CN111685228A - 一种含甜叶菊渣的菌酶协同发酵饲料及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种含甜叶菊渣的菌酶协同发酵饲料及其应用，饲料包括原料按质量分数计的黑曲霉预发酵后的甜叶菊渣38～43份，玉米6～12份、豆粕4.5～12份、DDGS12～20份、米糠粕11～20份、麸皮0～15份、石粉0～8份、30％甜菜碱0～0.3份、磷酸氢钙0～0.7份、氯化钠0～0.5份和葡萄糖1～2份，加入复合菌剂为甜叶菊渣的0.05～0.1％，混匀后，装入呼吸袋中密封，于25～30℃条件下发酵5～7天。该饲料能提高蛋鸡的生产性能，改善蛋鸡舍内空气质量；可使猪的屠宰率和瘦肉率提高，背膘厚度和发病率降低；可有效提高了奶牛的干物质采食量和产奶量，降低了牛奶中的体细胞数，并降低了奶牛乳房炎的发病率。
Description
技术领域
本发明属于发酵饲料技术领域，具体涉及一种含甜叶菊渣的菌酶协同发酵饲料及其应用。
背景技术
甜叶菊糖产品在制糖过程中会产生大量甜叶菊渣，我国每年产生的甜叶菊渣为20多万吨，甜叶菊渣属于工业废料，处理费用很高。目前，甜叶菊废渣主要的处理方式是焚烧和堆肥，焚烧污染环境，堆肥使其中的营养成分及活性物质得不到合理、高效地利用，造成资源浪费。如何有效处理甜叶菊渣不仅关系到环境问题，还影响着甜叶菊深加工产业链条的延伸和企业的效益。
研究资料显示，甜叶菊渣中含有粗蛋白、粗纤维、粗脂肪、微量元素和维生素等多种营养成分，总黄酮含量高达4％，作为饲料或添加剂极具利用价值。研究指出适当添加甜叶菊可提高动物免疫器官指数和增强免疫效果的趋势。以5％比例做禽类饲料，能起到预防禽类腹泻等作用，调节禽类消化功能，并能提高产蛋率；掺到饲料里用来喂奶牛、奶羊，可增加奶甜度，提高奶质量和奶中微量元素、氨基酸等物质，对产奶量有一定促进作用，肉牛可提高肉的品质和口感。但甜叶菊渣是高湿物料，直接或烘干后作为饲料产品销售附加值低，企业积极性不高，亟待开发高附加值的产品。并且，甜叶菊渣质地粗硬，适口性较差，酸溶蛋白含量低，纤维含量高，影响其饲用价值。菌酶协同发酵能够有效提高甜叶菊渣中酸溶蛋白含量，降低其粗纤维含量，并产生一些消化酶类和维生素类物质，使其营养价值和适口性大大提高，为拓展饲料资源，降低饲料成本探索一条新途径。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种含甜叶菊渣的菌酶协同发酵饲料。
为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案为：
一种含甜叶菊渣的菌酶协同发酵饲料，其包括原料按质量分数计的黑曲霉预发酵后的甜叶菊渣38～43份，玉米6～12份、豆粕4.5～12份、DDGS 12～20份、米糠粕11～20份、麸皮0～15份、石粉0～8份、30％甜菜碱0～0.3份、磷酸氢钙0～0.7份、氯化钠0～0.5份和葡萄糖1～2份，加入复合菌剂为前述原料质量总和的0.05～0.1％，混匀后，装入呼吸袋中密封，于25～30℃条件下发酵5～7天，即得菌酶协同发酵饲料。
如上所述的菌酶协同发酵饲料，优选地，所述复合菌剂包括干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母，其中干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母的菌株保藏编号为分别为CGMCC No.18913、CGMCC No.5468、CGMCC No.18917。
如上所述的菌酶协同发酵饲料，优选地，所述菌干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母为冻干粉，按照质量比1～3：1～3：5～10：5～10的比例混合，复合菌剂中干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母的活菌数分别≥1×109CFU/g，≥1×109CFU/g，≥1×108CFU/g和≥1×108CFU/g。
如上所述的菌酶协同发酵饲料，优选地，所述黑曲霉预发酵后的甜叶菊渣为将甜叶菊渣、糖蜜和尿素按照质量比为93:6:1的比例充分混合，接种黑曲霉进行发酵后的36～48h后的物料。
