CN113801808A - 一株阿比科恩链霉菌及其应用 - Google Patents

一株阿比科恩链霉菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113801808A
CN113801808A CN202110774464.8A CN202110774464A CN113801808A CN 113801808 A CN113801808 A CN 113801808A CN 202110774464 A CN202110774464 A CN 202110774464A CN 113801808 A CN113801808 A CN 113801808A
Authority
CN
China
Prior art keywords
streptomyces
albocongensis
root rot
peony
pathogenic bacteria
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110774464.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113801808B (zh
Inventor
彭霞薇
孙鑫
纪翔
霍泓儒
易丽颖
周金星
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Forestry University
Original Assignee
Beijing Forestry University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Forestry University filed Critical Beijing Forestry University
Priority to CN202110774464.8A priority Critical patent/CN113801808B/zh
Publication of CN113801808A publication Critical patent/CN113801808A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113801808B publication Critical patent/CN113801808B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/28Streptomyces
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一株阿比科恩链霉菌(Streptomyces abikoensis),保藏号为CGMCC No.19504。本发明所述阿比科恩链霉菌对茄腐皮镰刀菌(Fusarium solani)引起的根腐病具有较强的抑制作用,采用该菌制备的菌液来防治油用牡丹根腐病,能够起到较好的防治效果,同时还具有促进油用牡丹植株生长的作用,从而可减少化学农药和肥料投入,节约成本,降低环境污染,实现农业可持续发展。

Description

一株阿比科恩链霉菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域,具体涉及植物病害生物防治微生物领域,尤其涉及一株阿比科恩链霉菌及其应用。
背景技术
油用牡丹不仅具有极高的观赏价值,还具有降血糖、抗菌消炎、抗动脉粥样硬化、抗心律失常、抗惊厥、保肝、增强免疫等多种药理作用。近年来,人们发现牡丹籽的含油率可达到24.12%-37.83%,牡丹籽油的主要成分为亚麻酸、油酸、亚油酸等17种脂肪酸,含不饱和脂肪酸高达92.26%,特别是其中的α-亚麻酸含量达42%以上,是称为“液体黄金”的橄榄油的40倍,是名副其实的高端、优质食用油。因此油用牡丹有望成为一种具有中国特色的潜在油料作物,从而使其成为集观赏、药用和油用为一身的重要经济植物。此外,牡丹可以种植在非耕性土壤上,对水土保持,防风固沙,改善土壤品质等方向具有不可忽视的作用。近年来油用牡丹产业的发展成为兴起的一项朝阳产业。
然而随着油用牡丹种植规模和种植面积的逐年扩大,田间管理的粗放,病害的发生也日趋加重,并引起生产者和科研工作者的重视,其中油用牡丹根腐病是油用牡丹病害中最为严重的土传病害。从根腐病引起的病症看,在发病初期根皮上出现不规则的黑斑,不断发展,导致根部全部变黑腐烂,造成地上部分长势衰弱,叶片发黄;严重时叶片、枝条枯死,如果不及时防治,就会造成整株死亡,从而影响牡丹籽的产量和品质。经鉴定该病是由茄腐皮镰刀菌(Fusarium solani)引起,针对油用牡丹根腐病的防治主要是以化学药剂为主,农药的大量施用不仅引起食品安全问题,而且也会造成环境污染。
