种替格瑞洛有关物质I及其制备方法。

背景技术

替格瑞洛是阿斯利康公司研发的一种新型、小分子抗血凝药，其结构式如下：

2010年12月替格瑞洛获得欧盟批准，2011年7月阿斯利康宣布FAD已批准替卡格雷用于减少急性冠脉综合征(ACS)患者的心血管死亡和心脏病发作，属于环戊基三唑并嘧啶类化合物。该药可以可逆性地作用于血管平滑肌细胞(VSMC)上的嘌呤2受体(purinoceptor2,P2)亚型P2Y12，而且不需要代谢激活，对二磷酸腺苷(ADP)引起的血小板聚集有很明显的抑制作用，口服起效较快，可以有效改善急性冠脉综合征(ACS)患者的症状，尤其适用于进行冠状动脉旁路移植术(CABG)的患者。而其对于那些需在先期进行抗凝治疗后再行手术的病人尤为适用。

原研公司阿斯利康的中国专利CN102149716A公开了以式(A)2-[[(3AR,4S,6R,6AS)-6-氨基四氢-2,2-二甲基-4H-环戊烯并-1,3-二氧杂环戊烷-4-基]氧基]乙醇和4,6-二氯-2-(丙硫基)-5-氨基嘧啶(B)为起始原料反应得到关键中间体(C)，该中间体在适当的碱金属亚硝酸盐作用下发生关环反应得到中间体(D)，中间体(D)再(1R,2S)-REL-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺盐(E)反应，然后脱掉保护基得到替格瑞洛的合成路线。

在药品生产过程中，杂质研究是不可或缺且非常重要的一部分，药物中间体杂质残留会对后期药物成品带来潜在性风险。这些杂质的存在不仅影响药物的药效，而且还会产生生产储藏过程中的问题，部分杂质甚至会产生毒副作用。所以，对药物杂质进行分析和研究既可以保证用药的安全、有效、稳定，同时也为生产、流通过程的质量保证提供依据。杂质标准品是指用于杂质的鉴别、检查、含量测定的标准物质。所以，在替格瑞洛的生产和质量控制过程中，不断完善杂质谱，制备和研究杂质标准品是非常有必要的工作。

发明内容

本专利发明人在替格瑞洛原料药的检测中，发现存在一种未知的杂质。经过高分辨质谱及核磁共振表征，该杂质为替格瑞洛有关物质I，即2-(((3aR，4S，6R，6aS)-6-(7-((1R，2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-5-(丙基硫基)-3H-[1,2,3]三唑基[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,2-二甲基四氢-4H-环戊基[d][1,3]二氧基-4-氧基)亚硝酸乙酯，其结构如下：

在替格瑞洛分析方法开发及后续的成品检验过程中，需要用该杂质的标准品对替格瑞洛中此杂质进行定位及定量研究，因此需要用到大量的替格瑞洛杂质I的标准品。为了制备替格瑞洛有关物质I，可以采用传统的杂质分离方法：在替格瑞洛原料药样品中分离目标杂质，但是目标杂质经HPLC(高效液相色谱法)检测，其含量最高只能达到0.11％，并且样品还有很多个相似含量的类似杂质，会对分离造成干扰，分离周期长，需要多次分离才能得到纯品，总收率一般只有0.03％左右。基于此，本申请的目的是提供一种替格瑞洛有关物质I及其制备方法。

为实现上述发明目的，本发明技术方案如下：

一方面，本发明提供一种替格瑞洛有关物质I，所述有关物质I为2-(((3aR，4S，6R，6aS)-6-(7-((1R，2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-5-(丙基硫基)-3H-[1,2,3]三唑基[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,2-二甲基四氢-4H-环戊基[d][1,3]二氧基-4-氧基)亚硝酸乙酯，其结构式为：

再一方面，本发明提供上述替格瑞洛有关物质I的制备方法，包括以下合成路线：

优选的，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将化合物A、化合物B、碳酸氢钠、溶剂混合，升温至回流，反应；

