CN113462597A - 一种产木质素过氧化物酶的枯草芽孢杆菌和含有该枯草芽孢杆菌的菌剂及其应用 - Google Patents
一种产木质素过氧化物酶的枯草芽孢杆菌和含有该枯草芽孢杆菌的菌剂及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113462597A CN113462597A CN202110726817.7A CN202110726817A CN113462597A CN 113462597 A CN113462597 A CN 113462597A CN 202110726817 A CN202110726817 A CN 202110726817A CN 113462597 A CN113462597 A CN 113462597A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus subtilis
- preservation
- culture
- microbial inoculum
- lignin peroxidase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 title claims abstract description 94
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 title claims abstract description 92
- 108010054320 Lignin peroxidase Proteins 0.000 title claims abstract description 18
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 14
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 12
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 17
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 9
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 8
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 claims description 7
- 210000004767 rumen Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 6
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 6
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 9
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 9
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 8
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 5
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 5
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 5
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 4
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 4
- KFZNPGQYVZZSNV-UHFFFAOYSA-M azure B Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(NC)=CC=C3N=C21 KFZNPGQYVZZSNV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 3
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 3
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 3
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 208000026775 severe diarrhea Diseases 0.000 description 3
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 3
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 description 2
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 2
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 2
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 2
- 230000006750 UV protection Effects 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 2
- -1 lead acetate Chemical compound 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 2
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- WJUFSDZVCOTFON-UHFFFAOYSA-N veratraldehyde Chemical compound COC1=CC=C(C=O)C=C1OC WJUFSDZVCOTFON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- 235000014692 zinc oxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 2
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXTGDCSMTYGJND-UHFFFAOYSA-N 1-dodecylazepan-2-one Chemical compound CCCCCCCCCCCCN1CCCCCC1=O AXTGDCSMTYGJND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N Abietic-Saeure Natural products C12CCC(C(C)C)=CC2=CCC2C1(C)CCCC2(C)C(O)=O RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001556567 Acanthamoeba polyphaga mimivirus Species 0.000 description 1
- IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N Acrinol Chemical compound CC(O)C(O)=O.C1=C(N)C=CC2=C(N)C3=CC(OCC)=CC=C3N=C21 IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000001008 Dimocarpus longan Species 0.000 description 1
- 235000000235 Euphoria longan Nutrition 0.000 description 1
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 1
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N Rosin Natural products O(C/C=C/c1ccccc1)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- HDYRYUINDGQKMC-UHFFFAOYSA-M acetyloxyaluminum;dihydrate Chemical compound O.O.CC(=O)O[Al] HDYRYUINDGQKMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 229940009827 aluminum acetate Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 238000009412 basement excavation Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 229960002645 boric acid Drugs 0.000 description 1
- 229940105847 calamine Drugs 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000355 copper sulfate Drugs 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 229960000913 crospovidone Drugs 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxomagnesium;hydrate Chemical compound O.[Mg]=O.[Mg]=O.[Mg]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005485 electric heating Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 1
- 229910001448 ferrous ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910052864 hemimorphite Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229940046892 lead acetate Drugs 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- IAIWVQXQOWNYOU-FPYGCLRLSA-N nitrofural Chemical compound NC(=O)N\N=C\C1=CC=C([N+]([O-])=O)O1 IAIWVQXQOWNYOU-FPYGCLRLSA-N 0.000 description 1
- 229960000349 nitrofural Drugs 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 235000013809 polyvinylpolypyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000523 polyvinylpolypyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 238000004080 punching Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 229960004274 stearic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N trans-cinnamyl beta-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC=CC1=CC=CC=C1 KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 1
- CPYIZQLXMGRKSW-UHFFFAOYSA-N zinc;iron(3+);oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[Fe+3].[Fe+3].[Zn+2] CPYIZQLXMGRKSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/742—Spore-forming bacteria, e.g. Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, clostridium or Lactobacillus sporogenes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Virology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开一种产木质素过氧化物酶的枯草芽孢杆菌，其保藏号为GDMCC NO.61711，保藏日期为2021年6月7日，保藏地点为广东省微生物菌种保藏中心。本发明还公开一种含有该枯草芽孢杆菌的菌剂及其在抑菌尤其是抑制大肠杆菌上的应用。本发明的产木质素过氧化物酶的枯草芽孢杆菌属于一种枯草芽孢杆菌属新种，能够用于抑菌，尤其是抑制大肠杆菌，具有很好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物制剂技术领域，具体涉及一种产木质素过氧化物酶的枯草 芽孢杆菌和含有该枯草芽孢杆菌的菌剂及其应用。
背景技术
木质素过氧化物酶是含有亚铁离子的木质素降解蛋白酶，可降解木质素内 部的带羟基芳香环，减少木质素与多糖聚合物间的作用力从而提高饲草消化率。 从土壤、作物秸秆、饲料等来源中筛选高效、安全的木质纤维素降解微生物， 不仅遵循安全、绿色、高效等原则，同时为饲草的高效利用提供物质支持。白 腐真菌是木质素降解中最主要的微生物，其对木质素降解，产酶条件的优化等 方面的研究是目前生物技术应用的热点，但通常真菌对降解环境比较敏感，目 前工业化应用仍然较少。细菌因其适应性强，分泌的酶通常具有更好的热稳定 性以及更广的PH耐受范围而具有广阔的前景。枯草芽孢杆菌是一种嗜温性产芽 孢的革兰氏阳性杆状细菌，具有耐热、耐酸碱、抗紫外线、所需营养物质简单、 生长繁殖迅速、稳定性高等特点，且其能抑制许多致病菌的生长，是一种非常 理想的生防制剂微生物。木质素过氧化物酶能够酶解牧草以及饲粮种皮中的木 质素，改善饲料原料的饲用品质，促进对营养物质的吸收，同时枯草芽孢杆菌 的抑菌特性能够维持肠道菌群平衡，促进对营养物质的吸收。枯草芽孢杆菌双 重功能大大减缓禽畜胃肠道疾病的发生。挖掘枯草芽孢杆菌多重功对开发新型 微生物制剂具有重要意义。
发明内容
针对上述问题，本发明提供一种产木质素过氧化物酶的枯草芽孢杆菌，其 属于一种枯草芽孢杆菌属新种，能够用于制备抑菌的菌剂用于各种抑菌场合， 尤其是抑制大肠杆菌，具有很好的应用前景。
本发明的技术方案如下：
一种产木质素过氧化物酶的枯草芽孢杆菌，其保藏号为GDMCC NO.61711， 保藏日期为2021年6月7日，保藏地点为广东省微生物菌种保藏中心。
进一步，所述的枯草芽孢杆菌，是由健康牛瘤胃内容物分离而得。
进一步，所述的枯草芽孢杆菌的分离方法为：
采集健康牛瘤胃内容物，用接种环划线接种于培养基中，控制培养温度和 培养时间，挑取单个菌落进行革兰氏染色，镜检；重复上述划线培养、革兰氏 染色、镜检操作，至单菌落形态一致，即得。
进一步，所述的培养基为MRS固体培养基。
进一步，所述的培养温度为恒温37℃，培养时间为24h。
本发明还提供一种含有所述的枯草芽孢杆菌的菌剂，还包括医药学上可接 受的载体。
进一步，所述的菌剂，可制成丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、溶液 剂或混悬剂。
本发明还提供过一种上述菌剂在抑菌上的应用。
本发明还提供过一种上述菌剂在抑制大肠杆菌上的应用。
本发明分离出一种产木质素过氧化物酶的枯草芽孢杆菌，经鉴定判定该菌 株属于一种枯草芽孢杆菌属新种，并根据真菌命名规则将该新种命名为：Bacillus subtilis1578-1。提议的分类学名称为：Bacillus subtilis。同时将该枯草芽孢杆菌1578-1送保藏，保藏编号为GDMCC NO:61711，保藏日期为2021年6月7日，保 藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼 5楼。
本发明医药学上可接受的载体包括但不限于以下成分：
稀释剂：氧化锌、炉甘石、淀粉、糖粉、乳糖、糊精、微晶纤维素、无机 盐、糖醇类等。
粘合剂：明胶、聚乙二醇、纤维素衍生物、豚脂、凡士林、硅油、羊毛脂、 纤维素、树胶、生橡胶、铅皂、羊毛脂等。
有机溶剂：硼酸、醋酸铅、硫酸铜、硫酸锌、醋酸铝、利凡诺、呋喃西林、 新霉素、高锰酸钾、乙醚、乙醇、丙酮等。
崩解剂：淀粉、羧甲基淀粉钠、纤维素衍生物、交联聚维酮等。
润滑剂：硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、聚乙二醇、三乙醇胺、月桂醇硫 酸钠、硬脂酸、鲸蜡醇、聚乙二醇、单甘脂、司盘、吐温等等。
乳化剂：豚脂、凡士林、硅油、羊毛脂、聚乙二醇、纤维素等。
助溶剂：水、乙醇、甘油、丙二醇、液状石蜡、植物油、二甲基亚砜、氮 卓酮等。
矫味剂：蜂蜜、蔗糖、单糖、芳香剂等。
防腐剂：苯甲酸、山梨酸、甲酯、乙酯、丙酯等。
增塑剂：蓖麻油、松香等。
成膜材料：火棉、玉米垸、有机玻璃。
各剂型的制备方法如下：
1、丸剂：
将本发明的含有枯草芽孢杆菌1578-1的菌剂干燥，粉碎，过100目筛，制成 浓缩丸。
2、散剂：
将本发明的含有枯草芽孢杆菌1578-1的菌剂干燥，粉碎，得散剂；
3、片剂：
将本发明的含有枯草芽孢杆菌1578-1的菌剂干燥，粉碎，压片，即得片剂。
4、胶囊剂：
将本发明的含有枯草芽孢杆菌1578-1的菌剂干燥，粉碎，然后填装于空心胶 囊中或密封于弹性软质胶囊中，得胶囊剂；所述的构成上述空心硬质胶囊壳或 弹性软质胶囊壳的材料是明胶、甘油、水以及其它的药用材料。
5、颗粒剂：
将本发明的含有枯草芽孢杆菌1578-1的菌剂成分干燥，粉碎，与适宜的辅料 混合造粒，即得颗粒剂；所述的辅料包括稀释剂、吸收剂、润湿剂、粘合剂、 矫味剂、泡腾性辅料。
6、溶液剂或混悬剂：
将本发明的含有枯草芽孢杆菌1578-1的菌剂溶于水、植物油或者其它药用液 体溶剂，得溶液剂或混悬剂。
各剂型中，本发明枯草芽孢杆菌1578-1的含量在5～85％内。
本发明的有益效果为：
1、本发明分离出的枯草芽孢杆菌1578-1，具有枯草芽孢杆菌耐热、耐酸碱、 抗紫外线、所需营养物质简单、生长繁殖迅速、稳定性高等特点，能产木质素 过氧化物酶，将其添加到饲料中，能够酶解牧草以及饲粮种皮中的木质素，改 善饲料原料的饲用品质，促进对营养物质的吸收，且其能抑制多种致病菌尤其 是大肠杆菌的生长，枯草芽孢杆菌的这一抑菌特性能够维持肠道菌群平衡，促 进对营养物质的吸收，是一种非常理想的生防制剂微生物；分离和应用枯草芽 孢杆菌1578-1对枯草芽孢杆菌多重功对开发新型微生物制剂具有重要意义。
2、本发明的枯草芽孢杆菌1578-1能与多种医药学上可接受的载体混合制备 成菌剂，并制成多种剂型，用于抑菌，具有很好的抑菌效果。
3、本发明对分离的枯草芽孢杆菌1578-1新化合物进行了鉴定，并对其抑菌 作用进行了试验实验，以期为其抑菌原理提供理论依据。因此，本发明菌株在 对大肠杆菌的抑菌领域具有良好的应用前景。
附图说明
图1为本发明分离的枯草芽孢杆菌1578-1过氧化物酶的检测实验结果图；
图2为本发明分离的枯草芽孢杆菌1578-1与枯草芽孢杆菌1568-5(广西壮 族自治区兽医研究所细菌室分离获得)不同培养时间木质素过氧化物酶活力测 定结果图；
图3为本发明分离的枯草芽孢杆菌1578-1对大肠杆菌的抑菌实验结果图；
图4为枯草芽孢杆菌1568-5(广西壮族自治区兽医研究所细菌室分离获得) 对大肠杆菌的抑菌实验结果图。
具体实施方式
一、菌株的筛选与鉴定
1.材料与方法
1.1材料
1.1.1样品：采自广西隆安县江泉牧业有限公司牛场健康牛瘤胃内容物。
1.1.2主要试剂
细菌DNA提取试剂盒、2×ES Taq MasterMix、100bp ladder marker等均购 自北京康为世纪生物科技有限公司；胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)、胰蛋白大豆肉 汤购自北京陆桥技术股份有限公司；葡萄糖购自天津市科密欧化学试剂有限公 司，酵母浸粉，天青B购自于美国Sigma公司，木质素过氧化物酶活性检测试 剂盒购自于Solarbio公司细菌微量生化反应管购自杭州天和微生物试剂有限公 司；PCR仪、凝胶成像仪购自Biorad公司。
1.1.3培养基：MRS培养基；检测培养基：称取葡萄糖4g，酵母浸粉0.4g， 天青B0.11g，琼脂10g，加蒸馏水400mL，加热使其充分溶解，于121℃灭菌 20min。
1.1.4益生菌株：植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌 1568-5、枯草芽孢杆菌1578-2均为广西壮族自治区兽医研究所细菌室分离获得， 枯草芽孢杆菌1578-1(保藏号为GDMCC NO.61711)。
1.2方法
1.2.1菌株的分离纯化
采集广西隆安县江泉牧业有限公司牛场健康牛瘤胃内容物，用接种环划线 接种于MRS固体培养基中，置于37℃恒温箱中培养24h，挑取单个菌落进行革 兰氏染色，镜检；重复上述划线培养、革兰氏染色、镜检操作，至单菌落形态 一致。
1.2.2菌株生理生化特性及分析生物学鉴定
(1)生理生化特性鉴定
参照《伯杰式细菌鉴定手册》进行生化鉴定，选择接触酶、糖/醇利用、V-P 反应、淀粉水解、吲哚形成、明胶液化、纤维素水解、蛋白水解、硝酸盐、柠 檬酸盐和硫化氢利用试验作为初步判断。
(2)16sDNA分子的鉴定
取纯培养物1mL，按照细菌基因组DNA提取试剂盒说明书提取DNA，于 -20℃下保存，备用。合成细菌16S rDNA引物27F： AGAGTTTGATCMTGGCTCAG和1492R：GGTTACCTTGTTACGACTT，扩增 长度为1500bp。再以上述DNA为模板，F/R为引物进行PCR扩增。扩增程序 为：95℃预变性5min；然后进行30个95℃变性30s、52℃退火40s、72℃ 延伸1min循环；最后再进行72℃延伸10min。扩增结束后，取7μL的PCR 产物在1.5％的凝胶琼脂糖上进行电泳，克隆、测序分析。
(3)过氧化物酶的检测
在含天青B的培养基上分别打直径6mm的小孔，将菌液接种于含天青B 的培养基小孔内，每个菌种3次，以培养基作为阴性对照，置于37℃培养箱 恒温培养，每隔24h观察亮蓝平板中接种菌落周围是否出现变色圈，以有无变 色圈的出现判断是否有过氧化物酶的产生，有变色圈出现记为“+”，反之则为 “-”，并记录显色时间。
(4)木质素过氧化物酶活力检测
按照木质素过氧化物酶活性检测试剂盒说明书，充分混匀样品，测定310nm 处10s和310s的吸光值，记为A1和A2，ΔA＝A2-A1。酶活力测定公式：LiP活 性(nmol/min/mL)＝ΔA/(ε×d)×V反总×109÷V样÷T＝430×△A，ε：藜芦醛 摩尔消光系数：9300L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应总体积，0.2mL； V样：反应中样本体积，0.02mL。
2.结果
2.1菌株的16SrDNA鉴定结果
将测序结果与16SrRNA基因序列在GeneBank进行BLAST对比，运用 MegAlign和MEGA6.0软件进行同源性和遗传进化分析，结果表明该菌株为枯 草芽孢杆菌。
2.1过氧化物酶的检测结果
分别将枯草芽孢杆菌1578-2、枯草芽孢杆菌1568-5、植物干酪乳杆菌、植 物副干酪乳杆菌和本发明分离获得的枯草芽孢杆菌1578-1的菌液接种于含天青 B的培养基小孔内，观察菌落周围出现的变色圈，结果显示只有枯草芽孢杆菌 1578-1，1568-5出现变色圈，且枯草芽孢杆菌1578-1透明圈半径远大于枯草芽 孢杆菌1568-5；而枯草芽孢杆菌1578-2及其他菌株均未出现，如图1所示。菌 株不同培养时间木质素过氧化酶活力测定结果如图2所示。可见，本发明分离 获得的枯草芽孢杆菌1578-1能够产木质素过氧化物酶；且枯草芽孢杆菌1578-1 的过氧化物酶活力比枯草芽孢杆菌1578-2大。
二、拮抗大肠杆菌的益生菌的筛选
1.材料与方法
1.1材料与试剂
1.1.1实验器材与试剂
电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)，电子天平(satorius)，超净工 作台(江苏安泰有限公司)，离心机(Eppendorf)，高压蒸汽灭菌锅(SANYO 公司)
1.1.2益生菌株
本发明实施例1筛选分离到的枯草芽孢杆菌1578-1(保藏号为GDMCC NO.61711)、枯草芽孢杆菌1568-5(广西壮族自治区兽医研究所细菌室分离获 得)。
1.1.3致病菌株：大肠杆菌
1.1.4培养基：LB琼脂培养基，营养肉汤培养基(北京陆桥生物技术有限责 任公司)
1.2试验方法
1.2.1益生菌菌液制备
将活化的枯草芽孢杆菌1578-1、枯草芽孢杆菌1568-5分别接种于营养肉汤 培养基，在转速为150r/min，温度为37℃下摇菌24h，获得益生菌液，备用。
1.2.2抑菌实验
用无菌移液枪吸取0.1mL浓度为1×108CFU/mL的益生菌液加入含LB琼 脂培养基的平板内，超净台内静置半小时，置于37℃培养箱内培养24h，早期 定植24h后，在益生菌苔附近滴加0.1mL的大肠杆菌菌液，于37℃培养箱内培 养24h，观察不同益生菌的抑菌效果。
2.1益生菌对大肠杆菌的抑菌实验结果
经测量统计，由图3～4可知，枯草芽孢杆菌1578-1抑菌圈半径均大于6mm， 枯草芽孢杆菌1568-5并未出现抑菌圈，说明枯草芽孢杆菌1578-1具有抑菌效果。
下面通过具体实施例对本发明进行详细说明。
枯草芽孢杆菌1578-1的分离纯化：采集健康牛瘤胃内容物，用接种环划线接 种于培养基中，置于37℃恒温箱中培养24h，挑取单个菌落进行革兰氏染色，镜 检；重复上述划线培养、革兰氏染色、镜检操作，至单菌落形态一致，即得枯 草芽孢杆菌1578-1。
实施例1
将枯草芽孢杆菌1578-1与适量明胶、水、蜂蜜混合，其中，枯草芽孢杆菌 1578-1的质量含量为33％；制成含有枯草芽孢杆菌1578-1的丸剂。
实施例2
将枯草芽孢杆菌1578-1与适量填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂混合，其 中，枯草芽孢杆菌1578-1的质量含量为35％；干燥，粉碎，压片，制成含有枯 草芽孢杆菌1578-1的片剂。
实施例3
将枯草芽孢杆菌1578-1与适量淀粉、糖粉混合，其中，枯草芽孢杆菌1578-1 的质量含量为40％；造粒，然后填装于空心胶囊中，制成即得含有枯草芽孢杆 菌1578-1的胶囊剂。
实施例4
将枯草芽孢杆菌1578-1与适量稀释剂、吸收剂、润湿剂、粘合剂、矫味剂、 泡腾性混合，其中，枯草芽孢杆菌1578-1的质量含量为20％；干燥，造粒，即 得含有枯草芽孢杆菌1578-1的颗粒剂。
实施例5
将枯草芽孢杆菌1578-1溶于适量水中，其中，枯草芽孢杆菌1578-1的质量 含量为55％；制成含有枯草芽孢杆菌1578-1的溶液剂。
临床试验总结
1.基本资料
2021年1月3日，广西横县绿健达养猪场发现，新购的800头断奶仔猪中，有 较多仔猪发生腹泻，其中有133头仔猪为严重腹泻，严重腹泻仔猪表现消瘦，肚 有发胀情况，明显脱水，病程较长，甚至脱水死亡。
2.使用方法
随机选择120头严重腹泻仔猪随机分为6组，每组20头，所有仔猪均在相同 营养水平和管理条件下进行饲养管理。
其中，5组发病仔猪分别服用本发明实施例1～5所制备的丸剂、片剂、胶囊 剂、颗粒剂、溶液剂各7天，每天二次；第6组发病仔猪每次喂食时，将本发明 实施例5的溶液剂添加到饲料中混匀，添加量为饲料重量的5％，每天喂食三次。
观察时间为10天。
3.疗效判断标准
治愈：发病仔猪腹泻完全得到改善；
有效：发病仔猪腹泻明显得到改善；
无效：发病仔猪腹泻未得到改善。
4.试验数据统计处理：试验由专人负责管理，随时观察与记录仔猪的精神、 体温及粪便情况，统计仔猪的治愈、有效、无效数量及单个仔猪10天平均总增 重量，结果见表1。
表1抑菌效果统计
| 组别 | 治愈 | 有效 | 无效 | 有效率/％ | 仔猪平均总增重/kg |
| 第1组 | 18 | 1 | 1 | 95 | 2.03 |
| 第2组 | 19 | 1 | 0 | 100 | 2.24 |
| 第3组 | 19 | 0 | 1 | 95 | 1.99 |
| 第4组 | 18 | 2 | 0 | 100 | 2.15 |
| 第5组 | 20 | 0 | 0 | 100 | 2.38 |
| 第6租 | 15 | 3 | 2 | 90 | 3.11 |
由表1可知，因此，本次试验取得了较好的结果，有效率均在90％以上，本 发明制备的含有枯草芽孢杆菌1578-1能有效缓解并治疗仔猪腹泻，无副作用，是 一种较为理想的治疗动物腹泻的菌剂；所有剂型中，溶液剂剂型的效果最好； 并且，将其添加到饲料中，能够促进仔猪采食，以及具有较明显的提高仔猪增 重量的效果。
Claims (9)
1.一种产木质素过氧化物酶的枯草芽孢杆菌，其特征在于：其保藏号为GDMCCNO.61711，保藏日期为2021年6月7日，保藏地点为广东省微生物菌种保藏中心。
2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌，其特征在于：是由健康牛瘤胃内容物分离而得。
3.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌，其特征在于：其分离方法为：
采集健康牛瘤胃内容物，用接种环划线接种于培养基中，控制培养温度和培养时间，挑取单个菌落进行革兰氏染色，镜检；重复上述划线培养、革兰氏染色、镜检操作，至单菌落形态一致，即得。
4.根据权利要求3所述的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述的培养基为MRS固体培养基。
5.根据权利要求3所述的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述的培养温度为恒温37℃，培养时间为24h。
6.一种含有如权利要求1～5任一项所述的枯草芽孢杆菌的菌剂，其特征在于：还包括医药学上可接受的载体。
7.根据权利要求6所述的菌剂，其特征在于：剂型包括丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、溶液剂或混悬剂。
8.一种根据权利要求6或7所述的菌剂在抑菌上的应用。
9.一种根据权利要求6或7所述的菌剂在抑制大肠杆菌上的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110726817.7A CN113462597A (zh) | 2021-06-29 | 2021-06-29 | 一种产木质素过氧化物酶的枯草芽孢杆菌和含有该枯草芽孢杆菌的菌剂及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110726817.7A CN113462597A (zh) | 2021-06-29 | 2021-06-29 | 一种产木质素过氧化物酶的枯草芽孢杆菌和含有该枯草芽孢杆菌的菌剂及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113462597A true CN113462597A (zh) | 2021-10-01 |
Family
ID=77873779
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110726817.7A Pending CN113462597A (zh) | 2021-06-29 | 2021-06-29 | 一种产木质素过氧化物酶的枯草芽孢杆菌和含有该枯草芽孢杆菌的菌剂及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113462597A (zh) |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103321074A (zh) * | 2013-04-03 | 2013-09-25 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种用枯草芽孢杆菌工程菌降解植物的木质素的方法 |
| US20160000840A1 (en) * | 2012-12-12 | 2016-01-07 | Lesaffre Et Compagnie | Probiotic Strains for Treating and/or Preventing Diarrhea |
| CN105400729A (zh) * | 2015-07-16 | 2016-03-16 | 山东省食品发酵工业研究设计院 | 一种抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌菌株 |
| CN105602865A (zh) * | 2015-12-23 | 2016-05-25 | 河南广安生物科技股份有限公司 | 一株枯草芽孢杆菌、发酵方法、粉剂和应用 |
| CN106190933A (zh) * | 2016-09-28 | 2016-12-07 | 吉林省农业科学院 | 广谱抗致病菌的枯草芽孢杆菌及其应用 |
| CN108531660A (zh) * | 2018-05-31 | 2018-09-14 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 一种检测猪圆环病毒3型实时定量lamp引物、试剂盒及应用 |
| CN109824453A (zh) * | 2018-10-26 | 2019-05-31 | 博白县三桦石柳生态农业开发有限责任公司 | 含枯草芽孢杆菌的木薯渣有机肥及其发酵制备方法 |
| CN111748486A (zh) * | 2020-05-18 | 2020-10-09 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 一种芽孢杆菌培养基 |
| CN113957002A (zh) * | 2021-08-26 | 2022-01-21 | 中国林业科学研究院林产化学工业研究所 | 一株木质素降解芽孢杆菌及其应用 |
-
2021
- 2021-06-29 CN CN202110726817.7A patent/CN113462597A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20160000840A1 (en) * | 2012-12-12 | 2016-01-07 | Lesaffre Et Compagnie | Probiotic Strains for Treating and/or Preventing Diarrhea |
| CN103321074A (zh) * | 2013-04-03 | 2013-09-25 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种用枯草芽孢杆菌工程菌降解植物的木质素的方法 |
| CN105400729A (zh) * | 2015-07-16 | 2016-03-16 | 山东省食品发酵工业研究设计院 | 一种抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌菌株 |
| CN105602865A (zh) * | 2015-12-23 | 2016-05-25 | 河南广安生物科技股份有限公司 | 一株枯草芽孢杆菌、发酵方法、粉剂和应用 |
| CN106190933A (zh) * | 2016-09-28 | 2016-12-07 | 吉林省农业科学院 | 广谱抗致病菌的枯草芽孢杆菌及其应用 |
| CN108531660A (zh) * | 2018-05-31 | 2018-09-14 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 一种检测猪圆环病毒3型实时定量lamp引物、试剂盒及应用 |
| CN109824453A (zh) * | 2018-10-26 | 2019-05-31 | 博白县三桦石柳生态农业开发有限责任公司 | 含枯草芽孢杆菌的木薯渣有机肥及其发酵制备方法 |
| CN111748486A (zh) * | 2020-05-18 | 2020-10-09 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 一种芽孢杆菌培养基 |
| CN113957002A (zh) * | 2021-08-26 | 2022-01-21 | 中国林业科学研究院林产化学工业研究所 | 一株木质素降解芽孢杆菌及其应用 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| SELVARAJ BARATHI等: "Optimization for enhanced ecofriendly decolorization and detoxification of Reactive Blue160 textile dye by Bacillus subtilis", 《BIOTECHNOLOGY REPORTS》 * |
| 尹杨燕等: "一株鸡源植物乳杆菌的分离鉴定及体外抑菌特性研究", 《广西畜牧兽医》 * |
| 河北农业大学: "秸秆木质素高效降解菌株的筛选鉴定及菌剂生产应用", 《科技成果》 * |
| 王毅: "农林废物堆肥化中细菌对木质素的降解及产酶研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)工程科技Ⅰ辑》 * |
| 饶正华: "《饲料微生物学检测技术》", 31 March 2006 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107164269B (zh) | 一种副干酪乳杆菌、制剂及其在猪饲料中的应用 | |
| CN112011481B (zh) | 一株防治畜禽细菌性腹泻的罗伊氏乳杆菌及其应用 | |
| CN102304483A (zh) | 一株饲用屎肠球菌及其应用 | |
| CN1186440C (zh) | 预防病原性细菌引起的腹泻的新双歧杆菌 | |
| JPH09506625A (ja) | サルモネラの調節用の共生体 | |
| CN102321552B (zh) | 一株饲用丁酸梭菌及其应用 | |
| JP6663977B2 (ja) | バチルスサブチリスとバチルスリケニフォルミスを含む飼料添加剤、前記添加剤を含む飼料組成物及び前記飼料添加剤の製造方法 | |
| CN110878266B (zh) | 一株约氏乳杆菌及其用途 | |
| CN113122466B (zh) | 粪肠球菌及其应用 | |
| CN112980735B (zh) | 丁酸梭菌、菌剂及它们的应用以及菌剂的制备方法 | |
| CN116103208B (zh) | 唾液乳杆菌在抗氧化上的应用 | |
| CN113088468B (zh) | 干酪乳杆菌Ma.GLRGJ 1及其应用 | |
| CN113249255B (zh) | 一种防控禽肠炎的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| KR100287825B1 (ko) | 가축용 복합 미생물 제제 | |
| CN110878256A (zh) | 一种富含发酵代谢产物高稳定性乳酸菌的制备方法及应用 | |
| CN111575196A (zh) | 一种改善牛瘤胃健康的微生态制剂及其制备方法 | |
| CN116478873B (zh) | 一种民猪肠道中可抑制多种有害菌生长的贝莱斯芽孢杆菌 | |
| CN112226389A (zh) | 一种三黄肉雏鸡肠道益生菌群的定植培养方法及其应用 | |
| KR102003822B1 (ko) | 반려동물의 모질을 개선하는 효능을 갖는 유산균과 이를 포함하는 생균제 조성물을 유효성분으로 함유하는 모질 개선을 위한 동물 사료용 첨가제 및 동물 사료 조성물 | |
| CN114874949B (zh) | 一种丁酸梭菌、其发酵物、包含其的菌剂及动物饲料添加剂 | |
| CN114410514B (zh) | 斯密氏芽孢杆菌及其用途 | |
| CN114480206B (zh) | 一种耐高温粪肠球菌及其制备方法与应用 | |
| CN113462597A (zh) | 一种产木质素过氧化物酶的枯草芽孢杆菌和含有该枯草芽孢杆菌的菌剂及其应用 | |
| CN109170149A (zh) | 一种利用抗生素牛奶生产微生态发酵饲料的方法 | |
| CN111690573A (zh) | 一种可用于动物肠道益生菌的希氏乳杆菌及其发酵制备的酵素和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20211001 |