如上所述的菌酶协同发酵饲料，优选地，所述黑曲霉的孢子含量均≥150亿/克，按甜叶菊渣质量的0.01％～0.05％进行接种，发酵温度低于40℃。
如上含甜叶菊渣的菌酶协同发酵饲料在饲养动物中的应用。
如上所述的应用，优选地，所述菌酶协同发酵饲料在蛋鸡的日粮中添加质量分数为3％～5％。
如上所述的应用，优选地，所述菌酶协同发酵饲料在育肥猪的日粮中添加质量分数为10～15％。
如上所述的应用，优选地，所述菌酶协同发酵饲料在奶牛的日粮中添加质量分数为10％～20％。
本发明的有益效果在于：
本发明提供的一种含甜叶菊渣的菌酶协同发酵饲料，是以甜叶菊渣作为原料之一生产发酵饲料，其即能提高甜叶菊渣的饲用价值，又能增加发酵饲料的粗蛋白和酸溶蛋白含量，纤维、NDF和ADF降低，提高饲料的适口性，使得甜叶菊渣的营养价值大幅度提升，使甜叶菊渣变废为宝。
本发明提供的一种含甜叶菊渣的菌酶协同发酵饲料，可用于饲养家禽，用于饲养蛋鸡，使得蛋鸡生产性能提高，并可改善蛋鸡舍内空气质量；用于饲养育肥猪，使猪的屠宰率和瘦肉率提高，背膘厚度和发病率降低；用于饲养奶牛，有效提高了奶牛的干物质采食量和产奶量，降低了牛奶中的体细胞数，并降低了奶牛乳房炎的发病率。
附图说明
图1为干酪乳杆菌BFC190201随时间变化产酸的pH值；
图2为干酪乳杆菌BFC190201的发酵液上清抑制霉菌活性。
具体实施方式
以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的前提下，对本发明所作的修饰或者替换，均属于本发明的范畴。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1甜叶菊渣自身附着乳酸菌的筛选
以山东诸城市浩天药业有限公司厂区内自然堆放的甜叶菊渣(DM＝60％)作为菌种来源进行乳酸菌富集培养。取1.0g甜叶菊渣加入9mL MRS培养液(蔗糖20g/L，蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母浸粉5g/L，乙酸钠5g/L，柠檬酸铵2g/L，K2HPO4 2g/L，MgSO4·7H2O0.58g/L，MnSO4·4H2O 0.25g/L，吐温80 1.0mL/L，pH调至6.3，115℃灭菌20min)中进行富集培养：30℃静置培养24h后，按1％(体积分数比)的接种量转接培养物连续继代培养20代，获得性质和菌种组成稳定的乳酸菌群。
取富集培养液梯度稀释涂布于MRS琼脂培养基上30℃培养36h，挑取单菌落，分离出纯菌株。将分离出的纯菌株接种于MRS液体培养基，30℃培养24h，选取L-乳酸产量最高的菌株BFC190201，即完成筛选。经测量，该菌株培养液中L-乳酸和D-乳酸产量分别为36.3g/L和2.56g/L，经提取DNA用通用引物27F/1492R进行PCR扩增，测序结果SEQ ID NO.1所示，经比对鉴定为干酪乳杆菌Lactobacillus casei，保存于于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名：干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)，保藏编号：CGMCC No.18913，保藏日期为：2019年11月07日。
产酸试验：挑取菌株BFC190201单菌落接种于MRS培养基(蔗糖20g/L，蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母浸粉5g/L，乙酸钠5g/L，柠檬酸铵2g/L，K2HPO4 2g/L，MgSO4·7H2O0.58g/L，MnSO4·4H2O 0.25g/L，吐温80 1.0mL/L，pH调至6.3，115℃灭菌20min)中，30℃静置培养48h，每隔2h测定菌液pH值。测定48h内的pH值的结果见图1，结果说明该菌株能够快速产酸降低pH值。