(2)用有机溶剂萃取，分离有机相；

(3)有机相浓缩得到中间体C，将中间体C溶于溶剂，加入有机酸，加入亚硝酸钠，反应后分离含有D1的有机相；

(4)有机相和化合物E、碳酸钾混合，反应，分离有机相得有关物质I。

进一步优选的，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将化合物A、化合物B和碳酸氢钠加入溶剂中，缓慢升温至回流，保温搅拌反应；

(2)降温，加入有机溶剂萃取，萃取分液得有机相；

(3)有机相浓缩得到中间体C，将中间体C溶于有机溶剂，加入有机酸，冷却，滴加亚硝酸钠水溶液，保温搅拌反应，分液得含有D1的有机相；

(4)将有机相、化合物E、碳酸钾水溶液混合，搅拌反应，分液，将有机相浓缩、精制提纯得到有关物质I；

进一步优选的，步骤(1)中，所述溶剂选自乙醇、异丙醇、丁醇、异丁醇、乙二醇、水中的至少一种，更进一步优选为水；

进一步优选的，步骤(1)中，所述化合物A：化合物B：碳酸氢钠的摩尔比为1:0.8-1.2：2.0-4.0，更进一步优选为1：1：3。

进一步优选的，步骤(1)中，所述反应的时间为8-20h，更进一步优选为10-15h；所述反应的温度为30-120℃，更进一步优选为100℃。

进一步优选的，步骤(1)中，所述溶剂和化合物A的体积质量比为2-20:1(ml：g)。

进一步优选的，步骤(2)中，所述降温是指降温至室温。

术语“室温”在本发明中定义为25±2℃。

进一步优选的，步骤(2)和(3)中，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、氯仿、醋酸异丙酯中的至少一种；更进一步优选为乙酸乙酯或甲苯。

进一步优选的，步骤(2)中有机溶剂和步骤(1)中化合物A的体积质量比为5-20:1(ml：g)。

进一步优选的，步骤(3)中，所述有机酸选自甲酸、乙酸、一氯乙酸、二氯乙酸、丙酸中的至少一种，更进一步优选为乙酸。

进一步优选的，步骤(3)中，所述冷却的温度为-5-15℃，更进一步优选0-10℃。

进一步优选的，步骤(3)中，所述反应的时间为1.5-8h，更进一步优选为2-4h。所述反应的温度为-5-15℃，更进一步优选为5℃。

进一步优选的，步骤(3)中，所述中间体C：有机酸：亚硝酸钠的摩尔比为1:5.0-8.0：1.0-3.0，更进一步优选为1：7：2。

进一步优选的，步骤(4)中，所述反应的时间为1.5-8h，更进一步优选为2-4h。所述反应的温度为20-30℃，优选为室温。

进一步优选的，步骤(4)中，所述化合物D1：化合物E：碳酸钾的摩尔比为1:0.9～1.2:1.0～3.0，更进一步优选为1：1：2。

进一步优选的，步骤(5)中，所述精制的具体操作为：将有关物质I粗品中加入4-10倍质量的溶剂，升温至50-70℃，缓慢降温至0-20℃，过滤得到纯品；更进一步优选的，所述溶剂选自乙酸乙酯、甲苯、二甲苯、甲叔醚、醋酸异丙酯、正己烷、正庚烷、环己烷、石油醚中的至少一种。

