KR20120133708A

KR20120133708A - 미생물 폐배양액을 유효성분으로 함유하는 조사료원 발효용 조성물

Info

Publication number: KR20120133708A
Application number: KR1020110052498A
Authority: KR
Inventors: 장문백; 배귀석; 박제환; 김종기; 이찬; 김상범; 정명준
Original assignee: 중앙대학교 산학협력단; 주식회사 쎌바이오텍
Priority date: 2011-05-31
Filing date: 2011-05-31
Publication date: 2012-12-11

Abstract

본 발명은 미생물 폐배양액을 유효성분으로 함유하는 조사료원 발효용 조성물 및 조사료원에 미생물 폐배양액을 첨가하는 과정을 포함하는 사료 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명을 이용하는 경우, 미생물 폐배양액의 잔여 미생물과 유효성분에 의하여 조사료원, 특히 버섯폐배지의 발효능력을 증가 시킬 수 있으며, 섬유소 분해 미생물의 활성도를 배가 시켜 섬유소분해율을 극대화 할 수 있다. 또한 폐자원의 재활용에 따른 사료비 절감 효과 및 미생물 폐배양액과 폐배지의 처리비용을 감소 효과를 가지고 있다.

Description

미생물 폐배양액을 유효성분으로 함유하는 조사료원 발효용 조성물 {A Composition for fermentation of origin of roughage that contain media waste by available component}

본 발명은 조사료(roughage)원 발효용 조성물에 관한 발명이다. 보다 구체적으로 미생물 폐배양액을 유효성분으로 함유하는 조사료원 발효용 조성물 및 조사료원에 미생물 폐배양액을 첨가하는 과정을 포함하는 사료 제조 방법에 관한 것이다.

일반적으로 사료는 가축의 생명을 유지하고, 알, 우유, 고기 등의 산출물을 생산하는데 필요한 유기(有機) 또는 무기(無機) 영양소를 공급하는 물질로서, 좋은 사료는 영양소의 함량이 많고, 가축에게 유해한 성분이 없으며 생산량이 많을 뿐 아니라 쉽게 구할 수 있고, 신선하고 소화율이 높은 것이어야 한다.

가축에 급여하는 건초나 사료용 곡물은 대부분 수입에 의존하고 있다. 건초는 국내의 농지나 유휴농지를 이용 재배하여 어느 정도는 자급자족이 가능하나 곡물 등은 거의 자급생산이 불가능한 실정이다.

현재 기존의 먹이 공급만으로는 국내 축산의 국제 경쟁력이 없을 뿐만 아니라 청정 유기축산물을 공급하기도 불가능하다. 종래 국내 축산 사료의 수급 현황을 개괄하면 수입 곡물을 주원료로 사용하는 배합사료가 대부분이고, 농가에서 자급원료를 사용하는 저온 발효 사이레지가 보조적인 먹이로 되어 있다.

종래 곡물 배합사료는 단백질(CP), 가소화양분총량(TDN), 조섬유, 조회분, 칼슘(Ca), 인(P), 비타민Z를 사료 메뉴의 조성비율로 혼합/포장된 건조사료 또는 곡물과 건초를 혼합/포장된 배합사료 등이 판매되고 있다.

방목할 토지가 부족한 한국의 경우, 수입 건초류와 곡물류를 원료로 하는 혼합사료에 의한 축산이 불가피하다. 이 결과 가축의 건강지수가 감소하고, 번식기능이 약화되고, 가축의 질환이 증가하여 젖에 포함되는 체세포수가 증가하고, 수태율이 감소하고, 공태기간이 길어지는 등의 부작용이 발생하고 있다. 이에 따라 질병에 대한 저항성이 감소하면서, 감염된 축우의 폐기 등 막대한 산업적 손실이 초래되고 있는 것이 현실이다. 이에 따라 축우의 건강증진을 위해 비타민 복합제나 미네랄 생균효소제 등 다양한 유형의 보조사료가 제시되고 있지만 가격적인 면이나 실용성 면에서 축산농가에 경제적인 부가가치를 주지는 못하고 있다.

