CN113848332B - 一种血栓弹力图检测试剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种血栓弹力图检测试剂及其制备方法和应用。所述血栓弹力图检测试剂包括：激活剂、磷脂、稳定剂和无机盐，所述激活剂包括高岭土、硅藻土或白陶土中的任意一种或至少两种的组合，所述磷脂包括脑磷脂，所述稳定剂包括蔗糖。本发明的血栓弹力图检测试剂能够有效启动内源性凝血激活途径，从而进行血栓弹力图检测，还能有效避免血栓弹力图检测试剂在长期保存及运输过程中出现失效的问题，此外，本发明的血栓弹力图检测试剂成分简单，易于制备，成本低，具有较高的实用价值和现实意义。
Description
本申请要求申请号为2021110941425专利申请的优先权(在先申请的申请日为2021年9月17日，发明名称为一种血栓弹力图检测试剂及其制备方法和应用)。
技术领域
本发明属于临床血栓与止血诊断技术领域，涉及一种血栓弹力图检测试剂及其制备方法和应用。
背景技术
人体内的纤溶系统与凝血系统和血小板在正常生理情况下存在一种动态的平衡关系，以保障血液循环的稳定和畅通。纤溶系统的功能是清除沉积于血管上的纤维蛋白，溶解血凝块，维持血流通畅，在防止血栓形成和消除已形成的血栓方面发挥作用。
1948年德国人Harter发明了血栓弹力图(Thrombelastography，TEG)，TEG通过检测少量全血，能够全面反映患者从凝血到纤溶的整个过程中血小板、凝血因子、纤维蛋白原、纤溶系统和其他细胞成分之间的相互作用，其数据准确，操作简便，主要用于对凝血、纤溶全过程及血小板功能进行全面检测，已成为当今围术期监测凝血功能的最重要指标，被广泛用于临床指导术中输血。
TEG监测血凝块的物理特性的原理如下：将样品杯卡在杯槽上，圆柱套在金属探针上，在杯壁与圆柱体之间加入全血标本，杯槽带动样品杯做匀速转动，当血液呈液态状态时，样品杯的来回转动不能带动圆柱体；当血液开始凝固时，杯与圆柱体之间因纤维蛋白和血小板的黏附而产生阻力，杯旋转通过圆柱体带动金属探针同时运动，纤维蛋白-血小板复合物的强度能影响探针运动的幅度；当血凝块回缩或溶解时，圆柱与杯壁间的阻力解除，杯的运动不再传递给探针，通过机电传感器将探针的转动幅度描绘到图形上形成特有的TEG图形。
现有的TEG检测试剂盒主要检测原理一般是根据内源性凝血原理在激活试剂成分中添加高岭土试剂启动内源性凝血激活途径，在空白检测样品杯中加入激活后的全血和氯化钙溶液，通过凝血酶促反应，使可溶性纤维蛋白原转化成纤维蛋白凝块，如CN107561295A公开了一种血栓弹力图普通杯检测试剂盒及其使用方法，所述试剂盒中检测试剂包括组分包括悬浮缓冲液处理得到的激活剂、氯化钙，所述激活剂包括高岭土、木质素盐、磷脂酰胆碱、叠氮钠和甘油等，能够有效解决试剂盒在运输过程中液体易干燥及稳定性低的问题，然而其成分复杂，成本较高。
综上所述，提供一种低成本且具备高稳定性的血栓弹力图检测试剂，测量结果准确可靠，对于临床血栓与止血诊断领域具有重要意义。
发明内容
针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种血栓弹力图检测试剂及其制备方法和应用，所述血栓弹力图检测试剂成分简单，易制备，成本低，且具备高稳定性，能够有效应用于血栓弹力图检测。
为达上述目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种血栓弹力图检测试剂，所述血栓弹力图检测试剂包括激活剂、磷脂、稳定剂和无机盐，所述激活剂包括高岭土、硅藻土或白陶土中的任意一种或至少两种的组合，所述磷脂包括脑磷脂，所述稳定剂包括蔗糖。
本发明的血栓弹力图检测试剂中激活剂和磷脂相互配合，能够有效启动内源性凝血激活途径，从而进行血栓弹力图检测，稳定剂包括蔗糖能够显著提高血栓弹力图检测试剂的稳定性，能有效避免血栓弹力图检测试剂在长期保存及运输过程中出现失效的问题。
优选地，所述无机盐包括氯化钠。
优选地，所述脑磷脂包括兔脑磷脂。
优选地，所述血栓弹力图检测试剂中还包括防腐剂。
优选地，所述防腐剂包括Proclin 300。
优选地，所述血栓弹力图检测试剂中还包括水。
优选地，所述血栓弹力图检测试剂中所述激活剂的质量百分比为0.02％-0.05％，包括但不限于0.022％、0.024％、0.026％、0.028％、0.03％、0.032％、0.035％、0.038％、0.04％、0.042％、0.045％、0.046％、0.048％或0.049％。
优选地，所述血栓弹力图检测试剂中所述磷脂的质量百分比为0.5％-1.5％，包括但不限于0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％或1.4％。
优选地，所述血栓弹力图检测试剂中所述稳定剂的质量百分比为1％-10％，包括但不限于2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％或9％。
优选地，所述血栓弹力图检测试剂中所述无机盐的质量百分比为0.4％-0.9％，包括但不限于0.42％、0.45％、0.5％、0.6％、0.7％、0.75％、0.8％、0.82％、0.85％、0.86％或0.89％。
优选地，所述血栓弹力图检测试剂中所述防腐剂的质量百分比为0.02％-0.08％，包括但不限于0.03％、0.04％、0.05％、0.06％或0.07％。
优选地，所述血栓弹力图检测试剂中所述水的质量百分比为87.47％-98.06％，包括但不限于88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％或97％。
优选地，所述血栓弹力图检测试剂按质量百分比计包括激活剂0.02％-0.05％、磷脂0.5％-1.5％、稳定剂1％-10％、无机盐0.4％-0.9％、防腐剂0.02％-0.08％和水87.47％-98.06％，所述激活剂包括高岭土、硅藻土或白陶土中的任意一种或至少两种的组合，所述磷脂包括脑磷脂，所述稳定剂包括蔗糖。
优选地，所述血栓弹力图检测试剂按质量百分比计包括高岭土0.02％-0.05％、兔脑磷脂0.5％-1.5％、蔗糖1％-10％、氯化钠0.4％-0.9％、Proclin300 0.02％-0.08％和水87.47％-98.06％。
本发明的血栓弹力图检测试剂不仅具备优良的性能，而且成分简单，易于制备，成本低，具有较高的实用价值和现实意义。
第二方面，本发明提供一种第一方面所述的血栓弹力图检测试剂的制备方法，所述制备方法包括：
按比例将所述激活剂、磷脂、稳定剂、无机盐与水混合，得到所述血栓弹力图检测试剂。
第三方面，本发明提供第一方面所述的血栓弹力图检测试剂在制备血栓弹力图检测产品中的应用。
第四方面，本发明提供一种血栓弹力图检测试剂盒，所述血栓弹力图检测试剂盒包括第一方面所述的血栓弹力图检测试剂。
优选地，所述血栓弹力图检测试剂盒还包括氯化钙。
优选地，所述血栓弹力图检测试剂盒还包括普通杯。
优选地，所述氯化钙的浓度为0.2mol/L。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明的血栓弹力图检测试剂中激活剂和磷脂相互配合，能够有效启动内源性凝血激活途径，从而进行血栓弹力图检测，稳定剂包括蔗糖能够显著提高血栓弹力图检测试剂的稳定性，能有效避免血栓弹力图检测试剂在长期保存及运输过程中出现失效的问题；
(2)本发明的血栓弹力图检测试剂不仅具备优良的性能，而且成分简单，易于制备，成本低，具有较高的实用价值和现实意义。
具体实施方式
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
本发明实施例中，高岭土、硅藻土、磷脂酰乙醇胺均购买于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，兔脑磷脂购买于北京博尔西科技有限公司。
实施例1
本实施例提供一种血栓弹力图检测试剂，所述血栓弹力图检测试剂按质量百分比计为高岭土0.05％、兔脑磷脂1.27％、蔗糖5％、氯化钠0.9％、Proclin 300 0.05％和水92.73％。
所述血栓弹力图检测试剂的制备方法包括以下步骤：
(1)将氯化钠加入纯水中配制成氯化钠溶液；
(2)取高岭土加入所述氯化钠溶液中，制备高岭土储备液；
(3)取兔脑磷脂加入所述氯化钠溶液中，制备兔脑磷脂储备液，配制后将兔脑磷脂储备液放置于乳化机上乳化30min；
(4)将所述高岭土储备液和乳化后兔脑磷脂储备液按体积比为1:1混合后加入蔗糖和防腐剂Proclin 300，混合均匀，得到所述血栓弹力图检测试剂。
实施例2
本实施例提供一种血栓弹力图检测试剂，所述血栓弹力图检测试剂按质量百分比计为高岭土0.02％、兔脑磷脂0.5％、蔗糖1％、氯化钠0.4％、Proclin 300 0.02％和水98.06％。
所述血栓弹力图检测试剂的制备方法与实施例1相同。
实施例3
本实施例提供一种血栓弹力图检测试剂，所述血栓弹力图检测试剂按质量百分比计为高岭土0.05％、兔脑磷脂1.5％、蔗糖10％、氯化钠0.9％、Proclin 300 0.08％和水87.47％。
所述血栓弹力图检测试剂的制备方法与实施例1相同。
实施例4
本实施例提供一种血栓弹力图检测试剂，所述血栓弹力图检测试剂按质量百分比计为硅藻土0.05％、磷脂酰乙醇胺1.5％、蔗糖10％、氯化钠0.9％、Proclin300 0.08％和水87.47％。
所述血栓弹力图检测试剂的制备方法与实施例1相同。
对比例1
本对比例提供一种血栓弹力图检测试剂，所述血栓弹力图检测试剂按质量百分比计为高岭土0.05％、兔脑磷脂1.27％、氯化钠0.9％、Proclin 300 0.05％和水97.73％。
所述血栓弹力图检测试剂的制备方法与实施例1相同。
应用例1
将氯化钙加入纯水中配制成0.2mol/L氯化钙溶液，取实施例1制备的血栓弹力图检测试剂与所述0.2mol/L氯化钙溶液和普通杯共同装盒，制备血栓弹力图检测试剂盒。
应用例2
将氯化钙加入纯水中配制成0.2mol/L氯化钙溶液，取实施例2制备的血栓弹力图检测试剂与所述0.2mol/L氯化钙溶液和普通杯共同装盒，制备血栓弹力图检测试剂盒。
应用例3
将氯化钙加入纯水中配制成0.2mol/L氯化钙溶液，取实施例3制备的血栓弹力图检测试剂与所述0.2mol/L氯化钙溶液和普通杯共同装盒，制备血栓弹力图检测试剂盒。
应用例4
将氯化钙加入纯水中配制成0.2mol/L氯化钙溶液，取实施例4制备的血栓弹力图检测试剂与所述0.2mol/L氯化钙溶液和普通杯共同装盒，制备血栓弹力图检测试剂盒。
应用对比例1
将氯化钙加入纯水中配制成0.2mol/L氯化钙溶液，取对比例1制备的血栓弹力图检测试剂与所述0.2mol/L氯化钙溶液和普通杯共同装盒，制备血栓弹力图检测试剂盒。
应用对比例2
现有技术中的一种血栓弹力图普通杯检测试剂盒，试剂厂家为鼎润血栓弹力图试剂。
试验例1
本试验例分别利用应用例1-4和应用对比例1-2中的检测试剂盒对相同来源的血液样本进行检测，检测过程包括以下步骤：
(1)打开血栓弹力图仪TEG 5000(厂家为美国HAEMONETICS/血液技术)，装载样品杯。
(2)复温血栓弹力图检测试剂至25℃；
(3)取1mL混合均匀的枸橼酸钠抗凝全血与20μL血栓弹力图检测试剂充分混合后，得到混合血液，先加20μL氯化钙于样品杯中，再加340μL混合血液于样品杯中；
(4)立即将杯架推上并把控制杆转到测试位置；
(5)使用软件开始检测。
结果如表1所示，表1为应用例1-4及应用对比例1-2制备的血栓弹力图检测试剂盒的检测结果。
表1
由表1可知，本发明的血栓弹力图检测试剂盒的检测结果与市售血栓弹力图检测试剂盒的检测结果相近，表明本发明的血栓弹力图检测试剂能够有效应用于血栓弹力图检测，且与现有技术中血栓弹力图检测试剂相比，成分更简单，成本更低。
试验例2
本试验例分析应用例1和应用对比例1-2中的检测试剂盒中试剂的稳定性。
稳定性分析实验过程如下所示：
(1)将应用例1和应用对比例1中血栓弹力图检测试剂及应用对比例2中鼎润血栓弹力图试剂置于50℃进行加速老化2周；
(2)分别取在50℃加速老化的第0、7、11、14天取试剂对同一个批次的质控血浆进行测试。
结果如表2所示，表2为应用例1和应用对比例1-2血栓弹力图检测试剂盒的稳定性检测结果。
表2
由表2可知，应用例1中的血栓弹力图检测试剂含有稳定剂蔗糖，在50℃条件下加速老化条件下14天后，测试同一样本偏差依然较小，与应用对比例2中市售检测试剂相当，而应用对比例1中的血栓弹力图检测试剂未添加蔗糖，在50℃条件下加速老化14天后，测试同一样本偏差较大，说明其稳定性较差，表明本发明精简血栓弹力图检测试剂的配方，并创造性采用蔗糖单一组分为稳定剂，在降低成本的同时，并不影响血栓弹力图检测试剂的品质，对于血栓弹力图检测试剂的推广应用具有重要意义。
综上所述，本发明的血栓弹力图检测试剂中激活剂和磷脂相互配合，能够有效启动内源性凝血激活途径，从而进行血栓弹力图检测，稳定剂包括蔗糖能够显著提高血栓弹力图检测试剂的稳定性，能有效避免血栓弹力图检测试剂在长期保存及运输过程中出现失效的问题，此外，本发明的血栓弹力图检测试剂不仅具备优良的性能，而且成分简单，易于制备，成本低，具有较高的实用价值和现实意义。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (17)
1.一种血栓弹力图检测试剂，其特征在于，所述血栓弹力图检测试剂包括：激活剂、磷脂、稳定剂和无机盐；
所述激活剂包括高岭土、硅藻土或白陶土中的任意一种或至少两种的组合，所述激活剂的质量百分比为0.02％-0.05％；
所述磷脂包括脑磷脂，所述磷脂的质量百分比为0.5％-1.5％；
所述稳定剂为蔗糖，所述稳定剂的质量百分比为1％-10％。
2.根据权利要求1所述的血栓弹力图检测试剂，其特征在于，所述无机盐包括氯化钠。
3.根据权利要求1所述的血栓弹力图检测试剂，其特征在于，所述脑磷脂包括兔脑磷脂。
4.根据权利要求1所述的血栓弹力图检测试剂，其特征在于，所述血栓弹力图检测试剂中还包括防腐剂。
5.根据权利要求4所述的血栓弹力图检测试剂，其特征在于，所述防腐剂包括Proclin300。
6.根据权利要求1所述的血栓弹力图检测试剂，其特征在于，所述血栓弹力图检测试剂中还包括水。
7.根据权利要求4所述的血栓弹力图检测试剂，其特征在于，所述血栓弹力图检测试剂中所述防腐剂的质量百分比为0.02％-0.08％。
8.根据权利要求6所述的血栓弹力图检测试剂，其特征在于，所述血栓弹力图检测试剂中所述水的质量百分比为87.47％-98.06％。
9.根据权利要求1所述的血栓弹力图检测试剂，其特征在于，所述血栓弹力图检测试剂中所述无机盐的质量百分比为0.4％-0.9％。
10.根据权利要求1所述的血栓弹力图检测试剂，其特征在于，所述血栓弹力图检测试剂按质量百分比计包括激活剂0.02％-0.05％、磷脂0.5％-1.5％、稳定剂1％-10％、无机盐0.4％-0.9％、防腐剂0.02％-0.08％和水87.47％-98.06％；
所述激活剂包括高岭土、硅藻土或白陶土中的任意一种或至少两种的组合，所述磷脂包括脑磷脂，所述稳定剂为蔗糖。
11.根据权利要求1所述的血栓弹力图检测试剂，其特征在于，所述血栓弹力图检测试剂按质量百分比计包括高岭土0.02％-0.05％、兔脑磷脂0.5％-1.5％、蔗糖1％-10％、氯化钠0.4％-0.9％、Proclin 300 0.02％-0.08％和水87.47％-98.06％。
12.一种如权利要求1-11任一项所述的血栓弹力图检测试剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
按比例将所述激活剂、磷脂、稳定剂、无机盐与水混合，得到所述血栓弹力图检测试剂。
13.如权利要求1-11任一项所述的血栓弹力图检测试剂在制备血栓弹力图检测产品中的应用。
14.一种血栓弹力图检测试剂盒，其特征在于，所述血栓弹力图检测试剂盒包括权利要求1-11任一项所述的血栓弹力图检测试剂。
15.根据权利要求14所述的血栓弹力图检测试剂盒，其特征在于，所述血栓弹力图检测试剂盒还包括氯化钙。
16.根据权利要求14所述的血栓弹力图检测试剂盒，其特征在于，所述血栓弹力图检测试剂盒还包括普通杯。
17.根据权利要求15所述的血栓弹力图检测试剂盒，其特征在于，所述氯化钙的浓度为0.2mol/L。
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