CN113552266A - 一种脑灵素制剂中麦冬原料的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于材料分析领域，具体涉及一种脑灵素制剂中麦冬原料的检测方法。该检测方法通过以下步骤实现：（1）制备对照品溶液；（2）制备供试品溶液；（3）采用高分离度快速液相色谱‑三重串联四极杆质谱联用技术进行检测；（4）结果判定。本发明建立了甲基麦冬黄烷酮A、山麦冬皂苷B和短葶山麦冬皂苷C的快速和专属性检测方法。该方法专属性强、准确率高、操作快速，可快速、准确地检测出生产企业的投料情况，可以大大提高麦冬药材及其含该味药材复方制剂的质量控制水平，为脑灵素制剂的专项治理提供技术支撑，能有效保证脑灵素制剂的用药安全，该方法也可用于麦冬及山麦冬药材的质量控制。

Description

一种脑灵素制剂中麦冬原料的检测方法
技术领域
本发明属于材料分析领域，具体涉及一种脑灵素制剂中麦冬原料的检测方法。
背景技术
脑灵素制剂由淫羊霍、苍耳子、黄精、五味子、枸杞子、远志、熟地黄、麦冬、酸枣仁、鹿角胶、鹿茸等15味药组成，临床上主要用于神经衰弱，健忘失眠，头晕心悸，身倦无力，体虚自汗，阳痿遗精。脑灵素制剂中的麦冬为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus（L. f）Ker-Gawl的干燥块根，具有养阴润肺、清心除烦之功效，为方中臣药之一，是我国大宗常用药材之一。《中国药典》自1963年版开始收载麦冬，于1995年版中将湖北麦冬与短葶山麦冬一同收载为山麦冬，作为一味独立的药材与麦冬相区别。湖北麦冬为百合科植物湖北麦冬Liriope spicata (Thunb.) Lour.var.prolifera Y.T.Ma的干燥块根，短葶山麦冬为百合科植物短葶山麦冬Liriope muscari (Decne.) Baily的干燥块根。
现行标准中将其作为两个品种单列，在临床交付、投料生产以及质量评价时均是分别对待。但是由于山麦冬产量大，且价格低于麦冬，并且两者外观相似，名称相近，难以避免混用、冒用的情况发生，因此麦冬与山麦冬在使用领域方面存在一定范围的交叉。由于麦冬与山麦冬现有的检测方法只针对单一品种，只能对单一麦冬或山麦冬进行检测，对于疑似两者混用的情况则无力检测。随着中医药发展加快，麦冬作为我国常用的大宗药材需求量也逐步增大，两者混用的情况也逐渐凸显出来。急需建立一种方法将麦冬与山麦冬进行同时检测。现有技术中，尚未有针对脑灵素制剂中麦冬原料的相关检测的报道。
发明内容
针对现有技术中存在的技术空白，本发明提供了一种脑灵素制剂中麦冬原料的检测方法，该检测方法通过液质联用仪，使用麦冬和山麦冬的专属性检测离子对进行筛查。该方法专属性强、准确率高、操作快速，可以大大提高麦冬药材及其含该味药材复方制剂的质量控制水平，为脑灵素制剂的专项治理提供技术支撑。
本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：
本发明提供了一种脑灵素制剂中麦冬原料的检测方法，包括以下步骤：
（1）对照品溶液的制备：取甲基麦冬黄烷酮A、山麦冬皂苷B、短葶山麦冬皂苷C对照品，精密称定，加甲醇稀释成对照品储备液；精密量取上述对照品储备液加甲醇制成的混合溶液，作为对照品溶液；
（2）供试品溶液的制备：取脑灵素胶囊内容物或脑灵素片，除去糖衣，研细，取样品，精密加入甲醇，加热回流，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；
（3）采用高分离度快速液相色谱-三重串联四极杆质谱联用技术进行检测；
（4）结果判定 供试品的提取离子流色谱中，应检出与甲基麦冬黄烷酮A对照品相应的色谱峰，并不得检出与短葶山麦冬皂苷C或山麦冬皂苷B对照品溶液色谱相应的色谱峰。
进一步的，步骤（1）中，所述对照品储备液的浓度分别为184.5μg/ml、104.6μg/ml、103.6μg/ml。
进一步的，步骤（1）中，所述对照品溶液中每1ml含甲基麦冬黄烷酮A0.2μg、山麦冬皂苷B0.1μg、短亭山麦冬皂苷C0.5μg。
本发明提供的检测方法中，供试品溶液的具体制备方法为：取脑灵素胶囊内容物或脑灵素片（除去糖衣），研细，取1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，加热回流30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液。
本发明所使用的高分离度快速液相色谱的条件为：色谱柱为Agilent ZORBAXEclipse Plus C18（100 mm×2.1 mm，1.8μm）；柱温30℃；以乙腈为流动相A，0.1%甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱（0~10min，45%A→60%A）；流速0.3ml·min-1；进样5µl。
进一步的，所述质谱的条件为：采用电喷雾离子源（ESI），多反应检测（MRM），结合正负离子扫描切换，其中甲基麦冬黄烷酮A采用负离子模式检测，山麦冬皂苷B和短葶山麦冬皂苷C采用正离子模式检测，按离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于10：1。
上述质谱的参数如表1所示：
表1
Figure 199107DEST_PATH_IMAGE001
其中，DP为去簇电压；CE为碰撞能量。
本发明以脑灵素制剂作为模型，通过比较麦冬、湖北麦冬和短葶山麦冬的化学物质基础，结合制剂的处方特点，对上述三个物种分别选取特异性化学成分：甲基麦冬黄烷酮A、山麦冬皂苷B、短葶山麦冬皂苷C，建立了脑灵素制剂中麦冬原料的检测方法。
本发明的有益效果为：采用高分离度快速液相色谱-三重串联四极杆质谱联用技术，建立了甲基麦冬黄烷酮A、山麦冬皂苷B 和短葶山麦冬皂苷C 的快速和专属性检测方法，并运用该方法对脑灵素制剂中是否存在山麦冬替代或掺伪麦冬投料进行了考察。该方法专属性强、准确率高、操作快速，可快速、准确地检测出生产企业的投料情况，可以大大提高麦冬药材及其含该味药材复方制剂的质量控制水平，为脑灵素制剂的专项治理提供技术支撑，能有效保证脑灵素制剂的用药安全，该方法也可用于麦冬及山麦冬药材的质量控制。
附图说明
图1为混合对照品溶液的总离子流图。
图2 为甲基麦冬黄烷酮A的专属性考察（m/z341.1→178.1）。
图3为 山麦冬皂苷B的专属性考察(m/z723.7→269.4)。
图4为 短葶山麦冬皂苷C的专属性考察(m/z893.6→481.2)。
图5为脑灵素制剂中阳性样品（山麦冬投料）。
图6为脑灵素制剂麦冬投料合格样品。
具体实施方式
下面通过具体的实施方式对本发明的技术方案作进一步的解释和说明。
1、仪器、试剂与样品
仪器：AB SCIEX Triple Quad 6500+ 高效液相色谱-质谱联用仪；METTLERXSE205电子天平，KQ2200B 型台式超声波清洗器。
试剂：质谱剂乙腈、甲酸、甲醇（Fisher公司），水为Millipore 超纯水，其他试剂为分析纯。
对照物质：甲基麦冬黄烷酮A（批号141027）购于成都普菲德生物技术有限公司，山麦冬皂苷B（批号：111907-201103）、短葶山麦冬皂苷C（批号：111908-201102）、麦冬对照药材（批号：121013-201711）均购于中国食品药品检验研究院。
5批湖北麦冬和4批短葶山麦冬购自河北安国药材市场和安徽亳州药材市场，经山东食品药品检验研究院穆向荣主管中药师鉴定，分别为百合科植物湖北麦冬Liriope spicata (Thunb.) Lour.var.prolifera Y.T.Ma的干燥块根和百合科植物短葶山麦冬Liriope muscari (Decne.) Baily的干燥块根。
样品：脑灵素制剂来自国家评价性抽验品种，共收集9家药品上市许可持有人的63批次样品（A1-A7，B1-B11，C1-C2，D1-D4，E1，F1-F5，G1-G7，H1-H6，I1-I19）。
标准制剂及阴性对照样品：本实验室按照规定的处方量及工艺自制脑灵素胶囊和脑灵素片，作为标准制剂使用；自制缺麦冬药味的脑灵素制剂，作为阴性样品使用。
2、检测条件
2.1 色谱条件：色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（100 mm×2.1 mm，1.8μm）；柱温30℃；以乙腈为流动相A，0.1%甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱（0~10min，45%A→60%A）；流速0.3ml·min-1；进样5µl。
2.2 质谱条件：采用电喷雾离子源（ESI），多反应检测（MRM），结合正负离子扫描切换，其中甲基麦冬黄烷酮A采用负离子模式检测，山麦冬皂苷B和短葶山麦冬皂苷C采用正离子模式检测，按上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于10：1。3种化学成分的质谱参数如表2所示。
表2
Figure 194745DEST_PATH_IMAGE002
实施例1
（1）对照品溶液的制备
取甲基麦冬黄烷酮A、山麦冬皂苷B、短亭山麦冬皂苷C对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度分别为184.5μg/ml、104.6μg/ml、103.6μg/ml的对照品储备液。精密量取上述对照品储备液加甲醇制成每1ml含甲基麦冬黄烷酮A0.2μg、山麦冬皂苷B0.1μg、短亭山麦冬皂苷C0.5μg的混合溶液，作为混合对照品溶液。混合对照品溶液总离子流图见图1。
（2）药材溶液的制备
取麦冬、湖北麦冬和短葶山麦冬对照药材50mg（按处方量折算），置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，加热回流30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
（3）供试品溶液的制备
取脑灵素胶囊内容物适量或脑灵素片20片（除去糖衣）研细，取1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，加热回流30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
对比例1
（1）麦冬皂苷D对照品溶液的制备
取麦冬皂苷D对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为0.1μg/ml的对照品溶液，作为对照品溶液。采用质谱检测器，电喷雾正离子（ESI+）模式，多反应检测（MRM），选择质荷比m/z855.5→431.5和m/z855.5→287.4作为检测离子对。
（2）药材溶液的制备
取麦冬、湖北麦冬和短葶山麦冬对照药材50mg（按处方量折算），置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，加热回流30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果三种药材均检出与麦冬皂苷D对照品相应的色谱峰，且在短葶山麦冬药材中发现其同分异构体干扰，经调整流动相比例及色谱条件，不易分离。
（3）供试品溶液的制备
取脑灵素胶囊内容物适量或脑灵素片20片（除去糖衣）研细，取1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，加热回流30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。供试品中均呈现与麦冬皂苷D对照品相应的色谱峰，且存在同分异构体干扰峰，不易分离。
对比例2
（1）麦冬皂苷C对照品溶液的制备
取麦冬皂苷C对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为0.1μg/ml的对照品溶液，作为对照品溶液。采用质谱检测器，电喷雾正离子（ESI+）模式，多反应检测（MRM），选择质荷比m/z869.3→411.2和m/z869.3→393.3作为检测离子对。结果质谱响应值较低。
（2）药材溶液的制备
取麦冬、湖北麦冬和短葶山麦冬对照药材50mg（按处方量折算），置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，加热回流30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果三种药材均检出与麦冬皂苷C对照品相应的色谱峰，但质谱响应值均较低，且不具有专属性。
对比例3
（1）甲基麦冬黄烷酮B对照品溶液的制备
取甲基麦冬黄烷酮B对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为0.1μg/ml的对照品溶液，作为对照品溶液。采用质谱检测器，电喷雾负离子（ESI-）模式，多反应检测（MRM），选择质荷比m/z327.1→206.0和m/z327.1→150.0作为检测离子对。
（2） 缺麦冬阴性制剂溶液的制备
自制缺麦冬药味的脑灵素制剂，作为阴性样品使用。取1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，加热回流30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果均检出与甲基麦冬黄烷酮B对照品相应的色谱峰，表明阴性制剂中其他药味对该成分测定存在干扰。
效果实施例
（一）基质效应考察
取甲基麦冬黄烷酮A、山麦冬皂苷B、短亭山麦冬皂苷C对照品适量，精密称定，分别加甲醇和空白基质溶液（取阴性制剂，同实施例1中供试品溶液的制备过程相同）制成每1ml含甲基麦冬黄烷酮A0.2μg、山麦冬皂苷B0.1μg、短亭山麦冬皂苷C0.5μg的溶液，即得。结果基质对照峰峰面积与溶剂峰面积基本一致，表明质谱相应无明显的基质效应。
（二）专属性考察
将缺麦冬阴性制剂、短葶山麦冬阳性制剂、湖北麦冬阳性制剂、短葶山麦冬药材、湖北麦冬药材以及麦冬药材，按供试品溶液制备方法制备，与对照品溶液同时进样测定。结果见图2-4。表明脑灵素胶囊中的各药味对甲基麦冬黄烷酮A、山麦冬皂苷B、短葶山麦冬皂苷C的测定无干扰。
（三）线性关系考察
分别精密量取对照品储备液，并逐级稀释制成系列混合对照品溶液。精密吸取上述系列对照品溶液5μl，注入液相色谱-质谱联用仪器，测定。分别以m/z341.1→178.1离子峰峰面积为纵坐标，以甲基麦冬黄烷酮A浓度为横坐标；以m/z723.7→269.4离子峰峰面积为纵坐标，以山麦冬皂苷B浓度为横坐标；以m/z893.6→481.2离子峰峰面积为纵坐标，以短葶山麦冬皂苷C浓度为横坐标，绘制标准曲线，对照品的线性关系考察见表3。
表 3
Figure 332465DEST_PATH_IMAGE003
（四）掺伪比例考察
按照不同比例（10%~100%）将湖北麦冬或短葶山麦冬掺入麦冬药材后，再制备脑灵素片或脑灵素胶囊，得到系列掺伪比例的阳性制剂，制备供试品溶液，以特征离子峰m/z723.7→269.4和m/z893.6→481.2作为检测离子进行检测，结果显示峰面积随湖北麦冬或短葶山麦冬掺入比例增加而增加，两者呈线性关系。湖北麦冬掺伪比例线性回归方程为y=13660x-3705，r=0.9979；短葶山麦冬掺伪比例线性回归方程为y=3367750x-64303，r=0.9959。
（五）精密度试验
取甲基麦冬黄烷酮A、山麦冬皂苷B、短亭山麦冬皂苷C混合对照品溶液，按“2.1”项下进样测定6次，测定m/z341.1→178.1、m/z723.7→269.4、m/z893.6→481.2离子流色谱的峰面积，其RSD分别为2.52%、2.23%、1.29%，说明方法精密度良好。
（六）重复性
取G2（批号：200602）40片（除去糖衣）、H1（批号：190702）40片（除去糖衣）、样品A6（批号：200101）胶囊内容物适量，取1.0g，按实施例1提供的方法平行制备六份供试品溶液。精密吸取供试品溶液5µl，注入高效液相色谱-质谱联用仪。样品G2测定m/z 341.1→178.1的离子流色谱峰面积，甲基麦冬黄烷酮A平均含量为2.88μg/g，RSD为2.09%。样品H1测定m/z723.7→269.4的离子流色谱峰面积，山麦冬皂苷B平均含量为16.39μg/g，RSD为2.06%。样品A6测定m/z 893.6→481.2的离子流色谱峰面积，短葶山麦冬皂苷C平均含量为110.63μg/g，RSD为1.58%。
（七）回收率试验
精密称取G2样品0.5g，精密称定六份，置具塞锥形瓶中，精密加入浓度为0.1845μg/ml的甲基麦冬黄烷酮A对照品溶液10ml，再精密加入甲醇15ml，自“加热回流30分钟”起照供试品溶液制备方法制备。精密吸取5µl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，以m/z341.1→178.1的离子流色谱峰面积，计算加样回收率，即得。结果回收率为99.65~102.7%，RSD为1.64%。
精密称取H1样品0.5g，精密称定六份，置具塞锥形瓶中，精密加入浓度为0.523μg/ml的山麦冬皂苷B对照品溶液15ml，再精密加入甲醇10ml，自“加热回流30分钟”起照供试品溶液制备方法制备。精密吸取5µl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，以m/z 723.7→269.4的离子流色谱峰面积，计算加样回收率，即得。结果回收率为102.4~105.8%，RSD为1.64%。
精密称取A6样品0.5g，精密称定六份，置具塞锥形瓶中，精密加入浓度为10.36μg/ml的短葶山麦冬皂苷C对照品溶液5ml，再精密加入甲醇20ml，自“加热回流30分钟”起照供试品溶液制备方法制备。精密吸取5µl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，以m/z 893.6→481.2 的离子流色谱峰面积，计算加样回收率，即得。结果回收率为95.39~97.34%，RSD为0.73%。
（八）稳定性试验
取实施例1中的混合对照品溶液，分别于制备后0h、2h、4h、8h、16h、24h进样，以m/z341.1→178.1、m/z 723.7→269.4、m/z 893.6→481.2，作为检测离子对进行测定。取检出山麦冬皂苷B或短葶山麦冬皂苷C的阳性样品溶液，常温保存，分别于制备后0h、2h、4h、8h、16h、24h进样，测定m/z723.7→269.4、m/z 893.6→481.2离子流色谱峰面积。结果表明，对照品和供试品溶液在24小时内稳定性良好，可以满足检测需要。
（九）检测限
以m/z341.1→178.1、m/z 723.7→269.4、m/z 893.6→481.2作为检测离子对进行测定，将混合对照品溶液（以制剂基质配制）逐级稀释，直至上述离子的信噪比约为3，即测得三者在MRM模式下的最低检测浓度分别为0.0922ng/ml、0.1046ng/ml、0.1036ng/ml，检测限为0.0023mg/kg、0.0026mg/kg、0.0026mg/kg。
（十）限度制定
参照《中国药典》2020年版四部“通则0212药材和饮片检定通则”中规定：“药屑及杂质通常不得过3%”，考虑到山麦冬与麦冬性状相近，本试验将山麦冬掺入比例放宽至5%和10%进行考察。取4份短葶山麦冬药材及1 批麦冬药材（批号：121013-201711），分别制得麦冬中含5%、10% 短葶山麦冬的脑灵素胶囊阳性样品各4 份，按实施例1中的方法制备供试品溶液，以特征离子峰m/z893.6→481.2和893.6→463.1作为检测离子对进行检测，结果5%阳性样品有3 份未检出短葶山麦冬皂苷C，4份含10% 阳性样品中短葶山麦冬皂苷C 的峰面积对应短葶山麦冬皂苷C对照品溶液的浓度为0.28~0.46 μg/ml，因此拟定以0.5μg/ml的短葶山麦冬皂苷C对照品溶液，作为判定检出的限度。
取5份湖北麦冬药材及1 批麦冬药材（批号：121013-201711），分别制得麦冬中含5%、10% 湖北麦冬的脑灵素片阳性样品5份，按实施例1中的方法制备供试品溶液，以特征离子峰m/z723.7→251.3和723.7→269.4作为检测离子对进行检测，结果5% 阳性样品有3 份未检出山麦冬皂苷B，5份含10% 阳性样品中山麦冬皂苷B 的峰面积对应山麦冬皂苷B对照品溶液的浓度为0.05~0.10μg/ml，因此拟定以0.1μg/ml的山麦冬皂苷B对照品溶液，作为判定检出的限度。
（十一）判定原则
供试品的提取离子流色谱中，同时出现与山麦冬皂苷B对照品溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中 m/z 723.7→269.4的色谱峰面积值大于对照品溶液中相应的峰面积值者，视为检出湖北麦冬，判定为不合格。
供试品的提取离子流色谱中，同时出现与短葶山麦冬皂苷C对照品溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中 m/z 893.6→481.2的色谱峰面积值大于对照品溶液中相应的峰面积值者，视为检出短葶山麦冬，判定为不合格。
供试品的提取离子流色谱中，出现与甲基麦冬黄烷酮A对照品溶液色谱相应的色谱峰，且未出现与山麦冬皂苷B或短葶山麦冬皂苷C对照品溶液色谱相应的色谱峰，视为检出麦冬，判定为合格。
（十二）样品测定结果
采用拟定方法对收集的脑灵素制剂样品进行测定，结果显示7批次样品检出短葶山麦冬皂苷C成分，6批次检出山麦冬皂苷B成分，其余49批次均为麦冬药材投料，测定结果见表4和图5-6。
表4
编号 甲基麦冬黄烷酮A（m/z341.1→178.1 ） 山麦冬皂苷B（m/z723.7→269.4） 短葶山麦冬皂苷C（m/z893.6→481.2） 批号
A1 / / 检出 181101
A2 / / 检出 190502
A3 / / 检出 190504
A4 / / 检出 190505
A5 / / 检出 191001
A6 / / 检出 200101
A7 / / 检出 200901
B1 检出 / / 181202
B2 检出 / / 190701
B3 检出 / / 190901
B4 检出 / / 191101
B5 检出 / / 191201
B6 检出 / / 200301
B7 检出 / / 200302
B8 检出 / / 200403
B9 检出 / / 200802
B10 检出 / / 200803
B11 检出 / / 201102
C1 检出 / / 20190801
C2 检出 / / 20190802
D1 检出 / / 20200101
D2 检出 / / 20200601
D3 检出 / / 20200901
D4 检出 / / 20201101
E1 检出 / / 190201
F1 检出 / / 190903
F2 检出 / / 191104
F3 检出 / / 200401
F4 检出 / / 200602
F5 检出 / / 200903
G1 检出 / / 181201
G2 检出 / / 200602
G3 检出 / / 200603
G4 检出 / / 200604
G5 检出 / / 200701
G6 检出 / / 200702
G7 检出 / / 210302
H1 / 检出 / 190702
H2 / 检出 / 200204
H3 / 检出 / 200206
H4 / 检出 / 201001
H5 / 检出 / 201002
H6 / 检出 / 201003
I1 检出 / / 20190301
I2 检出 / / 20190901
I3 检出 / / 20200301
I4 检出 / / 20200502
I5 检出 / / 20200503
I6 检出 / / 20200504
I7 检出 / / 20200601
I8 检出 / / 20200901
I9 检出 / / 20200902
I10 检出 / / 20200903
I11 检出 / / 20200904
I12 检出 / / 20201001
I13 检出 / / 20201101
I14 检出 / / 20201102
I15 检出 / / 20201201
I16 检出 / / 20201202
I17 检出 / / 20210101
I18 检出 / / 20210102
I19 检出 / / 20210203

Claims (4)

1.一种脑灵素制剂中麦冬原料的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）对照品溶液的制备：取甲基麦冬黄烷酮A、山麦冬皂苷B、短葶山麦冬皂苷C对照品，精密称定，加甲醇稀释成对照品储备液；精密量取上述对照品储备液加甲醇制成的混合溶液，作为对照品溶液；
（2）供试品溶液的制备：取脑灵素胶囊内容物或脑灵素片，除去糖衣，研细，取样品，精密加入甲醇，加热回流，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；
（3）采用高分离度快速液相色谱-三重串联四极杆质谱联用技术进行检测；
所述高分离度快速液相色谱的条件为：色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18，100 mm×2.1 mm，1.8μm；柱温30℃；以乙腈为流动相A，0.1%甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱的条件为：0~10min，45%A→60%A；流速0.3ml·min-1；进样5µl；
所述质谱的条件为：采用电喷雾离子源ESI，多反应检测MRM，结合正负离子扫描切换，其中甲基麦冬黄烷酮A采用负离子模式检测，山麦冬皂苷B和短葶山麦冬皂苷C采用正离子模式检测，按离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于10：1；
所述质谱的参数为：
Figure 626884DEST_PATH_IMAGE001
；
（4）结果判定：供试品的提取离子流色谱中，应检出与甲基麦冬黄烷酮A对照品相应的色谱峰，并不得检出与短葶山麦冬皂苷C或山麦冬皂苷B对照品溶液色谱相应的色谱峰。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，所述对照品储备液的浓度分别为184.5μg/ml、104.6μg/ml、103.6μg/ml。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，所述对照品溶液中每1ml含甲基麦冬黄烷酮A0.2μg、山麦冬皂苷B0.1μg、短亭山麦冬皂苷C0.5μg。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，所述供试品溶液的具体制备方法为：取脑灵素胶囊内容物或除去糖衣的脑灵素片，研细，取1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，加热回流30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液。
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