버섯은 수분, 탄수화물, 조단백, 조지방, 조섬유, 회분으로 구성되면서 단백질과 필수아미노산 조성이 좋을 뿐 만이 아니라 미량원소도 풍부하여 단백질 공급원으로 중요한 역할을 하고 있으며, 성인병 및 항암효과가 입증되어 식품적 가치가 높은 것이다. 버섯은 맛과 향이 좋고 각종 영양성분이 많이 함유되어 있음은 물론, 다당류들은 항암 및 면역조절 작용을 하는 것으로 알려져 있어서 건강식품으로 사용되고 있는 것인데, 이러한 버섯을 재배하고 난 배지에는 가축에게 유익한 많은 양의 영양원을 포함하고 있다. 특히 버섯과 버섯배지에 포함되어 있는 베타 글루칸(β-Glucan)과 같은 다당류는 세포조직의 면역기능을 활성화시켜서 암세포의 증식과 전이를 방지하는 작용을 하는 것으로 알려져 있다.

버섯 생산을 위한 생산비 중 배지가 차지하고 있는 비율이 가장 높으며, 또한 원료들 대부분이 수입에 의존하고 있는 실정이다. 또한 버섯을 수확 후 버려지는 버섯 폐배지의 처리비용 또한 운반비가 소요되기 때문에 버섯재배 농가에서는 생산성 감소에 많은 영양을 미치고 있는 실정이다. 이러한 실정에서 버섯폐배지의 재활용에 대한 여러 가지 방법들이 모색되어 왔다.

대규모 버섯재배 회사에서는 톱밥 보다는 콘코브, 미강, 건비지등을 혼합하여 버섯을 재배하고 있는 실정이나 새송이 버섯의 경우 미송톱밥, 밀기울, 건비지 혼합배지를 주로 사용하고, 느타리버섯은 미송톱밥, 비트펄프, 면실박을 혼합하여 버섯을 재배하고 있다. 이와 같은 버섯재배의 사용되는 원료와 혼합비율은 각 회사마다 다소 차이가 있으나 주로 사용되고 있는 원료는 가축 사료제조에 사용되는 원료들이 주를 이루고 있으며, 이 때문에 가축사료 원료로 이용가능한 영양학적 특징을 가지고 있다. 이러한 버섯배지의 영양 성분을 살펴보면 조단백질 6-18%이를 차지하고 있으며 나머지 주요성분은 섬유소원이 다량함유하고 있다.

이러한 특징을 가지고 있는 버섯배지들은 버섯배양 시 유기물의 일부분만을 사용하고 나머지는 버섯폐배지로 버려지게 된다. 따라서, 이러한 버섯 폐배지의 가축 사료원으로써 이용은 폐자원 활용면에서 중요한 역할을 할 수 있으며, 특히 섬유소원을 주로 공급해 주어야 하는 반추가축 사료원으로써 활용도가 높은 사료자원이다.

그러나 톱밥과 같은 버섯배지의 주요 구성 성분은 반추가축의 1위내 존재하고 있는 섬유소분해 미생물들에 의해 분해가 어려우며, 따라서 버섯폐배지를 반추동물에 공급시에는, 다른 사료원과의 분해 속도를 동기화 및 반추위내에서의 분해율 증진을 위하여 버섯폐배지를 1차적으로 미생물로 분해하는 과정이 요구된다.

미생물 폐배양액은 폐기물로 분류 되어 폐기를 위한 비용이 발생되며, 재활용에 대한 요구가 많은 실정이다.

