CN113769437A - 一种从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法及其应用 - Google Patents

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刘艺璇
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吴艳
胡先勤
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Abstract

本发明公开了一种从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法及其应用，属于海洋微藻生物活性成分高效利用技术领域。该方法主要包括以下步骤：(1)将微藻冷冻干燥处理的粉末进行高压脉冲电场处理，收集样品并干燥；(2)将上述干燥样品与硅藻土混合均匀；(3)利用加压流体萃取法提取步骤(2)混合粉末的活性成分；(4)对提取液进行冷冻干燥处理。本发明结合了高压脉冲电场击穿微藻细胞壁和加压流体挤压微藻破碎细胞的工作原理，从微藻中高效萃取蛋白质，多酚等功能活性物质，这大大缩短了微藻营养物质提取的时间，极大提高了微藻活性物质的功能特性，且该工艺稳定、无污染、可操作性强，具有良好的工业化生产前景。

Description

一种从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法及其 应用
技术领域
本发明属于海洋微藻生物活性成分高效利用技术领域，尤其涉及一种从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法及其应用。
背景技术
小球藻是一种绿色微藻，因其优异的营养和功能特性而被用作食品和药物的重要成分。多酚为小球藻的主要活性成分，因其具有多种保健活性，如免疫调节、抗氧化、抗高脂血症、抗肿瘤、神经保护和抗哮喘作用而日益受到关注。
化学溶剂萃取是微藻活性成分萃取的最常见手段之一，是通过有机溶剂与藻体的充分接触(浸泡、喷淋),使活性物质溶解在溶剂中而被萃取出来。萃取过程中常用的有机试剂有甲醇、氯仿、乙醚、乙腈等。由于这些溶剂都有一定毒性,用量较大,时间较长,对人体健康及环保都是不利的,在食品级成分的提取中有一定限制。
高压脉冲电场(pulsedelectric field，PEF)在高压电场的条件下能破碎微藻坚硬的细胞壁，使得活性物质的提取处理时间短、能耗低、可最大程度保留物质活性等优点,近些年被广泛应用于活性物质提取。
压力流体萃取(pressurized liquid extraction，PLE)是有机液相溶剂在较高温度(50～200℃)、较大压力(1450～2175psi)条件下实现对组分的快速萃取分离。高压有助于增加传质速率迫使溶剂更容易渗入藻细胞,提高萃取效率。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法，该方法包括以下步骤：
(1)将微藻冷冻干燥处理的粉末进行高压脉冲电场处理，收集样品并干燥；
(2)将上述干燥样品与硅藻土混合均匀；
(3)利用加压流体萃取法提取步骤(2)混合粉末的活性成分；
(4)对提取液进行冷冻干燥处理。
优选地，所述步骤(1)中电场强度1～2KV/CM，能量100～300KJ/Kg，脉冲40～50Pulse。
优选地，所述步骤(1)中冷冻干燥温度为-30～-50℃，时间为48～72h。
优选地，所述步骤(2)中混合转速为1200～1700r/min，处理时间为5～12min。
优选地，所述步骤(2)中干燥样品与硅藻土的重量比为1:2-4。
优选地，所述步骤(3)中蒸馏水作为提取试剂，设置压力流体萃取的条件为预热1min，加热5min，氮气吹扫60s。
优选地，所述步骤(3)中萃取压力1000～1500psi，温度45～55℃，提取时间10～15min。
优选地，所述步骤(4)中冷冻干燥温度为-30～-50℃，时间为48～72h，粉末过筛60目。
优选地，所述步骤(4)还包括对冷冻干燥粉碎后的粉末进行生物活性、蛋白质及多酚活性成分的分析。
本发明的目的之二在于提供上述方法在微藻生物活性成分提取中的应用。
本发明结合高压脉冲电场和压力流体萃取提取技术，缩短了传统化学溶剂提取法的萃取时间，促进了微藻营养成分的提取并提高了微藻营养物质的生物活性功能。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明通过高压电场对微藻粉末进行细胞破碎处理，之后压力流体萃取提取过程使得提取液中的蛋白质转化为小分子肽或氨基酸，多酚转化为游离酚，成为具有更高营养功能的营养素。
(2)与传统的萃技术取相比,本发明以水作为溶剂,消除了化学试剂的消耗，该方法安全可靠，可用作食品级成分的提取。
(3)本发明采用的一种从微藻细胞中快速提取高品质生物活性成分的方法制备工艺安全、萃取率高，无污染、操作简单、成本低、对设备无较高要求，具有良好的工业化生产前景。
附图说明
图1为本发明的工艺流程图。
具体实施方式
实施例1
(1)将微藻冷冻干燥粉末与水按4g/400mL的比例混合，利用高压脉冲电场在电场强度2KV/cm，能量200KJ/kg，30KV，脉冲450J/Pulse下对其进行高压电场处理，处理时间为8min，收集液体并冷冻干燥；
(2)将上述经高压脉冲电场处理的冻干微藻粉末与硅藻土按质量比1:3均匀混合，转速为1500r/min，处理时间为7min；
(3)以蒸馏水作为提取试剂，料液比为5g/600mL设置压力流体萃取的条件为：预热1分钟，加热5分钟，氮气吹扫60S，萃取压力1300psi，温度50℃，提取时间13min，对步骤(2)的混合粉末样品进行提取；
(4)收集步骤(3)得到的提取液，进行冷冻干燥，粉碎，对其生物活性及蛋白质，多酚等活性成分进行分析，确定其可以作为一种富含蛋白质和多种形式多酚，可抑制食源性有害菌，促进益生菌生长并具备强抗氧化能力的优质益生元来源。
实施例2
同实施例1，区别在于步骤(3)中，混合粉末不经过压力流体萃取处理，且步骤(1)中高压脉冲电场处理时间为14min。
实施例3
同实施例1，区别在于步骤(1)中，微藻粉末与水的混合液不经过高压脉冲电场处理，且步骤(3)中压力流体萃取处理时间为14min。
对比例1
同实施例1，区别在于微藻细胞中高品质生物活性成分取过程采用乙醇或氯仿进行溶剂萃取，萃取时间350min，同时不采用高压脉冲电场和压力流体萃取相结合的处理手段。
对比例2
同实施例1，区别在于步骤(1)中高压脉冲电场在电场强度3KV/cm，能量300KJ/kg，30KV，脉冲450J/Pulse下对其进行高压电场处理，处理时间为25min；
同实施例1，区别在于步骤(3)中压力流体萃取的条件为：预热1分钟，加热5分钟，氮气吹扫60S，萃取压力1300psi，温度60℃，提取时间20min。
对比例3
同实施例1，区别在于步骤(3)中压力流体萃取的条件为：预热1分钟，加热5分钟，氮气吹扫60S，萃取压力1300psi，温度60℃，提取时间20min。
对比例4
同实施例1，区别在于步骤(1)中高压脉冲电场在电场强度3KV/cm，能量300KJ/kg，30KV，脉冲450J/Pulse下对其进行高压电场处理，处理时间为25min。
测试例1
采用凯氏定氮法、Folin-Ciocalteu法、分光光度法分别对实施例1-3与对比例1-4的提取时间及所制备出的提取物进行蛋白质和多酚含量及提取物抗氧化性的测定，结果如表1所示。
表1
Figure BDA0003316610210000031
Figure BDA0003316610210000041
从表1中可以看出，实施例1-3制备出的提取物的蛋白质含量和多酚含量明显高于对比例1的测定结果，尤其是实施例1，经过高压脉冲电场和压力流体萃取相结合的处理手段使得从微藻中提取的活性物质的蛋白质及多酚显著提高。同对比例1(350min)相比较，实施例1制备出提取物的抗氧化性得到了明显提升。测试例1的结果表明高压脉冲电场和压力流体萃取相结合的处理手段能够从微藻中快速提取(29min)富含蛋白质，多酚并具有良好抗氧化性的活性物质。
测试例2
采用分光光度法分别对实施例1-3与对比例1-4所制备得到的活性物质的细菌生长对数期的最大生长速率值的测定，结果如表2所示。
表2
Figure BDA0003316610210000042
由表2可知，李斯特菌CECT 910、沙门氏菌CECT 4138、金黄色葡萄球菌CECT 86、大肠杆菌为有害菌，干酪乳杆菌BL 23和乳双歧杆菌NCC 2818为益生菌，有害菌生长对数期的最大生长速率值呈现下降趋势，益生菌生长对数期的最大生长速率值则得到了增加，表明实施例1-3与对比例1-4所制备出活性物质能够具有抑菌作用及促进益生菌生长。
测试例3
对实施例1所制备出的活性物质进行成分测定，结果如表3所示。
表3
Figure BDA0003316610210000051
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一种从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将微藻冷冻干燥处理的粉末进行高压脉冲电场处理，收集样品并干燥；
(2)将上述干燥样品与硅藻土混合均匀；
(3)利用加压流体萃取法提取步骤(2)混合粉末的活性成分；
(4)对提取液进行冷冻干燥处理。
2.根据权利要求1所述的从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法，其特征在于，所述步骤(1)中电场强度1～2KV/CM，能量100～300KJ/Kg，脉冲40～50Pulse。
3.根据权利要求1所述的从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法，其特征在于，所述步骤(1)中冷冻干燥温度为-30～-50℃，时间为48～72h。
4.根据权利要求1所述的从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法，其特征在于，所述步骤(2)中混合转速为1200～1700r/min，处理时间为5～12min。
5.根据权利要求1所述的从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法，其特征在于，所述步骤(2)中干燥样品与硅藻土的重量比为1:2-4。
6.根据权利要求1所述的从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法，其特征在于，所述步骤(3)中蒸馏水作为提取试剂，设置压力流体萃取的条件为预热1min，加热5min，氮气吹扫60s。
7.根据权利要求1所述的从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法，其特征在于，所述步骤(3)中萃取压力1000～1500psi，温度45～55℃，提取时间10～15min。
8.根据权利要求1所述的从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法，其特征在于，所述步骤(4)中冷冻干燥温度为-30～-50℃，时间为48～72h，粉末过筛60目。
9.根据权利要求1所述的从微藻细胞中快速提取高质量生物活性成分的方法，其特征在于，所述步骤(4)还包括对冷冻干燥粉碎后的粉末进行生物活性、蛋白质及多酚活性成分的分析。
10.权利要求1～9中任一项所述方法在微藻生物活性成分提取中的应用。
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