CN113646312B

CN113646312B - 固体形式的brd4抑制剂化合物及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN113646312B
Application number: CN202080022188.3A
Authority: CN
Inventors: 沈春莉; 刘勇; 卞桓钰; 吴成德; 吴家虎
Original assignee: CSPC Zhongqi Pharmaceutical Technology Shijiazhuang Co Ltd
Current assignee: CSPC Zhongqi Pharmaceutical Technology Shijiazhuang Co Ltd
Priority date: 2019-03-22
Filing date: 2020-03-23
Publication date: 2022-12-06
Anticipated expiration: 2040-03-23
Also published as: EP3943498A4; CA3134071A1; AU2020248834B2; AU2020248834A1; EP3943498A1; US20220185820A1; CN113646312A; KR20210151841A; JP2022536574A; WO2020192637A1

Abstract

一种作为BRD4抑制剂的式(1)所示化合物的固体形式、晶型及其制备方法，以及其在制备治疗BRD4相关疾病药物中的应用。(I)

Description

固体形式的BRD4抑制剂化合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种作为小分子BRD4抑制剂的式(I)所示化合物的固体形式、晶型及其制备方法，并涉及其在制备治疗BRD4相关病症的药物中的应用。

背景技术

组蛋白乙酰化可以调控基因转录及染色体结构，在表观遗传中起到重要作用，BET(bromodomain and extra-terminal domain)蛋白作为组蛋白乙酰化识别基因的“reader”，能特异性与乙酰化修饰的赖氨酸结合，并招募其它转录因子，通过参与蛋白与蛋白相互作用形成介体复合物、磷酸化RNA聚合酶，进而激活基因转录调控c-Myc等下游基因。癌细胞增殖高度依赖于特定的基因(如c-Myc)，特定基因表达的增强对癌细胞的增殖起到重要的作用。研究表明，肿瘤细胞对于特定基因的过度依赖性，使得它们对BET抑制剂非常敏感。BET抑制剂的存在，阻碍了BET蛋白与组蛋白乙酰化的赖氨酸结合，从而阻断了转录因子对Myc的表达抑制了肿瘤的生长。

BET蛋白家族包含4个成员：BRD2、BRD3、BRD4和BRDT，每个成员都包括两段N-末端串联(BD1和BD2)，一段额外的末端基团(ET)，几组保守的区域(A，B，SEED区域)和一个C-末端区域(CTM)。其中研究最多最广的是BRD4，目前研究发现许多血液肿瘤包括淋巴瘤(例如急性骨髓淋巴瘤等)、白血病(例如急性成淋巴细胞性白血病等)、骨髓瘤(例如多种骨髓瘤等)及神经细胞瘤、胶质瘤、乳腺癌(例如三阴乳腺癌等)、胃肠肿瘤(例如结直肠癌等)及前列腺癌等实体瘤的发生都与BRD4的过度表达有关，但目前还没有以BRD4为靶点的药物上市。

发明内容

一方面，本发明提供了固体形式的式(I)所示化合物，

本发明的一些方案中，上述固体形式为结晶形式。

本发明的一些方案中，上述结晶形式为式(I)化合物的A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：7.03±0.2°，11.28±0.2°，14.00±0.2°。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：7.03±0.2°，11.28±0.2°，20.07±0.2°。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：7.03±0.2°，19.48±0.2°，20.07±0.2°，26.05±0.2°。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：7.03±0.2°，11.28±0.2°，17.31±0.2°，19.48±0.2°，20.07±0.2°，26.05±0.2°。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：7.03±0.2°，11.28±0.2°，14.00±0.2°，15.11±0.2°，17.31±0.2°，19.48±0.2°，20.07±0.2°，22.86±0.2°。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：7.03±0.2°，11.28±0.2°，14.00±0.2°，15.11±0.2°，17.31±0.2°，19.48±0.2°，20.07±0.2°，26.05±0.2°。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：7.03±0.2°，11.28±0.2°，12.39±0.2°，14.00±0.2°，15.11±0.2°，17.31±0.2°，19.48±0.2°，20.07±0.2°，22.86±0.2°，26.05±0.2°。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：7.03±0.2°，11.28±0.2°，12.39±0.2°，14.00±0.2°，14.87±0.2°，15.11±0.2°，17.31±0.2°，19.48±0.2°，20.07±0.2°，22.86±0.2°。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：7.03±0.2°，11.28±0.2°，12.39±0.2°，14.00±0.2°，14.87±0.2°，15.11±0.2°，17.31±0.2°，19.48±0.2°，20.07±0.2°，22.86±0.2°，26.05±0.2°。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：7.03±0.2°，11.28±0.2°，12.39±0.2°，14.00±0.2°，14.87±0.2°，15.11±0.2°，17.31±0.2°，17.68±0.2°，19.48±0.2°，20.07±0.2°，22.86±0.2°。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：7.03±0.2°，11.28±0.2°，12.39±0.2°，14.00±0.2°，14.87±0.2°，15.11±0.2°，17.31±0.2°，17.68±0.2°，19.48±0.2°，20.07±0.2°，22.86±0.2°，26.05±0.2°。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其XRPD图谱基本上如图1所示。

本发明的一些方案中，上述A晶型的XRPD图谱解析数据如表1所示：

表1 式(I)化合物A晶型的XRPD解析数据

本发明的一些方案中，上述A晶型，其差示扫描量热曲线在289.22±3℃有一个吸热峰的起始点。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其DSC图谱基本上如图2所示。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其热重分析曲线在300.00±3℃处失重达1.626％。

本发明的一些方案中，上述A晶型，其TGA图谱基本上如图3所示。

本发明的一些方案中，上述结晶形式为式(I)化合物的B晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：5.50±0.2°，8.36±0.2°，11.87±0.2°。

本发明的一些方案中，上述B晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：5.50±0.2°，8.36±0.2°，12.66±0.2°。

本发明的一些方案中，上述B晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：5.50±0.2°，8.36±0.2°，11.87±0.2°，12.39±0.2°，12.66±0.2°，15.11±0.2°，17.35±0.2°，18.70±0.2°。

本发明的一些方案中，上述B晶型，其XRPD图谱基本上如图4所示。

本发明的一些方案中，上述B晶型的XRPD图谱解析数据如表2所示。

表2 式(I)化合物B晶型的XRPD解析数据

另一方面，本发明还提供了上述固体形式的式(I)所示化合物的制备方法，其中所述固体形式为A晶型，包括：

(1)将式(I)化合物加入溶剂中，使其成混悬液或溶液；

(2)上述混悬液或溶液于恒温混匀仪中，搅拌后分离，干燥，得到式(I)化合物的A晶型。

本发明的一些方案中，上述的制备方法，其中，步骤(2)中所述分离为离心或过滤。

本发明的一些方案中，上述的制备方法，其中，步骤(2)中所述分离为离心。

本发明的一些方案中，上述的制备方法，其中，所述溶剂为选自C_1-4烷基-O-C_1-4烷基、C_1-4烷基C(＝O)OC_1-4烷基、C_1-4烷基-CN、C_1-4烷基-OH或C_1-4烷基C(＝O)C_1-4烷基的单一溶剂。

本发明的一些方案中，上述的制备方法，其中，所述单一溶剂为甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、丙酮、甲醇或甲乙酮。

本发明的一些方案中，上述的制备方法，其中，所述溶剂为C_1-4烷基C(＝O)C_1-4烷基和水，或者C_1-4烷基-OH和水组成的混合溶剂。

本发明的一些方案中，上述的制备方法，其中，所述C1_-4烷基C(＝O)C_1-4烷基和水组成的混合溶剂中，所述C_1-4烷基C(＝O)C_1-4烷基和水的体积比为1-5∶1，优选为2∶1；或者所述C_1-4烷基-OH和水组成的混合溶剂中，所述C_1-4烷基-OH和水的体积比为1-5∶1，优选为3∶1。

本发明的一些方案中，上述的制备方法，其中，所述混合溶剂为丙酮和水，或者乙醇和水组成的混合溶剂。

本发明的一些方案中，上述的制备方法，其中，所述混合溶剂为体积比为2∶1的丙酮-水，或者体积比为3∶1的乙醇-水组成的混合溶剂。

上述术语“C_1-4烷基”指的是任意的含有1-4个碳原子的直链或支链基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等。且各“C_1-4烷基”可以相同，也可以不同。

本发明的一些方案中，上述的制备方法，其中，化合物与溶剂的重量-体积比为1g∶5～15mL，或者为1g∶5～12mL，或者为1g∶5-10mL。

本发明的一些方案中，上述的制备方法，其中，搅拌温度为25℃～45℃。

本发明的一些方案中，上述的制备方法，其中，搅拌时间为12小时～50小时，或者为12小时-48小时，或者为12小时-24小时。

另一方面，本发明还提供了上述固体形式的式(I)所示化合物的制备方法，其中所述固体形式为B晶型，包括：

(1)将式(I)化合物加入溶剂中，使其成混悬液或溶液；

(2)上述混悬液或溶液于恒温混匀仪中，搅拌后分离，干燥，得到式(I)化合物的B晶型。

本发明的一些方案中，上述的制备方法，其中，所述溶剂选自四氢呋喃。

本发明的一些方案中，上述的制备方法，其中，化合物与溶剂的重量-体积比为1g∶5～10mL。

另一方面，本发明提供了一种药物组合物，包含上述固体形式的式(I)化合物或任意两种或两种以上的结晶混合物。

另一方面，本发明还提供了上述固体形式的式(I)所示化合物或上述药物组合物在制备治疗BRD4相关病症的药物上的应用。

本发明的一些方案中，上述的应用，其特征在于，所述BRD4相关病症包括肿瘤疾病。

本发明的一些方案中，上述的应用，其特征在于，所述肿瘤疾病包括血液肿瘤和晚期实体瘤，其中，血液肿瘤包括白血病、淋巴瘤及骨髓瘤，晚期实体瘤包括神经细胞瘤、胶质瘤、乳腺癌、胃肠肿瘤及前列腺癌；优选地，白血病为急性成淋巴细胞性白血病，或者淋巴瘤为急性骨髓淋巴瘤，或者乳腺癌为三阴性乳腺癌，或者胃肠肿瘤为结直肠癌。

另一方面，本发明还涉及上述固体形式的式(I)所示化合物或上述药物组合物，其用于治疗BRD4相关病症。

本发明的一些方案中，上述的固体形式的式(I)所示化合物或上述药物组合物，其中，所述BRD4相关病症包括肿瘤疾病。

本发明的一些方案中，上述的固体形式的式(I)所示化合物或上述药物组合物，其中，所述肿瘤疾病包括血液肿瘤和晚期实体瘤，其中，血液肿瘤包括白血病、淋巴瘤及骨髓瘤，晚期实体瘤包括神经细胞瘤、胶质瘤、乳腺癌、胃肠肿瘤及前列腺癌；优选地，白血病为急性成淋巴细胞性白血病，或者淋巴瘤为急性骨髓淋巴瘤，或者乳腺癌为三阴性乳腺癌，或者胃肠肿瘤为结直肠癌。

另一方面，本发明还涉及一种治疗患者的病症的方法，通过向患者施用上述固体形式的式(I)所示化合物或上述药物组合物，所述患者的病症为BRD4相关病症。

本发明的一些方案中，上述的治疗患者的病症的方法，其中，所述BRD4相关病症包括肿瘤疾病。

本发明的一些方案中，上述的治疗患者的病症的方法，其中，所述肿瘤疾病包括血液肿瘤和晚期实体瘤，其中，血液肿瘤包括白血病、淋巴瘤及骨髓瘤，晚期实体瘤包括神经细胞瘤、胶质瘤、乳腺癌、胃肠肿瘤及前列腺癌；优选地，白血病为急性成淋巴细胞性白血病，或者淋巴瘤为急性骨髓淋巴瘤，或者乳腺癌为三阴性乳腺癌，或者胃肠肿瘤为结直肠癌。

上述的“患者”包括动物界的所有成员，包括但不限于，哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、猫、猴子、狗、马、猪等)和人。

术语“基本上如图所示”是指X-射线粉末衍射图谱或DSC图谱或TGA图谱中至少50％，或至少60％，或至少70％，或至少80％，或至少90％，或至少95％，或至少99％的峰显示在其图中。

定义和说明

除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在含有下列含义。一个特定的短语或术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文出现商品名时，旨在指代其对应的商品或其活性成分。

本发明的中间体化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。

下面会通过实施例具体描述本发明，这些实施例并不意味着对本发明的任何限制。

本发明所使用的所有溶剂是市售的，无需进一步纯化即可使用。

本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词：DCM代表二氯甲烷；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；TFA代表三氟乙酸；TsOH代表对甲苯磺酸；mp代表熔点；EtSO₃H代表乙磺酸；MeSO₃H代表甲磺酸；ATP代表三磷酸腺苷；HEPES代表4-羟乙基哌嗪乙磺酸；EGTA代表乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸；MgCl₂代表二氯化镁；MnCl₂代表二氯化锰；DTT代表二硫苏糖醇。

技术效果

本发明提及的式(I)化合物的晶型稳定性好，易于成药；本发明晶型对BRD4显示出优良的活性，具有较好的药代动力学性质及口服吸收率，具有活性高、代谢稳定性好、溶解度好、适于口服等特点，对由BRD4异常表达引起的疾病可以提供更有效的治疗。

1.1粉末X-射线衍射(X-ray powder diffractometer，XRPD)

仪器型号：布鲁克D8 advance X-射线衍射仪

测试方法：大约10～20mg样品用于XRPD检测。

详细的XRPD参数如下：

X-ray发生器：Cu，kα，

管电压：40kV，管电流：40mA.

发射狭缝：1deg.

限高狭缝：10mm

散射狭缝：1deg.

接受狭缝：0.15mm

单色器：Fixed Monochromator

扫描范围：对于A晶型：4-33deg；B晶型：4-35deg

扫描速度：10deg/min

1.2差热分析(Differential Scanning Calorimeter，DSC)

仪器型号：TA Q2000差示扫描量热仪

测试方法：取样品(0.5～1mg)置于DSC铝锅内进行测试，在50mL/min N₂条件下，以10℃/min的升温速率，加热样品从30℃到300℃。

1.3热重分析(Thermal Gravimetric Analyzer，TGA)

仪器型号：TA Q5000IR热重分析仪

测试方法：取样品(2～5mg)置于TGA铂金锅内进行测试，在25mL/min N₂条件下，以10℃/min的升温速率，加热样品从室温到失重20％。

1.4本发明动态蒸汽吸附分析(Dynamic Vapor Sorption，DVS)方法

仪器型号：SMS DVS Advantage动态蒸汽吸附仪

测试条件：取样品(10～20mg)置于DVS样品盘内进行测试。

详细的DVS参数如下：

温度：25℃

平衡：dm/dt＝0.01％/min(最短：10min，最长：180min)

干燥：0％RH下干燥120min

RH(％)测试梯级：10％

RH(％)测试梯级范围：0％-90％-0％

引湿性评价分类如下：

注：ΔW％表示受试品在25±1℃和80±2％RH下的吸湿增重。

附图说明

图1为式(I)化合物A晶型的Cu-Kα辐射的XRPD谱图。

图2为式(I)化合物A晶型的DSC谱图。

图3为式(I)化合物A晶型的TGA谱图。

图4为式(I)化合物B晶型的Cu-Kα辐射的XRPD谱图。

图5为式(I)化合物A晶型的DVS等温线。

具体实施方式

为了更好的理解本发明的内容，下面结合具体实施例来做进一步的说明，但具体的实施方式并不是对本发明的内容所做的限制。

实施例1：式(I)化合物的制备

步骤1：

将化合物1-1(25.00g，139.20mmol，1.00eq)，2-丁酮(11.04g，153.12mmol，13.63mL，1.10eq)和吗啡啉(12.13g，139.20mmol，12.25mL，1.00eq)溶于乙醇(200.00毫升)，再加入升华硫(4.46g，139.20mmol，1.00eq)，悬浊液升温至70℃氮气保护下搅拌12个小时。先将反应液真空旋干，得到黄色油状物，向油状物中加入水(500毫升)后用乙酸乙酯(200毫升×4)萃取，收集合并有机相，用饱和食盐水(200毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤真空减压旋干。粗品通过硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到化合物1-2。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 7.47(d，J＝8.0Hz，2H)，7.38(d，J＝8.0Hz，2H)，6.43(br s，2H)，2.13(s，3H)，1.56(s，3H)。

步骤2：

化合物1-2(10.00g，37.63mmol，1.00eq)溶于氯仿(100.00毫升)中并滴加2-氯乙酰氯(6.37g，56.45mmol，4.49mL，1.50eq)，滴加完后反应在70℃下搅拌1小时。反应液用饱和碳酸氢钠溶液(100毫升)，饱和食盐水(50毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤后旋干。得到的粗品化合物用甲醇(40毫升)重结晶得到化合物1-3。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm11.81(br s，1H)，7.58(dd，J＝2.0，6.4Hz，2H)，7.45(dd，J＝2.2，8.6Hz，2H)，4.25(s，2H)，2.29(s，3H)，1.72(s，3H)。

步骤3：

化合物1-3(11.00g，32.14mmol，1.00eq)和碘化钠(9.63g，64.28mmol，2.00eq)加入到四氢呋喃(50.00毫升)中，该混合物在60℃下搅拌2小时。反应液直接旋干，得到化合物1-4未纯化直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z：433.9(M+1)。

步骤4：

化合物1-4(14.00g，32.28mmol，1.00eq)溶于四氢呋喃(100.00毫升)中，冷却到-60℃并充氨气30分钟，反应液缓慢升温至20℃并搅拌3小时。反应液直接旋干，得到的固体用乙酸乙酯(150毫升)溶解，并用水(50毫升×3)，饱和食盐水(50毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤然后旋干。得到化合物1-5直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z：322.9(M+1)，344.9(M+Na)。

步骤5：

化合物1-5(10.00g，30.98mmol，1.00eq)溶于异丙醇(150.00毫升)和冰乙酸(50.00毫升)并在90℃下搅拌3小时。反应液减压去除溶剂，剩余混合物溶于氯仿(20毫升)并用饱和碳酸氢钠溶液(20毫升)和饱和食盐水(20毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤然后旋干。粗品用乙酸乙酯(50毫升)重结晶，得到化合物1-6。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 8.98(br s，1H)，7.46(d，J＝8.4Hz，2H)，7.35(d，J＝8.4Hz，2H)，4.80(d，J＝8.8Hz，1H)，3.93(d，J＝8.6Hz，1H)，2.28(s，3H)，1.59(s，3H)。

步骤6：

五硫化二磷(17.07g，76.79mmol，8.17mL，3.60eq)加入到不停搅拌的碳酸钠(4.07g，38.39mmol，1.80eq)的1，2-二氯乙烷(200.00毫升)浑浊液中，在20℃下搅拌1小时，然后加入化合物1-6(6.50g，21.33mmol，1.00eq)，得到的浑浊液在65℃下反应5小时。反应冷却到20℃并过滤，滤饼用乙酸乙酯(2L)溶解并用饱和食盐水(500毫升)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤然后旋干。粗品化合物用硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到化合物1-7。

步骤7：

在0℃下往化合物1-7(3.50g，10.91mmol，1.00eq)的甲醇(5.00毫升)浑浊液中加入水合肼(1.67g，32.72mmol，1.62mL，98％纯度，3.00eq)，反应在0℃下搅拌1小时。反应液过滤，滤饼烘干。得到化合物1-8并直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z：318.9(M+1)。

步骤8：

往化合物1-8(2.50g，7.84mmol，1.00eq)的甲苯(100.00毫升)混合液中加入原乙酸三乙酯(3.82g，23.52mmol，4.29mL，3.00eq)，反应在80℃下搅拌1小时。反应液直接旋干，粗品化合物用乙酸乙酯(10毫升)重结晶，得到化合物1-9。LCMS(ESI)m/z：344.9(M+1)。

步骤9：

在-70℃下往化合物1-9(1.50g，4.38mmol，1.00eq)的四氢呋喃(180毫升)溶液中滴加LiHMDS(1M，8.76mL，2.00eq)，反应在该温度下搅拌1小时然后滴加2-溴醋酸叔丁酯(1.28g，6.57mmol，970.82μL，1.50eq)溶于20毫升四氢呋喃的溶液，滴加完后反应缓慢升温至20℃并搅拌5小时。反应液用饱和NH₄Cl溶液(50毫升)淬灭，用乙酸乙酯(100毫升)萃取并用饱和食盐水(50毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤然后旋干。粗品化合物用快速过柱仪纯化，得到的化合物用SFC分离得到化合物1-10(碱性-EtOH，色谱柱：AS(250mm×30mm，5μm)，流动相B：30％，流速(mL/min)：55)([α]²⁵ _D+54(C 0.6，CHCl₃))。LCMS(ESI)m/z：457.0(M+1)。

步骤10：

化合物1-10(150.00mg，328.23μmol，1.00eq)溶于二氯甲烷(5.00毫升)和三氟乙酸(1.00毫升)，反应在20℃下搅拌4小时。反应直接旋干，得到化合物1并直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z：401.0(M+1)。

步骤11：

将化合物2(0.78g，3.66mmol，1eq)、氨基甲酸叔丁酯(643.39mg，5.49mmol，1.5eq)、三(二亚苄基丙酮)二钯(335.29mg，366.15μmol，0.1eq)、碳酸铯(2.39g，7.32mmol，2eq)和4，5-双(二苯基膦)-9，9-二甲基氧杂蒽(211.86mg，366.15μmol，0.1eq)加入到1，4-二氧六环(10毫升)中，加入后在100℃氮气保护下反应12小时。向反应液中加入水(20毫升)，再加入乙酸乙酯(20毫升)，过滤滤去不溶物，水相再用乙酸乙酯(10毫升)萃取，合并有机相用无水硫酸钠干燥过滤后旋干。利用快速过柱仪进行纯化得到化合物3。LCMS(ESI)m/z：250.1(M+1)。

步骤12：

将三氟乙酸(3.85g，33.77mmol，2.5mL，18.30eq)加入到化合物3(0.46g，1.85mmol，1eq)的无水二氯甲烷(20毫升)中、加入后在20℃下反应12小时。用水(20毫升)洗涤反应液，再用饱和碳酸氢钠溶液将水相pH调至7，水相再用二氯甲烷(10毫升×2)萃取，合并有机相用无水硫酸钠干燥过滤后旋干。得到化合物4不进行进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z：149.8(M+1)。

步骤13.

在0℃将POCl₃(76.50mg，498.90μmol，46.36μL，2eq)加入到化合物1(100mg，249.45μmol，1eq)和化合物4(44.65mg，299.34μmol，1.2eq)的吡啶(2毫升)溶液中，加入后升温至20℃下反应1.5小时。向反应液中加入水(3毫升)淬灭反应，再用2N盐酸将水相pH调至7，水相用二氯甲烷(5毫升×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤后旋干。利用薄层色谱制备板进行(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到式(I)化合物，其为玻璃粘稠状或泡沫状黏附于瓶壁上。LCMS(ESI)m/z：532.1(M+1).¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 9.98(br s，1H)，7.94(d，J＝6.8Hz，1H)，7.67(d，J＝8.0Hz，1H)，7.32-7.36(m，3H)，7.24-7.27(m，2H)，5.08-5.16(m，2H)，4.57-4.61(m，1H)，3.78-3.84(m，1H)，3.45-3.50(m，1H)，2.63(s，3H)，2.36(s，3H)，1.63(s，3H)。

实施例2：式(I)化合物A晶型的制备

称取约50mg式(I)化合物分别加入到1.5mL玻璃小瓶中，分别加入适量的溶剂(见表3)使其成悬浊液，用封口膜将其密封，放在40℃的恒温混匀仪搅拌48小时。然后将样品放入离心机离心处理，离心后的固体放入真空干燥箱中30℃干燥过夜，得式(I)化合物的A晶型。

表3 不同溶剂晶型筛选实验

实施例3：式(I)化合物B晶型的制备

称取约50mg式(I)化合物加入到1.5mL玻璃小瓶中，再加入四氢呋喃(0.2mL)使其成悬浊液，用封口膜将其密封，放在40℃的恒温混匀仪搅拌48小时。然后将样品放入离心机离心处理，离心后的固体放入真空干燥箱中30℃干燥过夜，得式(I)化合物的B晶型。

实验例1：式(I)化合物A晶型的固体稳定性试验

依据《原料药与制剂稳定性试验指导原则》(中国药典2015版四部通则9001)，考察式(I)化合物A晶型在加速(40℃/75％RH，密封)及长期(25℃/60％RH，密封)条件下的稳定性。

分别称取式(I)化合物A晶型1.5g，置于玻璃样品瓶的底部，摊成薄薄一层。其中25℃/60％RH及40℃/75％RH条件样品装入双层LDPE(低密度聚乙烯)袋，每层LDPE袋分别扎扣密封，再将LDPE袋子放入铝箔袋中并热封。在不同条件下放置的样品于第90天取样检测，检测结果与0天的初始检测结果进行比较，试验结果见下表4所示：

表4 式(I)化合物A晶型的固体稳定性试验结果

试验条件	时间点	外观	晶型(XRPD)	含量(％)	总杂质(％)
						-	0天	白色粉末	晶型A	98.7	0.17
40℃/75％RH，密封	90天	白色粉末	晶型A	99.2	0.19
						25℃/60％RH，密封	90天	白色粉末	晶型A	99.4	0.12

“RH”：相对湿度。

结论：式(I)化合物A晶型具有良好的稳定性。

实验例2：式(I)化合物A晶型的吸湿性研究

实验材料：

SMS DVS Advantage动态蒸汽吸附仪

实验方法：

取式(I)化合物A晶型10～15mg置于DVS样品盘内进行测试。

实验结果：

式(I)化合物A晶型的DVS谱图如图5所示，ΔW＝1.789％。

实验结论：

式(I)化合物A晶型在25℃和80％RH下的吸湿增重为1.789％，略有吸湿性。

实验例3：BRD4生化活性检测

实验准备：

1)实验使用BPS公司的BRD4-BD1和BRD4-BD2蛋白；ANASPEC公司的多肽；PerkinElmer公司的检测试剂；

2)实验应用TR-FRET的实验原理对化合物进行筛选；

3)测试化合物。

实验步骤：

1)准备化合物板：

实验中的化合物板的准备通过Echo实现：

化合物稀释由Echo完成，3倍递减稀释成10个浓度：20000、6666.67、2222.22、740.74、246.91、82.305、27.435、9.145、3.048、1.016nM。

2)反应试剂的准备：

相关的反应试剂应在实验当天准备：

a)配制1×assay buffer(测试缓冲溶液)；

b)配制3×的实验用组分溶液：

1.将试剂取出并放在冰上自然融化待用；

2.使用1×assaybuffer(测试缓冲溶液)来配置实验所用中的“溶液A”(蛋白溶液)，“溶液B”(多肽溶液)，和“溶液C”(检测试剂溶液)，并使得各个组分在实验反应体系中，形成3X的溶液，溶液A、B、C的量须足够该轮实验所需量。

3)实验操作步骤：

实验板即实验前使用ECHO准备好的含有化合物梯度浓度和相应的DMSO溶液的板子：

a)取出实验板，并向实验板的第2～23列，加入5μL/孔的“溶液A”(蛋白溶液)，再向实验板的第1和24列加入5μL/孔的1X assay buffer，1和24列作为实验系统中的Mincontrol；

b)离心1000转，30秒；

c)将板子置于23℃孵育20分钟；

d)孵育20分钟之后，向实验板的1～24列加入5μL/孔的“溶液B”(多肽溶液)；

e)离心1000转，30秒；

f)将板子置于23℃孵育20分钟；

g)孵育20分钟之后，向实验板的1～24列加入5μL/孔的“溶液C”(检测试剂溶液)；

h)离心1000转，30秒；

i)将板子置于23℃孵育40分钟；

j)将实验板置于EnVision上读板。

4)数据分析：

a)用每块实验板的相应的Max control(最大控制)和Min control(最小控制)来换算出该实验板的Z’值，并确保每块板的Z’值＞0.5；

b)测试化合物的信号通过XLFIT5计算出IC₅₀值，并确保其维持在历史数据平均值的3倍以内，结果见表5。

表5 BRD4检测IC₅₀测试结果

化合物	BRD4(BD1，BD2)，IC<sub>50</sub>(nM)
		式(I)化合物	66，10

5)结论：

式(I)化合物对BRD4-BD 1和BRD4-BD 2均有显著抑制作用。

实验例4：式(I)化合物在人乳腺癌MDA-MB-231_luc细胞皮下异种移植肿瘤模型的体内药效研究

1.实验设计

表6 受试物配制方法

“BID”：每天两次。

表7 体内药效实验动物分组及给药方案

“PO”：口服灌胃。

2.实验材料

2.1实验动物

种属：小鼠

品系：BALB/c裸小鼠

周龄及体重：6-8周龄，体重18-22克

性别：雌性

供应商：上海西普尔-必凯实验动物有限公司

3.实验方法与步骤

3.1细胞培养

人乳腺癌MDA-MB-231_luc细胞体外单层培养，培养条件为RPMI-1640培养基(供应商：Gibco；货号：22400-089；生产批号：4868546)中加10％胎牛血清，100U/mL的盘尼西林和100μg/mL的链霉素37℃ 5％CO₂培养。一周两次用胰酶-EDTA进行常规消化处理传代。当细胞处于指数生长期时，收取细胞，计数，接种。

3.2肿瘤细胞接种

将0.2mL 10＊10⁶个MDA-MB-231_luc细胞皮下接种于每只裸小鼠的右后背(PBS∶Matrigel＝1∶1)。肿瘤平均体积达到100-150mm³时开始分组给药。

3.3肿瘤测量和实验指标

实验指标是考察肿瘤生长是否被抑制、延缓或治愈。每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b²，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。

化合物的抑瘤疗效用TGI(％)或相对肿瘤增殖率T/C(％)评价。TGI(％)，反映肿瘤生长抑制率。TGI(％)的计算：TGI(％)＝【(1-(某处理组给药结束时平均瘤体积-该处理组开始给药时平均瘤体积))/(溶媒对照组治疗结束时平均瘤体积-溶媒对照组开始治疗时平均瘤体积)】×100％。

相对肿瘤增殖率T/C(％)：计算公式如下：T/C％＝T_RTV/C_RTV×100％(T_RTV：治疗组RTV；C_RTV：阴性对照组RTV)。根据肿瘤测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumorvolume，RTV)，计算公式为RTV＝V_t/V₀，其中V₀是分组给药时(即d₀)测量所得平均肿瘤体积，V_t为某一次测量时的平均肿瘤体积，T_RTV与C_RTV取同一天数据。

在实验结束后将检测肿瘤重量，并计算T/C_weight百分比，T_weight和C_weight分别表示给药组和溶媒对照组的瘤重。

3.4统计分析

统计分析，包括每个组的每个时间点的肿瘤体积的平均值和标准误(SEM)。治疗组在试验结束时给药后第21天表现出最好的治疗效果，因此基于此数据进行统计学分析评估组间差异。两组间比较用T-test进行分析，三组或多组间比较用one-way ANOVA进行分析，如果F值有显著性差异，应用Games-Howell法进行检验。如果F值无显著性差异，应用Dunnet(2-sided)法进行分析。用SPSS 17.0进行所有数据分析。p＜0.05认为有显著性差异。4.实验结论

给药21天后，式(I)化合物的抑瘤率TGI＝54.85％，T/C＝52.99％，p＜0.05；动物体重无明显变化，具有良好的耐受性。

实验例5：式(I)化合物在人前列腺癌PC-3细胞皮下异种移植肿瘤模型的体内药效研究

1.实验设计

受试物配制方法同表6，动物分组及给药方案同表7。

2.实验材料

2.1实验动物

种属：小鼠

品系：BALB/c裸小鼠

周龄及体重：6-8周龄，体重18-22克

性别：雄性

供应商：上海西普尔-必凯实验动物有限公司

3.实验方法与步骤

3.1细胞培养

人前列腺癌PC-3细胞体外单层培养，培养条件为F-12K培养基(供应商：Gibco；货号：21127-022；生产批号：1868870)中加10％胎牛血清，100U/mL的盘尼西林和100μg/mL的链霉素37℃ 5％CO₂培养。一周两次用胰酶-EDTA进行常规消化处理传代。当细胞处于指数生长期时，收取细胞，计数，接种。

3.2肿瘤细胞接种

将0.1mL 10＊10⁶个PC-3细胞皮下接种于每只裸小鼠的右后背。肿瘤平均体积达到100-150mm³时开始分组给药。

3.3肿瘤测量，实验指标和统计分析同MDA-MB-231模型

4.实验结论

给药21天后，受试式(I)化合物与溶媒对照组相比，具有显著的抑瘤作用(T/C＝44.63％，TGI＝58.4％，p＝0.033)；动物具有良好的耐受性。

实验例6：式(I)化合物在MC38小鼠结肠癌细胞动物移植瘤模型的体内抗肿瘤药效研究

1.实验设计

2.实验材料

2.1实验动物

种属：小鼠

品系：C57BL6小鼠

周龄及体重：6～7周龄，体重16-20克

性别：雌性

供应商：上海斯莱克实验动物有限责任公司

3.实验方法与步骤

3.1细胞培养

小鼠结肠癌MC38细胞(和元生物技术股份有限公司)体外单层培养，培养条件为10％胎牛血清的DMEM培养基(Gibco，货号：12100)，37℃ 5％CO₂的培养箱中培养。用0.25％胰酶-EDTA进行常规消化处理传代。当细胞处于指数生长期，饱和度为80％～90％时，收取细胞，计数，接种。

3.2肿瘤细胞接种

将0.1mL 2×10⁵个MC38细胞皮下接种于每只小鼠的右后背，待肿瘤平均体积达到～70mm³时，根据肿瘤体积进行随机分组给药。

3.3肿瘤测量

每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5×a×b²，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。

化合物的抑瘤疗效用TGI(％)或相对肿瘤增殖率T/C(％)评价。相对肿瘤增殖率T/C(％)＝T_RTV/C_RTV×100％(T_RTV：治疗组RTV；C_RTV：阴性对照组RTV)。根据肿瘤测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为RTV＝V_t/V₀，其中V₀是分组给药时(即D0)测量所得平均肿瘤体积，V_t为某一次测量时的平均肿瘤体积，T_RTV与C_RTV取同一天数据。

TGI(％)，反映肿瘤生长抑制率。TGI(％)＝[(1-(某处理组给药结束时平均瘤体积-该处理组开始给药时平均瘤体积))/(溶媒对照组治疗结束时平均瘤体积-溶媒对照组开始治疗时平均瘤体积)]×100％。

在实验结束后将检测肿瘤重量，并计算T_weight/C_weight百分比，T_weight和C_weight分别表示给药组和溶媒对照组的瘤重。

3.4统计分析

统计分析基于试验结束时肿瘤体积和肿瘤重量运用SPSS软件进行分析。两组间比较用t-test进行分析，三组或多组间比较用one-way ANOVA进行分析，如果方差齐(F值无显著性差异)，应用LSD法进行分析，如果方差不齐(F值有显著性差异)，应用Games-Howell法进行检验。p＜0.05认为有显著性差异。

4.实验结论

给药20天后，式(I)化合物的15mg/kg给药组相对肿瘤增殖率T/C＝33.68％，肿瘤生长抑制率TGI＝68.81％，p＜0.0001；25mg/kg给药组相对肿瘤增殖率T/C＝27.59％，TG I＝75.21％，p＜0.0001；50mg/kg给药组T/C＝10.04％，TGI＝93.46％，p＜0.0001。各给药组动物具有显著的抑瘤作用以及良好的耐受性。

实验例7式(I)化合物在小鼠体内的药代动力学测试

以雌性Balb/c小鼠为受试动物，应用LC/MS/MS法测定小鼠静脉和灌胃给予式(I)化合物后不同时刻血浆中的药物浓度。研究式(I)化合物在小鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。

1.实验方案

1.1试验药品：式(I)化合物

1.2试验动物：健康成年雌性Balb/c小鼠16只，按照体重相近的原则分成4组，每组4只。动物购买自上海灵畅生物科技有限公司实验动物有限公司，动物生产许可证号：SCXK(沪)2013-0018

1.3药物配制

称取适量样品，加入5％终体积的DMSO，再加入95％终体积的20％HP-β-CD，搅拌超声后得到0.5mg/mL的澄清溶液，过滤后用于静脉给药。

称取适量样品，溶于0.5％羧甲基纤维素钠溶液中，搅拌超声后得到0.5mg/mL的均一混悬液，用于灌胃给药。

1.4给药

雌性Balb/c小鼠8只，分成2组，过夜禁食后，第一组进行静脉给药，给药体积为2.5mL/kg，剂量为1mg/kg；第二组进行灌胃给药，给药体积为5mL/kg，剂量为3mg/kg。2.操作

雌性Balb/c小鼠静脉给药后，分别在0.0833、0.25、0.5、1、2、4、8、及24小时交叉采血30μL，置于含有2μL EDTA-K₂的试管中；灌胃给药组后，分别在0.0833、0.25、0.5、1、2、4、8及24小时交叉采血30μL，置于含有2μL EDTA-K₂的试管中。试管在3000g离心15分钟分离血浆，并于-60℃保存。给药2小时后动物可进食。

用LC/MS/MS法测定小鼠静脉和灌胃给药后，血浆中待测化合物的含量。方法的线性范围为2.00-6000nmol/L；血浆样品经乙腈沉淀蛋白处理后进行分析。药代动力学参数结果见表8。

表8 药代动力学参数结果

“--”：不适用。

实验结论：式(I)化合物口服暴露量高，药代清除率低，口服生物利用度高。

实验例8式(I)化合物在大鼠体内的药代动力学测试

以雄性SD大鼠为受试动物，应用LC/MS/MS法测定大鼠静脉和灌胃给予式(I)化合物后不同时刻血浆中的药物浓度。研究式(I)化合物在大鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。

1.实验方案

2.1试验药品：式(I)化合物(晶型A)

2.2试验动物：健康成年雄性SD大鼠4只，按照体重相近的原则分成2组，每组2只。动物购买自北京维通利华实验动物有限公司，动物生产许可证号：SCXK(京)2016-0006

2.3药物配制

称取适量样品，溶于0.5％羧甲基纤维素钠溶液中，搅拌超声后得到1mg/mL的均一混悬液，用于灌胃给药。

2.4给药

雄性SD大鼠4只，分成2组，过夜禁食后，第一组进行静脉给药，给药体积为4mL/kg，剂量为2mg/kg；第二组进行灌胃给药，给药体积为10mL/kg，剂量为10mg/kg。

2.操作

雄性SD大鼠静脉给药后，分别在0.0833、0.25、0.5、1、2、4、6、8及24小时采血100μL，置于含有2μL EDTA-K₂的试管中；灌胃给药组后，分别在0.0833、0.25、0.5、1、2、4、6、8及24小时采血100μL，置于含有2μLEDTA-K2的试管中。试管在3000g离心15分钟分离血浆，并于-60℃保存。给药2小时后动物可进食。

用LC/MS/MS法测定大鼠静脉和灌胃给药后，血浆中待测化合物的含量。方法的线性范围为2.00-6000nmol/L；血浆样品经乙腈沉淀蛋白处理后进行分析。药代动力学参数结果见表9。

表9 药代动力学参数结果

“--”：不适用。

实验例9式(I)化合物对hERG钾通道作用测试

采用稳定表达hERG钾通道的CHO(Chinese Hamster Ovary)细胞，用全自动膜片钳QPatch技术，考察SYHA1801对hERG钾通道电流的作用。

1.实验方案

1.1试验药品：式(I)化合物

1.2试验系统：CHO-hERG细胞系

1.3细胞准备

CHO-hERG细胞培养于175cm²培养瓶中，待细胞密度生长到60～80％，移走培养液，用7mL PBS洗一遍，然后加入3mL Detachin消化。

待消化完全后加入7mL培养液中和，然后离心，吸走上清液，再加入5mL培养液重悬，以确保细胞密度为2～5×106/mL。

1.4溶液配制

溶液配制的方法如下表10.

表10 细胞内液和外液的组成成分

2.操作

将20mM的化合物母液用细胞外液进行稀释，取5μL 20mM的化合物母液加入2495μL细胞外液，500倍稀释至40μM，然后在含0.2％DMSO的细胞外液中依次进行3倍连续稀释得到需要测试的最终浓度。最高测试浓度为40μM，依次分别为40，13.33，4.44，1.48，0.49，0.16μM共6个浓度。最终测试浓度中的DMSO含量不超过0.2％，此浓度的DMSO对hERG钾通道没有影响。

单细胞高阻抗封接和全细胞模式形成过程全部由Qpatch仪器自动完成，在获得全细胞记录模式后，细胞钳制在-80毫伏，在给予一个5秒的+40毫伏去极化刺激前，先给予一个50毫秒的-50毫伏前置电压，然后复极化到-50毫伏维持5秒，再回到-80毫伏。每15秒施加此电压刺激，记录2分钟后给予细胞外液记录5分钟，然后开始给药过程，化合物浓度从最低测试浓度开始，每个测试浓度给予2.5分钟，连续给完所有浓度后，给予阳性对照化合物3μMCisapride。每个浓度至少测试3个细胞(n≥3)。实验数据由XLFit软件进行分析。

3.结论

结果显示，式(I)化合物对hERG钾电流的抑制IC₅₀＞40μM。

Claims

1.式(I)化合物的A晶型，

其特征在于，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：7.03±0.2°，11.28±0.2°，14.00±0.2°，15.11±0.2°，17.31±0.2°，19.48±0.2°，20.07±0.2°，22.86±0.2°。

2.根据权利要求1所述的式(I)化合物的A晶型，其特征在于，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：7.03±0.2°，11.28±0.2°，12.39±0.2°，14.00±0.2°，14.87±0.2°，15.11±0.2°，17.31±0.2°，17.68±0.2°，19.48±0.2°，20.07±0.2°，22.86±0.2°。

3.根据权利要求1所述的式(I)化合物的A晶型，其特征在于，其XRPD图谱如图1所示。

4.根据权利要求1所述的式(I)化合物的A晶型，其特征在于，其XRPD图谱解析数据如下表所示:

5.根据权利要求1-4任一项所述的式(I)化合物的A晶型，其差示扫描量热曲线在289.22±3℃有一个吸热峰的起始点。

6.根据权利要求5所述的式(I)化合物的A晶型，其DSC图谱基本上如图2所示。

7.根据权利要求1-4任一项所述的式(I)化合物的A晶型，其热重分析曲线在300.00±3℃处失重达1.626％。

8.根据权利要求7所述的式(I)化合物的A晶型，其TGA图谱基本上如图3所示。

9.式(I)化合物的B晶型，

其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：5.50±0.2°，8.36±0.2°，11.87±0.2°，12.39±0.2°，12.66±0.2°，15.11±0.2°，17.35±0.2°，18.70±0.2°。

10.根据权利要求9所述的式(I)化合物的B晶型，其特征在于，其XRPD图谱如图4所示。

11.根据权利要求9所述的式(I)化合物的B晶型，其特征在于，其XRPD图谱解析数据如下表所示:

12.一种权利要求1-8任一项所述的式(I)化合物的A晶型的制备方法，包括：

(1)将式(I)所示化合物加入溶剂中，使其成混悬液或溶液；

(2)上述混悬液或溶液于恒温混匀仪中，搅拌后离心，干燥，得到式(I)化合物的A晶型；

其中，所述溶剂为甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、丙酮、甲醇、甲乙酮、体积比为2:1的丙酮-水或者体积比为3:1的乙醇-水。

13.根据权利要求12所述的制备方法，其中，搅拌温度为25℃～45℃。

14.根据权利要求12所述的制备方法，其中，搅拌时间为12小时～24小时。

15.根据权利要求12所述的制备方法，其中，所述化合物与溶剂的重量-体积比为1g:5～10mL。

16.一种权利要求9-11任一项所述的式(I)化合物的B晶型的制备方法，包括：

(1)将式(I)所示化合物加入四氢呋喃中，使其成混悬液或溶液；

(2)上述混悬液或溶液于恒温混匀仪中，搅拌后离心，干燥，得到式(I)化合物的B晶型。

17.根据权利要求16所述的制备方法，其中，搅拌温度为25℃～45℃。

18.根据权利要求16所述的制备方法，其中，搅拌时间为12小时～24小时。

19.根据权利要求16所述的制备方法，其中，所述化合物与四氢呋喃的重量-体积比为1g:5～10mL。

20.一种药物组合物，包含权利要求1-8任一项所述的式(I)化合物的A晶型或权利要求9-11任一项所述的式(I)化合物的B晶型或这两种晶型的混合物。

21.根据权利要求1-8任一项所述的式(I)化合物的A晶型或权利要求9-11任一项所述的式(I)化合物的B晶型或权利要求20所述的药物组合物在制备治疗BRD4相关病症的药物上的应用。

22.根据权利要求21所述的应用，其中，所述BRD4相关病症为肿瘤疾病。

23.根据权利要求22所述的应用，其中，所述肿瘤为血液肿瘤或者晚期实体瘤。

24.根据权利要求23所述的应用，其中，所述血液肿瘤为淋巴瘤或者骨髓瘤，所述晚期实体瘤为神经细胞瘤、乳腺癌、结直肠癌或者前列腺癌。

25.根据权利要求23所述的应用，其中，所述肿瘤为急性成淋巴细胞性白血病或者急性骨髓淋巴瘤。

26.根据权利要求24所述的应用，其中，所述乳腺癌为三阴性乳腺癌。