본 출원의 발명자들은 미생물 폐배양액을 유용하게 사용할 방법을 개발하기 위하여 예의 노력한 결과 미생물 폐배양액을 조사료원에 첨가하는 방법을 개발하고, 이의 사료가치 및 생체 내외의 소화율을 확인하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명의 목적은 미생물 폐배양액을 유용하게 사용하기 위하여 미생물 폐배양액을 유효성분으로 함유하는 조사료원 발효용 조성물을 제공함에 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 조사료원에 미생물 폐배양액을 첨가하는 과정을 포함하는 사료 제조 방법을 제공함에 있다.

또한 본 발명의 목적은 미생물 폐배양액을 유효성분으로 함유하는 조사료원 발효용 조성물을 포함하는 섬유질배합사료를 제공함에 있다.

본 발명은 미생물 폐배양액을 유효성분으로 함유하는 조사료원 발효용 조성물을 제공한다.

바람직하게는 상기 조사료원은 폐배지이며, 더욱더 바람직하게는 버섯 폐배지이다. 또한 바람직하게는 상기 미생물 폐배양액은 유산균 폐배양액에 해당한다.

또한 본 발명은 조사료원에 미생물 폐배양액을 첨가하는 과정을 포함하는 사료 제조 방법을 제공한다. 바람직하게는 상기 조사료원은 폐배지이며, 더욱더 바람직하게는 버섯 폐배지이다. 또한 바람직하게는 상기 미생물 폐배양액은 유산균 폐배양액에 해당한다.

또한, 본 발명은 (1) 버섯 폐배지에 유산균 폐배양액을 첨가하는 과정; 및

(2) (1)과정의 혼합물에 유산균 및 섬유소분해 미생물을 접종하는 과정; 을 포함하는 사료 제조 방법을 제공한다.

바람직하게는 (2) 단계의 유산균은 Lactobacillus acidophilus (ATCC 496), Lactobacillus casei (IFO 3533), Lactobacillus plantorum (KCTC 1048) 및 Lactobacillus fermentum (ATCC 1493)로 이루어진 그룹에서 선택된 것이며, 바람직하게는 상기 (2)단계의 섬유소분해 미생물은 Enterobacter ludwiggi (KEMB 2224-008) (Cellulolytic bacterial, CMCase) 및 Bacillus subtilis (Cellulolytic bacterial, CMCase)로 이루어진 그룹에서 선택된 것이다.

또한 본 발명은 미생물 폐배양액을 유효성분으로 함유하는 조사료원 발효용 조성물을 포함하는 섬유질배합사료를 제공한다. 상기 조사료원은 바람직하게는 폐배지이며, 더욱 바람직하게는 버섯폐배지이다. 또한 상기 미생물 폐배양액은 바람직하게는 유산균 폐배양액이다.

본 발명의 조사료원 발효 조성물 또는 사료 제조 방법에 의하는 경우, 미생물 폐배양액의 잔여 미생물과 유효성분에 의하여 조사료원, 특히 버섯폐배지의 발효능력을 증가 시킬 수 있으며, 섬유소 분해 미생물의 활성도를 배가 시켜 섬유소분해율을 극대화 할 수 있다. 또한 폐자원의 재활용에 따른 사료비 절감 효과 및 미생물 폐배양액과 폐배지의 처리비용을 감소 효과를 가지고 있다.

도 1은 미생물 폐배양액을 폐배지에 첨가하는 과정 및 이를 이용하여 사료를 제조하는 방법이 도시한 것이다.

본 발명에 있어서 “미생물 폐배양액”은 유용한 미생물을 배양하고 난 뒤 남은 부산물을 의미하며, 미생물이 생장할 수 있는 배양액 모두 포함한다. 본 발명에 있어서 “미생물”이란 유용한 미생물로 그람 양성균, 그람 음성균 모두를 의미하며, 바람직하게는 유산균일 수 있다. 본 발명에 있어서 “유산균”이란 글루코오스 등 당류를 분해하여 젖산을 생성하는 세균으로서, 락토바실러스 속 또는 스트렙토코쿠스 속 등이 이에 해당하여, 그 종류를 한정 하지 아니한다.