利用拮抗微生物进行病原菌控制是一种环境友好的病害防治手段,日益得到人们的认可,如木霉菌、青霉菌、链霉菌、芽孢杆菌等是比较常见的拮抗微生物。链霉菌(Streptomyces spp.)是公认的可产生多种抗生素、胞外酶等活性物质的一种放线菌,链霉菌可大量产孢,孢子抗逆性强,在土传病害防治方面具有较好的应用前景。已经报道的对植物病原菌有拮抗作用的链霉菌有卡那霉素链霉菌(S.kanamyceticus)、纺锤链霉菌(S.netropsis)、龟裂链霉菌(S.rimosus)、球孢链霉菌(S.globisporus)等。
一般拮抗链霉菌的分离环境为土壤,与非根际土壤相比,根际土壤中蕴含着种类和数量更多的微生物类群,是拮抗微生物筛选的优选环境。此外,有些根际微生物除了具有拮抗植物病原微生物的效果,同时还兼具植物促生的作用,在协助植物抵抗病害的同时,增强植物的生长活力,提高植物免疫力。虽然前期有学者对具有拮抗牡丹根腐病病原菌作用的生防菌进行了筛选(王雪山等,牡丹根腐病拮抗菌的筛选与鉴定.山东农业科学,2012年第44卷第7期),但研究对象均为观赏性牡丹,关于以结籽为目的的油用牡丹根腐病病原菌拮抗生防菌的筛选研究还鲜见报道。因此,为了确保油用牡丹丰产稳产,降低油用牡丹根腐病的发生,有必要针对该病害进行拮抗链霉菌的筛选,以充分挖掘和利用其根际有益微生物,减少化学农药和肥料投入,节约成本,降低环境污染,实现农业可持续发展。
发明内容
本发明目的在于提供一株同时具有拮抗多种病原微生物和产植物促生因子的阿比科恩链霉菌(Streptomyces abikoensis)LS164及其应用,该菌对茄腐皮镰刀菌(Fusarium solani)引起的根腐病具有很强的抑制作用,用该菌菌液防治油用牡丹根腐病具有较好的防治效果,且还能够促进油用牡丹植株的生长,从而可减少化学农药和肥料投入,节约成本,降低环境污染,实现农业可持续发展。
本发明的阿比科恩链霉菌(Streptomyces abikoensis)LS164,是从山西长治襄垣县油用牡丹种植基地发生了根腐病的5年生油用牡丹植株根际土壤分离筛选出来的菌种,对茄腐皮镰刀菌有很强的抑制效果。在ISP2固体培养基上该菌株基内菌丝灰白色,气生菌丝和孢子丝灰绿色,多褶皱,菌落为灰白色,不透明,培养36h后出现皱褶,培养3-7天产生孢子,革兰氏染色阳性,能够利用淀粉,产生过氧化化氢酶,V.P.测定为阳性。将菌株LS164进行16S rRNA基因扩增和测序分析,与Streptomyces abikoensis(NR 112420.1)同源性最高达99.68%以上,与其他链霉菌相距较远。基于以上特征,将LS164菌株命名为阿比科恩链霉菌(Streptomyces abikoensis),该菌于2020年3月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮政编码:100101),保藏编号为CGMCC No.19504,经检测存活。
本发明进一步提供所述的阿比科恩链霉菌(Streptomyces abikoensis)在防治植物根腐病中的应用。优选地,所述植物是油用牡丹,进一步优选地所述根腐病是由茄腐皮镰刀菌(Fusarium solani)引起的根腐病。
具体应用时,是利用所述阿比科恩链霉菌的菌液对植物进行灌根。所述阿比科恩链霉菌的菌液是菌体悬浮液,优选地制备方法如下:将所述阿比科恩链霉菌进行液体培养,优选是在ISP2液体培养基中,于30℃、150rpm摇床中培养72~120h,获得发酵液作为菌体悬浮液。
本发明还提供所述的阿比科恩链霉菌(Streptomyces abikoensis)在防治由辣椒疫霉病病原菌(Phytophthora capsici)、杨树立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、番茄细菌性斑点病原菌(Pseudomonas syringae)、番茄青枯病原菌(Ralstonia solanacearum)引起的植物病害中的应用。
本发明通过实验表明,所述阿比科恩链霉菌LS164对油用牡丹根腐病具有较好的防治效果,且在具有良好防效的同时,能够促进油用牡丹植株的生长。此外,本发明阿比科恩链霉菌LS164除了对茄腐皮镰刀菌引起的根腐病具有很强的抑制作用,对辣椒疫霉病病原菌、杨树立枯丝核菌和番茄细菌性斑点病原菌也具有非常强的抑制作用,对番茄青枯病原菌也有一定的抑制作用,由此说明阿比科恩链霉菌LS164具有潜在的对多种病害的预防效果。因此,将可将本发明阿比科恩链霉菌作为生防制剂用于防治植物根腐病特别是油用牡丹根腐病,从而可减少化学农药和肥料投入,节约成本,降低环境污染,实现农业可持续发展。
附图说明
图1使用软件MEGA X基于ITS序列构建茄腐皮镰刀菌的系统发育树。
图2使用软件MEGA X基于mtSSU序列构建茄腐皮镰刀菌的系统发育树。
图3 LS164菌株对茄腐皮镰刀菌的抑菌效果。
图4本发明LS164菌株16S rDNA系统发育树。
图5阿比科恩链霉菌LS164生长曲线。
图6双抗标记菌株菌液灌根处理不同时间后活菌数量。
具体实施方式
下面通过具体实施方式的详细描述来进一步阐明本发明,但并不是对本发明的限制,仅仅作示例说明。
实施例1阿比科恩链霉菌LS164的分离、鉴定
1、土壤样品来源
土壤取自山西长治市襄垣县油用牡丹种植基地,选取发生了根腐病的5年生油用牡丹植株。将植株连根拔起,轻轻抖落后用无菌毛刷刷取粘在根部的土壤(即根际土),每5棵植株的样品混为一个土样,将土壤装入无菌塑封袋,带回实验室于4℃冰箱中保存。
2、放线菌菌株的分离
取10g根际土壤样品放于90mL的无菌蒸馏水中,均匀振荡30min后,土壤悬液分别稀释至10-3,10-4,10-5倍。取100μL稀释液涂布于高氏I号固体培养基上(高氏I号合成培养基37.5g,3%重铬酸钾(aq)3mL,蒸馏水1000mL,pH 7.4-7.7)。倒置培养于30℃恒温培养箱,3-7d后观察平板,挑选形态,色泽,大小不同的菌落于高氏I号培养基平板上划线,将纯化后的菌株保存于4℃冰箱,供下一步拮抗菌的筛选。
3、病原菌的分离与鉴定
病原菌的分离与鉴定过程具体如下:
1)油用牡丹根腐病植株的采集:采自山西长治市襄垣县油用牡丹种植基地,品种为凤丹牡丹,采集具有地上部枯萎、地下部腐烂变黑的典型根腐病症状的5年生油用牡丹植株,标记后带回实验室。2)病原菌分离筛选培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):200g去皮马铃薯切成小块后,放于蒸馏水中煮,待水开后用8层纱布过滤并用蒸馏水补充至1L,加入20g葡萄糖和16g琼脂粉。3)病原菌的分离与纯化:采用常规组织法进行病原菌的分离:先将凤丹病根用自来水洗净,取其病健交界处,依次用75%的酒精处理30s、0.1%升汞处理30~60s,无菌水冲洗3遍,将冲洗好的牡丹根切成4~5mm的方块放入加有1%链霉素的PDA培养基中,于28℃培养箱中培养,将长出的单菌落进一步进行单孢分离与纯化,并将菌株保存于4℃冰箱,备用。4)病原菌的致病性测定:分离到的所有菌株进行致病性实验,使用长势一致并且无任何病害的3年生凤丹牡丹植株,用已灭菌的接种针刺伤凤丹根部表皮,并将根部放在含有1×108个孢子/·mL-1的孢子悬浮液中浸泡30min,以无菌水浸泡30min为空白对照。然后将牡丹种植在基质土中,每盆2棵,每个处理10棵牡丹苗,重复3次,然后放置在25℃温室中,接种48h后每天浇水,保证其发病条件。30天后调查牡丹植株的发病程度,计算病情指数。5)病原菌的鉴定:包括形态观察和分子生物学鉴定,在马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)(配方:200g去皮马铃薯切成小块后,放于蒸馏水中煮,待水开后用8层纱布过滤并用蒸馏水补充至1L,加入20g蔗糖和16g琼脂粉)中接种病原菌,观察并记录菌落的特征。在康乃馨琼脂培养基(CLA)(配方:已烘干灭菌的康乃馨叶片若干,琼脂20g,蒸馏水1L)中接种病原菌,待长出菌落后用显微镜观察分生孢子的形态特征。利用OMEGA真菌提取试剂盒进行病原菌基因组DNA的提取,采用通用引物ITS:(ITS1:5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’,ITS4:5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)和引物mt SSU(NMS1a:5’-CAGCAGTGAGGAATATTGGTCAATG-3’,NMS2b:5’-GCGGATCATCGAATTAAATAACAT-3’)进行PCR扩增。PCR反应体系为25μL,DNA模板2μL,上下游引物各1μL,ddH2O 8.5μL,2×Taq PCR Super Mix 12.5μL。PCR扩增程序:94℃预变性4min;94℃变性30s,退火(ITS:55℃1min;mt SSU:60℃1.5min),72℃延伸1min,35个循环;72℃再延伸10min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检查后,送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序,将测序结果在NCBI中进行BLAST分析,使用MEGA X软件进行系统发育树构建(系统发育树请见图1和图2)。
结果表明在山西省长治地区油用牡丹‘凤丹’大田共采标样22株,共分离获得43个纯培养菌株,依据菌落形态特征,其中41个分离物属于茄腐皮镰刀菌(Fusarium solani),分离频率为95.35%,再根据显微观察,初步鉴定为上述分离物归属为8株茄腐皮镰刀菌。致病性测定结果表明,有4株茄腐皮镰刀菌使所处理的植株发病较严重,且可再分离到所接菌株,其菌株编号分别为FD1、FD8、FD10、FD13,发病率为100%,病情指数分别为86.67%、85.00%,36.67%,71.67%。发病植株主要症状为根部变黑,出现腐烂,与田间结果一致。将致病性实验中已发病的根组织表面消毒后再接入到PDA平板中进行病原菌的分离,在相同营养与培养条件下,所分离的菌株与所接菌株形态相同,根据柯赫法则,证明所接菌株为牡丹根腐病的病原菌。以上实验说明菌株FD1、FD8、FD10、FD13为油用牡丹‘凤丹’的病原菌,但致病力有所不同。对上述4株菌进行分子鉴定,菌株测序结果在GenBank中进行比对,其序列与茄腐皮镰刀菌(Fusarium solani)的相似性达到98%~100%,再结合形态学观察,明确引起油用牡丹根腐病的4株病原菌均是茄腐皮镰刀菌(Fusarium solani)。
4、拮抗菌的初筛
采用平板对峙培养法,对上述分离菌株进行拮抗效果的筛选。在改良ISP2培养基(即PDA培养基与ISP2培养基1:1比例混合:酵母浸粉2g,麦芽浸粉5g,葡萄糖2g,NaCl 5g,酵母浸粉2.5g,蛋白胨5g,蒸馏水1000mL)平板中央,将活化好的病原菌(选择引起油用牡丹根腐病发病率最高的4株茄腐皮镰刀菌FD1、FD8、FD10、FD13)用灭菌打孔器取直径为0.5cm的圆形病原菌块放在平板中心,将待检测放线菌点接在距离病原菌块2.5cm处,每个平板接3种放线菌,28℃培养箱中培养5-7d,每天观察并记录放线菌菌对病原菌的抑制情况。
5、拮抗菌的复筛
将初筛中对病原菌(FD1、FD8、FD10、FD13)均有抑制作用的放线菌进行复筛。放线菌单菌落接种在ISP2液体培养基中,30℃、150rpm培养2-4d,用于平板对峙实验。在改良ISP2平板中心接种已活化的直径为0.5cm的病原菌菌块,在距离病原菌2.5cm的对称两侧打孔,每孔加入100μL的菌液,每个处理重复3次,在28℃培养箱中培养5-7d,用游标卡尺测定测量病原菌直径和拮抗半径,计算抑菌率。
初筛结果表明,对4株茄腐皮镰刀菌均具有抑菌作用的放线菌共有12株,不同拮抗菌株对4株茄腐皮镰刀菌的抑制效果存在差异。选择2株抑制效果最好的放线菌进行抑菌率的统计,结果见表1,图3。综合来看,抑菌效果最好的是LS164,对4株茄腐皮镰刀菌的抑菌率在64.85%-77.93%之间。
表1拮抗菌株对4株病原菌的抑菌率(%)
Figure BDA0003154095030000061
6、拮抗菌LS164的理化特征及16S rRNA分子鉴定
参照《常见细菌系统鉴定手册》对拮抗茄腐皮镰刀菌效果较好的菌株LS164进行形态学观察和生理生化鉴定,同时将菌株LS164进行16S rRNA基因扩增和测序分析。在ISP2固体培养基上(酵母浸粉4g,麦芽浸粉10g,葡萄糖4g,琼脂20g,蒸馏水1L,pH7.4-7.6)该菌株基内菌丝灰白色,气生菌丝和孢子丝灰绿色,多褶皱,菌落为灰白色,不透明,培养36h后出现皱褶,培养3-7天产生孢子,革兰氏染色阳性,能够利用淀粉,产生过氧化化氢酶,V.P.测定为阳性。16S rRNA基因测序后在NCBI上进行BLAST比对分析,结果表明该菌与Streptomyces abikoensis(NR 112420.1)同源性最高达99.68%,与其他链霉菌相距较远。基于以上特征,将LS164菌株命名为阿比科恩链霉菌(Streptomyces abikoensis)(图4),该菌于2020年3月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,其简称为CGMCC(单位地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮政编码:100101),保藏编号为CGMCC No.19504。
实施例2阿比科恩链霉菌LS164的定殖及存活能力
作为生防菌剂,除了需要具有抗病能力,还需要具有较强的环境适应能力,以确保在田间施用后能够定殖,并在较长时期保持其生物活性,因此测定了阿比科恩链霉菌LS164在放置不同时间后存活量和在土壤中的定殖情况。
1、生长特性测定
挑取阿比科恩链霉菌LS164单菌落接种于2mL ISP2液体培养基中,28℃,150r/min的摇床中培养24h,作为种子液以1%接种量接种在20mL ISP2液体培养基中,28℃,150r/min的摇床中培养,分别在2、4、6、8、10、12、18、24、30、36、42、48、54、60、66、72h取菌液,用酶标仪在590nm下测定吸光值(OD590),绘制生长曲线。结果表明(图5),阿比科恩链霉菌LS164在培养12h后开始进入对数期,开始快递生长,并于接种30h后达到稳定期,之后一直保持稳定的活菌数量。
2、定殖能力测定
首先对阿比科恩链霉菌LS164进行利福平和氨苄青霉素两种抗生素的标记,在装有20mL ISP2液体培养基的三角瓶中加入利福平溶液,使其终浓度为10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、120μg/mL、160μg/mL、200μg/mL、300μg/mL。吸取100μL已活化好的菌液加到含有10μg/mL利福平的培养基中,28℃培养36-48h,吸取该瓶中100μL菌液转移至含有20μg/mL利福平的培养基中培养,这样依次在含有更高浓度利福平溶液的培养基中培养,即可筛选出具有利福平抗性的突变菌株。将具有利福平抗性的突变菌株使用相同方法进行氨苄青霉素抗性标记,将菌株逐步在含有10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL氨苄青霉素的培养基中进行培养,使得菌株获得双抗标记。以茄腐皮镰刀菌(FD1、FD8、FD10、FD13)为材料,采用平板对峙法对双抗标记菌株的抑制效果进行验证,确保其保持原来抗病能力。将上述菌种培养后制成108CFU/mL的菌悬液,灌根处理种植有2年生油用牡丹的盆栽中,每盆菌液添加量为50mL,每个处理3盆。分别在灌根后1w、4w、7w、10w、15w进行根际土壤取样,采用梯度稀释法,取10-3、10-4和10-5稀释度的土壤稀释液在同时含有利福平(300μg/mL)和氨苄(200μg/mL)抗性的ISP2培养基上进行涂布,于28℃培养箱中培养3-5d,菌落计数法核算其在每克土壤中的活菌数量,并对回收菌株抑菌能力进行检测,以验证阿比科恩链霉菌LS164在土壤中的定殖能力。
结果见表2及图6,经双抗标记后菌株仍然保持了抑菌效果,且抑菌能力未发生显著变化(表2);菌液灌根处理不同时间后活菌数量呈现一定的下降趋势,但在处理7w后,活性数能够稳定在一定水平,即使在处理后15w,活菌数仍然维持在每克土壤6×106CFU以上(图6),一定的活菌数量保证了菌种抗病性的发挥,为其作为生防菌剂的应用提供了保障。
表2双抗标记菌株抑菌率变化
Figure BDA0003154095030000081
实施例3阿比科恩链霉菌LS164的拮抗功能谱
选择发病率较普遍的植物真菌病害和细菌病害的病原微生物各4种为实验材料,采用平板对峙法对阿比科恩链霉菌LS164的拮抗功能谱进行测定,结果表明(表3)LS164对辣椒疫霉病病原菌(Phytophthora capsici)和杨树立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)这两种病原真菌以及番茄细菌性斑点病原菌(Pseudomonas syringae)具有非常强的抑制作用,抑菌半径超过30mm;对番茄青枯病原菌(Ralstonia solanacearum)引起的细菌病害也具有一定的抑制作用。由此说明阿比科恩链霉菌LS164具有潜在的对多种病害的预防效果。
表3阿比科恩链霉菌LS164抑菌谱
Figure BDA0003154095030000082
注:病原真菌1.辣椒疫霉病病原菌(Phytophthora capsici);2.板栗疫病病原菌(Cryphonectria parasitica);3.杨树立枯丝核菌(Rhizoctonia solani);4.大白菜根腐病病原菌(Fusarium oxysporum)。病原细菌:1.番茄细菌性斑点病原菌(Pseudomonassyringae);2.胡萝卜软腐病原菌(Pectobacterium carotovorum);3.番茄青枯病原菌(Ralstonia solanacearum);4.细菌性杨树溃疡(Botryosphaeria dothidea)“-”无拮抗;“+”0<拮抗半径<3mm;“++”3<拮抗半径<8mm;“+++”拮抗半径>8mm。
实施例4阿比科恩链霉菌LS164对油用牡丹根腐病的防治效果
培养24h的阿比科恩链霉菌LS164种子液以1%的接种量接种于ISP2液体培养基中,于28℃、150r/min摇床中培养72-96h,用无菌蒸馏水稀释至发酵液至108cfu·mL-1备用。将病原菌茄腐皮镰刀菌FD1、FD8、FD10、FD13用打孔器打成直径为7mm的菌块,接入PD培养基中,每250ml接7-8块,在28℃、160rpm摇床中培养7d,离心后用纱布过滤得到菌丝体,将其放入搅拌机中加无菌水打碎,用蒸馏水稀释至孢子为106个·mL-1,备用。选取2年生的凤丹牡丹植株,挑选大小一致,健康的植株进行种植,用清水洗去浮土,用75%的酒精清洗一遍。在直径为24.5cm、高20.5cm的塑料盆中装土5kg,均匀栽种6棵牡丹苗,定期进行浇水。在缓苗两个月后,采用灌根法进行接菌液种。共设置5个处理组:处理1(CK):对照,自来水100mL;处理2(B):接种阿比科恩链霉菌LS164,生防菌悬液和清水各50mL;处理3(BP):同时接种生防菌和病原菌,生防菌悬液和病原菌孢子悬浮液各50mL;处理4(P):接种病原菌,病原菌孢子悬浮液和清水各50mL;处理5(CP):接种病原菌,同时添加化学农药恶霉灵,病原菌孢子悬浮液和500倍恶霉灵稀释液各50mL。每个处理3次重复。每隔7d灌根一次,共灌根3次,在最后一次灌根两个月后进行收苗。统计发病率,计算病情指数与防效;测定植株株高、根鲜重、株鲜重等指标。
在第3次生防菌液灌根后,继续种植2个月后收苗,统计植株发病情况,结果如表4所示。在没有添加病原孢子悬浮液的处理CK和处理B中,植株均未发病,在只添加病原孢子悬浮液的处理P中,植株全部发病,出现根部腐烂变黑,病情指数为87.96%。在添加病原孢子悬浮液与生防菌液的处理BP和添加病原孢子悬浮液与药剂的处理CP中,发病率和病情指数显著低于处理P,但处理BP与CP之间没有显著差异,说明阿比科恩链霉菌LS164对于油用牡丹根腐病具有较好的防治效果。
表4阿比科恩链霉菌LS164对油用牡丹根腐病的防治效果
Figure BDA0003154095030000091

Claims (8)

1.一株阿比科恩链霉菌(Streptomyces abikoensis),保藏号为CGMCC No.19504。
2.如权利要求1所述的阿比科恩链霉菌(Streptomyces abikoensis)在防治植物根腐病中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于:所述植物是油用牡丹。
4.如权利要求1或2所述的应用,其特征在于:所述根腐病是由茄腐皮镰刀菌(Fusariumsolani)引起的根腐病。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于:其利用所述阿比科恩链霉菌的菌液对植物进行灌根。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于:所述阿比科恩链霉菌的菌液是菌体悬浮液,优选地制备方法如下:将所述阿比科恩链霉菌进行液体培养,优选是在ISP2液体培养基中,于30℃、150rpm摇床中培养72~120h,获得发酵液作为菌体悬浮液。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于:所述植物是油用牡丹。
8.如权利要求1所述的阿比科恩链霉菌(Streptomyces abikoensis)在防治由辣椒疫霉病病原菌(Phytophthora capsici)、杨树立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、番茄细菌性斑点病原菌(Pseudomonas syringae)、番茄青枯病原菌(Ralstonia solanacearum)引起的植物病害中的应用。
CN202110774464.8A 2021-07-08 2021-07-08 一株阿比科恩链霉菌及其应用 Active CN113801808B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110774464.8A CN113801808B (zh) 2021-07-08 2021-07-08 一株阿比科恩链霉菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110774464.8A CN113801808B (zh) 2021-07-08 2021-07-08 一株阿比科恩链霉菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113801808A true CN113801808A (zh) 2021-12-17
CN113801808B CN113801808B (zh) 2022-12-09

Family

ID=78893071

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110774464.8A Active CN113801808B (zh) 2021-07-08 2021-07-08 一株阿比科恩链霉菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113801808B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115504827A (zh) * 2022-07-27 2022-12-23 国家林业和草原局林草调查规划院 一种具有生防功能的微生物有机调理剂及应用
CN115948301A (zh) * 2023-01-06 2023-04-11 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种防控香蕉枯萎病的寡糖素复合菌剂及其应用
CN116179640A (zh) * 2023-01-04 2023-05-30 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种高效筛选香蕉枯萎病拮抗菌的方法
CN118104679A (zh) * 2024-01-29 2024-05-31 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种防治辣椒枯萎病的杀菌组合物及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PH12017000203A1 (en) * 2017-07-18 2019-01-21 Univ Of The Philippines Los Banos Development and utilization of actinomycetes as biocontrol agents against panama wilt causing-fusarium oxysporum tr4 cavendish banana
CN110301455A (zh) * 2019-07-05 2019-10-08 海南大学 阿孙链霉菌产生的挥发性物质在植物病害防治中的应用
CN110699270A (zh) * 2018-07-10 2020-01-17 百泰生物科技股份有限公司 阿孙链霉菌、其代谢产物、其制备方法及其杀蚊子的应用
KR102200332B1 (ko) * 2019-12-03 2021-01-13 서울대학교산학협력단 유충호르몬 안타고니스트 및 살충 활성을 가지는 스트렙토마이세스 아비코엔시스 mjm10673 균주의 배양액 및 이의 용도

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PH12017000203A1 (en) * 2017-07-18 2019-01-21 Univ Of The Philippines Los Banos Development and utilization of actinomycetes as biocontrol agents against panama wilt causing-fusarium oxysporum tr4 cavendish banana
CN110699270A (zh) * 2018-07-10 2020-01-17 百泰生物科技股份有限公司 阿孙链霉菌、其代谢产物、其制备方法及其杀蚊子的应用
CN110301455A (zh) * 2019-07-05 2019-10-08 海南大学 阿孙链霉菌产生的挥发性物质在植物病害防治中的应用
KR102200332B1 (ko) * 2019-12-03 2021-01-13 서울대학교산학협력단 유충호르몬 안타고니스트 및 살충 활성을 가지는 스트렙토마이세스 아비코엔시스 mjm10673 균주의 배양액 및 이의 용도

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115504827A (zh) * 2022-07-27 2022-12-23 国家林业和草原局林草调查规划院 一种具有生防功能的微生物有机调理剂及应用
CN116179640A (zh) * 2023-01-04 2023-05-30 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种高效筛选香蕉枯萎病拮抗菌的方法
CN116179640B (zh) * 2023-01-04 2023-10-24 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种高效筛选香蕉枯萎病拮抗菌的方法
CN115948301A (zh) * 2023-01-06 2023-04-11 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种防控香蕉枯萎病的寡糖素复合菌剂及其应用
CN115948301B (zh) * 2023-01-06 2023-10-24 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种防控香蕉枯萎病的寡糖素复合菌剂及其应用
CN118104679A (zh) * 2024-01-29 2024-05-31 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种防治辣椒枯萎病的杀菌组合物及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN113801808B (zh) 2022-12-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113151059B (zh) 一株多功能暹罗芽孢杆菌及其应用
CN113801808B (zh) 一株阿比科恩链霉菌及其应用
CN112175888B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌Hsg1949及其应用
CN113736687A (zh) 一株抗病促生耐盐芽孢杆菌及其应用
CN110129240B (zh) 一株解淀粉芽孢杆菌及其在防治芹菜软腐病中的应用
CN110982725B (zh) 一种拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌及其应用
CN107058160B (zh) 一株花生根际解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN103642734B (zh) 一种甜菜内生微杆菌及其用于甜菜病害生物防治中的应用
CN108148794A (zh) 一种广谱抑菌活性的枯草芽孢杆菌DYr3.3及制备方法和应用
CN109112069B (zh) 一种生防内生真菌及其应用
CN110317747A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌jt68及其在防治茶炭疽病的应用
CN117165494A (zh) 一种猕猴桃溃疡病生防菌株Wq-1及其应用
CN105567600A (zh) 黄萎病菌拮抗菌及其应用
CN108220211B (zh) 一株嗜油不动杆菌nmb17及其在植物病害防治中的应用
CN111363696B (zh) 一种链霉菌及其筛选方法与应用
CN110447457B (zh) 一种血红密孔菌菌株及其人工栽培方法和用途
CN115960777B (zh) 一株假真菌样芽孢杆菌及其在蔬菜疫病防治中的应用
CN105462854B (zh) 越南槐内生真菌sdte-p在防治三七炭疽病中的应用
CN105462882B (zh) 一种用于防治作物黄萎病的铜绿假单胞菌及其应用
CN105695334B (zh) 一种新的棘孢木霉及其用途
CN114933980B (zh) 一种防治黄精根腐病的浅紫链霉菌hjb-xtbg45及其应用
CN106701624A (zh) 一株拮抗枸杞根腐病的特基拉芽孢杆菌及其应用
CN115197853B (zh) 内生菌Epicoccum thailandicum LF-28菌株及其应用
CN114958660A (zh) 一种多粘类芽孢杆菌菌株及其应用
CN111304135B (zh) 一种芽孢杆菌及其在植物病害防治中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant