CN113892563A - 一种缓解冷应激的复合益生菌制剂 - Google Patents

一种缓解冷应激的复合益生菌制剂 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种缓解冷应激的复合益生菌制剂。具体地，本发明提供一种复合益生菌的用途，用于制备组合物，所述的组合物用于选自下组的一种或多种用途：(i)用于产消化酶；(ii)用于产有机酸；(iii)用于提高家禽体重；(iv)用于提高家禽的饲料转化率；(v)用于降低家禽的发病率；(vi)用于降低家禽的死亡率；(vii)用于降低家禽的与冷应激相关的激素水平；(viii)改善肠道微生态；和/或(ix)用于改善家禽的抗冷应激。

Description

一种缓解冷应激的复合益生菌制剂
技术领域
本发明涉及畜牧业领域，具体地，本发明涉及一种缓解冷应激的复合益生菌制剂。
背景技术
鸡肉是补充蛋白的重要食品，然而我国大部分地区冬季和早春温度较低，在集约化养鸡时，需要保暖。但集约化饲养的密度大，空气污浊，需要定期通风透气，于是形成通风和保温这一对矛盾。在低温通风过程中，常造成肉鸡冷应激，如何缓解肉鸡冬季养殖中的过程中形成的冷应激，避免应激对机体的损伤，然而目前针对冬季肉鸡养殖中的冷应激，尚没有切实解决办法。如何缓解冷应激，改善冬季肉鸡养殖，提高家禽体重，提高家禽的饲料转化率，降低家禽的发病率，降低家禽的死亡率，降低家禽的与冷应激相关的激素水平和改善肠道微生态等等成为家禽养殖业研究热点
因此，本领域需要开发一种改善家禽抗冷应激的方法，提高冬季家禽生产的经济价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种改善家禽抗冷应激的含有复合益生菌的组合物，所述的组合物能够改善家禽抗冷应激，提高冬季家禽生产的经济价值
本发明的第一方面提供了一种复合益生菌的用途，用于制备组合物，所述的组合物用于选自下组的一种或多种用途：(i)用于产消化酶；(ii)用于产有机酸；(iii) 用于提高家禽体重；(iv)用于提高家禽的饲料转化率；(v)用于降低家禽的发病率； (vi)用于降低家禽的死亡率；(vii)用于降低家禽的与冷应激相关的激素水平；(viii) 改善肠道微生态；和/或(ix)用于改善家禽的抗冷应激；
所述的复合益生菌包括枯草芽孢杆菌和/或地衣芽孢杆菌。
优选地，所述的枯草芽孢杆菌为Bacillus subtilis yb-1，保藏号：CGMCC No.14246。
优选地，所述的地衣芽孢杆菌为Bacillus licheniformis yb-2，保藏号：CGMCCNo. 14245。
优选地，所述的芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌。
优选地，所述的枯草芽孢杆菌与所述地衣芽孢杆菌的含量之比为(0.1-10):(0.1-10)，较佳地(0.5-5):(0.5-5)，更佳地(0.5-3):(0.5-3)，更佳地(0.5-2): (0.5-2)，更佳地(0.5-1.5):(0.5-1.5)，更佳地(0.8-1.2):(0.8-1.2)，最佳地1:1。
优选地，所述的含量之比包括数量之比。
优选地，所述的含量的单位为CFU/g，即每g组合物中含菌数CFU。
优选地，所述的枯草芽孢杆菌的含量为0.001-99wt％，较佳地0.01-70wt％，更佳地0.05-40wt％，更佳地0.05-10wt％，按组合物的总重量计。
优选地，所述的地衣芽孢杆菌的含量为0.001-99wt％，较佳地0.01-70wt％，更佳地0.05-40wt％，更佳地0.05-10wt％，按组合物的总重量计。
优选地，所述的家禽包括鸡、鸭和/或鹅。
优选地，所述的家禽包括肉食家禽。
优选地，所述的家禽包括肉食鸡。
优选地，所述的家禽艾拔益加肉鸡(AA肉鸡)。
优选地，所述的家禽包括育雏期和/或育肥期家禽。
优选地，所述的家禽的日龄为0-60天，较佳地0-20天，更佳地0-42天。
优选地，所述的育雏期的家禽日龄为0-21天。
优选地，所述的育肥期的家禽日龄为21-42天。
优选地，所述的枯草芽孢杆菌产消化酶和/或有机酸。
优选地，所述的地衣芽孢杆菌产消化酶和/或有机酸。。
优选地，所述的消化酶选自下组的酶：蛋白酶、乳糖酶、脂肪酶，或其组合。
优选地，所述枯草芽孢杆菌产蛋白酶的活力为175-200U/mL，较佳地175-190 U/mL。
优选地，所述枯草芽孢杆菌产乳糖酶的活力为435-460U/mL，较佳地435-450 U/mL。
优选地，所述枯草芽孢杆菌产脂肪酶的活力为565-590U/mL，较佳地565-580 U/mL。
优选地，所述地衣芽孢杆菌产蛋白酶的活力为195-220U/mL，较佳地195-210 U/mL。
优选地，所述地衣芽孢杆菌产乳糖酶的活力为530-550U/mL，较佳地 530-540U/mL。
优选地，所述地衣芽孢杆菌产脂肪酶的活力为695-720U/mL，较佳地 695-710U/mL。
优选地，所述的蛋白酶、乳糖酶和/或脂肪酶的活力通过以下方法测定：
将枯草芽孢杆菌和/或地衣芽孢杆菌接种于营养琼脂液态培养基中培养11-13h后，离心，收集上清液，测定蛋白酶、乳糖酶和/或脂肪酶的活力。
优选地，所述的蛋白酶、乳糖酶和/或脂肪酶的活力通过以下方法测定：
将枯草芽孢杆菌和/或地衣芽孢杆菌接种于营养琼脂液态培养基中培养12h后，3000转/分钟离心发酵液10分钟，收集上清液，弃细菌，测定蛋白酶、乳糖酶和/或脂肪酶的活力。
优选地，所述的有机酸包括氨基丁酸。
优选地，所述的氨基丁酸包括γ-氨基丁酸。
优选地，所述枯草芽孢杆菌产有机酸的含量为370-380μg/L。
优选地，所述的地衣芽孢杆菌产有机酸的含量为180-190μg/L。