抑霉菌试验：将霉菌孢子接种至PDA固体培养基斜面，37℃培养4天(以长出霉菌孢子为标准)。用含有体积分数为0.05％的吐温-80无菌水冲洗斜面制成悬浮液。将干酪乳杆菌BFC190201接种于液体MRS培养基中，37℃恒温培养24h，4 000r/min离心15min，分别吸取0、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL、2.0mL与20mL的PDA琼脂培养基混匀，倒入平皿中，待凝固后，吸取30μL的孢子悬浮液于固体培养基中，涂布均匀，于28℃恒温培养，观察干酪乳杆菌BFC190201的抑菌能力。结果图2所示。图2中第一个培养皿为未接种上清液的只有孢子悬浮液接种的固体培养基即吸取0mL上清液的，标记有1％即吸取0.2mL的上清液、2％即吸取0.4mL的上清液、3％即吸取0.6mL的上清液、4％即吸取0.8mL的上清液、5％即吸取1.0mL的上清液、6％即吸取1.2mL的上清液、7％即吸取1.4mL的上清液、8％即吸取1.6mL的上清液、9％即吸取1.8mL的上清液、10％即吸取2.0mL的上清液，说明干酪乳杆菌BFC190201的代谢产物具有抑制霉菌孢子生长的特征，浓度越高，抑制能力越强。
抑致病菌试验：把大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌这3种致病菌接入50mLLB培养基中，37℃、200r/min培养18h。取直径约为90mm的培养皿，加入已经融化好的LB培养基20mL，让其在平板内能够均匀分布，放置一段时间让它凝固，作为底层。然后取半固体营养琼脂培养基(琼脂含量为1％)进行加热融化后，等其冷却至48～50℃，每50mL的半固体中加入指示菌菌悬液0.1mL，在底层上加入5mL半固体培养基，使其在第一层上能够均匀分布，作为第二层。然后在平板中放置4个牛津杯，间隔距离相同，待其冷却后，取8 000r/min离心5min后的干酪乳杆菌BFC190201发酵上清液，每个双层平板中的牛津杯中分别加200μL样品，37℃培养24h后，测定各个抑菌圈直径的大小以作出评价，结果如表1所示。
表1 BFC190201发酵液上清抑制病菌的效果
| 菌种 | 抑菌直径mm |
| 金黄色葡萄球菌 | 16.28±0.26 |
| 沙门氏菌 | 15.88±0.24 |
| 大肠杆菌 | 15.36±0.28 |
结果表明干酪乳杆菌BFC190201的代谢产物能够广谱抑制金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌和霉菌的生长。
实施例2
将保藏状态的干酪乳杆菌BFC190201接种于MRS液体培养基中，25-37℃静置培养18-24h，得到一级种子液；将一级种子液按接种量5％-10％(v/v)再次转接入新的MRS培养基进行二次活化，静置18-24h后获得二级种子液；将二级种子液按照接种量5％-10％(v/v)分别单独接入到发酵罐培养基中，在温度为25-37℃，静置培养18-24h，获得干酪乳杆菌BFC190201发酵液。将干酪乳杆菌BFC190201发酵液在4℃条件下，8000r/min离心10min制得菌泥，按1：2～4(m/v)向菌泥中加入脱脂牛奶，在涡旋振荡器上震荡混匀，进行真空冷冻干燥，制得干酪乳杆菌BFC190201冻干粉，有效活菌数≥1×1012CFU/g。
植物乳杆菌P-8，已于2011年11月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC No.5468。(公开号为CN102618461B的中国发明专利《一株可以促进肠道中SIgA分泌的益生菌及其检测方法》已公开该菌株)。将保藏状态的该菌株如上所述逐级活化后冷冻干燥，制得植物乳杆菌P-8冻干粉，有效活菌数≥1×1012CFU/g。
将分离鉴定获得的产朊假丝酵母菌BFC190301，已于2019年11月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名：产朊假丝酵母(Candida utilis)，保藏编号：CGMCC No.18917。将保藏状态的产朊假丝酵母BFC190301用无菌水稀释打匀后制成原始菌液，取原始菌液涂布于YPD固体培养基(葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母浸粉1％，琼脂1.5％)上，在30～35℃下培养3～5天，挑取单菌落接种于YPD固体培养基斜面试管，待菌种长满整个试管斜面后转接一次，备用；从斜面培养基上挑取菌种，接种于YPD液体培养基中摇匀，置于振荡培养箱中摇床发酵培养，30～35℃摇床培养20～24h，转速为130～150r/min，得到一级种子液；将一级种子液按接种量5％-10％(v/v)再次转接入新的YPD培养基进行二次活化，静置18-24h后获得二级种子液；将二级种子液按照接种量5％-10％(v/v)分别单独接入到发酵罐培养基中，30～35℃培养20～24h，转速为130～150r/min，获得产朊假丝酵母BFC190301发酵液。将产朊假丝酵母BFC190301发酵液在4℃条件下，8000r/min离心10min制得菌泥，按1：2～4(m/v)向菌泥中加入脱脂牛奶，在涡旋振荡器上震荡混匀，进行真空冷冻干燥，制得产朊假丝酵母BFC190301冻干粉，有效活菌数≥1×1010CFU/g。
酿酒酵母由安琪酵母股份有限公司提供，活菌数≥2×1010CFU/g。
将干酪乳杆菌BFC190201冻干粉、植物乳杆菌P-8冻干粉、产朊假丝酵母菌冻干粉和酿酒酵母菌冻干粉按照质量比2：1：8：6的比例混合，并以冻干粉混合物与有机载体按质量比为1：58混合，获得复合菌剂，所述有机载体为葡萄糖、蔗糖、果糖或糊精中的任一种或多种混合。最终的复合菌剂中干酪乳杆菌BFC190201、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母的活菌数分别≥1×109CFU/g，≥1×109CFU/g，≥1×108CFU/g，≥1×108CFU/g。
实施例3含甜叶菊渣发酵饲料的加工
(1)甜叶菊渣好氧发酵预处理
将甜叶菊渣(DM＝30％)、糖蜜和尿素按照质量比为93:6:1的比例充分混合，接种黑曲霉，放入水泥池或发酵槽中，好氧发酵发酵42h，温度升至40℃翻抛，保证发酵温度低于40℃。随着发酵时间的延长，真蛋白含量增加，粗纤维含量减少，结果如表2所示，发酵24h、36h和48h，真蛋白含量分别增加13.77％、36.96％和51.12％。
表2
| 真蛋白％ | 粗纤维％ | |
| 发酵前 | 15.61 | 18.32 |
| 发酵24h | 17.76 | 17.54 |
| 发酵36h | 21.38 | 15.55 |
| 发酵48h | 23.59 | 12.84 |
其中，黑曲霉由山东康源生物科技有限公司提供，孢子含量均≥150亿/克，在培养物制备过程中的接种量为0.01％～0.05％。该菌株具有很强的产酶能力，包括纤维素酶、β-葡聚糖酶、木聚糖酶、葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶、植酸酶和果胶酶。发酵48h后，经测量，甜叶菊渣中的酶的组成和活性如表3。
表3 发酵48h甜叶菊渣中的酶的组成和活性
| 种类 | 酶活U/g |
| 纤维素酶 | 7.5±0.37 |
| 木聚糖酶 | 62.5±1.22 |
| β-葡聚糖酶 | 5.0±0.73 |
| β-甘露聚糖酶 | 10.0±0.65 |
| 果胶酶 | 7.5±0.29 |
| 植酸酶 | 7.5±0.18 |
| 蛋白酶 | 25.0±0.15 |
(2)甜叶菊渣发酵饲料原料
黑曲霉预处理后的甜叶菊渣，添加0.1％的按实施例2中方法制备的复合菌剂，其中，干酪乳杆菌BFC190201冻干粉、植物乳杆菌P-8冻干粉、产朊假丝酵母菌冻干粉和酿酒酵母菌冻干粉按照质量比2:1:8:6配制，加入载体：葡萄糖，冻干粉的总和与葡萄糖质量比1:58混合制备的复合菌剂，25～30℃呼吸袋发酵5～7天，制得发酵甜叶菊渣甜叶菊渣发酵饲料原料。
对发酵前后甜叶菊渣(即未做任何处理的)中成分进行测量，结果如表4所示，经好氧和厌氧两阶段发酵后，甜叶菊渣水分含量降低，降至适宜有益微生物发酵的60％左右。在鲜基基础上，粗蛋白和酸溶蛋白含量均显著提高。如表5所示，在干物质基础上比较，发酵前后甜叶菊渣中的粗灰分、钙、磷含量变化不显著，但粗蛋白和酸溶蛋白含量分别提高46.90％和345.79％，粗纤维、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)分别降低19.11％、13.36％和5.57％。说明，发酵大大提高了甜叶菊渣中营养物质的利用率。
表4 发酵前后甜叶菊渣中成分的变化(鲜基基础)
| 指标 | 发酵前甜叶菊渣 | 发酵甜叶菊渣 |
| 水分(％) | 71.7 | 60.51 |
| 粗灰分(％) | 2.11 | 3.01 |
| 粗蛋白(％) | 5.54 | 11.76 |
| 酸溶蛋白(g/100g) | 0.09 | 0.56 |
| 粗纤维(％) | 6.51 | 7.35 |
| 中性洗涤纤维(％) | 15.34 | 18.55 |
| 酸性洗涤纤维(％) | 7.42 | 9.78 |
| 钙(％) | 0.59 | 0.84 |
| 总磷(％) | 0.04 | 0.06 |
| 粗脂肪(％) | 0.62 | 0.89 |
表5 发酵前后甜叶菊渣中成分的变化(干物质基础)
| 指标 | 发酵前甜叶菊渣 | 发酵甜叶菊渣 |
| DM(干物质)(％) | 28.30 | 39.49 |
| 粗灰分(％) | 7.46 | 7.63 |
| 粗蛋白(％) | 19.58 | 20.04 |
| 酸溶蛋白(g/100g) | 0.32 | 1.42 |
| 粗纤维(％) | 23.00 | 18.61 |
| 中性洗涤纤维(％) | 54.20 | 46.96 |
| 酸性洗涤纤维(％) | 26.22 | 24.76 |
| 钙(％) | 2.08 | 2.13 |
| 总磷(％) | 0.14 | 0.14 |
| 粗脂肪(％) | 2.19 | 2.24 |
实施例4-8含甜叶菊渣的菌酶协同发酵饲料
按照表6所示的质量份数称取好氧发酵48h的甜叶菊渣即黑曲霉预发酵后的甜叶菊渣、玉米、豆粕、DDGS、米糠粕、麸皮、石粉、30％甜菜碱、磷酸氢钙、氯化钠和葡萄糖，加入实施例3所用的复合菌剂。
表6 含甜叶菊渣发酵饲料配方
充分混匀后，装入呼吸袋中密封，于25～30℃条件下发酵5～7天，即得发酵饲料。发酵后的饲料经过检测，获得理化指标如表7所示。
表7 含甜叶菊渣发酵后饲料理化指标
实施例9甜叶菊渣菌酶协同发酵饲料在蛋鸡上的应用效果
选择367日龄海兰褐蛋鸡，将12000只蛋鸡随机分成3个处理组，每组4000只，每组设5个重复，采用四层阶梯笼养，自由采食，自由饮水，按免疫程序正常接种免疫，定期消毒。试验Ⅰ组为对照组，饲喂基础饲粮，Ⅱ、Ⅲ组分别在基础饲粮中添加3％、5％的按实施例8制备的菌酶协同发酵饲料。根据蛋鸡营养需要调整配方，使各组日粮配方营养组成基本一致。
1甜叶菊渣发酵饲料对蛋鸡生产性能的影响
结果如表8，可知，试验第45天，日粮中添加质量分数为3％和5％甜叶菊渣发酵饲料在产蛋率和日采食量有升高的趋势，料蛋比显著降低(P<0.05)，蛋重显著升高(P<0.05)，蛋破损率分别降低36.67％和61.05％，死淘率有分别降低6.06％和9.68％。
表8 对蛋鸡生产性能的影响
注：同行指标相比，*表示差异显著(P＜0.05)；**表示差异极显著(P＜0.01)，下表同。
2甜叶菊渣酵饲料对蛋鸡舍内空气质量的影响
如表9所示，与对照期相比，试验期第35d，二氧化碳浓度显著提高(P<0.05)；试验期第15d和35d，一氧化碳、一氧化二氮、氨气、甲烷浓度分别极显著降低(P<0.01)；与试验第15d相比，试验第35d一氧化碳、一氧化二氮、氨气、甲烷浓度分别极显著性降低(P<0.01)。由此可见，甜叶菊渣发酵饲料具有改善蛋鸡舍内空气品质的效果。
表9 蛋鸡舍内气体浓度
注：同列数据肩标小写字母不同表示差异显著(P＜0.05)，大写字母不同表示差异极显著(P＜0.01)，小写字母相同表示差异不显著(P＞0.05)。
实施例10甜叶菊渣菌酶协同发酵饲料在育肥猪上的应用效果
选择320头80kg左右的健康状况良好的肥育猪(杜×长×大)，随机分为4组，每组4栏，每栏20头猪。试验Ⅰ组为对照组，饲喂基础饲粮，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别在基础饲粮中添加5％、10％和15％的按实施例4制备的菌酶协同发酵饲料(30％水分)。根据生长育肥猪营养需要调整配方，使各组日粮配方营养组成基本一致。试验预试期3d，正式期4周。4组猪除饲喂的饲料不同外，其他饲养条件和管理方式均保持一致。试验期内，采取人工喂料，猪自由采食和饮水。以栏为单位记录肥育猪每周的采食量。在正试第1天和试验第4周早上空腹称重，以栏为单位计算平均体重。试验结束时，每组每栏圈随机选取1头猪进行屠宰，测定屠宰率和肉质。
1对育肥猪生产性能的影响
测量结果如表10所示，日粮中添加5％、10％和15％的甜叶菊渣发酵饲料均会提高肥育猪的干物质采食量，增加平均日增重，降低料重比，其中添加10％的试验组日增重最高，料重比最低。
