CN113846088B - 一种提取质粒dna的试剂盒及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明一种提取质粒DNA的试剂盒及方法。包括：细菌悬浮液，所述细菌悬浮液包括三羟甲基氨基甲烷及EDTA；细胞裂解液，所述细胞裂解液包括强碱及十二烷基硫酸钠；蛋白沉淀液，所述蛋白沉淀液包括盐酸胍、醋酸钾及乙酸；漂洗液，所述漂洗液包括盐酸胍、醋酸钾及三羟甲基氨基甲烷；以及硅羟基磁珠。与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明质粒DNA提取试剂盒，采用羟基磁珠进行DNA吸附，同时采用细菌悬浮液、细胞裂解液、蛋白沉淀液进行悬浮、细胞裂解、蛋白沉淀进行吸附前处理，初步去除蛋白质、大分子DNA等杂质，同时将DNA片段产物从组织中释放，在后期配合使用漂洗液进一步去除杂质，提高了DNA的产量与纯度。
Description
技术领域
本发明属于生物样品提取技术，本发明提供一种提取质粒DNA的试剂盒及方法。
背景技术
质粒是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主复制的较小的DNA分子(即细胞附殖粒、又胞附殖粒)。大部分的质粒虽然都是环状构型，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的叶绿体和线粒体等胞器中。有时有些质粒含有某种抗药基因(如大肠杆菌中就有含有抗四环素基因的质粒)。有一些质粒携带的基因则可以赋予细胞额外的生理代谢能力，乃至于在一些细菌中提高它的致病力。一般来说，质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用，它是基因工程最常见的运载体，质粒还带有某些遗传信息，所以会赋予宿主细胞一些遗传性状。其自我复制能力及所携带的遗传信息在重组DNA操作，如扩增、筛选过程中都是极为有用的，因此快速高效地从细菌细胞中提取和纯化质粒具有重要的意义。
从细菌中提取质粒DNA常采用的方法有煮沸法、碱裂解法等，这些方法通常都是针对少量的大肠杆菌进行提取，耗费时间长、产量低，而且提取过程中使用酚、氯仿等有毒物质，既污染环境又危害人体健康。
当前，磁珠法开始应用于DNA的提纯中，磁珠法操作简单，在微量的样本中也能高效提取全基因组DNA，并且可以在微孔板中以自动化的方式进行，省时省力，同时减少有毒试剂的危害，相比传统的DNA提取方法，具备无法比拟的优势，是未来核酸提取发展的重要方向。但是该方法依旧存在DNA提纯产物产率与纯度难以兼顾，难以适用于现今高通量测序的需求。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种提取质粒DNA的试剂盒及方法。
具体技术方案如下：
一种提取质粒DNA的试剂盒，其不同之处在于，包括：
细菌悬浮液，所述细菌悬浮液包括三羟甲基氨基甲烷及EDTA；
细胞裂解液，所述细胞裂解液包括强碱及十二烷基硫酸钠；
蛋白沉淀液，所述蛋白沉淀液包括盐酸胍、醋酸钾及乙酸；
漂洗液，所述漂洗液包括盐酸胍、醋酸钾及三羟甲基氨基甲烷；
以及
硅羟基磁珠。
进一步，所述细胞裂解液包括下列含量的组分：0.15mol/L～0.25mol/L的NaOH及体积百分比为0.08％～0.12％的十二烷基硫酸钠。
进一步，所述细胞裂解液包括下列含量的组分：0.2mol/L的NaOH及体积百分比为0.01％的十二烷基硫酸钠。
进一步，所述细菌悬浮液包括下列含量的组分：40mmol/L～60mmol/L的三羟甲基氨基甲烷及8mmol/L～12mmol/L EDTA。
进一步，所述细菌悬浮液包括下列含量的组分：50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷及10mmol/L EDTA。
进一步，所述蛋白沉淀液包括下列含量的组分：3.0mol/L～4.5mol的盐酸胍，0.5mol/L～0.8mol/L的醋酸钾及1.5mol/L～2.5mol/L的乙酸。
进一步，所述蛋白沉淀液包括下列含量的组分：4.0mol/L～4.2mol的盐酸胍，0.7mol/L～0.8mol/L的醋酸钾及1.8mol/L～2.2mol/L的乙酸。
进一步，所述漂洗液包括下列含量的组分:2.2mol/L～3.0mol/L的盐酸胍，15.0mmol/L～16.5mmol/L的醋酸钾及2.0mol/L～3.0mol/L的三羟甲基氨基甲烷。
进一步，所述漂洗液包括下列含量的组分:2.3mol/L～2.8mol/L的盐酸胍，16.0mmol/L～16.5mmol/L的醋酸钾及2.2mol/L～2.8mol/L的三羟甲基氨基甲烷。
一种提取质粒DNA的方法，其不同之处在于，包括以下步骤：
步骤S1:去除菌液的上清液后，加入细菌悬浮液；
步骤S2:加入细胞裂解液混匀，静置，得到细菌裂解液；
步骤S3:往所述细菌裂解液中加入蛋白沉淀液混匀，静置后，去除沉淀后的蛋白质，得到预处理液；
步骤S4:往所述预处理液中加入羟基磁珠后进行吸附，去除上清液后得到第一次吸附产物；
步骤S5:将所述第一次吸附产物进行洗涤，得到洗涤产物；
步骤S6:将DNA从羟基磁珠上脱附，然后去除洗涤产物中的羟基磁珠，得到纯化产品；
所述细菌悬浮液三羟甲基氨基甲烷及EDTA；所述细胞裂解液包括强碱及十二烷基硫酸钠；所述蛋白沉淀液包括盐酸胍、醋酸钾及乙酸。
进一步，所述步骤S5包括以下步骤：
步骤S5-1:将所述第一次吸附产物加入漂洗液进行磁珠吸附，去除上清液，得到第一次洗涤产物，
步骤S5-2：将所述第一次洗涤产物加入乙醇溶液后进行磁珠吸附，去除上清液，得到所述洗涤产物；
所述漂洗液包括盐酸胍、醋酸钾及三羟甲基氨基甲烷。
进一步，所述步骤S6中，往所述洗涤产物中加入灭菌水后，将DNA从所述羟基磁珠上脱附。
进一步，所述步骤S1～所述步骤S3中，加入所述菌液、所述细菌悬浮液、所述细胞裂解液以及所述蛋白沉淀液的体积比为：(3.5～4.5)：(0.8～1.2)：(0.8～1.2)：(0.8～1.2)。
进一步，所述硅羟基磁珠的体积与所述预处理液比为1:(20～80)。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)本发明细菌DNA提取试剂盒，采用硅羟基磁珠进行DNA吸附，同时采用细菌悬浮液、细胞裂解液、蛋白沉淀液进行悬浮、细胞裂解、蛋白沉淀进行吸附前处理，初步去除蛋白质、大分子DNA等杂质，同时将DNA片段产物从组织中释放，在后期配合使用漂洗液进一步去除杂质，提高了DNA的产量与纯度。
(2)蛋白沉淀液在进行蛋白沉淀的同时，可以将细胞裂解液中的十二烷基硫酸钠，强碱去除一部分，蛋白沉淀率高，进一步提高纯化DNA的产率以及纯度。
(3)本发明漂洗液可进一步去蛋白与大分子DNA，提高产率与纯度。
(4)本发明采用了上述试剂盒进行了磁珠吸附操作，有效的提高了DNA产率与纯度。
(5)在洗涤时，采用了漂洗液进行第一次洗涤，采用乙醇进行了第二次洗涤，有效降低了产物的杂质含量。
附图说明
图1为本发明实施例9与对比例4提供的DNA胶图；
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本发明。
以下各实施例，仅用于说明本发明，但不止用来限制本发明的范围。基于本发明中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本发明的保护范围。
在本发明实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本发明实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
在本发明实施例中，所使用的原料均为常规市售产品。
实施例1
本实施例提供了一种提取质粒DNA的试剂盒，具体成分如下：
细菌悬浮液、细胞裂解液、蛋白沉淀液、漂洗液以及硅羟基磁珠。
细菌悬浮液包括：50mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)、10mmol/L EDTA。
细胞裂解液包括：0.2M NaOH、1％(v/v)十二烷基硫酸钠(SDS)。
蛋白沉淀液包括：4.1M盐酸胍、0.76M醋酸钾(KAc)、2.1M冰醋酸。
漂洗液包括：2.7M盐酸胍、16.3mM KAc、2.5M Tris。
硅羟基磁珠：洛阳爱森生物科技有限公司，货号：AS316002，固含量：100mg/ml
实施例2
本实施例提供了一种提取质粒DNA的试剂盒，具体成分如下：
细菌悬浮液、细胞裂解液、蛋白沉淀液、漂洗液以及硅羟基磁珠。
细菌悬浮液包括：40mmol/L Tris、8mmol/L EDTA。
细胞裂解液包括：0.15M NaOH、0.08％(v/v)SDS。
蛋白沉淀液包括：3.0M盐酸胍、0.5M KAc、1.5M冰醋酸。
漂洗液包括：2.2M盐酸胍、15.0mM KAc、2.0M Tris。
硅羟基磁珠：洛阳爱森生物科技有限公司，货号：AS316002，固含量：100mg/ml
实施例3
本实施例提供了一种提取质粒DNA的试剂盒，具体成分如下：
细菌悬浮液、细胞裂解液、蛋白沉淀液、漂洗液以及硅羟基磁珠。
细菌悬浮液包括：60mmol/L Tris、12mmol/L EDTA。
细胞裂解液包括：0.25M NaOH、0.12％(v/v)SDS。
蛋白沉淀液包括：3.0M盐酸胍、0.5M KAc、1.5M冰醋酸。
漂洗液包括：2.2M盐酸胍、16.5mM KAc、3.0M Tris。
硅羟基磁珠：洛阳爱森生物科技有限公司，货号：AS316002，固含量：100mg/ml
实施例4～实施例6
实施例4～实施例6提供一种提取质粒DNA的方法，具体操作步骤如下：
(1)将大肠杆菌接到96孔的板里进行培养10h～12h。
(2)将培养好的800ul菌液离心，去除菌液的上清液后，加入200ul细菌悬浮液在漩涡震荡仪上混匀，将细菌悬浮起来。
(3)加入200ul细胞裂解液在平板混匀仪上轻微混匀20s～3min,静置30s～3min，将细胞裂解，得到细菌裂解液。
(4)往细菌裂解液中加入200ul蛋白沉淀液，在平板混匀仪上轻微混匀20s～3min，沉淀蛋白，得到预处理液。
(5)将预处理液进行离心，将400ul的上清转移到一块干净的96孔的板中，加入15ul的硅羟基磁珠，混匀，静置2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min，去除上清，得到第一次吸附产物。
(6)将第一次吸附产物加入200ul～400ul漂洗液混匀2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s～2min，去除上清，得到第一次洗涤产物。
(7)将第一次洗涤产物加入80％(v/v)乙醇溶液后，混匀2混匀2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min，去除上清，得到洗涤产物。
(8)将洗涤产物室温静置5min后，加入40-100ul的灭菌水，混混匀2min，将DNA从羟基磁珠上脱附，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min后去除洗涤产物中的硅羟基磁珠，得到纯化产品。
表1实施例5～实施例8中的试剂盒
| 实施例 | 试剂盒 |
| 实施例4 | 实施例1 |
| 实施例5 | 实施例2 |
| 实施例6 | 实施例3 |
实施例7
本实施例提供一种提取质粒DNA的方法，采用实施例1试剂盒及实施例4相似的操作对细菌DNA进行提取，与实施例5唯一不同的是，无步骤(7)。
实施例8～实施例10
实施例8～实施例10提供一种质粒DNA的方法，具体操作步骤与实施例4大致相同，不同的是，采用如下表所示体积的硅羟基磁珠。
对比例1
本对比例提供了一种提取质粒DNA的试剂盒，具体成分如下：
细菌悬浮液、细胞裂解液、蛋白沉淀液、漂洗液以及硅羟基磁珠。
细菌悬浮液包括：50mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)、10mmol/L EDTA。
细胞裂解液包括：0.2M NaOH、1％(v/v)十二烷基硫酸钠(SDS)。
蛋白沉淀液包括：3M醋酸钾、2M醋酸、75％(v/v)酒精。
漂洗液包括：2.7M盐酸胍、16.3mM KAc、2.5M Tris。
硅羟基磁珠：洛阳爱森生物科技有限公司，货号：AS316002，固含量：100mg/ml
本对比例还提供一种细菌DNA的提取方法，具体操作如下：
(1)将大肠杆菌接到96孔的板里进行培养10h～12h。
(2)将培养好的800ul菌液离心，去除菌液的上清液后，加入200ul细菌悬浮液在漩涡震荡仪上混匀，将细菌悬浮起来。
(3)加入200ul细胞裂解液在平板混匀仪上轻微混匀20s～3min,静置30s～3min，将细胞裂解，得到细菌裂解液。
(4)往细菌裂解液中加入200ul蛋白沉淀液，在平板混匀仪上轻微混匀20s～3min，沉淀蛋白，得到预处理液。
(5)将预处理液进行离心，将400ul的上清转移到一块干净的96孔的板中，加入15ul的硅羟基磁珠，混匀，静置2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min，去除上清，得到第一次吸附产物。
(6)将第一次吸附产物加入200ul～400ul漂洗液混匀2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s～2min，去除上清，得到第一次洗涤产物。
(7)将第一次洗涤产物加入80％(v/v)乙醇溶液后，混匀2混匀2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min，去除上清，得到洗涤产物。
(8)将洗涤产物室温静置5min后，加入40-100ul的灭菌水，混混匀2min，将DNA从羟基磁珠上脱附，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min后去除洗涤产物中的羟基磁珠，得到纯化产品。
对比例2
本对比例提供了一种提取质粒DNA的试剂盒，具体成分如下：
细菌悬浮液、细胞裂解液、蛋白沉淀液、漂洗液以及硅羟基磁珠。
细菌悬浮液包括：50mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)、10mmol/L EDTA。
细胞裂解液包括：0.2M NaOH、1％(v/v)十二烷基硫酸钠(SDS)。
蛋白沉淀液包括：3.0M盐酸胍、0.5M KAc、1.5M冰醋酸。
漂洗液包括：350g/L的异硫氰酸胍、7.5g/L的Tris、7.5g/L的EDTA、体积占比20％的曲拉通X-100、体积占比50％的乙醇。
本对比例还提供一种提取质粒DNA的方法，具体操作如下：
(1)将大肠杆菌接到96孔的板里进行培养10h～12h。
(2)将培养好的800ul菌液离心，去除菌液的上清液后，加入200ul细菌悬浮液在漩涡震荡仪上混匀，将细菌悬浮起来。
(3)加入200ul细胞裂解液在平板混匀仪上轻微混匀20s～3min,静置30s～3min，将细胞裂解，得到细菌裂解液。
(4)往细菌裂解液中加入200ul蛋白沉淀液，在平板混匀仪上轻微混匀20s～3min，沉淀蛋白，得到预处理液。
(5)将预处理液进行离心，将400ul的上清转移到一块干净的96孔的板中，加入15ul的硅羟基磁珠，混匀，静置2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min，去除上清，得到第一次吸附产物。
(6)将第一次吸附产物加入200ul～400ul漂洗液混匀2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s～2min，去除上清，得到第一次洗涤产物。
(7)将第一次洗涤产物加入80％(v/v)乙醇溶液后，混匀2混匀2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min，去除上清，得到洗涤产物。
(8)将洗涤产物室温静置5min后，加入40-100ul的灭菌水，混混匀2min，将DNA从羟基磁珠上脱附，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min后去除洗涤产物中的羟基磁珠，得到纯化产品。
对比例3
本对比例提供了一种提取质粒DNA的试剂盒，具体成分如下：
细菌悬浮液、细胞裂解液、蛋白沉淀液、漂洗液以及硅羟基磁珠。
细菌悬浮液包括：50mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)、10mmol/L EDTA。
细胞裂解液包括：0.2M NaOH、1％(v/v)十二烷基硫酸钠(SDS)。
蛋白沉淀液包括：4.1M盐酸胍、0.76M醋酸钾(KAc)、2.1M冰醋酸。
漂洗液包括：2.7M盐酸胍、16.3mM KAc、2.5M Tris。
羧基磁珠：上海柏默生物科技有限公司货号：BMD009510固含量：100mg/ml
本对比例还提供一种质粒DNA的提取方法，具体操作如下：
(1)将大肠杆菌接到96孔的板里进行培养10h～12h。
(2)将培养好的800ul菌液离心，去除菌液的上清液后，加入200ul细菌悬浮液在漩涡震荡仪上混匀，将细菌悬浮起来。
(3)加入200ul细胞裂解液在平板混匀仪上轻微混匀20s～3min,静置30s～3min，将细胞裂解，得到细菌裂解液。
(4)往细菌裂解液中加入200ul蛋白沉淀液，在平板混匀仪上轻微混匀20s～3min，沉淀蛋白，得到预处理液。
(5)将预处理液进行离心，将400ul的上清转移到一块干净的96孔的板中，加入15ul的硅羟基磁珠，混匀，静置2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min，去除上清，得到第一次吸附产物。
(6)将第一次吸附产物加入200ul～400ul漂洗液混匀2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s～2min，去除上清，得到第一次洗涤产物。
(7)将第一次洗涤产物加入80％(v/v)乙醇溶液后，混匀2混匀2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min，去除上清，得到洗涤产物。
(8)将洗涤产物室温静置5min后，加入40-100ul的灭菌水，混混匀2min，将DNA从羟基磁珠上脱附，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min后去除洗涤产物中的羧基磁珠，得到纯化产品。
对比例4
本对比例提供了一种提取质粒DNA的试剂盒，具体成分如下：
细菌悬浮液、细胞裂解液、蛋白沉淀液、漂洗液以及硅羟基磁珠。
细菌悬浮液包括：50mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)、10mmol/L EDTA。
细胞裂解液包括：0.2M NaOH、1％(v/v)十二烷基硫酸钠(SDS)。
蛋白沉淀液包括：4.1M盐酸胍、0.76M醋酸钾(KAc)、2.1M冰醋酸。
漂洗液包括：2.7M盐酸胍、16.3mM KAc、2.5M Tris。
羟基磁珠：上海柏默生物科技有限公司，货号：BMD009510，固含量：100mg/ml
本对比例还提供一种细菌DNA的提取方法，具体操作如下：
(1)将大肠杆菌接到96孔的板里进行培养10h～12h。
(2)将培养好的800ul菌液离心，去除菌液的上清液后，加入200ul细菌悬浮液在漩涡震荡仪上混匀，将细菌悬浮起来。
(3)加入200ul细胞裂解液在平板混匀仪上轻微混匀20s～3min,静置30s～3min，将细胞裂解，得到细菌裂解液。
(4)往细菌裂解液中加入200ul蛋白沉淀液，在平板混匀仪上轻微混匀20s～3min，沉淀蛋白，得到预处理液。
(5)将预处理液进行离心，将400ul的上清转移到一块干净的96孔的板中，加入10ul的硅羟基磁珠，混匀，静置2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min，去除上清，得到第一次吸附产物。
(6)将第一次吸附产物加入200ul～400ul漂洗液混匀2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s～2min，去除上清，得到第一次洗涤产物。
(7)将第一次洗涤产物加入80％(v/v)乙醇溶液后，混匀2混匀2min，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min，去除上清，得到洗涤产物。
(8)将洗涤产物室温静置5min后，加入40-100ul的灭菌水，混混匀2min，将DNA从羟基磁珠上脱附，将96孔板放置在磁力架上吸附30s-2min后去除洗涤产物中的羟基磁珠，得到纯化产品。
实施例10
本实施例将实施例5～实施例9及对比例1～2的产物采用紫外分光光度计进行测试，分别测试其在260nm(DNA吸收峰)的光密度(OD260nm)以及230nm(蛋白质吸收峰)(OD230nm)的光密度。其结果如表2所示。
表2各实施例及对比例产物紫外分光光度计测试结果
实施例相较于对比例1采用了盐酸胍、醋酸钾及乙酸复配成的蛋白沉淀液，相较于对比例1，其代表DNA产率的OD260nm明显提高。实施例相较于对比例2采用了盐酸胍、醋酸钾及三羟甲基氨基甲烷复配的漂洗液，同样，其产率明显提高。实施例相较于对比例3～对比例4采用的硅羟基磁珠进行吸附，其产率就大幅度提高。采用本发明实施例试剂盒及提取方法相较于对比例，其OD260nm提升至8.9以上。
与此同时，发明人团队发现，若采用硅羟基磁珠，其OD260nm进一步提高。而在洗涤过程中，采用乙醇与本实施例复配的漂洗液，其纯度会进一步提高。
实施例11
本实施例将实施例9(重复两次)与对比例4(重复两次)的产物进行琼脂糖电泳测试，结果分别如图1所示。
图1为实施例9和对比例4提取质粒亮度对比，与1显示，采用本发明试剂盒提取的质粒亮度更强。
采用本发明试剂盒以及相应的提取方法，均能得到高通量的DNA产物。而采用硅羟基磁珠进行吸附，产物含量进一步提高。
在此有必要指出的是，以上实施例仅限于对本发明的技术方案做进一步的阐述和说明，并不是对本发明的技术方案的进一步的限制，本发明的方法仅为较佳的实施方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于，包括：
细菌悬浮液，所述细菌悬浮液为下列含量的组分：40mmol/L~60mmol/L的三羟甲基氨基甲烷及8mmol/L~12mmol/L的EDTA；
细胞裂解液，所述细胞裂解液为下列含量的组分：0.15mol/L~0.25mol/L的NaOH及体积百分比为0.08%~0.12%的十二烷基硫酸钠；
蛋白沉淀液，所述蛋白沉淀液为下列含量的组分：3.0mol/L~4.5mol/L的盐酸胍，0.5mol/L~0.8mol/L的醋酸钾及1.5mol/L~2.5mol/L的乙酸；
漂洗液，所述漂洗液为下列含量的组分：2.2mol/L~3.0mol/L的盐酸胍，15.0mmol/L~16.5mmol/L的醋酸钾及2.0mol/L~3.0mol/L的三羟甲基氨基甲烷；
以及
硅羟基磁珠；
所述硅羟基磁珠的固含量为80 mg/mL~120 mg/mL。
2.一种提取质粒DNA的方法，其特征在于，所述提取质粒DNA的方法采用权利要求1中所述提取质粒DNA的试剂盒进行，包括以下步骤：
步骤S1:去除菌液的上清液后，加入细菌悬浮液；
步骤S2:加入细胞裂解液混匀，静置，得到细菌裂解液；
步骤S3:往所述细菌裂解液中加入蛋白沉淀液混匀，静置后，去除沉淀后的蛋白质，得到预处理液；
步骤S4:往所述预处理液中加入硅羟基磁珠后进行吸附，去除上清液后得到第一次吸附产物；所述硅羟基磁珠的体积与所述预处理液的体积比为1:（20~80）；
步骤S5:将所述第一次吸附产物进行洗涤，得到洗涤产物；
步骤S6:将DNA从所述硅羟基磁珠上脱附，然后去除洗涤产物中的所述硅羟基磁珠，得到纯化产品；
所述步骤S1~所述步骤S3中，加入所述菌液、所述细菌悬浮液、所述细胞裂解液以及所述蛋白沉淀液的体积比为：（3.5~4.5）：（0.8~1.2）：（0.8~1.2）：（0.8~1.2）；
所述步骤S5包括以下步骤：
步骤S5-1:将所述第一次吸附产物加入漂洗液进行磁珠吸附，去除上清液，得到第一次洗涤产物，
步骤S5-2：将所述第一次洗涤产物加入体积百分含量为80%的乙醇溶液后进行磁珠吸附，去除上清液，得到所述洗涤产物。
3.根据权利要求2所述的提取质粒DNA的方法，其特征在于，所述步骤S6中，往所述洗涤产物中加入灭菌水后，将DNA从所述硅羟基磁珠上脱附。
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