CN113717878B - 一种乙苯降解菌及其筛选方法和应用 - Google Patents

一种乙苯降解菌及其筛选方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113717878B
CN113717878B CN202110778024.XA CN202110778024A CN113717878B CN 113717878 B CN113717878 B CN 113717878B CN 202110778024 A CN202110778024 A CN 202110778024A CN 113717878 B CN113717878 B CN 113717878B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ethylbenzene
degradation
benzene
xylene
degrading
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110778024.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN113717878A (zh
Inventor
罗启仕
崔长征
张磊
常国兴
常玲
赵建锋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Shenglong Environmental Technology Co ltd
Original Assignee
Shanghai Shenglong Environmental Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Shenglong Environmental Technology Co ltd filed Critical Shanghai Shenglong Environmental Technology Co ltd
Priority to CN202110778024.XA priority Critical patent/CN113717878B/zh
Publication of CN113717878A publication Critical patent/CN113717878A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113717878B publication Critical patent/CN113717878B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2101/00—Nature of the contaminant
    • C02F2101/30—Organic compounds
    • C02F2101/32—Hydrocarbons, e.g. oil
    • C02F2101/322—Volatile compounds, e.g. benzene
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/20—Air quality improvement or preservation, e.g. vehicle emission control or emission reduction by using catalytic converters

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种乙苯降解菌及其筛选方法和应用，其为无色杆菌，命名为Achromobacter sp.ED‑2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.M 2021058，保藏时间为2021年1月14日。本发明的乙苯降解菌能在48h内能够完全降解100mg/L的乙苯，也能够降解苯，甲苯，间、对二甲苯，邻二甲苯。经液相色谱检测，该菌降解苯无中间产物代谢积累，且该菌降解效果稳定，对苯系物污染场地的生物净化实践过程提供支撑。

