CN111718880A - 一种用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents
一种用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂及其制备方法和应用，其用于甜叶菊渣发酵的菌剂包括干酪乳杆菌(CGMCC No.18913)、植物乳杆菌P‑8(CGMCC No.5468)、产朊假丝酵母菌(CGMCC No.18917)和酿酒酵母。采用复合菌剂发酵黑曲霉发酵后的甜叶菊渣，使得甜叶菊渣粗蛋白和酸溶蛋白含量分别提高46.90％和345.79％，粗纤维、NDF和ADF分别降低19.11％、13.36％和5.57％，使得甜叶菊渣的营养价值大幅度提升，使甜叶菊渣变废为宝。
Description
技术领域
本发明属于发酵饲料技术领域，具体涉及一种用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
我国是目前世界上最大的甜叶菊糖产品生产供应国，约占全球总产量的90％。制糖过程中会产生大量甜叶菊渣，我国每年因此产生的甜叶菊渣为20多万吨。甜叶菊渣属于工业废料，处理费用很高。
研究资料显示，甜叶菊渣中含有粗蛋白、粗纤维、粗脂肪、微量元素和维生素等多种营养成分，总黄酮含量高达4％，作为饲料或添加剂极具利用价值。但甜叶菊渣是高湿物料，直接或烘干后作为饲料产品销售附加值低，企业积极性不高，亟待开发高附加值的产品。并且，甜叶菊渣质地粗硬，适口性较差，酸溶蛋白含量低，纤维含量高，影响其饲用价值。如何有效处理甜叶菊渣不仅关系到环境问题，还影响着甜叶菊深加工产业链条的延伸和企业的效益。目前，甜叶菊废渣主要处理方式是焚烧和堆肥，焚烧污染环境，堆肥使其中的营养成分及活性物质得不到合理、高效地利用，造成资源浪费。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂，采用该菌剂对甜叶菊渣进行发酵制备饲料，能有效提高甜叶菊渣的粗蛋白和酸溶蛋白含量，降低粗纤维、NDF和ADF的含量。
为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案为：
一种用于甜叶菊渣发酵的干酪乳杆菌，该菌株分离自甜叶菊渣，保藏号为CGMCCNo.18913，保藏日期为：2019年11月7日。
一种用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂，其包括干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母，其中干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母的菌株保藏编号为分别为CGMCC No.18913、CGMCC No.5468、CGMCC No.18917。
如上所述的复合菌剂，优选地，所述干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母的活菌数分别≥1×109CFU/g，≥1×109CFU/g，≥1×108CFU/g和≥1×108CFU/g。
如上所述的复合菌剂，优选地，所述干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母为冻干粉，按照质量比1～3：1～3：5～10：5～10的比例混合。
一种如上所述的用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂的制备方法，其包括干酪乳杆菌冻干粉、植物乳杆菌P-8冻干粉、产朊假丝酵母菌冻干粉和酿酒酵母各菌株冻干粉的制备，将干酪乳杆菌BFC190201冻干粉、植物乳杆菌P-8冻干粉、产朊假丝酵母菌冻干粉和酿酒酵母菌冻干粉按照质量比1～3：1～3：5～10：5～10的比例混合，并以冻干粉混合物与有机载体按质量比为1：50-114混合，获得复合菌剂，所述有机载体为葡萄糖、蔗糖、果糖、或糊精中的任一种或多种混合。
如上所述的制备方法，优选地，所述干酪乳杆菌冻干粉的制备采用如下方法：将干酪乳杆菌发酵获得的发酵液，将发酵液离心制得菌泥，按质量与体积g/mL的比为1：2～4计向菌泥中加入脱脂牛奶，混匀后进行真空冷冻干燥，制得干酪乳杆菌冻干粉，经检测，其有效活菌数≥1×1012CFU/g。