优选地，所述的有机酸的含量通过以下方法测定：
将枯草芽孢杆菌和/或地衣芽孢杆菌接种于营养琼脂液态培养基中培养11-13h后，测定发酵液中的有机酸含量。
优选地，所述的有机酸的含量通过以下方法测定：
将枯草芽孢杆菌和/或地衣芽孢杆菌接种于营养琼脂液态培养基中培养12h后，测定发酵液中的有机酸含量。
优选地，所述发酵液的pH为酸性。
优选地，所述的产消化酶包括在高温、低温、常温和/或低水分培养条件下产消化酶。
优选地，所述的产有机酸包括在高温、低温、常温和/或低水分培养条件下产有机酸。
优选地，所述的培养包在培养基中培养。
优选地，所述的培养基包括营养琼脂液态培养基。
优选地，所述的家禽的饲养条件包括在低温和/或常温条件下饲养。
优选地，所述的高温为80-120℃，较佳地80-110℃，更佳地85-110℃，更佳地 90-110℃，更佳地95-105℃，更佳地98-102℃，最佳地100℃。
优选地，所述的高温为85-100℃，较佳地85-90℃。
优选地，所述的低温为-5℃至20℃，较佳地0℃至20℃，更佳地2℃至20℃，更佳地4℃至20℃，更佳地4℃至15℃，更佳地4℃至10℃，更佳地4℃至8℃，更佳地6℃。
优选地，所述的常温为21℃至40℃，较佳地21℃至35℃，更佳地25℃至35℃，更佳地33℃至35℃。
优选地，所述的低水分是指水分含量为5-30％，较佳地5-25％，更佳地5-20％，更佳地10-20％，更佳地14-16％，以组合物的重量计。
优选地，所述的低水分是指水分含量小于等于16％。
优选地，所述的家禽的饲养条件包括：
日龄0-3天为34-36℃，日龄4-7天为32-34℃，日龄8-14天为18-22℃，日龄 15-21天为13-17℃，日龄22天后(优选为22-42天)为4-8℃。
优选地，所述的激素包括血液、血清或血浆中的激素。
优选地，所述的与冷应激相关的激素包括皮质醇、丙二醛和/或内毒素。
优选地，所述的皮质醇包括血液、血清或血浆中的皮质醇。
优选地，所述的丙二醛包括血液、血清或血浆中的丙二醛。
优选地，所述的内毒素包括血液、血清或血浆中的内毒素。
优选地，所述的改善肠道微生态包括：
(a)降低肠道致病性微生物的数量和/或种类；和/或
(b)降低肠道致病性微生物对肠道的侵染。
优选地，所述的降低肠道致病性微生物对肠道的侵染包括降低肠道致病性微生物对肠道上皮细胞的侵染。
优选地，所述的致病性微生物包括致病性细菌。
优选地，所述的致病性微生物包括致病性革兰氏阴性菌和/或致病性革兰氏阳性菌。
优选地，所述的致病性微生物包括：大肠杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌、百日咳杆菌，或其组合。
优选地，所述的致病性微生物包括：大肠杆菌(Pathogenic Escherichia coli)、志贺氏菌(7Shigellosis)、沙门氏菌(Salmonella)、百日咳杆菌(Pertussis)，或其组合。
优选地，所述的抗冷应激包括抗低温下的应激。
优选地，所述的改善家禽的抗冷应激包括提高家禽的抗冷应激。
优选地，所述的改善家禽的抗冷应激包括降低家禽的与冷应激相关的激素水平来改善家禽的抗冷应激。
优选地，所述的用于提高家禽体重包括通过改善家禽的抗冷应激来提高家禽体重。
优选地，所述的用于提高家禽的饲料转化率包括通过改善家禽的抗冷应激来提高家禽的饲料转化率。
优选地，所述的用于提高家禽的饲料转化率包括降低家禽的料肉比。
优选地，所述的用于降低家禽的发病率包括通过改善家禽的抗冷应激来降低家禽的发病率。
优选地，所述的用于降低家禽的死亡率包括通过改善家禽的抗冷应激来降低家禽的死亡率。
优选地，所述的用于降低家禽的与冷应激相关的激素水平包括通过改善家禽的抗冷应激来降低家禽的与冷应激相关的激素水平。
优选地，所述的改善肠道微生态包括通过改善家禽的抗冷应激来改善肠道微生态。
优选地，所述的组合物为饲料组合物。
优选地，所述的饲料包括家禽饲料。
优选地，所述的组合物还包括饲料上可接受的载体。
优选地，所述的组合物的剂型为固体制剂、液体制剂或半固体制剂。
优选地，所述的组合物为饲喂(或口服)组合物。
优选地，所述的饲料上可接受的载体包括基础日粮。
优选地，所述的基础日粮包括育雏期基础日粮和/或育肥期。
优选地，所述的饲料上可接受的载体包括育雏期基础日粮和/或育肥期。
优选地，所述的基础日粮参照美国国家研究委员会(NRC，1998)标准和/或国内蛋鸡词养标准NY/T33-2004配制。
优选地，所述的育雏期基础日粮包括如下组分：
Figure BDA0003269655080000051
Figure BDA0003269655080000061
优选地，所述的育肥期基础日粮包括如下组分：
基础日粮组分 用量
玉米 60-63重量份
豆粕 25-28重量份
鱼粉 3-4重量份
大豆油 2-4重量份
预混料 4-6重量份；和
磷酸氢钙 0.2-0.4重量份。
优选地，预混料为每千克饲粮提供：VA 9600-9800IU，VD3 3000-3200IU，VE 22-28IU，VK3 3.0-3.4mg，硫胺素1.3-1.7mg，核黄素4.5-5.5mg，VB6 1.5-2.1mg， VB12 0.01-0.03mg，生物素0.03-0.05mg，叶酸1.0-1.5mg，烟酸13-17mg，泛酸9-11 mg，氯化胆碱780-820mg，Mn 90-110mg，Zn 70-90mg，Cu 7-9mg，I 0.1-0.2mg， Se 0.1-0.2mg，Fe 78-82mg。
优选地，所述的基础日粮中的营养成分包括代谢能ME(MJ/kg)、粗蛋白、钙、总磷、可利用磷、苏氨酸和蛋氨酸。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的代谢能ME(MJ/kg)的含量为11-13％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的粗蛋白的含量为20-22％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的钙的含量为0.8-1.2％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的总磷的含量为0.6-0.8％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的可利用磷的含量为0.4-0.6％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的苏氨酸的含量为1.0-1.4％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的蛋氨酸的含量为0.4-0.6％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的代谢能ME(MJ/kg)的含量为11-13％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的粗蛋白的含量为16-18％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的钙的含量为0.8-1.0％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的总磷的含量为0.6-0.8％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的可利用磷的含量为0.4-0.5％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的苏氨酸的含量为1.0-1.2％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的蛋氨酸的含量为0.25-0.4％，以营养成分的含量计。
在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。
附图说明
图1为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1的产酶效果。
图2为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2的产酶效果。
图3为γ-氨基丁酸标准品液相色谱串联质谱质量色谱图。
图4为各组肉鸡42天的体重。
图5为各组肉鸡的料肉比。
图6为各组蛋鸡血清皮质醇水平。
图7为各组蛋鸡血清丙二醛水平。
图8为各组蛋鸡血清内毒素水平。
图9为各组肠道的菌群数量。
具体实施方式
本发明开了一种包括枯草芽孢杆菌和/或地衣芽孢杆菌的复合益生菌在于用于产消化酶和有机酸，用于提高家禽体重、提高家禽的饲料转化率、降低家禽的发病率、降低家禽的死亡率、降低家禽的与冷应激相关的激素水平、改善肠道微生态和改善家禽的抗冷应激方面中的用途，从而提高家禽的经济价值。
术语
如本文所用，术语“包括”、“包含”与“含有”可互换使用，不仅包括开放式定义，还包括半封闭式、和封闭式定义。换言之，所述术语包括了“由……构成”、“基本上由……构成”。
如本文所用，“枯草芽孢杆菌优选为Bacillus subtilis yb-1”与“Bacillussubtilis yb-1”可互换使用。
如本文所用，“地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2”与“Bacilluslicheniformis yb-2”可互换使用。
如本文所用，“料肉比”的英文是feed conversion ratio，是指饲养的畜禽增重量与所消耗的饲料量的比例，它是评价饲料转化率的一个重要指标，料肉比高表明用的饲料多，但增长的肉少，价饲料转化率低；反之，料肉比低说明用的饲料少，但增长的肉多，价饲料转化率高。
基础日粮
本发明所述的基础日粮包括(但不限于)育雏期基础日粮和/或育肥期。
本发明所述的基础日粮优选参照美国国家研究委员会(NRC，1998)标准和/或国内蛋鸡词养标准NY/T33-2004配制。
在本发明的一个优选例中，所述的育雏期基础日粮包括如下组分：
基础日粮组分 用量
玉米 57-59重量份
豆粕 28-30重量份
鱼粉 4-6重量份
大豆油 1.5-2.5重量份
预混料 4-6重量份；
磷酸氢钙 0.4-0.6重量份；和
石粉* 0.2-0.3重量份。
在本发明的一个优选例中，所述的育肥期基础日粮包括如下组分：
基础日粮组分 用量
玉米 60-63重量份
豆粕 25-28重量份
鱼粉 3-4重量份
大豆油 2-4重量份
预混料 4-6重量份；和
磷酸氢钙 0.2-0.4重量份。
在本发明的一个优选例中，预混料为每千克饲粮提供：VA 9600-9800IU，VD33000-3200IU，VE 22-28IU，VK3 3.0-3.4mg，硫胺素1.3-1.7mg，核黄素4.5-5.5mg， VB6 1.5-2.1mg，VB12 0.01-0.03mg，生物素0.03-0.05mg，叶酸1.0-1.5mg，烟酸13-17mg，泛酸9-11mg，氯化胆碱780-820mg，Mn 90-110mg，Zn 70-90mg，Cu 7-9 mg，I 0.1-0.2mg，Se 0.1-0.2mg，Fe 78-82mg。
