CN116490188A - 含氮杂环类衍生物的盐、晶型及其制备方法和应用 - Google Patents

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CN116490188A CN202180076059.7A CN202180076059A CN116490188A CN 116490188 A CN116490188 A CN 116490188A CN 202180076059 A CN202180076059 A CN 202180076059A CN 116490188 A CN116490188 A CN 116490188A
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刘庆鑫
呙临松
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Shanghai Hansoh Biomedical Co Ltd
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Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Group Co Ltd
Shanghai Hansoh Biomedical Co Ltd
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
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Abstract

一种涉及含氮杂环类衍生物的盐、晶型及其制备方法和应用。特别地，涉及通式(I)化合物盐及晶型、制备方法和含有治疗有效量的该晶型的药物组合物，及其作为KRAS G12C突变抑制剂，在治疗白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌及其结肠癌等疾病或病症的用途，其中通式(I)中的各取代基与说明书中的定义相同。

Description

含氮杂环类衍生物的盐、晶型及其制备方法和应用
本申请要求申请日为2020/11/26的中国专利申请2020113542899和申请日为2021/11/22的中国专利申请2021113892168的优先权。本申请引用上述中国专利申请的全文。
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种含氮杂环类衍生物的盐、晶型及其制备方法和应用。
背景技术
大鼠肉瘤(rat sarcoma，RAS)，由原癌基因HRAS，NRAS以及KRAS编码，分为4种蛋白HRAS，NRAS，KRAS4A和KRAS4B，是一种GTP(guanosine triphosphate)结合蛋白。RAS位于细胞膜内表面，上游为受体酪氨酸激酶(RTK)，激活后调控下游的PI3K，RAF等信号通路，从而调控细胞的生长、存活、迁移和分化等功能。
RAS在机体内主要有两种状态：与GDP(guanosine diphosphate)结合的失活状态和与GTP结合的激活状态。其活性受两个蛋白调控，鸟苷交换因子(guanine nucleotide exchange factor，GEF)促使GDP从RAS蛋白上释放，使GTP结合激活RAS；GTP酶激活蛋白(GTPase activating protein，GAP)激活RAS蛋白的GTP酶活性，将结合在RAS蛋白上的GTP水解成GDP，使RAS失活。正常情况下，RAS蛋白处于非活化状态，突变后构象发生改变，RAS处于持续激活状态，且下游信号通路也被持续激活，从而导致多种癌症的发生。
RAS作为第一个被确认的癌基因，是突变率最高的致癌基因，在人类癌症中平均占25％。RAS家族中最常见的致癌突变为KRAS(85％)，而NRAS(12％)和HRAS(3％)则较为少见。KRAS突变主要高发于胰腺癌(95％)、结直肠癌(52％)和肺癌(31％)等一系列癌症。KRAS最常见的突变方式为点突变，多发生在p-loop(aa 10～17)中的G12、G13和Switch II区(aa59-76)的Q61，其中以G12突变最为常见(83％)。在非小细胞肺癌(NSCLC)和结直肠癌中，KRAS G12C是最常见的突变之一。
虽然存在极大的临床需求，但至今没有一个直接靶向KRAS的药物上市，目前临床治疗KRAS突变的患者一般只能采取化疗。KRAS抑制剂的研发困难主要有两个因素，首先RAS蛋白结构平滑，小分子难以结合到蛋白表面；其次RAS GTP酶对GTP的亲和力高达皮摩尔(pM)级别，且内源性GTP水平高，小分子药物难以阻断二者结合。近期研究发现KRAS 12位甘氨酸(Glycine，Gly)突变为半胱氨酸(Cysteine，Cys)后，构象改变，形成一个新的口袋供小分子共价结合，不可逆的将KRAS G12C锁定在结合GDP的非活化状态。因此KRAS G12C抑制剂有望成为首个直接靶向KRAS的药物。
目前已有多个KRAS G12C抑制剂进入临床研究阶段，如Amgen公司开发的AMG 510，Wellspring Biosciences公司开发的ARS-3248和Mirati公司开发的MTRX849，目前均处于临床I期研究阶段，但还没有一款开发上市的KRAS G12C抑制剂。
KRAS G12C目前没有特异的靶向药，存在较大的临床需求，选择性更高、活性更好、安全性更佳的KRAS G12C抑制剂有治疗多种癌症的潜力，具有广阔的市场前景。
江苏豪森药业集团有限公司的专利申请(申请号：PCT/CN2020/093285)中公开了一系列哒嗪类衍生物抑制剂的结构，在后续的研发中，为了使产物易于处理、过滤、干燥，便于储存、产品长期稳定、生物利用度高等，本发明对上述物质的盐和晶型进行了全面的研究，致力于得到最适合的晶型。
发明内容
专利申请PCT/CN2020/093285所涉及的所有内容均以引证的方式添加到本发明中。
本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物的酸式盐：
其中：
R a各自独立的选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb、卤代烷氧基或羟烷基；
R 1选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb、卤代烷氧基或羟烷基；
R 2选自烷基；
R 3选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb或羟烷基；
R 4选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb或羟烷基；
R 5选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb或羟烷基；
R 6选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb或羟烷基；
R 7选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb或羟烷基；
R aa选自氘、卤素、烷基、氘代烷基或卤代烷基；
R bb选自氘、卤素、烷基、氘代烷基或卤代烷基；且
x选自0、1、2或3。
在本发明优选方案中，所述通式(I)所示化合物的酸式盐中，R a各自独立的选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb、C 1-6卤代烷氧基或C 1-6羟烷基；
优选氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1- 3卤代烷基、C 1-3烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb、C 1-3卤代烷氧基或C 1-3羟烷基；
更优选氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、异丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代异丙基、卤代甲基、卤代乙基、卤代丙基、卤代异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、卤代甲氧基、卤代乙氧基、卤代丙氧基、羟甲基、羟乙基、羟丙基或羟异丙基；
R 1选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb、C 1-6卤代烷氧基或C 1-6羟烷基；
优选氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3卤代烷基、C 1-3烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb、C 1-3卤代烷氧基或C 1-3羟烷基；
更优选氢、甲基、氟、氯、氨基、羟基或氰基；
R 2选自氢或C 1-6烷基；
优选氢或C 1-3烷基；
更优选氢、甲基、乙基、丙基或异丙基；
R 3选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb或C 1-6羟烷基；
优选氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3卤代烷基、C 1-3烷氧基、-SR aa或C 1-3羟烷基；
更优选氢、氘、氟、氯、溴、碘、氨基、羟基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、异丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代异丙基、卤代甲基、卤代乙基、卤代丙基、卤代异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、-S(CH 3)、羟甲基、羟乙基、羟丙基或羟异丙基；
R 4选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb、或C 1-6羟烷基；
优选氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1-3卤代烷基、C 1-3烷氧基、-NR aaR bb、或C 1-3羟烷基；
更优选氢、氘、氟、氯、溴、碘、氨基、羟基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、异丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代异丙基、卤代甲基、卤代乙基、卤代丙基、 卤代异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、-NH(CH 3)、-N(CH 3) 2、羟甲基、羟乙基、羟丙基或羟异丙基；
R 5选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb或C 1-6羟烷基；
优选氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1- 3卤代烷基、C 1-3烷氧基或C 1-3羟烷基；
更优选氢、氘、氟、氯、溴、碘、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、异丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代异丙基、卤代甲基、卤代乙基、卤代丙基、卤代异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基，羟甲基、羟乙基、羟丙基或羟异丙基；
R 6选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb或C 1-6羟烷基；
优选氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1- 3卤代烷基、C 1-3烷氧基或C 1-3羟烷基；
更优选氢、氘、氟、氯、溴、碘、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、异丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代异丙基、卤代甲基、卤代乙基、卤代丙基、卤代异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基，羟甲基、羟乙基、羟丙基或羟异丙基；
R 7选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、-SR aa、-C(O)R aa、-NR aaR bb或C 1-6羟烷基；
优选氢、氘、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基、C 1- 3卤代烷基、C 1-3烷氧基或C 1-3羟烷基；
更优选氢、氘、氟、氯、溴、碘、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、甲基、乙基、丙基、异丙基、氘代甲基、氘代乙基、氘代丙基、氘代异丙基、卤代甲基、卤代乙基、卤代丙基、卤代异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基，羟甲基、羟乙基、羟丙基或羟异丙基；
R aa选自氘、卤素、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基或C 1-6卤代烷基；
优选氘、卤素、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基或C 1-3卤代烷基；
更优选甲基、乙基、丙基或异丙基；
R bb选自氘、卤素、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基或C 1-6卤代烷基；
优选氘、卤素、C 1-3烷基、C 1-3氘代烷基或C 1-3卤代烷基；
更优选甲基、乙基、丙基或异丙基；
x选自0、1、2或3；优选0、1或2；更优选0或1。
在本发明优选方案中，所述化合物的酸式盐，化合物如通式(II)所示：
其中：
R a选自氢或甲基；
R 1选自氢、氟、氯、溴或甲基；
R 3选自氢、氨基、羟基、氟、氯、甲基、-S(CH 3)或三氟甲基；
R 4选自氢、氨基、羟基、氟、氯、-N(CH 3) 2、-NH(CH 3)或氟；
R 5选自氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基或异丙基；
R 6选自氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基或异丙基；
R 7选自氢、氟、氯、溴或甲基。
在本发明优选方案中，所述化合物的酸式盐，化合物进一步如通式(II-A)或(II-B)所示：
在本发明优选方案中，所述化合物的酸式盐，其中化合物选自：
在本发明更优选方案中，所述化合物的酸式盐，其中化合物选自：
酸式盐中的酸选自羟乙基磺酸、硫酸、1，5-萘二磺酸、甲磺酸、氢溴酸、磷酸、苯磺酸、草酸、马来酸、己二酸、盐酸、柠檬酸、丙二酸、L-苹果酸、帕莫酸、对甲苯磺酸或富马酸，优选羟乙基磺酸或硫酸。
在本发明更进一步优选的方案中，酸的个数为0.2-3；优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3；更优选0.5、1、2或3。
在本发明再进一步优选方案中，酸式盐为水合物或无水物，并且当酸式盐为水合物时，水的个数为0.2-3；优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3；更优选0.5、1、2或3。
在本发明最优选方案中，提供化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐，其中酸式盐中的酸选自羟乙基磺酸、硫酸、1，5-萘二磺酸、甲磺酸、氢溴酸、磷酸、苯磺酸、草酸、马来酸、己二酸、盐酸、柠檬酸、丙二酸、L-苹果酸、帕莫酸、对甲苯磺酸或富马酸，其中化合物酸式盐结构具体如下：
在本发明优选的方案中，酸式盐为晶型；优选化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐晶型；
P-4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐晶型；
P-4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐晶型；
P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐晶型；
P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐晶型；
更优选羟乙基磺酸盐晶型、硫酸盐晶型、1，5-萘二磺酸盐晶型、甲磺酸盐晶型、氢溴酸盐晶型、磷酸盐晶型、苯磺酸盐晶型、草酸盐晶型、马来酸盐晶型、己二酸盐晶型、盐酸盐晶型、柠檬酸盐晶型、丙二酸盐晶型、L-苹果酸盐晶型、帕莫酸盐晶型、对甲苯磺酸盐晶型或富马酸盐晶型。
在本发明优选方案中，提供化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐的晶型。
在本发明更优选方案中，化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐为晶型，优选羟乙基磺酸盐晶型、硫酸盐晶型、1，5-萘二磺酸盐晶型、甲磺酸盐 晶型、氢溴酸盐晶型、磷酸盐晶型、苯磺酸盐晶型、草酸盐晶型、马来酸盐晶型、己二酸盐晶型、盐酸盐晶型、柠檬酸盐晶型、丙二酸盐晶型、L-苹果酸盐晶型、帕莫酸盐晶型、对甲苯磺酸盐晶型或富马酸盐晶型。
在本发明优选方案中，酸式盐为晶型，其中酸的个数为0.2-3；优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3；更优选0.5、1、2或3。
在本发明优选方案中，提供化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的羟乙基磺酸盐晶型I-III和硫酸盐晶型I-IV：
羟乙基磺酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱2θ在21.7±0.2°处具有衍射峰；或者在8.8±0.2°处具有衍射峰；或者在19.3±0.2°处具有衍射峰；或者在27.6±0.2°处具有衍射峰；或者在10.9±0.2°处具有衍射峰；或者在15.4±0.2°处具有衍射峰；或者在16.7±0.2°处具有衍射峰；或者在15.8±0.2°处具有衍射峰；或者在17.5±0.2°处具有衍射峰；或者在23.8±0.2°处具有衍射峰；或者在10.2±0.2°处具有衍射峰；或者在11.8±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
羟乙基磺酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱2θ在21.7±0.2°处具有衍射峰；或者在8.8±0.2°处具有衍射峰；或者在19.3±0.2°处具有衍射峰；或者在27.6±0.2°处具有衍射峰；或者在10.9±0.2°处具有衍射峰；或者在23.8±0.2°处具有衍射峰；或者在16.7±0.2°处具有衍射峰；或者在15.4±0.2°处具有衍射峰；或者在15.8±0.2°处具有衍射峰；或者在10.0±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
羟乙基磺酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱2θ在19.4±0.2°处具有衍射峰；或者在16.9±0.2°处具有衍射峰；或者在26.6±0.2°处具有衍射峰；或者在14.6±0.2°处具有衍射峰；或者在28.0±0.2°处具有衍射峰；或者在25.6±0.2°处具有衍射峰；或者在20.7±0.2°处具有衍射峰；或者在12.8±0.2°处具有衍射峰；或者在19.1±0.2°处具有衍射峰；或者在27.2±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
硫酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱2θ在19.0±0.2°处具有衍射峰；或者在19.4±0.2°处具有衍射峰；或者在12.4±0.2°处具有衍射峰；或者在26.2±0.2°处具有衍射峰；或者在17.6±0.2°处具有衍射峰；或者在18.1±0.2°处具有衍射峰；或者在25.3±0.2°处具有衍射峰； 或者在8.8±0.2°处具有衍射峰；或者在21.9±0.2°处具有衍射峰；或者在11.5±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
硫酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱2θ在15.5±0.2°处具有衍射峰；或者在11.1±0.2°处具有衍射峰；或者在8.9±0.2°处具有衍射峰；或者在19.3±0.2°处具有衍射峰；或者在22.3±0.2°处具有衍射峰；或者在23.6±0.2°处具有衍射峰；或者在17.4±0.2°处具有衍射峰；或者在27.3±0.2°处具有衍射峰；或者在17.0±0.2°处具有衍射峰；或者在27.9±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
硫酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱2θ在19.6±0.2°处具有衍射峰；或者在18.0±0.2°处具有衍射峰；或者在18.4±0.2°处具有衍射峰；或者在16.8±0.2°处具有衍射峰；或者在14.3±0.2°处具有衍射峰；或者在11.8±0.2°处具有衍射峰；或者在14.9±0.2°处具有衍射峰；或者在25.7±0.2°处具有衍射峰；或者在15.4±0.2°处具有衍射峰；或者在23.5±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
硫酸盐晶型IV的X-射线粉末衍射图谱2θ在19.4±0.2°处具有衍射峰；或者在18.9±0.2°处具有衍射峰；或者在15.5±0.2°处具有衍射峰；或者在8.8±0.2°处具有衍射峰；或者在18.1±0.2°处具有衍射峰；或者在24.9±0.2°处具有衍射峰；或者在17.4±0.2°处具有衍射峰；或者在12.3±0.2°处具有衍射峰；或者在26.1±0.2°处具有衍射峰；或者在14.5±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处。
在本发明进一步优选方案中，提供化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的羟乙基磺酸盐晶型I-III和硫酸盐晶型I-IV：
羟乙基磺酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°、16.7±0.2°、15.8±0.2°、10.2±0.2°、11.8±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
21.7±0.2°、8.8±0.2°；
8.8±0.2°、27.6±0.2°；
21.7±0.2°、8.8±0.2°、10.9±0.2°；
8.8±0.2°、19.3±0.2°、15.4±0.2°；
21.7±0.2°、8.8±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°；
8.8±0.2°、19.3±0.2°、15.4±0.2°、16.7±0.2°；
15.8±0.2°、8.8±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°；
11.7±0.2°、8.8±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°；
16.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、16.7±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°；
21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、15.8±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°；
10.9±0.2°、8.8±0.2°、10.2±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.8±0.2°；
羟乙基磺酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为21.7±0.2°、10.0±0.2°、8.8±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、23.8±0.2°、16.7±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
21.7±0.2°、10.0±0.2°；
10.0±0.2°、8.8±0.2°；
21.7±0.2°、10.0±0.2°、19.3±0.2°；
10.0±0.2°、8.8±0.2°、27.6±0.2°；
21.7±0.2°、10.0±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°；
10.0±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°；
27.6±0.2°、10.0±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、16.7±0.2°、10.9±0.2°；
21.7±0.2°、10.0±0.2°、8.8±0.2°、16.7±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°；
羟乙基磺酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°、12.8±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°；
19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、12.8±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°；
硫酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为19.0±0.2°、19.4±0.2°、 12.4±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°、25.3±0.2°、8.8±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°；
19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、25.3±0.2°；
硫酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为19.3±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、27.3±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
15.5±0.2°、11.1±0.2°；
11.1±0.2°、8.9±0.2°；
15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°；
11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°；
15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°；
15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、27.3±0.2°；
8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、27.3±0.2°；
硫酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、25.7±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°；
19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、14.9±0.2°；
硫酸盐晶型IV的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°、12.3±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°；
19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、12.3±0.2°、24.9±0.2°。
在本发明进一步优选方案中，提供化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1- 基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的羟乙基磺酸盐晶型I-III和硫酸盐晶型I-IV：
羟乙基磺酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为21.7±0.2°、8.8±0.2°、10.2±0.2°、11.8±0.2°、13.3±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°、16.7±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处或8处；例如，
8.8±0.2°、10.2±0.2°、11.8±0.2°、13.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.8±0.2°、17.5±0.2°；