Description

一种乙苯降解菌及其筛选方法和应用
技术领域
本发明属于微生物处理降解技术领域，涉及一种乙苯降解菌及其筛选方法和应用。
背景技术
乙苯是一种毒性较强的芳香族化合物，是石油烃的组成成分。乙苯通常以石油提炼、塑料、树脂、农药生产和制药工业废水或废气的排放形式进入环境，史箴等人报道乙苯在湖泊、河流等水质监测中检出频率高达71.4％。美国环境保护署(US EPA 1996)发现，短期暴露于乙苯环境中(高于0.7ppm)会引起嗜睡、疲劳、头痛、轻度的眼睛和呼吸道刺激。长期接触乙苯会潜在地损害肝脏，肾脏，中枢神经系统和眼睛。因此，乙苯被认为是主要污染物之一。而且，乙苯与沉积物和土壤的结合力适中，如果释放到土壤中，会导致地下水污染。由于上述原因，迫切需要从环境中消除该污染物。
常规物理或化学去除乙苯的方法会产生二次污染问题，并且成本较高。因此，生物处理可作为含乙苯等有机化合物废水和污染土壤的另一种有效且环保治理手段。目前，人们已经分离出了多株单环芳烃降解菌。例如：CN101624576A公开了具有降解苯系化合物能力的分枝杆菌Mycobacterium cosmeticum byf-4及其应用，该菌在30℃、pH值7.2-7.4下能够降解苯、甲苯、乙苯以及邻二甲苯，当乙苯浓度高于200mg/L时该菌无法降解。CN101514329A公开了具有降解苯系化合物能力的淀粉芽孢杆菌Bacillusamyloliquefaciens byf-5及其应用，该菌在30℃、pH值8.0下能够降解苯、甲苯、乙苯以及邻二甲苯，当乙苯浓度高于125mg/L时，该菌被抑制基本无法降解乙苯。可见，现有的降解菌对乙苯等特定物质的降解效果均不是特别理想。
发明内容
本发明的目的就是为了提供一种乙苯降解菌及其筛选方法和应用，以克服上述技术存在对土壤及水体环境造成破坏，对低浓度苯污染物去除不够彻底，需要高成本，并且容易造成二次污染等问题。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
本发明的技术方案之一提供了一种乙苯降解菌，其为无色杆菌，命名为Achromobacter sp.ED-2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.M2021058，保藏时间为2021年1月14日。
进一步的，该乙苯降解菌革兰氏染色呈阴性，菌株形态无荚膜、无色杆菌，且在Luria-Bertani培养基上菌落形态规则，呈黄色、凸起、不透明和光滑。
本发明的技术方案之二提供了一种乙苯降解菌的筛选方法，包括以下步骤：
(1)将基础无机盐培养基、微量元素混合液和乙苯溶液混合，得到液体培养基；
(2)取来源于农药厂污染土壤的土壤样品置于一份液体培养基中，混合，得到含菌的第一混合液，培养后移取10％的第一混合液再转移至另一份液体培养基中，得到第二混合液，如此重复若干次，直至得到第n混合液，其中，n＝6-8；
(3)将所得第n混合液进行划线分离培养，即得到乙苯降解菌。
进一步的，步骤(1)中，所述的基础无机盐培养基中的无机盐成分至少包含：0.2g/L NH4Cl，7.95g/L NaCl，0.77g/L MgCl2·6H2O，1.05g/L MgSO4·7H2O，0.076g/L CaCl2，0.22g/L KCl，0.01g/L NaHCO3，0.026g/L NaBr，0.25g/L K2HPO4。
进一步的，步骤(1)中，所述的微量元素混合液中的溶质成分至少包括：0.15g/LZnSO4·7H2O，0.26g/L MnSO4·H2O，0.03g/L CoCl2·6H2O，4.5g/L FeSO4·7H2O，0.02g/LNiCl2·6H2O，0.01g/L CuCl2，0.1g/L Na2MoO4·2H2O，0.06g/L H3BO3。
进一步的，步骤(1)中，所述的乙苯溶液所用的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，其浓度为50g/L；
无机盐培养基，微量元素溶液，乙苯溶液添加体积比为106:103:2。
进一步的，步骤(2)中，制得第一混合液时，土壤样品与液体培养基的添加量之比为(3-6)g：20mL。
进一步的，步骤(2)中，培养过程在密闭条件下进行，温度为28℃，每次培养的时间为2-3d。
进一步的，步骤(3)中，分离培养过程具体为：取1mL第n混合液，加入至9mL灭菌的液体无机盐培养基中混匀，即10-1(即第n混合液的体积浓度变为1/10)，依次逐级梯度稀释至10-2(即第n混合液的体积浓度变为1/100)，10-3(即第n混合液的体积浓度变为1/1000)，10-4(即第n混合液的体积浓度变为1/10000)，10-5(即第n混合液的体积浓度变为1/100000)，并将稀释液在含乙苯的Luria-Bertani培养基平板上涂布，每个梯度3个平行，再用接种环挑取单菌落在Luria-Bertani培养基平板上线分离，划线分离重复2-3次，将获得的单菌接种到降解体系中验证降解能力，若观察到该菌能够利用乙苯为唯一碳源生长且乙苯浓度降低，即为乙苯降解菌。
本发明的技术方案之三提供了一种乙苯降解菌在降解苯系物中的应用。
本发明提供的乙苯降解菌是Achromobacter sp.ED-2，GenBank登录号为MW453094，保藏编号为CCTCC No.M 2021058。所述筛选方法包括：从农药厂周边污染土壤样品中，经驯化、分离和纯化后得到。本发明通过从农药厂周围提取污染土壤，并从中筛选出乙苯降解菌ED-2，该菌不仅能高效降解乙苯，对苯、甲苯也有较好的降解效果，对二甲苯也有一定的降解能力。通过上述乙苯降解菌ED-2对水中的苯系物进行降解，能达到去除污染物的目的，并且中间产物被彻底降解。该操作成本较低，对环境产生的负面影响小，具有很好的开发利用前景。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
