CN113498348A - 抑制神经递质分泌的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明一种通过抑制神经膜电位产生来抑制神经递质分泌的组合物。本发明的组合物在抑制SNARE复合体形成的方面具有协同效果，从而不能以有活性的方式分泌神经递质，因此，能够通过减少肌肉收缩来表现出改善皮肤皱纹的效果。

Description

抑制神经递质分泌的组合物
技术领域
本申请要求基于2019年02月22日申请的韩国申请第10-2019-0021265号和2020年01月08日申请的韩国申请第10-2020-0002573号的优先权，这些申请的说明书和附图中公开的所有内容均援引于本申请。
本发明涉及通过抑制神经膜电位产生来抑制神经递质分泌的组合物及包含该组合物的皮肤皱纹改善用化妆材料组合物。
背景技术
老化是身体功能和能力随着时间的推移而退化的现象，是在包括人类在内的大多数生物体中出现的普遍现象。皮肤皱纹的增加是随着老化而出现的外部变化中最为显眼的变化中的一种。随着老化，整个面部和整个身体的皱纹会增加，在皱纹的形成中除了老化以外，还与皮肤水分、紫外线暴露程度、肌肉的重复运动等有关。在肌肉运动较多的眉间、眼角、嘴周围等中较多出现深层皱纹，将由重复的肌肉运动或表情所产生的皱纹称为表情皱纹。
肉毒杆菌毒素(Botulinum toxin)是肉毒杆菌(Clostridium botulinum)产生的神经毒性蛋白。肉毒杆菌毒素作用于神经肌肉接头部，从而通过在神经细胞中抑制作为神经递质的乙酰胆碱的分泌来起到麻痹肌肉的作用。为了在神经细胞中分泌乙酰胆碱，必须在轴突末端形成SNARE(可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子结合蛋白受体)复合体，在肉毒杆菌毒素(血清型A(serotype A))的情况下，通过截断作为SNARE复合体的组成蛋白之一的25KDA突触关联蛋白(SNAP-25)来阻断SNARE复合体的形成，从而抑制乙酰胆碱的分泌。
肉毒杆菌毒素通过麻痹肌肉来改善皱纹的效果优异。近年来，肉毒杆菌毒素被广泛用于美容目的，但是由于是一种半数致死剂量仅为10ng/kg的强毒物质，因而存在安全事故风险，并且由于只能由专科医生进行手术，因而具有消费者难以轻松接触的缺点。另外，具有为了进行手术而必须进行侵入性手术的缺点。为了弥补这些缺点，其现状为需要开发出副作用低且能够应用于化妆材料、外用剂等的肉毒素类似功效材料。
在整个本说明书中，参考了大量文献并指出了其引用。作为参考，在本说明书中以整体并入所引用的文献的公开内容，以更清楚地说明本发明所属技术领域的水平和本发明的内容。
发明内容
发明所要解决的问题
本发明人们为了开发出表现抑制神经递质分泌的效果且无副作用的肉毒素类似功效物质而努力研究的结果，发现在将多种天然原料中的秦椒果提取物与SNARE(可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子结合蛋白受体)形成抑制剂组合的情况下，与各自原料所具有的效果相比，在抑制神经递质分泌的效果和皱纹改善效果上具有显著的协同效果，从而完成了本发明。
因此，本发明的目的在于，提供一种神经递质分泌抑制用组合物，其中，包含秦椒果提取物和SNARE形成抑制剂的组合作为有效成分。
本发明的另一目的在于，提供皮肤皱纹改善用化妆材料组合物和化妆品，其中，包含所述组合物皮肤皱纹改善用。
本发明的又一目的和优点由以下的发明内容、权利要求书以及附图变得更加清楚。
解决问题的技术方案