如上所述的制备方法，优选地，所述植物乳杆菌P-8冻干粉的制备采用如下方法：将植物乳杆菌P-8发酵获得发酵液，将发酵液离心制得菌泥，按质量与体积g/mL的比为1：2～4计向菌泥中加入脱脂牛奶，混匀后进行真空冷冻干燥，制得植物乳杆菌P-8冻干粉。
如上所述的制备方法，优选地，所述产朊假丝酵母菌冻干粉的制备采用如下方法：将产朊假丝酵母菌发酵获得发酵液，将发酵液离心制得菌泥，按质量与体积g/mL的比为1：2～4计向菌泥中加入脱脂牛奶，混匀后进行真空冷冻干燥，制得产朊假丝酵母菌冻干粉。
优选地，制得的干酪乳杆菌冻干粉中有效活菌数≥1×1012CFU/g；
制得的植物乳杆菌P-8冻干粉中有效活菌数≥1×1012CFU/g；
制得的产朊假丝酵母菌冻干粉中有效活菌数≥1×1010CFU/g。
一种如上所述的用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂在制备发酵饲料中的应用。
如上所述的应用，优选地，所述用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂在对黑曲霉发酵后甜叶菊渣进行发酵的用量为甜叶菊渣质量百分比的0.05～0.1％。
如上所述的应用，优选地，所述黑曲霉发酵后甜叶菊渣为甜叶菊渣(DM＝30％)、糖蜜和尿素按照质量比为93:6:1的比例充分混合，按甜叶菊渣质量的0.01％～0.05％接种黑曲霉后，在发酵温度25℃～40℃进行好氧发酵36～48h。
一种甜叶菊渣发酵饲料原料，使用如上所述的复合菌剂对黑曲霉发酵后甜叶菊渣进行发酵所得。
如上所述的发酵饲料原料，优选地，所述黑曲霉发酵后甜叶菊渣为甜叶菊渣、糖蜜和尿素按照质量比为93:6:1的比例充分混合，按甜叶菊渣质量的0.01％～0.05％接种黑曲霉后，在发酵温度25℃～40℃进行好氧发酵36～48h。
本发明中的干酪乳杆菌CGMCC No.18913为甜叶菊渣自身附着的菌株，具有底物专一性，产酸能力强，并能有效抑制霉菌和沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等致病菌。
植物乳杆菌P-8具有优异的抗胃肠道消化液耐受能力，能够增强机体抗氧化能力，显著增加肠黏膜免疫球蛋白A含量，对肌体肠黏膜局部免疫具有调节作用，并能在动物肠道定植并繁殖，改善肠道健康。
产朊假丝酵母的菌体蛋白质约占菌体干物质的32％～75％，其含量因菌种、培养条件不同而差异较大。在菌体细胞中含有核糖核酸4.5％～8.5％和B族维生素约2％和多种矿物质。产朊假丝酵母菌本身还含有丰富的酶类，如单胃蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶及植酸酶等，这些酶类可以将淀粉、纤维素水解成小分子糖、氨基酸、醇类等易被消化和吸收的低分子物质。酵母菌的添加有利于瘤胃pH的稳定，促进蛋白分解菌生长，提高蛋白消化率。
酿酒酵母菌属于兼性厌氧菌，在进入动物胃肠道后，可以消耗胃肠道的氧气，造成厌氧环境，从而促进有益菌群的繁殖，改善动物消化道微生态平衡。
本发明的有益效果在于：
本发明提供的一种用于制备甜叶菊渣发酵复合菌剂的干酪乳杆菌，其具有较强的产酸能力，其发酵产物具有较好的抑制霉菌和沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等致病菌的抑菌性能。
本发明提供的一种用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂，用于黑曲霉发酵甜叶菊渣，发酵后的甜叶菊渣粗蛋白和酸溶蛋白含量分别提高46.90％和345.79％，粗纤维、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)分别降低19.11％、13.36％和5.57％，使得甜叶菊渣的营养价值大幅度提升，使甜叶菊渣变废为宝。
本发明提供的用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂，用其制备发酵的饲料，用于饲养蛋鸡，使得蛋鸡生产性能提高，并可改善蛋鸡舍内空气质量；用于饲养育肥猪，可使猪的屠宰率和瘦肉率提高，背膘厚度和发病率降低；用于饲养奶牛，可有效提高了奶牛的干物质采食量和产奶量，降低了牛奶中的体细胞数，并降低了奶牛乳房炎的发病率。
附图说明
