CN107418907A - 一种降解汽油类石油烃的微生物菌剂及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的是为了开发处理汽油类石油烃的微生物法，提供了一种降解石油烃的微生物菌剂及其使用方法。该菌剂由微球菌、潘多拉菌和无色杆菌组成；较好的，所述微生物菌剂中微球菌：潘多拉菌：无色杆菌的个数比为(8～16)：(5～12)：(10～16)；或者，所述微球菌：潘多拉菌：无色杆菌的个数比为4:4:5；或者，所述微球菌：潘多拉菌：无色杆菌的个数比为2:1:2。所述降解石油烃的微生物菌剂使用方法为，利用所述菌剂降解汽油类石油烃或含有汽油类石油烃的废水或含有汽油类石油烃的土壤。通过该微生物菌剂处理后，汽油类石油烃可较快较完全地被降解，为解决汽油或其它石油烃类的环境污染问题提供了新思路。

Description

一种降解汽油类石油烃的微生物菌剂及其使用方法
技术领域
本发明属于环境污染治理领域，特别涉及一种降解石油烃的微生物菌剂及其使用方法。
背景技术
随着工业的不断发展，石油被作为主要能源之一以及主要原材料之一，出现在各行各业。但石油在开采、运输、加工等使用过程当中，由于泄露和错误排放等问题，使得土壤、河流、地下水、海洋等被石油污染，对生态环境带来了污染。
对石油烃类污染修复技术主要有物理法、化学法和微生物法。与物理修复、化学修复相比较，微生物修复技术是一种发展较为成熟的技术，且具有安全、高效、低成本、操作简单且不产生二次污染的优势，是一种环境友好型的污染处理技术。
汽油是一种复杂混合物，属于石油烃类中的一种，一般来说，原油中C4-C12的组份为汽油(沸点35～220℃)，是轻质石油产品之一。汽油类石油烃主要成分包括烃类化合物(直链烷烃、支链烷烃、环烷烃、芳香烃等)和非烃类化合物(含硫化合物、含氧化合物、含氮化合物)，烃类化合物所占比例较大(95％以上)。随着全国机动车保有量以每年平均12％的速度的逐年递增，汽油的使用量越来越大，带来的环境污染风险也越来越大。
因此，有必要对汽油类石油烃的微生物法进行进一步研究。
发明内容
本发明的目的是为了开发处理汽油类石油烃的微生物法，提供了一种降解石油烃的微生物菌剂及其使用方法。该菌剂由微球菌、潘多拉菌和无色杆菌组成，通过该微生物菌剂处理后，汽油类石油烃可较快较完全地被降解，为解决汽油或其它石油烃类的环境污染问题提供了新思路。
为了实现本发明的目的，本发明的技术方案之一为，一种降解石油烃的微生物菌剂，以微球菌(Micrococcus sp.)JWJ-02、潘多拉菌(Pandoraea sp.)JWJ-06和无色杆菌(Achromobacter sp.)JWJ-09为活性成分，所述三种菌种以任意比例混合，菌剂中还可以含有培养基等非活性成分；
较好的，所述微生物菌剂中微球菌：潘多拉菌：无色杆菌的个数比为(8～16)：(5～12)：(10～16)；
更好的，所述微生物菌剂中微球菌：潘多拉菌：无色杆菌的个数比为4:4:5；或者，微球菌：潘多拉菌：无色杆菌的个数比为2:1:2；
所述的微球菌(Micrococcus sp.)JWJ-02，简称微球菌JWJ-02，保藏编号CGMCCNo.13557，保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏时间2017年01月11日，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；用于降解汽油类石油烃或处理含有汽油类石油烃的废水或处理含有汽油类石油烃的土壤；
所述的潘多拉菌(Pandoraea sp.)JWJ-06，简称潘多拉菌JWJ-06，保藏编号：CGMCCNo.13558，保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏时间2017年01月11日，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；用于降解汽油类石油烃或处理含有汽油类石油烃的废水或处理含有汽油类石油烃的土壤；
