CN113480589A - 一种熊去氧胆酸的纯化方法 - Google Patents

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CN113480589A CN202110779101.3A CN202110779101A CN113480589A CN 113480589 A CN113480589 A CN 113480589A CN 202110779101 A CN202110779101 A CN 202110779101A CN 113480589 A CN113480589 A CN 113480589A
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Abstract

本发明公开了一种熊去氧胆酸的纯化方法，包括以下步骤：步骤A为熊去氧胆酸的4‑二甲基吡啶铵盐的制备；步骤B为熊去氧胆酸的4‑二甲基吡啶铵盐的水解。本发明操作简便，使用的溶剂、试剂价廉易得，适合工业化生产，得到的熊去氧胆酸纯度高。

Description

一种熊去氧胆酸的纯化方法
技术领域
本发明涉及医药中间体分离领域，具体地涉及一种熊去氧胆酸的纯化方法。
背景技术
熊去氧胆酸(Ursodeoxycholic acid，UDCA)(如式1所示)，化学名称3α,7β-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(3α,7β-dihydroxy-5β-cholan-24-oic acid)，CAS号128-13-2，分子式C24H40O4，分子量392.56，白色粉末，无臭，味苦，熔点为203-204℃。熊去氧胆酸是名贵中药熊胆所含的主要成分，是美国FDA批准的原发性胆汁性肝硬化(PBC)的一线治疗药物，在临床上还可以有效治疗胆结石类疾病和慢性肝病，具有广阔的市场前景。目前，制备熊去氧胆酸主要有动物胆汁提取和人工合成两种方法，但动物胆汁提取来源有限，难以满足临床需要，因此主要依赖人工合成。
Figure BDA0003155482380000011
目前，由于鹅去氧胆酸廉价易得，工业上主要以鹅去氧胆酸为原料，通过化学氧化、还原反应(Bioorganic&Medicinal Chemistry,2016,24:3986-3993.等)或酶法氧化、还原反应(Bioprocess and Biosystems Engineering,2019,42(9):1537-1545.等)来制备熊去氧胆酸。在此反应产物中，除产品熊去氧胆酸，还有中间体7-酮石胆酸(7K-LCA，3α-羟基-7-羰基-5β-胆烷酸)以及鹅去氧胆酸(Chenodeoxycholic acid，CDCA，3α,7α-二羟基-5β-胆烷-24-酸)等副产物，纯化较为困难。
目前工业上主要采用乙酸乙酯等溶剂多次洗涤纯化，选择性地从含有熊去氧胆酸的混合物中溶解除去鹅去氧胆酸等相关杂质，实际生产中需要用30倍以上的乙酸乙酯才能将鹅去氧胆酸等杂质溶解除去，溶剂消耗大、成本高，纯化效果不理想。中国专利文献(CN106928306A)公开了通过三乙胺处理粗品熊去氧胆酸，经过三步精制步骤，得到熊去氧胆酸精品，产品回收率82.8％-85.3％，操作相对较复杂，收率也不理想。
发明内容
本发明的目的是针对以上存在的问题与不足，提供一种操作简便、使用的溶剂、试剂价廉易得、得到的熊去氧胆酸纯度高、适宜工业化生产的纯化方法。
为了实现上述目的，本发明提供了一种纯化熊去氧胆酸的方法，其特点是，包括以下步骤：
A.熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐的制备
将熊去氧胆酸粗品溶于第一溶剂和第二溶剂的混合溶液中，搅拌升温至55-70℃，加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)，升温回流反应1-4h，缓慢降温，在0-5℃条件下搅拌0.5-4h，抽滤，用第一溶剂洗涤滤饼，干燥，得到熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐。
B.熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐的水解
将步骤A中得到的熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐悬浮在水中，加入碱，调节pH调节至12.0-12.5，在20-25℃条件下搅拌1-4h；滴加酸调节pH至2.0-2.5，在20-25℃搅拌1-4h；过滤，收集滤饼并用水洗涤，干燥，得到熊去氧胆酸纯品。
所述反应过程如路线(I)所示：
Figure BDA0003155482380000021
路线(I)
步骤A中，
所述熊去氧胆酸粗品的纯度为70％-90％；优选地，为90％。
所述第一溶剂为丙酮。
所述第二溶剂选自四氢呋喃、甲醇、乙醇等中的一种或多种；优选地，所述第二溶剂为甲醇。
所述加入的第一溶剂体积(毫升)数是熊去氧胆酸粗品重量(克)数的4-8倍；优选地，为6倍。
所述加入的第二溶剂体积(毫升)数是熊去氧胆酸粗品重量(克)数的0.3-1倍；优选地，为0.5倍。
所述4-二甲氨基吡啶的加入量是所述熊去氧胆酸粗品重量的0.31-0.47倍；优选地，所述4-二甲氨基吡啶的重量是熊去氧胆酸粗品重量的0.32倍。
所述洗涤滤饼的第一溶剂的体积(毫升)数是熊去氧胆酸粗品重量(克)数的1-3倍倍；优选地，为1倍。
所述升温回流反应的温度为55-70℃；优选地，为65℃。
所述升温回流反应的时间优选为2h。
在0-5℃条件下优选搅拌1h。
步骤B中，
所述熊去氧胆酸的4-二甲氨基吡啶铵盐悬浮使用的水体积(毫升)数是熊去氧胆酸粗品重量(克)数的5-20倍；优选地，为15倍。
所述碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂等中的一种或几种；优选地，为氢氧化钠。
所述酸为盐酸、硫酸、磷酸、乙酸等中的一种或几种；优选地，为盐酸。
所述碱的浓度为1-8mol/L；优选地，为2mol/L。
所述酸的体积分数为10％-90％；优选地，为10％。
所述洗涤滤饼所用水的体积(毫升)数是熊去氧胆酸重量(克)数的1-5倍；优选地，为2倍。
优选地，加入碱调节pH至12.0。
优选地，加入酸调节pH至2.0。
本发明在加入碱或者加入酸调节pH后，优选在20-25℃搅拌1h。
本发明的有益效果包括，本发明熊去氧胆酸的纯化方法，所用溶剂易得，操作简单，只用两步纯化步骤，精制得到的熊去氧胆酸纯度大于99％，耗能少，便于工业化生产。
具体实施方式
结合以下具体实施例，对本发明作进一步详细说明，实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。
实施例一
将10g 90％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于丙酮(60mL)和甲醇(5mL)的混合溶液中，搅拌升温至60℃，加入4-二甲氨基吡啶(3.2g)，并在65℃下反应2h，然后将反应液冷却，在0-5℃下搅拌1h，抽滤，滤饼用丙酮(10mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐(11.6g)。
上述熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐悬浮在水中(150mL)，加入2mol/L的氢氧化钠水溶液，将pH调节至12.0，在20-25℃下搅拌1h；滴加10％的稀盐酸调节pH至2.0，在20-25℃搅拌1h；过滤，收集滤饼并用水(200mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸8.74g(液相纯度>99％)，熊去氧胆酸纯化收率97.1％。
实施例二
将10g 80％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于丙酮(60mL)和甲醇(5mL)的混合溶液中，搅拌升温至60℃，加入4-二甲氨基吡啶(3.2g)，并在65℃下反应1.5h，然后将反应液冷却，在0-5℃下搅拌1h，抽滤，滤饼用丙酮(10mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐(10g)。
上述熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐悬浮在水中(150mL)，加入4mol/L的氢氧化钠水溶液，将pH调节至12.0，在20-25℃下搅拌1h；滴加10％的稀盐酸调节pH至2.0，在20-25℃搅拌1h；过滤，收集滤饼并用水(200mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸7.65g(液相纯度>99％)，熊去氧胆酸纯化收率95.6％。
实施例三
将10g 85％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于丙酮(60mL)和乙醇(5mL)的混合溶液中，搅拌升温至60℃，加入4-二甲氨基吡啶(3.2g)，并在65℃下反应2h，然后将反应液冷却，在0-5℃下搅拌2h，抽滤，滤饼用丙酮(10mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐(10.7g)。
上述熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐悬浮在水中(150mL)，加入2mol/L的氢氧化钠水溶液，将pH调节至12.5，在20-25℃下搅拌1h；滴加10％的稀盐酸调节pH至2.5，在20-25℃搅拌1h；过滤，收集滤饼并用水(300mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸纯品8.07g(液相纯度>99％)，熊去氧胆酸纯化收率95％。
实施例四
将10g 90％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于丙酮(60mL)和四氢呋喃(5mL)的混合溶液中，搅拌升温至60℃，加入4-二甲氨基吡啶(3.2g)，并在70℃下反应2h，然后将反应液冷却，在0-5℃下搅拌2h，抽滤，滤饼用丙酮(10mL)冲洗滤饼，真空干燥，得到熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐(11.4g)。
上述熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐悬浮在水中(100mL)，加入4mol/L的氢氧化钠水溶液，将pH调节至12.5，在20-25℃下搅拌2h；滴加30％的稀盐酸调节pH至2.0，在20-25℃搅拌2h；过滤，收集滤饼并用水(150mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸纯品8.5g(液相纯度>99％)，熊去氧胆酸纯化收率94.4％。
实施例五
将10g 90％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于丙酮(60mL)和甲醇(8mL)的混合溶液中，搅拌升温至70℃，加入4-二甲氨基吡啶(3.6g)，并在65℃下反应3h，然后将反应液冷却，在0-5℃下搅拌1h，抽滤，滤饼用丙酮(20mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐(11.3g)。
上述熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐悬浮在水中(200mL)，加入2mol/L的氢氧化钠水溶液，将pH调节至12.0，在20-25℃下搅拌2h；滴加10％的稀盐酸调节pH至2.3，在20-25℃搅拌2h；过滤，收集滤饼并用水(400mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸8.58g(液相纯度>99％)，熊去氧胆酸纯化收率95.3％。
实施例六
将10g 90％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于丙酮(70mL)和乙醇(6mL)的混合溶液中，搅拌升温至70℃，加入4-二甲氨基吡啶(3.2g)，并在60℃下反应3h，然后将反应液冷却，在0-5℃下搅拌1h，抽滤，滤饼用丙酮(15mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐(11.2g)。
上述熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐悬浮在水中(200mL)，加入4mol/L的氢氧化锂水溶液，将pH调节至12.0，在20-25℃下搅拌2h；滴加10％的稀硫酸调节pH至2.5，在20-25℃搅拌2h；过滤，收集滤饼并用水(200mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸8.53g(液相纯度>99％)，熊去氧胆酸纯化收率94.8％。
实施例七
将10g 88％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于丙酮(60mL)和乙醇(5mL)的混合溶液中，搅拌升温至55℃，加入4-二甲氨基吡啶(4.0g)，并在65℃下反应2h，然后将反应液冷却，在0-5℃下搅拌2h，抽滤，滤饼用丙酮(20mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐(11.0g)。
上述熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐悬浮在水中(150mL)，加入4mol/L的氢氧化钠水溶液，将pH调节至12.0，在20-25℃下搅拌2h；滴加50％的稀盐酸调节pH至2.0，在20-25℃搅拌2h；过滤，收集滤饼并用水(100mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸纯品8.38g(液相纯度>99％)，熊去氧胆酸纯化收率95.2％。
对比例一
专利文献CN 110669091A的操作步骤如下：
Figure BDA0003155482380000061
(1)将含有熊去氧胆酸的混合物溶解在四氢呋喃中，加入二异丙基乙基胺进行反应，制得含有熊去氧胆酸二异丙基乙基铵盐的溶液；(2)在0-5℃下冷却步骤(1)所得熊去氧胆酸二异丙基乙基铵盐的溶液，使其结晶，分离得到熊去氧胆酸二异丙基乙基铵盐；(3)将熊去氧胆酸二异丙基乙基铵盐悬浮在超纯水中，加入氢氧化钠水溶液，将pH调节至12.0-12.5；经二氯甲烷萃取后，将水相投入反应瓶中，搅拌升温，滴加稀盐酸调节pH为2.0-2.5；将浆液冷却，过滤，收集滤饼并用超纯水洗涤，干燥，得到熊去氧胆酸纯品。
本发明用专利文献CN 110669091A公开的方法纯化熊去氧胆酸的过程中，未观测到熊去氧胆酸二异丙基乙基铵盐晶体析出，未能纯化熊去氧胆酸产品。具体操作步骤如下：
将10g 90％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于四氢呋喃(100mL)中，搅拌升温至55℃，加入二异丙基乙基胺(3.3g)，并在65℃下反应1h，然后将所得反应液冷却至0-5℃，未观测到熊去氧胆酸二异丙基乙基铵盐晶体析出，未得到熊去氧胆酸的纯品。因此，用此专利文献CN 110669091A公开的方法来纯化熊去氧胆酸可行性差。
对比例二
将本发明方法中用到的碱4-二甲氨基吡啶替换成专利文献CN 110669091A中使用的二异丙基乙基胺，其他步骤同本发明实施例，结果发现熊去氧胆酸产品的纯化收率远低于本发明的实施例。具体操作步骤如下：
将10g 90％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于丙酮(60mL)和甲醇(5mL)的混合溶液中，搅拌升温至60℃，加入二异丙基乙基胺(3.64g)，并在65℃下反应2h，然后将反应液冷却，在0-5℃条件下搅拌1h，未观测到熊去氧胆酸二异丙基乙基铵盐晶体析出，最终未能纯化熊去氧胆酸产品。因此，专利文献CN 110669091A中使用的二异丙基乙基胺虽然也是一种有机碱，但不适用于本发明的纯化方法，本发明所使用的有机碱4-二甲氨基吡啶，是通过本发明人多次试验、筛选获得的，用于熊去氧胆酸粗品的纯化，效果极佳。
对比例三
将专利文献CN 110669091A中的二异丙基乙基胺替换为本发明提到的4-二甲氨基吡啶，其他步骤同专利文献CN 110669091A，未能纯化熊去氧胆酸产品。具体操作步骤如下：
将10g 90％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于四氢呋喃中(100mL)，搅拌升温至55℃，加入DMAP(3.2g)，并在65℃下反应1h，然后将反应液冷却至0-5℃，未观测到熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐晶体析出，最终未能纯化熊去氧胆酸产品。
对比例四
专利文献CN 106928306A的操作步骤如下：
Figure BDA0003155482380000071
(1)将含有熊去氧胆酸的混合物溶解在丙酮和乙醇的混合溶液中，搅拌升温，加入三乙胺进行反应，制得含有熊去氧胆酸三乙铵盐的溶液，冷却，过滤得到熊去氧胆酸三乙铵盐；(2)将熊去氧胆酸三乙铵盐加入丙酮和水，升温溶解，加入冰乙酸调节pH至4-5，加入活性炭脱色，滤除活性炭，常压蒸馏回收丙酮，冷却反应液，过滤，干燥得到熊去氧胆酸；(3)将步骤(2)所得熊去氧胆酸再用乙酸乙酯重结晶精制，过滤，干燥得到熊去氧胆酸，熊去氧胆酸的纯化收率为82.8％-85.3％。
本发明重复专利文献CN 106928306A公开的方法纯化熊去氧胆酸，结果发现熊去氧胆酸产品的纯化收率远低于本发明的实施例。具体操作步骤如下：
(1)将10g 80％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于丙酮(60mL)和乙醇(5mL)的混合溶液中，搅拌升温至46℃，维持温度1.5h，加入一倍体积的三乙胺(10mL)，升温回流1.5h，降温至14℃，搅拌反应4h，过滤，用丙酮(10mL)洗涤滤饼，干燥，得到熊去氧胆酸的三乙铵盐(8.5g)。(2)上述熊去氧胆酸的三乙铵盐悬浮在水中(150mL)，加入丙酮(100mL)和水(30mL)，搅拌升温至46℃，维持温度0.5h，待完全溶解后，滴加冰乙酸调节PH值在4.7，加入5％质量的活性炭(0.5g)脱色2h，滤除活性炭，用丙酮(7mL)和水(3mL)的混合溶液洗涤活性炭，65℃以下常压蒸馏回收丙酮至残留液体70mL左右，停止回收，缓慢降温至10-15℃，搅拌1h，过滤，用水(10mL)洗涤滤饼，干燥得到熊去氧胆酸粗品；(3)将步骤(2)所得熊去氧胆酸加入3倍体积的乙酸乙酯，升温回流2h，缓慢降温至0-5℃，搅拌4h，过滤，干燥，得到熊去氧胆酸6.6g，纯化收率为82.5％，此方法的熊去氧胆酸纯化收率低于本发明方法的实施例。
对比例五
将本发明用到的4-二甲氨基吡啶替换成专利文献CN 106928306A中使用的三乙胺，其他步骤同本发明实施例，结果发现熊去氧胆酸产品的纯化收率远低于本发明的实施例。具体操作步骤如下：
将10g 90％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于丙酮(60mL)和乙醇(5mL)的混合溶液中，搅拌升温至60℃，加入三乙胺(2.84g)，并在65℃下反应2h，然后将反应液冷却，在0-5℃条件下搅拌1h，抽滤，滤饼用丙酮(10mL)冲洗滤饼，真空干燥，得到熊去氧胆酸的三乙铵盐(9.5g)。上述熊去氧胆酸的三乙铵盐悬浮在水中(150mL)，加入2mol/L的氢氧化钠水溶液，将pH调节至12.0，在20-25℃条件下搅拌1h；滴加10％的稀盐酸调节pH至2.0，在20-25℃搅拌1h；过滤，收集滤饼并用水洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸纯品7.56g，熊去氧胆酸的纯化收率84％，此方法的熊去氧胆酸纯化收率低于本发明方法的实施例。
对比例六
将专利文献CN 106928306A中的三乙胺替换为本发明提到的4-二甲氨基吡啶，其他步骤同专利文献CN106928306A，熊去氧胆酸产品纯化效率低于本发明的实施例。具体操作步骤如下：
(1)将10g 80％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于丙酮(60mL)和乙醇(5mL)的混合溶液中，搅拌升温至46℃，维持温度1.5h，加入DMAP(8.8mL)，升温回流1.5h，降温至14℃，搅拌反应4h，过滤，用丙酮(10mL)洗涤滤饼，干燥，得到熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐(9.21g)。(2)上述熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐悬浮在水中(150mL)，加入丙酮(100mL)和水(30mL)，搅拌升温至46℃，维持温度0.5h，待完全溶解后，滴加冰乙酸调节PH值为4.7，加入5％质量的活性炭(0.5g)脱色2h，滤除活性炭，用丙酮(7mL)和水(3mL)的混合溶液洗涤活性炭，65℃以下常压蒸馏回收丙酮至残留液体70mL左右，停止回收，缓慢降温至10-15℃，搅拌1h，过滤，用水(10mL)洗涤滤饼，干燥得到熊去氧胆酸粗品；(3)将步骤(2)所得熊去氧胆酸加入3倍体积的乙酸乙酯，升温回流2h，缓慢降温至0-5℃，搅拌4h，过滤，干燥，得到熊去氧胆酸6.87g，纯化收率为85.9％，此方法的熊去氧胆酸纯化收率低于本发明方法的实施例。
对比例七
将本发明专利中的丙酮用异丙醚替代，其他步骤同本发明实施例，结果发现所得熊去氧胆酸产品的纯度远低于本发明的实施例，不能实现本发明高收率得到纯度大于99％的熊去氧胆酸。具体操作步骤如下：
将10g 90％纯度的熊去氧胆酸粗品溶解于异丙醚(60mL)和甲醇(5mL)的混合溶液中，搅拌升温至60℃，加入4-二甲氨基吡啶(3.2g)，并在65℃下反应1.5h，然后将反应液冷却，在0-5℃下搅拌1h，抽滤，滤饼用异丙醚(10mL)洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐(11.3g)。上述熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐悬浮在水中(150mL)，加入2mol/L的氢氧化钠水溶液，将pH调节至12.0，在20-25℃下搅拌1h；滴加10％的稀盐酸调节pH至2.0，在20-25℃搅拌1h；过滤，收集滤饼并用水洗涤，真空干燥，得到熊去氧胆酸8.6g，液相纯度95％，此方法得到的熊去氧胆酸产品的纯度远低于本发明的实施例。
本发明通过4-二甲氨基吡啶处理熊去氧胆酸粗品，不仅操作方法简便，且熊去氧胆酸的纯化收率最高可达97.1％，产品纯度高(液相纯度>99％)。因此，本发明描述的熊去氧胆酸纯化方法更高效，更简便，更具有工业化价值。
本发明能够实现高效纯化熊去氧胆酸的关键技术是在特定的溶剂中，选定4-二甲氨基吡啶为碱，高收率得到熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐，然后再经过酸解，高收率得到熊去氧胆酸纯品。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。

Claims (8)

1.一种熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
A.熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐的制备
将含有熊去氧胆酸的粗品溶于第一溶剂和第二溶剂的混合溶液中，搅拌升温至55-70℃，加入4-二甲氨基吡啶DMAP，升温回流反应1-4h，缓慢降温，在0-5℃条件下搅拌0.5-4h，抽滤，用第一溶剂洗涤滤饼，干燥，得到熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐；
B.熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐的水解
将所述步骤A中得到的熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐悬浮在水中，加入碱调节pH至12.0-12.5，在20-25℃条件下搅拌1-4h；滴加酸调节pH至2.0-2.5，在20-25℃搅拌1-4h；过滤，收集滤饼并用水洗涤，干燥，得到熊去氧胆酸纯品；所述纯化方法的反应过程如路线(I)所示：
Figure FDA0003155482370000011
2.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于，步骤A中，所述第一溶剂为丙酮；所述第二溶剂选自四氢呋喃、甲醇、乙醇中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于，步骤A中，所述4-二甲氨基吡啶的加入量是所述熊去氧胆酸粗品重量的0.31-0.47倍。
4.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于，所述加入的第一溶剂体积(毫升)数是熊去氧胆酸粗品重量(克)数的4-8倍；所述加入的第二溶剂体积(毫升)数是熊去氧胆酸粗品重量(克)数的0.3-1倍；所述洗涤滤饼的第一溶剂的体积(毫升)数是熊去氧胆酸粗品重量(克)数的1-3倍。
5.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于，步骤B中，所述熊去氧胆酸的4-二甲基吡啶铵盐悬浮使用的水的体积(毫升)数是熊去氧胆酸粗品重量(克)数的5-20倍。
6.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于，步骤B中，所述碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂中的一种或几种。
7.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于，步骤B中，所述酸为盐酸、硫酸、磷酸、乙酸中的一种或几种。
8.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于，步骤B中，所述碱的浓度为1-8mol/L；所述酸的体积分数为10-90％；所述洗涤滤饼水的体积(毫升)数是熊去氧粗品重量(克)数的1-5倍。
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