表10 对育肥猪生产性能的影响
注：同一行的不同字母表示在P＝0.05的水平上差异显著。
2对屠宰性能的影响
测量结果如表11所示，肥育猪日粮中添加5％、10％和15％的甜叶菊渣发酵饲料均会提高屠宰率和瘦肉率，降低背膘厚度。添加量为10％和15％时，屠宰率、瘦肉率和背膘厚度与对照组差异显著，但10％和15％添加量的试验组之间差异不显著。因此，优选10％添加量。
表11 对屠宰性能的影响
注：同一行的不同字母表示在P＝0.05的水平上差异显著。
3对健康状况的影响
发病率是指(每组发病猪头数/每组饲养总头数)×100％，结果如表12所示，表明肥育猪日粮中添加5％、10％和15％的甜叶菊渣发酵饲料均会提高免疫力，降低发病率。日粮中甜叶菊渣发酵饲料的添加量约多，猪的发病率越低。
表12 对健康状况的影响
实施例11甜叶菊渣发酵饲料在奶牛上的应用效果
选择100头年龄、胎次、泌乳量和泌乳天数相近的健康状况良好的高产荷斯坦泌乳奶牛，随机分为4组，每组25头。试验Ⅰ组为对照组，饲喂基础饲粮，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础饲粮中添加10％、15％和20％的实施例8制备的甜叶菊渣发酵饲料(30％水分)。预试期1周，正试期7周。
对于干物质、产奶量、体细胞数和乳房炎的检测结果如表13所示，表明本发明的发酵饲料显著提高了奶牛的干物质采食量和产奶量，降低了牛奶中的体细胞数，并降低了奶牛乳房炎的发病率，使用量占日粮10％时效果最好。
表13 对奶牛生产性能的影响
注：同一行的不同字母表示在P＝0.05的水平上差异显著。
序列表
<110> 博益德（北京）生物科技有限公司
<120> 一种含甜叶菊渣的菌酶协同发酵饲料及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1393
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tacgccaccg gcttcgggtg ttacaaactc tcatggtgtg acgggcggtg tgtacaaggc 60
ccgggaacgt attcaccgcg gcgtgctgat ccgcgattac tagcgattcc gacttcgtgt 120
aggcgagttg cagcctacag tccgaactga gaatggcttt aagagattag cttgacctcg 180
cggtctcgca actcgttgta ccatccattg tagcacgtgt gtagcccagg tcataagggg 240
catgatgatt tgacgtcatc cccaccttcc tccggtttgt caccggcagt cttactagag 300
tgcccaactg aatgctggca actagtcata agggttgcgc tcgttgcggg acttaaccca 360
acatctcacg acacgagctg acgacaacca tgcaccacct gtcattttgc ccccgaaggg 420
gaaacctgat ctctcaggtg atcaaaagat gtcaagacct ggtaaggttc ttcgcgttgc 480
ttcgaattaa accacatgct ccaccgcttg tgcgggcccc cgtcaattcc tttgagtttc 540
aaccttgcgg tcgtactccc caggcggaat gcttaatgcg ttagctgcgg cactgaaggg 600
cggaaaccct ccaacaccta gcattcatcg tttacggcat ggactaccag ggtatctaat 660
cctgttcgct acccatgctt tcgagcctca gcgtcagtta cagaccagac agccgccttc 720
gccactggtg ttcttccata tatctacgca tttcaccgct acacatggag ttccactgtc 780
ctcttctgca ctcaagtttc ccagtttccg atgcgcttcc tcggttaagc cgagggcttt 840
cacatcagac ttaaaaaacc gcctgcgctc gctttacgcc caataaatcc ggataacgct 900
tgccacctac gtattaccgc ggctgctggc acgtagttag ccgtggcttt ctggttggat 960
accgtcacgc cgacaacagt tactctgccg accattcttc tccaacaaca gagttttacg 1020
acccgaaagc cttcttcact cacgcggcgt tgctccatca gacttgcgtc cattgtggaa 1080
gattccctac tgctgcctcc cgtaggagtt tgggccgtgt ctcagtccca atgtggccga 1140
tcaacctctc agttcggcta cgtatcatcg ccttggtgag ccgttacctc accaactagc 1200
taatacgccg cgggtccatc caaaagcgat agcttgcgcc atctttcagc caagaaccat 1260
gcggttcttg gatttatgcg gtattagcat ctgtttccaa atgttatccc ccacttaagg 1320
gcaggttacc cacgtgttac tcacccgtcc gccactcgtt ttaagttgaa tcacagtgca 1380
agcaccgttc atc 1393
Claims (9)
1.一种含甜叶菊渣的菌酶协同发酵饲料，其特征在于，其包括原料按质量分数计的黑曲霉预发酵后的甜叶菊渣38～43份，玉米6～12份、豆粕4.5～12份、DDGS12～20份、米糠粕11～20份、麸皮0～15份、石粉0～8份、30％甜菜碱0～0.3份、磷酸氢钙0～0.7份、氯化钠0～0.5份和葡萄糖1～2份，加入复合菌剂为前述原料质量总和的0.05～0.1％，混匀后，装入呼吸袋中密封，于25～30℃条件下发酵5～7天，即得菌酶协同发酵饲料。
2.根据权利要求1所述的菌酶协同发酵饲料，其特征在于，所述复合菌剂包括干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母，其中干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母的菌株保藏编号为分别为CGMCC No.18913、CGMCC No.5468、CGMCC No.18917。
3.根据权利要求1所述的菌酶协同发酵饲料，其特征在于，所述菌干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母为冻干粉，按照质量比1～3：1～3：5～10：5～10的比例混合，复合菌剂中干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母冻干粉活化后的活菌数分别≥1×109CFU/g，≥1×109CFU/g，≥1×108CFU/g和≥1×108CFU/g。
4.根据权利要求1所述的菌酶协同发酵饲料，其特征在于，所述黑曲霉预发酵后的甜叶菊渣为将甜叶菊渣、糖蜜和尿素按照质量比为93:6:1的比例充分混合，接种黑曲霉进行发酵后的36～48h后的物料。
5.根据权利要求1所述的菌酶协同发酵饲料，其特征在于，所述黑曲霉的孢子含量均≥150亿/克，按甜叶菊渣质量的0.01％-0.05％进行接种，发酵温度25～40℃。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的含甜叶菊渣的菌酶协同发酵饲料在饲养动物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述菌酶协同发酵饲料在蛋鸡的日粮中添加质量分数为3％～5％。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述菌酶协同发酵饲料在育肥猪的日粮中添加质量分数为10～15％。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述菌酶协同发酵饲料在奶牛的日粮中添加质量分数为10％～20％。
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