CN114563497A - 一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱检测方法 - Google Patents
一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114563497A CN114563497A CN202210208297.5A CN202210208297A CN114563497A CN 114563497 A CN114563497 A CN 114563497A CN 202210208297 A CN202210208297 A CN 202210208297A CN 114563497 A CN114563497 A CN 114563497A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- capsule
- bupleurum tenue
- solution
- quantitative
- mixed solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000002775 capsule Substances 0.000 title claims abstract description 53
- 241001132254 Bupleurum tenue Species 0.000 title claims abstract description 47
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 claims abstract description 36
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 claims abstract description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 19
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 claims abstract description 18
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 claims abstract description 18
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims abstract description 17
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 claims abstract description 17
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims abstract description 16
- NOEGNKMFWQHSLB-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxymethylfurfural Chemical compound OCC1=CC=C(C=O)O1 NOEGNKMFWQHSLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- RJGBSYZFOCAGQY-UHFFFAOYSA-N hydroxymethylfurfural Natural products COC1=CC=C(C=O)O1 RJGBSYZFOCAGQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 30
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 14
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 11
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 7
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 5
- 238000013441 quality evaluation Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 18
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 16
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 16
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 4
- 239000008767 xiaochaihu Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001522129 Pinellia Species 0.000 description 3
- 235000006886 Zingiber officinale Nutrition 0.000 description 3
- 235000006545 Ziziphus mauritiana Nutrition 0.000 description 3
- 244000126002 Ziziphus vulgaris Species 0.000 description 3
- 235000008529 Ziziphus vulgaris Nutrition 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 235000008397 ginger Nutrition 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 241000756943 Codonopsis Species 0.000 description 2
- 244000303040 Glycyrrhiza glabra Species 0.000 description 2
- 235000006200 Glycyrrhiza glabra Nutrition 0.000 description 2
- 244000273928 Zingiber officinale Species 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 description 2
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 235000011477 liquorice Nutrition 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 244000141218 Alpinia officinarum Species 0.000 description 1
- 241000202726 Bupleurum Species 0.000 description 1
- 241000007126 Codonopsis pilosula Species 0.000 description 1
- 206010013789 Dry throat Diseases 0.000 description 1
- 206010013954 Dysphoria Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- IPQKDIRUZHOIOM-UHFFFAOYSA-N Oroxin A Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC(C(=C1O)O)=CC2=C1C(=O)C=C(C=1C=CC=CC=1)O2 IPQKDIRUZHOIOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 241000207929 Scutellaria Species 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- IKIIZLYTISPENI-ZFORQUDYSA-N baicalin Chemical compound O1[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1OC(C(=C1O)O)=CC2=C1C(=O)C=C(C=1C=CC=CC=1)O2 IKIIZLYTISPENI-ZFORQUDYSA-N 0.000 description 1
- 229960003321 baicalin Drugs 0.000 description 1
- AQHDANHUMGXSJZ-UHFFFAOYSA-N baicalin Natural products OC1C(O)C(C(O)CO)OC1OC(C(=C1O)O)=CC2=C1C(=O)C=C(C=1C=CC=CC=1)O2 AQHDANHUMGXSJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 238000012067 mathematical method Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005325 percolation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 235000019615 sensations Nutrition 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8603—Signal analysis with integration or differentiation
- G01N30/8606—Integration
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8686—Fingerprinting, e.g. without prior knowledge of the sample components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N2030/042—Standards
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Library & Information Science (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Algebra (AREA)
- Mathematical Analysis (AREA)
- Mathematical Optimization (AREA)
- Pure & Applied Mathematics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱检测方法,该方法具体为:(1)制备供试品溶液和对照品混合溶液,所述对照品混合溶液是以尿苷、腺嘌呤、5‑羟甲基糠醛、鸟苷这四种成分作为对照品并分别加入溶剂溶解,混合均匀即得;(2)采用超高效液相色谱仪对步骤(1)制备的两种溶液进行分析测定,其色谱条件为:仪器选用超高效液相色谱系统,色谱柱选用Waters ACQUITYUPLC HSS T3色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm);以纯水作为流动相进行等度洗脱;(3)根据10个不同批次的色谱图确定共有峰和定量检测指标,同时通过指纹图谱相似度和含量对小柴胡胶囊进行质量评价。本发明方法可以为小柴胡胶囊的质量控制提供科学依据。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药的检测方法,具体涉及小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱检测方法。