본 발명에 있어서 미생물 폐배양액은 전체 중량을 100으로 하여 0.1 내지 50 중량부로 포함하는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 10 내지 30 중량부로 포함된 것이다. 그 함량이 상기 범위 내일 경우, 조사료원의 발효 및 미생물에 의한 섬유소분해능에 더욱 좋다.

본 발명에 있어서 “조사료원”이란 섬유질 함량이 높고 에너지 함량이 낮은 사료의 원료를 의미하며, 건초, 사일리지, 옥수수, 파, 씨있는 과일의 껍데기, 콩깍지, 티모시, 톨훼스큐, 알파파베일, 버뮤다, 클라인, 오챠드, 블로그라스 또는 라이그라스 등 그 종류를 한정하지 않는다. 조사료원은 바람직하게는 폐배지일 수 있으며, 더욱더 바람직하게는 버섯 폐배지일 수 있다.

본 발명에 있어서 “발효”란 유기물이 미생물 작용에 의하여 분해 및 변화하는 현상을 의미하며, 본 발명에서는 바람직하게는 반추위 내 존재하는 미생물들이 분해하기 용이한 형태로 분해 또는 변화하는 과정일 수 있다.

또한 본 발명은 조사료원에 미생물 폐배양액을 첨가하는 과정을 포함하는 사료 제조 방법을 제공한다. 바람직하게는 상기 조사료원은 폐배지일 수 있으며, 더욱더 바람직하게는 버섯 폐배지일 수 있다. 또한 바람직하게는 상기 미생물 폐배양액은 유산균 폐배양액일 수 있다.

섬유질배합사료에 있어서 전체 사료 중량100을 기준으로 유효성분은 0.1 내지 50 중량부 일 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 20 중량부일 수 있으며, 가장 바람직하게는 10 중량부 일 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 상세하게 설명한다. 이하의 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

< 실시예1 > 버섯 폐배지와 미생물 폐배양액 혼합 및 유용 미생물을 이용한 발효

1-1 : 폐미생물배양액을 이용한 유용미생물 배양

폐미생물배양액은 주식회사 셀바이오텍에서 미생물제제를 제조하고 난 뒤의 부산물인 폐배양액을 이용하여 조사료원 발효에 사용하였다.

폐미생물배양액 (생균수 2×10^-3 cfu/g) 20%와 유산균 첨가로써 Lactobacillus acidophilus ATCC 496, Lactobacillus casei IFO 3533, Lactobacillus plantorum KCTC 1048, Lactobacillus fermentum ATCC 1493 4종의 미생물 접종액과 섬유소분해미생물로써 Enterobacter ludwiggi (KEMB 2224-008) (Cellulolytic bacterial, CMCase), Bacillus subtilis (Cellulolytic bacterial, CMCase) 2종을 버섯폐배지에 접종하여 발효시키기 위해 48시간 동안 36℃에서 계대배양을 실시하여 접종액을 준비하였다.

1-2 : 폐미생물 배양액 미생물제제를 이용한 버섯폐배지 발효 및 제조

배양기 (80L)을 이용하여 버섯폐배지 50kg에 대하여 폐미생물배양액 20% (생균수 2×10^-3 cfu/g)을 첨가하였으며, 계대배양이 끝난 2종류의 유용미생물 접종 후 36℃에서 48시간 incubator에서 1차배양 후 교반기가 설치 incubator를 이용하여 80 rpm의 속도로 혼합하면서 24시간 동안 2차 배양과 동시에 수분함량 20%를 유지하였다. 그 구체적 공정은 도1과 같다.