图1为本发明提供的在150mL血清瓶中菌株降解乙苯的过程培养基随时间变浑浊的图片。
图2为本发明提供的乙苯降解菌株ED-2的菌落形态图。
图3为本发明提供的乙苯降解菌株ED-2的扫描电镜图。
图4为本发明中提供的乙苯降解菌株ED-2的降解特性图。
图5为本发明中提供的乙苯降解菌株ED-2降解苯的生长曲线与降解曲线图。
图6为本发明中提供的乙苯降解菌株ED-2降解苯过程的HPLC色谱图。
图7为本发明中提供的乙苯降解菌株ED-2的系统发育树。
图8为本发明中提供的乙苯降解菌株ED-2的降解底物图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。本实施例以本发明技术方案为前提进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
特别的，在本文中所披露范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
以下各实施例中，如无特别说明的原料或处理技术，即表明其均为本领域的常规市售原料或常规处理技术。
本发明的技术方案之一提供了一种乙苯降解菌，其为无色杆菌，命名为Achromobacter sp.ED-2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.M2021058，保藏时间为2021年1月14日。
进一步的，该乙苯降解菌革兰氏染色呈阴性，菌株形态无荚膜、无色杆菌，且在Luria-Bertani培养基上菌落形态规则，呈黄色、凸起、不透明和光滑。同时，对其进行了16SrDNA测序，所测得的16S rDNA序列进行BLAST比对，比对结果显示，菌株ED-2的16S rDNA的核苷酸序列与无色杆菌属(Achromobacter sp.)不同菌株的核苷酸序列有大于99％的同源性。
本发明的技术方案之二提供了一种乙苯降解菌的筛选方法，包括以下步骤：
(1)将基础无机盐培养基、微量元素混合液和乙苯溶液混合，得到液体培养基；
(2)取来源于农药厂污染土壤的土壤样品置于一份液体培养基中，混合，得到含菌的第一混合液，培养后移取10％的第一混合液再转移至另一份液体培养基中，得到第二混合液，如此重复若干次，直至得到第n混合液，其中，n＝6-8；
(3)将所得第n混合液进行划线分离培养，即得到乙苯降解菌。
进一步的，步骤(1)中，所述的基础无机盐培养基中的无机盐成分至少包含：0.2g/L NH4Cl，7.95g/L NaCl，0.77g/L MgCl2·6H2O，1.05g/L MgSO4·7H2O，0.076g/L CaCl2，0.22g/L KCl，0.01g/L NaHCO3，0.026g/L NaBr，0.25g/L K2HPO4。
进一步的，步骤(1)中，所述的微量元素混合液中的溶质成分至少包括：0.15g/LZnSO4·7H2O，0.26g/L MnSO4·H2O，0.03g/L CoCl2·6H2O，4.5g/L FeSO4·7H2O，0.02g/LNiCl2·6H2O，0.01g/L CuCl2，0.1g/L Na2MoO4·2H2O，0.06g/L H3BO3。
进一步的，步骤(1)中，所述的乙苯溶液所用的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，其浓度为50g/L。
进一步的，步骤(1)中，无机盐培养基，微量元素溶液，乙苯溶液添加体积比为106:103:2。
进一步的，步骤(2)中，制得第一混合液时，土壤样品与液体培养基的添加量之比为(3-6)g：20mL。同样的，从第一混合液中转移至第二混合液的量与第一混合液体积比可以是1:20至1:10，本发明不局限于此。
进一步的，步骤(2)中，培养过程在密闭条件下进行，温度为28℃，每次培养的时间为2-3d。
进一步的，步骤(2)的整个驯化过程中，所用工具可以根据实际情况具体选择，这里筛选所用的瓶子为150mL钳口血清瓶，用铝盖加垫片密封，其中所加液体为20-30mL，当然，本发明不局限于此。
进一步的，步骤(2)中，驯化条件可以根据实际情况具体选择。比如，这里适用的摇床转速可以是180r/min，培养过程在密闭条件下进行，温度为28℃，每次培养的时间为2-3d。
进一步的，步骤(3)中，分离培养过程具体为：取1mL第n混合液，加入至9mL灭菌的液体无机盐培养基中混匀，即10-1，依次逐级梯度稀释至10-2，10-3，10-4，10-5，并将稀释液在含乙苯的Luria-Bertani培养基平板上涂布，每个梯度3个平行，再用接种环挑取单菌落在Luria-Bertani培养基平板上线分离，划线分离重复2-3次，将获得的单菌接种到降解体系中验证降解能力，若观察到该菌能够利用乙苯为唯一碳源生长且乙苯浓度降低，即为乙苯降解菌。
本发明的技术方案之三提供了一种乙苯降解菌在降解苯系物中的应用。
以上各实施方式可以任一单独实施，也可以任意两两组合或更多的组合实施。
下面结合具体实施例来对上述实施方式进行更详细的说明。
实施例1：
菌株的获得
从安徽蚌埠某农药厂采取污染土壤装于棕色瓶中运回实验室，将土壤添加于培养基中制得混合物，通过筛选、驯化获得一株高效乙苯降解菌，对该菌株进行苯系物降解验证，发现该菌株能高效降解苯、甲苯和乙苯，对二甲苯也有一定的降解效果，并且该菌株具有稳定的传代特性。