再一方面，本发明提供上述替格瑞洛有关物质I的中间体化合物D1，结构如下所示：

再一方面，本发明提供有关物质I作为标准品在替格瑞洛质量控制中的应用。

最后，本发明提供一种替格瑞洛中有关物质I的含量控制方法，包括以下步骤：控制中间体F中有关物质I的含量小于0.60％，其中，中间体F结构式如下

具体步骤为：(1)通过加标实验确定替格瑞洛中间体F中替格瑞洛有关物质I的限度；

(2)以替格瑞洛有关物质I作为标准品，用外标法来监控该杂质的含量。能够严格的控制替格瑞洛中间体F的产品质量，保证后续反应得到质量合格的替格瑞洛产品。

本发明的有益效果为：

(1)采用本申请提供的方法制备替格瑞洛有关物质I，替格瑞洛有关物质I的收率可达60-80％之间，收率大幅提高、品质好；相比传统方法，收率可以提高一千倍以上。

(2)本申请提供的方法，其采用的溶剂可以为水、乙酸乙酯、甲苯等溶剂，未涉及到不常用或昂贵的有机溶剂，在酸性条件下产物手性中心稳定，不会发生异构化。

(3)在整个制备过程中，所用试剂安全、环保，反应条件温和，无需使用特殊设备及原料，制备周期较短，处理简单，易于操作，成本低。

(4)本发明得到的有关物质I为替格瑞洛新杂质，可作为替格瑞洛、其中间体或其制剂的质量控制中的重要指标，具有制备方法简便、对环境友好的优势。

附图说明

图1为替格瑞洛原料药的液相检测图；

图2为替格瑞洛原料药的液质检测图；

图3为替格瑞洛原料药中有关物质I的液相图谱；

图4为替格瑞洛原料药中有关物质I的液质图谱；

图5为本发明制备的有关物质I的核磁氢谱；

图6为本发明制备的有关物质I的碳谱图；

图7为本发明制备的替格瑞洛有关物质I的编号示意图。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，但下述实施例仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。其中本申请具体实施例中所用化合物A、化合物B、化合物E、亚硝酸钠、乙酸、碳酸钾、碳酸氢钠购自麦克林试剂。下述实施例中所用仪器的生产厂家是台州信立仪器公司，检测仪器的生产厂家为安捷伦公司。

1、有关物质I的确认

申请人在替格瑞洛原料药的检测中，发现存在一种未知的杂质。

生产替格瑞洛原料药的路线图为：

2、有关物质I的制备

实施例1

一种上述的替格瑞洛有关物质I的制备方法，合成过程为：

具体包括以下步骤：

(1)36.7g(0.1mol)化合物A，23.7g(0.1mol)化合物B，25.2g(0.3mol)碳酸氢钠，100g水，混合，缓慢升温至回流，100℃保温搅拌12h。

(2)降温至室温，加入100g乙酸乙酯，萃取分液。

(3)有机相浓缩，得到中间体C，将中间体C溶于200g甲苯，加入42g(0.7mol)乙酸，冷却至5℃，滴加13.8g(0.2mol)亚硝酸的10％水溶液，加毕5℃保温搅拌3h，分液。

(4)得到含有中间体D1的有机相，加入32.1g(0.1mol)化合物E，滴加27.2g(0.2mol)碳酸钾的10％水溶液，室温搅拌3h，分液。

(5)有机相浓缩，得到有关物质I粗品；将有关物质I粗品中加入粗品3倍质量的甲叔醚溶剂，升温至60℃保持1.5h，缓慢降温至10℃保持1.5h，过滤得到纯品46g，收率78％，纯度98.8％。

实施例2

与实施例1不同仅在于：步骤(1)中化合物B的加入量为28.4g(0.12mol)，其他步骤与实验参数均与实施例1相同。精制得到纯品41.9g，收率71％，纯度97.6％。

实施例3

与实施例1不同仅在于：步骤(3)中亚硝酸钠的加入量为19.3g(0.28mol)，其他步骤与实验参数均与实施例1相同。精制得到纯品44.9g，收率76％，纯度98.1％。

实施例4

与实施例1不同仅在于：步骤(4)中化合物E加入量为38.5g(0.12mol)，其他步骤与实验参数均与实施例1相同。精制得到纯品43.1g，收率73％，纯度97.2％。

对比例1

与实施例1不同仅在于：步骤(1)中反应温度为60℃，其他步骤与实验参数均与实施例1相同。精制得到纯品29.0g，收率49％，纯度82.3％。

对比例2

与实施例1不同仅在于：步骤(1)中反应温度为30℃，其他步骤与实验参数均与实施例1相同。精制得到纯品26.6g，收率45％，纯度81.5％。

3、测试例

本发明制备的替格瑞洛有关物质I，通过液质和核磁共振结构表征确定合成产物结构正确，对其液质(图4)、核磁共振氢谱(图5)和碳谱(图6)进行了解析。有关物质I的分子式为：C₂₆H₃₁F₂N₇O₅S，分子量计算值为591.21，阳离子峰为[M+H]:592.36，与理论计算值相吻合，该化合物编号如附图7和下表所示。

表1.替格瑞洛有关物质I的核磁解析

质子类型	化学位移	归属H编码	质子数
				C-H	0～2ppm	H-7,8,9,11,12,15	15H
C-H	2～6ppm	H-1,2,3,4,5,6,10,14,16	12H
				C-H	6.5-7.8ppm	H-17,18,19	3H

表2.替格瑞洛有关物质I的核磁解析

4、一种控制替格瑞洛中杂质I含量的方法

EP10.5规定替格瑞洛未知杂质需要控制0.10％以下，基于这个要求，我们需要控制中间体F中杂质I的含量，确保生产的替格瑞洛符合药典标准。

实验步骤：通过称量不同重量的中间体F(不含有关物质I，纯度大于99.5％的标准品)和替格瑞洛杂质I(纯度大于99.5％)混合均匀分别得到替格瑞洛杂质I含量为0.20％、0.40％、0.60％、0.80％和1.00％的中间体F。如表3：

表3.

序号	替格瑞洛杂质I	中间体F	替格瑞洛杂质I
				1	0.20％	9.980g	0.020g
2	0.40％	9.960g	0.040g
				3	0.60％	9.940g	0.060g
4	0.80％	9.920g	0.080g
				5	1.00％	9.900g	0.100g

称量后将中间体F和替格瑞洛杂质I混合均匀，即得到替格瑞洛杂质I含量为0.20％、0.40％、0.60％、0.80％和1.00％的中间体F。

使用替格瑞洛杂质I含量为0.20％的中间体F制备替格瑞洛的具体实验过程如下：

向250ml反应瓶中加入10g(17.8mmol)加标好的中间体F，50g甲醇，控温20℃，加入(12.5g，125mol)精制盐酸，控温20℃，反应2小时，加入50g甲苯，静置分层，水层用液碱调pH至7.0,减压浓缩除甲醇，再用100g乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯浓缩至60g后滴加200g正庚烷析晶，降温至10℃，搅拌0.5小时后抽滤，得到替格瑞洛粗品湿品，烘干得到8.5g替格瑞洛粗品。

将(8.5g，16.3mmol)替格瑞洛粗品加入至250ml反应瓶中，加入34g乙酸乙酯，升温至57℃，溶清后降温至50℃，迅速加入34g异辛烷，2.35小时内降温至0℃，0℃保温2.33小时，抽滤，滤饼用20g冷乙酸乙酯和17.5g异辛烷的混合物洗涤，得到替格瑞洛湿品，烘干得到8.1g替格瑞洛，收率87.2％。

所得替格瑞洛经液相检测替格瑞洛杂质I纯度为0.03％。

替格瑞洛成品分析方法如下：

仪器:高效液相色谱仪配备紫外检测器

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18 4.6*250mm，5μm

流动相A：水

流动相B：乙腈

梯度：

表4.

时间(min)	流动相A(v/v，％)	流动相B(v/v，％)
			0	70	30
4	70	30
			9	50	40
23	55	45
			35	40	60
45	20	80
			47	70	30
54	75	25

流速：1.0ml/min

柱温：35℃

检测波长：242nm

进样量：15μl

运行时间：54min

使用杂质含量为0.40％、0.60％、0.80％和1.00％的中间体F，重复前述替格瑞洛的制备过程，所得替格瑞洛中替格瑞洛杂质I液相纯度分别0.06％、0.09％、0.12％和0.15％。

中间体F中该杂质I的不同含量，对通过含有该杂质I的中间体F制备得到的替格瑞洛质量的影响如下：

表5.

结论：欧洲药典中要求替格瑞洛有关物质检测单一杂质小于0.10％。当中间体F中该杂质I的含量为0.60％时，经一系列合成步骤中间体F中该杂质生成替格瑞洛中杂质I，杂质I为0.09％接近0.10％的指标，严格控制中间体F中该杂质的含量小于0.60％，能保证替格瑞洛中杂质I符合质量标准的要求。

配制杂质I浓度为0.006mg/ml的标准溶液(替格瑞洛中间体F样品浓度为2mg/ml，样品中的杂质I的质控限度0.60％，配制标准溶液浓度为0.012mg/ml)，同一标准溶液进样5次相对标准偏差小于1％，符合标准。作为外标法的标准溶液，计算样品中该杂质I的含量。

表6.

配制2mg/ml的替格瑞洛中间体F样品溶液，进样3次。分别以杂质I标准溶液的峰面积为对照，计算替格瑞洛中间体F样品中该杂质I的含量，最终求该杂质I含量的平均值。

表7.

结论：检测替格瑞洛中间体F样品，用外标法检测该杂质I的含量为0.30％，小于0.60％，符合质量标准要求。

最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims

1.一种替格瑞洛有关物质I，其特征在于，所述有关物质I为2-(((3aR，4S，6R，6aS)-6-(7-((1R，2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-5-(丙基硫基)-3H-[1,2,3]三唑基[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,2-二甲基四氢-4H-环戊基[d][1,3]二氧基-4-氧基)亚硝酸乙酯，其结构式为：

2.权利要求1所述替格瑞洛有关物质I的制备方法，其特征在于，包括以下合成路线：

优选的，所述制备方法包括以下步骤：

(2)用有机溶剂萃取，分离有机相；

(4)有机相和化合物E、碳酸钾混合，反应，分离有机相得有关物质I；

进一步优选的，所述制备方法包括以下步骤：

(2)降温，加入有机溶剂萃取，萃取分液得有机相；

(4)将有机相、化合物E、碳酸钾水溶液混合，搅拌反应，分液，将有机相浓缩、精制提纯得到有关物质I。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述溶剂选自乙醇、异丙醇、丁醇、异丁醇、乙二醇、水中的至少一种，优选为水；所述反应的时间为8-20h，更进一步优选为10-15h；所述反应的温度为30-120℃，更进一步优选为100℃，

步骤(2)和(3)中，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、氯仿、醋酸异丙酯中的至少一种；优选为乙酸乙酯或甲苯，

步骤(3)中，所述有机酸选自甲酸、乙酸、一氯乙酸、二氯乙酸、丙酸中的至少一种，优选为乙酸；所述冷却的温度为-5-15℃，优选0-10℃；所述反应的时间为1.5-8h，优选为2-4h；所述反应的温度为-5-15℃，优选为5℃，

步骤(4)中，所述反应的时间为1.5-8h，优选为2-4h；所述反应的温度为为20-30℃，优选为室温。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述化合物A：化合物B：碳酸氢钠的摩尔比为1:0.8-1.2：2.0-4.0，优选为1：1：3；所述溶剂和化合物A的体积质量比为2-20:1(ml：g)。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中有机溶剂和步骤(1)中化合物A的体积质量比为5-20:1(ml：g)。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述中间体C：有机酸：亚硝酸钠的摩尔比为1:5.0-8.0：1.0-3.0，优选为1：7：2。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述化合物D1：化合物E：碳酸钾的摩尔比为1:0.9～1.2:1.0～3.0，优选为1：1：2。

8.权利要求1所述替格瑞洛有关物质I的中间体化合物D1，结构如下所示：

9.权利要求1所述替格瑞洛有关物质I作为标准品在替格瑞洛质量控制中的应用。

10.一种替格瑞洛中有关物质I的含量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：控制中间体F中的权利要求1所述的替格瑞洛有关物质I的含量小于0.60％，其中，中间体F结构式如下

优选的，步骤为：(1)通过加标实验确定替格瑞洛中间体F中替格瑞洛有关物质I的限度；

(2)以替格瑞洛有关物质I作为标准品，用外标法来监控该杂质的含量。