图1为干酪乳杆菌BFC190201随时间变化产酸的pH值；
图2为干酪乳杆菌BFC190201的发酵液上清抑制霉菌活性。
具体实施方式
以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的前提下，对本发明所作的修饰或者替换，均属于本发明的范畴。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1甜叶菊渣自身附着乳酸菌的筛选
以山东诸城市浩天药业有限公司厂区内自然堆放的甜叶菊渣(DM＝60％)作为菌种来源进行乳酸菌富集培养。取1.0g甜叶菊渣加入9mL MRS培养液(蔗糖20g/L，蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母浸粉5g/L，乙酸钠5g/L，柠檬酸铵2g/L，K2HPO4 2g/L，MgSO4·7H2O0.58g/L，MnSO4·4H2O 0.25g/L，吐温80 1.0mL/L，pH调至6.3，115℃灭菌20min)中进行富集培养：30℃静置培养24h后，按1％(体积分数比)的接种量转接培养物连续继代培养20代，获得性质和菌种组成稳定的乳酸菌群。
取富集培养液梯度稀释涂布于MRS琼脂培养基上30℃培养36h，挑取单菌落，分离出纯菌株。将分离出的纯菌株接种于MRS液体培养基，30℃培养24h，选取L-乳酸产量最高的菌株BFC190201，即完成筛选。经测量，该菌株培养液中L-乳酸和D-乳酸产量分别为36.3g/L和2.56g/L，经提取DNA用通用引物27F/1492R进行PCR扩增，测序结果为SEQ ID NO.1：TACGCCACCGGCTTCGGGTGTTACAAACTCTCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCGTGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCGTGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAGTCCGAACTGAGAATGGCTTTAAGAGATTAGCTTGACCTCGCGGTCTCGCAACTCGTTGTACCATCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTTACTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAGTCATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCATTTTGCCCCCGAAGGGGAAACCTGATCTCTCAGGTGATCAAAAGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAATGCTTAATGCGTTAGCTGCGGCACTGAAGGGCGGAAACCCTCCAACACCTAGCATTCATCGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGACAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTTCACCGCTACACATGGAGTTCCACTGTCCTCTTCTGCACTCAAGTTTCCCAGTTTCCGATGCGCTTCCTCGGTTAAGCCGAGGGCTTTCACATCAGACTTAAAAAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGATAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTGGATACCGTCACGCCGACAACAGTTACTCTGCCGACCATTCTTCTCCAACAACAGAGTTTTACGACCCGAAAGCCTTCTTCACTCACGCGGCGTTGCTCCATCAGACTTGCGTCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGATCAACCTCTCAGTTCGGCTACGTATCATCGCCTTGGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAATACGCCGCGGGTCCATCCAAAAGCGATAGCTTGCGCCATCTTTCAGCCAAGAACCATGCGGTTCTTGGATTTATGCGGTATTAGCATCTGTTTCCAAATGTTATCCCCCACTTAAGGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTCCGCCACTCGTTTTAAGTTGAATCACAGTGCAAGCACCGTTCATC，经比对鉴定为干酪乳杆菌Lactobacillus