该菌株革兰氏染色呈阴性，菌株形态无荚膜、无色杆菌。在Luria-Bertani培养基平板上菌落形态规则，黄色，微凸起，不透明的和光滑。
对其进行了16S rDNA测序，所测得的16S rDNA序列进行BLAST比对，比对结果显示，菌株ED-2的16S rDNA的核苷酸序列与无色杆菌属(Achromobacter sp.)不同菌株的核苷酸序列有大于99％的同源性。
该菌株已于2021年1月保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株代码：ED-2，保藏编号为CCTCC NO.M 2021058。
菌株的具体获得过程如下：
(1)将基础无机盐培养基、微量元素混合液和乙苯溶液混合，得到液体培养基；
(2)取来源于农药厂污染土壤的土壤样品置于一份液体培养基中，混合，得到含菌的第一混合液，培养后移取10％的第一混合液再转移至另一份液体培养基中，得到第二混合液，如此重复若干次，直至得到第n混合液，其中，n＝6；
(3)将所得第六混合液进行划线分离培养，即得到乙苯降解菌。
步骤(1)中，所述的基础无机盐培养基中的无机盐成分包含：0.2g/L NH4Cl，7.95g/L NaCl，0.77g/L MgCl2·6H2O，1.05g/L MgSO4·7H2O，0.076g/L CaCl2，0.22g/LKCl，0.01g/L NaHCO3，0.026g/L NaBr，0.25g/L K2HPO4。
步骤(1)中，所述的微量元素混合液中的溶质成分包括：0.15g/L ZnSO4·7H2O，0.26g/L MnSO4·H2O，0.03g/L CoCl2·6H2O，4.5g/L FeSO4·7H2O，0.02g/L NiCl2·6H2O，0.01g/L CuCl2，0.1g/L Na2MoO4·2H2O，0.06g/L H3BO3。
步骤(1)中，乙苯溶液(50g/L)所用的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺。
步骤(1)中，无机盐培养基，微量元素溶液，乙苯溶液添加体积比为106:103:2。
步骤(2)中，制得第一混合液时，土壤样品与液体培养基的添加量之比为(3-6)g：20mL。同样的，从第一混合液中转移至第二混合液的量与第一混合液的体积比可以是1:20至1:10，本发明不局限于此。
步骤(2)的整个驯化过程中，所用工具为150mL钳口血清瓶，用铝盖加垫片密封，其中所加液体一般为20-30mL。
步骤(2)中，驯化条件可以是180r/min，培养过程在密闭条件下进行，温度为28℃，每次培养的时间为2-3d左右。
步骤(3)中，稀释涂布分离培养过程具体为：取1mL第n次转接降解菌液，加入到9mL灭菌液体无机盐培养基中混匀即10-1，依次逐级梯度稀释至10-2，10-3，10-4，10-5，并在含乙苯的Luria-Bertani培养基平板上涂布，每个梯度3个平行，再用接种环挑取单菌落在Luria-Bertani培养基平板上线分离，如此重复2-3次，将获得的单菌接种到降解体系中验证降解能力，若观察到该菌能够利用乙苯为唯一碳源生长且乙苯浓度降低，即为乙苯降解菌。ED-2菌落形态如图2所示，形态规则，黄色，微凸起，不透明的和光滑。ED-2菌的主要形态如图3所示，ED-2菌呈无荚膜、无鞭毛、杆状。图7展示了ED-2与无色杆菌属其它菌的亲缘关系，ED-2与F4在发育树的同一支，表明其有较近的亲缘关系。
实施例2：
菌株降解特性(不同乙苯浓度、温度、pH、酵母粉浓度)的研究
ED-2于Luria-Bertani培养基扩大培养后，8000r/min离心5min，并用1％无机盐培养基重悬，洗去酵母粉等碳源，重复2次后总体积不变，在600nm波长条件下测定吸光值，并加入150mL血清瓶中，血清瓶中盛装20mL含有乙苯的无机盐培养基，降解体系中初始OD600值0.1。为防止乙苯挥发加盖密封，于28℃，180rpm，避光条件下振荡培养，分别改变乙苯浓度、pH值、酵母粉浓度、温度，48h时后取样，测定乙苯的残留浓度。
降解特性结果如图4所示，ED-2能够耐受300mg/L的乙苯，并在48h内完全降解50mg/L乙苯，ED-2在pH 6-9范围内都能很好的生长并且降解100mg/L的乙苯，少量酵母粉的添加能够促进乙苯的降解，并且在15℃低温条件下亦能降解乙苯，在37℃条件下降解效率最高，降解过程伴随着培养基变浑浊的过程，如图1所示。
实施例3：
菌株对废水中BTEX的降解研究
将20mL含有50mg/L BTEX(苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间/对二甲苯)的无机盐培养基置于150mL血清瓶中，接菌步骤同实施例1。为防止苯系物挥发加盖密封，于28℃，180rpm，避光条件下振荡培养，定时取样，测定BTEX的残留浓度。
图8显示ED-2在92h内完全降解50mg/L乙苯和甲苯，苯被降解76％，间、对二甲苯被降解57％，邻二甲苯被降解47％。
实施例4：
菌株对水体中高浓度乙苯及其产物的降解研究
取ED-2菌株在以含乙苯100mg/L的Luria-Bertani培养基中生长过夜。通过将洗涤过的细胞重悬于不含碳源的无机盐培养基中，并将悬浮液在28℃下搅拌后添加至20mL降解无机盐培养基中，培养基中含乙苯100mg/L，初始在600nm波长条件下吸光值为0.1。