在本发明的一个优选例中，所述的基础日粮中的营养成分包括代谢能ME(MJ /kg)、粗蛋白、钙、总磷、可利用磷、苏氨酸和蛋氨酸。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的代谢能ME(MJ/kg)的含量为11-13％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的粗蛋白的含量为20-22％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的钙的含量为0.8-1.2％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的总磷的含量为0.6-0.8％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的可利用磷的含量为0.4-0.6％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的苏氨酸的含量为1.0-1.4％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育雏期基础日粮中，所述的蛋氨酸的含量为0.4-0.6％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的代谢能ME(MJ/kg)的含量为11-13％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的粗蛋白的含量为16-18％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的钙的含量为0.8-1.0％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的总磷的含量为0.6-0.8％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的可利用磷的含量为0.4-0.5％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的苏氨酸的含量为1.0-1.2％，以营养成分的含量计。
优选地，所述的育肥期基础日粮中，所述的蛋氨酸的含量为0.25-0.4％，以营养成分的含量计。
枯草芽孢杆菌
本发明所述的枯草芽孢杆菌优选为Bacillus subtilis yb-1，保藏号：CGMCC No.14246。
本发明所述的枯草芽孢杆菌可产消化酶和/或有机酸。
在本发明的一个优选例中，所述的消化酶选自下组的酶：蛋白酶、乳糖酶、脂肪酶，或其组合。
优选地，所述枯草芽孢杆菌产蛋白酶的活力为175-200U/mL，较佳地175-190 U/mL。
优选地，所述枯草芽孢杆菌产乳糖酶的活力为435-460U/mL，较佳地435-450 U/mL。
优选地，所述枯草芽孢杆菌产脂肪酶的活力为565-590U/mL，较佳地565-580 U/mL。
在本发明的一个优选例中，所述的蛋白酶、乳糖酶和/或脂肪酶的活力通过以下方法测定：
将枯草芽孢杆菌接种于营养琼脂液态培养基中培养11-13h后，离心，收集上清液，测定蛋白酶、乳糖酶和/或脂肪酶的活力。
优选地，所述的蛋白酶、乳糖酶和/或脂肪酶的活力通过以下方法测定：
将枯草芽孢杆菌接种于营养琼脂液态培养基中培养12h后，3000转/分钟离心发酵液10分钟，收集上清液，弃细菌，测定蛋白酶、乳糖酶和/或脂肪酶的活力。
在本发明的一个优选例中，所述的有机酸包括氨基丁酸。
优选地，所述的氨基丁酸包括γ-氨基丁酸。
优选地，所述枯草芽孢杆菌产有机酸的含量为370-380μg/L。
优选地，所述的有机酸的含量通过以下方法测定：
将枯草芽孢杆菌接种于营养琼脂液态培养基中培养12h后，测定发酵液中的有机酸含量。
优选地，所述发酵液的pH为酸性。
地衣芽孢杆菌
本发明所述的地衣芽孢杆菌优选为Bacillus licheniformis yb-2，保藏号：CGMCC No.14245。
本发明所述的地衣芽孢杆菌可产消化酶和/或有机酸。
在本发明的一个优选例中，所述的消化酶选自下组的酶：蛋白酶、乳糖酶、脂肪酶，或其组合。
优选地，所述地衣芽孢杆菌产蛋白酶的活力为195-220U/mL，较佳地195-210 U/mL。
优选地，所述地衣芽孢杆菌产乳糖酶的活力为530-550U/mL，较佳地 530-540U/mL。
优选地，所述地衣芽孢杆菌产脂肪酶的活力为695-720U/mL，较佳地 695-710U/mL。
在本发明的一个优选例中，所述的蛋白酶、乳糖酶和/或脂肪酶的活力通过以下方法测定：
将地衣芽孢杆菌接种于营养琼脂液态培养基中培养11-13h后，离心，收集上清液，测定蛋白酶、乳糖酶和/或脂肪酶的活力。
优选地，所述的蛋白酶、乳糖酶和/或脂肪酶的活力通过以下方法测定：
将地衣芽孢杆菌接种于营养琼脂液态培养基中培养12h后，3000转/分钟离心发酵液10分钟，收集上清液，弃细菌，测定蛋白酶、乳糖酶和/或脂肪酶的活力。
在本发明的一个优选例中，所述的有机酸包括氨基丁酸。
优选地，所述的氨基丁酸包括γ-氨基丁酸。
在本发明的一个优选例中，所述的地衣芽孢杆菌产有机酸的含量为180-190 μg/L。
优选地，所述的有机酸的含量通过以下方法测定：
将地衣芽孢杆菌接种于营养琼脂液态培养基中培养12h后，测定发酵液中的有机酸含量。
优选地，所述发酵液的pH为酸性。
温度
本发明所述的温度包括高温、低温和/或常温。
在本发明的一个优选例中，所述的高温为80-120℃，较佳地80-110℃，更佳地 85-110℃，更佳地90-110℃，更佳地95-105℃，更佳地98-102℃，最佳地100℃。
在本发明的一个优选例中，所述的高温为85-100℃，较佳地85-90℃。
在本发明的一个优选例中，所述的低温为-5℃至20℃，较佳地0℃至20℃，更佳地2℃至20℃，更佳地4℃至20℃，更佳地4℃至15℃，更佳地4℃至10℃，更佳地4℃至8℃，更佳地6℃。
在本发明的一个优选例中，所述的常温为21℃至40℃，较佳地21℃至35℃，更佳地25℃至35℃，更佳地33℃至35℃。
用途
本发明提供了一种复合益生菌的用途，用于制备组合物，所述的组合物用于选自下组的一种或多种用途：(i)用于产消化酶；(ii)用于产有机酸；(iii)用于提高家禽体重；(iv)用于提高家禽的饲料转化率；(v)用于降低家禽的发病率；(vi)用于降低家禽的死亡率；(vii)用于降低家禽的与冷应激相关的激素水平；(viii)改善肠道微生态；和/或(ix)用于改善家禽的抗冷应激；
所述的复合益生菌包括枯草芽孢杆菌和/或地衣芽孢杆菌。
在本发明的一个优选例中，所述的枯草芽孢杆菌为Bacillus subtilis yb-1，保藏号：CGMCC No.14246。
在本发明的一个优选例中，所述的地衣芽孢杆菌为Bacillus licheniformis yb-2，保藏号：CGMCC No.14245。
在本发明的一个优选例中，所述的芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌。
在本发明的一个优选例中，所述的枯草芽孢杆菌与所述地衣芽孢杆菌的含量之比为(0.1-10):(0.1-10)，较佳地(0.5-5):(0.5-5)，更佳地(0.5-3):(0.5-3)，更佳地(0.5-2):(0.5-2)，更佳地(0.5-1.5):(0.5-1.5)，更佳地(0.8-1.2):(0.8-1.2)，最佳地1:1。
在本发明的一个优选例中，所述的含量之比包括数量之比。
在本发明的一个优选例中，所述的含量的单位为CFU/g，即每g组合物中含菌数CFU。
在本发明的一个优选例中，所述的枯草芽孢杆菌的含量为0.001-99wt％，较佳地0.01-70wt％，更佳地0.05-40wt％，更佳地0.05-10wt％，按组合物的总重量计。
在本发明的一个优选例中，所述的地衣芽孢杆菌的含量为0.001-99wt％，较佳地0.01-70wt％，更佳地0.05-40wt％，更佳地0.05-10wt％，按组合物的总重量计。
在本发明的一个优选例中，所述的家禽包括鸡、鸭和/或鹅。
在本发明的一个优选例中，所述的家禽包括肉食家禽。
优选地，所述的家禽包括肉食鸡。
优选地，所述的家禽艾拔益加肉鸡(AA肉鸡)。
在本发明的一个优选例中，所述的家禽包括育雏期和/或育肥期家禽。
优选地，所述的家禽的日龄为0-60天，较佳地0-20天，更佳地0-42天。
优选地，所述的育雏期的家禽日龄为0-21天。
优选地，所述的育肥期的家禽日龄为21-42天。
在本发明的一个优选例中，，所述的产消化酶包括在高温、低温、常温和/或低水分培养条件下产消化酶。
在本发明的一个优选例中，所述的产有机酸包括在高温、低温、常温和/或低水分培养条件下产有机酸。
在本发明的一个优选例中，所述的培养包在培养基中培养。
优选地，所述的培养基包括营养琼脂液态培养基。
在本发明的一个优选例中，所述的家禽的饲养条件包括在低温和/或常温条件下饲养。
在本发明的一个优选例中，所述的低水分是指水分含量为5-30％，较佳地5-25％，更佳地5-20％，更佳地10-20％，更佳地14-16％，以组合物的重量计。
优选地，所述的低水分是指水分含量小于等于16％。
在本发明的一个优选例中，所述的家禽的饲养条件包括：
日龄0-3天为34-36℃，日龄4-7天为32-34℃，日龄8-14天为18-22℃，日龄 15-21天为13-17℃，日龄22天后(优选为22-42天)为4-8℃。
在本发明的一个优选例中，所述的激素包括血液、血清或血浆中的激素。
在本发明的一个优选例中，所述的与冷应激相关的激素包括皮质醇、丙二醛和/或内毒素。
优选地，所述的皮质醇包括血液、血清或血浆中的皮质醇。
优选地，所述的丙二醛包括血液、血清或血浆中的丙二醛。
优选地，所述的内毒素包括血液、血清或血浆中的内毒素。
在本发明的一个优选例中，所述的改善肠道微生态包括：
(a)降低肠道致病性微生物的数量和/或种类；和/或
(b)降低肠道致病性微生物对肠道的侵染。
在本发明的一个优选例中，所述的降低肠道致病性微生物对肠道的侵染包括降低肠道致病性微生物对肠道上皮细胞的侵染。
在本发明的一个优选例中，所述的致病性微生物包括致病性细菌。
优选地，所述的致病性微生物包括致病性革兰氏阴性菌和/或致病性革兰氏阳性菌。
优选地，所述的致病性微生物包括：大肠杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌、百日咳杆菌，或其组合。
优选地，所述的致病性微生物包括：大肠杆菌(Pathogenic Escherichia coli)、志贺氏菌(7Shigellosis)、沙门氏菌(Salmonella)、百日咳杆菌(Pertussis)，或其组合。
在本发明的一个优选例中，所述的抗冷应激包括抗低温下的应激。
优选地，所述的改善家禽的抗冷应激包括提高家禽的抗冷应激。
在本发明的一个优选例中，所述的改善家禽的抗冷应激包括降低家禽的与冷应激相关的激素水平来改善家禽的抗冷应激。
优选地，所述的用于提高家禽体重包括通过改善家禽的抗冷应激来提高家禽体重。
优选地，所述的用于提高家禽的饲料转化率包括通过改善家禽的抗冷应激来提高家禽的饲料转化率。
优选地，所述的用于提高家禽的饲料转化率包括降低家禽的料肉比。
优选地，所述的用于降低家禽的发病率包括通过改善家禽的抗冷应激来降低家禽的发病率。
优选地，所述的用于降低家禽的死亡率包括通过改善家禽的抗冷应激来降低家禽的死亡率。
优选地，所述的用于降低家禽的与冷应激相关的激素水平包括通过改善家禽的抗冷应激来降低家禽的与冷应激相关的激素水平。
优选地，所述的改善肠道微生态包括通过改善家禽的抗冷应激来改善肠道微生态。
在本发明的一个优选例中，所述的组合物为饲料组合物。
优选地，所述的饲料包括家禽饲料。
在本发明的一个优选例中，所述的组合物还包括饲料上可接受的载体。
在本发明的一个优选例中，所述的组合物的剂型为固体制剂、液体制剂或半固体制剂。
优选地，所述的组合物为饲喂(或口服)组合物。
在本发明的一个优选例中，所述的饲料上可接受的载体包括基础日粮。
在本发明的一个优选例中，所述的饲料上可接受的载体包括育雏期基础日粮和/或育肥期。
菌种保藏
本发明的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1(与保藏名称相同)已于2017年06月15 日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号：CGMCC No.14246。
本发明的地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2(与保藏名称相同)已于2017年06 月15日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号：CGMCC No.14245。
本发明的主要优异技术效果包括：
1.本发明开发了一种枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2的复合益生菌，具有抗逆性强，耐热，耐低水分，可用于饲料高温制备和饲料低水分储存，具有产γ-氨基丁酸等有机酸和蛋白酶、乳糖酶、脂肪酶等消化酶的能力，用于肉食家禽饲喂，提高家禽的饲料转化率，降低料肉比，提高肉食家禽的体重等生长性能。
2.本发明的复合益生菌能够降低冷应激造成的与冷应激相关的激素水平升高，改善肠道微生态，抑制病原菌感染，从而降低冬季饲养肉食家禽的发病率和死亡率，提高冬季(低温条件)饲养肉食家禽的经济价值，同时，冬季(低温条件)给肉食家禽饲养本发明的复合益生菌制剂能够降低治疗用抗生素的使用量，从而提高肉的品质和安全，减少对环境的污染。
3.本发明的复合益生菌作为一种绿色、无污染的微生态优于其他同类产品，可在冬季家禽生产上推广应用。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，以下具体实施例以本技术方案为前提，给出了详细的实施方式和具体操作过程，但本发明的保护范围并不限于本实施例。
实施例1
1.益生菌菌种益生特性的评价
1)菌种
研究组从健康鸡肠道内分离多株益生菌，后经过产消化酶评价、产γ-氨基丁酸评价、耐热评价、耐低水分评价，得到2株益生芽孢杆菌，分别为枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌，申请中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，分别为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1的保藏编号为CGMCC No.14246，地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2的保藏编号为CGMCC No.14245。
2)菌种产消化酶评价
A.定性检测
在100毫升营养琼脂培养基中添加2克奶粉，121℃灭菌后，倒至平皿中，凝固后。采用划线法分别接种枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2，培养12h，观察结果，见图1和图2所示。在枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2的菌落周围有明显空白区域，奶粉中富含蛋白、乳糖和脂肪，表明枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌 Bacillus licheniformis yb-2自身能产生蛋白酶、乳糖和脂肪消化酶；菌落周围出现白色加深的现象，表明菌产酶效果没有枯草芽孢杆菌强，其可能分泌了降解蛋白的酶。
B.定量检测
分别将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2接种于营养琼脂液态培养基中培养12h后，3000转/分钟离心发酵液10分钟，收集上清液，弃细菌。购买试剂盒检测蛋白酶、乳糖和脂肪消化酶(南京建成生物工程研究所)，检测发酵液上清中蛋白酶、乳糖和脂肪消化酶的活力。
结果表明：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2的蛋白酶活力依次分别为178.89U/m L、198.89U/mL；
枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2的乳糖酶活力依次分别为438.89U/mL、532.43U/mL；
枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2的脂肪酶活力依次分别为567.81U/mL、698.29U/mL。
C.γ-氨基丁酸评价
分别将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2接种于营养琼脂液态培养基中培养12h后，3000转/分钟离心发酵液10分钟，收集上清液，弃细菌。采用液相色谱串联质谱法检测发酵液上清中γ-氨基丁酸的含量。
(a)试剂与材料：
标准品：γ氨基丁酸。
试剂：乙腈、甲酸、乙酸铵(色谱纯，质谱级别，美国热电)、超纯水。
(b)样品提取：
称取1克样品，加入10mL乙腈，涡旋1min，混匀后10000r/min离心10min。取上清液溶液进样.
(c)标准物质溶液配制：
取标准物质母液，加水分别配制浓度为1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、1000ng/mL的标准物质溶液，过0.22μm滤膜，HPLC-MS/MS分析。
(d)仪器条件：
液相色谱型号：LC30，色谱柱：Waters ACQUITY UPLC Hillic(100mm*2.1mm， 1.7μm)
流动相：A:0.5mmol/L乙酸铵溶液(0.1％甲酸)柱温：35℃，B:乙腈(0.1％甲酸) 流速：0.4mL/min，进样体积：1μL。
检测结果：γ-氨基丁酸标准品和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2发酵液中γ-氨基丁酸的检测色谱图如图3所示，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2的发酵液中γ-氨基丁酸含量分别为375.78μg/L、182.19μg/L。
3)耐热评价
分别将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2接种于营养琼脂液态培养基中培养12h，后从培养箱中取出，煮沸至100℃，后用平板计数法计数煮沸前与煮沸后的活菌数量。结果表明，煮沸前枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2的平均数量分别依次为 6.5×109CFU/mL和5.8×109CFU/mL，100℃水煮沸后，枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis yb-1 和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2的平均数量分别依次为6.4×109CFU/mL和 5.7×109CFU/mL，差异不显著(P>0.05)，表明枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2具有优异的耐热性。
4)耐低水分评价
分别将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2接种于营养琼脂液态培养基中培养12h，后从培养箱中取出，准确量取600毫升菌液，接种至1000g麸皮中，混合均匀。后至烘箱中烘干至水分含量达到16％。后用平板计数法计数麸皮中的活菌数量。结果表明，烘干前枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisyb-1 和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2的平均数量分别依次为4.9×109CFU/mL和 4.2×109CFU/mL数量与煮沸前，烘干后，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisyb-1和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2的平均数量分别依次为5.5×109CFU/mL和 4.4×109CFU/mL数量与煮沸前，差异不显著(P>0.05)。
在饲料工业化生产中，常常需要将将饲料制成颗粒，制粒温度一般为高温如 85-95℃，制成颗粒后水分含量低于15％。对益生菌开展耐热和耐低水分评价，测评将益生菌能否添加至饲料中进行制粒，便于开展工业化饲料生产。
如上所述，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2在高温和低水分条件下仍然能够保持优异的活力，因此，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2能够用于高温和低水分条件下的饲料工业化生产中。
2.固态复合益生菌制剂的制备
1)菌种
选择中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1 的保藏编号为CGMCC No.14246，地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2GMCC No.14245。
2)菌种的活化与种子液的获得
将保存在4℃的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2分别接种于营养琼脂液体培养基上，37℃培养12h，如此连续活化 3次后，得到菌种子液。
3)生产
将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2种子液接种于培养基中。为了保证菌种的营养需要，如碳源、氮源、生长促进因子，及便于吸附、成型，并综合考虑经济成本。经过反复试验得出其组分：玉米粉199g，麸皮800g，甜菜碱1g，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2 种子液分别300mL。搅拌均匀后，放于40℃恒温箱中，固态发酵22-26小时。
4)烘干
将固态发酵成熟的复合益生菌制剂，放入恒温干燥箱中过夜烘干，摊开，使厚度不超过5厘米，水分含量约16％。装袋，密封保存。
5)产品活菌数
用选择性计数培养基，采用平板计数法，检测烘干后枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis yb-2活菌数，皆达到109活菌单位每克(CFU/g)。
6)货架时间
将密封好的复合益生菌制剂放在室温下保存，分别于30天、60天、90天后，按第5)步方法，检测其中枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1和地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2的活菌数量。结果显示30天后活菌数为2.3±0.2×109CFU/g，60天后活菌数为1.6±0.2×109CFU/g，90天后活菌数为1.2±0.3×109CFU/g。数量均超过国家饲用微生态添加剂活菌含量要求(>108CFU/g)。
3.固态复合益生菌制剂缓解肉鸡冷应激的效果
1)试验动物及分组
选择出壳400只1日龄的艾拔益加肉鸡(AA肉鸡)(体重40.5±0.5g)，随机分成4 组(每100只)，对照组(试验I)、无机硒组(试验II)、自制复合益生菌组(试验III)、抗生素组(试验Ⅳ)。每组5个重复，每个重复20只。试验日粮基础日粮为参照美国国家研究委员会(NRC，1998)标准及中华人们共和国农业行业标准(肉鸡词养标准，NY/T33-2004)肉鸡营养需要配合而成，日粮组成及营养水平见表1。添加量皆为0.3％，使基础日粮中的活菌数量达到5.0×106CFU/mL，见表2所示。饲喂方式：将益生菌制剂混入肉鸡饲料中。硒元素具有提高肉鸡抗冷应激的功效，因此本研究设置无机硒作为抗冷应激的对照。
表1AA肉鸡基础日粮的配方组成(％)
Figure BDA0003269655080000191
Figure BDA0003269655080000201
a预混料为每千克饲粮提供：VA 9700IU，VD3 3100IU，VE 25IU，VK3 3.20mg，硫胺素thiamine 1.5mg，核黄素riboflavin 5.0mg，VB6 1.8mg，VB12 0.02mg，生物素biotin0.04mg，叶酸folic acid 1.25mg，烟酸nicotinic acid 15mg，泛酸 pantothenic acid10.0mg，氯化胆碱choline chloride 800mg，Mn 100mg，Zn 80mg， Cu 8.0mg，I 0.15mg，Se0.15mg，Fe 80mg。
试验分2个阶段：育雏期和育肥期，0-21天为育雏期，试验开始22天，将肉鸡转群，至育肥室。每天观察试验肉鸡的健康状况。环境一致，每日定时饲喂两次(早晨 7:30，下午16:30)。鸡舍温度：日龄0-3天为35℃；日龄4-7天为33℃；日龄8-14天为 20℃；日龄15-21天为15℃；日龄22天后为6℃。试验期内定期消毒，疫苗注射及其它程序，同场内其它鸡群。
表2肉鸡试验分组
Figure BDA0003269655080000202
2)测定指标
1、肉鸡生长性能
记录肉鸡初始重、育雏转群体重、出栏体重。记录每个组每日的饲料消耗量，计算料肉比和日增重。
2、肉鸡发病及死亡情况
观察每个组鸡群每天的采食、健康状况、发病情况，进行记录。计算每组的发病率和死淘率。
3、肉鸡激素水平
每个组选择体重均匀10只鸡，翅静脉采血，采用肝素抗凝，离心收集血浆。购买试剂盒(南京建成生物工程研究所)，检测血浆中皮质醇、丙二醛、内毒素的水平。
4、肠道菌群与冷应激
取肉鸡盲肠内容物，提取细菌总DNA，采用高通量二代测序法，检测菌群多样性，通过检测细菌核糖体DNA(16S rDNA)V3-V4区序列，明确肠道菌群多样性，同时进行OTU功能分析，明确对复合益生菌对病原菌与革兰氏阴性菌的抑制作用。
5、数据分析
数据用SPSS17.0软件进行统计分析，差异显著者进行Duncan氏进行多重比较，以P<0.05作为差异显著性判断标准。
3)结果与讨论
3.1)生长性能
试验42天后，称重肉鸡体重和计算料肉比，结果如图4和图5所示。复合益生菌组中的肉鸡体重极显著高于对照组(P<0.01)和黄霉素组没有显著差异(P>0.05)。复合益生菌组的料肉比显著低于对照组和无机硒组(P<0.01)和黄霉素组没有显著差异(P>0.05)，即复合益生菌组的肉鸡饲料转化率显著高于对照组和无机硒组(P <0.01)和黄霉素组没有显著差异(P>0.05)。枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis yb-1 和地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis yb-2具有产消化酶的能力，可帮助鸡消化饲料，且有机酸能够将饲料中的钙盐水解，生成肠道容易吸收的钙离子，从而促进肠道营养物质的吸收，提高肉鸡体重，降低料肉比，提高饲料的转化率。
3.2)肉鸡发病及死亡情况
试验42天后，统计各组肉鸡死淘率，试验I组、试验II组、试验III组、试验IV 组依次为5.22％、4.99％、2.09％、2.12％，复合益生菌数值最低。气温低于20℃时，机体会产生一定的应激，增加机体的氧化水平，不利于动物防病，而益生菌可以降低应激造成的损伤，恢复抵抗力，降低死淘率。
3.3)肉鸡激素水平
试验42天后，各组肉鸡的血清皮质醇、血清丙二醛、血清内毒素水平结果如图6、图7和图8。从图6-8中可以看出，肉鸡饲喂复合益生菌后，可有效减少体内冷应激相关的激素水平。皮质醇、丙二醛和内毒素水平极显著下降，为四个试验组最低(P< 0.01)，同时饲喂无机硒，可以降低冷应激造成机体激素水平升高。
3.4)肠道菌群
试验42天后，经肠道菌群多样性测序，结果如图9所示，4个组的菌群中以益生菌饲喂组，肠道内病原菌的数量最低，降低病原菌对肠道上皮细胞的侵染，具有感染的细胞数量极显著低于对照组和无机硒组(P<0.01)，复合益生菌组与黄霉素组没有显著差异(P>0.05)。复合益生饲喂组，肉鸡肠道中的致病性大肠杆菌(Pathogenic Escherichia coli)、志贺氏菌(Shigellosis)、沙门氏菌(Salmonella)、百日咳杆菌 (Pertussis)数量与对照组、无机硒组合黄霉素组相比极显著下降(P<0.01)。大肠杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌、百日咳杆菌这4种病原菌为革兰氏阴性菌，被杀灭后，菌体崩解，会产生LPS造成机体内毒素水平升高，与结果3相互支撑。
以上所述是本发明针对一种案例设计的实施方案，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下还可以作出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种复合益生菌的用途，其特征在于，，用于制备组合物，所述的组合物用于选自下组的一种或多种用途：(i)用于产消化酶；(ii)用于产有机酸；(iii)用于提高家禽体重；(iv)用于提高家禽的饲料转化率；(v)用于降低家禽的发病率；(vi)用于降低家禽的死亡率；(vii)用于降低家禽的与冷应激相关的激素水平；(viii)改善肠道微生态；和/或(ix)用于改善家禽的抗冷应激；
所述的复合益生菌包括枯草芽孢杆菌和/或地衣芽孢杆菌。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的枯草芽孢杆菌为Bacillus subtilisyb-1，保藏号：CGMCC No.14246；和或
所述的地衣芽孢杆菌为Bacillus licheniformis yb-2，保藏号：CGMCC No.14245。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的枯草芽孢杆菌与所述地衣芽孢杆菌的含量之比为(0.1-10):(0.1-10)，较佳地(0.5-5):(0.5-5)，更佳地(0.5-3):(0.5-3)，更佳地(0.5-2):(0.5-2)，更佳地(0.5-1.5):(0.5-1.5)，更佳地(0.8-1.2):(0.8-1.2)，最佳地1:1。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的家禽包括鸡、鸭和/或鹅。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的家禽包括肉食家禽。
6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的消化酶选自下组的酶：蛋白酶、乳糖酶、脂肪酶，或其组合；和/或
所述的有机酸包括氨基丁酸。
7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的家禽的饲养条件包括在低温和/或常温条件下饲养。
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述的低温为-5℃至20℃，较佳地0℃至20℃，更佳地2℃至20℃，更佳地4℃至20℃，更佳地4℃至15℃，更佳地4℃至10℃，更佳地4℃至8℃；和/或
所述的常温为21℃至40℃，较佳地25℃至35℃，更佳地33℃至35℃。
9.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的冷应激相关的激素包括皮质醇、丙二醛和/或内毒素。
10.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的改善肠道微生态包括：
(a)降低肠道致病性微生物的数量和/或种类；和/或
(b)降低肠道致病性微生物对肠道的侵染。
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