casei，保存于于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名：干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)，保藏编号：CGMCC No.18913，保藏日期为：2019年11月7日。
产酸试验：挑取菌株BFC190201单菌落接种于MRS培养基(蔗糖20g/L，蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母浸粉5g/L，乙酸钠5g/L，柠檬酸铵2g/L，K2HPO4 2g/L，MgSO4·7H2O0.58g/L，MnSO4·4H2O 0.25g/L，吐温80 1.0mL/L，pH调至6.3，115℃灭菌20min)中，30℃静置培养48h，每隔2h测定菌液pH值。测定48h内的pH值的结果见图1，结果说明该菌株能够快速产酸，降低pH值，产酸能力强。
抑霉菌试验：将霉菌孢子接种至PDA固体培养基斜面，37℃培养4天(以长出霉菌孢子为标准)。用含有体积分数为0.05％的吐温-80无菌水冲洗斜面制成悬浮液。将干酪乳杆菌BFC190201接种于液体MRS培养基中，37℃恒温培养24h，4 000r/min离心15min，分别吸取0、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL、2.0mL与20mL的PDA琼脂培养基混匀，倒入平皿中，待凝固后，吸取30μL的孢子悬浮液于固体培养基中，涂布均匀，于28℃恒温培养，观察干酪乳杆菌BFC190201的抑菌能力。结果图2所示。图2中第一个培养皿为未接种上清液的只有孢子悬浮液接种的固体培养基即吸取0mL上清液的，标记有1％即吸取0.2mL的上清液、2％即吸取0.4mL的上清液、3％即吸取0.6mL的上清液、4％即吸取0.8mL的上清液、5％即吸取1.0mL的上清液、6％即吸取1.2mL的上清液、7％即吸取1.4mL的上清液、8％即吸取1.6mL的上清液、9％即吸取1.8mL的上清液、10％即吸取2.0mL的上清液，说明干酪乳杆菌BFC190201的代谢产物具有抑制霉菌孢子生长的特征，浓度越高，抑制能力越强。
抑致病菌试验：把大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌这3种致病菌接入50mLLB培养基中，37℃、200r/min培养18h。取直径约为90mm的培养皿，加入已经融化好的LB培养基20mL，让其在平板内能够均匀分布，放置一段时间让它凝固，作为底层。然后取半固体营养琼脂培养基(琼脂含量为1％)进行加热融化后，等其冷却至48～50℃，每50mL的半固体中加入指示菌菌悬液0.1mL，在底层上加入5mL半固体培养基，使其在第一层上能够均匀分布，作为第二层。然后在平板中放置4个牛津杯，间隔距离相同，待其冷却后，取8 000r/min离心5min后的干酪乳杆菌BFC190201发酵上清液，每个双层平板中的牛津杯中分别加200μL样品，37℃培养24h后，测定各个抑菌圈直径的大小以作出评价，结果如表1所示。
表1 BFC190201发酵液上清抑制病菌的效果
结果表明干酪乳杆菌BFC190201的代谢产物能够广谱抑制金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌和霉菌的生长。
实施例2
