CN113577120A - 艾纳香提取物组合物及其在制备抗炎镇痛的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药领域，具体涉及艾纳香提取物组合物及其在制备抗炎镇痛的药物中的应用；采用艾纳香油和艾纳香总黄酮配伍，制备得到一种艾纳香提取物组合物，可用于制备抗炎镇痛的药物，成本低，毒性小。经过小鼠耳廓肿胀实验及醋酸扭体实验可以看出，采用艾纳香油和艾纳香总黄酮搭配得到的组合物，比单一组分的抗炎镇痛效果更优。

Description

艾纳香提取物组合物及其在制备抗炎镇痛的药物中的应用
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及艾纳香提取物组合物及其在制备抗炎镇痛的药物中的应用。
背景技术
艾纳香(Blumea balsamifera(L.)DC.)，是菊科艾纳香属多年生草本或亚灌木植物。全草可入药，有祛风除湿等功效，在黎族、苗族、壮族等少数民族地区有着悠久的用药历史，是一种重要的民间药物。同时，艾纳香也是获取冰片、艾片的重要来源之一。
艾纳香油中含有多种有效成分，且具有良好的生物活性，具有抗菌、抗炎、止血、止痛、止痒等功效。但由于艾纳香油在室温非密封条件下易挥发，且气味浓厚，不便于直接使用。
艾纳香总黄酮为艾纳香中的主要成分之一，具有广泛的药用价值。具有抗炎、镇痛、平喘及抗菌的活性，同时具有护肝、解肝毒、抗真菌、治疗急、慢性肝炎、肝硬化及抗自由基和抗氧化作用。
现有公开号为CN110974861A的专利文件公开了一种艾纳香油脂质体，其是由以下质量份数的物质组成：艾纳香油0.35-0.65％、卵磷脂1.0-3.0％、胆固醇0.2-0.5％、余量为PBS溶液。可进一步制成凝胶剂、软膏剂、眼膏剂等产品，具有良好的透皮吸收效果和抗炎、镇痛、皮肤修复活性作用。
公开号为CN107468736A的专利文件公开了一种艾纳香有效组分的制备方法与用途，其是以乙醇水溶液为溶剂提取艾纳香，将其浓缩至无醇味，加水稀释后，分别用乙酸乙酯、正丁醇萃取，干燥后得到。制得的有效组分具有良好的抗炎活性。但其采用了正丁醇等多种有机溶剂进行逐级萃取，方法较繁复，且可能在提取物中残留有机溶剂。
公告号为CN100563669C的专利文件公开了一种艾纳香总黄酮提取物的制备方法及艾纳香总黄酮提取物，其是以聚酰胺为吸附剂进行层析分离，显著提高了艾纳香总黄酮提取物的制备效率、降低制备成本，在保证原有药效的基础上，减少患者服用量。
发明内容
本发明为解决上述问题，提供了一种艾纳香提取物组合物及其在制备抗炎镇痛的药物中的应用。
具体是通过以下技术方案来实现的：
1、一种艾纳香提取物组合物在制备抗炎镇痛的药物中的应用。
进一步，所述制备抗炎镇痛的药物包括口服制剂、擦剂或注射制剂。
进一步，所述制备抗炎镇痛的药物是将艾纳香提取物组合物与药学中可接受的辅料相结合，制成所需制剂。
2、所述的艾纳香提取物组合物，按重量份计，是由艾纳香油1-2份、艾纳香总黄酮1-8份组成。
进一步，所述的艾纳香油，是由艾纳香叶经过超声处理、加热回流、水蒸汽蒸馏得到的挥发油。
进一步，所述的艾纳香油的提取方法为：取艾纳香叶，以水为溶剂，料液比为1：14(g/mL)，30℃超声处理30min，再浸泡1.5h，100℃加热回流1h后收集艾粉，继续提取4h，即得到艾纳香油。
进一步，所述的艾纳香总黄酮，是采用提取艾纳香油后的艾渣经回流提取、大孔树脂洗脱得到。
进一步，所述的艾纳香总黄酮的提取方法为：收集提取完艾纳香油的艾渣，以60％的乙醇为溶剂进行回流提取，料液比为1：15(g/mL)，提取温度为80℃，提取时间为2h，提取2-3次，合并提取液，上样于大孔吸附树脂，以体积百分浓度为60％乙醇进行洗脱，即得到艾纳香总黄酮。
3、所述的艾纳香提取物组合物的制备方法，方法如下：取艾纳香油和艾纳香总黄酮，加入吐温-80，混合后以纯水超声溶解，放入混合皿中混合均匀，得到艾纳香提取物组合物。
参照陈伟鹏,陈倩欣,蔡志华,卓晓雪,陈思斯,李杰梅.大孔树脂吸附法纯化滇桂艾纳香总黄酮的工艺研究[J].中华中医药学刊,2014,32(05):1205-1208.中的方法对艾纳香总黄酮的纯化工艺进行筛选对比，比较了大孔吸附树脂和聚酰胺柱对艾纳香总黄酮的纯化效果。设置具体参数如下：
提取液分别用聚酰胺柱、大孔吸附树脂纯化
柱体积(BV)：500ml
树脂径高比：1:10
洗脱溶剂：3BV的60％乙醇
洗脱速度：2.5ml/min
用紫外-可见光分光度法测定洗脱液中的总黄酮含量，结果如表1所示。
表1
项目 洗脱物总黄酮含量(％) 洗脱物得重(g) 洗脱物总黄酮量(g)
大孔吸附树脂 14.9 1.3 0.1937
聚酰胺柱 16.7 1 0.167
由实验结果可知，大孔吸附树脂纯化的总黄酮含量不及聚酰胺，但相差不大，但是大孔吸附树脂的得率更优于聚酰胺。综合考虑选择大孔吸附树脂对艾纳香总黄酮进行纯化。
综上所述，本发明的有益效果在于：本发明采用艾纳香油和艾纳香总黄酮配伍，制备得到一种艾纳香提取物组合物，可用于制备抗炎镇痛的药物，成本低，毒性小。经过小鼠耳廓肿胀实验及醋酸扭体实验可以看出，采用艾纳香油和艾纳香总黄酮搭配得到的组合物，比单一组分的抗炎镇痛效果更优。
附图说明
图1为受试药物抗炎效果图。
图2为受试药物镇痛效果图。
图3为不同比例的受试药物抗炎镇痛作用比较图
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。
实施例1
1、制备艾纳香油
取艾纳香叶，以水为溶剂，料液比为1：14(g/mL)，30℃超声处理30min，再浸泡1.5h，100℃加热回流1h后收集艾粉，继续提取4h，即得到艾纳香油。
2、制备艾纳香总黄酮
收集提取完艾纳香油的艾粉，以体积百分浓度为60％的乙醇为溶剂进行回流提取，料液比为1：15(g/mL)，提取温度为80℃，提取时间为2h，提取2-3次，合并提取液，上样于大孔吸附树脂，以60％乙醇进行洗脱，即得到艾纳香总黄酮。
配方
取实施例1制得的艾纳香油和艾纳香总黄酮制备艾纳香提取物组合物：
取艾纳香油133.3mg和艾纳香总黄酮266.7mg，加入吐温133.3mg，混合后以纯水超声溶解，放入混合皿中混合均匀，得到艾纳香提取物组合物。
一、艾纳香提取物组合物抗炎效果实验
1.1实验动物及药剂
1.1.1动物
18-22g雌雄昆明小鼠(SPF级)，许可证号为SCXK(京)2019-0010，购自斯贝福(北京)生物技术有限公司。饲养于贵州省生化工程中心SPF级实验室。对动物的处理方法符合中华人民共和国科学技术部颁发的《关于善待实验动物的指导性意见》。
1.1.2试剂及受试药物
实验试剂：二甲苯
受试药物(受试药物均以纯水配制)
空白组：生理盐水
溶剂组：266mg/kg吐温-80
阳性药物组：20mg/kg醋酸地塞米松
艾纳香油组：133mg/kg艾纳香油
艾纳香总黄酮组：267mg/kg艾纳香总黄酮
配方：400mg/kg组合配方药物
1.2造模、给药及处理
KM小鼠60只，体重为18-22g，分成6组，每组雌雄各半。即生理盐水组、吐温一80溶剂组、地塞米松组、艾纳香油组、艾纳香黄酮组、配方组，小鼠灌胃给药，每20g体重0.4mL，给药1d，末次给药1h后。将0.03mL二甲苯均匀涂抹于各组小鼠右耳的两面致炎，小鼠的左耳不涂作为对照，30min后脱颈椎处死，沿着小鼠耳廓剪下小鼠的两耳，用打孔器在左右耳相同位置冲下圆形耳片，分别称重，以两耳片的质量差作为耳肿胀度，计算肿胀抑制率。肿胀度＝右耳重(肿胀耳)-左耳重(对照耳)。
1.3评价指标
肿胀抑制率(％)＝[(生理盐水组平均肿胀率-试验组平均肿胀率)/生理盐水组平均肿胀率]×100％。
1.4实验结果
受试药物的实验结果如表2、图1所示。
表2
Figure BDA0003178220060000051
Figure BDA0003178220060000061
注：*表示P<0.05，**表示P<0.01，与空白组相比，艾纳香油组、阳性药物组P<0.01，配方组P<0.05。
二、艾纳香提取物组合物镇痛效果实验
2.1实验动物及药剂
2.1.1动物
18-22g雌雄昆明小鼠(SPF级)，许可证号为SCXK(京)2019-0010，购自斯贝福(北京)生物技术有限公司。饲养于贵州省生化工程中心SPF级实验室。对动物的处理方法符合中华人民共和国科学技术部颁发的《关于善待实验动物的指导性意见》。
2.1.2试剂
实验试剂：0.6％醋酸溶液
受试药物
空白组：生理盐水
溶剂组：266mg/kg吐温-80
阳性药物组：200mg/kg阿司匹林
艾纳香油：133mg/kg
艾纳香黄酮类化合物：267mg/kg
配方：400mg/kg组合配方药物
2.2造模、给药及处理
KM小鼠60只，体重为18-22g，分成6组，每组雌雄各半。生理盐水组、吐温一80溶剂组、阿司匹林组、艾纳香油组、艾纳香黄酮组、配方组，小鼠灌胃给药，每20g体重0.4mL。给药1h后，每只小鼠腹腔注射0.6％的冰醋酸0.2mL，记录小鼠在15min内的扭体次数。
2.3评价指标
扭体反应抑制率(％)＝[(生理盐水组平均扭体次数一给药组平均扭体次数)/生理盐水组平均扭体次数]×100％。
2.4实验结果
受试药物的实验结果如表3、图2所示。
表3
Figure BDA0003178220060000071
注：*表示P<0.05,**表示P<0.01。与空白组相比，阳性药物组、艾纳香油组、配方组p<0.01。
三、组合物用量比例筛选实验
以二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、醋酸致小鼠扭体法筛选组合物的用量比例。通过查阅相关文献以及预实验结果，初步确定给药剂量为(400mg/kg)，分别以艾纳香油：艾纳香黄酮类化合物(1:1、1:2、1:4)三个比例进行实验，分别命名为比例1、比例2、比例3。
3.1实验动物及药剂
3.1.1动物
18-22g雌雄昆明小鼠(SPF级)，许可证号为SCXK(京)2019-0010，购自斯贝福(北京)生物技术有限公司。饲养于贵州省生化工程中心SPF级实验室。对动物的处理方法符合中华人民共和国科学技术部颁发的《关于善待实验动物的指导性意见》。
3.1.2受试药物
空白组：生理盐水
比例1
取艾纳香油200mg和艾纳香总黄酮200mg，加入吐温200mg，混合后以纯水超声溶解，放入混合皿中混合均匀，得到艾纳香提取物组合物。
比例2
取艾纳香油133mg和艾纳香总黄酮267mg，加入吐温133mg，混合后以纯水超声溶解，放入混合皿中混合均匀，得到艾纳香提取物组合物。
比例3
取艾纳香油80mg和艾纳香总黄酮320mg，加入吐温80mg，混合后以纯水超声溶解，放入混合皿中混合均匀，得到艾纳香提取物组合物。
3.2组合物比例筛选
3.2.1抗炎实验
KM小鼠20只，体重为18-22g，分成4组，每组雌雄各半。即比例1组、比例2组、比例3组小鼠灌胃给药，每20g体重0.4mL，给药1d，末次给药1h后。将0.03mL二甲苯均匀涂抹于各组小鼠右耳的两面致炎，小鼠的左耳不涂作为对照，30min后脱颈椎处死，沿着小鼠耳廓剪下小鼠的两耳，用打孔器在左右耳相同位置冲下圆形耳片，分别称重，以两耳片的质量差作为耳肿胀度，计算肿胀抑制率。肿胀度＝右耳重(肿胀耳)-左耳重(对照耳)。
评价指标：肿胀抑制率(％)＝[(生理盐水组平均肿胀率-试验组平均肿胀率)/生理盐水组平均肿胀率]×100％。
3.2.2镇痛实验
KM小鼠20只，体重为18-22g，分成4组，每组雌雄各半。即生理盐水组、比例1组、比例2组、比例3组，小鼠灌胃给药，每20g体重0.4mL。给药1h后，每只小鼠腹腔注射0.6％的冰醋酸0.2mL，记录小鼠在15min内的扭体次数。评价指标：扭体反应抑制率(％)＝[(生理盐水组平均扭体次数一给药组平均扭体次数)/生理盐水组平均扭体次数]×100％。
3.3实验结果
抗炎、镇痛实验结果数据分别如表4、表5所示。分析抗炎镇痛结果数据，从抗炎结果可以看出只有比例2组合物与空白组相比，呈现差异显著性。且抑制率达到51.16％。镇痛实验结果看出3个比例组合物与空白组相比，呈现差异显著性，且比例3的镇痛率最高，最终结合抗炎、镇痛率的数据结果如图3所示。由图中看出比例2组合物为最佳比例组合。
表4
Figure BDA0003178220060000091
注：与空白组相比，*表示P<0.05,**表示P<0.01
表5
Figure BDA0003178220060000092
注：与空白组相比，*表示P<0.05,**表示P<0.01
四、急毒性实验
4.1实验方法
KM小鼠20只，体重为18-22g，分成2组，每组10只且雌雄各半。即对照组(生理盐水)、急毒性组(5g/kg组合物)。试验前6h禁食不禁水，小鼠灌胃给药，每20g体重0.4mL，给药后，分别于0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、48h观察小鼠活动情况。对死亡小鼠大体解剖，肉眼观察并检查心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等器官病变情况；未死亡小鼠连续观察14d后处死，大体解剖小鼠，检查心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等器官病变情况。统计各组小鼠死亡情况。
4.2实验结果
(1)临床观察：对照组动物观察期间未见明显异常反应；急毒性组小鼠经灌胃给药后，活动增强，出现短暂的兴奋状态，3min后，小鼠陆续进入抑制状态，行走摇摆不定，然后进入沉睡状态，3h后小鼠逐渐苏醒，进入活跃状态。
(2)小鼠死亡情况：对照组、急毒性组动物均没有出现死亡。
(3)小鼠摄食量、体重：对照品组、急毒性组体重保持增长，摄食量保持平稳。
(4)小鼠病理检查：试验期结束动物各组全部动物大体解剖观察均未见异常。

Claims (9)

1.一种艾纳香提取物组合物在制备抗炎镇痛的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的艾纳香提取物组合物的应用，其特征在于，所述制备抗炎镇痛的药物包括口服制剂、擦剂或注射制剂。
3.如权利要求1所述的艾纳香提取物组合物的应用，其特征在于，所述制备抗炎镇痛的药物是将艾纳香提取物组合物与药学中可接受的辅料相结合，制成所需制剂。
4.一种艾纳香提取物组合物，其特征在于，所述的组合物，按重量份计，是由艾纳香油1-2份、艾纳香总黄酮1-8份组成。
5.如权利要求4所述的一种艾纳香提取物组合物，其特征在于，所述的艾纳香油，是由艾纳香叶经过超声处理、加热回流、水蒸汽蒸馏得到的挥发油。
6.如权利要求5所述的一种艾纳香提取物组合物，其特征在于，所述的艾纳香油的提取方法为：取艾纳香叶，以水为溶剂，料液比为1：13-15(g/mL)，28-32℃超声处理25-35min，再浸泡1-2h，100℃加热回流1h后收集艾粉，采用水蒸汽蒸馏法提取4h，即得到艾纳香油。
7.如权利要求4所述的一种艾纳香提取物组合物，其特征在于，所述的艾纳香总黄酮，是采用提取艾纳香油后的艾粉经回流提取、大孔树脂洗脱得到。
8.如权利要求7所述的一种艾纳香提取物组合物，其特征在于，所述的艾纳香总黄酮的提取方法为：收集提取完艾纳香油的艾粉，以体积百分浓度为60％的乙醇为溶剂进行回流提取，料液比为1：14-16(g/mL)，提取温度为78-82℃，提取时间为2h，提取2-3次，合并提取液，上样于大孔吸附树脂，以60％乙醇进行洗脱，即得到艾纳香总黄酮。
9.一种艾纳香提取物组合物的制备方法，其特征在于，制备方法如下：取艾纳香油和艾纳香总黄酮，加入与艾纳香油等体积的吐温-80，混合后以纯水超声溶解，放入混合皿中混合均匀，得到艾纳香提取物组合物。
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