CN113624871A - 一种粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，包括以下步骤：建立六氯环三磷腈的标准曲线；对粮食进行前处理，得到待测样品溶液；使用高效液相色谱仪结合标准曲线，对待测样品溶液中六氯环三磷腈进行定性定量测定。本发明采用正己烷：丙酮混合溶液超声提取，可以减少干扰物的提取量，还可以使粮食样品在提取过程中分散不黏连，获得更好的信噪比；加入氯化钠离心能够盐析破乳，净化基质，减少基质效应，去除假阳性结果，提高检测准确性，具有可行性，可以普及推广应用。

Description

一种粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法

技术领域

本发明属于六氯环三磷腈测定技术领域，特别涉及一种粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法。

背景技术

六氯环三磷腈是高耗氯产品，它在杀虫剂、肥料、阻燃剂等领域被广泛应用，现有技术对其的检测方法有核磁共振、X射线衍射分析、热重分析、示差扫描量热分析等，这些方法大多数是定性分析，针对基质简单的原料中成分分析，且成本较高。

吕瑞红等研究了合成聚磷腈高聚物的原料六氯环三磷腈的含量，称样用乙腈溶解，过滤，高效液相色谱法测定(吕瑞红等，建立一种新型六氯环三磷腈的分析方法，广州化工，2011，39(08)：90-91)。上述公开方法是针对基质简单的原料中六氯环三磷腈纯度的检测，加入乙腈溶解过滤上机测定，对于复杂固废样品成分基质，缺少提取手段，很难萃取出来，制约检测效率，即使提取出来也会造成假阳性结果，准确性低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种快速、简便、准确可行的检测粮食中六氯环三磷腈残留量的方法。

为实现上述技术目的，本发明公开了一种粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，包括以下步骤：

(1)建立六氯环三磷腈的标准曲线；

(2)对粮食样品进行前处理，得到待测样品溶液；

(3)使用高效液相色谱仪结合标准曲线，对待测样品溶液中六氯环三磷腈进行定性定量测定。

更进一步地，所述建立六氯环三磷腈的标准曲线包括以下子步骤：

制备浓度为0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.0μg/mL的六氯环三磷腈标准溶液；

分别测定上述六氯环三磷腈标准溶液的峰面积；

根据不同六氯环三磷腈标准溶液对应的峰面积，建立六氯环三磷腈的标准曲线。

更进一步地，所述对粮食样品进行前处理，得到待测样品溶液包括以下子步骤：

提取：将粮食样品粉碎后，加入提取液涡旋混匀后超声提取；

盐析：在提取液中加入盐析剂破乳，在4000-8000r/min下离心5-10min；

转溶剂：将离心后的提取液浓缩近干后用流动相定容，过滤后得到待测样品溶液。

更进一步地，所述提取液是体积比为1:1的正己烷：丙酮混合溶液。

更进一步地，所述盐析剂为氯化钠。

更进一步地，所述流动相是体积比为95:5的乙腈：甲醇混合溶液。

更进一步地，所述流动相采用等度洗脱的洗脱方式。

更进一步地，所述高效液相色谱仪的色谱条件为：流动相流速为0.5-1.5mL/min和检测波长为211nm。

更进一步地，所述高效液相色谱仪的色谱条件为：柱温为25-40℃和进样量为5-20μL。

更进一步地，所述粮食样品包括玉米、小麦和稻谷。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：采用正己烷：丙酮混合溶液超声提取，可以减少干扰物的提取量，还可以使粮食样品在提取过程中分散不黏连，获得更好的信噪比；加入氯化钠离心能够盐析破乳，净化基质，减少基质效应，去除假阳性结果，提高检测准确性，具有可行性，可以普及推广应用。

本发明的其他特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在说明书、权利要求书以及附图中所指出的结构来实现和获得。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1示出了根据本发明实施例的六氯环三磷腈标准曲线和回归方程；

图2示出了根据本发明实施例的10.0μg/mL六氯环三磷腈标准溶液的HPLC色谱图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地说明，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本实施例提出的一种粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，包括以下步骤：

(1)建立六氯环三磷腈的标准曲线；

(2)对粮食样品进行前处理，得到待测样品溶液；

(3)使用高效液相色谱仪结合标准曲线，对待测样品溶液中六氯环三磷腈进行定性定量测定。

建立六氯环三磷腈的标准曲线包括以下子步骤：

制备浓度为0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.0μg/mL的六氯环三磷腈标准溶液；

分别测定上述六氯环三磷腈标准溶液的峰面积；

根据不同六氯环三磷腈标准溶液对应的峰面积，建立六氯环三磷腈的标准曲线。

对粮食样品进行前处理，得到待测样品溶液包括以下子步骤：

提取：将粮食样品粉碎后，加入提取液涡旋混匀后超声提取；

盐析：在提取液中加入盐析剂破乳，在4000-8000r/min下离心5-10min；

转溶剂：将离心后的提取液浓缩近干后用流动相定容，过滤后得到待测样品溶液。

粮食样品包括玉米、小麦和稻谷等。

样品溶液制备方法如下：

粮食样品经中药粉碎机粉碎后，称取10-15g于50mL离心管中，加入正己烷：丙酮(体积比为1:1)混合溶液20mL，涡旋混匀后超声提取30min。向提取液中加入盐析剂氯化钠盐析，在4000-8000r/min下离心5-10min，离心后的提取液浓缩近干后用流动相定容1mL，用孔径为0.45μm有机滤头过滤，得到待测样品溶液，直接向高效液相色谱仪进样测定或者根据需求稀释之后进样测定。浓缩近干指将提取液转入浓缩杯中采用平行浓缩仪MultiVap-10，用氮气吹至近干。

选择二氯甲烷：丙酮、正己烷：二氯甲烷等其他提取液加入会使粉碎的粮食样品黏连，只有加入正己烷：丙酮混合提取液，涡旋超声分散的很好，通过加标显示提取效果好。因此，粮食样品采用正己烷：丙酮的混合溶液作为提取液，采用超声提取的方式既可以减少干扰物的提取量，又可以使粮食样品在提取过程中分散不黏连，向提取液中加入氯化钠离心能够盐析破乳，净化基质效应，去除假阳性结果，提高检测准确性。

高效液相色谱系统测定：按照色谱条件测定标准溶液和样品溶液，用标准曲线对样品溶液浓度进行校正，外标法定量。

色谱条件：

色谱柱：Inertsil ODS-SP，5μm，4.6×250mm(或相当柱)；

波长：210nm以上，优选为211nm；

进样量：5-20μL，优选为10μL；

流动相流速：0.5-1.5mL/min，优选为1.00mL/min；

柱温：25-40℃，优选为35℃；

流动相A为乙腈；流动相B为甲醇；流动相采用等度洗脱的洗脱方式，运行时间为15min，A:B体积比为95:5。

乙腈在190nm吸收比较大，甲醇截至波长205nm，最大吸收波长在200nm以内，因此甲醇与乙腈做流动相的检测波长在210nm以上，检测波长优选为211nm。

实施例：小麦样品经粉碎后，称取10g样品于50mL离心管中，加入正己烷：丙酮(体积比为1:1)20mL，涡旋混匀后超声提取30min。向提取液中加入2g氯化钠盐析，在8000r/min下离心5min，离心后的提取液浓缩近干后用流动相定容1mL，用孔径为0.45μm有机滤头过滤，待测定。

线性关系：将六氯环三磷腈标准溶液逐级稀释，制备浓度为0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.0μg/mL的六氯环三磷腈系列标准溶液，按照浓度从低到高顺序，依照上述色谱条件测定上述六氯环三磷腈标准溶液的峰面积，具体结果如表1所示。

表1六氯环三磷腈标准溶液的峰面积

标准溶液浓度(μg/mL)	峰面积
		0.20	1098
0.50	3284
		1.00	6714
2.00	15361
		5.00	36974
10.0	73099

图1示出了根据本发明实施例的六氯环三磷腈标准曲线和回归方程；图2示出了根据本发明实施例的10.0μg/mL六氯环三磷腈标准溶液的HPLC色谱图。如图1所示，按六氯环三磷腈标准溶液浓度对峰面积做标准曲线图，得出回归方程和相关系数R²，结果见表2。如图2所示，六氯环三磷腈的出峰时间为5.1min。从表2中可以得出，相关系数R²为0.9997，符合检测要求R²＞0.995，证明在0.20-10.0μg/mL的浓度范围内，六氯环三磷腈溶液的浓度与峰面积呈良好的线性关系。通过标准曲线可进行量化计算，样品加标和精密度能进行定量计算。

表2六氯环三磷腈标准溶液回归方程和相关系数

目标物名称	回归方程	相关系数R<sup>2</sup>
			六氯环三磷腈	Y＝7355.248X-168.8012	0.9997

小麦样品中六氯环三磷腈测定

选取A、B两种小麦样品，每种小麦样品平行测定三次，计算目标物六氯环三磷腈的含量，测定结果见表3。从表3中可以得出，两种小麦样品分别经过三次平行测定，均没有检测出目标物六氯环三磷腈。

表3样品中六氯环三磷腈的检测结果

目标物名称	小麦样品A	小麦样品B
			六氯环三磷腈	未检出	未检出

小麦样品中六氯环三磷腈精密度、加标回收实验

1、精密度实验

选取6份上述阴性小麦样品A，分别经中药粉碎机粉碎后，分别进行加标(加标量为0.20μg，加标物为六氯环三磷腈)，6份阴性小麦样品A分别加入正己烷：丙酮(体积比为1:1)20mL，涡旋混匀后超声提取30min。向提取液中加入2g氯化钠盐析，在8000r/min下离心5min，离心后的提取液浓缩近干后用流动相定容1mL，用孔径为0.45μm有机滤头过滤，得到小麦样品A的6份待测样品溶液1-6，测定六氯环三磷腈精密度。

如表4所示，实验结果表明本发明提出的一种粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法测定的六氯环三磷腈的精密度相对偏差RSD为8.1％，符合检测要求RSD≤20％。

表4精密度实验数据

2、加标回收实验

采用上述阴性小麦样品A做加标回收实验，样品分别添加0.75μg、1.00μg(即加标浓度为0.75μg/mL、1.00μg/mL)六氯环三磷腈，依据上述步骤进行测定粮食样品中六氯环三磷腈的含量，计算回收率，结果见表5。如表5所示，本实施例的平均加标回收率在84.4％-88.5％之间，符合检测要求70％-120％。

表5加标回收实验数据

本发明中提出的一种粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，采用正己烷：丙酮混合溶液超声提取，可以减少干扰物的提取量，还可以使粉碎后的粮食样品在提取过程中分散不黏连，获得更好的信噪比；加入氯化钠离心能够盐析破乳，净化基质，减少基质效应，去除假阳性结果，提高检测准确性，具有可行性，可以普及推广应用。

尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)建立六氯环三磷腈的标准曲线；

(2)对粮食样品进行前处理，得到待测样品溶液；

(3)使用高效液相色谱仪结合标准曲线，对待测样品溶液中六氯环三磷腈进行定性定量测定。

2.根据权利要求1所述的粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，其特征在于，所述建立六氯环三磷腈的标准曲线包括以下子步骤：

制备浓度为0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.0μg/mL的六氯环三磷腈标准溶液；

分别测定上述六氯环三磷腈标准溶液的峰面积；

根据不同六氯环三磷腈标准溶液对应的峰面积，建立六氯环三磷腈的标准曲线。

3.根据权利要求1所述的粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，其特征在于，所述对粮食样品进行前处理，得到待测样品溶液包括以下子步骤：

提取：将粮食样品粉碎后，加入提取液涡旋混匀后超声提取；

盐析：在提取液中加入盐析剂破乳，在4000-8000r/min下离心5-10min；

转溶剂：将离心后的提取液浓缩近干后用流动相定容，过滤后得到待测样品溶液。

4.根据权利要求3所述的粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，其特征在于，所述提取液是体积比为1:1的正己烷：丙酮混合溶液。

5.根据权利要求3所述的粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，其特征在于，所述盐析剂为氯化钠。

6.根据权利要求3所述的粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，其特征在于，所述流动相是体积比为95:5的乙腈：甲醇混合溶液。

7.根据权利要求6所述的粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，其特征在于，所述流动相采用等度洗脱的洗脱方式。

8.根据权利要求1所述的粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪的色谱条件为：流动相流速为0.5-1.5mL/min和检测波长为211nm。

9.根据权利要求1或8所述的粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪的色谱条件为：柱温为25-40℃和进样量为5-20μL。

10.根据权利要求1所述的粮食中六氯环三磷腈残留量的高效液相色谱测定方法，其特征在于，所述粮食样品包括玉米、小麦和稻谷。

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