所述的无色杆菌(Achromobacter sp.)JWJ-09，简称无色杆菌JWJ-09，保藏编号：CGMCC No.13559，保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏时间2017年01月11日，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；用于降解汽油类石油烃或处理含有汽油类石油烃的废水或处理含有汽油类石油烃的土壤。
本发明的技术方案之二为，上述微生物或微生物菌剂的无机盐培养基，其配比为，MgSO4·7H2O：0.5g～0.7g，无水CaCl2：0.1g～0.15g，KH2PO4：0.26～0.35g，NH4NO3：0.76～1.03g，FeCl3·6H2O：0.01～0.02g，加入蒸馏水至1000mL；培养基的pH值范围为6～8。
本发明的技术方案之三为，上述微生物菌剂的微量元素培养液，其配比为，KI：0.05g/L，MnSO4·H2O：1.36g/L，CuSO4·5H2O：0.255g/L，ZnSO4·7H2O：2g/L，Na2MoO4·2H2O：1.25g/L，H3BO3：0.08g/L；
上述微量元素培养液的使用量为每100mL微生物菌剂培养基添加0.05～0.1mL。
本发明的技术方案之四为，上述微生物菌剂的使用方法，即利用所述微生物菌剂降解汽油类石油烃或处理含有汽油类石油烃的废水或处理含有汽油类石油烃的土壤，其具体步骤为：
1)将汽油类石油烃或含有汽油类石油烃的废水或含有汽油类石油烃的土壤加入到含有微量元素培养液和微生物菌剂的无机盐培养基中；
其中，所述的汽油类石油烃的添加量与培养基的体积比为(0.35～1.2)：100；
所述废水与培养基的体积比为(0.35～20)：100，其中，废水中的汽油类石油烃与培养基的体积比为(0.35～1.2)：100；
所述土壤与培养基的比例为(1～20)g：100mL，其中，土壤中的汽油类石油烃与培养基的体积比为(0.35～1.2)：100；
所述微生物菌剂的初始接种量总数为每mL培养基接种1～11.7×105个；
所述微量元素培养液添加量为每升无机盐培养基加入0.5～1mL；
2)将步骤1)中的无机盐培养基置于摇床上，于28℃～32℃下培养96～120h，并保持培养基的pH值为6～8，使无机盐培养基中的微生物菌剂降解汽油类石油烃。
本发明的技术方案之五为，上述微生物的选育方法，包括如下步骤：
1)取采自抚顺石化公司石油三厂水净化车间曝气池或生物膜的水样，作为筛选目标菌的来源；
2)配制选育培养基
无机盐选育培养基：MgSO4·7H2O 0.5g，CaCl2 0.02g，KH2PO4 1.0g，NH4NO3 1.0g，FeCl3 0.05g，加蒸馏水至1000mL，pH＝7；
甲苯液体培养基：无机盐选育培养基加入适量甲苯；
萘液体培养基：无机盐选育培养基加入适量萘；
正十六烷液体培养基：无机盐选育培养基加入适量正十六烷；
正十六烷固体培养基：在无机盐选育培养基的基础上，加入适量琼脂和正十六烷；
将上述培养基灭菌处理；
3)菌种的分离
通过两种途径分离目标菌：
3.1)液体培养基分离：将水样加入到正十六烷液体培养基中，摇床培养，待培养基浑浊后转接，经过数次培养筛选，最后用涂布法接种于正十六烷平板固体培养基中，从中挑选出生长好的菌株；
3.2)平板直接分离：将水样用涂布法接种于正十六烷固体培养基中，再将平板放于恒温培养箱中培养，从中挑选出生长快、生长好的菌株；
4)菌种的纯化
将步骤3)挑选的菌株采用正十六烷固体培养基平板划线法纯化，筛选出长势好的单菌落；
5)目标菌的筛选
将步骤4)筛选的单菌落的菌种分别接种到含甲苯、萘、正十六烷的液体培养基中，培养数天后，以菌种对甲苯、萘、正十六烷的降解率来评价菌株的降解能力，从而筛选出高效的石油烃类降解菌微球菌JWJ-02、潘多拉菌JWJ-06和无色杆菌JWJ-09。
与现有技术相比，本发明的优势在于：
三种菌对烷烃类和烯烃类均有良好的降解能力，其中，特别的，微球菌对于含有一个苯环和两个苯环的芳烃有良好的降解能力；潘多拉菌对于含有一个苯环的芳烃有良好的降解能力；无色杆菌对于含有一个苯环和两个苯环的芳烃有良好的降解能力，因而在三种菌的协同作用下，对汽油类石油烃的降解更完全。经GC-MS检测分析，三种菌构成的菌剂对于汽油类石油烃中的链状烷烃、环烷烃、环烯烃、C1～C10烷烃、C10以上烷烃、含有一个苯环的芳烃物质在0～72h几乎完成转化，其中环烷烃、环烯烃和C1～C10的烷烃物质全部消失，对于链状烯烃和苯环支链含双键或三键类物质在72～120h基本完成转化，且链状烯烃完全消失，对于有机含氧化合物在0～48h基本完成转化。
具体实施方式
以下实施例中所用的微球菌JWJ-02、潘多拉菌JWJ-06和无色杆菌JWJ-09的选育方法为：
1)取采自抚顺石化公司石油三厂的水净化车间曝气池或生物膜的水样，作为筛选目标菌的来源。
2)配制选育培养基
无机盐选育培养基：MgSO4·7H2O 0.5g，CaCl2 0.02g，KH2PO4 1.0g，NH4NO3 1.0g，FeCl3 0.05g，加蒸馏水至1000mL，pH＝7。
甲苯液体培养基：无机盐选育培养基加入0.2％(v/v)甲苯。
萘液体培养基：无机盐选育培养基加入0.01g/L萘。
正十六烷液体培养基：无机盐选育培养基加入0.5％(v/v)正十六烷。
正十六烷固体培养基：在无机盐选育培养基的基础上，加入琼脂15g/L，正十六烷1.5mL/L。
以上培养基灭菌条件：121℃条件下灭菌30min。
3)菌种的分离
通过两种途径分离目标菌：
3.1)液体培养基分离：将正十六烷液体培养基200mL放入锥形瓶中，在无菌条件下加入上述水样5mL，在30℃，120r/min条件下摇床培养3天，正十六烷液体培养基明显变混浊，此后3天转接一次，不断重复该过程经过21天的培养筛选，最后用涂布法接种于正十六烷平板固体培养基中，从中挑选出生长好的菌种；
3.2)平板直接分离：将正十六烷固体培养基制成平板，在无菌条件下接1mL的上述水样用涂布法接种于正十六烷固体培养基中；将平板倒放于30℃恒温培养箱中培养，从中挑选出生长快、生长好的菌种。
4)菌种的纯化
菌种纯化选择的是正十六烷固体培养基平板划线法；
将步骤3)挑选的菌种平板划线，为了得到更加纯化的菌株，反复用正十六烷固体培养基的平板转接纯化多次，直到纯化完全；根据菌种在正十六烷固体培养基中的生长状况，筛选出长势良好的单菌落，并编号。
5)目标菌的筛选
将步骤4)筛选的单菌落的菌种分别接种到上述含甲苯、萘、正十六烷的液体培养基中，30℃恒温振荡培养数天，含空白样；以菌种对甲苯、萘、正十六烷降解率来定量评价菌株的降解能力，从而筛选出高效石油烃类降解菌微球菌JWJ-02、潘多拉菌JWJ-06和无色杆菌JWJ-09。
筛选出的微球菌JWJ-02的形态学如下：
菌体形态为椭圆形、体内透明且内部有红色斑点，菌体大小为1.25～2.5微米；菌落形态为圆形，菌落大小为0.5mm，颜色呈现白色。
培养学如下：
革兰氏染色呈阳性，兼性好氧菌，异养菌，不运动。
生理特性如下：
接触酶实验呈阳性反应；利用葡萄糖可发酵产酸、不产气；油脂实验呈阳性反应；甲基红实验呈阳性反应；乙酰甲基醇实验呈阳性反应；硝酸盐还原实验呈阳性反应；产硫化氢实验为阴性反应。
筛选出的潘多拉菌JWJ-06的形态学如下：
菌体形态为球形，菌体大小为1.25微米；菌落形态为圆形，菌落大小为1～1.5mm，颜色呈现白色。
培养学如下：
革兰氏染色呈阴性，好氧异养菌，不运动。
生理特性如下：
接触酶实验呈阳性反应；利用葡萄糖可发酵产酸、产气；油脂实验呈阴性反应；甲基红实验呈阴性反应；乙酰甲基醇实验呈阳性反应；硝酸盐还原实验呈阳性反应；产硫化氢实验为阴性反应。