1-3 : 폐미생물배양액의 추가 미생물 접종에 의한 생균수 함량

폐미생물배양액의 고형분 함량은 2.5~3.0% 수준을 나타내었으며, 폐미생물 배양액 내 생균수 함량은 2.0±0.25×10⁶cfu/ml를 나타내었다. 본 시험에서 사용된 유산균 첨가로써 Lactobacillus acidophilus ATCC 496, Lactobacillus casei IFO 3533, Lactobacillus plantorum KCTC 1048, Lactobacillus fermentum ATCC 1493 4종과 섬유소분해미생물로써 Enterobacter ludwiggi (KEMB 2224-008) (Cellulolytic bacterial, CMCase), Bacillus subtilis (Cellulolytic bacterial, CMCase) 2종을 접종하여 각각 0, 24, 48 그리고 72시간 동안 37℃에서 계대배양한 미생물 생균수는 하기의 표1과 같다.

각 폐미생물배양액의 배양시간별 생균수는 48과 72시간대에서 각 109.35±0.18×10⁶cfu/ml 109.39±0.21×10⁶cfu/ml로 두 처리구 간에 통계적으로 유의성이 없이 가장 높은 결과를 나타내었으며, 24시간대에서 18.72±0.15×10⁶cfu/ml로 대조구 보다 높은 결과를 나타내었다.

Incubation time (h)
0	24	48	72
--------------------------×10⁶cfu/ml ------------------------------
7.50±0.25^c	18.72±0.15^b	109.35±0.18^a	109.39±0.21^a

< 실시예2 > 미생물발효 버섯 폐배지 사료가치 평가

미생물 폐배양액을 미처리한 버섯배지의 화학적 성분은 하기 표 2과 같으며, 미생물 폐배양액을 처리한 버섯폐배지의 화학적 성분은 하기 표 3와 같다. 미생물 폐배양액 처리 미처리 버섯배지 (버섯배지+톱밥 40%)의 NDF, ADF, Hemicellulose, cellulose, lignin함량은 미생물 폐배양액 미처리 버섯폐배지에 비하여 각 21.95, 20.19, 1.76, 15.79 그리고 3.98% 감소하는 경향을 나타내었다. 그러나 미생물 폐배양액 처리 버섯배지는 미생물 미처리 시보다 non fiber carbohydrate (NFC), crude protein, true protein 그리고 ether extract함량이 각 4.21, 1.73, 5.30 그리고 0.82% 증가하는 경향을 나타내었다.

이와 같은 결과는 버섯페배지 발효를 위해 사용된 미생물 균주 중 섬유소분해미생물로써 Enterobacter ludwiggi (KEMB 2224-008) (Cellulolytic bacterial, CMCase), Bacillus subtilis (Cellulolytic bacterial, CMCase)에 의한 섬유소 분해 효과로 사료되며, 특히 미생물폐배양액 처리 버섯폐배지에서 NFC함량이 4.21% 증가한 것은 섬유소 분해 미생물의 섬유소분해 활력이 높아졌기 때문으로 사료된다. Non protein nitrogen (NPN)의 함량은 미생물폐배양액을 처리한 버섯 폐배지에서 5.09% 감소는 경향을 나타내었는데, 이와 같은 결과는 미생물 폐배양액 처리 버섯폐배지에 유효미생물을 접종하여 2차 배양을 하는 경우, 추가 질소원의 보충 없이 유효미생물들에 의하여 NPN함량이 감소한 것으로 사료된다.

Items	%
NDF	74.10
ADF	59.80
Hemicellulose	14.30
Cellulose	37.10
Lignin	22.40
NFC	7.00
Crude protein	6.90
True protein	62.60
NPN	33.40
ADF-CP	35.50
Ether Extract	2.30
Crude ash	6.30
Dry matter	43.50

Items	%
NDF	52.15
ADF	39.61
Hemicellulose	12.54
Cellulose	21.31
Lignin	18.42
NFC	11.21
Crude protein	8.63
True protein	67.90
NPN	28.31
ADF-CP	35.50
Ether Extract	3.12
Crude ash	6.28
Dry matter	29.16

< 실시예3 > 미생물 폐배양액 첨가 버섯 폐배지의 사료가치 평가를 위한 젖소용 섬유질 배합사료 ( TMR ) 제조

시험에 사용된 기초 섬유질배합사료는 표 4와 같으며, 미생물 폐배양액 첨가 버섯 폐배지의 중량부별 첨가 수준(3, 5, 10, 20%)에 따른 TMR 사료의 사료 화학적 성분 변화는 표 5와 같다.

미생물 폐배양액 첨가 버섯 폐배지 수준이 증가할수록 dry matter, crude fiber, ADF 그리고 NDF함량은 다소 증가하는 경향을 나타내었다. 또한 crude protein, undegradable protien, Ether extract, Nitrogen free extract (NFE) 그리고 NFC함량은 다소 감소하는 경향을 나타내었다.

이와 같은 결과는 미생물발효 버섯폐배지의 높은 섬유소 함량 때문으로 사료된다. 그러나 모든 TMR 사료의 화학적 구성성분은 건물함량을 제외하고 미생물발효 버섯폐배지의 첨가 수준에 따라 1.0% 이하의 차이를 나타내었다. 이는 2차 유용 미생물배양에 사용된 미생물 폐배지가 함유하고 있는 영양성분 때문에 섬유소함량 증가에도 다른 성분에는 영향을 미치지 않은 것으로 사료된다.

Ingredient	Amount (%)
Corn	32.434
Wheat Bran	15.000
Soybean Meal	10.000
Corn Gluten Feed	10.000
DDGS	7.000
Reapseed Meal	6.267
Palmkemel Meal	6.000
Coconut Meal	6.000
Rice Polishing	5.000
Limestone	1.849
Salt	0.250
AS-2002	0.200
Chemical composition (%)
NDF	73.30
ADF	57.20
Hemicellulose	16.10
Cellulose	35.50
Lignin	19.70
NFC	10.20
Crude protein	8.40
True protein	64.00
NPN	36.00
ADF-CP	31.20
Ether Extact	2.80
Crude ash	6.20
Dry matter	41.50

Item
Chemical composition	Microbial fermented spent mushroom substrates (%)
Chemical composition	0	3	5	10	20
Dry matter, %	72.12	72.98	73.93	74.01	74.19
Crude protein, %	15.80	14.96	14.89	14.70	14.53
Undegradable protein, %/CP	36.47	35.46	34.92	34.86	34.74
Ether extract, %	5.45	5.22	5.03	4.83	4.61
Crude fiber, %	16.95	17.08	17.44	17.55	17.68
Ash, %	6.03	6.03	6.03	6.04	6.04
NFE¹,%	55.97	52.61	51.34	51.31	51.27
NFC²,%	53.20	50.96	50.61	50.26	50.14
ADF³,%	23.08	23.43	23.71	24.02	24.39
NDF⁴,%	40.87	40.98	41.02	41.20	41.45
¹NFE : Nitrogen Free Extract ²NFC : Non Fiber Carbohydrate ³ADF : Acid Detergent Fiber ⁴NDF : Neutral Detergent Fiber

< 실시예 4> In vitro 시험

4-1: 반추위액 준비 및 접종

In vitro 반추위 미생물 발효특성 시험을 위한 반추위 미생물 접종액의 제조는 도살장에서 착유우의 반추위 내에서 채취한 내용물을 8겹의 cheesecloth로 거른 후 39℃를 유지하여 실험실로 운반 후 반추위액과 McDougall's buffer를 각각 1:1로 혼합하였으며, 혐기상태를 유지하기 위해 CO₂ gas를 지속적으로 주입시켜 주었다. 미생물 혼합액에는 건초(100% rice stew, 20g/L)와 농후사료(20g/L)를 함께 24시간 39℃ incubator에서 강화배양 후 2,500 × g에서 15분간 원심분리하여 상층액만을 취하여 접종액으로 사용하였다.