背景技术
小柴胡胶囊是由柴胡、黄芩、甘草、党参、大枣、生姜、姜半夏七味药材通过煎煮、渗漉、浓缩等工艺精制而成的复方制剂,可用于外感病,邪犯少阳证,症见寒热往来、胸胁苦满、食欲不振、心烦喜呕、口苦咽干等。近年来,学术界对小柴胡制剂的研究呈现出逐年增加的趋势。2020版《中国药典》(一部)采用高效液相色谱法测定小柴胡胶囊中的黄芩苷含量用于其质量控制,同时采用柴胡、甘草、党参对照药材定性鉴别这三味药材。但是小柴胡胶囊由多种药材组成,仅仅依靠单一成分进行质量评价存在片面性。
目前对于小柴胡胶囊质控方法研究报道较少。指纹图谱是评价中药制剂的有效方法,采用适当数学方法处理指纹图谱的光谱或者色谱峰信息,就可以较好地反映中药整体质量,同时也可以用于反映中药制剂在生产中的量值传递规律。但目前也未见小柴胡胶囊的指纹图谱方法研究报道。所以总体来看,目前对小柴胡胶囊的质量检测方法研究仍十分欠缺。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱,该检测方法可以弥补现有分析方法对于药效成分质量控制的不足,从而更加全面地评价小柴胡胶囊的质量,对于控制小柴胡胶囊的质量和临床疗效有着重要作用。
为了实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
本发明的目的之一:提供一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱检测方法,所述的小柴胡胶囊包括以下药材:柴胡、黄芩、甘草、党参、大枣、生姜、姜半夏。所述的指纹图谱检测方法,包括以下步骤:
(1)对照品混合溶液以及供试品溶液的制备:
对照品混合溶液的制备:精密称定尿苷、腺嘌呤、5-羟甲基糠醛、鸟苷这四种成分作为对照品,置于容量瓶中,用5%甲醇溶液定容至刻度,摇匀,制成含46.04μg/mL尿苷、9.07μg/mL腺嘌呤、18.04μg/mL5-羟甲基糠醛、13.72μg/mL鸟苷组成的对照品混合溶液。
供试品溶液的制备:取小柴胡胶囊内容物于研钵中,研碎,精密称定,置于25mL容量瓶中,精密加入5%甲醇溶液,在室温下超声处理30min,放冷至室温,摇匀,离心,过0.22μm滤膜滤过,取续滤液,即得。
(2)超高效液相色谱测定
将步骤(1)中的对照品混合溶液和供试品溶液注入液相色谱分析测定,仪器为:Waters Acquity UPLC超高效液相色谱仪;色谱条件为:色谱柱:Waters ACQUITY UPLC HSST3色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm);以纯水作为流动相进行等度洗脱;洗脱方式:0-20min,水100%;流量:0.25ml/min;柱温:26℃;检测波长:260nm~262nm,进样体积为1μL~3μL。
(3)建立定量指纹图谱并进行质量评价
取10个不同批次小柴胡胶囊按照步骤(1)方法制备得到10个不同批次的供试品溶液,按照步骤(2)进行高效液相色谱分析,记录色谱图;根据10个不同批次的色谱图,以不同批次共有的色谱峰确定共有峰。同时通过建立的指纹图谱相似度以及测定的四种成分含量对小柴胡胶囊进行质量评价。
优选的,步骤(2)中的检测波长为260nm,在该检测波长下,色谱峰分离较好,基线较为平稳,峰面积较大响应较好。
优选的,步骤(2)中的进样体积为3μL,在该进样体积下,峰面积较大响应较好。
优选的,步骤(3)中的定量检测指标为:尿苷、腺嘌呤、5-羟甲基糠醛、鸟苷。在本发明的检测条件下,上述四种成分可以充分分离。
优选的,步骤(3)中的共有峰数量为7。
本发明的目的之二:提供一种小柴胡胶囊成分的含量测定的方法。
色谱条件如下:仪器:Waters Acquity UPLC超高效液相色谱仪;色谱柱:WatersACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm);以纯水作为流动相进行等度洗脱;洗脱方式:0-20min,水100%;流量:0.25ml/min;柱温:26℃;检测波长:260nm,进样体积为3μL。
精密称定尿苷、腺嘌呤、5-羟甲基糠醛、鸟苷对照品适量,分别加5%甲醇稀释成不同浓度的溶液,注入超高效液相色谱进行分析,以各个化合物的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程,计算不同批次样品中的指标成分含量。
本发明的目的之三:提供一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱在小柴胡胶囊质量控制中的应用。
将10个批次的小柴胡胶囊的供试品溶液的色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(国家药典委员会2012版),生成对照指纹图谱,将不同批次的小柴胡胶囊的供试品溶液导入相似度评价软件,计算相似度,对相似度低于0.9的批次,认为质量差异较大,不建议放行。
对四种定量含量测定的成分设定含量下限形成企业内控标准,具体为:尿苷不低于200μg/g,腺嘌呤不低于10μg/g,5-羟甲基糠醛不低于100μg/g,鸟苷不低于20μg/g。低于下限的批次,认为其质量存在异常,不建议放行。
本发明的有益效果为:
本发明首次建立了小柴胡胶囊中四种强极性成分的定量指纹图谱,填补了现有方法对强极性成分控制不足的空白,所述的定量指纹图谱可用于全面评价小柴胡胶囊的质量。在本发明方法中,尿苷、腺嘌呤、鸟苷这三种成分与小柴胡胶囊治疗流行性感冒以及病毒性肝炎等临床治疗作用有着密切的关系,作为药效成分,对其进行较为全面的质量控制是十分必要的;且通过建立包括尿苷、腺嘌呤、鸟苷含量的指纹图谱,可以在色谱图中体现出姜半夏和大枣的部分质量信息;5-羟甲基糠醛的来源为糖类受热降解,故其可以体现药物在制药工艺中物料受热情况,所以也能从侧面体现出小柴胡胶囊的生产加工信息。
本发明创造性地采用水作为流动相,相比于传统的有机相与水结合的梯度洗脱方式,更有助于对小柴胡胶囊中水溶性的强极性成分进行检测和质量控制,同时用纯水作为流动相,在进行仪器操作时更加简单。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解,本发明的示意性实施例及其说明用来解释本发明,不构成对于本发明的不当限定。
图1(a)、(b)和(c)分别为小柴胡胶囊样品强极性成分部分化合物的UPLC-Q-TOF-MS正、负离子下的总离子流图、UPLC-UV色谱图。
图2为混合对照品(A)和样品(B)的色谱。
图3为10批小柴胡胶囊强极性成分UPLC指纹图谱。
具体实施方式
应该指出,以下详细说明都是示例性的,旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明,本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是,这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式,而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。此外,还应当理解的是,当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时,其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。
1.实验仪器与材料
1.1仪器
Waters Acquity UPLC超高效液相色谱仪,配置Acquity PDA检测器、在线脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱以及Waters色谱工作站(empower 3.0版)。UPLC-Q-TOF-MS分析系统:超高液相色谱仪(Waters Acquity ultra型,美国waters公司)串联飞行时间质谱仪(Triple TOF 5600+型,美国ABS SCIEX公司),带有Analyst TF软件(version 1.6)采集数据,Peak view软件(version 1.2)处理数据;色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm)。电子天平(AB204-N,Mettler Toledo公司)。小型高速离心机(AB204-N,Mettler Toledo公司)。指纹图谱相似度评价软件为“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(国家药典委员会2012版)。
1.2试剂
乙腈(色谱纯,德国Merck公司),甲醇(色谱纯,德国Merck公司),无水乙醇(批号:20200710,永华化学股份有限公司),水为Mili-Q超纯水。
尿苷对照品(纯度98%,上海旭硕生物科技有限公司,批号:DC17812),腺嘌呤对照品(纯度≥98%,上海旭硕生物科技有限公司,批号:DC14933),5-羟甲基糠醛对照品(纯度≥98%,上海旭硕生物科技有限公司,批号:DC13141),鸟苷对照品(纯度98%,上海旭硕生物科技有限公司,批号:DC17810)。采集了11批小柴胡胶囊,批号见表1。
表1小柴胡胶囊的批号和编号信息
2.实验条件
2.1对照品混合溶液的制备
对照品混合溶液的制备:精密称定尿苷、腺嘌呤、5-羟甲基糠醛、鸟苷对照品,置于容量瓶中,用5%甲醇溶液定容至刻度,摇匀,制成含46.04μg/mL尿苷、9.07μg/mL腺嘌呤、18.04μg/mL5-羟甲基糠醛、13.72μg/mL鸟苷组成的对照品混合溶液。
2.2供试品的制备
供试品的制备:精密称定2.4g小柴胡胶囊内容物,用5%甲醇定容至25mL容量瓶,超声30min,摇匀,12000rpm离心10min,过0.22μm滤膜后取续滤液进样分析。
2.3色谱条件
色谱条件为:色谱柱:Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm);以纯水作为流动相进行等度洗脱;洗脱方式:0-20min,水100%;流量:0.25ml/min;柱温:26℃;检测波长:260nm,进样体积为3μL。
2.4 LC-Q-TOF-Q-MS(液相色谱-三重四极杆-飞行时间质谱)条件
以上述的液相色谱分析条件作为高分辨质谱分析的色谱条件。
质谱条件如下:采用正负离子扫描模式;扫描范围:m/z 100-1500;雾化气(GS1):55psi;雾化气(GS2):55psi;气帘气(CUR):35psi;离子源温度(TEM):600℃(正)550℃(负);离子源电压(IS):-4500V(负)5500V(正);一级扫描:去簇电压(DP):100V;聚焦电压(CE):10V;二级扫描:使用TOF MS~Product Ion~IDA模式采集质谱数据,CID能量为±40±20eV,进样前,用CDS泵做质量轴校正,使质量轴误差小于2ppm。
确定分析方法后,用高分辨质谱检测样品,得到样品的总离子流图。根据高分辨质谱得到的准确相对分子质量和二级质谱的裂解碎片信息,初步推测了其中的11个色谱峰的化学成分,结果见表2。
表2小柴胡胶囊样品强极性成分部分化合物的UPLC-Q-TOF-MS分析
*表示经与对照品比对确定的成分
3.方法学验证
3.1指纹图谱的方法学验证
3.1.1实验方法
指纹图谱的方法学验证主要包括进样精密度、重复性和样品稳定性考察。
进样精密度实验:取同一份供试品溶液,连续进样6次。选择一个参照峰,分别计算各共有峰与参照峰的保留时间与峰面积的比值,得到各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD(相对标准偏差)值。
方法重复性实验:取六份平行制备的供试品溶液,分别进样分析。选择一个参照峰,分别计算各共有峰与参照峰的保留时间与峰面积的比值,得到各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD值。
样品稳定性实验:取同一份供试品溶液,于0,3,6,9,12,18,24h进样分析,选择一个参照峰,分别计算各共有峰与参照峰的保留时间与峰面积的比值,得到各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD值。
3.2.2实验结果
测定了编号为S1-S10不同批次的小柴胡胶囊,在该条件下确定了7个共有峰,由于尿苷(5号峰)峰面积相对较大,且与相邻色谱峰的分离度较好,将其定为参照峰,分别计算进样精密度、重复性和样品稳定性实验项下各个色谱峰的相对保留时间的平均值和RSD值,结果见表3和4。在进样精密度和重复性条件下。各个色谱峰的相对保留时间和相对保留峰面积的RSD值均小于3%,符合指纹图谱要求。稳定性实验条件下,各个色谱峰的相对保留时间和相对保留峰面积的的RSD值均小于5%,说明供试品溶液在24h内稳定。
表3进样精密度、重复性和样品稳定性实验各峰相对保留时间结果
表4进样精密度、重复性和样品稳定性实验各峰相对峰面积结果
3.2含量测定方法学验证
3.2.1实验方法
该分析方法也适用于小柴胡胶囊中强极性类成分的含量测定,方法学验证包括各含量测定成分的线性、精密度、稳定性、重复性和加样回收实验的考察。
线性考察:取系列不同浓度的对照品混合溶液,分别进样3μL分析。以各成分测定的峰面积为纵坐标,浓度为横坐标制作标准曲线,得到线性回归方程与分析范围。根据峰信噪比约为3:1与10:1时各成分的浓度分别确定检测限与定量限。
进样精密度实验:取同一份供试品溶液以及与供试品溶液浓度相同的对照品溶液,连续进样6次,计算得到各成分峰面积以及保留时间的RSD值。
重复性实验:取六份平行制备的供试品溶液,分别进样分析,计算得到各成分含量的RSD值。
溶液稳定性实验:取同一份供试品溶液以及与其浓度相同的对照品混合溶液,于0,3,6,9,12,18,24h进样分析,计算得到各个成分含量的RSD值。
加样回收实验:分别取已知含量的样品溶液9份,分为3组。设高、中、低三个浓度水平,控制对照品加入量与供试品中待测成分量之比分别在1.5:1.0,1.0:1.0,0.5:1.0左右,每种浓度平行制备3份供试品溶液进行测定。精密加入1.2g样品与适量混合对照品贮备液,用5%甲醇定容至25mL,超声30min后,摇匀,离心,过0.22μm滤膜后取续滤液进样分析。
3.2.2实验结果
结合对照品比对,鉴定了5号、7号、9号和10号峰分别为尿苷、腺嘌呤、5-羟甲基糠醛和鸟苷。也最终确定了将这4个成分作为含量测定成分。
尿苷、腺嘌呤、5-羟甲基糠醛、鸟苷的回归方程、线性范围以及检测限、定量限结果见表5,进样精密度实验结果见表6和表7,重复性实验结果见表8,溶液稳定性实验结果见表9,其中精密度、重复性、稳定性RSD均小于5%,符合中国药典的要求,说明该方法线性良好,且供试品溶液在24h内稳定。加样回收实验结果见表10,各成分平均回收率均满足要求,且RSD值均小于5%,证明该优化得到的方法准确可靠,可用于小柴胡胶囊中四种强极性成分的含量测定。
表5各成分的回归方程、相关系数和线性分析范围
表6峰面积的进样精密度结果
表7保留时间的进样精密度结果
表8重复性实验结果
表9溶液稳定性实验结果
表10加样回收实验结果
3.3样品含量测定结果及质控示例
11批供试品溶液的定量成分含量测定结果见表11。各个批次小柴胡胶囊中中尿苷含量在270.3~482.3μg/g,腺嘌呤含量在19.0~75.9μg/g,5-羟甲基糠醛含量在121.2~506.1μg/g,鸟苷含量均低于157.3μg/g,相差较大。其中,尿苷含量最高,腺嘌呤含量最低。
根据上文设定的企业内控标准,发现S6、S8、S9、S11批次的鸟苷含量低于设定的20μg/g的标准,认为不符合内控标准,不建议放行。
表11 11批供试品溶液定量成分含量测定结果
注:“0”表示该成分含量低于定量限
3.4指纹图谱相似度评价及质控示例
将10批正常批次(S1-S10)小柴胡胶囊的供试品的原始图谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件,并生成对照谱图,如图3所示。将各供试品与对照谱图进行比较,相似度结果见表12。由表可知,各供试品指纹图谱与对照谱图的相似度均在0.90以上,各批次的小柴胡胶囊强极性成分具有较好的质量一致性。
表12 10批正常批次小柴胡胶囊供试品溶液指纹图谱的相似度评价结果
取另一新批次S11的样品与对照指纹图谱比对,计算所得相似度为0.676,相似度低于0.9,认为该批次小柴胡胶囊的质量与正常批次相差较大,建议不予放行。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱检测方法,其特征在于,包含以下步骤:
(1)对照品混合溶液和供试品溶液的配制
对照品混合溶液的配制:以尿苷、腺嘌呤、5-羟甲基糠醛、鸟苷这四种成分作为对照品,制备对照品混合溶液;
供试品溶液的配制:称取若干批次小柴胡胶囊内容物为供试品,分别以溶剂进行超声溶解,摇匀后,离心滤过,取续滤液即为供试品溶液;
(2)超高效液相色谱测定
将步骤(1)中的对照品混合溶液和供试品溶液注入液相色谱分析测定,色谱条件为:色谱柱:Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱,柱长100mm×内径2.1mm,粒径1.8μm;以纯水作为流动相进行等度洗脱;洗脱方式:0-20min,水100%;流量:0.25ml/min;柱温:26℃;
(3)建立定量指纹图谱并进行质量评价
取若干不同批次小柴胡胶囊按照步骤(1)方法制备得到不同批次的供试品溶液,按照步骤(2)进行高效液相色谱分析,记录色谱图;根据所有不同批次的色谱图确定共有峰和定量检测指标;同时通过指纹图谱相似度和所述四种成分含量对小柴胡胶囊进行质量评价。
2.根据权利要求1所述的一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱检测方法,其特征在于,供试品溶液通过以下方式配制得到:向小柴胡胶囊内容物中加入5%甲醇溶液,在室温下超声处理至少30min,放冷至室温,摇匀,离心,过0.22μm滤膜滤过,取续滤液,即得。
3.根据权利要求1所述的一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱检测方法,其特征在于,对照品混合溶液通过以下方式配制得到:精密称定尿苷、腺嘌呤、5-羟甲基糠醛、鸟苷对照品,用5%甲醇溶液定容至刻度,摇匀,制成对照品混合溶液。
4.根据权利要求1所述的一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱检测方法,其特征在于,所述的指纹图谱中的共有峰为7个。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210208297.5A CN114563497A (zh) | 2022-03-04 | 2022-03-04 | 一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210208297.5A CN114563497A (zh) | 2022-03-04 | 2022-03-04 | 一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱检测方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114563497A true CN114563497A (zh) | 2022-05-31 |
Family
ID=81717741
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210208297.5A Pending CN114563497A (zh) | 2022-03-04 | 2022-03-04 | 一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114563497A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115372516A (zh) * | 2022-08-24 | 2022-11-22 | 浙江惠松制药有限公司 | 一种鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法 |
-
2022
- 2022-03-04 CN CN202210208297.5A patent/CN114563497A/zh active Pending
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115372516A (zh) * | 2022-08-24 | 2022-11-22 | 浙江惠松制药有限公司 | 一种鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法 |
CN115372516B (zh) * | 2022-08-24 | 2023-11-03 | 浙江惠松制药有限公司 | 一种鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112924586B (zh) | 小柴胡颗粒的检测方法 | |
CN108896681B (zh) | 一种安神补脑液多指标定量指纹图谱建立方法及其应用 | |
CN116429943A (zh) | 一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法 | |
CN114280209B (zh) | 一种小儿清热止咳口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 | |
CN114563497A (zh) | 一种小柴胡胶囊成分的定量指纹图谱检测方法 | |
CN110824068A (zh) | 一种鸢都感冒颗粒指纹图谱的建立方法及应用 | |
CN113655135A (zh) | 一种马兜铃酸i的定量检测方法与限量方法 | |
CN110243986B (zh) | 一种活血消瘿片hplc指纹图谱及其制备方法 | |
CN110031564B (zh) | 基于hplc指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法 | |
CN114994220B (zh) | 一种七清败毒颗粒的指纹图谱的构建方法和其成分含量的测定方法及应用 | |
CN110988198A (zh) | 一种痹痛宁胶囊的含量测定方法 | |
Yao et al. | HILIC‐UPLC‐MS/MS combined with hierarchical clustering analysis to rapidly analyze and evaluate nucleobases and nucleosides in Ginkgo biloba leaves | |
CN108918696B (zh) | 一种健脾益肺方指纹图谱的建立方法及质量控制方法 | |
CN108205024B (zh) | 一种小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法 | |
CN114544816A (zh) | 一种小柴胡胶囊糖类成分的定量指纹图谱检测方法 | |
CN113884587B (zh) | 一种白头翁汤多组分化学成分含量测定方法 | |
WO2023004939A1 (zh) | 一种川芎道地药材指纹图谱鉴别方法 | |
CN113759011B (zh) | 一种银柴胡及其制剂特征图谱的建立方法 | |
CN113759012B (zh) | 一种瞿麦配方颗粒的质量控制方法 | |
CN110082460B (zh) | 一种颈舒颗粒的质量检测方法 | |
CN117288870B (zh) | 蚁灵口服液指纹图谱的建立方法 | |
CN110068640B (zh) | 基于hplc指纹图谱的蒙药紫檀香心药材质量检测方法 | |
CN109632993B (zh) | 一种木蝴蝶配方颗粒中6种化学成分的含量测定方法 | |
CN115308331B (zh) | 一种采用一测多评法测定白花蛇舌草标准汤剂冻干粉或配方颗粒中5种成分含量的方法 | |
CN117805273B (zh) | 一种克痢痧胶囊中5种马兜铃酸类物质的定量检测方法及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220531 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |