CN109709292A - 一种肝素检测试剂盒及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种肝素检测试剂盒及其应用，涉及抗凝效果检测技术领域，具体而言，该肝素检测试剂盒包括有肝素检测试剂，肝素检测试剂包括有肝素酶I，肝素酶I为液体酶制剂，长期保存需要进行冻干后固体保存，而在肝素酶I中加入一定量的无水氯化钙、丙三醇以及D‑海藻糖能够作为保护剂使检测检测试剂长期稳定地存在，达到可以长期保存的要求。该肝素检测试剂盒能够快速、特异地中和肝素的抗凝血活性，而不影凝血的其他血液成分，以更加精准快速地评估肝素钠盐的残留情况，评估肝素钠盐的抗凝效果，为临床用药提供依据。

Description

一种肝素检测试剂盒及其应用

技术领域

本发明涉及抗凝效果检测技术领域，具体而言，涉及一种肝素检测试剂盒及其应用。

背景技术

肝素钠盐是一种抗凝剂，是需要迅速达到抗凝作用的首选药物。目前临床上可用于外科预防血栓形成以及妊娠者的抗凝治疗。

对于急性心肌梗死患者，可用肝素预防病人发生静脉栓塞，并可预防大块的前壁透壁性心肌梗死病人发生动脉栓塞，用于心脏、手术和肾脏透析时维持血液体外循环畅通。治疗各种原因引起的弥散性血管内凝血(DIC)，也用于治疗肾小球肾炎、肾病综合征、类风湿性关节炎等。

目前，临床上对肝素抗凝效果评价主要用APTT(活化部分凝血酶时间)来评估，血液中有肝素钠盐物质存在将导致APTT延长，但易受先天性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ降低，纤维蛋白原缺乏，纤溶活力增强或其他抗凝物质都会影响检测结果的准确性。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种肝素检测试剂盒，该试剂盒能够快速、特异地中和肝素的抗凝血活性，而不影凝血的其他血液成分，以更加精准快速地评估肝素钠盐的残留情况，评估肝素钠盐的抗凝效果，为临床用药提供依据。

本发明的第二目的在于提供一种肝素检测试剂的制备方法，其能够有效快速地制备出能够精准检测肝素抗凝效果的肝素检测试剂。

本发明的第三目的在于提供一种活化凝血检测试剂盒，其包括有能够有效快速地制备出能够精准检测肝素抗凝效果的肝素检测试剂。

本发明的第四目的在于提供上述肝素检测试剂在血栓弹力图仪检测或凝血检测中的应用，其能够快速精准检测肝素抗凝效果。

本发明是这样实现的：

本发明实施例提供一种肝素检测试剂盒，其包括有肝素检测试剂，该肝素检测试剂包括有肝素酶I、无水氯化钙、丙三醇以及D-海藻糖，其中肝素酶I为液态。

肝素酶I为液体酶制剂，长期保存需要进行冻干后固体保存，而本专利发明人通过长期的创造性劳动，将无水氯化钙、丙三醇以及D-海藻糖与肝素酶I结合，使肝素酶I能够长期稳定的以液体的形式保存，简化了操作过程，加快实验进度，提高检测效率，同时也降低了运输以及保存成本，实用性强。

具体地，在肝素检测试剂中，肝素酶I的浓度为60％-80％(5IU/ml-10IU/ml)、无水氯化钙的浓度为0.05％-0.4％、丙三醇的浓度为0.2％-0.8％以及D-海藻糖的浓度为0.2％-0.8％。

本发明实施例还提供了一种肝素检测试剂的制备方法，其包括有以下步骤：

将肝素酶I、无水氯化钙、丙三醇以及D-海藻糖混合。

具体地，肝素酶I的浓度为60％-80％(5IU/ml-10IU/ml)、无水氯化钙的浓度为0.05％-0.4％、丙三醇的浓度为0.2％-0.8％以及D-海藻糖的浓度为0.2％-0.8％。

进一步地，本发明实施例还提供了一种活化凝血检测试剂盒，其包括有肝素检测试剂以及活化凝血检测试剂。

具体地，肝素检测试剂包括有肝素酶I、无水氯化钙、丙三醇以及D-海藻糖，其中，肝素酶I为液态。

该肝素检测试剂中组分的配比和浓度同上，在此不在赘述。

本发明实施例还提供上述肝素检测试剂盒或上述活化凝血检测试剂盒在血栓弹力图仪检测或凝血检测中的应用。

具体地，血栓弹力图仪(thromboela-stogram,TEG)检测为一种从血小板聚集、凝血、纤溶等整个动态过程来监测凝血过程的分析仪，用于监测和分析血样的凝结状态。

其原理是基于凝血过程的最终结果为形成血凝块,而血凝块的物理特性(血凝块强度和稳定性)决定其是否具有正常凝血功能。

R值为血栓弹力图仪的检测参数，R为最初的纤维蛋白的形成的时间，R值延长代表使用抗凝剂，凝血因子缺乏；R值缩短：血液呈高凝状态。

在本发明实施例中，血栓弹力图仪检测包括第一通道检测和第二通道检测：

第一通道检测为检测活化凝血检测试剂诱导后的待测样品，该检测为普通杯检测，测得R_普通杯；

第二通道检测为将活化凝血检测试剂诱导后的待测样品与上述肝素检测试剂盒的肝素检测试剂或上述活化凝血检测试剂盒中的肝素检测试剂混合后检测，该检测为肝素酶杯检测，测得R_肝素酶杯；

然后，根据测得的R_普通杯和R_肝素酶杯判断肝素类药物对凝血的影响。

具体地，在判断肝素类药物对凝血影响过程中：

当|R_普通杯﹣R_肝素酶杯︱≤1min，则判断被检血样中不受肝素类物质影响；

当R_肝素酶杯﹤R_普通杯，且R_普通杯﹣R_肝素酶杯≥1min，则判断待测样品受肝素类物质影响。

进一步地，上述凝血检测为活化部分凝血酶时间检测。

本发明具有以下有益效果：

本发明实施例提供了一种肝素检测试剂盒及其制备方法，该肝素检测试剂盒包括有肝素检测试剂，肝素检测试剂包括有肝素酶I，肝素酶I为液体酶制剂，长期保存需要进行冻干后固体保存，而在肝素酶I中加入一定量的无水氯化钙、丙三醇以及D-海藻糖能够作为保护剂使检测检测试剂长期稳定地存在，达到可以长期保存的要求。

该肝素检测试剂盒能够快速、特异地中和肝素的抗凝血活性，而不影凝血的其他血液成分，以更加精准快速地评估肝素钠盐的残留情况，评估肝素钠盐的抗凝效果，为临床用药提供依据。

本发明实施例还提供了一种活化凝血检测试剂盒及其应用，该活化凝血检测试剂盒包括有能够快速、特异地中和肝素的抗凝血活性，而不影凝血的其他血液成分。而将该活化凝血检测试剂盒应用于血栓弹力检测或凝血检测能够更加精准有效地检测肝素钠盐的残留情况，以评估肝素钠盐的抗凝效果。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供一种肝素检测试剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

将该肝素检测试剂包括：肝素酶I、无水氯化钙、丙三醇以及D-海藻糖；其中，肝素酶I为液态。

具体地，肝素酶I的浓度为8IU/mL、无水氯化钙的浓度为0.2％、丙三醇的浓度为0.6％，以及D-海藻糖的浓度为0.6％。

实施例2

本实施例提供一种肝素检测试剂的制备方法，该制备方法与实施例1提供的方法大致相同，区别在于组分的不同，区别如下：

将该肝素检测试剂按照质量百分比包括：肝素酶I、无水氯化钙、丙三醇以及D-海藻糖；其中，肝素酶I为液态。

具体地，肝素酶I的浓度为7IU/mL、无水氯化钙的浓度为0.2％、丙三醇的浓度为0.5％，以及D-海藻糖的浓度为0.6％。

实施例3

本实施例提供一种肝素检测试剂的制备方法，该制备方法与实施例1、2提供的方法大致相同，区别在于组分的不同，区别如下：

将该肝素检测试剂按照质量百分比包括：肝素酶I、无水氯化钙、丙三醇以及D-海藻糖；其中，肝素酶I为液态。

具体地，肝素酶I的浓度为7IU/mL、无水氯化钙的浓度为0.3％、丙三醇的浓度为0.4％，以及D-海藻糖的浓度为0.4％。

实施例4

本实施例提供肝素检测试剂在血栓弹力图仪检测中的应用。

在本实施例中，肝素检测试剂为实施例1提供的制备方法制备的肝素检测试剂。

(1)在血栓弹力图仪的第一通道和第二通道上均装载样品杯，在两个通道的样品杯中均加入0.2mol/L氯化钙溶液20μL；

(2)取1mL未离心的枸橼酸抗凝全血(待测血样)，将待测血样与活化凝血检测试剂(为现有技术，在此不再赘述)混合，上下颠倒5次后静置1min得到待测样品；

(3)吸取340μL步骤(2)中得到的待测样品到步骤(1)的第一通道的样品杯中，按照常规操作步骤点击血栓弹力图仪软件中的“开始”钮开始检测，测得的R值为R_普通杯；

(4)吸取500μL步骤(2)得到的待测样品，加入到含有肝素检测试剂的试剂管中，上下颠倒3次，静置1min后，吸取340μL试剂管中待测样品到步骤(1)的第二通道的样品杯中，按照常规操作步骤点击血栓弹力图仪软件中的“开始”钮开始检测，测得的R值为R_肝素酶杯；

(5)当第一通道检测和第二通道检测均或者需要的参数值后，按照常规操作流程停止检测。

(6)结果判断

当R_肝素酶杯﹤R_普通杯，且R_普通杯﹣R_肝素酶杯≥1min，则判断待测样品受肝素类物质影响，凝血比未被肝素类物质影响前低；

当|R_普通杯﹣R_肝素酶杯︱≤1min，则判断被检血样中不受肝素类物质影响，凝血与未被肝素类物质影响前接近。

对比例1

实施例1提供的肝素检测试剂的性能。

验证实施例1提供的制备方法制备的肝素检测试剂，其保存时间可长达18个月，将本实施例1提供的肝素检测试剂与现有技术提供的肝素检测试剂(乐普肝素检测试剂)相比较。

实验方法

用3～6IU肝素钠置于1mL血液中混合均匀，取500μL肝素化血样置于试剂中混匀，比较中和能力。

通常，加肝素钠后血液不凝固，R值定不了，而采用本发明提供的试剂中和肝素钠后血样还原正常凝血，测试R值为4～11。

本发明实施例提供了一种肝素检测试剂盒，该肝素检测试剂盒包括有肝素检测试剂，肝素检测试剂包括有肝素酶I，肝素酶I为液体酶制剂，长期保存需要进行冻干后固体保存，而在肝素酶I中加入一定量的无水氯化钙、丙三醇以及D-海藻糖能够作为保护剂使检测检测试剂长期稳定地存在，达到可以长期保存的要求。

该肝素检测试剂盒能够快速、特异地中和肝素的抗凝血活性，而不影凝血的其他血液成分，以更加精准快速地评估肝素钠盐的残留情况，评估肝素钠盐的抗凝效果，为临床用药提供依据。

本发明实施例还提供了一种活化凝血检测试剂盒及其应用，该活化凝血检测试剂盒包括有能够快速、特异地中和肝素的抗凝血活性，而不影凝血的其他血液成分。而将该活化凝血检测试剂盒应用于血栓弹力检测或凝血检测能够更加精准有效地检测肝素钠盐的残留情况，以评估肝素钠盐的抗凝效果。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种肝素检测试剂盒，其特征在于，其包括肝素检测试剂，所述肝素检测试剂包括：肝素酶I、无水氯化钙、丙三醇以及D-海藻糖；其中，所述肝素酶I为液态。

2.根据权利要求1所述的肝素检测试剂盒，其特征在于，按照质量百分比，在所述肝素检测试剂中，所述肝素酶I的浓度为5IU/ml-10IU/ml、无水氯化钙的浓度为0.05％-0.4％、丙三醇的浓度为0.2％-0.8％以及D-海藻糖的浓度为0.2％-0.8％。

3.一种肝素检测试剂的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：将肝素酶I、无水氯化钙、丙三醇以及D-海藻糖混合；

所述肝素酶I的浓度为5IU/ml-10IU/ml、无水氯化钙的浓度为0.05％-0.4％、丙三醇的浓度为0.2％-0.8％以及D-海藻糖的浓度为0.2％-0.8％。

4.一种活化凝血检测试剂盒，其特征在于，其包括有肝素检测试剂；

所述肝素检测试剂包括有肝素酶I、无水氯化钙、丙三醇以及D-海藻糖；所述肝素酶I为液态。

5.根据权利要求4所述的活化凝血检测试剂盒，其特征在于，所述肝素酶I的浓度为5IU/ml-10IU/ml、无水氯化钙的浓度为0.05％-0.4％、丙三醇的浓度为0.2％-0.8％以及D-海藻糖的浓度为0.2％-0.8％。

6.根据权利要求4或5所述的活化凝血检测试剂盒，其特征在于，所述活化凝血检测试剂盒包括有活化凝血检测试剂。

7.如权利要求1或2所述的肝素检测试剂盒或权利要求4或5所述的活化凝血检测试剂盒在血栓弹力图仪检测或凝血检测中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述血栓弹力图仪检测中包括第一通道检测和第二通道检测：

第一通道检测为检测活化凝血检测试剂诱导后的待测样品，该检测为普通杯检测，测得R_普通杯；

第二通道检测为将活化凝血检测试剂诱导后的待测样品与权利要求1或2中肝素检测试剂盒的肝素检测试剂或权利要求4或5中活化凝血检测试剂盒中的肝素检测试剂混合后检测，该检测为肝素酶杯检测，测得R_肝素酶杯；

根据R_普通杯和R_肝素酶杯判断肝素类药物对凝血的影响。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，在判断肝素类药物对凝血影响过程中：

当|R_普通杯﹣R_肝素酶杯︱≤1min，则判断被检血样中不受肝素类物质影响；

当R_肝素酶杯﹤R_普通杯，且R_普通杯﹣R_肝素酶杯≥1min，则判断待测样品受肝素类物质影响。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述凝血检测包括活化部分凝血酶时间检测。