CN113416712B

CN113416712B - 一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体及其应用

Info

Publication number: CN113416712B
Application number: CN202110742848.1A
Authority: CN
Inventors: 王喜亮; 李越; 赵虹泽; 袁旭; 吕佩琳; 邰蓉; 金秀娥
Original assignee: Huazhong Agricultural University
Current assignee: Wuhan Grenon Biotechnology Co ltd
Priority date: 2021-06-30
Filing date: 2021-06-30
Publication date: 2022-04-26
Anticipated expiration: 2041-06-30
Also published as: CN113416712A

Abstract

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体及其应用。该噬菌体为烈性噬菌体，对沙门氏菌具有强的裂解作用，属于长尾噬菌体科；该噬菌体在固体培养基上可以形成较大、透亮的空斑，周围有晕环；在pH3～pH13、在‑80℃～70℃条件下能够存活；MOI＝0.001条件下培养12h，其效价为1.2×10¹⁰pfu/mL。本发明提供的沙门氏菌噬菌体效价高且安全性好，可以单独或复配使用，对多种血清型或多种耐药表型的沙门氏菌具有强裂解活性；是一种新型的控制养殖生产环境中沙门氏菌污染的产品和手段。该噬菌体能为开发噬菌体疗法提供优良的噬菌体来源，并具有良好的应用开发前景，适于推广应用。

Description

一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体及其应用。

背景技术

沙门氏菌是一种重要的人兽共患病原菌，能够感染畜禽并通过排泄、分娩、产蛋等途径污染肉类、蛋类、蔬菜等食品引发人类食源性疾病。据统计，我国发生的食源性疾病，70％-80％是由沙门氏菌引起。由于沙门氏菌血清型众多，在自然界分布广泛，这给沙门氏菌病的防控带来了极大的困难。近年来畜牧生产中抗生素的滥用导致许多细菌出现耐药性，沙门氏菌耐药性问题日趋严重。据统计，沙门氏菌对链霉素、磺胺异恶唑、四环素、卡那霉素、庆大霉素、头孢曲松和氨苄西林等表现出高度耐药，而多重耐药菌株在临床病例中的不断增加将严重地影响感染病人的治疗效果，这使得沙门氏菌病的防治面临严峻挑战。因此，亟待研究开发一种新型抗菌制剂或疗法来替代化学抗生素。

噬菌体是一类专门感染细菌的病毒，广泛存在于土壤、空气、水及生物体中。噬菌体可以通过感染细菌，并在菌体内快速繁殖使细菌裂解而杀灭细菌，其杀菌机制与抗生素不同，对抗生素耐药菌株同样具有杀菌作用。作为细菌的天然克星，噬菌体在控制细菌感染方面有着突出的优越性。早在20世纪初，用噬菌体治疗细菌感染就取得过积极的效果。由于抗生素危机，基于噬菌体的生物防治被视为最有吸引力的替代方法。

噬菌体因具有靶向裂解特定菌株、快速杀灭细菌和快速繁殖、安全环保的特性，在预防食源性疾病方面具有特殊的意义。CN200980000314.9公开了新型噬菌体和包含所述噬菌体的抗菌组合物，以用于治疗和预防鸡沙门氏菌的传染病；CN201010508259.9公开了一株沙门氏菌噬菌体及其应用，以用于控制沙门氏菌对食品和器具的污染。目前，关于沙门氏菌噬菌体的研究主要集中在杀菌抑菌性方面，针对更多病原的沙门氏菌噬菌体及其裂解特性的研究还是较少，所以丰富广谱噬菌体资源，寻找新的强裂解性和耐受不利环境的噬菌体是本技术领域对于沙门氏菌病原菌防治中急需解决的问题。综上，急需开发新型宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体，并对所有这些方面进行充分研究和表征。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体及其应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。噬菌体具有杀菌性强、裂解谱宽、稳定性好的特点，该噬菌体可以单独或与其他噬菌体组合使用，为开发一种对多种血清型沙门氏菌具有强裂解作用且安全性高、稳定性强、裂解谱广的噬菌体制剂提供新的噬菌体来源。

本发明是这样实现的，一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体，保藏编号为CCTCC NO：M2020657，于2020年10月30日保藏至中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心，名称为沙门氏菌噬菌体(Salmonella spp phage)WXLSGP006。

进一步地，所述沙门氏菌包括肠炎沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、禽伤寒沙门氏菌、山夫登堡沙门氏菌、汤卜逊沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌、婴儿沙门氏菌、布伦登卢普沙门氏菌、哈达尔沙门氏菌、阿贡纳沙门氏菌、肯塔基沙门氏菌、亚利桑那沙门氏菌、圣地亚哥沙门氏菌、巴累利沙门氏菌、纽因顿沙门氏菌、勃兰登堡沙门氏菌、双亚利桑那沙门氏菌、胥伐成格隆沙门氏菌、鸡副伤寒沙门氏菌、纽波特沙门氏菌、海德堡沙门氏菌中的至少一种。

本发明还提供了如上述的一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体在裂解沙门氏菌中的应用。

本发明还提供了如上述的一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体在制备裂解沙门氏菌的药物中的应用。

进一步地，所述药物包括载体药物和/或液体药剂。

进一步地，所述载体药物包括含水性载体。

进一步地，所述含水性载体包括磷酸盐缓冲液和/或水。

进一步地，所述液体药剂消毒剂和/或漂洗剂。

进一步地，所述药物包含保藏编号为CCTCC NO：M 2020657的噬菌体或其发酵液。

进一步地，所述发酵液的制备方法为将噬菌体与宿主菌混合，接种于TSB培养基中培养。

本发明还提供了如上述的一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体在处理含沙门氏菌的污水中的应用。

本发明中的沙门氏菌噬菌体WXLSGP006(salmonella phage，WXLSGP006)为烈性噬菌体，对沙门氏菌具有强的裂解作用；从电镜形态上分析，属于长尾噬菌体科，头部直径约134nm，尾部长约232nm；该噬菌体在固体培养基上可以形成较大、透亮的空斑，周围有晕环；在PH3～pH13、在-80℃～70℃条件下能够存活；MOI＝0.001条件下培养12h，其效价为1.2×10¹⁰pfu/mL。

本发明所述沙门氏菌噬菌体WXLSGP006(salmonella phage，WXLSGP006)在噬菌体效价、裂解沙门氏菌的最佳感染复数(MOI)、pH稳定性、温度耐受范围和裂解谱等方面具有如下的生理特性和有益效果：

(1)所述沙门氏菌噬菌体WXLSGP006(salmonella phage WXLSGP006)具有较高的效价，经培养可达约2.9×10¹⁰pfu/mL；其最佳感染复数MOI为1:1000(表1)；所述沙门氏菌噬菌体WXLSGP006(salmonella phage WXLSGP006)在pH为5-11条件下孵育12h，其效价与初始效价无显著差异，在PH为3和PH为13的条件下孵育12h，该噬菌体仍具有活性；耐受温度范围较广，在-80℃～60℃中放置60min，其活性稳定，在70℃中放置60min，其效价降低四个数量级，在80℃中失去活性。

(2)沙门氏菌噬菌体WXLSGP006(salmonella phage WXLSGP006)无毒力基因，耐药基因和编码溶源性基因；具有较宽的宿主范围(参见表2)，对108株沙门氏菌的裂解率达91.7％。

(3)沙门氏菌噬菌体WXLSGP006(salmonella phage，WXLSGP006)具有如下的优势：其为严格的烈性噬菌体且对宿主菌株具有强的裂解作用；具有较广的宿主范围；其发酵液可于室温下稳定存活，于4℃下长期保持活性。本发明未对供试噬菌体进行任何遗传修饰，因此，本发明的沙门氏菌噬菌体WXLSGP006(salmonella phage，WXLSGP006)能为开发噬菌体制剂提供优良的菌株资源，并具有良好的应用开发前景。本发明中所述沙门氏菌噬菌体裂解率达90％以上，具有很强的裂解作用。

(4)一种所述噬菌体在制备抑制或杀灭沙门氏菌药物中的应用，其中所述的沙门氏菌主要包括肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、禽伤寒沙门氏菌等22种不同血清型的沙门氏菌。

(5)在所述的噬菌体的应用中：沙门氏菌噬菌体WXLSGP006包括但不限于以载体携带、浓缩喷洒或药剂浸泡等形式施用于被防治的寄主体表、生产环境等范围；作为实施方案之一，所述载体携带形式包括但不限于含水性载体；浓缩喷洒形式包括但不限于消毒剂等；药剂浸泡形式包括但不限于漂洗剂等。

(6)本发明所述沙门氏菌噬菌体WXLSGP006被制备为各种产品的有效成分应用于环境消毒，例如包括但不限于以液体浸泡、喷洒、与含水性载体联合使用等形式对配水系统、养殖业设施或其他环境表面进行消毒杀菌，可有效控制沙门氏菌对所述环境或设施的污染。所述液体浸泡、喷洒形式包括但不限于漂洗剂、消毒剂等；所述含水性载体包括但不限于磷酸盐缓冲液、纯水等。

综上所述，本发明的优点及积极效果为：

本发明提供的沙门氏菌噬菌体是一株宽裂解谱噬菌体，效价高且安全性好，该噬菌体制剂可以单独或复配使用，对多种血清型或多种耐药表型的沙门氏菌具有强裂解活性。是一种新型的控制养殖生产环境中沙门氏菌污染的产品和手段。本发明所述噬菌体能为开发噬菌体疗法提供优良的噬菌体来源，并具有良好的应用开发前景，适于推广应用。

附图说明

图1是噬菌体透射电子显微镜图；

图2是噬菌斑图；

图3是噬菌体的一步生长曲线图；

图4是噬菌体pH稳定性实验结果；

图5是噬菌体热稳定性实验结果；

图6是噬菌体核酸序列比对结果；

图7是噬菌体体内杀菌实验结果。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明，各实施例及试验例中所用的设备和试剂如无特殊说明，均可从商业途径得到。此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

根据本申请包含的信息，对于本领域技术人员来说可以轻而易举地对本发明的精确描述进行各种改变，而不会偏离所附权利要求的精神和范围。应该理解，本发明的范围不局限于所限定的过程、性质或组分，因为这些实施方案以及其他的描述仅仅是为了示意性说明本发明的特定方面。实际上，本领域或相关领域的技术人员明显能够对本发明实施方式作出的各种改变都涵盖在所附权利要求的范围内。

为了更好地理解本发明而不是限制本发明的范围，在本申请中所用的表示用量、百分比的所有数字、以及其他数值，在所有情况下都应理解为以词语“大约”所修饰。因此，除非特别说明，否则在说明书和所附权利要求书中所列出的数字参数都是近似值，其可能会根据试图获得的理想性质的不同而加以改变。各个数字参数至少应被看作是根据所报告的有效数字和通过常规的四舍五入方法而获得的。本发明中，“约”指给定值或范围的10％以内，优选为5％以内。

本发明下述各实施例中未特别限定温度时，则均为常温条件。常温是指四季中自然室温条件，不进行额外的冷却或加热处理，一般常温控制在10～30℃，最好是15～25℃。

本发明披露了一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体及其应用，本发明中涉及的沙门氏菌噬菌体WXLSGP006(salmonella phage，WXLSGP006)保存于中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学；保藏编号为CCTCC NO：M 2020657；保藏时间：2020年10月30日。本发明中涉及的培养基配方如下：

TSB液体培养基的配方为：胰蛋白胨17g，大豆木瓜蛋白酶消化物3g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2.5g，葡萄糖2.5g，蒸馏水1000mL，pH 7.0，121℃15min高压蒸汽灭菌备用。

TSA固体培养基的配方为：胰蛋白胨15g，大豆木瓜蛋白酶消化物5g，氯化钠5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH 7.0，121℃15min高压蒸汽灭菌备用。

TSB半固体琼脂培养基配方为：胰蛋白胨17g，大豆木瓜蛋白酶消化物3g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2.5g，葡萄糖2.5g，琼脂7g，蒸馏水1000mL，pH 7.0，121℃15min高压蒸汽灭菌备用。

SM液配方为：氯化钠8.5g，硫酸镁2g，1mol/L Tris-HCl 50mL，明胶0.25g，蒸馏水1000mL，过滤除菌。

亚硫酸铋琼脂培养基配方为：蛋白胨10g，牛肉浸粉5g，硫酸亚铁0.3g，亚硫酸钠6g，磷酸氢二钠4g，葡萄糖5g，煌绿0.025g，柠檬酸铋铵2g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH 7.5，加热煮沸至完全溶解，冷却至45～50℃备用。

实施例1沙门氏菌噬菌体WXLSGP006分离纯化

将来自于湖北某养鸡场的粪便污水样品30mL于4℃8000r/min离心10min，取20mL上清液用滤纸进行初步过滤以除去样品中不溶的大颗粒杂质和菌体等成分，再用0.22μm的微孔滤膜对得到的滤液再次过滤除菌，取滤液5mL与20mL 2×TSB液体培养基及2mL处于对数期的沙门氏菌HNSM2菌液(10⁸cfu/mL)均匀混合，于37℃180r/min培养14-18h，富集噬菌体。

将样本富集液于8000r/min离心10min，取上清液过0.22μm的微孔滤膜并通过点斑法观察该样本富集液中有无针对该宿主菌的噬菌体存在。具体步骤为：取200μL沙门氏菌菌液与5mL冷却至50℃的TSB半固体琼脂培养基混匀，立即铺于事先准备的TSA固体平板上，将5μL样品富集液滴加在已凝固好的上层琼脂上，37℃培养12h，观察噬菌斑生长情况。在形成噬菌斑的双层平板上，用无菌枪头挑取透亮的单个噬菌斑，于1mL SM液中振荡解吸附后过0.22μm的微孔滤膜除菌得噬菌体滤液，将其接种于含有200μL沙门氏菌菌液的10mL TSB液体培养基中，37℃下180r/min过夜培养12h，大量增值噬菌体；8000r/min离心10min，取上清过0.22μm的滤膜，得到无菌的噬菌体原液。取100μL噬菌体原液进行10倍梯度稀释，将稀释至合适倍数的100μL稀释液、200μL宿主菌液和5mL的TSB半固体培养基混匀，迅速倾倒在TSA固体平板中，待其凝固，于37℃静置培养12h，获得形成噬菌斑的双层平板。初次分离平板上的噬菌斑的大小、形状不一致，需要对分离的噬菌体进行纯化，用无菌枪头挑取大而透亮的单个噬菌斑，重复上述步骤，进行噬菌体原液的纯化。重复操作3-5次后，即获得形状和大小一致的噬菌斑。

实施例2沙门氏菌噬菌体WXLSGP006的生物学特性

1、噬菌体形态学特性

在透射电子显微镜下观察噬菌体颗粒，如图1所示，该噬菌体头部呈正多面体结构，头部长度为134.2nm，横径为126.6nm，尾部长约232.6nm，初步鉴定该噬菌体为长尾噬菌体科。

2、噬菌体在双层平板上形成噬菌斑的形态

如图2所示，沙门氏菌噬菌体WXLSGP006在沙门氏菌菌苔上均产生较大的圆形噬菌斑，中心透亮，边缘具晕圈，直径约为5-6mm。

实施例3沙门氏菌噬菌体WXLSGP006对沙门氏菌最佳感染复数(MOI)的测定

按1％接种量将鸡白痢沙门氏菌HNSM2接种于5mL TSB培养基，在37℃摇床中以200r/min振荡培养至对数期，得到宿主菌悬液。将得到的菌悬液经适当稀释后通过菌落平板计数检测效价。按照设定的感染复数比例(MOI＝0.00001、0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、100)加入100μL噬菌体WXLSGP006的纯培养液(由实施例1制得)和100μL宿主菌悬液，再加入等量的TSB液体培养基使各实验组总体积相同。37℃摇床中180r/min培养3.5h，得到的培养液8000r/min离心l0min，收集上清液过0.22μm的微孔滤膜并通过双层平板法测定噬菌体效价。平行实验重复3次，取平均值计算，以产生最高噬菌体效价的MOI为最佳感染复数。

结果如表1所示，当MOI为1:1000时，沙门氏菌噬菌体WXLSGP006效价达到最高，为1.2x10¹⁰pfu/mL，即沙门氏菌噬菌体WXLSGP006最佳MOI为0.001。

表1沙门氏菌噬菌体WXLSGP006的最佳感染复数测定

实施例4沙门氏菌噬菌体WXLSGP006的一步生长曲线测定

将沙门氏菌噬菌体WXLSGP006和培养至对数期的宿主菌按MOI为0.001的比例混合(100μL宿主菌悬液10⁸CFU/mL，100μL沙门氏菌噬菌体WXLSGP006 10⁵pfu/mL)，37℃恒温培养箱孵育20min，得到的培养液8000r/min离心5min，弃上清，再用TSB培养基洗涤沉淀2次，除去游离噬菌体。将沉淀再重悬于相同体积的TSB培养基中，取其中的200μL悬液加入到20mLTSB培养基中，37℃，180r/min培养150min，每隔10min吸取100μL培养液，通过双层平板法检测培养液中噬菌体的效价。平行实验重复3次。以感染时间为横坐标，以测得的噬菌体效价的对数值为纵坐标，绘制一步生长曲线。

结果如图3所示，沙门氏菌噬菌体WXLSGP006感染宿主菌的潜伏期和裂解期分别为60min和60min，平均裂解量约为207pfu/cell。

实施例5沙门氏菌噬菌体WXLSGP006的pH稳定性试验

分别向1.5mL无菌EP管中加入不同pH(2-14)的TSB培养基900μL，将其置于37℃的恒温水浴中平衡温度，取100μL效价为10¹⁰pfu/mL的噬菌体纯培养液分别加入到先前的EP管中，37℃恒温水浴12h，将样品做适当稀释后采用双层平板法测定噬菌体效价。平行实验重复3次。

结果如图4所示，沙门氏菌噬菌体WXLSGP006在pH为5-11的TSB中处理12h后其效价与初始效价无明显变化；PH为12时效价有略微降低，在PH为4和PH为13的TSB中孵育12h，其效价保持在10⁷pfu/mL；在PH为3的TSB中孵育12h，效价降低至10³pfu/mL，以上数据表明沙门氏菌噬菌体WXLSGP006具有较好的耐酸耐碱特性。

实施例6沙门氏菌噬菌体WXLSGP006的热稳定性试验

将10¹⁰pfu/mL的噬菌体纯培养液分装于3个1.5mL的无菌EP管中，每管1mL，将EP管分别放置于-80℃、-20℃、4℃、37℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃恒温孵育，分别在孵育30min和60min后，经适当稀释采用双层平板法检测噬菌体效价。

结果如图5所示，实验组中沙门氏菌噬菌体WXLSGP006在温度为-80℃～60℃之间效价保持稳定，约10¹⁰pfu/mL；在70℃水浴60min后仍有较高的效价，约10⁶pfu/mL；80℃水浴30min效价降低至10³pfu/mL，80℃水浴60min后噬菌体基本失活。以上结果显示该沙门氏菌噬菌WXLSGP006具有良好的热稳定性。

实施例7沙门氏菌噬菌体WXLSGP006基因组测序

向45mL噬菌体纯培养物中按10％加入5g PEG8000(Polyethylene glycol 8000)，待PEG8000完全溶解后于4℃下静置6h，8000r/min离心20min，弃上清将沉淀重悬于1mL的SM缓冲液中，浓缩噬菌体。取250μL的噬菌体浓缩液，使用Viral DNA Kit(OMEGA)试剂盒，按照说明书操作提取噬菌体DNA。将DNA样品交于测序公司完成。通过测定沙门氏菌噬菌体WXLSGP006全基因组并对其进行生物信息学分析，以确定其是否含有毒力或耐药性相关基因。

将该噬菌体的基因组在NCBI数据库中进行核酸序列比对，结果如图6所示，噬菌体WXLSGP006与数据库中序列相似性较高的Salmonella phage TS6的比对结果为Querycover89％，Ident 95％；与噬菌体Salmonella phage vB_SenS_SE1的比对结果为Querycover89％，Ident95％，说明该噬菌体是一种新型噬菌体。

另外，对供试噬菌体WXLSGP006进行毒力或耐药性相关基因分析，结果表明该噬菌体不含编码毒力或耐药性相关基因，表明将供试噬菌体应用于对养殖生产中沙门氏菌的防控没有潜在的安全风险。

实施例8沙门氏菌噬菌体WXLSGP006对沙门氏菌裂解谱分析

取效价为1.0x10⁹pfu/mL沙门氏菌噬菌体WXLSGP006的原液，采用点滴法来测定噬菌体的裂解谱。

挑取武汉格瑞农生物科技有限公司馈赠的108株沙门氏菌的单克隆，分别接种于3mL TSB中，37℃200r/min培养至对数期，取200uL对数期的菌液分别与TSB半固体培养基混匀，倒入预先制备好的TSA固体平板上，待上层琼脂凝固后，取5uL效价为1.0x10⁹pfu/mL的噬菌体WXLSGP006纯培养液滴于平板上。待自然风干后，将平板置于37℃培养12h，观察噬菌体的裂解情况。平行实验重复3次。

结果如表2所示，沙门氏菌噬菌体WXLSGP006具有较宽的裂解谱，可裂解99株沙门氏菌，裂解率为91.7％。该噬菌体能裂解22个不同的血清型，表明沙门氏菌噬菌体WXLSGP006具有较宽的宿主谱。

表2沙门氏菌噬菌体WXLSGP006的裂解谱

注：“_”表示不裂解；“+”点滴区域有个别的裂解斑点；“++”表示有轻微裂解，裂解斑模糊；“+++”表示裂解，裂解斑较为清晰；“++++”表示完全裂解。

实施例9沙门氏菌噬菌体WXLSGP006对条件致病菌和益生菌的裂解试验

挑取包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌等在内的20株条件致病菌和益生菌的单菌落分别接种于3mL TSB中，37℃200r/min培养至对数期，获得各株细菌的菌液。沙门氏菌噬菌体WXLSGP006对上述20株细菌裂解情况的检测，方法同实施例8。

结果如表3所示，本研究中的沙门氏菌噬菌体WXLSGP006只裂解其宿主菌沙门氏菌，不裂解上述20株条件致病菌和益生菌，宿主专一性强。

表3沙门氏菌噬菌体WXLSGP006对条件致病菌和益生菌的裂解效果评价

实施例10沙门氏菌噬菌体WXLSGP006安全性实验

按实施例7的方法将噬菌体纯培养液浓缩并重悬于PBS中，制备成浓度为10⁹pfu/mL的噬菌体溶液。将购自武汉市江夏区一个孵化场的18只1日龄小鸡随机分为2组，每组9只。一组口服上述制备的噬菌体浓缩液10⁹pfu/mL/只；另外一组口服等体积的PBS作为对照，连续口服5d后，每组取3只小鸡麻醉处死，观察其体内的各个脏器、消化道及黏膜的变化情况；每组剩余的6只小鸡每天取其粪便检测噬菌体数量变化。

结果显示，此剂量噬菌体对雏鸡生长没有任何不利影响，解剖检查雏鸡内脏、消化道及粘膜未见异常，且在口服噬菌体结束三天后，在雏鸡粪便中检测不到该噬菌体。

实施例11沙门氏菌噬菌体WXLSGP006体内杀菌实验

取48只一周龄小鸡随机分为3组，每组16只。挑取鸡白痢沙门氏菌CVCC530单克隆于3ml TSB液体培养基中培养至OD2.0，10000r/min离心1min，除去上清，并连续用PBS洗涤3次，调整浓度为1×10⁹cfu/ml备用。噬菌体制剂由实施例10获得。按以下方式处理各组。

组1：每只小鸡口服鸡白痢沙门氏菌CVCC530 100μL。

组2：每只小鸡口服沙门氏菌100μL的同时，口服噬菌体WXLSGP006 100μL。

组3：对照组每只小鸡口服100μLPBS。

分别在6h、12h、24h和36h每组麻醉处死3只小鸡，分离肠道内容物并称重，用筛选培养基亚硫酸铋测定其宿主菌的数量。

结果如图7所示，36h后鸡白痢沙门氏菌CVCC530大约减少了10⁴倍(从10⁶降至10²)。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体，保藏编号为CCTCC NO：M 2020657。

2.根据权利要求1所述的一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体，其特征在于，所述沙门氏菌包括肠炎沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、禽伤寒沙门氏菌、山夫登堡沙门氏菌、汤卜逊沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌、婴儿沙门氏菌、布伦登卢普沙门氏菌、哈达尔沙门氏菌、阿贡纳沙门氏菌、肯塔基沙门氏菌、亚利桑那沙门氏菌、圣地亚哥沙门氏菌、巴累利沙门氏菌、纽因顿沙门氏菌、勃兰登堡沙门氏菌、双亚利桑那沙门氏菌、胥伐成格隆沙门氏菌、鸡副伤寒沙门氏菌、纽波特沙门氏菌、海德堡沙门氏菌中的至少一种。

3.如权利要求1所述的一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体在制备裂解沙门氏菌的药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述药物包括载体药物和/或液体药剂。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述载体药物包括含水性载体。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述含水性载体包括磷酸盐缓冲液和/或水。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述液体药剂包括消毒剂和/或漂洗剂。

8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述药物包含保藏编号为CCTCC NO：M2020657的噬菌体或其发酵液；所述发酵液的制备方法为将噬菌体与宿主菌混合，接种于TSB培养基中培养。

9.如权利要求1所述的一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体在处理含沙门氏菌的污水中的应用。