将保藏状态的干酪乳杆菌BFC190201(CGMCC No.18913)接种于MRS液体培养基中，25-37℃静置培养18-24h，得到一级种子液；将一级种子液按接种量5％-10％(v/v)再次转接入新的MRS培养基进行二次活化，静置18-24h后获得二级种子液；将二级种子液按照接种量5％-10％(v/v)分别单独接入到发酵罐培养基中，在温度为25-37℃，静置培养18-24h，获得干酪乳杆菌BFC190201发酵液。将干酪乳杆菌BFC190201发酵液在4℃条件下，8000r/min离心10min制得菌泥，按1：2～4(m/v按g/mL计)向菌泥中加入脱脂牛奶，在涡旋振荡器上震荡混匀，进行真空冷冻干燥(第一步，-80℃预冻2-4h；第二步，真空度10-12Pa，温度-40-60℃，真空干燥48-60h)，制得干酪乳杆菌BFC190201冻干粉，经测定其有效活菌数≥1×1012CFU/g。
植物乳杆菌P-8，已于2011年11月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC No.5468。(具体见公开号为CN102618461B的中国发明专利《一株可以促进肠道中SIgA分泌的益生菌及其检测方法》已公开该菌株。)将保藏状态的该菌株如上所述逐级活化后冷冻干燥，制得植物乳杆菌P-8冻干粉，测得其有效活菌数≥1×1012CFU/g。
将分离鉴定获得的产朊假丝酵母菌(Candida utilis)BFC190301，已于2019年11月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名：产朊假丝酵母(Candida utilis)，保藏编号：CGMCC No.18917。将保藏状态的产朊假丝酵母BFC190301用无菌水稀释打匀后制成原始菌液，取原始菌液涂布于YPD固体培养基(葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母浸粉1％，琼脂1.5％)上，在30～35℃下培养3～5天，挑取单菌落接种于YPD固体培养基斜面试管，待菌种长满整个试管斜面后转接一次，备用；从斜面培养基上挑取菌种，接种于YPD液体培养基中摇匀，置于振荡培养箱中摇床发酵培养，30～35℃摇床培养20～24h，转速为130～150r/min，得到一级种子液；将一级种子液按接种量5％～10％(v/v)再次转接入新的YPD培养基进行二次活化，静置18-24h后获得二级种子液；将二级种子液按照接种量5％～10％(v/v)分别单独接入到发酵罐培养基中，30～35℃培养20～24h，转速为130～150r/min，获得产朊假丝酵母BFC190301发酵液。将产朊假丝酵母BFC190301发酵液在4℃条件下，8000r/min离心10min制得菌泥，按1：2～4(m/v按g/mL计)向菌泥中加入脱脂牛奶，在涡旋振荡器上震荡混匀，进行真空冷冻干燥，制得产朊假丝酵母BFC190301冻干粉，经检测其有效活菌数≥1×1010CFU/g。
酿酒酵母由安琪酵母股份有限公司提供，活菌数≥2×1010CFU/g。
将干酪乳杆菌BFC190201冻干粉、植物乳杆菌P-8冻干粉、产朊假丝酵母菌冻干粉和酿酒酵母菌冻干粉按照质量比2：1：8：6的比例混合，并以葡萄糖、蔗糖、果糖、糊精等有机载体中的任一种或两种或几种混合作为稀释载体，按照冻干粉混合物与稀释载体质量比为1：58混合获得复合菌剂。最终的复合菌剂中干酪乳杆菌BFC190201、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母的活菌数分别≥1×109CFU/g，≥1×109CFU/g，≥1×108CFU/g，≥1×108CFU/g。
实施例3含甜叶菊渣发酵饲料的加工
(1)甜叶菊渣好氧发酵预处理
将甜叶菊渣(DM＝30％)、糖蜜和尿素按照质量比为93:6:1的比例充分混合，接种黑曲霉，其孢子含量均≥150亿/克，按甜叶菊渣质量的0.03％接种放入水泥池或发酵槽中，好氧发酵发酵42h，温度升至40℃翻抛，保证发酵温度低于40℃。随着发酵时间的延长，真蛋白含量增加，粗纤维含量减少，具体见表2，发酵24h、36h和48h，真蛋白含量分别增加13.77％、36.96％和51.12％。
表2
| 真蛋白％ | 粗纤维％ | |
| 发酵前 | 15.61 | 18.32 |
| 发酵24h | 17.76 | 17.54 |
| 发酵36h | 21.38 | 15.55 |
| 发酵48h | 23.59 | 12.84 |
其中，黑曲霉由山东康源生物科技有限公司提供，孢子含量均≥150亿/克，在培养物制备过程中的接种量优选为0.01％-0.05％。该菌株具有很强的产酶能力，包括纤维素酶、β-葡聚糖酶、木聚糖酶、葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶、植酸酶和果胶酶。发酵48h后，经测量，甜叶菊渣中的酶的组成和活性如表3。
表3发酵48h甜叶菊渣中的酶的组成和活性
(2)甜叶菊渣发酵饲料原料
黑曲霉预处理后的甜叶菊渣，添加0.1％的实施例2中制备的方法按干酪乳杆菌BFC190201冻干粉、植物乳杆菌P-8冻干粉、产朊假丝酵母菌冻干粉和酿酒酵母菌冻干粉按照质量比2:1:8:6配制，加入载体：葡萄糖，冻干粉的总和与葡萄糖质量比1:58制备的复合菌剂，25～30℃呼吸袋发酵5～7天，制得发酵甜叶菊渣甜叶菊渣发酵饲料原料。
对发酵前后甜叶菊渣(即未做任何处理的甜叶菊渣)中成分进行测量，结果如表4所示，经好氧和厌氧两阶段发酵后，甜叶菊渣水分含量降低，降至适宜有益微生物发酵的60％左右。在鲜基(未做风干处理)基础上，粗蛋白和酸溶蛋白含量均显著提高。如表5所示，在干物质基础上比较，发酵前后甜叶菊渣中的粗灰分、钙、磷含量变化不显著，但粗蛋白和酸溶蛋白含量分别提高46.90％和345.79％，粗纤维、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)分别降低19.11％、13.36％和5.57％。说明，发酵大大提高了甜叶菊渣中营养物质的利用率。
表4发酵前后甜叶菊渣中成分的变化(鲜基基础)
表5发酵前后甜叶菊渣中成分的变化(干物质基础)
| 指标 | 发酵前甜叶菊渣 | 发酵甜叶菊渣 |
| 干物质(DM)(％) | 28.30 | 39.49 |
| 粗灰分(％) | 7.46 | 7.63 |
| 粗蛋白(％) | 19.58 | 20.04 |
| 酸溶蛋白(g/100g) | 0.32 | 1.42 |
| 粗纤维(％) | 23.00 | 18.61 |
| 中性洗涤纤维(％) | 54.20 | 46.96 |
| 酸性洗涤纤维(％) | 26.22 | 24.76 |
| 钙(％) | 2.08 | 2.13 |
| 总磷(％) | 0.14 | 0.14 |
| 粗脂肪(％) | 2.19 | 2.24 |
实施例4-8含甜叶菊渣的菌酶协同发酵饲料
按照表6所示的质量份数称取好氧发酵48h的甜叶菊渣即黑曲霉预发酵后的甜叶菊渣(38-43)、玉米(6-12)、豆粕(4.5-12)、DDGS(12-20)、米糠粕(11-20)、麸皮(0-15)、石粉(0-8)、30％甜菜碱(0-0.3)、磷酸氢钙(0-0.7)、氯化钠(0-0.5)和葡萄糖(1-2)，加入实施例3中所用的复合菌剂。复合菌剂的添加量均为按照上述各种原料的混合物为基础添加0.05-0.1％。
表6含甜叶菊渣发酵饲料配方
充分混匀后，装入呼吸袋中密封，于25～30℃条件下发酵5～7天，即得发酵饲料。发酵后的饲料经过检测，获得理化指标如表7所示。
表7含甜叶菊渣发酵后饲料理化指标
实施例9甜叶菊渣菌酶协同发酵饲料在蛋鸡上的应用效果
选择367日龄海兰褐蛋鸡，将12000只蛋鸡随机分成3个处理组，每组4000只，每组设5个重复，采用四层阶梯笼养，自由采食，自由饮水，按免疫程序正常接种免疫，定期消毒。试验Ⅰ组为对照组，饲喂基础饲粮，Ⅱ、Ⅲ组分别在基础饲粮中添加3％、5％的按实施例8制备的甜叶菊渣发酵饲料。根据蛋鸡营养需要调整配方，使各组日粮配方营养组成基本一致。
1甜叶菊渣发酵饲料对蛋鸡生产性能的影响
结果如表8，可知，试验第45天，日粮中添加质量分数为3％和5％甜叶菊渣发酵饲料在产蛋率和日采食量有升高的趋势，料蛋比显著降低(P<0.05)，蛋重显著升高(P<0.05)，蛋破损率分别降低36.67％和61.05％，死淘率有分别降低6.06％和9.68％。
表8对蛋鸡生产性能的影响
注：同行指标相比，*表示差异显著(P＜0.05)；**表示差异极显著(P＜0.01)，下表同。
2甜叶菊渣酵饲料对蛋鸡舍内空气质量的影响
如表9所示，与对照期相比，试验期第35d，二氧化碳浓度显著提高(P<0.05)；试验期第15d和35d，一氧化碳、一氧化二氮、氨气、甲烷浓度分别极显著降低(P<0.01)；与试验第15d相比，试验第35d一氧化碳、一氧化二氮、氨气、甲烷浓度分别极显著性降低(P<0.01)。由此可见，甜叶菊渣发酵饲料具有改善蛋鸡舍内空气品质的效果。
表9蛋鸡舍内气体浓度
注：同列数据肩标小写字母不同表示差异显著(P＜0.05)，大写字母不同表示差异极显著(P＜0.01)，小写字母相同表示差异不显著(P＞0.05)。
实施例10甜叶菊渣菌酶协同发酵饲料在育肥猪上的应用效果
选择320头80kg左右的健康状况良好的肥育猪(杜×长×大)，随机分为4组，每组4栏，每栏20头猪。试验Ⅰ组为对照组，饲喂基础饲粮，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别在基础饲粮中添加5％、10％和15％的按实施例4制备的甜叶菊渣发酵饲料(30％水分)。根据生长育肥猪营养需要调整配方，使各组日粮配方营养组成基本一致。试验预试期3d，正式期4周。4组猪除饲喂的饲料不同外，其他饲养条件和管理方式均保持一致。试验期内，采取人工喂料，猪自由采食和饮水。以栏为单位记录肥育猪每周的采食量。在正试第1天和试验第4周早上空腹称重，以栏为单位计算平均体重。试验结束时，每组每栏圈随机选取1头猪进行屠宰，测定屠宰率和肉质。
1对育肥猪生产性能的影响
测量结果如表10所示，日粮中添加5％、10％和15％的甜叶菊渣发酵饲料均会提高肥育猪的干物质采食量，增加平均日增重，降低料重比，其中添加10％的试验组日增重最高，料重比最低。
表10对育肥猪生产性能的影响
注：同一行的不同字母表示在P＝0.05的水平上差异显著。
2对屠宰性能的影响
测量结果如表11所示，肥育猪日粮中添加5％、10％和15％的甜叶菊渣发酵饲料均会提高屠宰率和瘦肉率，降低背膘厚度。添加量为10％和15％时，屠宰率、瘦肉率和背膘厚度与对照组差异显著，但10％和15％添加量的试验组之间差异不显著。因此，优选10％添加量。
表11对屠宰性能的影响
注：同一行的不同字母表示在P＝0.05的水平上差异显著。
3对健康状况的影响
发病率是指(每组发病猪头数/每组饲养总头数)×100％，结果如表12所示，表明肥育猪日粮中添加5％、10％和15％的甜叶菊渣发酵饲料均会提高免疫力，降低发病率。日粮中甜叶菊渣发酵饲料的添加量约多，猪的发病率越低。
表12对健康状况的影响
实施例11甜叶菊渣发酵饲料在奶牛上的应用效果
选择100头年龄、胎次、泌乳量和泌乳天数相近的健康状况良好的高产荷斯坦泌乳奶牛，随机分为4组，每组25头。试验Ⅰ组为对照组，饲喂基础饲粮，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础饲粮中添加10％、15％和20％的实施例8制备的甜叶菊渣发酵饲料(30％水分)。预试期1周，正试期7周。
对于干物质、产奶量、体细胞数和乳房炎的检测结果如表13所示，表明本发明的发酵饲料显著提高了奶牛的干物质采食量和产奶量，降低了牛奶中的体细胞数，并降低了奶牛乳房炎的发病率，使用量占日粮10％时效果最好。
表13对奶牛生产性能的影响
注：同一行的不同字母表示在P＝0.05的水平上差异显著。
序列表
<110> 博益德（北京）生物科技有限公司
<120> 一种用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂及其制备方法和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1393
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tacgccaccg gcttcgggtg ttacaaactc tcatggtgtg acgggcggtg tgtacaaggc 60
ccgggaacgt attcaccgcg gcgtgctgat ccgcgattac tagcgattcc gacttcgtgt 120
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agcaccgttc atc 1393
Claims (12)
1.一种用于甜叶菊渣发酵的干酪乳杆菌，其特征在于，该菌株分离自甜叶菊渣，保藏号为CGMCC No.18913，保藏日期为：2019年11月7日。
2.一种用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂，其特征在于，其包括干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母，其中干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母的菌株保藏编号为分别为CGMCC No.18913、CGMCC No.5468、CGMCC No.18917。
3.根据权利要求2所述的复合菌剂，其特征在于，所述干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母的活菌数分别≥1×109CFU/g，≥1×109CFU/g，≥1×108CFU/g和≥1×108CFU/g。
4.根据权利要求2所述的复合菌剂，其特征在于，所述干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌和酿酒酵母为冻干粉，按照质量比1～3：1～3：5～10：5～10的比例混合。
5.一种根据权利要求2-4中任一项所述的用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂的制备方法，其特征在于，其包括干酪乳杆菌冻干粉、植物乳杆菌P-8冻干粉、产朊假丝酵母菌冻干粉和酿酒酵母各菌株冻干粉的制备，将干酪乳杆菌BFC190201冻干粉、植物乳杆菌P-8冻干粉、产朊假丝酵母菌冻干粉和酿酒酵母菌冻干粉按照质量比1～3：1～3：5～10：5～10的比例混合均匀，并以冻干粉混合物与有机载体按质量比为1：50～114混合，获得复合菌剂，所述有机载体为葡萄糖、蔗糖、果糖或糊精中的任一种或多种混合。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述干酪乳杆菌冻干粉、植物乳杆菌P-8冻干粉、产朊假丝酵母菌冻干粉的制备采用如下方法：将干酪乳杆菌、植物乳杆菌P-8、产朊假丝酵母菌分别发酵获得发酵液，将发酵液离心制得菌泥，按质量与体积g/mL的比为1：2～4计向菌泥中加入脱脂牛奶，混匀后进行真空冷冻干燥，制得冻干粉。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，干酪乳杆菌冻干粉中有效活菌数≥1×1012CFU/g；
植物乳杆菌P-8冻干粉中有效活菌数≥1×1012CFU/g；
产朊假丝酵母菌冻干粉中有效活菌数≥1×1010CFU/g。
8.一种根据权利要求1-3中任一项的用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂在制备发酵饲料中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述用于甜叶菊渣发酵的菌剂在对黑曲霉发酵后甜叶菊渣进行发酵的用量为质量百分比的0.05～0.1％。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述黑曲霉发酵后甜叶菊渣为甜叶菊渣、糖蜜和尿素按照质量比为93:6:1的比例充分混合，按甜叶菊渣质量的0.01％～0.05％接种黑曲霉后，在发酵温度25℃～40℃进行好氧发酵36～48h。
11.一种甜叶菊渣发酵饲料原料，其特征在于，使用权利要求1-3中任一项复合菌剂对黑曲霉发酵后甜叶菊渣进行发酵所得。
12.根据权利要求11所述的发酵饲料原料，其特征在于，所述黑曲霉发酵后甜叶菊渣为甜叶菊渣、糖蜜和尿素按照质量比为93:6:1的比例充分混合，按甜叶菊渣质量的0.01％～0.05％接种黑曲霉后，在发酵温度25℃～40℃进行好氧发酵36～48h。
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| CN202010772326.1A CN111718880A (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 一种用于甜叶菊渣发酵的复合菌剂及其制备方法和应用 |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115968982A (zh) * | 2023-02-15 | 2023-04-18 | 中国科学院亚热带农业生态研究所 | 一种利用甜叶菊渣配制的蛋鸡饲料 |
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2020
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