筛选出的无色杆菌JWJ-09的形态学如下：
菌体形态为杆形，菌体大小为1.25微米×5微米；菌落形态为圆形，菌落大小为1mm，颜色呈现金黄色。
培养学如下：
革兰氏染色呈阴性，兼性好氧菌，异养菌，能运动。
生理特性如下：
接触酶实验呈阳性反应；利用葡萄糖可氧化产酸、不产气；油脂实验呈阳性反应；甲基红实验呈阳性反应；乙酰甲基醇实验呈阴性反应；硝酸盐还原实验呈阳性反应；产硫化氢实验为阴性反应。
以下实施例中采用的无机盐培养基，其配比为，MgSO4·7H2O：0.5g～0.7g，无水CaCl2：0.1g～0.15g，KH2PO4：0.26～0.35g，NH4NO3：0.76～1.03g，FeCl3·6H2O：0.01～0.02g，加入蒸馏水至1000mL；培养基的pH值范围为6～8。
以下实施例中采用的微量元素培养液，其配比为，KI：0.05g/L，MnSO4·H2O：1.36g/L，CuSO4·5H2O：0.255g/L，ZnSO4·7H2O：2g/L，Na2MoO4·2H2O：1.25g/L，H3BO3：0.08g/L。
实施例1
一种降解石油烃的微生物菌剂，由微球菌JWJ-02、潘多拉菌JWJ-06和无色杆菌JWJ-09组成，其中，三者的个数比为4：4：5。
上述微生物菌剂的使用方法为，在无菌条件下，在培养瓶中加入无机盐培养液100mL，微量元素培养液0.1mL，汽油0.5mL，再接种入降解汽油类石油烃的微生物菌剂，微球菌、潘多拉菌和无色杆菌初始接种总个数分别为6×106个、6×106个和7.5×106个；将培养瓶于摇床上培养，摇床转速120rad/min，保持培养基pH值为6～7，温度29±1℃，培养时间120h，测得汽油降解率为87.6％。
经GC-MS检测分析，该菌对于汽油类石油烃中的链状烷烃、环烷烃、环烯烃、C1～C10烷烃、C10以上烷烃、含有一个苯环的芳烃物质在0～72h几乎完成转化，其中环烷烃、环烯烃和C1～C10的烷烃物质全部消失，对于链状烯烃和苯环支链含双键或三键类物质在72～120h基本完成转化，且链状烯烃完全消失，对于有机含氧化合物在0～48h基本完成转化。
对比例1
在无菌条件下，在培养瓶中加入无机盐培养液100mL，汽油0.5mL，微球菌JWJ-02初始接种总个数为1.95～2×107个；在摇床上，摇床转速120rad/min，保持培养基的pH值为6～7，温度29±1℃，培养时间120h，测得汽油降解率为60.3％。
对比例2
在无菌条件下，在培养瓶中加入无机盐培养液100mL，汽油0.5mL，潘多拉菌JWJ-06初始接种总个数为1.95～2×107个；在摇床上，摇床转速120rad/min，保持培养基的pH值为6～7，温度29±1℃，培养时间120h，测得汽油降解率为53.2％。
对比例3
在无菌条件下，在培养瓶中加入无机盐培养液100mL，汽油0.5mL，无色杆菌JWJ-09初始接种总个数为1.95～2×107个；在摇床上，摇床转速120rad/min，保持培养基的pH值为6～7，温度29±1℃，培养时间120h，测得汽油降解率为59.2％。
实施例2
一种降解石油烃的微生物菌剂，由微球菌JWJ-02、潘多拉菌JWJ-06和无色杆菌JWJ-09组成，其中，三者的个数比为4：2：4。
上述微生物菌剂的使用方法为，在无菌条件下，在100mL无机盐培养基中添加微量元素培养液0.1mL，加入汽油1.2mL，再接种入降解汽油类石油烃的微生物菌剂，微球菌、潘多拉菌和无色杆菌接种总个数分别为3.6×107个、1.8×107个和3.6×107个；在摇床上，摇床转速120rad/min，保持培养基的pH值为7～8，温度31±1℃，培养时间120h，测得汽油降解率为80.9％。
实施例3
一种降解石油烃的微生物菌剂，由微球菌JWJ-02、潘多拉菌JWJ-06和无色杆菌JWJ-09组成，其中，三者个数比为4：3：4。
上述微生物菌剂的使用方法为，在无菌条件下，在100mL无机盐培养基中添加微量元素培养液0.05mL，加入汽油0.35mL，再接种入降解汽油类石油烃的微生物菌剂，微球菌、潘多拉菌和无色杆菌接种总个数分别为2.8×107个、2.1×107个和2.8×107个；在摇床上，摇床转速120rad/min，保持培养基的pH值为7～8，温度30±1℃，培养时间96h，测得汽油降解率为81.7％。
实施例4
一种降解石油烃的微生物菌剂，由微球菌JWJ-02、潘多拉菌JWJ-06和无色杆菌JWJ-09组成，其中，三者的个数比为8：5：10。
上述微生物菌剂的使用方法为，在无菌条件下，在100mL无机盐培养基中添加微量元素培养液0.75mL，加入汽油0.75mL，再接种入降解汽油类石油烃的微生物菌剂，微球菌、潘多拉菌和无色杆菌接种总个数分别为2×107个、1.3×107个和2.5×107个；在摇床上，摇床转速120rad/min，保持培养基的pH值为6～8，温度30±1℃，培养时间120h，测得汽油降解率为88.3％。
实施例5
一种降解石油烃的微生物菌剂，由微球菌JWJ-02、潘多拉菌JWJ-06和无色杆菌JWJ-09组成，其中，三者个数比为4：4：5。
上述微生物菌剂的使用方法为，在无菌条件下，在100mL无机盐培养基中添加微量元素培养液0.05mL和20mL含有石油烃的废水，经检测，废水中石油烃的含量为3％，再接种入降解汽油类石油烃的微生物菌剂，微球菌、潘多拉菌和无色杆菌接种总个数分别为3.6×107个、3.6×107个和4.5×107个；在摇床上，摇床转速120rad/min，保持培养基的pH值为7～8，温度30±1℃，培养时间108h，测得石油烃类降解率为93.2％。
实施例6
一种降解石油烃的微生物菌剂，由微球菌JWJ-02、潘多拉菌JWJ-06和无色杆菌JWJ-09组成，其中，三者的个数比为4:2:4。
上述微生物菌剂的使用方法为，在无菌条件下，在100mL无机盐培养基中添加微量元素培养液0.1mL和5g含有汽油类石油烃的土壤，经检测，5g土壤中含有1.0mL的汽油类石油烃，再接种入降解汽油类石油烃的微生物菌剂，微球菌、潘多拉菌和无色杆菌接种总个数分别为4×106个、2×106个和4×106个；在摇床上，摇床转速120rad/min，保持培养基的pH值为6～8，温度30±1℃，培养时间120h，测得汽油降解率为74.5％。

Claims (10)

1.一种降解石油烃的微生物，其特征在于，所述的微生物为微球菌JWJ-02，保藏编号CGMCC No.13557，用于降解汽油类石油烃或处理含有汽油类石油烃的废水或处理含有汽油类石油烃的土壤；或者，所述的微生物为潘多拉菌JWJ-06，保藏编号：CGMCC No.13558，用于降解汽油类石油烃或处理含有汽油类石油烃的废水或处理含有汽油类石油烃的土壤；或者，所述的微生物为无色杆菌JWJ-09，藏编号：CGMCC No.13559，用于降解汽油类石油烃或处理含有汽油类石油烃的废水或处理含有汽油类石油烃的土壤。
2.一种降解石油烃的微生物菌剂，其特征在于，以微球菌JWJ-02、潘多拉菌JWJ-06和无色杆菌JWJ-09为活性成分。
3.根据权利要求2所述的一种降解石油烃的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂中微球菌JWJ-02：潘多拉菌JWJ-06：无色杆菌JWJ-09的个数比为(8～16)：(5～12)：(10～16)。
4.根据权利要求2或3所述的一种降解石油烃的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂中微球菌JWJ-02：潘多拉菌JWJ-06：无色杆菌JWJ-09的个数比为4:4:5，或者，微球菌JWJ-02：潘多拉菌JWJ-06：无色杆菌JWJ-09的个数比为2:1:2。
5.一种权利要求1所述的微生物或权利要求2～4所述的微生物菌剂的无机盐培养基，其特征在于，其配比为，MgSO4·7H2O：0.5g～0.7g，无水CaCl2：0.1g～0.15g，KH2PO4：0.26～0.35g，NH4NO3：0.76～1.03g，FeCl3·6H2O：0.01～0.02g，加入蒸馏水至1000mL；培养基的pH值范围为6～8。
6.一种权利要求2～4所述的降解石油烃的微生物菌剂的微量元素培养液，其特征在于，其配比为，KI：0.05g/L，MnSO4·H2O：1.36g/L，CuSO4·5H2O：0.255g/L，ZnSO4·7H2O：2g/L，Na2MoO4·2H2O：1.25g/L，H3BO3：0.08g/L；
所述微量元素培养液的使用量为每100mL微生物菌剂培养基添加0.05～0.1mL。
7.一种权利要求2～4所述的降解石油烃的微生物菌剂的使用方法，其特征在于，利用所述菌剂降解汽油类石油烃或处理含有汽油类石油烃的废水或处理含有汽油类石油烃的土壤。
8.根据权利要求7所述的一种降解石油烃的微生物菌剂的使用方法，其特征在于，利用所述菌剂降解汽油类石油烃或处理含有汽油类石油烃的废水或处理含有汽油类石油烃的土壤的具体步骤为：
1)将汽油类石油烃或含有汽油类石油烃的废水或含有汽油类石油烃的土壤加入到含有微量元素培养液和微生物菌剂的无机盐培养基中；
2)将步骤1)中的无机盐培养基置于摇床上，于28℃～32℃下培养96～120h，并保持培养基的pH值为6～8，使无机盐培养基中的菌剂降解汽油类石油烃。
9.根据权利要求8所述的一种降解石油烃的微生物菌剂的使用方法，其特征在于，步骤1)中，所述的汽油类石油烃与培养基的体积比为(0.35～1.2)：100；
所述废水与培养基的体积比为(0.35～20)：100，其中，废水中的汽油类石油烃与培养基的体积比为(0.35～1.2)：100；
所述土壤与培养基的比例为(1～20)g：100mL，其中，土壤中的汽油类石油烃与培养基的体积比为(0.35～1.2)：100；
所述微生物菌剂的初始接种量总数为每mL培养基接种1～11.7×105个；
所述微量元素培养液添加量为每升无机盐培养基加入0.5～1mL。
10.一种降解石油烃的微生物的选育方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)取采自抚顺石化公司石油三厂水净化车间曝气池或生物膜的水样，作为筛选目标菌的来源；
2)配制选育培养基
无机盐选育培养基：MgSO4·7H2O 0.5g，CaCl2 0.02g，KH2PO4 1.0g，NH4NO31.0g，FeCl30.05g，加蒸馏水至1000mL，pH＝7；
甲苯液体培养基：无机盐选育培养基加入适量甲苯；
萘液体培养基：无机盐选育培养基加入适量萘；
正十六烷液体培养基：无机盐选育培养基加入适量正十六烷；
正十六烷固体培养基：在无机盐选育培养基的基础上，加入适量琼脂和正十六烷；
将上述培养基灭菌处理；
3)菌种的分离
通过两种途径分离目标菌：
3.1)液体培养基分离：将水样加入到正十六烷液体培养基中，摇床培养，待培养基浑浊后转接，经过数次培养筛选，最后用涂布法接种于正十六烷平板固体培养基中，从中挑选出生长好的菌种；
3.2)平板直接分离：将水样用涂布法接种于正十六烷固体培养基中，再将平板放于恒温培养箱中培养，从中挑选出生长快、生长好的菌种；
4)菌种的纯化
将步骤3)挑选的菌种采用正十六烷固体培养基平板划线法纯化，筛选出长势好的单菌落；
5)目标菌的筛选
将步骤4)筛选的单菌落的菌种分别接种到含甲苯、萘、正十六烷的液体培养基中，培养数天后，以菌种对甲苯、萘、正十六烷的降解率来评价菌种的降解能力，从而筛选出降解石油烃的微球菌JWJ-02、潘多拉菌JWJ-06和无色杆菌JWJ-09。
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