CN113440520A - 七叶内酯衍生物在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用 - Google Patents

七叶内酯衍生物在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用 Download PDF

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李善斌
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Abstract

本发明七叶内酯衍生物在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用，七叶内酯衍生物是指七叶内酯的C‑7位取代醚化衍生物，将含有不同的烃链以及含胺基的侧链引入母体结构的C‑7位，用以增加化合物的抗HBV活性，得到的七叶内酯衍生物表现出很好的抗HBV活性，毒性很小，具有一定的药用开发价值，可制成各种剂型的抗乙型肝炎病毒药物，具有很高的医学价值和广阔的市场前景。

Description

七叶内酯衍生物在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用
技术领域
本发明涉及药物化学领域，尤其涉及七叶内酯衍生物在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用。
背景技术
乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染引发的以肝脏病变为主的一种疾病，这是一个全球性的公共卫生问题。乙肝病毒的感染无论是潜伏期，急慢性期都有着传染性，且慢性患者与病毒携带者难以发现，这对于乙肝的防治构成了重大的挑战[1]。中国是乙型肝炎最为严重的国家，该疾病所导致死亡的人数甚至超过了艾滋病，结核等疾病致死人数的总和。因此，乙肝的防控形势十分严峻。
目前，治疗乙肝的主要药物有干扰素类和核苷类药物，但这些药物在治疗乙肝方面都各自有着不同的缺陷。用于治疗乙肝的干扰素主要有α型，β型和γ型三种，干扰素并不会直接对乙肝病毒产生抑制作用，而是通过与细胞表面的相应受体结合，诱导细胞内的蛋白激酶 PKR，MX蛋白等具有抗病毒作用的蛋白，从而抑制病毒蛋白质的合成以及病毒DNA的复制和转录以达到抗病毒的作用。但同时，干扰素类药物有着药物响应率较低，会产生较大的不良反应等缺陷。常用的核苷类药物有拉米夫定，替比夫定，恩替卡韦等，该类化合物是一种核酸的类似物，有着与核苷酸相类似的结构，因此可以进入核酸复制或转录的过程中，能够抑制DNA聚合酶发挥作用，使DNA链的延长或复制过程终止，从而抑制病毒的核酸复制进而达到抗病毒的作用。不同的核苷类药物能作为不同的核苷类似物，如拉米夫定为胞嘧啶类似物，恩替卡韦是鸟嘌呤类似物等。而部分核苷类药物在实用过程中易产生耐药性，具有一定的不良反应。因此，寻找并研究更加高效低毒的乙型肝炎治疗药物有着迫切的需求。
到目前为止，从天然植物中已经提取发现了众多具有价值的化合物，也成为了发现药物先导化合物的重要来源。其中，香豆素类化合物是一类植物中常见的天然化合物，并有着广泛的应用。七叶内酯是一种简单香豆素衍生物，其结构为6,7-二羟基-2-H-1-苯并吡喃-2-酮，其植物来源主要是七叶树科植物七叶树Aesculushippocastanumlinn树皮[9]，菊科植物菊苣 CichoriumintybusL.以及茜草科植物Hymenodictyonexcelsum等，在国内也被称为秦皮乙素。目前，七叶内酯已经被发现具有多种生物活性，如有研究发现七叶内酯能够抑制促炎症因子的释放从而对利血平诱导的纤维肌痛有缓解作用，具有抗菌活性；七叶内酯及其衍生物与淋病奈瑟氏菌中的谷氨酸消旋酶位点有着较好的亲和力，结合后能够抑制细菌的增殖，有着明显的抗菌作用；七叶内酯对病毒也有抑制作用，有研究发现，其对小核酸病毒，疱疹病毒等有着较好的抑制活性；七叶内酯也具有抗氧化和抗炎作用，在大鼠结肠炎模型中，能够发挥治疗作用，减少了大鼠腹泻的发生频率。
前期的研究中，课题组从江南星蕨中分离得到了香豆素类化合物七叶内酯，并在之后的活性实验中发现，该化合物具有抗HBV作用。但同时，七叶内酯在发挥抗HBV作用时存在缺陷，在以HepG2.2.15细胞为模型的体外试验中，七叶内酯仅在较低浓度时才能发挥较好的活性作用，而当浓度有一定增加后，会对细胞有较大的杀伤作用，因此有效的剂量范围较小。我们计划对七叶内酯进行一系列的结构改造，希望能够降低其对细胞的杀伤作用，并增强其抗HBV活性。
胺基是一类应用广泛的基团，在衍生物的合成中较为常见，有着较为广泛的活性，在许多合成研究中都有所应用。我们设计合成了一系列的七叶内酯衍生物，将含有不同的烃链以及含胺基的侧链引入母体结构的C-7位，希望可以增加化合物的抗HBV活性，为今后的进一步研究提供基础。
发明内容
本发明的目的在于：针对上述存在的问题，本发明提供毒性很小、表现出很好的抗HBV 活性的七叶内酯衍生物在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用。
本发明是通过以下技术方案实现的：
根据权利要求1所述的七叶内酯衍生物在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用，所述七叶内酯衍生物是指七叶内酯的C-7位取代醚化衍生物；所述七叶内酯衍生物的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000021
Figure RE-GDA0003117335730000031
本发明还提供了制备所述的七叶内酯衍生物的方法，包括以下步骤：
(1)将七叶内酯溶于乙腈，加入三乙胺，并搅拌反应，得到反应溶液；
(2)向反应溶液中加入溴乙烷或溴丙烷，搅拌反应，经TLC监测反应进程，反应完成后，将反应液减压浓缩除去溶剂，得到粗产物；
(3)将粗产物通过硅胶层析柱分离，得到化合物a1或化合物a2。
进一步地，所述步骤(2)中，向反应溶液中加入溴乙烷或溴丙烷，在63～67℃下搅拌反应5.5～6.5h，经TLC监测反应进程，反应完成后，将反应液减压浓缩除去溶剂，得到粗产物。
本发明还提供了制备所述的七叶内酯衍生物的方法，包括以下步骤：
(1)将中间产物b1、b2、b4溶于乙腈，加入三乙胺、吗啉，并搅拌反应，经TLC监测反应进程，反应完成后，得到反应液；其中，中间产物b1的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000032
b2的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000033
b4的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000041
(2)将反应液水洗，并加入二氯甲烷萃取，将二氯甲烷层减压浓缩后得到粗产物；
(3)将粗产物通过硅胶层析柱分离，得到化合物c1、c2、c3。
进一步地，所述步骤(1)中，将中间产物b1、b2、b4溶于乙腈，加入三乙胺、吗啉，并搅拌反应7.5～8.5h，经TLC监测反应进程，反应完成后，得到反应液。
本发明还提供了制备所述的七叶内酯衍生物的方法，包括以下步骤：
(1)将中间产物b1、b2、b3或b4溶于乙腈，加入无水碳酸钾、碘化钾，再加入咪唑或2-甲基咪唑，并搅拌反应，经TLC监测反应进程，反应完成后，得到反应液；其中中间产物 b1的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000042
b2的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000043
b3的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000044
b4的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000045
(2)将反应液水洗，并加入二氯甲烷萃取，将二氯甲烷层减压浓缩后得到粗产物；
(3)将粗产物通过硅胶层析柱分离，得到化合物c4、c5、c6或c7。
进一步地，所述步骤(1)中将中间产物b1、b2、b3或b4溶于乙腈，加入无水碳酸钾、碘化钾，再加入咪唑或2-甲基咪唑，并在62～68℃的条件下搅拌反应7.5～8.5h，经TLC监测反应进程，反应完成后，得到反应液。
进一步地，所述七叶内酯衍生物能抑制乙型肝炎病毒DNA的复制。
进一步地，所述七叶内酯衍生物能抑制乙型肝炎病毒HBsAg和HBeAg的分泌。
进一步地，所述七叶内酯衍生物在制备治疗和或预防由乙型肝炎病毒感染引起的相关疾病的药物中的应用；具体地，所述七叶内酯衍生物在制备治疗和或预防由乙型肝炎病毒感染引起的急慢性肝炎的药物中的应用。
本发明七叶内酯衍生物在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用，七叶内酯衍生物是指七叶内酯的C-7位取代醚化衍生物，将含有不同的烃链以及含胺基的侧链引入母体结构的C-7位，用以增加化合物的抗HBV活性，得到的七叶内酯衍生物表现出很好的抗HBV活性，毒性很小，具有一定的药用开发价值，可制成各种剂型的抗乙型肝炎病毒药物，具有很高的医学价值和广阔的市场前景。
附图说明：
图1为本发明实施例1的合成路线图；
图2为本发明实施例2的合成路线图；
图3为本发明制备化合物b1的合成路线图；
图4为本发明制备化合物b2的合成路线图；
图5为本发明制备化合物b3的合成路线图；
图6为本发明制备化合物b4的合成路线图；
图7为本发明实施例3的合成路线图；
图8为本发明实施例4的合成路线图；
图9为本发明实施例5的合成路线图；
图10为本发明实施例6的合成路线图；
图11为本发明实施例7的合成路线图；
图12为本发明实施例8的合成路线图；
图13为本发明实施例9的合成路线图。
具体实施方式
本说明书(包括任何附加权利要求、摘要)中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
实施例1：制备化合物a1
称取0.4g(2.2mmol)七叶内酯，将其溶于10ml乙腈。随后加入0.66ml三乙胺(4.4mmol)并搅拌10分钟,再分别向反应溶液中加入0.33ml的溴乙烷，在65℃下搅拌反应6小时，经TLC监测反应进程，在反应完成后，将反应液减压浓缩除去溶剂，得到粗产物。将粗产物通过硅胶层析柱分离，得到化合物a1，化合物a1为白色粉末，产率35％。
m.p.:122-128℃,1H NMR(400MHz CDCl3)δ7.52(d,J＝9.5Hz,1H),6.89(s,1H),6.73(s, 1H),6.21(d,J＝9.5Hz,1H),4.11(q,J＝7.0Hz,2H),1.44(t,J＝7.0Hz,3H).13CNMR(101 MHz,CDCl3)δ160.48,148.35,148.20,142.40,141.72,112.76,111.07,109.92,98.85,64.20, 13.51.HRIMS(m/z):205.0506[M-H]-.
制备得到的化合物a1的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000061
实施例2：制备化合物a2
称取0.4g(2.2mmol)七叶内酯，将其溶于10ml乙腈。随后加入0.66ml三乙胺(4.4mmol) 并搅拌10分钟，再分别向反应溶液中加入0.40ml的溴丙烷，在65℃下搅拌反应6小时，经 TLC监测反应进程，在反应完成后，将反应液减压浓缩除去溶剂，得到粗产物。将粗产物通过硅胶层析柱分离，得到化合物a2，化合物a2为白色粉末，产率26％。
mp:110-112℃,1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(d,J＝9.5Hz,1H),6.80(s,1H),6.64(s, 1H),6.11(d,J＝9.5Hz,1H),3.91(t,J＝6.6Hz,2H),1.80–1.68(m,2H),0.91(t,J＝7.4Hz,3H). 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ161.53,149.51,149.24,143.44,142.79,113.76,112.08,110.94, 99.94,71.02,22.23,10.41.HRIMS(m/z):219.0662[M-H]-.
制备得到的化合物a2的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000062
中间产物b1-b4的合成：
1.1制备化合物b1
称取0.4g(2.2mmol)七叶内酯，将其溶于10ml乙腈。随后加入0.66ml三乙胺(4.4mmol)并搅拌10分钟,再向反应溶液中加入0.35ml的1,3-二溴丙烷，在65℃下搅拌反应 6小时，经TLC监测反应进程，在反应完成后，将反应液减压浓缩除去溶剂，得到粗产物。将粗产物通过硅胶层析柱分离，得到化合物b1，化合物b1为白色粉末，产率23％。
m.p.:157-160℃1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.93(d,J＝9.5Hz,1H),7.34(s, 1H),7.01(s,1H),6.36(d,J＝9.5Hz,1H),4.32–4.21(m,2H),4.17(t,J＝5.7 Hz,2H),2.24–2.07(m,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ160.70,154.97,150.24, 148.24,144.16,120.33,114.75,114.56,109.14,71.29,71.14,31.42.HRIMS(m/z): 298.9746[M-H]-.
制备得到的化合物b1的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000071
1.2制备化合物b2
称取0.4g(2.2mmol)七叶内酯，将其溶于10ml乙腈。随后加入0.66ml三乙胺(4.4mmol)并搅拌10分钟,再向反应溶液中加入0.53ml的1,4-二溴丁烷，在65℃下搅拌反应6 小时，经TLC监测反应进程，在反应完成后，将反应液减压浓缩除去溶剂，得到粗产物。将粗产物通过硅胶层析柱分离，得到化合物b2，化合物b2为白色粉末，产率44％。
m.p.:117-121℃1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.53(d,J＝9.5Hz,1H),6.91(s,1H),6.74(s,1H),6.22(d,J＝9.5Hz,1H),4.09(t,J＝5.7Hz,2H),3.44(t,J＝6.1 Hz,2H),2.13–1.89(m,4H),1.20(d,J＝12.9Hz,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3) δ165.45,159.72,154.99,152.99,148.9,125.09,119.50,119.31,113.89,76.04, 75.90,36.17.HRIMS(m/z):312.9903[M-H]-.
制备得到的化合物b2的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000072
1.3制备化合物b3
称取0.4g(2.2mmol)七叶内酯，将其溶于10ml乙腈。随后加入0.66ml三乙胺(4.4mmol)并搅拌10分钟,再向反应溶液中加入0.63ml的1,5-二溴戊烷，在65℃下搅拌反应6 小时，经TLC监测反应进程，在反应完成后，将反应液减压浓缩除去溶剂，得到粗产物。将粗产物通过硅胶层析柱分离，得到化合物b3，化合物b3为白色粉末，产率55％。
m.p.114-119℃1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.53(d,J＝9.5Hz,1H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.22(d,J＝9.5Hz,1H),4.06(t,J＝6.4Hz,2H),3.39(t,J＝6.6 Hz,2H),1.93–1.80(m,4H),1.65–1.56(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ161.46, 149.31,149.20,143.39,142.72,113.91,112.22,111.10,99.94,69.14,33.35,32.18, 28.03,24.55.HRIMS(m/z):327.0057[M-H]-.
制备得到的化合物b3的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000081
1.4制备化合物b4
称取0.4g(2.2mmol)七叶内酯，将其溶于10ml乙腈。随后加入0.66ml三乙胺(4.4mmol)并搅拌10分钟,再向反应溶液中加入0.72ml的1,6-二溴己烷(4.4mmol)，在65℃下搅拌反应6小时，经TLC监测反应进程，在反应完成后，将反应液减压浓缩除去溶剂，得到粗产物。将粗产物通过硅胶层析柱分离，得到化合物b4，化合物b4为白色粉末，产率59％。 mp107-114℃1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.53(d,J＝9.5Hz,1H),6.90(s,1H),6.74 (s,1H),6.21(d,J＝9.5Hz,1H),4.05(t,J＝6.5Hz,2H),3.37(t,J＝6.7Hz, 2H),1.97–1.73(m,4H),1.53–1.40(m,4H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ160.42, 148.33,148.19,142.35,141.68,112.84,111.13,109.98,98.91,68.31,32.60,31.48, 27.69,26.81,24.15.HRIMS(m/z):341.0215[M-H]-.
制备得到的化合物b4的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000082
实施例3：制备化合物c1
称取0.6mmol的中间产物b1,溶于10ml乙腈，再加入0.17ml的三乙胺(1.2mmol) 与0.10ml的吗啉(1.2mmol)在室温下搅拌反应8h,经TLC监测反应进程，在反应完成后，将反应液水洗并加入100ml二氯甲烷萃取两次，将二氯甲烷层减压浓缩后得到粗产物，通过硅胶层析柱分离得到化合物c1，化合物c1为棕色粉末，产率46％。
m.p.:170-171℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.59(d,J＝9.5Hz,1H),6.94(d, J＝7.6Hz,2H),6.29(d,J＝9.5Hz,1H),4.08(t,J＝5.3Hz,2H),3.79(t,J＝ 4.6Hz,4H),2.64(t,J＝6.0Hz,2H),2.58(s,4H),2.08–1.97(m,2H).13C NMR(101 MHz,CDCl3)δ161.45,150.15,147.98,146.57,143.40,114.82,114.69,112.83,106.86, 72.42,66.03,57.09,53.70,25.12.HRIMS(m/z):304.1194[M-H]-.
制备得到的化合物c1的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000091
实施例4：制备化合物c2
称取0.6mmol的中间产物b2,溶于10ml乙腈，再加入0.17ml的三乙胺(1.2mmol) 与0.10ml的吗啉(1.2mmol)在室温下搅拌反应8h,经TLC监测反应进程，在反应完成后，将反应液水洗并加入100ml二氯甲烷萃取两次，将二氯甲烷层减压浓缩后得到粗产物，通过硅胶层析柱分离得到化合物c2，化合物c2为棕色粉末，产率53％。
m.p.:92-95℃.1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.79(d,J＝9.5Hz,1H),6.94(d,J＝14.3Hz, 2H),6.22(d,J＝9.5Hz,1H),4.14(t,J＝6.3Hz,2H),3.75–3.68(m,4H),2.54(s,4H),2.49(d,J＝ 7.7Hz,2H),1.92–1.84(m,2H),1.80–1.69(m,2H).C NMR(101MHz,MeOD)δ162.56, 151.34,148.85,144.43,144.00,112.07,111.98,111.56,100.00,68.71,66.04,58.14,53.21,29.41, 22.11.HRIMS(m/z):318.1352[M-H]-.
制备得到的化合物c2的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000092
实施例5：制备化合物c3
称取0.6mmol的中间产物b4,溶于10ml乙腈，再加入0.17ml的三乙胺(1.2mmol) 与0.10ml的吗啉(1.2mmol)在室温下搅拌反应8h,经TLC监测反应进程，在反应完成后，将反应液水洗并加入100ml二氯甲烷萃取两次，将二氯甲烷层减压浓缩后得到粗产物，通过硅胶层析柱分离得到化合物c3，化合物c3为棕色粉末，产率51％。
m.p.:41-43℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.57(d,J＝9.5Hz,1H,6.93(s,1H),6.77(s, 1H),6.25(d,J＝9.5Hz,1H),4.07(t,J＝6.5Hz,2H),3.72–3.69(m,4H),2.44(s,4H),2.37–2.30 (m,2H),1.88–1.80(m,2H),1.50(dt,J＝16.5,8.2Hz,4H),1.40–1.35(m,2H).13C NMR(101 MHz,CDCl3)δ161.60,149.80,149.18,143.49,142.90,113.64 112.07,111.29,99.98,69.44, 66.78,58.86,53.69,28.71,27.11,26.18,25.82.HRIMS(m/z):346.1663[M-H]-.
制备得到的化合物c3的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000101
实施例6：制备化合物c4
称取0.6mmol的中间产物b1,溶于10ml乙腈，再加入166mg的无水碳酸钾(1.2mmol)，83mg的咪唑(1.2mmol)与50mg的碘化钾(0.3mmol)在65℃的条件下搅拌反应 8h,经TLC监测反应进程，在反应完成后，将反应液水洗并加入100ml二氯甲烷萃取两次，将二氯甲烷层减压浓缩后得到粗产物，通过硅胶层析柱分离得到化合物c4，化合物c4为棕色粉末，产率32％。
m.p.:100-102℃.1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.86(s,1H),7.82(d,J＝9.5Hz,1H),7.25 (s,1H),7.06(s,1H),7.01(s,1H),6.93(s,1H),6.25(d,J＝9.5Hz,1H),4.35(t,J＝7.1Hz,2H), 4.08(t,J＝5.8Hz,2H),2.35(dt,J＝12.8,6.3Hz,2H).13C NMR(101MHz,MeOD)δ162.47, 150.94,148.79,144.34,143.93,126.60,119.73,119.69,112.41,112.35,111.78,100.27,65.45, 43.61,29.92.HRIMS(m/z):285.0883[M-H]-.
制备得到的化合物c4的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000102
实施例7：制备化合物c5
称取0.6mmol的中间产物b2,溶于10ml乙腈，再加入166mg的无水碳酸钾(1.2mmol)，98mg的2-甲基咪唑(1.2mmol)与50mg的碘化钾(0.3mmol)在65℃的条件下搅拌反应8h,经TLC监测反应进程，在反应完成后，将反应液水洗并加入100ml二氯甲烷萃取两次，将二氯甲烷层减压浓缩后得到粗产物，通过硅胶层析柱分离得到化合物c5，化合物 c5为棕色粉末，产率41％。
m.p.:70-74℃.1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.81(d,J＝9.4Hz,1H),7.13(d,J＝1.4Hz,1H),6.98(d,J＝2.7Hz,2H),6.90(d,J＝1.4Hz,1H),6.24(d,J＝9.4Hz,1H),4.15(t,J＝6.0Hz, 2H),4.06(t,J＝7.2Hz,2H),1.26(s,3H),0.89(t,J＝6.8Hz,4H2).13C NMR(101MHz,MeOD) δ162.60,151.29,148.86,144.44,144.00,124.16,122.91,119.81,112.16,112.09,111.60,100.15, 78.07,68.47,29.35,13.05.HRIMS(m/z):313.1196[M-H]-.
制备得到的化合物c5的结构式为：
Figure RE-GDA0003117335730000111
实施例8：化合物c6的合成
称取0.6mmol的中间产物b3,溶于10ml乙腈，再加入166mg的无水碳酸钾(1.2mmol)，98mg的2-甲基咪唑(1.2mmol)与50mg的碘化钾(0.3mmol)在65℃的条件下搅拌反应8h,经TLC监测反应进程，在反应完成后，将反应液水洗并加入100ml二氯甲烷萃取两次，将二氯甲烷层减压浓缩后得到粗产物，通过硅胶层析柱分离得到化合物c6，化合物 c6为棕色粉末，产率46％。
m.p.:62-65℃.1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.80(d,J＝9.4Hz,1H),7.05(d,J＝1.5Hz,1H),6.97(s,1H),6.93(s,1H),6.85(d,J＝1.5Hz,1H),6.23(d,J＝9.4Hz,1H),4.11(t,J＝6.3Hz, 2H),3.97(t,J＝7.2Hz,2H),1.40(s,2H),1.26(s,3H),0.89(t,J＝6.8Hz,4H).13CNMR(101 MHz,MeOD)δ163.95,152.70,150.19,145.78,145.32,125.86,124.23,120.93,114.63,113.38, 112.84,101.35,70.05,47.00,30.68,24.07,23.66,14.38.HRIMS(m/z):327.1352[M-H]-.
制备得到的化合物c6的结构式如下：
Figure RE-GDA0003117335730000112
实施例9：化合物c7的合成
称取0.6mmol的中间产物b4,溶于10ml乙腈，再加入166mg的无水碳酸钾(1.2mmol)，98mg的2-甲基咪唑(1.2mmol)与50mg的碘化钾(0.3mmol)在65℃的条件下搅拌反应8h,经TLC监测反应进程，在反应完成后，将反应液水洗并加入100ml二氯甲烷萃取两次，将二氯甲烷层减压浓缩后得到粗产物，通过硅胶层析柱分离得到化合物c7，化合物c7 为黄色粉末，产率57％。
mp:62-65℃.1H NMR(600MHz,Pyr)δ7.72(d,J＝9.4Hz,1H),7.32(s,1H),7.26(d,J＝1.0Hz, 1H),7.09(d,J＝1.0Hz,1H),7.05(s,1H),6.38(d,J＝9.4Hz,1H),4.02(t,J＝6.4Hz,2H),3.89(q, J＝7.0Hz,2H),3.69(t,J＝7.2Hz,2H),2.42(s,3H),1.65–1.58(m,2H),1.47(dd,J＝15.1,7.5 Hz,2H),1.10(dt,J＝15.4,7.9Hz,2H).13C NMR(151MHz,Pyr)δ162.47,153.04,146.21, 145.27,144.92,127.47,125.02,120.72,114.32,113.95,113.41,101.86,70.16,58.29,50.59,46.85, 27.31,20.13,13.65.HRIMS(m/z):341.1507[M-H]-.
制备得到的化合物c7的结构式如下：
Figure RE-GDA0003117335730000121
以拉米夫定为阳性对照药物，对上述实施例1-9制备得到的七叶内酯衍生物a1、a2，c1-c7 进行抗HBV活性实验，判断制备得到的几种化合物的抗HBV作用，实验步骤如下：
1材料与方法
1.1实验材料
HepG2.2.15细胞株：由桂林医学院苏何玲教授赠送，由课题组自行培养传代，并通过 G418进行活性筛选。
1.2实验试剂
DMEM高糖培养液：USA,Gibco
胎牛血清：Austria,PAA
0.25％胰蛋白酶：USA,Sigma
PBS缓冲液：北京索来宝科技有限公司
MTT：USA,Sigma
G418：USA,Sigma
乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂盒和乙型肝炎病毒e抗原检测试剂盒：中国上海科华生物工程股份有限公司。
乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(FQ-PCR)：中山大学达安基因股份有限公司。
DMSO：西陇科学股份有限公司
1.3实验仪器
ZHJH-C1112C超净工作台：上海智成分析仪器制造有限公司
MCO-15AC型二氧化碳细胞培养箱：日本三洋公司
倒置显微镜XSBIA：中国上海蔡康光学仪器有限公司
MVExc47/11-6液氮存贮罐：USA,MVE
Tecan Infinite F200/M200酶标仪：Swiss,TECAN
十万分之一电子天平：梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司
微量移液器：Germany,Eppendorf
高压蒸汽灭菌器：Japan,Kagoshima seisakusho
TDL-5-A型低速离心机：上海安亭科学仪器厂
Mili Q超纯水仪：USA,Milipore
BDC-290W型低温冰箱：青岛海尔股份有限公司
1.4实验试剂的配制
1.4.1完全培养基的配制
在无菌环境下将DMEM高糖培养液分装于50mL的试剂瓶中，加入5mL的胎牛血清(FBS)，配制成含有10％胎牛血清的完全培养基，并置于4℃下保存。
1.4.2PBS缓冲溶液的配制
取一包PBS粉末加入1L烧杯，倒入800mL的超纯水，通过磁力搅拌器将粉末搅拌至完全溶解后加入超纯水定容至1L。将溶液分装并高压灭菌，灭菌冷却后保存于4℃冰箱备用。
1.4.3细胞冻存液的配制
将DMEM高糖培养液，胎牛血清与DMSO按照9：3：1混合均匀，分装于离心管中，并置于4℃下保存备用。
1.4.4 G418的配制
称取G418粉末190mg，将其溶于5mL的PBS溶液中，并通过0.22μm的微孔滤膜过滤。配制完成后分装于离心管，并置于4℃下保存。
1.4.5 MTT的配制
取小支MTT粉末(250mg)，溶于50mL PBS缓冲液中，待完全溶解后用0.22μm的微孔滤膜过滤，分装于Ep管中，于-20℃冰箱避光保存备用。
1.4.6化合物样品的配制
准确称取各样品3mg，将其溶解于DMSO，并通过0.22μm的微孔滤膜过滤后，用含有10％胎牛血清的DMEM高糖培养液将样品溶液稀释至640、320、160、80、40、20μM六个不同浓度，于-20℃冰箱保存备用。
1.4.7阳性药物拉米夫定的配制
准确称取拉米夫定3mg，将其溶解于DMSO，并通过0.22μm的微孔滤膜过滤后，用含有10％胎牛血清的DMEM高糖培养基将样品溶液稀释至1000μM作为母液，并保存于4℃冰箱中备用，在加药前将其稀释至所需浓度。
1.5实验方法
1.5.1 HepG2.2.15细胞的培养
(1)细胞复苏：取出冻有HepG2.2.15细胞的冻存管，迅速在37℃水浴中轻轻晃动冻存管使细胞液溶解，随后迅速在超净台内快速将细胞转移至备好含完全培养基的离心管中，1000rpm 离心5分钟使细胞沉淀，弃上清后加入4mL完全培养基重悬细胞，随后将细胞液接种到培养瓶中，置37℃、5％CO2细胞培养箱中培养，于次日换液。
(2)细胞传代：待细胞生长至80％-90％时，便进行细胞传代，步骤为：用PBS缓冲液清晰细胞2次后，加入2mL 0.25％胰酶消化3分钟，在显微镜下观察细胞变圆，且有少许细胞漂浮时，加入2mL完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其完全悬浮，将悬浮液转移到离心管中，1000rmp离心5分钟，弃上清，加1mL培养基重悬细胞，根据细胞生长数量取少量细胞液接种到细胞培养瓶中。
(3)细胞冻存：待细胞生长至90％后，消化离心，弃上清，用冻存液将细胞重悬，分装于冻存管中，在管壁上标记细胞名称、日期和姓名放置冻存盒中，-20℃放置过夜后，转移至液氮罐中冻存。
1.5.2七叶内酯衍生物的细胞毒性实验
通过MTT法检测衍生物的细胞毒性[20-22]。实验方法为：①取对数生长期的细胞消化后，将HepG2.2.15细胞制备成1×104个/mL的悬液，以每孔200μL接种于96孔板中，使每孔细胞数为2×103个，置于37℃、5％CO2培养箱中培养。②24h后观察细胞状态良好，弃培养液后每孔加入200μl提前配制好的含药培养基(药物浓度为640、320、160、80、40、20μM)，不同浓度的药物各设置3个复孔，使用等量的培养液作为阴性对照，无细胞孔中加入，拉米夫定作为阳性对照，连续培养9天。每3天更换一次含药培养基，共给药3次。③第9天弃上清，每孔加入完全培养基80μL与20μL 5mg/mL的MTT溶液，孵育培养4h后弃去培养液并加入150μLDMSO震摇10min，使用酶标仪在490nm波长处测定吸光度值(OD)。④计算不同浓度的样品对HepG2.2.15细胞的抑制率，抑制率＝1-[(实验组OD值-空白组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)]×100％。采用Reed-Muench法计算半数毒性浓度(CC50)。
1.5.3 ELISA试剂盒检测HepG2.2.15细胞HBsAg与HBeAg的表达
1.5.3.1细胞上清液的收集
用与细胞毒性实验相同的方法接种96孔板并加入含药培养基培养。9天后，收集每孔的细胞上清液至新的96孔板中，保存于-20℃冰箱中待测。
1.5.3.2 ELISA试剂盒检测上清液中HBsAg和HBeAg的表达
HBsAg抑制率的检测
(1)实验准备：将HBsAg检测试剂盒和待测上清液放置室温平衡30min，将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释25倍配制工作洗涤液。
(2)加样：加入75μl待测样本和阴性、阳性对照物于反应孔中并预留空白对照孔，密封后置37℃孵育60min。
(3)加酶结合物：孵育完成后在各孔中分别加入50μl的酶结合物。震荡10s，继续密封反应板并置37℃孵育30min，
(4)洗板：孵育完成后弃孔内液体，将洗涤液注满每孔，静止30秒，甩干，并在干净的吸水纸上拍干，重复5次。
(5)加显色剂：洗涤结束后，立即在每孔中加入显色剂A，B各50μl并震摇10秒，密封后置37℃孵育箱中孵育30min，
(6)加终止液：每孔加50μl终止液并震摇5秒，
(7)酶标仪读数：于酶标仪450nm测量各孔OD值。
HBeAg抑制率的检测
(1)实验准备：将HBeAg试剂盒与待测上清液置室温平衡30min，将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释25倍配制工作洗涤液。
(2)加样：加入50μl待测样本和阴性、阳性对照物于反应孔中并预留空白对照孔。
(3)加酶结合物：在各孔中加入50μl的酶结合物(除空白孔)并震摇10秒，密封后放置37℃孵育30min，
(4)洗板：孵育后弃去孔内液体，每孔加入洗涤液静止5秒后甩干并在干净的吸水纸上拍干，重复5次。
(5)加显色剂：洗涤结束后，立即在每孔中加入显色剂A，B各50μl，震摇10秒后于37℃孵育15min，
(6)加终止液：在所有孔中加入50μl的终止液并震摇5秒，
(7)酶标仪读数：于酶标仪450nm测量各孔OD值。
抗原抑制率(％)＝[(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值]×100。并用Reed-Muench法计算半数抑制浓度(IC50)。
1.6化合物活性评价
通过选择指数(SI)来评价药效，选择指数(SI)＝CC50/IC50，SI>2表明化合物有效低毒，1<SI ≤2表明化合物低效低毒，SI≤1则表明化合物具有毒性作用。
1.7统计学处理
所有实验均重复3次，数据通过SPSS18.0统计软件进行统计学分析。
实验结果如下表1所示
表1：七叶内酯衍生物体外抑制HepG2.2.15细胞HbsAg和HbeAg的作用(n＝3,
Figure RE-GDA0003117335730000162
)
Table 1:The esculetin derivatives inhibition of HbsAg and HbeAg ofHepG2.2.15 cells in vitro
Figure RE-GDA0003117335730000161
注:HbsAg：乙肝表面抗原；HbeAg：乙型肝炎病毒e抗原；IC50：半数抑制浓度；CC50：半数细胞毒性浓度；SI：选择指数；3TC：拉米夫定，阳性对照；“─”:没有活性。
由上述测试结果可知，C-7位醚化衍生物a1,a2对HBsAg和HBeAg的IC50分别为254.17μM，220.00μM和198.27，284.14μM。在胺基侧链的衍生物中，含有吗啉基团的衍生物对HBeAg抗原的分泌有明显的抑制作用，化合物c1对HBeAg分泌的抑制作用最为突出 (IC50＝25.87μM,SI＝8.03)；含有咪唑基团的衍生物c4对HBsAg有一定的抑制作用(IC50＝185.10μM,SI＝2.01)；含有2-甲基咪唑基团的衍生物对HBsAg的分泌有明显的抑制活性，其中化合物c7对HBsAg的抑制作用最为明显(IC50＝21.37μM,SI＝20.32)。同时从MTT实验的结果(即表1中的CC50)来看，a1，a2，c1，c2，c4，c5和c7具有抗HBV活性，且其细胞毒性相较于七叶内酯有明显的减小，其半数细胞毒性浓度(CC50)小于原料七叶内酯。而对单种抗原分泌有着最佳作用的化合物c1,c7的选择指数(SI)分别为8.03与20.32。实验表明该部分化合物具有较好的活性作用与较低的毒性，具有药用开发价值，值得进一步的研究。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.七叶内酯衍生物在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用，其特征在于，所述七叶内酯衍生物是指七叶内酯的C-7位取代醚化衍生物；所述七叶内酯衍生物的结构式为：
Figure FDA0003015922250000011
2.制备权利要求1所述的七叶内酯衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将七叶内酯溶于乙腈，加入三乙胺，并搅拌反应，得到反应溶液；
(2)向反应溶液中加入溴乙烷或溴丙烷，搅拌反应，经TLC监测反应进程，反应完成后，将反应液减压浓缩除去溶剂，得到粗产物；
(3)将粗产物通过硅胶层析柱分离，得到化合物a1或化合物a2。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，向反应溶液中加入溴乙烷或溴丙烷，在63～67℃下搅拌反应5.5～6.5h，经TLC监测反应进程，反应完成后，将反应液减压浓缩除去溶剂，得到粗产物。
4.制备权利要求1所述的七叶内酯衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将中间产物b1、b2、b4溶于乙腈，加入三乙胺、吗啉，并搅拌反应，经TLC监测反应进程，反应完成后，得到反应液；其中，中间产物b1的结构式为：
Figure FDA0003015922250000021
b2的结构式为：
Figure FDA0003015922250000022
b4的结构式为：
Figure FDA0003015922250000023
(2)将反应液水洗，并加入二氯甲烷萃取，将二氯甲烷层减压浓缩后得到粗产物；
(3)将粗产物通过硅胶层析柱分离，得到化合物c1、c2、c3。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，将中间产物b1、b2、b4溶于乙腈，加入三乙胺、吗啉，并搅拌反应7.5～8.5h，经TLC监测反应进程，反应完成后，得到反应液。
6.制备权利要求1所述的七叶内酯衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将中间产物b1、b2、b3或b4溶于乙腈，加入无水碳酸钾、碘化钾，再加入咪唑或2-甲基咪唑，并搅拌反应，经TLC监测反应进程，反应完成后，得到反应液；其中中间产物b1的结构式为：
Figure FDA0003015922250000024
b2的结构式为：
Figure FDA0003015922250000025
b3的结构式为：
Figure FDA0003015922250000026
b4的结构式为：
Figure FDA0003015922250000031
(2)将反应液水洗，并加入二氯甲烷萃取，将二氯甲烷层减压浓缩后得到粗产物；
(3)将粗产物通过硅胶层析柱分离，得到化合物c4、c5、c6或c7。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中将中间产物b1、b2、b3或b4溶于乙腈，加入无水碳酸钾、碘化钾，再加入咪唑或2-甲基咪唑，并在62～68℃的条件下搅拌反应7.5～8.5h，经TLC监测反应进程，反应完成后，得到反应液。
8.如权利要求1所述的应用，所述七叶内酯衍生物能抑制乙型肝炎病毒DNA的复制。
9.如权利要求1所述的应用，所述七叶内酯衍生物能抑制乙型肝炎病毒HBsAg和HBeAg的分泌。
10.如权利要求1所述的应用，所述七叶内酯衍生物在制备治疗和或预防由乙型肝炎病毒感染引起的相关疾病的药物中的应用。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1132755A (zh) * 1994-12-28 1996-10-09 吴羽化学工业株式会社 七叶内酯衍生物及其制备方法和药物组合物
WO2009082735A1 (en) * 2007-12-21 2009-07-02 University Of Chicago Melanins synthesized chemically or via enzyme catalysis
CN105899508B (zh) * 2014-01-30 2017-07-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新型二氢喹嗪酮类化合物
CN108456189A (zh) * 2018-05-14 2018-08-28 桂林医学院 江南星蕨中七叶内酯的制备方法及应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1132755A (zh) * 1994-12-28 1996-10-09 吴羽化学工业株式会社 七叶内酯衍生物及其制备方法和药物组合物
WO2009082735A1 (en) * 2007-12-21 2009-07-02 University Of Chicago Melanins synthesized chemically or via enzyme catalysis
CN105899508B (zh) * 2014-01-30 2017-07-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新型二氢喹嗪酮类化合物
CN108456189A (zh) * 2018-05-14 2018-08-28 桂林医学院 江南星蕨中七叶内酯的制备方法及应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
叶蓁，等: "七叶内酯衍生物的合成及其生物活性", 《广东化工》 *
廉华，等: "苦黄注射液、复方甘草酸苷、阿德福韦酯三联疗法治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的临床疗效及对患者免疫功能的影响", 《现代中西医结合杂志》 *

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