4-2: In vitro 시험 준비

In vitro시험의 배양을 위해 1-mm screen이 장착된 Willey mill를 이용하여 균일한 입자로 분쇄하였고 3일간 건조 후 시험사료로 이용하였다. 배양은 300ml serum bottle에 각 처리구의 시험사료를 각 1.7g씩 하였으며, McDougall's artificial saliva 100ml를 CO₂ gas 분주와 함께 rubber stopper와 알루미늄 뚜껑을 고정장치를 이용하여 밀봉 후 주사기를 이용하여 5ml의 inoculums을 접종한 후 39℃ incubator에서 배양을 실시하였다. 시료 채취는 0, 2, 4, 6, 8, 12 그리고 24시간대별로 실시하였으며, 모든 배양 조건은 혐기상태를 유지하였다.

4-3: 시료분석

사료건물은 분석 직전 60℃ dry oven에서 72시간동안 건조하였다. 분석에서 시험 사료의 화학적 구성성분은 A.O.A.C(1990)의 방법을 이용하여 분석하였다. 미생물단백질합설량은 Lowry 등(1951)의 방법을 이용하여 측정하였다

4-4: 분석결과

시험사료를 사용하여, in vitro시험을 진행한 건물소화율, NDF소화율, 반추위 미생물단백질 함량을 나타낸 결과이다 (표 6). 대조구는 표4의 성분을 갖는 TMR사료이며, 처리구는 표5에 나타나는 미생물 폐배지 첨가 버섯폐배지를 TMR사료에 질량부별로 함유한 사료이다. 폐미생물배양액을 이용해 제조한 미생물발효 버섯폐배지가 10%질량부로 포함되는 경우까지, 건물소화율, NDF소화율 그리고 반추위내미생물단백질 합성량에 유의적 차이가 나타나지 않았다.

Items	Incubation Time
Items	0	2	4	6	8	12	24
	---------------------- % -------------------------
건물소화율
대조구	-	13.46	24.51	29.32	33.72	36.06	38.99
3%	-	12.76	23.39	28.46	32.71	35.03	38.24
5%	-	13.22	23.96	28.98	33.22	35.22	38.45
10%	-	12.76	23.16	27.84	32.88	34.99	37.99
20%	-	12.59	23.10	27.90	32.29	34.68	37.72
NDF소화율
대조구	-	47.28	51.50	54.05	57.63	60.89	62.40
3%	-	47.24	51.39	54.24	57.62	60.44	61.68
5%	-	47.25	51.28	54.13	57.56	60.35	61.30
10%	-	46.54	50.95	53.58	56.93	59.98	61.14
20%	-	46.16	50.03	53.64	56.24	58.93	59.74
반추위미생물단백질 합성량
대조구	104.86	112.78	127.16	135.72	138.25	140.39	154.40
3%	105.79	113.01	126.25	134.97	138.44	140.01	152.70
5%	106.44	112.63	126.07	135.18	138.09	140.95	150.80
10%	107.26	112.78	127.16	135.72	138.25	140.39	149.40
20%	107.99	113.22	125.45	128.85	136.08	138.91	146.79

< 실시예 5> In sacco 시험

5-1: 시험동물 및 sampling

공시가축은 반추위에 누관이 장착된 Holstein종 1두(공시체중 605Kg)를 공시하였으며, 혼합 목건초와 물을 자유채식토록 하였다.

5-2: 시험사료

in vitro시험에서 건물소화율이 대조구와 유의적 차이가 발견되지 않은 10중량부(10%)의 미생물 폐배양액을 첨가한 버섯폐배지를 포함하는 TMR을 시험사료로 하였으며, 대조구는 버섯폐배지를 포함하지 않은 표4의 TMR을 대조구로 하였다.

5-3: 시험설계

생균제 특성에 따라 대조구(TMR)와 10% 미생물발효 버섯폐배지 처리구인 2처리구를 이용하여 시험을 수행하였다. 반추위 배양시간은 0, 3, 6, 12 및 24시간으로 각각 3회 반복 처리하였다. Nylon bag (Swiss screen P/L co. Ltd, NYTAL 25T, pore size; 45㎛)은 5Cm × 10Cm 크기로 제작하였다.

5-4: 시험방법 및 조사항목

5g의 시료를 칭량하여 nylon bag에 넣고, 나이론 끈(낚시줄용)으로 bag의 끝에서 2.5Cm 지점을 묶은 다음, 큰 그물망 (크기 : 가로 15Cm × 세로 25Cm)에 다시 넣어 따뜻한 물에 15분 정도 수침하였다. 캐뉼러의 뚜껑을 열고 반추위 ventral sac 쪽으로 nylon bag이 든 그물망을 넣고, 캐뉼러의 뚜껑을 닫았다. 그 후 배양시간대 별로 캐뉼러 뚜껑을 열고 회수한 nylon bag을 즉시 얼음물에 침지하여 미생물의 생육을 억제하였다. 단, 0시간대는 nylon bag 시료를 반추위 캐뉼러에 넣지 않았다. 회수한 nylon bag을 맑은 물이 나올 때까지 흐르는 물에 세척하였다. 이것을 dry oven에서 60℃로 72시간 건조한 후 무게를 칭량하여, 건물소화율을 계산하였다. 건물소화율(%)은 (배양전 건물무게 - 배양후 건물무게) / 배양전 건물무게 × 100으로 계산하였다.

5-5: 시험 결과

배양시간에 따라 소화율은 증가하는 경향을 보였는데, 배양 48시간때까지 두처리구 모두 비슷한 소화율을 나타내었다 (표 7).

시간대별 반추위내에서 사료의 건물소화율 (n=3)

배양시간(h)	건물소화율(%)
배양시간(h)	대조구	버섯폐배지 (10%)
0	21.88 ± 1.44	21.19 ± 1.21
3	26.79 ± 1.43	27.02 ± 1.29
6	41.93 ± 1.22	41.84 ± 2.06
12	56.38 ± 1.36	55.55 ± 2.48
24	83.04 ± 1.73	84.90 ± 1.62
48	97.23 ± 1.03	97.35 ± 1.23

Claims

미생물 폐배양액을 유효성분으로 함유하는 조사료원 발효용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조사료원은 폐배지인 것을 특징으로 하는 조성물.
제2항에 있어서, 상기 폐배지는 버섯 폐배지인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 미생물 폐배양액은 유산균 폐배양액인 것을 특징으로 하는 조성물.
조사료원에 미생물 폐배양액을 첨가하는 과정을 포함하는 사료 제조 방법.
제5항에 있어서, 상기 조사료원은 폐배지인 것을 특징으로 하는 사료 제조 방법.
제6항에 있어서, 상기 폐배지는 버섯폐배지인 것을 특징으로 하는 사료 제조 방법.
제5항에 있어서, 상기 미생물 폐배양액은 유산균 폐배양액인 것을 특징으로 하는 사료 제조 방법.
제 8항에 있어서,
(1) 버섯 폐배지에 유산균 폐배양액을 첨가하는 과정; 및
(2) (1)과정의 혼합물에 유산균 및 섬유소분해 미생물을 접종하는 과정; 을 포함하는 사료 제조 방법.
제9항에 있어서, 상기 (2) 단계의 유산균은 Lactobacillus acidophilus (ATCC 496), Lactobacillus casei (IFO 3533), Lactobacillus plantorum (KCTC 1048) 및 Lactobacillus fermentum (ATCC 1493)로 이루어진 그룹에서 선택된 것을 특징으로 하는 사료 제조 방법.
제9항에 있어서, 상기 (2)단계의 섬유소분해 미생물은 Enterobacter ludwiggi, (KEMB 2224-008) (Cellulolytic bacterial, CMCase) 및 Bacillus subtilis (Cellulolytic bacterial, CMCase)로 이루어진 그룹에서 선택된 것을 특징으로 하는 사료 제조 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 섬유질배합사료.