本发明的一方式是提供一种神经递质分泌抑制用组合物，其中，包含(i)秦椒(Zanthoxylum piperitum)果提取物和(ii)SNARE形成抑制剂的组合作为有效成分。
秦椒(Zanthoxylum piperitum)传统上是一种具有局部麻醉、镇痛效果且具有麻辣的神经刺激的植物，通过干燥其叶、茎或果来使用。众所周知，秦椒的叶、茎或果提取物主要对抗菌、抗病毒、抗过敏、镇痛和紫外线阻断等具有效果。
本发明的组合物包含秦椒果提取物和SNARE形成抑制剂的组合作为有效成分，在本说明书中使用的术语“提取物”的含义包括对原料进行榨汁或对原料用提取溶剂处理而获得的提取结果物以及对该提取结果物进行剂型化(例如，粉末化)的加工物。
在对原料用提取溶剂处理而获得本发明的组合物中使用的提取物的情况下，可以使用多种提取溶剂，例如，可以使用极性溶剂或非极性溶剂。作为极性溶剂，可以使用：(i)水；(ii)醇(优选的是，甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、1-戊醇、2-丁氧基乙醇或乙二醇)；(iii)乙酸；(iv)N,N-二甲基甲酰胺(DMFO：dimethyl-formamide)；以及(v)二甲基亚砜(DMSO：dimethyl sulfoxide)等，作为非极性溶剂，也可以使用丙酮、乙腈、乙酸乙酯、乙酸甲酯、氟代烷、戊烷、己烷、2,2,4-三甲基戊烷、癸烷、环己烷、环戊烷、二异丁烯、1-戊烯、1-氯丁烷、1-氯戊烷、邻二甲苯、二异丙醚、2-氯丙烷、甲苯、1-氯丙烷、氯苯、苯、二乙醚、二乙基硫醚、氯仿、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、苯胺、二乙胺、乙醚、四氯化碳以及四氢呋喃(THF)等。
优选的是，本发明中使用的提取物可以是通过对原料进行榨汁而获得的提取物、使用超声波提取器提取的提取物或使用选自由水、碳原子数为1至4的低级醇以及它们的混合物构成的组中的任一种作为提取溶剂来提取的提取物，但不限于这些。更优选的是，本发明中使用的提取物是秦椒果的乙醇提取物或乙醇水溶液提取物。
另外，如上所述，本说明书中使用的术语“提取物”具有本技术领域中通常用作粗提取物(crude extract)的含义，但广义上还包括对提取物进一步分馏(fractionation)而获得的分馏物。即，不仅包括对原料进行榨汁而获得的提取物或使用上述的提取溶剂而获得的提取物，而且还包括对此还应用纯化过程而获得的提取物。例如，在本发明的提取物中还包括：使所述提取物通过具有预定的分子量截留值的超滤膜而获得的分馏物；基于多种色谱(为了根据尺寸、电荷、疏水性或亲和性的分离而制作)的分离等，通过进一步实施的多种纯化方法来获得的分馏物。
另外，本发明的提取物可以是随后进行附加过程，例如过滤、浓缩或干燥过程来去除溶剂的提取物，或者，可以是均进行过滤、浓缩以及干燥的提取物。对于过滤而言，例如，可以使用滤纸或减压过滤器，对于浓缩而言，可以使用减压浓缩器，对于干燥而言，可以进行喷雾干燥或冷冻干燥法等，从而获得粉末状态的提取物。
根据本发明的一具体例，通过如上制造的秦椒果提取物可以包含3至50ppm的槲皮苷(quercitrin)，优选的是，可以包含4ppm以上、5ppm以上、6ppm以上、7ppm以上、8ppm以上、9ppm以上、10ppm以上、11ppm以上、12ppm以上、13ppm以上、14ppm以上、15ppm以上、16ppm以上、17ppm以上、18ppm以上、19ppm以上、20ppm以上、30ppm以上、40ppm以上或50ppm以上的槲皮苷(quercitrin)。
本发明的组合物中所包含的SNARE形成抑制剂包括在本技术领域已知的物质，例如韩国授权专利公报第10-0883757号中公开的化合物作为截断在打开神经递质释放途径中起核心作用的SNARE蛋白质或使SNARE复合体不稳定的物质，但不限于此。具体而言，本发明的组合物中所包含的SNARE形成抑制剂可以是选自由阿基瑞林(Argireline)、肉毒神经毒素A轻链(BoNT/A LC)、山柰酚、槲皮素、杨梅黄酮、木犀草素、飞燕草素、矢车菊素、紫铆花素以及鞣花酸构成的组中的一种以上。
在本发明的组合物中，上述的秦椒果提取物和SNARE形成抑制剂可以以混合物或复合物的形式包含。其特征在于，与秦椒果提取物和SNARE形成抑制剂各自的单一物质相比，所述混合物或复合物具有协同效果。更具体而言，为了表现出协同效果，与所述SNARE形成抑制剂的重量相比，所述整个组合物中所包含的所述秦椒果提取物的重量应当为相同量以上。
根据韩国国内“化妆品全成分标识指南”，规定除了使用量为1％以下的成分以外按照含量顺序由多到少记载。
第六条(标识的顺序)：成分的标识按照化妆品中使用的含量顺序由多到少记载。但是，混合原料以单独的成分标识，对于1％以下的成分、香料以及着色剂可以按任意顺序记载。
现有的皱纹改善化妆品以所谓“涂抹式肉毒素”为名，还包含1％以下的微量阿基瑞林(Argireline)，单独使用如此微量的阿基瑞林的效果微乎其微，而且从合成肽的特性的方面考虑，使用1％以上的高浓度阿基瑞林在价格上不利，并且，存在有可能因使用高浓度而引起的副作用的弱点。另外，在现有的皱纹改善化妆品中，与阿基瑞林一同还包含秦椒果提取物，在此情况下，在包含迷迭香叶提取物、绿茶提取物等多种天然植物提取物的同时，仅包含极微量的秦椒果提取物作为概念原料。
然而，根据本发明人们所发现，只有在比阿基瑞林包含更多量或至少相同量的秦椒果提取物时，才能表现出协同效果，而在作为概念原料包含比阿基瑞林更少量的极微量的情况下，不会表现出协同效果(参照图6)。
在一具体例中，本发明的神经递质分泌抑制用组合物的特征在于，包含100至500ppm的所述(i)秦椒果提取物和10至100ppm的所述(ii)SNARE形成抑制剂，与SNARE形成抑制剂的重量相比，所包含的秦椒提取物的重量为相同量以上。在此，ppm是指组合物的总重量1,000,000mg中所包含的物质的mg数(或mg/kg)。
在另一具体例中，本发明的神经递质分泌抑制用组合物中所包含的所述秦椒果提取物的含量可以是100ppm以上、200ppm以上、300ppm以上、400ppm以上、500ppm以上、600ppm以上、700ppm以上、800ppm以上、900ppm以上或1000ppm以上，所述SNARE形成抑制剂的含量可以是10ppm以上、20ppm以上、30ppm以上、40ppm以上、50ppm以上、100ppm以上、200ppm以上、300ppm以上或400ppm以上，但是，SNARE形成抑制剂的含量不超过秦椒果提取物的含量。
如上所述，比阿基瑞林等SNARE形成抑制剂包含更多量或至少相同量秦椒果提取物的本发明的组合物，在抑制SNARE复合体形成的方面具有协同效果，从而不能以有活性的方式分泌神经递质，因此，能够通过减少肌肉收缩来表现出改善皮肤皱纹的效果。基于如上所述的实质性缓解皱纹的效果，本发明提供一种皮肤皱纹改善用化妆材料组合物，包含所述秦椒果提取物和SNARE形成抑制剂的组合。
本发明的化妆材料组合物表现出肉毒素类似功效，肉毒素类似功效是指改善皱纹、提升(lifting)、改善皮脂分泌、改善痤疮、抑制汗液分泌(改善多汗症)、改善眼部下方凹陷、眼部下方卧蚕、缓解肌肉松弛和疼痛、改善偏头痛。
在将所述化妆材料组合物用作皮肤外用剂的情况下，可以进一步包含脂肪物质、有机溶剂、增溶剂、增稠剂和胶凝剂、软化剂、抗氧化剂、悬浮剂、稳定剂、发泡剂(foamingagent)、芳香剂、表面活性剂、水、离子型或非离子型乳化剂、填充剂、金属离子封闭剂和螯合剂、防腐剂、维生素、阻断剂、润湿剂、必备油、染料、颜料、亲水性或亲油性活化剂、脂质囊泡或皮肤用外用剂中通常使用的任何其他成分这样的皮肤学领域中通常使用的辅助剂。另外，所述成分可以以皮肤学领域中通常使用的量导入。
在以皮肤外用剂的剂型的方式提供所述皱纹改善用组合物的情况下，可以具有如软膏剂、贴剂、凝胶剂、乳膏剂或喷雾剂等剂型，但不限于此。
另外，本发明的皱纹改善用组合物可以用于化妆品的制造。在将所述组合物用作化妆品的情况下，可以制造成一般的乳化剂型和可溶化剂型的形式。例如，可以具有如下剂型：柔软化妆水或营养化妆水等化妆水，面部乳液、身体乳液等乳液，滋养霜、保湿霜、眼霜等乳膏剂，精华素，化妆软膏，喷雾剂，凝胶剂，面膜，防晒霜，底霜，液体类型、固体类型或喷雾类型等粉底，粉剂，清洁膏、清洁乳、清洁油这样的粉底去除剂，清洁泡沫、皂剂、沐浴露等清洁剂等。
另外，所述化妆品可以进一步包含脂肪物质、有机溶剂、增溶剂、增稠剂和胶凝剂、软化剂、抗氧化剂、悬浮剂、稳定剂、发泡剂(foaming agent)、芳香剂、表面活性剂、水、离子型或非离子型乳化剂、填充剂、金属离子封闭剂和螯合剂、防腐剂、维生素、阻断剂、润湿剂、必备油、染料、颜料、亲水性或亲油性活化剂、脂质囊泡或化妆品中通常使用的任何其他成分这样的化妆品领域中通常使用的辅助剂。
发明效果
本发明所涉及的神经递质分泌抑制用组合物在抑制SNARE复合体形成的方面具有协同效果，从而不能以有活性的方式分泌神经递质，因此，能够通过减少肌肉收缩来表现出改善皮肤皱纹的效果。
附图说明
图1是示出了对已知包含在秦椒果中的金丝桃苷(hyperoside)和槲皮苷(quercitrin)各自的抑制肌肉收缩的效果进行确认的结果的图。
图2是示出了秦椒果提取物抑制神经细胞中的电信号传递的能力的图。
图3是示出了秦椒果提取物的抑制神经递质分泌的效果的图。
图4是示出了秦椒果提取物的细胞毒性评价的图。
图5是示出了秦椒果提取物的肌肉麻痹功效的图。
图6是示出了秦椒提取物和阿基瑞林(乙酰基六肽-8)的协同效果的图。
图7是示出了用阿基瑞林单独处理时的抑制肌肉收缩的效果的图。
图8是示出了秦椒提取物和作为肉毒素功效物质的BoNT/A LC的协同效果的图。
具体实施方式
以下，通过实施例进一步对本发明进行详细说明。这些实施例仅用于更加详细地说明本发明，本发明的范围不受这些实施例的限制，这对于本技术领域的普通技术人员来说是显而易见的。
实施例
1.秦椒提取物的制造和功效成分的确认(图1)
(1)秦椒提取物的制造
对秦椒(Zanthoxylum piperitum)果进行洗涤、干燥以及粉碎，并用其制造秦椒乙醇提取物。具体而言，乙醇提取物是通过如下方法制造：加入70％的乙醇作为提取溶剂在常温提取2小时，然后对得到的提取物进行过滤和浓缩，进行粉末化。
(2)功效成分的确认
为了测试已知包含在秦椒果中的金丝桃苷(hyperoside)和槲皮苷(quercitrin)各自的抑制肌肉收缩的效果，导入秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)系统。隐杆线虫使用野生型N2菌株(wild-type N2 strain)，由秀丽隐杆线虫遗传中心(CaenorhabditisGenetics Center)提供。用M9(+0.01％PEG,0.1％DMSO)缓冲液收获(harvest)同步化的年轻成虫(Synchronized young-adult)期的隐杆线虫，清洗两次并旋转沉降之后，用适量的M9缓冲液稀释，分别按50μL分配到离心管(e-tube)。加入各化合物之后，将最终反应体积调整为1mL。在20℃的培养箱中处理各化合物1小时之后，将1mL全部转移到24孔板进行视频录制。在录制的视频中，将左右往返一次作为一次游泳次数，测定10条线虫在20秒内的游泳次数，从而计算每分钟的游泳次数。通过100-(实验组的游泳次数)/(对照组的游泳次数)×100来计算肌肉麻痹效果。误差条通过S.E.M(平均标准误差(Standard Error of Mean))计算，统计处理通过t检验(Student’s t-test)进行。
实验结果，金丝桃苷(hyperoside)的肌肉收缩效果微乎其微，相反，确认到槲皮苷(quercitrin)的抑制肌肉收缩的效果(图1)。
(3)槲皮苷(quercitrin)含量的确认
测定所述制造的秦椒乙醇提取物、秦椒热水提取物以及秦椒超声波提取物中包含的槲皮苷的含量。秦椒热水提取物使用BIO FD&C公司的“秦椒果提取物”，秦椒超声波提取物使用The Garden of Natural Solution公司的Jeju Chophi(秦椒果提取物)。超声波提取的秦椒(Zanthoxylum piperitum)提取物的槲皮苷的含量为4ppm，在热水提取物的情况下，测定的槲皮苷含量为3ppm，在乙醇提取物的情况下，测定的槲皮苷含量为9ppm，从而确认到与其他溶剂提取法相比，在乙醇提取时槲皮苷含量显著提高。另一方面，在作为花椒(Zanthoxylum bungeanum)提取物的意迪那(Indena)公司的“Zanthalene”中未检出槲皮苷(小于1ppm)。
2.抑制神经细胞中的电信号传递的能力(图2)
(1)实验方法
使用所述制造的秦椒果(Zanthoxylum piperitum fruit)乙醇提取物测定抑制神经细胞中的电信号传递的能力。具体而言，为了测定作为神经细胞株的NG108-15中因KCl刺激而引起的钙离子流入的变化，使用FLIPR钙分析试剂盒(FLIPR Calcium Assay Kit)。将NG108-15以1×104个细胞/孔(cells/well)分株到涂有多聚-L-赖氨酸的96孔板。在分株后的第三天，将秦椒果提取物在无血清(serum-free)DMEM中稀释并处理1小时。然后，用上样缓冲液处理，在37℃的CO2培养箱中培养2小时。在上样缓冲液中包含与钙离子反应的荧光物质，由于掩蔽染料(masking dye)，只有细胞内的钙离子发生反应而显示荧光。培养后，使用FlexStation，用70mM的KCl刺激细胞，并在485/525nm测定荧光。
(2)实验结果
如果在神经细胞中用70mM的KCl诱导脱极化，则Ca2+流入到细胞内。在此，如果用秦椒果提取物一起处理，则由脱极化引起的Ca2+流入被显著抑制(图2)。由此，可知秦椒果提取物具有抑制神经细胞中的电信号传递的能力。
3.秦椒果提取物的抑制神经递质分泌的效果(图3)
(1)实验方法
为了查看在神经细胞和肌肉细胞的共同培养条件下的神经递质分泌的变化，使用神经递质转运体摄取检测试剂盒(Neurotransmitter Transporter Uptake Assay Kit)。在共同培养后的第三天，用染料溶液(dye solution)处理30分钟，然后，将所述制造的秦椒果提取物在HBSS缓冲液(HBSS buffer)(HBSS+20mM HEPES)中稀释并处理30分钟。使染料溶液(Dye solution)包含模拟神经递质的荧光物质和掩蔽染料(masking dye)。如果荧光物质通过掩蔽染料(masking dye)进入到细胞内，则显示荧光，如果被释放，则荧光消失。处理后，使用FlexStation，用70mM的KCl刺激细胞，并在485/525nm测定荧光。
(2)实验结果
确认秦椒果提取物是否抑制电信号的传递而最终抑制神经递质分泌。当在神经细胞中发生动作电位时，神经递质从突触前神经元(Presynaptic neuron)释放到突触间隙。释放的神经递质与肌肉中的突触后神经元(postsynaptic neuron)的受体结合，在运动神经元中产生动作电位，然后，信号转化为肌肉收缩。为了研究此过程，由于形成有神经肌肉接头部(neuromuscular junction)的环境是适合的研究条件，因此共同培养(co-culture)NG108-15和C2C12，以制造形成神经肌肉接头部的体外(in vitro)条件。
实验结果，与对照组相比，由于KCl处理后荧光值降低，因此可知KCl处理促进了神经递质的分泌。在此，用秦椒果提取物一起处理时，观察到因KCl而引起的神经递质的分泌减少(图3)。由此，确认到秦椒果提取物抑制神经递质的分泌。
4.秦椒果提取物的细胞毒性评价(图4)
(1)实验方法
为了确认针对秦椒果提取物的处理浓度的细胞毒性，通过细胞增殖实验(MTTassay)进行细胞存活率的测定。将NG108-15细胞以1×104个细胞/孔(cells/well)分株到涂有多聚-L-赖氨酸(poly-L-lysine)的96孔板，培养24小时，以附着在板(plate)上。然后，将两种物质按不同浓度在无血清(serum-free)DMEM中稀释，并对细胞进行处理之后，在CO2培养箱中培养4小时。去除上清液后，分别对细胞用溶于无血清(serum-free)DMEM的0.5mg/mL的MTT溶液100μL处理并反应3小时。反应后，去除MTT溶液，加入异丙醇(isopropanol)100μL并搅拌10分钟以溶解甲
Figure BDA0003221600930000101
晶体(formazan crystal)，用微盘分析仪(microplatereader)在540nm测定吸光度。
(2)实验结果
在处理12.5ppm、25ppm、50ppm的秦椒果提取物时，在所有浓度均表现出100％以上的细胞存活率，因此可以确认没有细胞毒性(图4)。
5.秦椒果提取物的肌肉麻痹功效(图5)
使用如上述1.(2)中所述的秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)系统测试所述制造的秦椒果提取物的肌肉麻痹功效。
实验结果，在用秦椒果提取物处理隐杆线虫时，肌肉麻痹效果随着浓度的增加而增加。虽然在0.01％的秦椒提取物中没有肌肉麻痹效果，但是在用0.05％的秦椒提取物处理时表现出8.5％的肌肉麻痹效果，在用0.1％的秦椒提取物处理是表现出24.1％的肌肉麻痹效果(图5)。由此，确认到在用秦椒果提取物处理时，在个体水平上具有肌肉麻痹功效。另外，基于之前的细胞实验结果可以类推，与肉毒素机制相似地，秦椒果提取物通过抑制神经细胞中的神经递质分泌来诱发肌肉的麻痹。
6.秦椒提取物和阿基瑞林组合的协同效果试验(图6和图7)
对秦椒果提取物和肉毒素功效材料之间的协同效果进行测试。首先，对秦椒果提取物和通过与神经细胞中的SNAP-25结合来抑制SNARE形成的阿基瑞林(乙酰基六肽-8，Acetyl hexapeptide-8)的协同效果进行测试。
实验结果，确认到如果与阿基瑞林相比较少使用秦椒提取物(50ppm的秦椒、100ppm的阿基瑞林)，则不会表现出协同效果，至少使用与阿基瑞林相同量以上的秦椒提取物时，表现出协同效果(图6)。另外，确认到阿基瑞林(100ppm)的抑制肌肉收缩的效果被500ppm的秦椒提取物增加了约15倍以上(图6)。
为了知道用多少量的阿基瑞林单独处理才能表现出这种效果，通过逐渐增加阿基瑞林的量来进行实验的结果，确认到为了获得与100ppm的阿基瑞林和500ppm的秦椒提取物组合相同水平的效果，用阿基瑞林单独处理时需要用100,000ppm进行处理(图7)。
7.秦椒提取物和BoNT/A LC组合的协同效果试验(图8)
接下来，测试秦椒果提取物是否也对肉毒杆菌毒素的部分功效材料表现出协同效果。在肉毒杆菌毒素的情况下，由于其毒性非常强且规定严格而难以在实验中使用，因此使用作为肉毒杆菌毒素蛋白质中的具有酶活性的部位的轻链部位(BoNT/A LC)测定协同效果。与肉毒杆菌毒素的肌肉麻痹效果相同地，在用0.002％(20ppm)的BoNT/A LC单独处理时具有50％左右的肌肉麻痹效果，由此可知，与肉毒杆菌毒素相同地，BoNT/A LC也表现出肉毒素功效。为了测试协同效果，用0.01％的秦椒果提取物与BoNT/A LC一同处理时表现出20％以上的协同效果(图8)。通过此结果可知，秦椒果提取物与所有表现出肉毒素功效的材料均表现出协同效果。

Claims (10)

1.一种神经递质分泌抑制用组合物，其中，
包含(i)秦椒(Zanthoxylum piperitum)果提取物和(ii)SNARE形成抑制剂的组合作为有效成分。
2.神经递质分泌抑制用组合物在皮肤皱纹改善中的应用，其中，
所述神经递质分泌抑制用组合物包含(i)秦椒(Zanthoxylum piperitum)果提取物和(ii)SNARE形成抑制剂的组合。
3.根据以上权利要求中任一项所述的神经递质分泌抑制用组合物或其在皮肤皱纹改善中的应用，其特征在于，
所述SNARE形成抑制剂是选自由阿基瑞林、肉毒神经毒素A轻链(BoNT/A LC)、山柰酚、槲皮素、杨梅黄酮、木犀草素、飞燕草素、矢车菊素、紫铆花素以及鞣花酸构成的组中的一种以上。
4.根据以上权利要求中任一项所述的神经递质分泌抑制用组合物或其在皮肤皱纹改善中的应用，其特征在于，
所述秦椒果提取物是选自由秦椒果的榨汁提取物、超声波提取物、水提取物、碳原子数为1至4的低级醇水溶液提取物以及碳原子数为1至4的低级醇提取物构成的组中的一种以上。
5.根据以上权利要求中任一项所述的神经递质分泌抑制用组合物或其在皮肤皱纹改善中的应用，其特征在于，
所述秦椒果提取物包含3至50ppm的槲皮苷。
6.根据以上权利要求中任一项所述的神经递质分泌抑制用组合物或其在皮肤皱纹改善中的应用，其特征在于，
与所述SNARE形成抑制剂的重量相比，所述整个组合物中所包含的所述秦椒果提取物的重量为相同量以上。
7.根据以上权利要求中任一项所述的神经递质分泌抑制用组合物或其在皮肤皱纹改善中的应用，其特征在于，
所述组合物包含100至500ppm的所述(i)秦椒果提取物和10至100ppm的所述(ii)SNARE形成抑制剂，与SNARE形成抑制剂的重量相比，所包含的秦椒提取物的重量为相同量以上。
8.一种皮肤皱纹改善用化妆材料组合物，其中，
包含以上权利要求中任一项所述的组合物。
9.一种化妆品，其中，
包含以上权利要求中任一项所述的组合物。
10.一种抑制神经递质分泌的方法，其中，
包括向对象体应用包含(i)秦椒(Zanthoxylum piperitum)果提取物和(ii)SNARE形成抑制剂的组合的组合物。
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