27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°、17.5±0.2°、15.8±0.2°、16.7±0.2°、17.5±0.2°、23.8±0.2°；
21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、17.5±0.2°、16.7±0.2°、15.8±0.2°；
羟乙基磺酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为10.0±0.2°、21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9+±0.2°、23.8±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处或8处；例如，
21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9+±0.2°、23.8±0.2°、16.7±0.2°、15.4±0.2°；
8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9+±0.2°、23.8±0.2°、15.4±0.2°、15.8±0.2°、10.0±0.2°；
羟乙基磺酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处或8处；例如，
19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°、27.2±0.2°；
19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、27.2±0.2°、20.7±0.2°、12.8±0.2°；
硫酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°、25.3±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处或8处；例如，
19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°、25.3±0.2°、8.8±0.2°；
硫酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、 4处、5处、6处、7处或8处；例如，
15.5±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、27.3±0.2°、17.0±0.2°；
11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、17.4±0.2°、27.3±0.2°、17.0±0.2°、27.9±0.2°；
硫酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处或8处；例如，
19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、15.4±0.2°；
19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、23.5±0.2°；
硫酸盐晶型IV的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处或8处；例如，
19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°、12.3±0.2°；
19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°、26.1±0.2°；
在本发明优选方案中，提供化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的羟乙基磺酸盐晶型I-III和硫酸盐晶型I-IV：
羟乙基磺酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为21.7±0.2°、8.8±0.2°、10.2±0.2°、11.8±0.2°、13.1±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、13.3±0.2°、15.4±0.2°、16.7±0.2°、15.8±0.2°、17.5±0.2°、23.8±0.2°、14.7±0.2°、24.3±0.2°、27.3±0.2°、23.4±0.2°、20.6±0.2°、21.2±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、20.6±0.2°；
19.3±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°、16.7±0.2°；
8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°、20.6±0.2°；
19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、16.7±0.2°、23.4±0.2°、20.6±0.2°；
8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、16.7±0.2°、15.8±0.2°、17.5±0.2°、24.3±0.2°、14.7±0.2°、27.3±0.2°、23.4±0.2°；
21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°、16.7±0.2°、15.8±0.2°、24.3±0.2°、23.8±0.2°；
8.8±0.2°、10.2±0.2°、11.8±0.2°、13.1±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、13.3±0.2°、21.2±0.2°、15.8±0.2°、17.5±0.2°；
羟乙基磺酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为21.7±0.2°、10.0±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、23.8±0.2°、16.7±0.2°、15.4±0.2°、15.8±0.2°、17.5±0.2°、14.7±0.2°、24.4±0.2°、27.3±0.2°、29.2±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
10.0±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、29.2±0.2°；
8.8±0.2°、27.6±0.2°、27.3±0.2°、29.2±0.2°；
21.7±0.2°、10.0±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、29.2±0.2°；
10.0±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、27.3±0.2°、14.7±0.2°；
21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、23.8±0.2°、27.3±0.2°、17.5±0.2°；
19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、23.8±0.2°、15.8±0.2°、、16.7±0.2°、15.4±0.2°、17.5±0.2°；
10.0±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、23.8±0.2°、16.7±0.2°、15.4±0.2°、15.8±0.2°、17.5±0.2°；
8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、23.8±0.2°、16.7±0.2°、15.4±0.2°、17.5±0.2°、27.3±0.2°、29.2±0.2°；
羟乙基磺酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°、12.8±0.2°、19.1±0.2°、27.2±0.2°、24.4±0.2°、15.3±0.2°、26.2±0.2°、30.2±0.2°、27.4±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°；
19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、28.0±0.2°；
19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、27.4±0.2°；
19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、30.2±0.2°；
19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°、27.4±0.2°；
19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°、30.2±0.2°；
19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°、12.8±0.2°、 19.1±0.2°、27.2±0.2°；
19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°、12.8±0.2°、19.1±0.2°、24.4±0.2°；
硫酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°、25.3±0.2°、8.8±0.2°、21.9±0.2°、11.5±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°；
19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、17.6±0.2°；
19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、11.5±0.2°；
19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、21.9±0.2°；
19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°、25.3±0.2°、8.8±0.2°；
19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°、25.3±0.2°、21.9±0.2°；
19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°、25.3±0.2°、8.8±0.2°、21.9±0.2°、11.5±0.2°；
硫酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、27.3±0.2°、17.0±0.2°、27.9±0.2°、15.8±0.2°、24.2±0.2°、21.8±0.2°、10.3±0.2°、20.6±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、21.8±0.2°；
15.5±0.2°、8.9±0.2°、22.3±0.2°、10.3±0.2°；
11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、20.6±0.2°、27.9±0.2°；
15.5±0.2°、11.1±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、21.8±0.2°、10.3±0.2°；
15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、20.6±0.2°、27.9±0.2°；
15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、10.3±0.2°、20.6±0.2°；
11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、27.3±0.2°、17.0±0.2°、27.9±0.2°、20.6±0.2°；
15.5±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、27.3±0.2°、17.0±0.2°、15.8±0.2°、10.3±0.2°；
硫酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、 16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、25.7±0.2°、15.4±0.2°、23.5±0.2°、18.8±0.2°、24.7±0.2°、9.5±0.2°、8.8±0.2°、11.1±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°；
19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、14.3±0.2°；
19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.1±0.2°；
19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、8.8±0.2°；
19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、11.1±0.2°；
19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、8.8±0.2°；
19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、25.7±0.2°、15.4±0.2°、23.5±0.2°；
19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、25.7±0.2°、15.4±0.2°、18.8±0.2°；
硫酸盐晶型IV的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°、12.3±0.2°、26.1±0.2°、14.5±0.2°、22.2±0.2°、24.3±0.2°、21.7±0.2°、23.6±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°；
19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、18.1±0.2°；
19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、23.6±0.2°；
19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、21.7±0.2°；
19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°、23.6±0.2°；
19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°、12.3±0.2°、26.1±0.2°、14.5±0.2°；
19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°、12.3±0.2°、26.1±0.2°、24.3±0.2°。
在本发明进一步优选地实施方式中，化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的羟乙基磺酸盐晶型I，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射 线特征衍射峰如表1所示。
表1
本发明所述的实施例13-1所示化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的羟乙基磺酸盐晶型I，其X-射线粉末衍射图谱基本如图1所示；其DSC图谱基本如图2所示；其TGA图谱基本如图3所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，实施例13-1所示化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的羟乙基磺酸盐晶型II，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表2所示。
表2
本发明所述的实施例13-1所示化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的羟乙基磺酸盐晶型II，其X-射线粉末衍射图谱基本如图4所示；其DSC图谱基本如图5所示；其TGA图谱基本如图6所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，实施例13-1所示化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的羟乙基磺酸盐晶型III，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表3所示。
表3
本发明所述的实施例13-1所示化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的羟乙基磺酸盐晶型III，其X-射线粉末衍射图谱基本如图7所示；其DSC图谱基本如图8所示；其TGA图谱基本如图9所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，实施例13-1所示化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的硫酸盐晶型I，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表4所示。
表4
本发明所述的实施例13-1所示化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的硫酸盐晶型I，其X-射线粉末衍射图谱基本如图10所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，实施例13-1所示化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的硫酸盐晶型II，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表5所示。
表5
本发明所述的实施例13-1所示化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的硫酸盐晶型II，其X-射线粉末衍射图谱基本如图11所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，实施例13-1所示化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的硫酸盐晶型III，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表6所示。
表6
本发明所述的实施例13-1所示化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的硫酸盐晶型III，其X-射线粉末衍射图谱基本如图12所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，实施例13-1所示化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的硫酸盐晶型IV，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值 表示的X-射线特征衍射峰如表7所示。
表7
本发明所述的实施例13-1所示化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的硫酸盐晶型IV，其X-射线粉末衍射图谱基本如图13所示。
在本发明进一步优选方案中，羟乙基磺酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图1对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°；
羟乙基磺酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图4对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°；
羟乙基磺酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图7对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°；
硫酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图10对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°；
硫酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图11对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°；
硫酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图12对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°；
硫酸盐晶型IV的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图13对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°；
在本发明进一步优选方案中，化合物的酸式盐，其特征在于，酸式盐晶型为水合物或无水物，当酸式盐晶型为水合物时，水的个数为0.2-3，优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0.5、1、2或3；进一步地，水合物中的水为管道水或结晶水或两者的结合。
在本发明进一步优选方案中，制备酸式盐的方法，包括如下步骤：
1)称取适量的游离碱，加溶剂溶解；
2)加入适量的酸，搅拌；酸的量优选1.2当量；
3)快速离心或静置得到化合物的盐；
溶剂为有机溶剂，优选乙醇、2-甲基四氢呋喃、甲苯、乙酸异丙酯、叔丁醇、正丁醇、四氢呋喃、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯或1，4-二氧六环中的至少一种；
酸选自盐酸、硫酸、硝酸、氢溴酸、氢氟酸、氢碘酸、磷酸、2,5-二羟基苯甲酸、1-羟基-2-萘甲酸、醋酸、乙烷磺酸、二氯醋酸、三氯醋酸、乙酰氧肟酸、己二酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环己烷氨基磺酸、樟脑磺酸、天门冬氨酸、樟脑酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、异抗坏血酸、乳酸、苹果酸、扁桃酸、焦谷氨酸、酒石酸、十二烷基硫酸、二苯甲酰酒石酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、蚁酸、富马酸、半乳糖酸、龙胆酸、戊二酸、2-酮戊二酸、乙醇酸、马尿酸、羟乙基磺酸、乳糖酸、抗坏血酸、天冬氨酸、月桂酸、樟脑酸、马来酸、丙二酸、甲磺酸、1,5-萘二磺酸、萘-2-磺酸、烟酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、丙酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、硫氰酸、十一碳烯酸、三氟乙酸、苯磺酸、对甲基苯磺酸或L-苹果酸；优选盐酸、磷酸、乙烷磺酸、苯磺酸、甲磺酸、富马酸、羟乙基磺酸、草酸或氢溴酸。
在本发明进一步优选方案中，所述化合物的酸式盐及其晶型的制备方法，包括如下步骤：
1)称取适量的游离碱，加反应溶剂溶解；
2)加入适量的酸，搅拌；酸的量优选1.2当量；
3)离心干燥后，得到化合物酸式盐的晶型；
反应溶剂为有机溶剂，优选乙醇、2-甲基四氢呋喃、正庚烷、甲基叔丁基醚、甲苯、乙酸异丙酯、叔丁醇、正丁醇、四氢呋喃、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯或1，4-二氧六环中的至少一种；
酸选自盐酸、硫酸、硝酸、氢溴酸、氢氟酸、氢碘酸、磷酸、2,5-二羟基苯甲酸、1- 羟基-2-萘甲酸、醋酸、乙烷磺酸、二氯醋酸、三氯醋酸、乙酰氧肟酸、己二酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环己烷氨基磺酸、樟脑磺酸、天门冬氨酸、樟脑酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、异抗坏血酸、乳酸、苹果酸、扁桃酸、焦谷氨酸、酒石酸、十二烷基硫酸、二苯甲酰酒石酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、蚁酸、富马酸、半乳糖酸、龙胆酸、戊二酸、2-酮戊二酸、乙醇酸、马尿酸、羟乙基磺酸、乳糖酸、抗坏血酸、天冬氨酸、月桂酸、樟脑酸、马来酸、丙二酸、甲磺酸、1,5-萘二磺酸、萘-2-磺酸、烟酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、丙酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、硫氰酸、十一碳烯酸、三氟乙酸、苯磺酸、对甲基苯磺酸或L-苹果酸；优选盐酸、磷酸、乙烷磺酸、苯磺酸、甲磺酸、富马酸、羟乙基磺酸、草酸或氢溴酸。
在本发明进一步优选方案中，化合物的酸式盐晶型的制备方法，包括如下步骤：
1)称取适量的化合物的盐，加入有机溶剂混悬；
2)搅拌，离心干燥后，得到化合物酸式盐的晶型；
有机溶剂选自乙醇、2-甲基四氢呋喃、正庚烷、甲基叔丁基醚、甲苯、乙酸异丙酯、叔丁醇、正丁醇、四氢呋喃、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯或1，4-二氧六环中的至少一种。
在本发明进一步优选的方案中，化合物的酸式盐或其晶型的制备方法，包括如下步骤：
1)称取适量的游离碱，加反应溶剂溶解；
2)加入适量的酸和有机溶剂搅拌溶清；
3)任选地，加入晶种；
4)冷却，过滤析出固体，并用溶剂洗涤，干燥。
步骤1)中所用的反应溶剂为有机溶剂，优选乙醇、丙醇、异丙醇、2-甲基四氢呋喃、正庚烷、甲基叔丁基醚、甲苯、乙酸异丙酯、叔丁醇、正丁醇、四氢呋喃、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯或1，4-二氧六环中的至少一种；
步骤2)中的酸选自盐酸、硫酸、硝酸、氢溴酸、氢氟酸、氢碘酸、磷酸、2,5-二羟基苯甲酸、1-羟基-2-萘甲酸、醋酸、乙烷磺酸、二氯醋酸、三氯醋酸、乙酰氧肟酸、己二酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环己烷氨基磺酸、樟脑磺酸、天门冬氨酸、樟脑酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、异抗坏血酸、乳酸、苹果酸、扁桃酸、焦谷氨酸、酒石酸、十二烷基硫 酸、二苯甲酰酒石酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、蚁酸、富马酸、半乳糖酸、龙胆酸、戊二酸、2-酮戊二酸、乙醇酸、马尿酸、羟乙基磺酸、乳糖酸、抗坏血酸、天冬氨酸、月桂酸、樟脑酸、马来酸、丙二酸、甲磺酸、1,5-萘二磺酸、萘-2-磺酸、烟酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、丙酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、硫氰酸、十一碳烯酸、三氟乙酸、苯磺酸、对甲基苯磺酸或L-苹果酸；优选盐酸、磷酸、乙烷磺酸、苯磺酸、甲磺酸、富马酸、羟乙基磺酸、草酸或氢溴酸。
步骤2)中的有机溶剂选自醇类、醚类、酮类或酯类溶剂中的一种或多种，优选乙醇、丙醇、异丙醇、2-甲基四氢呋喃、正庚烷、甲基叔丁基醚、甲苯、乙酸异丙酯、叔丁醇、正丁醇、四氢呋喃、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯或1，4-二氧六环中的至少一种；
步骤3)中的溶剂选自醇类、醚类、酮类或酯类溶剂中的一种或多种，优选乙醇、丙醇、异丙醇、2-甲基四氢呋喃、正庚烷、甲基叔丁基醚、甲苯、乙酸异丙酯、叔丁醇、正丁醇、四氢呋喃、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯或1，4-二氧六环中的至少一种。
本发明还提供了一种优选方案，还涉及一种药用组合物，其包括治疗有效剂量的所示的通式(I)化合物的酸式盐或其晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明进一步涉及任一所示的通式(I)化合物的酸式盐或其晶型或所述的药物组合物在制备KRAS抑制剂药物中的应用；优选在制备KRAS G12C突变抑制剂药物中的应用。
在一些实施例中，由本发明的化合物药学上可接受的盐及其晶型或组合物在治疗为努南氏症候群、豹皮症候群、白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、乳腺癌、食道癌、头颈部肿瘤、胃癌、肺癌及其结肠癌中的应用；优选非小细胞肺癌、结肠癌、食管癌、头颈部肿瘤。
发明的详细说明
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至8个碳原子的烷基，更优选1至6个碳原子的烷基，最优选1至3个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、 3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基，本发明优选甲基、乙基、异丙基、叔丁基、卤代烷基、氘代烷基、烷氧基取代的烷基和羟基取代的烷基。
术语“亚烷基”是指烷基的一个氢原子进一步被取代，例如：“亚甲基”指-CH 2-、“亚乙基”指-(CH 2) 2-、“亚丙基”指-(CH 2) 3-、“亚丁基”指-(CH 2) 4-等。术语“烯基”指由至少由两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基，优选环丙基、环丁基、环己基、环戊基和环庚基。
术语“螺环烷基”指5至20元的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为3元/6元、3元/5元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：
等；
也包含单螺环烷基与杂环烷基共用螺原子的螺环烷基，非限制性实例包括：
等。
术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：
等。
术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括：
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O) m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选包含3至8个环原子；最优选包含3至8个环原子；进一步优选包含1-3氮原子的3-8元杂环基，任选地，被1-2个氧原子、硫原子、氧代基取代，包 括含氮单环杂环基、含氮螺杂环基或含氮稠杂环基。
单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、吖庚基、1,4-二氮杂环庚基、吡喃基等，优选吡咯烷基、吗啉基、哌啶基、吖庚基、1,4-二氮杂环庚基和哌嗪基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基；其中涉及到的螺环、稠环和桥环的杂环基任选与其他基团通过单键相连接，或者通过环上的任意两个或者两个以上的原子与其他环烷基、杂环基、芳基和杂芳基进一步并环连接。
术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O) m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：
等。
术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O) m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：
等。
术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O) m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：
等。
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
等。
杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至12元，例如苯基和萘基。更优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，包括苯并5-10元杂芳基、苯并3-8元环烷基和苯并3-8元杂烷基，优选苯并5-6元杂芳基、苯并3-6元环烷基和苯并3-6元杂烷基，其中杂环基为含1-3氮原子、氧原子、硫原子的杂环基；或者还包含含苯环的三元含氮稠 环。
其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
等。
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至12元，更优选为5元或6元，例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等，优选为三唑基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、嘧啶基或噻唑基；更有选吡唑基、吡咯基和噁唑基。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
等。
杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述，优选含有1至8个碳原子的烷基，更优选1至6个碳原子的烷基，最更优选1至3个碳原子的烷基。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、 环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“烷硫基”指-S-(烷基)和-S-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。优选含有1至8个碳原子的烷基，更优选1至6个碳原子的烷基，最更优选1至3个碳原子的烷基。烷硫基的非限制性实例包括：甲硫基、乙硫基、丙硫基、丁硫基、环丙硫基、环丁硫基、环戊硫基、环己硫基。烷硫基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
“烷硫基-烷基”指烷硫基与烷基相连，其中烷基和烷硫基如上所定义。
“烷基氨基羰基”指(烷基)-N-C(O)-，其中烷基的定义如上所述。
“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。
“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定义。
“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷硫基，其中烷硫基如上所定义。
“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。
“烯基”指链烯基，又称烯烃基，优选含有2至8个碳原子的烷基，更优选2至6个碳原子的烷基，最更优选2至3个碳原子的烷基。其中所述的烯基可以进一步被其他相关基团取代，例如：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
“炔基”指(CH≡C-)，优选含有2至8个碳原子的烷基，更优选2至6个碳原子的烷基，最更优选2至3个碳原子的烷基。其中所述的炔基可以进一步被其他相关基团取代，例如：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“烯基羰基”指-C(O)-(烯基)，其中烯基的定义如上所述。烯基羰基的非限制性实例包括：乙烯基羰基、丙烯基羰基、丁烯基羰基。烯基羰基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“氨基”指-NH 2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO 2。
“羰基”指-C(O)-。
“羧基”指-C(O)OH。
“THF”指四氢呋喃。
“EtOAc”指乙酸乙酯。
“MeOH”指甲醇。
“DMF”指N,N-二甲基甲酰胺。
“DIPEA”指二异丙基乙胺。
“TFA”指三氟乙酸。
“MeCN”指乙晴。
“DMA”指N,N-二甲基乙酰胺。
“Et 2O”指乙醚。
“DCE”指1,2二氯乙烷。
“DIPEA”指N,N-二异丙基乙胺。
“NBS”指N-溴代琥珀酰亚胺。
“NIS”指N-碘代丁二酰亚胺。
“Cbz-Cl”指氯甲酸苄酯。
“Pd 2(dba) 3”指三(二亚苄基丙酮)二钯。
“Dppf”指1,1’-双二苯基膦二茂铁。
“HATU”指2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯。
“KHMDS”指六甲基二硅基胺基钾。
“LiHMDS”指双三甲基硅基胺基锂。
“MeLi”指甲基锂。
“n-BuLi”指正丁基锂。
“NaBH(OAc) 3”指三乙酰氧基硼氢化钠。
“X选自A、B、或C”、“X选自A、B和C”、“X为A、B或C”、“X为A、B和C”等不同用语均表达了相同的意义，即表示X可以是A、B、C中的任意一种或几种。
本发明所述的氢原子均可被其同位素氘所取代，本发明涉及的实施例化合物中的任一氢原子也均可被氘原子取代。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物 组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。
附图说明
图1为P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮羟乙基磺酸盐晶型I的XRPD图示。
图2为P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮羟乙基磺酸盐晶型I的DSC图示。
图3为P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮羟乙基磺酸盐晶型I的TGA图示。
图4为P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮羟乙基磺酸盐晶型II的XRPD图示。
图5为P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮羟乙基磺酸盐晶型II的DSC图示。
图6为P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮羟乙基磺酸盐晶型II的TGA图示。
图7为P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮羟乙基磺酸盐晶型III的XRPD图示。
图8为P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮羟乙基磺酸盐晶型III的DSC图示。
图9为P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮羟乙基磺酸盐晶型III的TGA图示。
图10为P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮硫酸盐晶型I的XRPD图示。
图11为P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮硫酸盐晶型II的XRPD图示。
图12为P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮硫酸盐晶型III的XRPD图示。
图13为P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮硫酸盐晶型IV的XRPD图示。
具体实施方式
以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
一、化合物的制备
实施例
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d 6)，氘代甲醇(CD 3OD)和氘代氯仿(CDCl 3)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent 1200 Infinity Series质谱仪。HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C 18 150×4.6mm色谱柱)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂，反应温度单位为摄氏度。
实施例1
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
第一步：4-氯-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺的制备
将2,4-二氯吡啶-3-胺(4.5g，27.78mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二噁硼戊环(5.13g，30.56mmol)、碳酸钾(11.5g，83.34mmol)、Pd(PPh 3) 4加入二氧六环(120mL)中，反应液均匀混合后，在油浴加热100℃条件下搅拌过夜。减压浓缩，所得粗品用快速硅胶柱层析分离纯化得到目标化合物4-氯-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺为无色油状液体(4.5g，产率96％)。
MS m/z(ESI):169.1[M+H] +.
第二步：4-(甲硫基)-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺的制备
将4-氯-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺(2g，11.9mmol)、甲硫醇钠(10mL，20％水溶液)加入二氧六环(3mL)中，反应液均匀混合后，在100℃条件下反应2天，冷却至室温，减压浓缩，所得粗品用快速硅胶柱层析分离纯化得到化合物4-(甲硫基)-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺为淡黄色液体(1.7g，产率79％)。
MS m/z(ESI):181.2[M+H] +.
第三步：2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺的制备
向4-(甲硫基)-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺(2g，11.11mmol)、Pd/C(4g)加入甲醇(50mL)，反应液均匀混合后，在室温条件下反应过夜，减压浓缩。所得粗品加入由甲醇(5mL)，N,N-二异丙基乙胺(0.5mL)，丙烯腈(1mL)混合的溶液中，在室温下反应2小时。减压浓缩，所得粗品用快速硅胶柱层析分离纯化得到化合物2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺为无色液体(500mg，产率25％)。
MS m/z(ESI):183.2[M+H] +.
第四步：2,6-二氯-5-氟-N-((2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)氨基甲酰)尼克酰胺的制备
向2,6-二氯-5-氟尼克酰胺(500mg,2.44mmol)、草酰氯(1.32mL,2.54mmol)加入THF(10mL)，反应液均匀混合后，在60℃条件下反应3小时，反应温度降至室温，加入三乙胺(680mg,6.6mmol)、2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺(400mg,2.2mmol),室温反应1小时，减压浓缩，所得粗品用快速硅胶柱层析分离纯化得到化合物2,6-二氯-5-氟-N-((2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)氨基甲酰)尼克酰胺为白色固体(800mg，产率87％)。
MS m/z(ESI):417.1[M+H] +.
第五步：7-氯-6-氟-4-羟基-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
将2,6-二氯-5-氟-N-((2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)氨基甲酰)尼克酰胺(800mg，1.92mmol)加入THF(20mL)，反应液均匀混合后，在0℃条件下，缓慢加入KHMDS(4.8mL,4.8mmol),室温反应1小时，减压浓缩，所得粗品用快速硅胶柱层析分离纯化得到化合物7-氯-6-氟-4-羟基-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮为白色固体(600mg，产率82％)。
MS m/z(ESI):381.1[M+H] +.
第六步：叔-丁基(S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氢吡啶 并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸酯的制备
将7-氯-6-氟-4-羟基-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(300mg，0.79mmol)、三氯氧磷(600mg,3.95mmil)、DIPEA(1g,7.9mmol)加入THF(40mL)，反应液均匀混合后，在80℃条件下反应1小时，反应温度降至室温，向反应液中缓慢加入叔-丁基(S)-3-甲基哌嗪-1-羧酸酯(240mg,1.19mmol),室温反应1小时，减压浓缩，所得粗品用快速硅胶柱层析分离纯化得到化合物叔-丁基(S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸酯为白色固体(400mg，产率90％)。
MS m/z(ESI):563.1[M+H] +.
第七步：(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
将叔-丁基(S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸酯(400mg，0.71mmol)、TFA(2mL)加入CH 2Cl 2(30mL)，反应液均匀混合后，在室温条件下反应1小时，减压浓缩，所得粗品中加入CH 2Cl 2(20mL)及DIPEA(0.3mL),反应温度降至0℃，向反应液中缓慢加入丙烯酰氯(0.1mL),室温反应1小时，减压浓缩。所得粗品用快速硅胶柱层析分离纯化得到化合物(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮为黄色固体(200mg，产率55％)。
MS m/z(ESI):517.1[M+H] +.
第八步：4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
将(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(50mg，0.1mmol)、(2-氟-6-羟基苯基)硼酸(30mg,0.2mmol),Pd(dppf)Cl 2(16mg,0.02mmol),碳酸铯(100mg,0.3mmol)加入dixoane(1.5mL)，反应液均匀混合后，在微波加热100℃条件下反应1小时，减压浓缩，所得粗品中加入CH 2Cl 2(20mL)及DIPEA(0.3mL),反应温度降至0℃，向反应液中缓慢加入丙烯酰氯(0.1mL),室温反应1小时，减压浓缩。所得粗品用Pre-HPLC分离纯化得到化合物4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮为白色固体(14mg，产率：24％)。
MS m/z(ESI):593.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.40(d,J＝5.6Hz,1H),8.22-8.27(m,1H),7.21-7.27(m,2H),6.79-6.88(m,1H),6.58-6.66(m,2H),6.28-6.34(m,1H),5.84(d,J＝12.0Hz,1H),5.06(s,1H),4.43-4.59(m,2H),4.07-4.23(s,1H),3.57-3.85(m,2H),3.20-3.48(m,1H),2.79-2.85(m,1H),2.41(s,3H),1.47(d,J＝4.8Hz,3H),1.20(d,J＝6.4Hz,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例1-1和实施例1-2
(P-4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)和(M-4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)
实施例1通过SFC拆分得到两个轴手性异构体实施例1-1和实施例1-2，SFC：手性制备条件：
仪器 SFC-150(Thar,Waters)
柱型 IC 20*250mm,10μm(Daicel)
柱压 100bar
流动相 CO 2/Methanol(0.2％Methanol Ammonia)＝50/50
流速 120g/min
检测波长 UV 214nm
柱温 35℃
实施例1-1：
t R＝1.92min
MS m/z(ESI):593.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.40(d,J＝5.6Hz,1H),8.22-8.27(m,1H),7.21-7.27(m,2H),6.79-6.88(m,1H),6.58-6.66(m,2H),6.28-6.34(m,1H),5.84(d,J＝12.0Hz,1H),5.06(s,1H),4.43-4.59(m,2H),4.07-4.23(s,1H),3.57-3.85(m,2H),3.20-3.48(m,1H),2.79-2.85(m,1H),2.41(s,3H),1.47(d,J＝4.8Hz,3H),1.20(d,J＝6.4Hz,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例1-2：
t R＝2.43min
MS m/z(ESI):593.1[M+H] +.
1HNMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.40(d,J＝5.6Hz,1H),8.25(t,J＝10.8Hz,1H),7.21-7.27(m,2H),6.79-6.90(m,1H),6.58-6.66(m,2H),6.28-6.34(m,1H),5.83(dd,J＝10.8Hz,2.0Hz,1H),5.05-5.10(m,1H),4.41-4.57(m,2H),4.07-4.21(m,1H),3.61-3.87(m,2H),3.24-3.36(m,1H),2.77-2.83(m,1H),2.41(s,3H),1.46-1.49(m,3H),1.19(d,J＝6.8Hz,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例2
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
第一步：4,7-二氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
室温下往7-氯-6-氟-4-羟基-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(200mg,0.526mmol)的乙腈(10mL)溶液里加N,N-二异丙基乙胺(407mg,3.16mmol)，再加三氯氧磷(242mg,1.58mmol)，80℃搅拌1小时。冷却至室温，直接用于下一步反应。
第二步：叔-丁基(2R,5S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-羧酸酯的制备
往上一步反应液加N,N-二异丙基乙胺(678mg,5.26mmol)和叔-丁基(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-羧酸酯(224mg,1.005mmol)，加完室温搅拌1小时。加水(60mL)，用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，有机相用氯化铵水溶液(40mL)洗，再用氯化钠水溶液(30mL)洗，浓缩后柱层析[洗脱剂:二氯甲烷～甲醇/二氯甲烷从0％到2.2％]纯化得到叔-丁基(2R,5S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-羧酸酯(200mg,2步产率66％)黄色固体。
MS m/z(ESI):577.2[M+H] +，579.2[M+H+2] +
第三步：7-氯-4-((2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮三氟乙酸盐的制备
往叔-丁基(2R,5S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-羧酸酯(200mg,0.347mmol)的二氯甲烷(6mL)溶液里加三氟乙酸(1.2mL)，加完室温搅拌1.5小时。低温浓缩反应液得到7-氯-4-((2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮三氟乙酸盐(200mg)红色油状物，快速用于下一步反应。
MS m/z(ESI):477.2[M+H] +,479.2[M+H+2] +。
第四步：4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
往7-氯-4-((2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮三氟乙酸盐(200mg,0.347mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(447mg,3.47mmol)，在0℃滴加丙烯酰氯(63mg,0.694mmol)，加完搅拌1小时。反应用氯化铵水溶液(30mL)淬灭，二氯甲烷(30mL×3)萃取，二氯甲烷层用饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析[洗脱剂:二氯甲烷～甲醇/二氯甲烷从0％到2.5％]纯化得到4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(130mg,2步产率71％)黄色固体。
MS m/z(ESI):530.2[M+H] +,532.2[M+H+2] +。
第五步：4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(130mg,0.246mmol)，(2-氟-6-羟基苯基)硼酸(77mg,0.491mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(40mg,0.0491mmol)和碳酸铯(240mg,0.738mmol)加入二氧六环(8mL)和水(1mL)中，氮气置换，100℃微波搅拌1小时。浓缩反应液，柱层析[洗脱剂:二氯甲烷～甲醇/二氯甲烷从0％到2.5％]纯化得到4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(90mg,产率60％)黄色固体。
MS m/z(ESI):606.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.40(d,J＝8Hz,1H),8.29-8.18(m,1H),7.30–7.18(m,2H),6.93–6.73(m,1H),6.70–6.56(m,2H),6.36–6.20(m,1H),5.89–5.75(m,1H),5.15–4.98(m,1H),4.63–4.22(m,2H),4.11–3.82(m,2H),3.68–3.40(m,1H),2.88–2.65(m,1H),2.40(d,J＝4Hz,3H),1.53–1.43(m,3H),1.36(t,J＝8Hz,1H),1.28(t,J＝8Hz,2H),1.23–1.16(m,3H),1.10–1.01(m,3H).
实施例2-1和实施例2-2
(P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)和(M-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)
实施例2通过SFC拆分得到两个轴手性异构体实施例2-1和实施例2-2，SFC：手性制备条件：
仪器 SFC-150(Thar,Waters)
柱型 IC 20*250mm,10μm(Daicel)
柱压 100bar
流动相 CO 2/Methanol(0.2％Methanol Ammonia)＝60/40
流速 100g/min
检测波长 UV 214nm
柱温 35℃
实施例2-1：
t R＝1.99min
MS m/z(ESI):606.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.40(d,J＝8Hz,1H),8.29-8.18(m,1H),7.30–7.18(m,2H),6.93–6.73(m,1H),6.70–6.56(m,2H),6.36–6.20(m,1H),5.89–5.75(m,1H),5.15–4.98(m,1H),4.63–4.22(m,2H),4.11–3.82(m,2H),3.68–3.40(m,1H),2.88–2.65(m,1H),2.40(d,J＝4Hz,3H),1.53–1.43(m,3H),1.36(t,J＝8Hz,1H),1.28(t,J＝8Hz,2H),1.23–1.16(m,3H),1.10–1.01(m,3H).
实施例2-2：
t R＝2.87min
MS m/z(ESI):606.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.40(d,J＝8Hz,1H),8.27-8.18(m,1H),7.30–7.19(m,2H),6.94–6.74(m,1H),6.70–6.56(m,2H),6.36–6.20(d,J＝16Hz,1H),5.90–5.75(m,1H),5.14–4.98(m,1H),4.63–4.22(m,2H),4.12–3.82(m,2H),3.68–3.41(m,1H),2.87–2.65(m,1H),2.40(d,J＝4Hz,3H),1.53–1.42(m,3H),1.36(t,J＝8Hz,1H),1.28(t,J＝8Hz,2H),1.23–1.16(d,J＝4Hz,3H),1.10–1.01(d,J＝4Hz,3H).
实施例3
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)的制备参考实施例1。
MS m/z(ESI):609.1[M+H] +.
实施例4
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-(甲硫基)苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)的制备参考实施例1。
MS m/z(ESI):622.8[M+H] +.
实施例5
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
第一步：N-(4-氯-3-氟苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺的制备
将4-氯-3-氟苯胺(1.45g,0.01mol)溶于THF(150mL)，加入Na 2CO 3(3.18g,0.03mol),氮气保护下，冷却到0℃，滴加三氟乙酸酐(4.2mL，0.03mol)，滴加完毕，室温搅拌10小时。将反应液加到水(150mL)中。乙酸乙酯(100mL)萃取三次。合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，柱层析(PE/EA＝5：1)纯化得到白色固体目标产物N-(4-氯-3-氟苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(2.3g，产率95％)。
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ7.70(dd,J＝11.1,2.0Hz,1H),7.49–7.40(m,2H)；
19F NMR(376MHz,MeOD-d 4)δ-77.17(s)；
MS m/z(ESI):242.1[M+H] +。
第二步：(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)硼酸的制备
将N-(4-氯-3-氟苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(2.3g,9.5mmol)溶于THF(40mL)，氮气保护下，冷却到-78℃，滴加n-BuLi(7.9mL，19.0mmol,2.4M)，滴加完毕，在-50℃条件下搅拌50分钟。反应液冷却到-78℃，滴加硼酸三异丙酯(2.3g,9.5mmol)(4.8mL，20.9mmol)，滴加完毕，相同温度下搅拌20分钟，移去干冰浴，室温搅拌2小时。然后，将反应液冷却到0℃，滴加稀盐酸(19mL,1M)，升温到40℃，搅拌1小时。乙酸乙酯(100mL)萃取三次。合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，柱层析(PE/EA＝4：1)纯化得到灰色固体目标产物(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)硼酸(1.1g，产率56％)。
MS m/z(ESI):190.0[M+H] +。
第三步：(2-氨基-6-氟苯基)硼酸的制备
将(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)硼酸(100mg，0.53mmol)溶于MeOH(20mL)中，加入Pd/C(20mg),氢气置换三次，15psi下搅拌反应2小时，TLC(PE/EA 1：1)检测反应完全。过滤，浓缩滤液，得到黄色固体目标产物(2-氨基-6-氟苯基)硼酸(80mg，产率97％)，直接用于下一步反应，无需纯化。
MS m/z(ESI):156.0[M+H] +。
第四步：4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
将(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(26mg，0.05mmol),(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)硼酸(23.2mg,0.15mmol)和碳酸铯(48.87mg,0.15mmol)溶于dioxane/H 2O(1.5mL/0.3mL)。氮气置换1分钟，微波100℃条件下，反应1小时。反应结束，浓缩反应液，柱层析(CH 2Cl 2/MeOH＝20：1)纯化得到粗品，后用制备HPLC纯化得到黄色固体目标产物4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7.0mg，产率24％)。
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.46(d,J＝5.4Hz,1H),8.25(dd,J＝21.2,12.0Hz,1H),7.27(d,J＝5.5Hz,1H),7.11(dd,J＝14.7,8.2Hz,1H),6.84(d,J＝14.2Hz,1H),6.49(d,J＝8.3Hz,1H),6.41–6.27(m,2H),5.83(dd,J＝10.6,1.6Hz,1H),4.48(dd,J＝52.4,11.6Hz,2H),4.30–3.83(m,2H),3.74(d,J＝9.7Hz,2H),3.22(s,1H),2.98–2.80(m,1H),2.43(d,J＝0.7Hz,3H),1.56–1.40(m,3H),1.22(d,J＝6.6Hz,3H),1.01(d,J＝6.6Hz,3H).
19F NMR(376MHz,MeOD-d 4)δ-114.58–-114.95(m),-114.95–-115.34(m),-125.12–-126.48(m).
MS m/z(ESI):592.2[M+H] +。
实施例6
2-(4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-氧基-1,2-二氢吡啶[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-氟苯甲酰胺
2-(4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-氧基-1,2-二氢吡啶[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-氟苯甲酰胺的制备参照实施例1。
MS m/z(ESI):619.7[M+H] +。
实施例7
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-(二甲氨基)-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶基[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-(二甲氨基)-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶基[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参照实施例1。
MS m/z(ESI):619.7[M+H] +。
实施例8
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-(甲氨基)苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶基[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参照实施例1。
MS m/z(ESI):605.7[M+H] +。
实施例9
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
将(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-氯-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(26.7mg，0.05mmol),(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)硼酸(28.4mg,0.15 mmol)和乙酸钾(15.0mg,0.15mmol)溶于dioxane/H 2O(1.5mL/0.3mL)。氮气置换1分钟，微波100℃条件下，反应1小时。反应结束，浓缩反应液，柱层析(CH 2Cl 2/MeOH＝20：1)纯化得到粗品，后用制备HPLC纯化得到黄色固体目标产物4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(3.7mg，产率14％)。
MS m/z(ESI):642.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.56–8.39(m,2H),7.24(t,J＝5.3Hz,1H),7.15(dd,J＝15.4,6.9Hz,1H),6.84(d,J＝9.9Hz,1H),6.53–6.46(m,1H),6.32(d,J＝15.9Hz,1H),5.84(d,J＝12.2Hz,1H),4.68–4.36(m,3H),4.10(dd,J＝45.7,31.6Hz,2H),3.76(s,1H),2.94(s,2H),2.42(d,J＝6.2Hz,3H),1.57–1.43(m,3H),1.22(d,J＝6.7Hz,3H),1.06(dd,J＝42.4,6.7Hz,3H). 19F NMR(376MHz,MeOD)δ-117.04–-117.24(m),-117.24–-117.51(m).
实施例9-1和实施例9-2
(P-4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)和(M-4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)
实施例9通过SFC拆分得到两个轴手性异构体实施例9-1和实施例9-2，SFC:手性制备条件：
仪器 SFC-80(Thar,Waters)
柱型 IC 20*250mm,10μm(Daicel)
柱压 100bar
流动相 CO 2/Methanol(0.2％Methanol Ammonia)＝45/55
流速 80g/min
检测波长 UV 214nm
柱温 35℃
实施例9-1：
t R＝1.74min
MS m/z(ESI):642.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.56–8.39(m,2H),7.24(t,J＝5.3Hz,1H),7.15(dd,J＝15.4,6.9Hz,1H),6.84(d,J＝9.9Hz,1H),6.53–6.46(m,1H),6.32(d,J＝15.9Hz,1H),5.84(d,J＝12.2Hz,1H),4.68–4.36(m,3H),4.10(dd,J＝45.7,31.6Hz,2H),3.76(s,1H),2.94(s,2H),2.42(d,J＝6.2Hz,3H),1.57–1.43(m,3H),1.22(d,J＝6.7Hz,3H),1.06(dd,J＝42.4,6.7Hz,3H).
19F NMR(376MHz,MeOD-d 4)δ-117.04–-117.24(m),-117.24–-117.51(m).
实施例9-2：
t R＝2.49min
MS m/z(ESI):642.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.56–8.39(m,2H),7.27–7.10(m,2H),6.84(dd,J＝28.3,17.7Hz,1H),6.50(d,J＝8.8Hz,1H),6.32(d,J＝16.9Hz,1H),5.83(d,J＝11.7Hz,1H),4.63–4.41(m,2H),4.23–4.02(m,1H),3.79–3.57(m,2H),3.36(s,2H),2.99–2.86(m,1H),2.41(d,J＝7.6Hz,3H),1.51(d,J＝25.9Hz,3H),1.21(d,J＝6.6Hz,3H),1.05(dd,J＝44.8,6.7Hz,3H).
实施例10
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
将(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(26mg，0.05mmol),(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)硼酸(28.4mg,0.15mmol)和碳酸铯(48.8mg,0.15mmol)溶于dioxane/H 2O(1.5mL/0.3mL)。氮气置换1分钟，微波100℃条件下，反应1小时。反应结束，将反应液旋干，柱层析(CH 2Cl 2/MeOH＝20：1)纯化得到粗品，后用制备HPLC纯化得到黄色固体目标产物4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1- 基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(4.4mg，产率14％)。
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.47(d,J＝5.4Hz,1H),8.38–8.24(m,1H),7.27(d,J＝5.4Hz,1H),7.17(t,J＝8.6Hz,1H),6.85(d,J＝14.9Hz,1H),6.49(d,J＝8.9Hz,1H),6.32(d,J＝16.3Hz,1H),5.84(d,J＝10.5Hz,1H),4.57(d,J＝23.5Hz,2H),4.42(s,1H),4.24–3.89(m,2H),3.73(dd,J＝14.4,7.9Hz,1H),2.92(s,1H),2.43(s,3H),1.54–1.40(m,3H),1.22(d,J＝6.7Hz,3H),1.01(d,J＝6.6Hz,3H).
19F NMR(376MHz,MeOD-d 4)δ-116.46–-116.73(m),-116.87(dd,J＝39.0,8.4Hz),-126.18(dd,J＝24.9,15.2Hz).
MS m/z(ESI):626.1[M+H] +。
实施例11
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2,3-二氟-6-羟基苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2,3-二氟-6-羟基苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例2。
MS m/z(ESI):611.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.41(d,J＝5.6Hz,1H),8.32-8.25(m,1H),7.25(d,J＝5.6Hz,1H),7.20-7.13(m,1H),6.92-6.82(m,1H),6.62-6.58(m,1H),6.34-6.28(m,1H),5.83(d,J＝10.4Hz,1H),5.14-5.04(m,1H),4.64-4.42(m,2H),4.25-4.07(m,1H),3.89-3.61(m,3H),2.88-2.77(m,1H),2.42(s,3H),1.52-1.46(m,3H),1.20(d,J＝6.4Hz,3H),1.05(d,J＝6.4Hz,3H).
实施例12
(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例2。
MS m/z(ESI):611.1[M+H] +.
实施例13
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
第一步：2,5,6-三氯-N-((2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)氨基甲酰)尼克酰胺的制备
N 2保护下，将2,5,6-三氯尼克酰胺(6.2g，27.7mmol)溶于THF(60mL)中，-78℃滴加草酰氯(15.2mL，31.5mmol)(2M/L的二氯甲烷溶液)，-78℃搅拌10分钟，60℃搅拌3小时，反应液冷却至0℃，滴加三乙胺(18mL，111mmol)，滴加2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-胺(5g，27.7mmol)的THF溶液，室温搅拌2小时。加盐水淬灭，加水和乙酸乙酯(3*100mL)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，柱层析(DCM/MeOH＝100：1到70：1)纯化得到目标产物2,5,6-三氯-N-((2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)氨基甲酰)尼克酰胺(8.6g，产率72％)。
MS m/z(ESI):433.1[M+H] +,435.1[M+H+2] +.
第二步：6,7-二氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备
将2,5,6-三氯-N-((2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)氨基甲酰)尼克酰胺(10.4g，24.1mmol)溶于无水THF(80mL)中，氮气保护下，冷却至0℃，滴加KHMDS(48mL，48.2mmol)，搅拌0.5小时。加饱和氯化铵水溶液淬灭，加水和乙酸乙酯(3*100mL)萃取。合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，用乙酸乙酯打浆纯化得到目标产物6,7-二氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(8g，产率84％)。
MS m/z(ESI):397.1[M+H] +,399.1[M+H+2] +.
第三步：4,6,7-三氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
将6,7-二氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(5.2g，13.1mmol)溶于ACN(50mL)中，加入DIEA(23mL，66mmol),POCl 3(3mL,19.7mmol)，80℃搅拌0.5小时。直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):415.1[M+H] +,417.1[M+H+2] +.
第四步：叔-丁基(2R,5S)-4-(6,7-二氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-羧酸酯的制备
将4,6,7-三氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的乙腈(50mL)中，加入DIEA(23mL，66mmol)，加入叔-丁基(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-羧酸酯(6.2g，26.2mmol)，室温搅拌1小时。加水淬灭，加水和乙酸乙酯(3*100mL)萃取。合并 有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，柱层析(CH 2Cl 2/MeOH＝30：1)纯化得到目标产物叔-丁基(2R,5S)-4-(6,7-二氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-羧酸酯(6.1g，产率77％)。
MS m/z(ESI):593.1[M+H] +,595.1[M+H+2] +.
第五步：6,7-二氯-4-((2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
将叔-丁基(2R,5S)-4-(6,7-二氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-2-羰基-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-羧酸酯(6.1g，10.3mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入TFA(20mL)，室温搅拌1小时。浓缩得到粗品目标产物6,7-二氯-4-((2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6.1g，产率100％)。
MS m/z(ESI):493.1[M+H] +,495.1[M+H+2] +.
第六步：4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6,7-二氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
将6,7-二氯-4-((2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6g，12.2mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入DIEA(30mL，131mmol)，加入丙烯酰氯(1.08mL，13.13mmol)，室温搅拌1小时。加水淬灭，加水和乙酸乙酯(3*100mL)萃取。合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，柱层析(CH 2Cl 2/MeOH＝20：1)纯化得到目标产物4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6,7-二氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(1.6g，产率22％)。
MS m/z(ESI):547.1[M+H] +,549.1[M+H+2] +.
第七步：4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
N 2保护下，将4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6,7-二氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(700mg，1.3mmol)，(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)硼酸(380mg，2.6mmol)溶于1,4-二氧六环和水的混合液中(6mL：0.3mL)中，Pd(dppf)Cl 2.DCM(100mg，0.1mmol)，KOAc(400mg，4mmol)，100℃微波反应1小时。加水淬灭，加水和乙酸乙酯(3*50mL)萃取。合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，柱层析(CH 2Cl 2/MeOH＝200：1到80：1)纯化得到目标产物4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(400mg，产率48％)。
MS m/z(ESI):656.1[M+H] +,658.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.47–8.34(m,2H),7.24-7.20(m,1H),7.10-7.14(m,1H),6.79-6.68(m,1H),6.42–6.40(d,J＝8.0Hz,1H),6.24–6.17(m,1H),5.75-5.71(m,1H),5.01–4.94(m,2H),4.46-4.40(m,1H),4.26-4.17(m,1H),4.03-3.99(m,1H),3.84-3.79(m,1H),2.86-2.77(m,1H),2.36(s,3H),1.26-1.19(m,9H),1.14-1.11(m,3H).
实施例13-1和实施例13-2
(P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)和(M-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)
实施例13通过SFC拆分得到两个轴手性异构体实施例13-1和实施例13-2，SFC：手性制备条件：
仪器 SFC-150(Thar,Waters)
柱型 IC 20*250mm,10μm(Daicel)
柱压 100bar
流动相 CO 2/Methanol(0.2％Methanol Ammonia)＝40/60
流速 120g/min
检测波长 UV 214nm
柱温 35℃
实施例13-1：
t R＝1.74min
MS m/z(ESI):656.1[M+H] +,658.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.47–8.34(m,2H),7.24-7.20(m,1H),7.10-7.14(m,1H),6.79-6.68(m,1H),6.42–6.40(d,J＝8.0Hz,1H),6.24–6.17(m,1H),5.75-5.71(m,1H),5.01–4.94(m,2H),4.46-4.40(m,1H),4.26-4.17(m,1H),4.03-3.99(m,1H),3.84-3.79(m,1H),2.86-2.77(m,1H),2.36(s,3H),1.26-1.19(m,9H),1.14-1.11(m,3H).
实施例13-2：
t R＝2.49min
MS m/z(ESI):656.1[M+H] +,658.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.55–8.38(m,2H),7.25-7.20(m,1H),7.18-7.11(m, 1H),6.88-6.76(m,1H),6.51–6.47(d,J＝8.0Hz,1H),6.33–6.27(m,1H),5.84-5.80(m,1H),5.12–5.10(m,2H),4.46-4.23(m,2H),4.15-3.89(m,2H),3.64-3.50(m,1H),2.89-2.82(m,1H),2.43(s,3H),1.51-0.99(m,12H).
实施例14
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):623.1[M+H] +,625.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.47–8.34(m,2H),7.21-7.20(m,2H),6.89-6.77(m,1H),6.64–6.55(m,2H),6.32–6.26(m,1H),5.84-5.80(m,1H),5.08–5.03(m,2H),4.56-4.49(m,1H),4.34-4.26(m,1H),4.13-4.04(m,1H),3.92-3.88(m,1H),2.79-2.72(m,1H),2.40(s,3H),1.55–1.43(m,3H),1.35-1.27(m,3H),1.20-1.17(m,3H),1.08-1.05(t,J＝8.0Hz,3H).
实施例14-1和实施例14-2
(P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)和(M-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮)
实施例14通过SFC拆分得到两个轴手性异构体实施例14-1和实施例14-2，SFC：手性制备条件：
仪器 SFC-150(Thar,Waters)
柱型 IC 20*250mm,10μm(Daicel)
柱压 100bar
流动相 CO 2/Methanol(0.2％Methanol Ammonia)＝50/50
流速 120g/min
检测波长 UV 214nm
柱温 35℃
实施例14-1：
t R＝2.46min
MS m/z(ESI):623.1[M+H] +,625.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.47–8.34(m,2H),7.21-7.20(m,2H),6.89-6.77(m,1H),6.64–6.55(m,2H),6.32–6.26(m,1H),5.84-5.80(m,1H),5.08–5.03(m,2H),4.56-4.49(m,1H),4.34-4.26(m,1H),4.13-4.04(m,1H),3.92-3.88(m,1H),2.79-2.72(m,1H),2.40(s,3H),1.55–1.43(m,3H),1.35-1.27(m,3H),1.20-1.17(m,3H),1.08-1.05(t,J＝8.0Hz,3H).
实施例14-2：
t R＝3.08min
MS m/z(ESI):623.1[M+H] +,625.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.48–8.34(m,2H),7.23-7.21(m,2H),6.90-6.78(m,1H),6.66–6.58(m,2H),6.33–6.28(m,1H),5.85-5.82(m,1H),5.10–5.06(m,2H),4.58-4.50(m,1H),4.34-4.27(m,1H),4.13-4.06(m,1H),3.93-3.88(m,1H),2.79-2.71(m,1H),2.41(s,3H),1.56–1.46(m,3H),1.37-1.29(m,3H),1.21-1.18(m,3H),1.07-1.05(t,J＝8.0Hz,3H).
实施例15
(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2,6-二氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2,6-二氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例2。
MS m/z(ESI):595.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.40–8.32(m,2H),7.51(t,J＝7.6Hz,1H),7.22(d,J＝5.4Hz,1H),7.05(t,J＝8.4Hz,2H),6.86–6.79(m,1H),6.37–6.26(m,1H),5.84(d,J＝10.6Hz,1H),5.08(m,2H),4.56-4.46(m,2H),4.21-4.08(m,1H),3.85-3.62(m,2H),2.86-2.82(m,1H),2.40(s,3H),1.47(d,J＝6.6Hz,3H),1.21–1.19(d,J＝6.8Hz,3H),1.04(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例16
(S)-4-(4-丙烯酰--2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
(S)-4-(4-丙烯酰--2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例2。
MS m/z(ESI):576.7[M+H] +
实施例17
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-3,5-二氯-6-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-3,5-二氯-6-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):690.1[M+H] +,692.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.46–8.34(m,2H),7.25-7.21(m,1H),7.11-7.14(m,1H),6.44–6.42(d,J＝8.0Hz,1H),6.23–6.16(m,1H),5.73-5.70(m,1H),5.03–4.97(m,2H),4.47-4.42(m,1H),4.25-4.16(m,1H),4.06-4.02(m,1H),3.86-3.83(m,1H),2.84-2.79(m,1H),2.34(s,3H),1.27-1.19(m,9H),1.16-1.14(m,3H).
实施例18
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-5-氯-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-5-氯-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):660.1[M+H] +,662.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.58–8.38(m,2H),7.53–7.36(m,1H),7.23–7.15(m,1H),6.97–6.79(m,1H),6.22(d,J＝16Hz,1H),5.77(d,J＝8Hz,1H),5.45–5.40(m,2H),5.07–4.82(m,1H),4.50–3.98(m,3H),3.92–3.49(m,2H),3.17–3.02(m,1H),2.93–2.63(m,1H),2.44–2.26(m,3H),1.43–1.27(m,3H),1.08(d,J＝4Hz,3H),1.04–0.86(m,3H).
实施例19
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-5,6-二氟-3-甲基苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲 硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-5,6-二氟-3-甲基苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):640.1[M+H] +,642.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.57–8.35(m,3H),7.25–7.04(m,2H),6.96–6.79(m,1H),6.29–6.14(m,1H),5.77(d,J＝12Hz,1H),5.09–4.82(m,1H),4.76–4.58(m,2H),4.48–3.98(m,3H),3.94–3.59(m,2H),2.93–2.69(m,1H),2.44–2.29(m,3H),2.10–1.95(m,3H),1.42–1.26(m,3H),1.08(d,J＝4Hz,3H),1.05–0.87(m,3H).
实施例20
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-5-氯-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-5-氯-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):674.1[M+H] +,676.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.61–8.39(m,2H),7.56–7.35(m,1H),7.27–7.14(m,1H),6.96–6.75(m,1H),6.20(d,J＝16Hz,1H),5.82–5.71(m,1H),5.53–5.38(m,2H),4.95–4.69(m,1H),4.57–4.30(m,1H),4.24–4.00(m,2H),3.98–3.79(m,2H),2.95–2.60(m,1H),2.44–2.25(m,3H),1.40–1.13(m,6H),1.10–0.87(m,6H).
实施例21
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):674.1[M+H] +,
实施例22
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-3,6-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):626.1[M+H] +,628.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.58–8.34(m,2H),7.26–6.99(m,2H),6.95–6.77(m,1H),6.47–6.27(m,1H),6.26–6.13(m,1H),5.77(d,J＝16Hz,1H),5.22(s,2H),5.09–4.80(m,1H),4.50–3.99(m,3H),3.95–3.53(m,2H),3.20–2.98(m,1H),2.94–2.65(m,1H),2.42–2.24(m,3H),1.43–1.25(m,3H),1.09(d,J＝4Hz,3H),1.04–0.82(m,3H).
实施例23
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-3,5,6-三氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-3,5,6-三氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参照实施例13。
MS m/z(ESI):644.1[M+H]+。
实施例24
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-3,5,6-三氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-3,5,6-三氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):658.1[M+H]+。
实施例25
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-5,6-二氟-3-甲基苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-5,6-二氟-3-甲基苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):654.1[M+H] +,656.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.58–8.31(m,2H),7.25–7.03(m,2H),6.94–6.73(m,1H),6.19(d,J＝16Hz,1H),5.81–5.69(m,1H),4.96–4.59(m,3H),4.55–4.38(m,1H),4.29–3.96(m,2H),3.93–3.72(m,2H),3.00–2.60(m,1H),2.45–2.25(m,3H),2.07–1.94(m,3H),1.43–1.13(m,6H),1.12–0.82(m,6H).
实施例26
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-2,3,4-三氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4- (甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-2,3,4-三氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):658.1[M+H]+,
实施例27
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-2,3,4-三氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-2,3,4-三氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):644.1[M+H]+,
实施例28
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-2,3-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-2,3-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):640.2[M+H]+,
实施例29
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-2,3-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-2,3-二氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):626.1[M+H]+,
实施例30
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-甲基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-甲基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):607.1[M+H] +,609.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.57–8.34(m,2H),7.43–7.31(m,1H),7.18(d,J＝4Hz,1H),7.15–7.01(m,2H),6.95–6.78(m,1H),6.28–6.14(m,1H),5.77(d,J＝12Hz,1H),5.07–4.86(m,1H),4.45–4.25(m,2H),4.22–3.98(m,1H),3.93–3.58(m,2H),3.21–3.02(m,1H),2.87–2.69(m,1H),2.40–2.27(m,3H),1.98–1.85(m,3H),1.41–1.28(m,3H),1.08(d,J＝8Hz,3H),1.02–0.79(m,3H).
实施例31
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-甲基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-甲基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):621.2[M+H]+,
实施例32
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氯-6-氟苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氯-6-氟苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):627.1[M+H] +,629.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.56–8.30(m,2H),7.58-7.36(m,3H),7.19(s,1H),6.87(s,1H),6.24-6.19(d,J＝20.0Hz,1H),5.79-5.76(d,J＝12.0Hz,1H),4.97(s,1H),4.32-4.04(m,3H),3.80-3.49(m,3H),2.72(s,1H),2.35(s,3H),1.34-0.91(m,9H).
实施例33
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氯-6-氟苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氯-6-氟苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):641.6[M+H]+,
实施例34
(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-7-(o-苯甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-7-(o-苯甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):589.1[M+H] +,591.1[M+H+2] +.
实施例35
(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氯苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氯苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):609.6[M+H]+,
实施例36
(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
(S)-4-(4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):661.1[M+H]+,
实施例37
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-7-(o-苯甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)-7-(o-苯甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):603.1[M+H] +,605.1[M+H+2] +.
实施例38
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氯苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氯苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):623.6[M+H]+,
实施例39
4-((2S,5R)-(4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((2S,5R)-(4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):675.1[M+H]+,
实施例40
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-3,5-二氯-6-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-3,5-二氯-6-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备参考实施例13。
MS m/z(ESI):676.1[M+H] +,678.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.40–8.32(m,2H),7.51(t,J＝7.6Hz,1H),7.22(d,J＝5.4Hz,1H),7.05(t,J＝8.4Hz,2H),6.86–6.79(m,1H),6.37–6.26(m,1H),5.84(d,J＝10.6Hz,1H),5.08(m,2H),4.56-4.46(m,2H),4.21-4.08(m,1H),3.85-3.62(m,2H),2.86-2.82(m,1H),2.40(s,3H),1.47(d,J＝6.6Hz,3H),1.21–1.19(d,J＝6.8Hz,3H),1.04(d,J＝6.8Hz,3H).
二、化合物生物学测试评价
以下结合测试例进一步描述解释本发明，但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。
测试例1、NCI-H358/Mia PaCa-2细胞增殖活性抑制作用的测定
1.1实验目的：
测定实施例化合物对KRAS G12C突变细胞株NCI-H358和Mia PaCa-2细胞增殖活性的抑制作用。
1.2.实验仪器和试剂：
1.2.1仪器：
酶标仪(BioTek Synergy H1)
移液器(Eppendorf&Rainin)
1.2.2试剂：
NCI-H358购自南京科佰生物科技有限公司；
Mia PaCa-2购自ATCC；
Cell Titer-Glo细胞购自Promega公司，货号为G7573；
RPMI 1640购自Gibco，货号为22400089；
DMEM购自Gibco，货号为11995065；
FBS购自Gibco，货号为10091148；
PBS购自Gibco，货号为10010023；
胰酶购自Gibco，货号为25200056；
细胞培养板购自Corning公司，货号为3610。
1.3.实验方法：
培养NCI-H358或Mia PaCa-2细胞至合适的融合度时，收集NCI-H358或Mia PaCa-2细胞，使用完全培养基将细胞调整为合适的细胞浓度，将细胞悬液铺于96孔板，每孔90μL，放入37℃，5％CO 2培养箱贴壁过夜，使用DMSO以及培养基配制不同浓度的化合物溶液，设置溶媒对照，将化合物溶液加入到96孔板中，每孔10μL，放入37℃，5％CO 2培养箱中继续培养72h后，加入CellTiter-Glo溶液，振荡混合均匀后，避光孵育10分钟，用BioTek Synergy H1酶标仪进行读数。
1.4.实验数据处理方法：
使用发光信号值计算抑制率，将浓度以及抑制率使用Graphpad Prism软件进行非线性回归曲线拟合，得到IC 50值。
1.5.实验结果：
实验结果如表8所示，实施例化合物对NCI-H358和Mia PaCa-2细胞增殖抑制活性的IC 50值。
表8
注：“NT”表示未检测。
1.6.实验结论：
根据数据显示，本发明实施例化合物对NCI-H358和Mia PaCa-2细胞具有有良好的增殖抑制作用。
测试例2、本发明化合物结合提升KRAS G12C蛋白稳定性(熔解温度)能力的测定
2.1.实验目的：
测试化合物提升KRAS G12C蛋白稳定性的能力(蛋白熔解温度上升的程度可以表征化合物与KRAS G12C蛋白的结合能力)。
2.2.实验试剂和仪器：
2.2.1实验仪器：
定量PCR仪(Quantstudio6Flex)购自Life公司；
移液器购自Eppendorf或Rainin公司。
2.2.2实验试剂：
Protein Thermal Shift TM Dye Kit购自Thermofisher公司，货号为4461146；
KRAS G12C蛋白购自北京义翘神州科技有限公司，货号为12259-H07E2；
HEPES，1M Buffer Solution购自Thermofisher公司，货号为15630080；
DTT购自Sigma公司，货号为43816-50mL；
NaCl购自国药集团化学试剂有限公司，货号为10019318。
2.3实验方法：
本实验通过thermal shift方法测试化合物结合前后KRAS G12C蛋白熔解温度(Tm)的变化程度来表征化合物提升KRAS G12C蛋白稳定性的能力。
具体实验操作如下：
配制含20μM HEPES(pH 7.5)、1mM DTT、5X SYPRO Orange和150mM NaCl的溶液作为实验缓冲液，同时加入终浓度为5.37μM的人KRAS G12C蛋白。将以上反应混合物分装到8联排PCR管中，每管19.5μL，分别加入0.5μL的测试化合物或者DMSO，则总反应体系为20μL，化合物终浓度为10μM，并设置2.5％DMSO为溶媒对照。室温避光孵育一小时后，将PCR管放入PCR仪中，打开QuantStudio Software v1.3软件，选取melt curve功能检测不同处理组中KRAS G12C蛋白的熔解温度(从25℃加热至95℃，0.03℃/s)。
2.4.实验数据处理方法：
将PCR仪实验数据文件导入至thermal shift软件，得出每个处理组的熔解温度(Tm)，并减去DMSO溶媒对照组的Tm，得到熔解温度的变化值(ΔTm)。
2.5.实验结果：
通过以上方案得出，本发明化合物结合提升KRAS G12C蛋白稳定性实验中，显示出如表9所示的蛋白熔解温度上升的能力。
表9
实施例编号 Tm(℃)DMSO Tm(℃) ΔTm(℃)
实施例1 48.6 60.2 11.6
实施例2 48.7 57.2 8.5
实施例3 50.6 61.5 10.9
实施例4 49.5 61.2 11.7
实施例5 48.6 64.4 15.8
实施例9 46.8 60.2 13.4
实施例13 47.0 58.0 11.0
2.6实验结论：
以上数据显示，本发明实施例化合物与KRAS G12C蛋白有良好的结合能力。
测试例3、本发明化合物对Miapaca-2细胞p-ERK的抑制活性
3.1.实验目的：
测定实施例化合物对KRAS G12C突变细胞Mia PaCa-2中磷酸化ERK水平的抑制 活性。
3.2.实验仪器：
3.2.1仪器：
酶标仪(BioTek Synergy H1)；
移液器(Eppendorf&Rainin)。
3.2.2试剂：
Phosphorylated ERK1/2(T202-Y204)LANCE Ultra Cellular Detection Kit购自PerkinElmer公司，货号为TRF4000M；
细胞培养板购自Corning公司，货号为3610；
White opaque OptiPlate TM-384板购自PerkinElmer公司，货号为6007290。
3.3.实验方法：
培养Mia PaCa-2细胞至合适的融合度时，收集Mia PaCa-2细胞，使用完全培养基将细胞密度调整为1×10 6/mL，将细胞悬液铺于96孔板，每孔50μL，放入37℃，5％CO 2培养箱贴壁过夜，使用DMSO以及完全培养基配制不同浓度的化合物溶液，设置溶媒对照，将化合物溶液加入到96孔板中，每孔25μL，放入37℃，5％CO 2培养箱中继续培养2小时后，细胞培养板弃去上清，每孔加入50μL的裂解液，室温振荡裂解30分钟，放入离心机1000rpm离心1分钟，转移15μL上清到384孔板中，每孔加入5μL的检测混合液(检测终浓度为0.5nM的Eu-labeled anti-ERK1/2(T202-Y204)Antibody以及检测终浓度为5nM的ULight labeled anti-ERK1/2 Antibody)，1000rpm离心1分钟混合均匀，室温反应过夜，用BioTek Synergy H1进行读板，采用时间分辨荧光程序检测620nm以及665nm发射波长处的信号值。
3.4.实验数据处理方法：
计算665nm与620nm发射波长处信号值的比值，使用比值计算抑制率，将浓度以及抑制率使用Graphpad Prism软件进行非线性回归曲线拟合，得到IC 50值。
3.5.实验结果：
表10 Mia PaCa-2细胞中pERK抑制的IC 50值
3.6.实验结论：
以上数据显示，本发明实施例化合物对Mia PaCa-2细胞中pERK具有良好的抑制作用。
测试例4、小鼠药代动力学测定
4.1.研究目的：
以Balb/c小鼠为受试动物，研究化合物口服给药在小鼠体内(血浆)的药代动力学行为。
4.2.试验方案：
4.2.1试验药品：
本发明实施例化合物，自制；
4.2.2试验动物：
Balb/c小鼠，雄性，购自上海杰思捷实验动物有限公司，动物生产许可证号(SCXK(沪)2013-0006N0.311620400001794)。
4.2.3药物配制：
称取5g羟乙基纤维素(HEC，CMC-Na，粘度：800-1200Cps)，溶于1000mL纯净水，加入10g Tween80。混合均匀成澄清溶液。
称取实施例化合物，分别加入4-mL玻璃瓶，加入2.4mL该溶液，超声10分钟，得到无色澄清溶液，浓度为1mg/mL。
4.2.4给药：
Balb/c小鼠，雄性；禁食一夜后分别PO，剂量为10mg/kg，给药体积10mL/kg。
4.2.5样品采集：
于给药前和给药后0.083h、0.25h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h采血，血液置于EDTA-2K试管中，4℃6000rpm离心6min分离血浆，于-80℃保存；给药后4h进食。4.3实验结果：
应用LCMS/MS方法得到最后测定结果见表11
表11：化合物的小鼠药代动力学参数
4.4实验结论：
以上数据显示，本发明实施例化合物有良好的小鼠药代动力学参数。
测试例5、MiaPaca 2移植瘤模型上对肿瘤的抑制实验
5.1实验目的：
以BALB/c裸小鼠为受试动物，采用人胰腺癌细胞MiaPaca 2异种移植瘤(CDX)模型进行体内药效实验，评价受试化合物抗肿瘤作用。
5.2实验仪器与试剂：
5.2.1仪器：
超净工作台(BSC-1300II A2，上海博讯实业有限公司医疗设备厂)；
CO 2培养箱(Thermo-311，Thermo)；
离心机(Centrifuge 5720R，Eppendorf)；
全自动细胞计数仪(Countess II，Life Technologies)；
移液器(10-20μL，Eppendorf)；
显微镜(Ts 2，尼康)；
游标卡尺(CD-6”AX，日本三丰)；
细胞培养瓶(T25/T75/T225，Corning)；
恒温水槽(HWS12，上海一恒科学)。
5.2.2试剂：
DMEM(11995-065，Gibco)；
胎牛血清(FBS)(10091-148，Gibco)；
0.25％胰蛋白酶(25200-056，Gibco)；
青链霉素双抗(P/S)(SV30010，GE)；
磷酸盐缓冲液(PBS)(10010-023，Gibco)；
Matrigel(356234，Corning)；
Gln(25030-081，Gibco)。
5.3实验操作：
从细胞库中取出MiaPaca 2细胞，复苏后加入DMEM培养基(含10％FBS、1％Glu、1％P/S)置于CO 2培养箱中培养(培养箱温度为37℃，CO 2浓度为5％)。待细胞铺满培养瓶底部80-90％后传代，传代后细胞继续置于CO 2培养箱中培养。重复该过程直到细胞数满足体内药效接种需求量，开始收集对数生长期的细胞，用全自动细胞计数仪计数，根据计数结果用PBS和Matrigel(体积比为1：1)重悬细胞，制成细胞悬液(密度8×10 7/mL)，置于冰盒中待用。
使用动物为BALB/c裸小鼠，雌性，6-8周龄，体重约为18-22克。将小鼠保持在一个无特殊病原体的环境中，且在单个通风笼中，每笼5只小鼠。所有的笼子、垫料和水在使用前进行消毒，所有动物可以自由获取标准认证的商业实验室饮食。实验开始前用一次性大小鼠通用耳标标记裸鼠，接种前用75％医用酒精消毒接种部位皮肤，每只小鼠在右后背皮下接种0.1ml(含8*10 6个细胞)MiaPaca 2肿瘤细胞。当平均肿瘤体积达到100-200mm 3时开始分组给药。受试化合物每日经口灌胃给药，给药剂量/给药频次(6mg/kg QD x 3w)，实验结束时各组药效情况见表5。
5.4数据处理：
每周两次用游标卡尺测量肿瘤体积(mm 3)，计算公式为：V＝0.5*D*d*d，其中D和d分别是肿瘤的长径和短径。抗肿瘤药效是通过化合物处理过的动物的平均肿瘤增加体积除以未处理过动物的平均肿瘤增加体积来确定。抑瘤率计算公式为：TGI(％)＝1-[(Vt-V0)给药组/(Vt-V0)溶剂对照组]*100％。实验结束后将所有动物安乐死。
5.5实验结果：
表12：化合物的移植瘤小鼠药效参数
5.6实验结论：
以上数据显示：口服连续给药21天后，本发明实施例化合物在6mg/kg口服每天给药条件下能显著抑制MiaPaca 2裸小鼠移植瘤生长。
测试例6、人肺癌NCI-H358细胞异种移植瘤模型上的体内药效学研究
6.1实验目的：
评价化合物在人肺癌NCI-H358细胞异种移植瘤模型上的体内药效。
6.2实验仪器与试剂：
6.2.1仪器：
1)生物安全柜(BSC-1300II A2，上海博讯实业有限公司医疗设备厂)；
2)超净工作台(CJ-2F，苏州市冯氏实验动物设备有限公司)；
3)CO 2培养箱(Thermo-311，Thermo)；
4)离心机(Centrifuge 5720R，Eppendorf)；
5)全自动细胞计数仪(Countess II，Life Technologies)；
6)游标卡尺(CD-6”AX，日本三丰)；
7)细胞培养瓶(T75/T225，Corning)；
8)电子天平(CPA2202S，赛多利斯)；
9)电子天平(BSA2202S-CW，赛多利斯)；
10)电子天平(BS124S，赛多利斯)。
6.2.2试剂：
1)RPMI-1640培养基(22400-089，Gibco)；
2)DMEM培养基(11995-065，Gibco)；
3)胎牛血清(FBS)(10099-141C，Gibco)；
4)磷酸盐缓冲液(PBS)(10010-023，Gibco)；
5)吐温80(30189828，国药试剂)；
6)羧甲基纤维素钠(30036365，国药试剂。)
6.3实验操作及数据处理：
6.3.1动物：
BALB/c裸小鼠，6-8周，雌性，购自上海西普尔－必凯实验动物有限公司。
6.3.2细胞培养及细胞悬液制备
1)从细胞库中取出一株MiaPaca-2细胞，用DMEM培养基(DMEM+10％FBS)复苏细胞，复苏后的细胞置细胞培养瓶中(在瓶壁标记好细胞种类、日期、培养人名字等)置于CO 2培养箱中培养(培养箱温度为37℃，CO 2浓度为5％)(复苏NCI-H358细胞方法同测试例5中MiaPaca-2细胞，培养基改为RPMI-1640培养基)。
2)每三到五天传代一次，传代后细胞继续置于CO 2培养箱中培养。重复该过程直到细胞数满足体内药效需求。
3)收集培养好的MiaPaca-2细胞，用全自动细胞计数仪计数，根据计数结果用PBS和Matrigel(比例为1：1)重悬细胞，制成细胞悬液(细胞密度为5×10 7/mL)，置于冰盒中待用(NCI-H358细胞不需要加Matrigel，直接用PBS重悬，细胞密度为1×10 8/mL)。
6.3.3配样：
1)溶媒：溶剂(0.5％CMC-Na+1％Tween 80)，储存条件：4℃。
称取0.5g CMC-Na,加入一定体积ddH 2O中溶解，再加入1.0mL Tween 80搅拌混匀，最后定容至100mL。
2)待测化合物(10mg/kg)配制：
称取8.42mg AMG510化合物，加入8.260mL溶剂，通过超声、涡旋、搅拌得到均一溶液。
称取7.81mg实施例13-1化合物，加入7.654mL溶剂，通过超声、涡旋、搅拌得到均一溶液。
6.3.3细胞接种
1)接种前用一次性大小鼠通用耳标标记裸鼠；
2)接种时混匀细胞悬液，用1mL注射器抽取0.1-1mL细胞悬液、排除气泡，然后将注射器置于冰袋上待用；
3)左手保定好裸鼠，用75％酒精消毒裸鼠右侧背部靠右肩位置(接种部位)，30秒后开始接种；
4)依次给试验裸鼠接种(每只小鼠接种0.1mL细胞悬液)；
6.3.4荷瘤鼠量瘤、分组、给药：
1)根据肿瘤生长情况，在接种后第18天量瘤、并计算肿瘤大小。
肿瘤体积计算：肿瘤体积(mm 3)＝长(mm)×宽(mm)×宽(mm)/2
2)根据荷瘤鼠体重和肿瘤大小，采用随机分组的方法进行分组。
3)根据分组结果，开始给予测试药物(给药方式：口服给药；给药剂量：10mg/kg；给药体积：10mL/kg；给药频率：1次/天；给药周期：21天；溶媒：0.5％CMC/1％吐温80)。
4)开始给予测试药物后每周两次量瘤、称重。
5)实验结束后安乐死动物。
6)用Excel等软件处理数据。
6.4数据处理：
化合物抑瘤率TGI(％)的计算：当肿瘤无消退时，TGI(％)＝[(1-(某处理组给药结束时平均瘤体积－该处理组开始给药时平均瘤体积))/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积－溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)]×100％。当肿瘤有消退时，TGI(％)＝[1-(某处理组给药结束时平均瘤体积－该处理组开始给药时平均瘤体积)/该处理组开始给药时平均瘤体积]×100％。
6.5实验结果：
表13：化合物的移植瘤小鼠药效参数
6.6实验结论：
以上数据显示：口服连续给药15天后，本发明实施例化合物在10mg/kg口服每天给药条件下能显著抑制人肺癌NCI-H358细胞的裸小鼠移植瘤生长，显著优于参比数据。
测试例7、hERG钾离子通道抑制活性测试
7.1细胞准备
7.1.1 CHO-hERG细胞培养于175cm 2培养瓶中，待细胞密度生长到60～80％，移走培养液，用7mL PBS洗一遍，然后加入3mL Detachin消化。
7.1.2待消化完全后加入7mL培养液中和，然后离心，吸走上清液，再加入5mL培养液重悬，以确保细胞密度为2～5×10 6/mL。
7.2溶液配制
表14：细胞内液和外液的组成成分
7.3电生理记录过程
单细胞高阻抗封接和全细胞模式形成过程全部由Qpatch仪器自动完成，在获得全细胞记录模式后，细胞钳制在-80毫伏，在给予一个5秒的+40毫伏去极化刺激前，先给予一个50毫秒的-50毫伏前置电压，然后复极化到-50毫伏维持5秒，再回到-80毫伏。每15秒施加此电压刺激，记录2分钟后给予细胞外液记录5分钟，然后开始给药过程，化合物浓度从最低测试浓度开始，每个测试浓度给予2.5分钟，连续给完所有浓度后，给予阳性对照化合物3μM Cisapride。每个浓度至少测试3个细胞(n≥3)。
7.4化合物准备
7.4.1将20mM的化合物母液用细胞外液进行稀释，取5μL 20mM的化合物母液加入2495μL细胞外液，500倍稀释至40μM，然后在含0.2％DMSO的细胞外液中依次进行3倍连续稀释得到需要测试的最终浓度。
7.4.2最高测试浓度为40μM，依次分别为40，13.33，4.44，1.48，0.49，0.16μM共6个浓度。
7.4.3最终测试浓度中的DMSO含量不超过0.2％，此浓度的DMSO对hERG钾通道没有影响。
7.5数据分析
实验数据由XLFit软件进行分析。
7.6质量控制
环境：湿度20～50％，温度22～25℃
试剂：所用实验试剂购买于Sigma公司，纯度>98％
报告中的实验数据必须满足以下标准：
全细胞封接阻抗>100MΩ
尾电流幅度>400pA
药理学参数：
多浓度Cisapride对hERG通道的抑制效应设为阳性对照。
7.7实验结果：
表15：本发明实施例在多浓度对hERG电流的抑制结果
实施例编号 hERG(μM)
实施例2-1 >30
实施例9-1 >30
实施例13-1 >30
实施例14-1 >30
7.8实验结论：
药物对于心脏hERG钾离子通道的抑制是药物导致QT延长综合症的主要原因。从实验结果可以看出，本发明实施例化合物对于心脏hERG钾离子通道没有明显抑制作用，可以避免高剂量时的心脏毒副作用。
测试例8、血浆稳定性试验方案
8.1实验目的
本实验的目的是检测实施例化合物在小鼠、大鼠、犬和人血浆中的稳定性情况。
8.2实验步骤
8.2.1溶液配制
1)、血浆制备
动物或人全血采集后，装入含有抗凝剂的试管中，3500rpm离心10min,收集上层淡黄色血浆。
2)、10μM受试化合物(m/M/V＝C)
称量化合物，储备液用DMSO配置，工作液用100mM磷酸缓冲液配置。
3)、10μM阳性对照
(1)Propantheline(溴丙胺太林Mr＝449.4Da)
称取2.36mg溴丙胺太林，并用1mL DMSO稀释成10mM储备液；移取10μL of10mM储备液至1mL 100mM磷酸缓冲液中，终浓度为100μM。
(2)Mevinolin(洛伐他汀Mr＝404.5Da)
称取4.05mg洛伐他汀，并用1mL DMSO稀释成10mM储备液；移取10μL of 10mM储备液至1mL 100mM磷酸缓冲液中，终浓度为100μM。
8.2.2实验流程：
1)、在96孔板中，依次加入285μL血浆、15μL 10μM化合物(受试化合物),37℃孵育。
2)、在0、15、30、60、90、120min(取点可微调)时分别取出40μL，加入160μL含有内标的乙腈终止液。
3)、离心(3500rpm，10min)后取50μL上清液，加入50μL DDH2O稀释后LC-MS/MS进样。
8.3色谱条件
仪器：岛津LC-20AD
色谱柱：Phenomenex C18(50*4.6mm，5μm粒径)；
流动相：A：乙腈，B：0.1％甲酸溶液0～8min：5％A→95％A，2.0～2.1min：90％A→5％A；流速：0.8mL/min；运行时间：5.0min；进样体积：5μL。
8.4质谱条件：
仪器:API4000型液相色谱质谱联用仪，美国AB公司；
离子源为电喷雾离子化源(ESI)；
干燥气体(N2)温度500℃；
电喷雾电压为5500V；
检测方式为正离子检测；
扫描方式为选择反应监测(MRM)方式；
扫描时间为0.1s。
8.5实验结果：
表16：实施例化合物血浆稳定性结果
8.6实验结论：
以上数据显示，本发明实施例化合物的血浆稳定性高，种属差异小。
测试例9、CYP酶单点抑制试验
9.1实验目的
采用人肝微粒体孵育体系，利用单点法快速预测化合物对CYP450酶亚型的抑制情况。
9.2实验步骤
9.2.1溶液配制
2.5mM NADPH，称重4.165mg NADPH(还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)加100mM磷酸缓冲液至2mL。0.25mg/mL微粒体，50μL 20mg/mL微粒体，加4mL 100mM磷酸缓冲液，混匀。
待测化合物反应液的配制
称取待测实施例化合物，用DMSO稀释至10mM,再用100mM磷酸缓冲液稀释至100μM。
9.2.2实验流程：
1.在96孔板中，加入40μL肝微粒体、10μL底物、10μL待测化合物，预孵育3min。
2.加入NADPH 40μL。
3.在20min时加入300μL含有内标的乙腈终止液。
4.离心进样。
9.3实验结果：
表17：实施例化合物CYP酶单点抑制结果
注：
强抑制：IC 50<1μM；中等抑制：1μM<IC 50<10μM；弱抑制：IC 50>10μM
9.4实验结论：
以上数据显示，本发明实施例化合物对各CYP酶亚型没有强抑制，DDI风险小。
测试例10、血浆蛋白结合率实验
10.1实验目的：
本实验方法的目的是检测实施例化合物在血浆中的血浆蛋白结合情况。
10.2实验仪器及材料：
液相质谱联用仪、离心机、涡旋仪、移液枪、连续加液器、96孔板、组织匀浆机(组织样品分析时使用)、50％的甲醇水溶液，加入内标的乙腈溶液、空白基质(血浆、尿液或组织匀浆液等)
10.3实验步骤：
10.3.1待测物储备液的配制A
用DMSO将实施例化合物配制成1mM溶液A.
10.3.2血浆溶液的配制B
取溶液A加入到血浆溶液中,配制成5uM溶液B.
10.3.3处理流程
1)在膜内加入200uL溶液B.
2)在膜外加入350uLPBS.
3)在37℃水浴锅内孵育6h.
4)样品进行处理稀释并进质谱检测.
10.4色谱条件：
仪器：岛津LC-20AD；
色谱柱：Phenomenex C18(50*4.6mm，5μm粒径)；
流动相：A：乙腈，B:0.1％甲酸溶液0～0.5min：5％A→90％A，2.0～2.1min：90％A→5％A；流速：0.8mL/min；运行时间：5.0min；进样体积：5μL。
10.5质谱条件：
仪器:API4000型液相色谱质谱联用仪，美国AB公司；
离子源为电喷雾离子化源(ESI)；
干燥气体(N2)温度500℃；
电喷雾电压为5500V；
检测方式为正离子检测；
扫描方式为选择反应监测(MRM)方式；扫描时间为0.1s。
10.6实验结果：
表18：实施例化合物血浆蛋白结合率
编号 人 大鼠 小鼠 犬
实施例2-1 98.0 90.5 88.4 82.6
实施例9-1 99.8 94.9 90.1 98.7
实施例13-1 99.7 97.9 93.9 98.7
实施例14-1 96.8 95.4 96.3 92.5
10.7实验结论：
以上数据显示：本发明实施例化合物显示出高血浆蛋白结合率，种属差异小。
测试例11、荷瘤小鼠药代动力学测定
11.1.研究目的：
以MiaPaca 2荷瘤小鼠为受试动物，研究化合物实施例13-1和AMG-510化合物，在6mg/kg剂量下口服给药在小鼠体内(血浆，肿瘤组织和肠道)的药代动力学行为。
11.2.试验方案
11.2.1试验药品：
本发明实施例13-1，AMG-510化合物，自制。
11.2.2试验动物：
MiaPaca 2荷瘤小鼠24只，雌性。每个时间点3只(0h、1h、2h、4h、6h、8h、16h、24h)。上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物生产许可证号(SCXK(沪)2018-0006。
11.2.3药物配制：
称取5g羟甲基纤维素，溶于1000mL纯净水，加入10g Tween80。混合均匀成澄清溶液。
称取实施例化合物13-1，AMG-510溶于该溶液中，摇匀，超声15分钟，得到均匀混悬液，浓度为0.6mg/mL。
11.2.4给药：
MiaPaca 2荷瘤小鼠禁食后分别按体重p.o.(0h点动物不给药)，剂量为6mg/kg，给药体积10mL/kg。
11.2.5样品采集：
小鼠给药前和给药后，CO 2处死，心脏采血0.5ml，置于EDTA-2K试管中，4℃6000rpm离心6min分离血浆，于-80℃保存；肿瘤组织称重后，置于2mL离心管中，于-80℃保存。十二指肠、回肠、结肠组织取适量长度用剪刀剪开，去除内容物并用PBS清洗2遍，用吸水纸吸干水分后称重，置于2mL离心管中，于-80℃保存。
11.3实验结果：应用LCMS/MS方法得到最后测定结果，见表11：
表19：本发明化合物的小鼠药代动力学参数
11.4实验结论：
6mg/kg剂量下，本发明实施例化合物在小鼠肿瘤里的暴露量和血液里的暴露量比值高于AMG-510，T 1/2和MRT更长。
三、化合物的盐及其晶型研究
本领域普通技术人员所熟知的是，上述实施例化合物被证明对NCI-H358和Mia PaCa-2细胞具有有良好的增殖抑制作用时，其药学上可接受的盐往往会具有同样的药理药效活性。在此基础上，发明人进一步研究了相应化合物的盐型及晶型理化性质，但下述具体盐型或晶型的制备与表征并不代表对本发明保护范围范围的限定，本领域普通技术人员可以以本发明为基础，通过常规的成盐或析晶手段获得本发明化合物更多的盐型和晶体，这些盐型和晶体均为本发明所保护的方案。具体如下：
1.实验仪器
1.1物理化学检测仪器的一些参数
1.2仪器与液相分析条件
1.2.1仪器与设备
仪器名称 型号
分析天平 METTLER TOLEDO XA105
纯水机 Milli-Q Plus，Millipore
高效液相色谱仪 Thermo Ultimate 3000
1.2.2色谱条件
2.化合物盐型的研究
2.1实施例13-1化合物的盐型筛选
2.1.1实验目的：
筛选化合物的盐型。
2.1.2实验步骤：
1)仪器和设备
名称 型号 来源
分析天平 XA105 METTLER TOLEDO
超声波清洗仪 SK5200LHC 上海科导超声仪器
移液枪 Eppendorf(50mL,100μL) Eppendorf
2)操作程序
①溶析或混悬成盐
称取10mg化合物，加溶剂200μL，室温搅拌，分别加入不同的酸，搅拌过夜，离心干燥或挥干后，得到化合物的盐。
②反溶剂法成盐
选择良溶剂，称取酸，加入良溶剂配置成含化合物浓度为100mg/mL的贮备溶液，加入反溶剂，分别称量100mg的化合物，加入1mL的良溶剂，全部溶解后过滤，取滤液0.2mL，分别滴入反溶剂(有沉淀则停止加入，最多加入1.8mL反溶剂)，搅拌一段时间后，快速离心去除滤液，得到化合物的盐。
2.1.3实验结果：
通过盐型筛选实验，能够与化合物游离碱成盐的为硫酸、羟乙基磺酸、1，5-萘二磺酸。
如上所述，本领域技术人员在本发明的基础上，运用常规的方法可以获得更多的可 药用盐。
2.2实施例13-1化合物羟乙基磺酸盐定量分析
2.2.1羟乙基磺酸盐HPLC定量
2.2.1.1实验目的：
确定实施例13-1化合物羟乙基磺酸盐中羟乙基磺酸的个数。
2.2.1.2实验步骤：
1)色谱条件
2)操作
称取实施例13-1游离碱适量，加甲醇配制成浓度为0.05-0.30mg/mL范围的系列线性溶液。
称取实施例13-1羟乙基磺酸盐化合物适量，加甲醇配制成含实施例13-1羟乙基磺酸盐浓度为0.25mg/mL的溶液。分别取上述线性溶液及样品溶液进样。
2.2.1.3实验结果：
外标法计算结果表明，羟乙基磺酸与游离碱按1：1摩尔比成盐。
2.2.2实施例13-1化合物羟乙基磺酸盐ELSD定量
2.2.2.1实验目的：
确定实施例13-1化合物羟乙基磺酸盐中羟乙基磺酸的个数。
2.2.2.2实验步骤：
1)色谱条件
Dilutent MeOH
Column ZIC-HILIC(150*4.6mm,5μm)
Mobile phase 75mM醋酸铵溶液(pH4.80)：乙腈＝30：70
Injection volume 5μL
Flow rate 1.0mL/min
Column Temperature 35℃
ELSD Temperature 40℃
2)操作
称取羟乙基磺酸适量，加甲醇配制成含羟乙基磺酸浓度0.5-1mg/mL范围的系列线性溶液。
称取实施例13-1化合物羟乙基磺酸盐化合物适量，加甲醇配制成含实施例13-1化合物羟乙基磺酸盐浓度为5.0mg/mL的溶液。分别取上述线性溶液及样品溶液进样。
2.2.2.3实验结果：
经计算实施例13-1化合物羟乙基磺酸盐中羟乙基磺酸的个数为1。
3.化合物盐的晶型研究
3.1实施例13-1化合物的晶型研究
3.1.1实验目的：
筛选化合物成晶型的盐。
3.1.2实验步骤：
1)仪器与设备
2)操作程序
①以不同溶剂溶析或混悬成盐结晶
称取实施例13-1化合物10mg，分别加入不同的反应溶剂，最终总体积为200μL，搅拌，加入酸，搅拌12小时，离心干燥后，测其XRPD。
②反溶剂法成盐结晶
选择良溶剂，称取酸，加入良溶剂配置成含化合物浓度为100mg/mL的贮备溶液，加入反溶剂，分别称量100mg的化合物，加入1mL的良溶剂，全部溶解后过滤，取滤液0.2mL，分别滴入反溶剂(有沉淀则停止加入，最多加入1.8mL反溶剂)，搅拌一段时间后，快速离心去除滤液，固体干燥后测其XRPD。
3.1.3实验结果
经过该化合物盐的晶型研究实验，得到有晶型的盐型为羟乙基磺酸盐、硫酸盐、1，5-萘二磺酸盐。
3.2实施例13-1化合物的晶型制备
3.2.1实验目的：
制备实施例13-1化合物盐的晶型。
3.2.2实验步骤：
1)仪器和设备
2)操作程序
I、羟乙基磺酸盐晶型I的制备
称取实施例13-1化合物500mg，加异丙醇9.08mL，50℃加热搅拌，加0.914mL羟乙基磺酸(1.0M in MeOH)，溶清后析出沉淀，室温搅拌2小时，过滤后固体在50℃条件真空干燥，得到羟乙基磺酸盐晶型I，经检测分析，其具有如图1所示的XRPD图、如图2所示的DSC图以及如图3所示的TGA图。
或者，将实施例13-1化合物(100g)，异丙醇(1200mL)加入到3L三口瓶中，加热到40～45℃，搅拌溶清；然后将2-羟乙基磺酸(28.84g)分散于800mL乙醇中，滴入反应体系中，控温39～42℃，约10min加完。向上述反应溶液中加入500mg晶种，快速析出固体，撤去加热，冷却到25℃搅拌12h。过滤，并用400mL异丙醇洗滤滤饼，抽干，置于45℃真空干燥16h得92.57g淡黄色固体，纯度97.9％，手性纯度99.8％，质 量收率：92％。经检测分析，其具有基本如图1所示的XRPD图、基本如图2所示的DSC图以及基本如图3所示的TGA图。
II、羟乙基磺酸盐晶型II的制备
称取实施例13-1化合物10mg，加四氢呋喃0.2mL，50℃加热搅拌，加18.3μL羟乙基磺酸(1.0M in MeOH)，溶清后析出沉淀，室温搅拌2小时，过滤后固体在50℃条件真空干燥，得到羟乙基磺酸盐晶型II，经检测分析，其具有如图4所示的XRPD图、如图5所示的DSC图以及如图6所示的TGA图。
III、羟乙基磺酸盐晶型III的制备
称取羟乙基磺酸盐晶型I 20mg，加甲醇0.2mL，甲基叔丁基醚0.45mL，50℃加热搅拌过夜，过滤后固体在50℃条件真空干燥，得到羟乙基磺酸盐晶型III，经检测分析，其具有如图7所示的XRPD图、如图8所示的DSC图以及如图9所示的TGA图。
IV、硫酸盐晶型I的制备
称取实施例13-1化合物10mg，加乙醇0.2mL，50℃加热搅拌，加18.3μL硫酸(1.0M in MeOH)，溶清后析出沉淀，室温搅拌过夜，过滤后固体在50℃条件真空干燥，得到硫酸盐晶型I，经检测分析，其具有如图10所示的XRPD图。
V、硫酸盐晶型II的制备
称取实施例13-1化合物100mg，加异丙醇1.82mL，50℃加热搅拌，加183μL硫酸(1.0M in MeOH)，溶清后析出固体，室温搅拌过夜，过滤后固体在50℃条件真空干燥，得到硫酸盐晶型II，经检测分析，其具有如图11所示的XRPD图。
VI、硫酸盐晶型III的制备
称取硫酸盐晶型I 10mg，加异丙醇0.2mL，50℃加热搅拌5天，过滤后固体在50℃条件真空干燥，得到硫酸盐晶型III，经检测分析，其具有如图12所示的XRPD图。
VII、硫酸盐晶型IV的制备
称取硫酸盐晶型I 10mg，加乙酸乙酯0.2mL，50℃加热搅拌5天，过滤后固体在50℃条件真空干燥，得到硫酸盐晶型III，经检测分析，其具有如图13所示的XRPD图。
4.固体稳定性实验
4.1实施例13-1化合物羟乙基磺酸盐晶型I的固定稳定性实验
4.1.1实验目的：
考察化合物晶型在高温、高湿、高温高湿及光照条件下，晶型的物理化学稳定性，为 晶型筛选和贮存提供依据。
4.1.2仪器和液相分析条件
4.1.3实验方案
4.1.3.1称取实施例13-1化合物羟乙基磺酸盐晶型I适量，分别在光照(≥1.2×106lux·h，10天)、高湿(25℃、75％，10天)、高湿(25℃、90％，10天)、高温(40℃，30天)、高温(60℃，30天)和微粉条件下处理一定时间后，测其XRPD。
4.1.4.1实验结果：
4.1.3.2实验方案：
称取实施例13-1化合物羟乙基磺酸盐晶型I适量，分别在光照(5000±500lux)、高温(60℃)、高湿(92.5％RH)、高温高湿(50℃&75％RH)条件下放置10天后，加稀释剂甲醇，配制成含实施例13-1游离碱浓度为0.25mg/mL的溶液，HPLC分析，按照峰面积归一化法计算有关物质的变化。
4.1.4.2实验结果：
以上实验结果表明，实施例13-1化合物羟乙基磺酸盐晶型I在光照、高湿、高温以及微粉条件下，羟乙基磺酸盐晶型I比较稳定。
4.2实施例13-1化合物硫酸盐晶型II的固体稳定性实验
4.2.1实验目的：
考察化合物晶型在高温、高湿、高温高湿及光照条件下，晶型的物理化学稳定性，为晶型筛选和贮存提供依据。
4.2.2仪器和液相分析条件
4.2.3实验方案：
称取实施例13-1化合物硫酸盐晶型II适量，分别在光照(5000±500lux)、高温(60℃)、高湿(92.5％RH)、高温高湿(50℃&75％RH)条件下放置10天后，加稀释剂甲醇，配制成含实施例13-1游离碱浓度为0.25mg/mL的溶液，HPLC分析，按照峰面积归一化法计算有关物质的变化。
4.2.4实验结果：
硫酸盐晶型II在光照、高湿、高温高湿条件下，比较稳定。
5.不同介质中溶解度实验
5.1实施例13-1化合物在不同介质中溶解度实验
5.1.1实验目的：
考察羟乙基磺酸盐晶型I和硫酸盐晶型II在不同pH值介质、水、人工模拟胃液(FaSSGF)、禁食人工模拟肠液(FaSSIF)及非禁食人工模拟肠液(FeSSIF)等媒介中溶解度大小，为盐可成药性评估提供依据。
5.1.2实验方案：
称量约1mg化合物不同的盐型分别混悬到1mL人工模拟胃液(FaSSGF)、禁食人工模拟肠液(FaSSIF)、非禁食人工模拟肠液(FeSSIF)以及纯水中24小时，用HPLC检测，外标法测定化合物在37℃下的热力学溶解度。
5.1.3实验结果：如下表所示：
6.热力学稳定实验
6.1实施例13-1化合物的羟乙基磺酸盐的多晶型筛选
6.1.1实验目的：
通过多晶筛选，获得热力学稳定的羟乙基磺酸盐的晶型。
6.1.2实验方案：
取羟乙基磺酸盐晶型I 10mg，分别加入200μL有机溶剂，室温和50℃条件下，打浆5天，离心，弃掉上清液，固体干燥后测其XRPD。
6.1.3实验结果：如下表：
以上结果表明，羟乙基磺酸盐晶型I为羟乙基磺酸盐的稳定晶型。
6.2实施例13-1化合物的硫酸盐的多晶型筛选实验
6.2.1实验目的：
通过多晶筛选，获得热力学稳定的硫酸盐的晶型。
6.2.2实验方案：
取硫酸盐晶型II 10mg，分别加入200μL有机溶剂，50℃打浆5天，离心，弃掉上清液，固体干燥后测其XRPD。
6.2.3实验结果：如下表：
序号 溶剂 硫酸盐
- 初始晶型 晶型II
1 乙醇 晶型II
2 2-甲基四氢呋喃 晶型II
3 2-丁酮 晶型II
4 乙酸乙酯 晶型II
5 甲苯 晶型II
6 乙酸异丙酯 晶型II
7 叔丁醇 晶型II
以上结果表明，硫酸盐晶型II为硫酸盐的稳定晶型。

Claims (20)

  1. 通式(II)所示化合物的酸式盐，
    其中：
    R a选自氢或甲基；
    R 1选自氢、氟、氯、溴或甲基；
    R 3选自氢、氨基、羟基、氟、氯、甲基、-S(CH 3)或三氟甲基；
    R 4选自氢、氨基、羟基、氟、氯、-N(CH 3) 2、-NH(CH 3)或氟；
    R 5选自氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基或异丙基；
    R 6选自氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基或异丙基；
    R 7选自氢、氟、氯、溴或甲基；
    酸式盐的酸选自盐酸、硫酸、硝酸、氢溴酸、氢氟酸、氢碘酸、磷酸、2,5-二羟基苯甲酸、1-羟基-2-萘甲酸、醋酸、乙烷磺酸、二氯醋酸、三氯醋酸、乙酰氧肟酸、己二酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环己烷氨基磺酸、樟脑磺酸、天门冬氨酸、樟脑酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、异抗坏血酸、乳酸、苹果酸、扁桃酸、焦谷氨酸、酒石酸、十二烷基硫酸、二苯甲酰酒石酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、蚁酸、富马酸、半乳糖酸、龙胆酸、戊二酸、2-酮戊二酸、乙醇酸、马尿酸、羟乙基磺酸、乳糖酸、抗坏血酸、天冬氨酸、月桂酸、樟脑酸、马来酸、丙二酸、甲磺酸、1,5-萘二磺酸、萘-2-磺酸、烟酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、丙酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、硫氰酸、十一碳烯酸、三氟乙酸、苯磺酸、对甲基苯磺酸或L-苹果酸；优选盐酸、磷酸、乙烷磺酸、苯磺酸、甲磺酸、富马酸、羟乙基磺酸、草酸或氢溴酸。
  2. 根据权利要求1所述化合物的酸式盐，其特征在于，化合物进一步如通式(II-A)或(II-B)所示：
  3. 根据权利要求1或2所述化合物的酸式盐，其特征在于，化合物选自：
  4. 根据权利要求1-3任一项所述化合物的酸式盐，其特征在于，化合物为
    P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮；
    P-4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮；
    P-4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮；
    P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基- 4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮；
    P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮；
    酸式盐中的酸选自羟乙基磺酸、硫酸、1，5-萘二磺酸、甲磺酸、氢溴酸、磷酸、苯磺酸、草酸、马来酸、己二酸、盐酸、柠檬酸、丙二酸、L-苹果酸、帕莫酸、对甲苯磺酸或富马酸，优选羟乙基磺酸或硫酸。
  5. 根据权利要求1-4任一项所述化合物的酸式盐，其特征在于，酸的个数为0.2-3；优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3；更优选0.5、1、2或3，进一步优选1。
  6. 根据权利要求1-5任一项所述化合物的酸式盐，其特征在于，酸式盐为水合物或无水物；当酸式盐为水合物时，水的个数为0.2-3；优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3；更优选0.5、1、2或3。
  7. 根据权利要求1-6任一项所述化合物的酸式盐，其特征在于，所述酸式盐为晶型；
    优选化合物P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐晶型；
    P-4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐晶型；
    P-4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐晶型；
    P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐晶型；
    P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐晶型；
    更优选羟乙基磺酸盐晶型、硫酸盐晶型、1，5-萘二磺酸盐晶型、甲磺酸盐晶型、氢溴酸盐晶型、磷酸盐晶型、苯磺酸盐晶型、草酸盐晶型、马来酸盐晶型、己二酸盐晶型、盐酸盐晶型、柠檬酸盐晶型、丙二酸盐晶型、L-苹果酸盐晶型、帕莫酸盐晶型、对甲苯磺酸盐晶型或富马酸盐晶型。
  8. 根据权利要求7所述化合物的酸式盐，其特征在于：
    P-4-((2S,5R)-4-丙烯酰-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(6-氨基-3-氯-2-氟苯基)-6-氯-1-(2-异丙基-4-(甲硫基)吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的酸式盐晶型为：
    羟乙基磺酸盐晶型I，其X-射线粉末衍射图谱2θ在21.7±0.2°处具有衍射峰；或者在8.8±0.2°处具有衍射峰；或者在19.3±0.2°处具有衍射峰；或者在27.6±0.2°处具有衍射峰； 或者在10.9±0.2°处具有衍射峰；或者在15.4±0.2°处具有衍射峰；或者在16.7±0.2°处具有衍射峰；或者在15.8±0.2°处具有衍射峰；或者在17.5±0.2°处具有衍射峰；或者在23.8±0.2°处具有衍射峰；或者在10.2±0.2°处具有衍射峰；或者在11.8±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
    其为羟乙基磺酸盐晶型II，其X-射线粉末衍射图谱2θ在21.7±0.2°处具有衍射峰；或者在8.8±0.2°处具有衍射峰；或者在19.3±0.2°处具有衍射峰；或者在27.6±0.2°处具有衍射峰；或者在10.9±0.2°处具有衍射峰；或者在23.8±0.2°处具有衍射峰；或者在16.7±0.2°处具有衍射峰；或者在15.4±0.2°处具有衍射峰；或者在15.8±0.2°处具有衍射峰；或者在10.0±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
    其为羟乙基磺酸盐晶型III，其X-射线粉末衍射图谱2θ在19.4±0.2°处具有衍射峰；或者在16.9±0.2°处具有衍射峰；或者在26.6±0.2°处具有衍射峰；或者在14.6±0.2°处具有衍射峰；或者在28.0±0.2°处具有衍射峰；或者在25.6±0.2°处具有衍射峰；或者在20.7±0.2°处具有衍射峰；或者在12.8±0.2°处具有衍射峰；或者在19.1±0.2°处具有衍射峰；或者在27.2±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
    其为硫酸盐晶型I，其X-射线粉末衍射图谱2θ在19.0±0.2°处具有衍射峰；或者在19.4±0.2°处具有衍射峰；或者在12.4±0.2°处具有衍射峰；或者在26.2±0.2°处具有衍射峰；或者在17.6±0.2°处具有衍射峰；或者在18.1±0.2°处具有衍射峰；或者在25.3±0.2°处具有衍射峰；或者在8.8±0.2°处具有衍射峰；或者在21.9±0.2°处具有衍射峰；或者在11.5±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
    其为硫酸盐晶型II，其X-射线粉末衍射图谱2θ在15.5±0.2°处具有衍射峰；或者在11.1±0.2°处具有衍射峰；或者在8.9±0.2°处具有衍射峰；或者在19.3±0.2°处具有衍射峰；或者在22.3±0.2°处具有衍射峰；或者在23.6±0.2°处具有衍射峰；或者在17.4±0.2°处具有衍射峰；或者在27.3±0.2°处具有衍射峰；或者在17.0±0.2°处具有衍射峰；或者在27.9±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
    其为硫酸盐晶型III，其X-射线粉末衍射图谱2θ在19.6±0.2°处具有衍射峰；或者在18.0±0.2°处具有衍射峰；或者在18.4±0.2°处具有衍射峰；或者在16.8±0.2°处具有衍射峰；或者在14.3±0.2°处具有衍射峰；或者在11.8±0.2°处具有衍射峰；或者在14.9±0.2°处具有衍射峰；或者在25.7±0.2°处具有衍射峰；或者在15.4±0.2°处具有衍射峰；或者在23.5±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
    其为硫酸盐晶型IV，其X-射线粉末衍射图谱在19.4±0.2°处具有衍射峰；或者在18.9±0.2°处具有衍射峰；或者在15.5±0.2°处具有衍射峰；或者在8.8±0.2°处具有衍射峰；或者在18.1±0.2°处具有衍射峰；或者在24.9±0.2°处具有衍射峰；或者在17.4±0.2°处具有衍射峰；或者在12.3±0.2°处具有衍射峰；或者在26.1±0.2°处具有衍射峰；或者在14.5±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处。
  9. 根据权利要求8所述化合物的酸式盐，其特征在于：
    羟乙基磺酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°、16.7±0.2°、15.8±0.2°、10.2±0.2°、11.8±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
    8.8±0.2°、27.6±0.2°；
    21.7±0.2°、8.8±0.2°、10.9±0.2°；
    21.7±0.2°、8.8±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°；
    15.8±0.2°、8.8±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°；21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、15.8±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°；
    10.9±0.2°、8.8±0.2°、10.2±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.8±0.2°；
    羟乙基磺酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为21.7±0.2°、10.0±0.2°、8.8±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、23.8±0.2°、16.7±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
    21.7±0.2°、10.0±0.2°；
    21.7±0.2°、10.0±0.2°、19.3±0.2°；
    21.7±0.2°、10.0±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°；
    21.7±0.2°、10.0±0.2°、8.8±0.2°、16.7±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°；
    羟乙基磺酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°、12.8±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
    19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°；
    硫酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°、25.3±0.2°、8.8±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
    19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°；
    硫酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为19.3±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、27.3±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
    15.5±0.2°、11.1±0.2°；
    15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°；
    15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°；
    15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、27.3±0.2°；
    硫酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、25.7±0.2°中的至少一条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
    19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°；
    硫酸盐晶型IV的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°、12.3±0.2°中的至少一 条，优选包含其中2条、3条、4条或5条；例如，
    19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°。
  10. 根据权利要求8或9所述化合物的酸式盐，其特征在于：
    羟乙基磺酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为21.7±0.2°、8.8±0.2°、10.2±0.2°、11.8±0.2°、13.3±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°、16.7±0.2°、15.8±0.2°、17.5±0.2°、23.8±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处或8处；例如，
    8.8±0.2°、10.2±0.2°、11.8±0.2°、13.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.8±0.2°、17.5±0.2°；
    21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、17.5±0.2°、16.7±0.2°、15.8±0.2°；
    羟乙基磺酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为10.0±0.2°、21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9+±0.2°、23.8±0.2°、16.7±0.2°、15.4±0.2°、15.8±0.2°、10.0±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处或8处；例如，
    21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9+±0.2°、23.8±0.2°、16.7±0.2°、15.4±0.2°；
    羟乙基磺酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°、12.8±0.2°、19.1±0.2°、27.2±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处或8处；例如，
    19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°、27.2±0.2°；
    硫酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°、25.3±0.2°、8.8±0.2°、21.9±0.2°、11.5±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处或8处；例如，
    19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、25.3±0.2°、8.8±0.2°、21.9±0.2°、11.5±0.2°；
    硫酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、27.3±0.2°、17.0±0.2°、27.9±0.2°中 的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处或8处；例如，
    15.5±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、27.3±0.2°、17.0±0.2°；
    硫酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、25.7±0.2°、15.4±0.2°、23.5±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处或8处；例如，
    19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、23.5±0.2°；
    硫酸盐晶型IV的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°、12.3±0.2°、26.1±0.2°、14.5±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-8处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处或8处；例如，
    19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°、12.3±0.2°。
  11. 根据权利要求8所述化合物的酸式盐，其特征在于：
    羟乙基磺酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为21.7±0.2°、8.8±0.2°、10.2±0.2°、11.8±0.2°、13.1±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、13.3±0.2°、15.4±0.2°、16.7±0.2°、15.8±0.2°、17.5±0.2°、23.8±0.2°、14.7±0.2°、24.3±0.2°、27.3±0.2°、23.4±0.2°、20.6±0.2°、21.2±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
    8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、20.6±0.2°；
    8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°、20.6±0.2°；
    21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°、16.7±0.2°、20.6±0.2°；
    21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、15.4±0.2°、16.7±0.2°、15.8±0.2°、24.3±0.2°、23.8±0.2°；
    8.8±0.2°、10.2±0.2°、11.8±0.2°、13.1±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、13.3±0.2°、21.2±0.2°、15.8±0.2°、17.5±0.2°；
    羟乙基磺酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为21.7±0.2°、10.0±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、23.8±0.2°、16.7±0.2°、15.4±0.2°、15.8±0.2°、 17.5±0.2°、14.7±0.2°、24.4±0.2°、27.3±0.2°、29.2±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
    10.0±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、29.2±0.2°；
    21.7±0.2°、10.0±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、29.2±0.2°；
    21.7±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、23.8±0.2°、27.3±0.2°、17.5±0.2°；
    10.0±0.2°、8.8±0.2°、19.3±0.2°、27.6±0.2°、10.9±0.2°、23.8±0.2°、16.7±0.2°、15.4±0.2°、15.8±0.2°、17.5±0.2°；
    羟乙基磺酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°、12.8±0.2°、19.1±0.2°、27.2±0.2°、24.4±0.2°、15.3±0.2°、26.2±0.2°、30.2±0.2°、27.4±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
    19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°；
    19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、27.4±0.2°；
    19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°、27.4±0.2°；
    19.4±0.2°、16.9±0.2°、26.6±0.2°、14.6±0.2°、28.0±0.2°、25.6±0.2°、20.7±0.2°、12.8±0.2°、19.1±0.2°、27.2±0.2°；
    硫酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°、25.3±0.2°、8.8±0.2°、21.9±0.2°、11.5±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
    19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°；
    19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、11.5±0.2°；
    19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°、25.3±0.2°、8.8±0.2°；
    19.0±0.2°、19.4±0.2°、12.4±0.2°、26.2±0.2°、17.6±0.2°、18.1±0.2°、25.3±0.2°、8.8±0.2°、21.9±0.2°、11.5±0.2°；
    硫酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、27.3±0.2°、17.0±0.2°、27.9±0.2°、15.8±0.2°、24.2±0.2°、21.8±0.2°、10.3±0.2°、20.6±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
    11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、21.8±0.2°；
    11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、20.6±0.2°、27.9±0.2°；
    15.5±0.2°、11.1±0.2°、8.9±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、20.6±0.2°、27.9±0.2°；
    11.1±0.2°、8.9±0.2°、19.3±0.2°、22.3±0.2°、23.6±0.2°、17.4±0.2°、27.3±0.2°、17.0±0.2°、27.9±0.2°、20.6±0.2°；
    硫酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、25.7±0.2°、15.4±0.2°、23.5±0.2°、18.8±0.2°、24.7±0.2°、9.5±0.2°、8.8±0.2°、11.1±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
    19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°；
    19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.1±0.2°；
    19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、11.1±0.2°；
    19.6±0.2°、18.0±0.2°、18.4±0.2°、16.8±0.2°、14.3±0.2°、11.8±0.2°、14.9±0.2°、25.7±0.2°、15.4±0.2°、23.5±0.2°；
    硫酸盐晶型IV的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°、12.3±0.2°、26.1±0.2°、14.5±0.2°、22.2±0.2°、24.3±0.2°、21.7±0.2°、23.6±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；例如，
    19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°；
    19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、23.6±0.2°；
    19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°、23.6±0.2°；
    19.4±0.2°、18.9±0.2°、15.5±0.2°、8.8±0.2°、18.1±0.2°、24.9±0.2°、17.4±0.2°、12.3±0.2°、26.1±0.2°、14.5±0.2°。
  12. 根据权利要求8-11任一项所述化合物的酸式盐，其特征在于：
    羟乙基磺酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱如图1所示；
    羟乙基磺酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱如图4所示；
    羟乙基磺酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱如图7所示；
    硫酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱如图10所示；
    硫酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱如图11所示；
    硫酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱如图12所示；
    硫酸盐晶型IV的X-射线粉末衍射图谱如图13所示。
  13. 根据权利要求8-11任一项所述化合物的酸式盐，其特征在于：
    羟乙基磺酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图1对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°；
    羟乙基磺酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图4对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°；
    羟乙基磺酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图7对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°；
    硫酸盐晶型I的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图10对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°；
    硫酸盐晶型II的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图11对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°；
    硫酸盐晶型III的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图12对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°；
    硫酸盐晶型IV的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置与图13对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°。
  14. 根据权利要求1-13任一项所述化合物的酸式盐，其特征在于，羟乙基磺酸盐晶型I具有如图2所示的DSC图谱；
    羟乙基磺酸盐晶型II具有如图5所示的DSC图谱；
    羟乙基磺酸盐晶型III具有如图8所示的DSC图谱。
  15. 根据权利要求1-14任一项所述化合物的酸式盐，其特征在于，酸式盐晶型为水合物或无水物，当酸式盐晶型为水合物时，水的个数为0.2-3，优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0.5、1、2或3；进一步地，水合物中的水为管道水或结晶水或两者的结合。
  16. 制备权利要求1-15任一项所述化合物酸式盐的方法，包括如下步骤：
    1)称取适量的游离碱，加反应溶剂溶解；
    2)加入适量的酸，搅拌；酸的量优选1.2当量；
    3)离心干燥后，得到化合物酸式盐或其晶型；
    反应溶剂为有机溶剂，优选乙醇、2-甲基四氢呋喃、正庚烷、甲基叔丁基醚、甲苯、乙酸异丙酯、叔丁醇、正丁醇、四氢呋喃、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯或1，4-二氧六环中的至少一种；
    酸选自盐酸、硫酸、硝酸、氢溴酸、氢氟酸、氢碘酸、磷酸、2,5-二羟基苯甲酸、1-羟基-2-萘甲酸、醋酸、乙烷磺酸、二氯醋酸、三氯醋酸、乙酰氧肟酸、己二酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环己烷氨基磺酸、樟脑磺酸、天门冬氨酸、樟脑酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、异抗坏血酸、乳酸、苹果酸、扁桃酸、焦谷氨酸、酒石酸、十二烷基硫酸、二苯甲酰酒石酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、蚁酸、富马酸、半乳糖酸、龙胆酸、戊二酸、2-酮戊二酸、乙醇酸、马尿酸、羟乙基磺酸、乳糖酸、抗坏血酸、天冬氨酸、月桂酸、樟脑酸、马来酸、丙二酸、甲磺酸、1,5-萘二磺酸、萘-2-磺酸、烟酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、丙酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、硫氰酸、十一碳烯酸、三氟乙酸、苯磺酸、对甲基苯磺酸或L-苹果酸；优选盐酸、磷酸、乙烷磺酸、苯磺酸、甲磺酸、富马酸、羟乙基磺酸、草酸或氢溴酸。
  17. 制备权利要求1-15任一项所述化合物酸式盐的方法，包括如下步骤：
    1)称取适量的游离碱，加反应溶剂溶解；
    2)加入适量的酸和有机溶剂搅拌溶清；
    3)任选地，加入晶种；
    4)冷却，过滤析出固体，并用溶剂洗涤，干燥；
    步骤1)中所用的反应溶剂为有机溶剂，优选乙醇、丙醇、异丙醇、2-甲基四氢呋喃、正庚烷、甲基叔丁基醚、甲苯、乙酸异丙酯、叔丁醇、正丁醇、四氢呋喃、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯或1，4-二氧六环中的至少一种；
    步骤2)中的酸选自盐酸、硫酸、硝酸、氢溴酸、氢氟酸、氢碘酸、磷酸、2,5-二羟基苯甲酸、1-羟基-2-萘甲酸、醋酸、乙烷磺酸、二氯醋酸、三氯醋酸、乙酰氧肟酸、己二 酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环己烷氨基磺酸、樟脑磺酸、天门冬氨酸、樟脑酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、异抗坏血酸、乳酸、苹果酸、扁桃酸、焦谷氨酸、酒石酸、十二烷基硫酸、二苯甲酰酒石酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、蚁酸、富马酸、半乳糖酸、龙胆酸、戊二酸、2-酮戊二酸、乙醇酸、马尿酸、羟乙基磺酸、乳糖酸、抗坏血酸、天冬氨酸、月桂酸、樟脑酸、马来酸、丙二酸、甲磺酸、1,5-萘二磺酸、萘-2-磺酸、烟酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、丙酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、硫氰酸、十一碳烯酸、三氟乙酸、苯磺酸、对甲基苯磺酸或L-苹果酸；优选盐酸、磷酸、乙烷磺酸、苯磺酸、甲磺酸、富马酸、羟乙基磺酸、草酸或氢溴酸；
    步骤2)中的有机溶剂选自醇类、醚类、酮类或酯类溶剂中的一种或多种，优选乙醇、丙醇、异丙醇、2-甲基四氢呋喃、正庚烷、甲基叔丁基醚、甲苯、乙酸异丙酯、叔丁醇、正丁醇、四氢呋喃、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯或1，4-二氧六环中的至少一种；
    步骤3)中的溶剂选自醇类、醚类、酮类或酯类溶剂中的一种或多种，优选乙醇、丙醇、异丙醇、2-甲基四氢呋喃、正庚烷、甲基叔丁基醚、甲苯、乙酸异丙酯、叔丁醇、正丁醇、四氢呋喃、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯或1，4-二氧六环中的至少一种。
  18. 一种药物组合物，其含有治疗有效量的权利要求1-15任一项所述化合物的酸式盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
  19. 根据权利要求1-15中任一项所述的化合物的酸式盐或权利要求18所述的药物组合物在制备KRAS抑制剂药物中的应用；优选在制备RAS G12C突变抑制剂药物中的应用。
  20. 根据权利要求1-17中任一项所述的化合物的酸式盐或权利要求18所述的药物组合物在制备治疗努南氏症候群、豹皮症候群、白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、食管癌、头颈部肿瘤、乳腺癌、肺癌及其结肠癌等疾病或病症的药物中的应用；优选非小细胞肺癌、结肠癌、食管癌和头颈部肿瘤。
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