视情况间隔取样分别测定乙苯残留浓度与产物分布情况，中间产物制备及检测方法参考Zhang等人(Zhang Lili,Zhang Chao,Cheng Zhuowei,Yao Yanlai,ChenJianmeng.Biodegradation of benzene,toluene,ethylbenzene,and o-xylene by thebacterium Mycobacterium cosmeticum byf-4,Chemosphere,2013(90):1340-1347.)报道的：用等体积的乙酸乙酯萃取上清液三次，合并的萃取物用无水硫酸钠干燥，并通过氮气流蒸发至干，然后将浓缩的样品重新溶解在乙腈中，通过孔径为0.22μm的有机相滤膜过滤。并使用带有Eclipse XDB-C18(5μm，4.6×250mm)的岛津HPLC-20A进行分析，流动相由CH3OH/0.1％乙酸组成，梯度洗脱，流速为1mL/min。
图5显示在28h内，乙苯被迅速消耗，99％的乙苯的被降解，同时中间产物快速生成(如图6所示)，细菌大量增殖，中间产物在第44h有最大的累积量，到第52h，乙苯被降解完全，在600nm波长条件下吸光值有所下降，推测是由于中间产物的消耗导致的。为了更好说明ED-2的优势，与几种乙苯降解菌进行了对比，由表1可知ED-2可以耐受更高浓度的乙苯，且降解速度较快，具有一定的优势。
表1几种乙苯降解菌降解特性对比
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 上海圣珑环境修复材料有限公司
<120> 一种乙苯降解菌及其筛选方法和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1394
<212> DNA
<213> Achromobacter sp.
<400> 1
tgcaagtcga acggcagcac ggacttcggt ctggtggcga gtggcgaacg ggtgagtaat 60
gtatcggaac gtgcccagta gcgggggata actacgcgaa agcgtagcta ataccgcata 120
cgccctacgg gggaaagcag gggatcgtaa gaccttgcac tattggagcg gccgatatcg 180
gattagctag ttggtggggt aacggctcac caaggcgacg atccgtagct ggtttgagag 240
gacgaccagc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg 300
gaattttgga caatggggga aaccctgatc cagccatccc gcgtgtgcga tgaaggcctt 360
cgggttgtaa agcacttttg gcaggaaaga aacgtcgcgg gttaatacct cgcgaaactg 420
acggtacctg cagaataagc accggctaac tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg 480
gtgcaagcgt taatcggaat tactgggcgt aaagcgtgcg caggcggttc ggaaagaaag 540
atgtgaaatc ccagagctta actttggaac tgcattttta actaccgggc tagagtgtgt 600
cagagggagg tggaattccg cgtgtagcag tgaaatgcgt agatatgcgg aggaacaccg 660
atggcgaagg cagcctcctg ggataacact gacgctcatg cacgaaagcg tggggagcaa 720
acaggattag ataccctggt agtccacgcc ctaaacgatg tcaactagct gttggggcct 780
tcgggccttg gtagcgcagc taacgcgtga agttgaccgc ctggggagta cggtcgcaag 840
attaaaactc aaaggaattg acggggaccc gcacaagcgg tggatgatgt ggattaattc 900
gatgcaacgc gaaaaacctt acctaccctt gacatgtctg gaatgccgaa gagatttggc 960
agtgctcgca agagaaccgg aacacaggtg ctgcatggct gtcgtcagct cgtgtcgtga 1020
gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca acccttgtca ttagttgcta cgaaagggca 1080
ctctaatgag actgccggtg acaaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca agtcctcatg 1140
gcccttatgg gtagggcttc acacgtcata caatggtcgg gacagagggt cgccaacccg 1200
cgagggggag ccaatcccag aaacccgatc gtagtccgga tcgcagtctg caactcgact 1260
gcgtgaagtc ggaatcgcta gtaatcgcgg atcagcatgt cgcggtgaat acgttcccgg 1320
gtcttgtaca caccgcccgt cacaccatgg gagtgggttt taccagaagt agttagccta 1380
accgcaaggg gggc 1394

Claims (2)

1.一种乙苯降解菌，其特征在于，其为无色杆菌，命名为Achromobacter sp. ED-2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO. M 2021058，保藏时间为2021年1月14日。
2.如权利要求1所述的一种乙苯降解菌在降解苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯和对二甲苯中的应用。
CN202110778024.XA 2021-07-09 2021-07-09 一种乙苯降解菌及其筛选方法和应用 Active CN113717878B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110778024.XA CN113717878B (zh) 2021-07-09 2021-07-09 一种乙苯降解菌及其筛选方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110778024.XA CN113717878B (zh) 2021-07-09 2021-07-09 一种乙苯降解菌及其筛选方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113717878A CN113717878A (zh) 2021-11-30
CN113717878B true CN113717878B (zh) 2023-08-18

Family

ID=78673121

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110778024.XA Active CN113717878B (zh) 2021-07-09 2021-07-09 一种乙苯降解菌及其筛选方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113717878B (zh)

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102876612A (zh) * 2012-10-12 2013-01-16 中国地质大学（北京） 苯作为基质共代谢降解1,1-dce菌种及其使用方法
CN104531600A (zh) * 2014-10-18 2015-04-22 浙江大学 一种vbnc联苯降解菌的分离筛选方法及应用
CN104805037A (zh) * 2015-02-09 2015-07-29 暨南大学 一株降解邻苯二甲酸二异辛酯的无色杆菌(Achromobacter sp. )MT-H
CN104845902A (zh) * 2015-02-09 2015-08-19 暨南大学 无色杆菌(Achromobacter sp.)MT-H在降解邻苯二甲酸二异辛酯中的应用
CN106939293A (zh) * 2017-04-19 2017-07-11 华南理工大学 一种木糖氧化无色杆菌gyp4及其在降解溴代阻燃剂中的应用
CN107418907A (zh) * 2017-04-11 2017-12-01 辽宁科技大学 一种降解汽油类石油烃的微生物菌剂及其使用方法
WO2019085370A1 (zh) * 2017-11-01 2019-05-09 广东工业大学 一株具有甲胺降解能力的梭状芽孢杆菌及其应用
WO2019091033A1 (zh) * 2017-11-07 2019-05-16 广东工业大学 一株具有一甲胺降解能力的无色杆菌及其应用
CN112251378A (zh) * 2020-10-22 2021-01-22 华东理工大学 一种苯系物降解菌及其筛选方法和应用
CN112899192A (zh) * 2021-02-04 2021-06-04 华东理工大学 一种btex降解菌及其筛选方法和应用

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102876612A (zh) * 2012-10-12 2013-01-16 中国地质大学（北京） 苯作为基质共代谢降解1,1-dce菌种及其使用方法
CN104531600A (zh) * 2014-10-18 2015-04-22 浙江大学 一种vbnc联苯降解菌的分离筛选方法及应用
CN104805037A (zh) * 2015-02-09 2015-07-29 暨南大学 一株降解邻苯二甲酸二异辛酯的无色杆菌(Achromobacter sp. )MT-H
CN104845902A (zh) * 2015-02-09 2015-08-19 暨南大学 无色杆菌(Achromobacter sp.)MT-H在降解邻苯二甲酸二异辛酯中的应用
CN107418907A (zh) * 2017-04-11 2017-12-01 辽宁科技大学 一种降解汽油类石油烃的微生物菌剂及其使用方法
CN106939293A (zh) * 2017-04-19 2017-07-11 华南理工大学 一种木糖氧化无色杆菌gyp4及其在降解溴代阻燃剂中的应用
WO2019085370A1 (zh) * 2017-11-01 2019-05-09 广东工业大学 一株具有甲胺降解能力的梭状芽孢杆菌及其应用
WO2019091033A1 (zh) * 2017-11-07 2019-05-16 广东工业大学 一株具有一甲胺降解能力的无色杆菌及其应用
CN112251378A (zh) * 2020-10-22 2021-01-22 华东理工大学 一种苯系物降解菌及其筛选方法和应用
CN112899192A (zh) * 2021-02-04 2021-06-04 华东理工大学 一种btex降解菌及其筛选方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN113717878A (zh) 2021-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tian et al. PAHs contamination and bacterial communities in mangrove surface sediments of the Jiulong River Estuary, China
Yu et al. Degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons by a bacterial consortium enriched from mangrove sediments
CN110317760B (zh) 一株PAHs-重金属复合污染降解/吸附菌及其在环境污染修复中的应用
CN110396488B (zh) 一种降解多环芳烃污染物的混合菌系及应用方法
CN112251378B (zh) 一种苯系物降解菌及其筛选方法和应用
CN110643534B (zh) 一株可降解磷酸三苯酯的失野口鞘氨醇菌
CN111748483B (zh) 一株石油烃降解芽孢杆菌及其应用
CN113637600B (zh) 一种高效石油烃降解菌及其筛选方法和应用
CN114410525B (zh) 一株对高环多环芳烃具有降解性的海杆菌及其应用
CN108300674B (zh) 一种石油降解菌及其获得方法和在降解原油中的应用
CN110669700A (zh) 一株高效石油烃降解菌pa16_9及其筛选方法与应用
CN110734877A (zh) 一株多环芳烃高效降解菌及其应用
CN113025524B (zh) 原油降解菌ss-21nj及其应用
CN113717878B (zh) 一种乙苯降解菌及其筛选方法和应用
CN117305153A (zh) 杆菌lh-hf0021及其微生物菌剂与用途
CN112899192B (zh) 一种btex降解菌及其筛选方法和应用
CN115873755A (zh) 一种氯苯降解菌及其在污染场地修复中的应用
CN115449498B (zh) 寡养单胞菌、菌剂及其降解芳香胺废水的方法和处理系统
CN113025535B (zh) 一株芽孢杆菌gdutan11及其在降解苯系物中的应用
CN117327613A (zh) 一种苯系物降解菌gx-6及其应用
CN116042484B (zh) 耐碱微生物菌pdc-1及其原位修复矿区有机污染土壤的应用
CN115725455B (zh) 一株α-萘酚降解细菌及其应用
CN117965372A (zh) 一株脱卤单胞菌及其在高盐度环境生物修复中的应用
CN114480189A (zh) 一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用
CN115725449A (zh) 微嗜酸寡养单胞菌在降解乙苯中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: Room 314, building 2, 100 Qinzhou Road, Xuhui District, Shanghai 200235

Applicant after: Shanghai Shenglong Environmental Technology Co.,Ltd.

Address before: Room 314, building 2, 100 Qinzhou Road, Xuhui District, Shanghai 200235

Applicant before: Shanghai Shenglong environmental remediation materials Co.,Ltd.

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant