CN113366319A - 血液检体的凝血特性的分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种分析血液检体的凝固特性的方法。一种血液检体的分析方法,包括:取得与将被检血液检体与凝固时间测定试剂混合而成的试样的凝固速度或凝固加速度相关的波形,提取表征该与凝固速度或凝固加速度相关的波形的多个参数,以及基于该多个参数判定该被检血液检体中的凝固因子的活性水平或活性异常。
Description
技术领域
本发明涉及一种血液检体的凝血特性的分析方法。另外,本发明涉及用于进行该血液检体的凝血特性的分析的程序和装置。
背景技术
凝血检查是用于调查患者的止血能力或溶纤能力的检查。一般的凝血检查中,对在患者的血液检体中添加试剂后发生的凝固反应进行光学测定。测定凝固进行到规定状态的时间作为凝血时间。作为凝血时间的典型例子,有凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间等。凝血时间的延长反映了生物体内的出血趋势。作为延长的原因,考虑有1)凝血因子的量的异常、2)存在针对构成凝血系统的血液成分、凝血时间测定用试剂等的抗体、3)抑制凝血反应的药剂的给予等。
在凝血检查中,通过经时地测定在血液检体中添加试剂后的凝血反应量,能够求出凝固反应曲线。该凝固反应曲线根据凝血系统的异常的类型而分别具有不同形状(非专利文献1)。因此,公开了一种基于凝固反应曲线来判定凝血系统的异常的方法。例如,专利文献1、专利文献2和专利文献3中记载了一种基于与患者血液的凝固反应曲线的1次微分曲线和2次微分曲线的参数、例如最大凝固速度、最大凝固加速度和最大凝固减速度等来评价该患者有无凝固因子的异常的方法。
血友病是一种具有凝血因子VIII(FVIII)或凝血因子IX(FIX)先天性缺失或者功能性异常的疾病。将正常人的活性设为100%,将FVIII的活性小于40%的人分类为血友病A,将FIX的活性小于40%的人分类为血友病B。进一步依照活性水平对血友病的严重程度进行了分类。专利文献4中记载了基于至患者的凝固反应达到最大凝固速度或最大凝固加速度的时间为止的凝固速度的平均变化率来判定血友病的严重程度。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开2016-194426号公报
专利文献2:日本特开2016-118442号公报
专利文献3:日本特开2017-106925号公报
专利文献4:日本特开2018-017619号公报
非专利文献
非专利文献1:British Journal of Haematology,1997,98:68-73
发明内容
实际的血液检体的凝固反应曲线的1次微分曲线根据检体中含有的成分、检查中使用的试剂的影响或测量方法的差异,有时不会成为单峰性。因此,专利文献1~4的方法中,为了准确地求出最大凝固速度、最大凝固速度时间等参数,进行用于使1次微分曲线为单峰性的平滑化处理而实施波形解析。但是,推测了如此对1次微分曲线进行用于单峰化的平滑化处理时,得到的曲线由于因平滑化处理而丧失波形信息,因此,无法详细地反映患者的临床状态。因此,寻求一种不依赖于平滑化处理,即使是非单峰性的1次微分曲线也能够高精度地评价检体的凝血特性的分析方法。
本发明人发现了一种来自血液的凝固反应曲线的与凝血因子VIII(FVIII)和凝血因子IX(FIX)的活性具有相关性的参数。另外,本发明人发现了一种基于该参数来分析血液检体中的FVIII或FIX的活性水平和该血液检体中有无FVIII或FIX的活性异常的方法。
因此,本发明提供以下方案。
〔1〕一种血液检体的分析方法,包括:
取得与将被检血液检体与凝固时间测定试剂混合而成的试样的凝固速度或凝固加速度相关的波形,
提取表征该与凝固速度或凝固加速度相关的波形的多个参数,以及
基于该多个参数判定该被检血液检体中的凝固因子的活性水平或活性异常。
〔2〕根据〔1〕所述的分析方法,其中,上述多个参数包含分别表征与上述凝固速度相关的波形的多个运算对象区域的多个参数,或者包含分别表征与上述凝固加速度相关的波形的多个运算对象区域的多个参数,或者包含它们的组合。
〔3〕根据〔2〕所述的分析方法,其中,上述多个参数包含选自下述参数中的1种以上:
与上述凝固速度相关的波形的多个运算对象区域的加权平均时间vT、加权平均高度vH、峰宽vB、加权平均峰宽vW、加权平均高度的B扁平率vAB、加权平均高度的W扁平率vAW、加权平均时间的B时间率vTB、加权平均时间的W时间率vTW、平均时间vTa、平均高度vHa、平均高度的B扁平率vABa、平均高度的W扁平率vAWa、区域起点时间vTs、区域终点时间vTe、区域中央时间vTm、区域时间宽度vTr、主峰起点时间vNs、主峰终点时间vNe和主峰宽vN,
与上述凝固加速度相关的波形的正峰的多个运算对象区域的加权平均时间pT、加权平均高度pH、峰宽pB、加权平均峰宽pW、加权平均高度的B扁平率pAB、加权平均高度的W扁平率pAW、加权平均时间的B时间率pTB、加权平均时间的W时间率pTW、主峰起点时间pNs、主峰终点时间pNe和主峰宽pN,以及
与上述凝固加速度相关的波形的负峰的多个运算对象区域的加权平均时间mT、加权平均高度mH、峰宽mB、加权平均峰宽mW、加权平均高度的B扁平率mAB、加权平均高度的W扁平率mAW、加权平均时间的B时间率mTB、加权平均时间的W时间率mTW、主峰起点时间mNs、主峰终点时间mNe和主峰宽mN。
〔4〕根据〔3〕所述的分析方法,其中,将与上述凝固速度相关的波形设为F(t)(t为时间)、将F(t)为规定值x的时间设为t1、t2(t1<t2)时,上述运算对象区域为满足F(t)≥x的区域,上述vT和vH由下述式表示,
这里,
F(t)、t1和t2为与上述F(t)、t1和t2相同的定义,在将从F(t1)到F(t2)的数据分数设为n时,上述vTa、vHa和vTm分别由下述式表示,
上述vB为从上述t1到t2的F(t)≥x的时间长度,
上述vW为从上述t1到t2的F(t)≥vH的时间长度,
上述vTs、vTe分别为t1、t2,
上述vTr为从vTs到vTe的时间长度,
上述vNs为该运算对象区域中小于F(t)显示最大值的时间且显示F(t)=x的时间中的最大的时间,
上述vNe为该运算对象区域中大于F(t)显示最大值的时间且显示F(t)=x的时间中的最小的时间,
上述vN为从vNs到vNe的时间长度,
上述vAB表示该vH与该vB之比,
上述vAW表示该vH与该vW之比,
上述vTB表示该vT与该vB之比,
上述vTW表示该vT与该vW之比,
上述vABa表示该vHa与该vB之比,
上述vAWa表示该vHa与该vW之比。
〔5〕根据〔3〕所述的分析方法,其中,将与上述凝固加速度相关的波形设为F’(t)(t为时间)、将F’(t)为规定值x的时间设为t1、t2(t1<t2)时,上述运算对象区域为满足F’(t)≥x的区域,上述pT和pH由下述式表示,
这里,
上述pB为从上述t1到t2的F’(t)≥x的时间长度,
上述pW为从上述t1到t2的F’(t)≥pH的时间长度,
上述pNs为该运算对象区域中小于F’(t)显示最大值的时间且显示F’(t)=x的时间中的最大的时间,
上述pNe为该运算对象区域中大于F’(t)显示最大值的时间且显示F’(t)=x的时间中的最小的时间,
上述pN为从pNs到pNe的时间长度,
上述pAB表示该pH与该pB之比,
上述pAW表示该pH与该pW之比,
上述pTB表示该pT与该pB之比,
上述pTW表示该pT与该pW之比。
〔6〕根据〔3〕所述的分析方法,其中,将与上述凝固加速度相关的波形设为F’(t)(t为时间)、将F’(t)为规定值x的时间设为t1、t2(t1<t2)时,上述运算对象区域为满足F’(t)≤x的区域,上述mT和mH由下述式表示,
这里,
上述mB为从上述t1到t2的F’(t)≤x的时间长度,
上述mW为从上述t1到t2的F’(t)≤mH的时间长度,
上述mNs为该运算对象区域中小于F’(t)显示最小值的时间且显示F’(t)=x的时间中的最大的时间,
上述mNe为该运算对象区域中大于F’(t)显示最小值的时间且显示F’(t)=x的时间中的最小的时间,
上述mN为从mNs到mNe的时间长度,
上述mAB表示该mH与该mB之比,
上述mAW表示该mH与该mW之比,
上述mTB表示该mT与该mB之比,
上述mTW表示该mT与该mW之比。
〔7〕根据〔4〕~〔6〕中任一项所述的分析方法,其中,上述规定值x为上述F(t)的最大值的0.5~99%,或者为上述F’(t)的正峰的最大值的0.5~99%,或者为上述F’(t)的负峰的最小值的0.5~99%。
〔8〕根据〔2〕~〔7〕中任一项所述的分析方法,其中,上述多个运算对象区域为5~20个的不同的区域。
〔9〕根据〔1〕~〔8〕中任一项所述的分析方法,其中,上述判定包括:
将上述多个参数组与多个模板血液检体所对应的参数组进行比较,以及,
基于该比较的结果判定上述被检血液检体中的凝固因子的活性水平或活性异常;
该模板血液检体为已知该凝固因子的活性水平或有无活性异常的血液检体。
〔10〕根据〔9〕所述的分析方法,其中,上述比较包括求出上述被检血液检体的参数组与上述多个模板血液检体所对应的参数组各自之间的相关性。
〔11〕根据〔10〕所述的分析方法,其中,上述判定包括:
选出上述相关性满足规定条件的模板血液检体,以及
将选出的模板血液检体中的上述凝固因子的活性水平或活性异常判定为上述被检血液检体中的凝固因子的活性水平或活性异常。
〔12〕根据〔1〕~〔11〕中任一项所述的分析方法,其中,上述凝固因子为凝血因子VIII或凝血因子IX。
〔13〕根据〔12〕所述的分析方法,其中,上述判定包括对来自上述血友病A患者的被检血液检体进行判定。
〔14〕根据〔12〕所述的分析方法,其中,上述判定包括对来自重症、中症或轻症的血友病A患者的被检血液检体进行判定。
〔15〕根据〔12〕所述的分析方法,其中,上述判定包括对来自极重度血友病A、中度重度血友病A、中症或轻症的血友病A患者的被检血液检体进行判定。
〔16〕根据〔12〕所述的分析方法,其中,上述判定包括对来自上述血友病B患者的被检血液检体进行判定。
〔17〕根据〔12〕所述的分析方法,其中,上述判定包括对来自重症、中症或轻症的血友病B患者的被检血液检体进行判定。
〔18〕根据〔12〕所述的分析方法,其中,进一步包括对判定为凝血因子VIII非异常的被检血液检体中的凝血因子IX的活性水平或活性异常进行判定的第2判定工序,
该第2判定工序包括:
将该被检血液检体的上述参数组与已知凝血因子IX的活性水平或有无活性异常的多个模板血液检体所对应的参数组进行比较,以及
基于该比较的结果判定上述被检血液检体中的凝血因子IX的活性水平或活性异常。
〔19〕根据〔18〕所述的分析方法,其中,上述判定包括对来自上述血友病B患者的被检血液检体进行判定。
〔20〕根据〔18〕所述的分析方法,其中,上述判定包括对来自重症、中症或轻症的血友病B患者的被检血液检体进行判定。
〔21〕一种用于进行〔1〕~〔20〕中任一项所述的血液检体的分析方法的程序。
〔22〕一种用于进行〔1〕~〔20〕中任一项所述的血液检体的分析方法的装置。
根据本发明,能够基于来自凝固反应曲线的参数来分析血液检体中的FVIII或FIX的活性水平或其活性异常(缺乏等)的有无。本发明对血友病A的判定或血友病B的判定、或者血友病患者的严重成都的判定有用。
附图说明
图1是本发明的血液检体的分析方法的步骤的一个实施方式。
图2是图1所示的数据解析工序的步骤的一个实施方式。
图3是凝固反应曲线的一个例子。
图4是前处理后的凝固反应曲线的一个例子。
图5中的A是凝固反应曲线的一个例子的部分放大图,图5中的B是前处理后的凝固反应曲线的一个例子的部分放大图。
图6是校正0次曲线的一个例子。
图7是校正1次曲线的一个例子。
图8是由与凝固速度相关的波形算出的参数的概念图。
图9是用于对运算对象区域值、作为解析对象的校正0次曲线和校正1次曲线的范围、以及加权平均分进行说明的概念图。
图10是由2次曲线算出的参数的概念图。
图11是表示vTs、vTe、vTr、vNs、vNe、vN的概念图。
图12是表示加权平均分以及vTs、vTe、vB、vW的概念图。虚线表示1次曲线的10%运算对象区域。
图13是表示vTa、vHa、vTm的概念图。
图14中的A是用于对运算对象区域值为10%时的加权平均分等进行说明的,图14中的B是用于对运算对象区域值为80%时的加权平均分等进行说明的概念图。
图15是表示用于进行本发明的血液检体的分析方法的自动分析装置的构成的概念图。
图16是参数组A-1的回归直线。被检检体(Sample AF)来自FVIII活性小于0.2%的重症血友病A患者。各图中,横轴和纵轴的表示分别表示模板检体和被检检体的FVIII活性和APTT。
图17中的A是与图16中相关系数最高的检体(Template A)的回归直线。图17中的B是被检检体(Sample AF)与Template A的校正1次曲线。
图18是实施例5中使用的被检检体和模板检体的FVIII活性和APTT的分布。A:FVIII活性,B:APTT。左:被检检体,右:模板检体。
图19是回归分析中的斜率允许范围和相关系数阈值对基于判定基准1的FVIII缺乏一致率和FVIII活性水平一致率造成的影响。
图20是回归分析中的斜率允许范围和相关系数阈值对基于判定基准2的FVIII缺乏一致率和FVIII活性水平一致率造成的影响。
图21是回归分析中的斜率允许范围和相关系数阈值对基于判定基准3的FVIII缺乏一致率和FVIII活性水平一致率造成的影响。
具体实施方式
本发明涉及对与血液检体的凝血相关联的特性进行分析。以下,有时将血液检体称为检体。更详细而言,本发明涉及对凝血时间延长的检体中的凝血时间延长因子成分的活性水平或其活性异常的有无进行分析。优选本发明涉及对凝血因子VIII(以下,也称为FVIII)或凝血因子IX(以下,也称为FIX)的活性水平或其活性异常的有无进行分析。因此,本发明的一个方式为血液检体的分析方法,更详细而言,是对血液检体中的凝血时间延长因子成分、优选FVIII和/或FIX的活性水平、或者其活性异常的有无进行判定的方法。以下,参照附图对本发明的方法的步骤的一个实施方式进行说明。
1.血液检体的分析方法
1.1.方法的概要
本发明的血液检体的分析方法(以下,也称为本发明的方法)包括:取得与将被检检体与凝固时间测定试剂混合而成的试样的凝固速度或凝固加速度相关的波形,提取表征该与凝固速度或凝固加速度相关的波形的多个参数,以及基于该多个参数判定该被检检体中的凝血时间延长因子成分的活性水平或活性异常。参照图1对本发明的方法的一个实施方式进行说明。本方法中,首先由被检检体制备试样(步骤1),接着执行对该试样的凝固反应测量(步骤2)。根据所得到的测量数据,取得与该试样的凝固速度或凝固加速度相关的波形,接着对波形进行规定的解析(步骤3)。基于解析中得到的参数进行被检检体的判定(凝血时间延长因子成分的活性水平或其活性异常的判定)(步骤4)。
1.2.试样制备和凝固反应测量
对步骤1中的由被检检体的试样的制备以及步骤2中的对该试样的凝固反应测量进行说明。这里,作为凝固反应测量,例举活化部分凝血活酶时间(APTT)的测定进行说明,向除此以外的凝固反应测量(例如凝血酶原时间(PT)测定)的变更只要是本领域技术人员就能够实施。
作为该被检检体的例子,可举出来自要求与凝血能力相关的检查的受试者的检体,例如可举出具有凝血异常的检体或怀疑凝血异常的检体,更详细而言,可举出凝血时间延长的检体或怀疑凝血时间延长的检体。作为该检体,优选使用受试者的血浆。该检体中可以添加凝固检查中通常使用的公知的抗凝剂。例如,通过使用放入了柠檬酸钠的采血管采血后,进行离心分离而得到血浆。
将得到的被检检体与凝固时间测定试剂混合,制备用于凝固反应测量的试样。作为该凝固时间测定试剂的例子,只要是用于APTT测定的试剂即可,例如可举出接触因子系的活化剂和磷脂。作为活化剂的例子,可举出鞣花酸、硅藻土、高岭土、二氧化硅、多酚化合物等。作为磷脂的例子,可举出动物来源、植物来源、合成来源的磷脂等。作为动物来源的磷脂的例子,可举出兔脑来源、鸡来源、猪来源的磷脂。作为植物来源的磷脂的例子,可举出大豆来源的磷脂。另外,该试样中可以根据需要添加Tris盐酸等缓冲液。或者,用于该APTT测定的试剂可以使用市售的APTT测定试剂。作为市售的APTT测定试剂的例子,可举出COAGPIAAPTT-N(积水医疗株式会社制)。将所制备的试样加温,将该试样中的接触因子活化。加温时的温度例如为30℃~40℃,优选为35℃~39℃。
然后,在包含该被检检体和凝固时间测定试剂的试样中添加氯化钙液(例如,COAGPIA APTT-N氯化钙液;积水医疗株式会社制),使凝血反应开始。可测量氯化钙液添加后的混合液的凝固反应。凝固反应的测量只要使用一般的方法,例如,测量散射光量、透射率、吸光度等的光学方法、或者测量血浆粘度的力学方法等。测量的期间例如可以为从氯化钙液的添加时刻起几十秒到5分钟左右。可以在测量期间之间以规定间隔反复进行测量。例如,只要以0.1秒间隔进行测量即可。测量中的反应液的温度例如为30℃~40℃,优选为35℃~39℃。凝固反应的反应开始时间典型而言可以定义为在包含被检检体的试样中添加氯化钙液的时刻,也可以将其它时机定义为反应开始时间。另外,测量的各种条件可以根据被检检体、试剂、测量方法等而适当地设定。
上述凝固反应测量中的一系列操作可以使用自动分析装置进行。作为自动分析装置的一个例子,可举出凝血自动分析装置CP3000(积水医疗株式会社制)。或者,也可以手动进行一部分操作。例如,可以由人进行被检检体的制备,其以后的操作利用自动分析装置进行。
1.3.数据解析
1.3.1.数据的1次处理和校正处理
接下来,对步骤3的数据解析进行说明。将数据解析的流程示于图2。步骤3中的数据解析可以与步骤2的凝固反应测量同时进行,或者也可以使用预先测定的凝固反应测量的数据,随后进行步骤3中的数据解析。
步骤3a中,取得上述凝固反应测量中的测量数据。该数据例如为反映上述步骤2的APTT测定中得到的试样的凝固反应过程的数据。例如,取得来自包含被检检体和凝固时间测定试剂的试样的显示氯化钙液添加后的凝固反应的进行量(例如散射光量)的时间变化的数据。也将这些凝固反应测量中得到的数据在本说明书中称为凝固反应信息。
将步骤3a中取得的凝固反应信息的一个例子示于图3。图3为基于散射光量的凝固反应曲线,横轴表示氯化钙液的添加后的经过时间(凝固反应时间),纵轴表示散射光量。随着时间经过,混合液的凝固反应进行,因此散射光量增加。本说明书中,将显示这样的散射光量等所示的相对于凝固反应时间的凝固反应量的变化的曲线称为凝固反应曲线。
如图3所示的基于散射光量的凝固反应曲线通常为S形。另一方面,基于透射光量的凝固反应曲线通常为倒S形。以下的本说明书中,对使用基于散射光量的凝固反应曲线作为凝固反应信息的数据解析进行说明。使用基于透射光量、吸光度的凝固反应曲线作为凝固反应信息的数据解析的情况也可以进行同样的处理对本领域技术人员而言显而易见的。或者,也可以将作为凝固反应信息的利用混合液的粘度变化等力学方法得到的凝固反应曲线作为解析对象。
步骤3b中,进行凝固反应曲线的前处理。该前处理中包括用于除去噪声的平滑化处理和零点调整。图4表示经前处理(平滑化处理和零点调整)后的图3的凝固反应曲线的一个例子。平滑化处理可以使用公知的噪声除去方法中的任一种。另外,如图3所示,包含被检检体的混合液原本就使光散射,因此,在测定开始时刻(时间0)的散射光量大于0。通过平滑化处理后的零点调整,如图4所示将时间0处的散射光量调整为0。图5中的A和B分别表示前处理前和后的图3的凝固反应曲线的部分放大图。图5中的B中对图5中的A的数据进行了平滑化处理和零点调整。
凝固反应曲线的高度依赖于被检检体的纤维蛋白原浓度。另一方面,由于纤维蛋白原浓度存在个人差异,因此,该凝固反应曲线的高度根据被检检体而不同。因此,本方法中,根据需要,在步骤3c中进行用于将前处理后的凝固反应曲线进行相对值化的校正处理。通过该校正处理,能够得到不依赖于纤维蛋白原浓度的凝固反应曲线,由此能够将检体间的前处理后的凝固反应曲线的形状的差异进行定量比较。
一个实施方式中,该校正处理中,对前处理后的凝固反应曲线以最大值达到规定值的方式进行校正。优选该校正处理中根据依照下述式(1)由前处理后的凝固反应曲线求出校正凝固反应曲线P(t)。式(1)中,D(t)表示前处理后的凝固反应曲线,Dmax和Dmin分别表示D(t)的最大值和最小值,Drange表示D(t)的变化幅度(即Dmax-Dmin),A为表示校正凝固反应曲线的最大值的任意的值。
P(t)=[(D(t)-Dmin)/Drange]×A (1)
作为一个例子,图6中示出将图4所示的凝固反应曲线以最大值成为100的方式进行校正而得的数据。应予说明,图6中以校正后的值成为0~100的方式进行了校正,但也可以为其它值(例如为0~10000,即式(1)中A=10000)。另外,也可以未必进行该校正处理。
或者,如上所述的校正处理也可以对后述的与凝固速度或凝固加速度相关的波形或从该波形中提取的参数组进行。例如,可以对未进行校正处理的前处理后的凝固反应曲线D(t)算出与凝固速度相关的波形后,将其转换为相当于P(t)的值。或者,可以从该与凝固速度相关的波形中提取参数组后,将该参数组中包含的各个参数的值转换为相当于P(t)的值。
本说明书中,也可以将如上所述的校正凝固反应曲线和无校正处理的凝固反应曲线分别称为校正0次曲线和未校正0次曲线,另外,也可以将它们通称为“0次曲线”。另外,本说明书中,也将该校正0次曲线和该未校正0次曲线的1次微分曲线分别称为校正1次曲线和未校正1次曲线,另外,也将它们通称为“1次曲线”。另外,本说明书中,也将该校正0次曲线和该未校正0次曲线的2次微分曲线或者该校正1次曲线和该未校正1次曲线的1次微分曲线分别称为校正2次曲线和未校正2次曲线,另外,也将它们通称为“2次曲线”。
1.3.2.与凝固速度或凝固加速度相关的波形的算出
步骤3d中,算出与凝固速度或凝固加速度相关的波形。本说明书中,与该凝固速度相关的波形包含未校正1次曲线和校正1次曲线。未校正1次曲线表示对凝固反应曲线(未校正0次曲线)进行1次微分而得到的值、即任意的凝固反应时间时的凝固反应量的变化率(凝固速度)。校正1次曲线表示对校正凝固反应曲线(校正0次曲线)进行1次微分而得到的值、即任意的凝固反应时间时的凝固反应量的相对变化率。因此,与该凝固速度相关的波形可以为表示试样的凝固反应的凝固速度或其相对值的波形。本说明书中,将1次曲线表示的表示包含该凝固速度和其相对值的凝血的进行的值通称为1次微分值。另外,本说明书中,与该凝固加速度相关的波形包含未校正2次曲线和校正2次曲线。本说明书中,将与该凝固加速度相关的波形表示的值通称为2次微分值。凝固反应曲线或校正凝固反应曲线(未校正和校正0次曲线)的1次微分和2次微分可以使用公知的方法进行。图7示出对图6所示的校正0次曲线进行一次微分而得到的校正1次曲线。图7的横轴表示凝固反应时间,纵轴表示1次微分值。
1.3.3.参数的提取
步骤3e中,进行表征与该试样的凝固速度或凝固加速度相关的波形的多个参数的提取。一个实施方式中,该多个参数包含分别表征与凝固速度相关的波形的多个参数。另一个实施方式中,该多个参数包含分别表征与凝固加速度相关的波形的多个参数。另一个实施方式中,将该分别表征与凝固速度相关的波形的多个参数与该分别表征与凝固加速度相关的波形的多个参数组合使用。
优选在本发明的方法的参数的提取工序中,从该与凝固速度或凝固加速度相关的波形提取多个运算对象区域,另一方面,对这些多个运算对象区域分别提取表征该运算对象区域的参数。结果,提取分别表征该与凝固速度或凝固加速度相关的波形的多个运算对象区域的多个参数。因此,本发明中提取的表征该与凝固速度或凝固加速度相关的波形的多个参数包含分别表征与该凝固速度相关的波形的多个运算对象区域的多个参数,或者包含分别表征与该凝固加速度相关的波形的多个运算对象区域的多个参数,或者包含它们的组合。本发明的方法中,制成包含所得到的该多个参数的参数组。该参数组反映该与凝固速度或凝固加速度相关的波形的形状,与检体的凝血特性相关联。该参数组用于被检检体的判定(步骤4)。以下对该参数进行说明。
1.3.3.2.运算对象区域的提取
关于本发明的方法的参数的提取,对由与凝固速度或凝固加速度相关的波形提取多个运算对象区域的步骤进行说明。
以下,以与凝固速度相关的波形为例对运算对象区域和表征该运算对象区域的参数进行说明。该运算对象区域是与凝固速度相关的波形(1次曲线)中的1次微分值(y值)为规定的运算对象区域值以上的区域(部分)。更详细而言,该运算对象区域是与凝固速度相关的波形中的1次微分值(y值)为规定的运算对象区域值以上且为最大值(Vmax)以下,且包括该波形的最大点的区域(部分)。运算对象区域值为指定运算对象区域的下限的规定值,本说明书中也被称为运算对象区域值S。运算对象区域值S可以设定为用于限定反映与凝固速度相关的波形的峰形状的范围。为了相对较宽地限定峰形状,运算对象区域值S可以设定为Vmax的0%~20%。另一方面,如果增大运算对象区域值S,则峰的上部形状的影响相对较大地反映在解析结果中。为了解析峰上部的形状,运算对象区域值S可以设定为Vmax的20%~95%。一个实施方式中,运算对象区域值S可以设定为Vmax的0.5~99%、优选5~90%。
本发明的方法中,基于多个不同的运算对象区域值S提取多个运算对象区域。本发明的方法中提取的运算对象区域的数量不一定受限,数量少的情况下,有时血液检体的判定的精度降低,另一方面,如果数量过多,则计算量增大而运算负荷变高。该多个运算对象区域优选为3个以上的不同的区域,更优选为5个以上的不同的区域,进一步优选为3~100个的不同的区域,进一步优选为5~20个的不同的区域。运算对象区域值S的数量与运算对象区域的数量对应。用于提取各运算对象区域的运算对象区域值S相互不同。从分析精度的观点考虑,优选各S不接近。各S的间隔只要根据运算对象区域的数量进行设定即可,优选为Vmax的1/100~1/2,更优选为Vmax的1/33~1/5,进一步优选为Vmax的1/20~1/5,进一步优选为Vmax的1/20~1/10。Vmax和各S的间隔可以相同或不同。运算对象区域值S也可以应用于2次曲线。2次曲线可以在正方向和负方向这两个方向上具有峰。运算对象区域值S可以对2次曲线的正峰和负峰分别设定。一个实施方式中,运算对象区域值S可以设定为2次曲线的正峰的最大值的0.5~99%、优选5~90%。另一个实施方式中,运算对象区域值S可以设定为2次曲线的负峰的最小值的0.5~99、优选5~90%。
1.3.3.3.加权平均分
参照图8对运算对象区域和该运算对象区域的加权平均分进行说明。图8中示出了校正1次曲线F(t)(t=时间)。另外,图8中示出了F(t)的最大值Vmax以及下述说明的参数的运算对象区域值S为Vmax的x%时的加权平均分(vTx,vHx)和表示运算对象区域的峰宽的vB。运算对象区域是F(t)的值为运算对象区域值S以上且1次微分值的最大值Vmax以下(F(t)≥S(S=x%))的区域。加权平均分(vTx,vHx)相当于F(t)的运算对象区域的“加权平均值”。
将该加权平均分处的凝固反应时间(t)作为加权平均时间vT。即,加权平均时间vT是从凝固反应开始时间到加权平均分的时间,是加权平均分的x坐标。加权平均高度vH为加权平均分的y坐标。
1次曲线的加权平均时间vT和加权平均高度vH可以按照以下步骤而求出。首先,将1次曲线F(t)的最大值为Vmax、运算对象区域值为S、满足F(t)≥Vmax×S×0.01的时间t的数据组设为t[t1,…t2](t1<t2)。即,F(t1)=Vmax×S×0.01,F(t2)=Vmax×S×0.01,时刻t1~t2的数据组为t[t1,…t2](t1<t2)。此时,由下述式(2)求出积和值M。
加权平均时间vT和加权平均高度vH分别由下式(3)和(4)算出。由求出的vT和vH导出加权平均分(vTx,vHx)。
本说明书中,为了识别来自不同的运算对象区域的vT和vH,有时依照其所来自的运算对象区域值S(S=x%)而分别称为vTx和vHx。例如,S为5%的运算对象区域的vT和vH为vT5%和vH5%。这些加权平均时间vTx和加权平均高度vHx可以用作表征运算对象区域的参数。应予说明,满足上述的F(t1)=Vmax×S×0.01、F(t2)=Vmax×S×0.01的t1和t2(t1<t2)也可以作为参数,以下,有时将与该1次曲线相关的t1和t2分别称为区域起点时间vTs和区域终点时间vTe(vTs<vTe)。这些也有时依照运算对象区域值S(S=x%)而分别被称为vTsx和vTex。
图9中示出运算对象区域值S与此时的作为解析对象的校正0次曲线和校正1次曲线的区域(运算对象区域)和加权平均分的关系。图9中,上段、中段和下段示出运算对象区域值S分别为Vmax(=100%)的10%、50%和80%的情况。左表示校正0次曲线,右表示校正1次曲线的运算对象区域,黑色圆圈表示加权平均分。随着运算对象区域值S的变化,运算对象区域和加权平均分的位置如图9所示地变化。上述的说明中,如图8、图9所示,算出校正1次曲线的与运算对象区域相关的参数,但未校正1次曲线也可算出同样的参数。
同样地,对于2次曲线,也可以定义加权平均分、加权平均时间和加权平均高度。2次曲线如图10所示在2次微分值的正方向和负方向这两个方向具有峰。因此,2次曲线的加权平均分可以对正峰和负峰这两者而算出。例如,对于正峰,2次曲线A=F’(t)的最大值为Amax、运算对象区域值为S(%)时,求出满足F’(t)≥Amax×S×0.01的时间t[t1,…,t2](t1<t2),依照上式(2)’~(4)’算出正峰的加权平均时间pT和加权平均高度pH。对于负峰,2次曲线A=F’(t)的最小值为Amin、运算对象区域值为S(%)时,求出满足F’(t)≤Amin×S×0.01的时间t[t1,…,t2](t1<t2),依照上式(2)’、(3)”和(4)”算出负峰的加权平均时间mT和加权平均高度mH。随着运算对象区域值S的变化,加权平均分的位置发生变化。
1.3.3.4.峰宽、平均分、扁平率和时间率
将从反应时间短于加权平均时间vT的区域中1次微分值为运算对象区域值S以上的最少的反应时间到反应时间长于加权平均时间vT的区域中1次微分值为运算对象区域值S以上的最大的反应时间为止的时间中1次曲线F(t)≥S的时间长度(F(t)≥S的数据分数乘以测光时间间隔而得到的值)作为1次曲线的峰宽vB。图8所示的例子中,从时间vTs到时间vTe为峰宽vB。同样地,2次曲线F’(t)的正峰的2次微分值为运算对象区域值S以上的反应时间的最小值和最大值分别为pTs、pTe,将从pTs到pTe的时间中F’(t)≥S的时间长度(F’(t)≥S的数据分数乘以测光时间间隔而得到的值)作为2次曲线的正峰的峰宽pB。同样地,2次曲线F’(t)的负峰的2次微分值为运算对象区域值S以下的反应时间的最小值和最大值分别为mTs、mTe,将从mTs到mTe的时间中F’(t)≤S的时间长度(F’(t)≤S的数据分数乘以测光时间间隔而得到的值)作为2次曲线的负峰的峰宽mB。
作为本发明中使用的参数的进一步的例子,可举出区域时间宽度vTr。vTr为从vTs到vTe的宽度(时间长度)。1次曲线的运算对象区域为单峰性的峰时,vTr=vB,但在1次曲线为包含F(t)<S的谷的多峰性的情况下,vTr>vB。作为本发明中使用的参数的进一步的例子,可举出主峰起点时间vNs、主峰终点时间vNe和主峰宽vN。vNs、vNe为1次曲线的运算对象区域中的包含最大值Vmax的主峰的参数,与上述的vTs、vTe等相比,是不易受到凝固反应曲线可能包含的噪声的影响的参数。vNs是在1次曲线F(t)的运算对象区域中小于显示最大值Vmax的时间(后述的VmaxT)且显示F(t)=S时间中的最大的时间。vNe是在1次曲线F(t)的运算对象区域中大于VmaxT且显示F(t)=S的时间中的最小的时间。运算对象区域为单峰性的峰时,vNs和vNe分别为与vTs和vTe相同的值。vN为从vNs到vNe的宽度(时间长度)。同样地,对2次曲线F’(t)的正峰和负峰可以同样地定义pNs、pNe、pN和mNs、mNe、mN。图11中示出vTs、vTe、vTr、vNs、vNe、vN。
作为本发明中使用的参数的进一步的例子,可举出加权平均峰宽vW。图12示出运算对象区域值S为10%时的1次曲线的运算对象区域(虚线)。图12中的上图示出了加权平均分(vT,vH)(黑色圆圈)、vTs、vTe,图12中的下图示出了vB、vW。如图12所示,vW为满足1次曲线F(t)≥vH的峰宽(从满足F(t)≥vH的最小时间到最大时间的时间中F(t)≥vH的时间长度)。利用未校正1次曲线也可算出同样的参数。同样地,对于2次曲线的正峰,将满足F’(t)≥pH的峰宽作为加权平均峰宽pW。对于2次曲线的负峰,将满足F’(t)≤mH的凝固反应时间的宽度作为加权平均峰宽mW。
作为本发明中使用的参数的进一步的例子,可举出平均时间vTa、平均高度vHa和区域中央时间vTm。图13中示出了运算对象区域值S为10%时的1次曲线的平均分(vTa,vHa)(白色菱形记号)、加权平均分(vT,vH)(黑色圆圈)、vTs、vTe和vTm。在将从F(vTs)到F(vTe)的数据分数设为n时,vTa、vHa和vTm分别由下式表示。
同样地,2次曲线也可以参考式(7)而求出作为pTs与pTe的中央点的pTm、作为mTs与mTe的中央点的mTm。
作为本发明中使用的1次曲线的参数,使用加权平均高度vH、平均高度vHa、峰宽vB和加权平均峰宽vW,将基于峰宽的扁平率vAB、vABa和基于加权平均峰宽的扁平率vAW、vAWa如下述式(8a)、(8b)、(8c)、(8d)所示进行定义。
vAB=vH/vB (8a)
vAW=vH/vW (8b)
vABa=vHa/vB (8c)
vAWa=vHa/vW (8d)
另外,作为1次曲线的参数,使用加权平均时间vT、峰宽vB和加权平均峰宽vW,将基于峰宽的时间率vTB和基于加权平均峰宽的时间率vTW如下述式(9a)、(9b)所示进行定义。
vTB=vT/vB (9a)
vTW=vT/vW (9b)
应予说明,扁平率可以为vAB=vB/vH、vAW=vW/vH,另外,也可以为vABa=vB/vHa、vAWa=vW/vHa。即,扁平率只要为加权平均高度vT或平均高度vHa与峰宽vB或vW之比即可。同样地,时间率可以为vTB=vB/vT、vTW=vW/vT。即,时间率只要为加权平均时间vT与峰宽vB或vW之比即可。另外,这些比可以乘以常量K。即,例如,扁平率可以为vAB=(vH/vB)K、vAB=(vB/vH)K、vAW=(vH/vW)K或vAW=(vW/vH)K,或者也可以为vABa=(vHa/vB)K、vABa=(vB/vHa)K、vAWa=(vHa/vW)K或vAWa=(vW/vHa)K,时间率可以为vTB=(vT/vB)K、vTB=(vB/vT)K、vTW=(vT/vW)K或vTW=(vW/vT)K。
另外,如上所述的扁平率和时间率也可以对2次曲线求出。例如,对于2次曲线的正峰,作为pH与pB或pW之比,可以求出基于峰宽的扁平率pAB或基于加权平均峰宽的扁平率pAW,另一方面,作为pT与pB或pW之比,可以求出基于峰宽的时间率pTB或基于加权平均峰宽的时间率pTW。同样地,对于2次曲线的负峰,作为mH与mB或mW之比,可以求出基于峰宽的扁平率mAB或基于加权平均峰宽的扁平率mAW,另一方面,作为mT与mB或mW之比,可以求出基于峰宽的时间率mTB或基于加权平均峰宽的时间率mTW。
如上所述的峰宽vB、pB、mB、加权平均峰宽vW、pW、mW、平均时间vTa、平均高度vHa、区域起点时间vTs、pTs、mTs、区域终点时间vTe、pTe、mTe、区域中央时间vTm、pTm、mTm、区域时间宽度vTr、主峰起点时间vNs、pNs、mNs、主峰终点时间vNe、pNe、mNe、主峰宽vN、pN、mN、扁平率vAB、vAW、vABa、vAWa、pAB、pAW、mAB、mAW和时间率vTB、vTW、pTW、pAW、mTB、mTW也可以为表征1次曲线的运算对象区域的参数。
本说明书中,为了识别来自不同的运算对象区域的参数,有时对各参数标注其所来自的运算对象区域值S而显示。例如,表征S为x(%)时的1次曲线的运算对象区域的参数有时被称为vHx、vTx、vBx、vWx等。例如,与S为10%时的1次曲线的加权平均分有关的参数vH、vT、vB、vW、vTa、vHa、vTs、vTe、vTm、vTr、vNs、vNe、vN、vAB、vAW、vABa、vAWa、vTB、vTW有时分别被称为vH10%、vT10%、vB10%、vW10%、vTa10%、vHa10%、vTs10%、vTe10%、vTm10%、vTr10%、vNs10%、vNe10%、vN10%、vAB10%、vAW10%、vABa10%、vAWa10%、vTB10%、vTW10%。对表征2次曲线的运算对象区域的参数也同样。
图14中的A和图14中的B表示关于相同的1次曲线的运算对象区域值S不同时的参数。图13中的A表示运算对象区域值S为10%的情况,图13中的B表示运算对象区域值S为80%的情况。在运算对象区域值S为10%的图13中的A的情况下,1次曲线的加权平均高度vH10%为0.4,加权平均时间vT10%为149秒,峰宽vB10%为200秒。与此相对,在运算对象区域值S为80%的图13中的B的情况下,加权平均高度vH80%为0.72,加权平均时间vT80%为119秒,峰宽vB80%为78秒。
1.3.3.5.其它
作为本发明中使用的表征该运算对象区域的参数的进一步的例子,可举出1次曲线或2次曲线的运算对象区域的曲线下面积(AUC)。2次曲线由于具有正峰和负峰,因此运算对象区域的曲线下面积(AUC)可能有正峰的运算对象区域的AUC(pAUC)和负峰的运算对象区域的AUC(mAUC)。本说明书中,为了识别来自不同的运算对象区域的AUC,有时依照其所来自的运算对象区域值S而称为AUCx。例如,S为5%的运算对象区域的vAUC、pAUC和mAUC分别为vAUC5%、pAUC5%和mAUC5%。
此外,上述的表征运算对象区域的参数以外的进一步的参数可以包含于本发明的用于判定凝固因子的活性水平或活性异常的参数中。作为该参数的例子,可举出最大1次微分值Vmax、最大2次微分值Amax、最小2次微分值Amin以及表示达到它们的时间的VmaxT、AmaxT、AminT等。
上述的一系列参数可以包含来自校正处理后的凝固反应曲线(校正0次~2次曲线)的参数和来自无校正处理的凝固反应曲线(未校正0次~2次曲线)的参数。
以上,根据基于散射光量的凝固反应曲线,对表征与凝固速度或凝固加速度相关的波形的参数进行了说明。另一方面,可以由基于其它凝固测量方法(例如透射光量、吸光度)的凝固反应曲线取得同等的参数对本领域技术人员而言是显而易见的。例如,由基于透射光量这样的倒S形的凝固反应曲线得到的1次曲线F(t)相对于上述基于散射光量的凝固反应曲线,正负是相反的。在这样的情况下,参数的计算中F(t)的符号反转,例如,最大值Vmax被调换为最小值Vmin,运算对象区域为满足F(t)≤S的区域,vB和vW分别为从t1到t2的F(t)≤x和F(t)≤vH的时间长度等对本领域技术人员而言是显而易见的。
1.4.检体的判定
对步骤4中进行的判定的一个例子进行说明。
1.4.1.参数组的制作
如上所述,对与凝固速度或凝固加速度相关的波形的运算对象区域分别提取表征该运算对象区域的参数。作为表征该运算对象区域的参数,可举出后述的表A中示出的与1次曲线的加权平均分有关的参数(加权平均时间vT、加权平均高度vH、平均时间vTa、平均高度vHa、峰宽vB、加权平均峰宽vW、由它们求出的扁平率vAB、vAW、vABa、vAWa和时间率vTB、vTW、以及vAUC、vTs、vTe、vTr、vTm、vNs、vNe、vN),与2次曲线的加权平均分有关的参数(加权平均时间pT、mT、加权平均高度pH、mH、峰宽pB、mB、加权平均峰宽pW、mW、由它们求出的扁平率pAB、pAW、mAB、mAW和时间率pTB、pTW、mTB、mTW、以及pAUC、mAUC、pNs、pNe、pN、mNs、mNe、mN、pTs、pTe、pTm、mTs、mTe、mTm)。本发明中,只要提取这些参数中的任1个以上即可,也可以提取包含它们中的2个以上的参数集。例如,该参数只要是选自vT、vH、vB、vAB和vTB中的至少1个即可,也可以为包含它们中的2个以上的参数集。优选的一个实施方式中,该参数为包含vT、vH、vB、vAB和vTB的参数集。另一个优选的实施方式中,该参数为包含vB、vAB和vTB的参数集。另一个优选的实施方式中,该参数为包含vB和vAB的参数集。另一个优选的实施方式中,该参数为pH、pAB或vH。另一优选的实施方式中,该参数为pAB与pNe的参数集、pTW与vT的参数集、pTB与vABa的参数集、pAB与vNs的参数集或pTW与vTs与vW的参数集。其中,本发明的方法中使用的表征各运算对象区域的参数的构成不限定于这些实施方式。
优选本发明的方法中用于判定被检检体的多个参数(参数组)包含分别表征1个波形的多个运算对象区域的多个参数。换言之,该参数组为从1个波形的多个运算对象区域中分别提取的多个参数的集合。优选该参数组包含1个以上的从1个波形(1次曲线或2次曲线)的不同的运算对象区域中提取的同种的参数集。例如,提取L个运算对象区域,且所采用的参数为vHx时,该参数组由L个vHx构成。例如,提取基于10个运算对象区域值S(5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%和90%)的10个运算对象区域,且从各运算对象区域提取参数vHx时,参数组为10个vHx的集合[vH5%,vH10%,vH20%,vH30%,vH40%,vH50%,vH60%,vH70%,vH80%,vH90%]。另外,例如,提取基于5个运算对象区域值S(5%、20%、40%、60%和80%)的5个运算对象区域,且从各运算对象区域提取参数vHx时,参数组为5个vHx的集合[vH5%,vH20%,vH40%,vH60%,vH80%]。同样地,提取M个运算对象区域,且所采用的参数为vBx、vABx和vTBx时,该参数组由M个集的[vBx,vABx,vTBx]构成。或者,提取N个运算对象区域,且所采用的参数为vTx、vHx、vBx、vABx和vTBx时,该参数组由N个集的[vTx,vHx,vBx,vABx,vTBx]构成。
此外,也可以将分别表征该运算对象区域的多个参数与其它参数组合。例如,可以将选自后述的表A中示出的最大1次微分值Vmax、最大2次微分值Amax、最小2次微分值Amin和表示达到它们的时间的VmaxT、AmaxT、AminT中的至少1个与上述的表征运算对象区域的多个参数组合。
1.4.2.靶凝血时间延长因子成分
作为利用本发明的方法判定活性水平或活性异常的靶凝血时间延长因子成分,可举出引起凝血时间延长的内源性或外源性的任意的参与凝固反应的成分。优选该靶凝血时间延长因子成分为凝固因子。该凝固因子优选为选自包含FVIII和FIX的凝固因子中的至少1种,更优选至少为FVIII。也可以将FVIII和FIX一起作为靶。
1.4.3.模板检体
本发明的方法中,将包含从上述被检检体的与凝固速度或凝固加速度相关的波形的多个运算对象区域中分别提取的多个参数的参数组(以下,称为被检参数组)与模板血液检体(以下,也简称为模板检体)所对应的参数组(本说明书中,也称为模板参数组)进行比较。基于该比较的结果,判定被检检体的凝固特性、优选被检检体中的凝血时间延长因子成分的活性水平或活性异常。本发明中优选准备1种以上的模板检体。该模板检体为已知本发明的方法中的靶凝血时间延长因子成分的活性水平或有无活性异常的血液检体。
例如,对FVIII进行评价时,该1种以上的模板检体包含1种以上的FVIII的活性水平非异常的血液检体(FVIII正常检体)和1种以上的FVIII的活性水平异常的血液检体(FVIII异常检体,例如FVIII缺乏检体)。例如,对FIX进行评价时,该1种以上的模板检体包含1种以上的FIX的活性水平非异常的血液检体(FIX正常检体)和1种以上的FIX的活性水平异常的血液检体(FIX异常检体,例如FIX缺乏检体)。例如,对FVIII和FIX进行评价时,该1种以上的模板检体包含1种以上的FVIII和FIX的活性水平均非异常的血液检体(FVIII/FIX正常检体)、1种以上的FVIII的活性水平异常的血液检体(FVIII异常检体,例如FVIII缺乏检体)以及1种以上的FIX的活性水平异常的血液检体(FIX异常检体,例如FIX缺乏检体)。
优选该FVIII异常检体包含来自重症、中症和轻症的血友病A患者的血液检体。优选该来自重症、中症和轻症的血友病A患者的血液检体分别为FVIII活性小于1%、1%以上且小于5%和5%以上且小于40%(将正常人的活性设为100%时的值,以下相同)的血液检体。要求更详细的解析时,可以根据需要准备多个来自FVIII活性水平不同的重症血友病A患者的检体。例如,可以准备来自FVIII活性为0.2%以上且小于1%的中度重度血友病A(MS-HA)患者的检体和来自FVIII活性小于0.2%的极重度血友病A(VS-HA)患者的检体。近年来,报告了在重症血友病A患者中,特别是FVIII活性低的VS-HA的患者(FVIII活性小于0.2%)和并非如此的MS-HA的患者(FVIII活性为0.2%以上且小于1%)中,临床严重程度存在差异(松本智子,嶋绿伦,凝固波形解析和第VIII因子微量测定中的应用,2003年,14卷2号,p.122-127)。鉴别VS-HA的患者对向患者实施适当的治疗有用。
同样地,该FIX异常检体优选包含来自重症、中症和轻症的血友病B患者的血液检体。优选为来自该重症、中症和轻症的血友病B患者的检体分别为FIX活性小于1%、1%以上且小于5%和5%以上且小于40%(将正常人的活性设为100%时的值,以下相同)的检体。实施更详细的解析时,可以根据需要准备多个来自FIX活性水平不同的重症血友病B患者的检体。例如,可以准备FIX活性为0.2%以上且小于1%的检体和FIX活性小于0.2%的检体。
1.4.4.回归分析
本发明的方法中,在被检参数组与来自各模板检体的各模板参数组之间进行对应的参数的回归分析。
回归分析中使用的模板参数组是通过对各模板检体进行上述1.3.中描述的数据解析而得到的。该数据解析中,提取的运算对象区域的数量和多个运算对象区域的提取中使用的一系列的运算对象区域值S设定为与被检检体的数据解析相同的值。另外,模板参数组中含有的参数的种类与被检参数组同样。例如,如果被检参数组为L个vHx,则模板检体的模板参数组也为L个vHx。另外,例如,如果被检参数组为M个集的[vBx,vABx,vTBx],则模板检体的模板参数组也为M个集的[vBx,vABx,vTBx]。另外,例如,如果被检参数组为N个集的[vTx,vHx,vBx,vABx,vTBx],则模板检体的模板参数组也为N个集的[vTx,vHx,vBx,vABx,vTBx]。因此,模板参数组为与被检参数组对应的模板检体的参数组。即,各模板参数组中含有的各个参数与被检参数组中含有的各个参数相互对应。应予说明,本说明书中,模板参数组的参数与被检参数组的参数对应时,该模板参数组的参数与该被检参数组的参数为相同种类的参数。例如,被检参数组的vTx、vHx、vBx、vABx和vTBx与模板参数组的vTx、vHx、vBx、vABx和vTBx(x为规定值)分别对应。由与被检参数组的全部参数各自对应的参数构成的模板参数组与该被检参数组对应。
该模板参数组优选预先取得。另外,各模板参数组也可以为对由多个模板检体得到的参数组进行加工而得到的合成参数组。例如,可以通过对靶凝血时间延长因子成分的活性水平同等的多个模板检体取得参数组并对它们进行统计处理而制作1个以上的表示标准模板检体的合成参数组。
回归分析的方法没有特别限定,例如可举出基于最小二乘法的线性回归。例如,将被检参数组中的各参数的值作为y轴,将任1个模板参数组中的对应的参数的值作为x轴进行标绘,求出回归直线。基于该回归直线的斜率、截距、相关性(相关系数、决定系数等)等来调查被检参数组与各模板参数组的相关性。被检参数组与模板参数组的相关性反映被检检体与该模板参数组所来自的模板检体之间的凝固特性的相关性(近似状态)。
1.4.5.凝血特性的判定
接下来,基于回归分析的结果,判定被检检体的凝固特性。优选该凝固特性的判定为靶凝血时间延长因子成分的活性水平或其活性异常的判定。以下,以靶凝血时间延长因子成分为FVIII的情况为例对判定步骤进行说明。对FIX等其它因子也只要按照同样的步骤进行判定即可。
基于上述回归分析中求出的被检检体与1种以上的模板检体的相关性判定被检检体的FVIII活性水平、活性异常(缺乏等)。优选该相关性为回归直线的相关性(例如斜率、截距、相关系数、决定系数等)。
以下对基于该相关性的被检检体的FVIII活性水平或活性异常的判定的一个实施方式进行说明。模板检体包含1种以上的FVIII正常检体和FVIII活性水平各不相同的1种以上的FVIII异常检体。优选模板检体包含1种以上的FVIII正常检体和来自重症(根据需要为VS-HA和MS-HA)、中症和轻症的血友病A患者的FVIII异常检体各1种以上。从用于回归分析的所有模板检体中选出被检参数组与模板参数组的相关性满足规定条件的至少1种检体。
一个实施方式中,选出该相关性为预先设定的阈值以上的模板检体。另一个实施方式中,选出该相关性为预先设定的阈值以上、且该相关性最高的模板检体。另一个实施方式中,选出被检参数组与模板参数组的回归直线的斜率在规定范围内(例如0.70~1.30,优选为0.75~1.25,更优选为0.80~1.20,进一步优选为0.85~1.15,进一步优选为0.87~1.13)的模板检体。另一个实施方式中,选出被检参数组与模板参数组的回归直线的斜率在上述规定范围内且该回归直线的相关系数为规定值以上(例如大于0.75,优选大于0.80,更优选大于0.85,进一步优选大于0.90)的模板检体。另一方面,选不出满足该规定条件的模板检体时,可以变更该规定的条件而再次进行模板检体的选出,或者也可以评价为“未选出模板检体”。
优选的一个实施方式中,选出该回归直线的斜率在规定范围内(例如0.70~1.30,优选为0.75~1.25,更优选为0.80~1.20,进一步优选为0.85~1.15,进一步优选为0.87~1.13)的模板检体。优选选出该回归直线的斜率在上述规定范围内且该回归直线的相关系数为规定值以上(例如大于0.75,优选大于0.80,更优选大于0.85,进一步优选大于0.90)的模板检体。从所选出的模板检体中选出该回归的相关系数最高的模板检体。选出多种满足该规定条件的模板检体时,可以基于进一步的基准从其中选出1种模板检体。
接下来,将该选出的模板检体的FVIII的状态(即,FVIII的活性水平或活性异常)判定为该被检检体的FVIII的状态。选出多种模板检体时,可以判定为被检检体的FVIII的状态相当于该多种模板检体的状态中的任一者,或者,也可以将该多种模板检体的平均状态判定为被检检体的FVIII的状态。
例如,如果所选出的模板检体为FVIII正常检体,则该被检检体的FVIII的状态可以判定为无异常,另一方面,如果所选出的模板检体为FVIII异常检体,则该被检检体可以判定为具有FVIII活性的异常。另外,例如,如果所选出的模板检体为来自重症、中症和轻症的血友病A患者的检体,则该被检检体可以分别判定为重症、中症和轻症的血友病A。此外,模板检体包含来自VS-HA和MS-HA的重症血友病A患者的检体时,如果选出来自VS-HA或MS-HA患者的模板检体,则该被检检体可以判定为VS-HA或MS-HA。或者,判定该被检检体的FVIII活性水平时,可以将所选出的模板检体的FVIII活性水平判定为该被检检体的FVIII活性水平。
另一方面,如果模板检体包含来自重症、中症和轻症的血友病A患者的检体且上述相关性的评价中为“未选出模板检体”,则该被检检体可以判定为“不具有FVIII活性异常”或被检检体的“凝血时间延长主要因子素并非由FVIII活性异常所致”。
另一个优选的实施方式中,选出所有该回归直线的斜率在规定范围内(例如0.70~1.30,优选为0.75~1.25,更优选为0.80~1.20,进一步优选为0.85~1.15,进一步优选为0.87~1.13)的模板检体。优选选出所有该回归直线的斜率在上述规定范围内且该回归直线的相关系数为规定值以上(例如大于0.75,优选大于0.80,更优选大于0.85,进一步优选大于0.90)的模板检体。将所选出的模板检体之间以最高频率发现的FVIII的状态(即,FVIII的活性水平或活性异常)判定为该被检检体中的FVIII的状态。
例如,如果所选出的模板检体中FVIII正常检体的数量最多,则该被检检体的FVIII的状态可以判定为非异常。另一方面,如果所选出的模板检体中FVIII异常检体的数量最多,则该被检检体可以判定为具有FVIII活性的异常。另外,例如,所选出的模板检体中来自重症、中症和轻症的血友病A患者的检体最多时,该被检检体可以分别判定为重症、中症和轻症的血友病A。另外,例如,所选出的模板检体中来自VS-HA和MS-HA的重症血友病A患者的检体最多时,该被检检体可以分别判定为VS-HA和MS-HA。另外,例如,所选出的模板检体中FVIII非异常的凝血时间延长检体最多时,该被检检体可以判定为除血友病A患者(重症、中症和轻症)以外的异常检体。或者,判定该被检检体的FVIII活性水平时,可以将所选出的模板检体中以最高频率发现的FVIII活性水平判定为该被检检体的FVIII活性水平。
另一个优选的实施方式中,选出所有该回归直线的斜率在规定范围内(例如0.70~1.30,优选为0.75~1.25,更优选为0.80~1.20,进一步优选为0.85~1.15,进一步优选为0.87~1.13)的模板检体。优选选出所有该回归直线的斜率在上述的规定范围内且该回归直线的相关系数为规定值以上(例如大于0.75,优选大于0.80,更优选大于0.85,进一步优选大于0.90)的模板检体。
将所选出的模板检体依照FVIII活性水平而分为来自FVIII活性低的血友病A患者(重症、中症和轻症)的检体和除此以外的检体。前者的数量多于后者的数量时,将前者的检体中最多可见的严重程度(重症、中症和轻症中的任一者)判定为该被检检体的状态。存在相同数量不同的严重程度的检体时,可以将更重症的状态判定为该被检检体的状态,或者也可以变更该规定的条件而再次进行模板检体的选出。另一方面,后者的数量多于前者的数量时,将该被检检体判定为除血友病A患者(重症、中症和轻症)以外的检体。
如上所述,可以通过本发明的方法来判定被检检体的FVIII活性水平或其有无活性异常。另一个实施方式中,判定被检检体中有无FVIII的活性异常,该判定提供关于该被检检体是否为血友病A患者的检体的判定的信息。另一个实施方式中,判定被检检体的FVIII活性水平,该判定提供关于提供了该被检检体的患者的血友病A的严重程度的判定的信息。因此,本发明的血液检体的分析方法的一个实施方式可以为用于血友病A的判定、用于血友病A的严重程度、例如重症(根据需要为VS-HA和MS-HA)、中症和轻症的判定等的方法。
一个实施方式中,对被检检体除了进行上述的关于FVIII的判定以外,还可以进行关于其它凝血时间延长因子成分的判定。优选该其它凝血时间延长因子成分为FIX。例如,可以对上述的关于FVIII的判定中判定为“凝血时间的延长因素并非由FVIII活性异常所致”或“血友病A患者(重症、中症和轻症)以外”的被检检体判定FIX的活性水平或其有无活性异常。FIX的活性水平或其有无活性异常的判定步骤可以按照与上述关于FVIII的判定步骤同样的步骤来实施。该关于FIX的判定中使用的模板检体可以与关于FVIII的评价中使用的模板检体相同或不同。另外,该关于FIX的判定中使用的被检参数组和模板参数组可以与关于FVIII的判定中使用的被检参数组和模板参数组相同或不同。本实施方式的一个例子中,判定被检检体中有无FIX的活性异常,该判定提供关于该被检检体是否为血友病B患者的检体的判定的信息。本实施方式的另一个例子中,判定被检检体的FIX活性水平,该判定提供关于提供了该被检检体的患者的血友病B的严重程度的判定的信息。本实施方式能够进行血友病B的判定、血友病B的严重程度的(例如重症、中症和轻症的)判定。此外,通过将上述关于FVIII的评价与关于FIX的评价组合,能够更全面地分析被检检体的凝固特性。
2.用于本发明的方法的程序和装置
上述的本发明的血液检体的分析方法可以使用计算机程序自动进行。因此,本发明的一个方式为用于进行上述的本发明的血液检体的分析方法的程序。另外,包括由被检检体的试样的制备和凝固时间的测定在内,上述的本发明的方法的一系列工序可以利用自动分析装置自动进行。因此,本发明的一个方式为用于进行上述的本发明的血液检体的分析方法的装置。
以下,对本发明的装置的一个实施方式进行说明。本发明的装置的一个实施方式为如图15所示的自动分析装置1。自动分析装置1具备控制单元10、操作单元20、测定单元30和输出单元40。
控制单元10控制自动分析装置1整体的动作。控制单元10例如可以由个人计算机(PC)构成。控制单元10具备CPU、内存、存储器、通信接口(I/F)等,进行来自操作单元20的指令的处理、测定单元30的动作的控制、从测定单元30接收到的测定数据的保存、数据分析、分析结果的保存、基于输出单元40的测定数据、分析结果的输出的控制等。此外,控制单元10也可以与外部媒体、主机等其它设备连接。应予说明,控制单元10中,控制测定单元30的动作的PC与进行测量数据的分析的PC可以相同,也可以不同。
操作单元20取得来自操作者的输入,并将所得到的输入信息发送到控制单元10。例如,操作单元20具备键盘、触摸面板等用户接口(UI)。输出单元40在控制单元10的控制下输出测定单元30的测量数据、该数据的分析结果。例如,输出单元40具备显示器等显示装置。
测定单元30执行用于凝血检查的一系列操作,取得包含血液检体的试样的凝固反应的测量数据。测定单元30具备凝血检查所需的各种器材、分析模块,例如,收纳血液检体的检体容器、收纳检查用试剂的试剂容器、用于检体与试剂的反应的反应容器,用于将血液检体和试剂分别注入到反应容器中的探针,光源,用于检测来自反应容器内的试样的散射光或透射光的检测器,将来自检测器的数据发送到控制单元10的数据处理电路,接收控制单元10的指令来控制测定单元30的操作的控制电路等。
控制单元10基于测定单元30所测量的数据而进行检体的凝固特性的分析。本分析中可以包括上述的凝固反应曲线、与凝固速度、凝固加速度相关的波形的取得,被检检体的参数组的提取,模板检体的模板参数组的提取,这些参数组的回归分析,以及基于回归分析的结果的被检检体的靶凝血时间延长因子成分的活性水平或活性异常的判定等。本分析可以通过用于进行本发明的方法的程序来实施。因此,控制单元10可以具备用于进行本发明的方法的程序。
利用上述的控制单元10的分析中,该分析中使用的凝固反应曲线、与凝固速度、凝固加速度相关的波形可以基于来自测定单元30的测量数据并由控制单元10制作,或者也可以由另一设备,例如测定单元30制作并发送到控制单元10。或者,还可以由测定单元30制作凝固反应曲线并发送到控制单元10,由控制单元10制作与凝固速度或凝固加速度相关的波形。模板检体的模板参数组的数据可以预先由测定单元30测定模板检体,并将所得到的测量数据用控制单元10进行解析而制作,或者也可以从外部获取。模板参数组的数据可以保存于控制单元10的内存、外部设备。回归分析的方法、用于基于回归分析的结果的被检检体的凝固特性的分析的判定基准可以通过本发明的程序进行控制。
控制单元10的分析结果被发送到输出单元40进行输出。输出可以为在屏幕上显示、发送到主机、印刷等任意方式。来自输出单元的输出信息包含关于被检检体的靶凝血时间延长因子成分的判定结果(例如,FVIII活性水平、血友病A或其严重程度的判定结果等),且根据期望可以包含被检检体与模板检体的回归分析的结果(例如回归线性方程、相关性)、被检检体、模板检体的凝固反应曲线、与凝固速度或凝固加速度相关的波形等进一步的信息。来自输出单元的输出信息的种类可以通过本发明的程序进行控制。
一个实施方式中,除具备用于进行本发明的方法的程序以外,自动分析装置1还可以采用APTT、PT等凝血时间的测定中以往使用这样的一般的凝血检查用的自动分析装置的构成。
实施例
以下,利用实施例对本发明进行详细说明,但本发明不限定于以下的实施例。
以下的实施例中使用的参数只要没有特别说明,则表示来自校正0次曲线~校正2次曲线的参数。另一方面,来自未校正0次曲线~未校正2次曲线的参数在各参数的名称开头标注R来表示。例如,校正1次曲线的加权平均高度为vH时,未校正1次曲线的加权平均高度由RvH表示,校正2次曲线的加权平均高度为pH时,未校正2次曲线的加权平均高度由RpH表示。将参数一览示于下述的表A。
[表A]
[表A]
1次曲线和2次曲线的波形参数
x:运算对象区域值 k:常数
来自无校正处理的凝固反应曲线的参数在前头标注R
实施例1被检参数的算出
(1)方法
作为测定用试剂,使用作为APTT测定用试剂的COAGPIAAPTT-N(积水医疗株式会社制),作为氯化钙液,使用COAGPIAAPTT-N氯化钙液(积水医疗株式会社制)。包含检体的试样的凝固反应测量使用凝血自动分析装置CP3000(积水医疗株式会社制)而进行。在小池(Cuvette)内向以37℃加温45秒的检体50μL添加约37℃的测定用试剂50μL,进一步经过171秒后添加25mM氯化钙液50μL,开始凝固反应。反应在37℃进行。凝固反应的测定中,对小池照射以LED为光源的波长660nm的光,以0.1秒间隔测量90度侧方散射光的散射光量。测量时间为360秒。由得到的经时测量数据得到凝固反应曲线。
(2)被检血液检体
对34份检体(血浆)进行分析。该34份检体包含24份FVIII缺乏检体(重症(FVIII<1%)13份、中症(FVIII=1-5%)8份、轻症(FVIII=5-40%)3份)和10份除VIII缺乏检体以外的检体(Other)。按照(1)的步骤得到各检体的凝固反应曲线。
(3)模板检体
将分析中使用的模板检体的构成示于表1。制备FVIII活性不同的43份检体和FVIII活性正常但因其它主要因素而凝血时间延长的88份检体。前者43份检体的FVIII活性属于血友病A重症(FVIII<1%)、中症(FVIII=1-5%)和轻症(FVIII=5-40%)以及其它(FVIII>40%为Other)中的任一者。后者88份检体由于FVIII活性为非异常,因此在表1的分类中属于“Other”。将这些合计131份检体作为模板检体用于分析,按照(1)的步骤得到各检体的凝固反应曲线。
[表1]
模板检体的构成
具有其它因素的检体:除FVIII以外的凝血因子缺乏、加入肝素的血浆以及LA阳性血浆
(4)数据解析
(4-1)1次曲线的算出
由来自(2)中得到的被检检体的凝固反应曲线算出校正1次曲线。首先,对凝固反应曲线进行前处理。即,对凝固反应曲线进行包含噪声除去的平滑化处理,以测定开始时刻的散射光量为0的方式进行调整。接着,以凝固反应曲线的最大高度为100的方式进行校正,对得到的校正凝固反应曲线(校正0次曲线)进行1次微分,算出校正1次曲线。
(4-2)被检参数组的制作
(参数组A)
从得到的校正1次曲线中提取10个运算对象区域。运算对象区域值S相对于校正1次曲线的最大高度值Vmax(100%)分别设定为5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%和90%。对各S下的运算对象区域算出峰宽vB以及使用上述式(2)、(3)和(4)算出加权平均时间vT和加权平均高度vH。由求出的vT和vH,由下述式算出扁平率vAB和时间率vTB。
vAB=(vH/vB)K1(K1=100)
vTB=(vT/vB)K2(K2=1)
通过以上的步骤算出10个运算对象区域(S=5%,10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%和90%)的参数:vB[vB5%,vB10%,vB20%,vB30%,vB40%,vB50%,vB60%,vB70%,vB80%,vB90%],vT[vT5%,vT10%,vT20%,vT30%,vT40%,vT50%,vT60%,vT70%,vT80%,vT90%],vH[vH5%,vH10%,vH20%,vH30%,vH40%,vH50%,vH60%,vH70%,vH80%,vH90%],vAB[vAB5%,vAB10%,vAB20%,vAB30%,vAB40%,vAB50%,vAB60%,vAB70%,vAB80%,vAB90%],和vTB[vTB5%,vTB10%,vTB20%,vTB30%,vTB40%,vTB50%,vTB60%,vTB70%,vTB80%,vTB90%]。
将所算出的被检检体的参数组合,如下制作被检参数组:
(参数组A-1)由vB[vB5%,vB10%,…,vB90%]、vT[vT5%,vT10%,…,vT90%]、vH[vH5%,vH10%,…,vH90%]、vAB[vAB5%,vAB10%,…,vAB90%]和vTB[vTB5%,vTB10%,…,vTB90%]这50个参数构成的参数组;
(参数组A-2)由vB[vB5%,vB10%,…,vB90%]、vAB[vAB5%,vAB10%,…,vAB90%]和vTB[vTB5%,vTB10%,…,vTB90%]这30个参数构成的参数组;
(参数组A-3)由vB[vB5%,vB10%,…,vB90%]和vAB[vAB5%,vAB10%,…,vAB90%]这20个参数构成的参数组。
为了进行比较,算出对校正0次曲线进行1次微分而得到的曲线的最大值(Vmax)和达到其为止的时间(VmaxT)、进行2次微分而得到的曲线的最大值(Amax)和达到其为止的时间(AmaxT)。这些是以以往的凝固反应曲线的波形解析中使用的参数为基准的参数(参照专利文献1和2)。除了这些以往参数以外,还进一步如下制作被检参数组:
(参数组A-4)由在参数A-1中追加了Vmax、Amax、VmaxT和AmaxT的54个参数构成的参数组;
(比较参数组1)由Vmax、Amax、VmaxT和AmaxT这4个参数构成的参数组。
(参数组B)
此外,使用5个运算对象区域(S=5%、20%、40%、60%和80%)的vB、vT、vH、vAB和vTB,如下制作被检参数组:
(参数组B-1)由vB[vB5%,vB20%,vB40%,vB60%,vB80%]、vT[vT5%,vT20%,vT40%,vT60%,vT80%]、vH[vH5%,vH20%,vH40%,vH60%,vH80%]、vAB[vAB5%,vAB20%,vAB40%,vAB60%,vAB80%]和vTB[vTB5%,vTB20%,vTB40%,vTB60%,vTB80%]这25个参数构成的参数组;
(参数组B-2)由vB[vB5%,vB20%,vB40%,vB60%,vB80%]、[vAB5%,vAB20%,vAB40%,vAB60%,vAB80%]、和vTB[vTB5%,vTB20%,vTB40%,vTB60%,vTB80%]这15个参数构成的参数组;
(参数组B-3)由vB[vB5%,vB20%,vB40%,vB60%,vB80%]和vAB[vAB5%,vAB20%,vAB40%,vAB60%,vAB80%]这10个参数构成的参数组;
(参数组B-4)由在参数B-1中追加了Vmax、Amax、VmaxT和AmaxT的29个参数构成的参数组。
(4-3)模板检体的解析
由来自(3)中得到的各模板检体的凝固反应曲线,依照(4-1)~(4-2)的步骤算出校正1次曲线,接着,制作分别具有上述参数组A-1~A-4、B-1~B-4和比较参数组1的构成的模板参数组A-1~A-4、B-1~B-4和比较模板参数组1。
将所制作的参数组的构成内容示于表2。
[表2]
分析中使用的各参数组的构成
实施例2使用参数组的被检检体的FVIII活性或异常的判定
(1)FVIII活性的判定
在由被检检体得到的被检参数组与由各模板检体得到的对应的模板参数组之间进行回归分析。参数组使用实施例1中取得的参数组A-1。图16中示出与来自FVIII活性小于0.2%的重症血友病A(VS-HA)患者的被检检体(Sample AF,APTT时间:118.1秒,FVIII<0.2%)的回归分析结果中的相关系数从高到低的前5份的结果。另外,图16的各图的横轴和纵轴的标签分别表示模板检体和被检检体的FVIII活性和APTT时间。由于这5份的相关系数为0.98以上,因此确认了存在在与被检检体Sample AF之间与参数组具有高相关性的模板检体。另外,确认了所选出的5份模板检体(Template A~Template E)均为来自FVIII活性小于0.2%的VS-HA患者的检体。
图17中的A示出与图16中相关系数最高的检体(Template A)的回归直线。图17中的B示出被检检体(Sample AF)和Template A的校正1次曲线。被检检体(Sample AF)和Template A的校正1次曲线具有非常相似的形状,表明两检体的凝血特性近似。由这些结果明确了本分析能够利用于血液检体的FVIII活性的判定。此外,明确了本分析对VS-HA患者检体的检测也有效。
(2)血友病A的严重程度的判定
针对实施例1中取得的参数组A-1~A-4、B-1~B-4和比较参数组1分别进行34份被检检体与各模板检体的回归分析。在被检检体与所有模板检体之间求出参数组的线性回归方程,从中选出回归直线的斜率在0.87~1.13范围的模板检体。接着,从所选出的模板检体中选出相关系数最高的模板检体作为相关性最高的模板检体。将所选出的模板检体的FVIII活性判定为被检检体的FVIII活性。基于判定结果,将被检检体的FVIII活性水平分类为4级(FVIII活性:<1%、1-5%、5-40%和Other)。由所分类的被检检体的FVIII活性水平和利用凝固一步法求出的实际的被检检体的FVIII活性水平,利用下式计算本判定中的FVIII活性水平一致率和FVIII缺乏一致率。FVIII活性水平一致率表示基于判定的被检检体的FVIII活性水平与实际的被检检体的FVIII活性水平一致的比例,FVIII缺乏一致率表示基于判定的被检检体的FVIII缺乏的有无与实际的被检检体的FVIII缺乏的有无一致的比例。
FVIII活性水平一致率(%)=(A11+A22+A33+A44)/D×100
FVIII缺乏一致率(%)=(A11+A12+A13+A21+A22+A23+A31+A32+A33+A44)/D×100
表3~表5为所判定的被检检体的FVIII活性与实际的被检检体的FVIII活性的对比表。将使用参数组A-1~A-4时的对比表示于表3,将使用参数组B-1~B-4时的对比表示于表4,将使用比较参数组1时的对比表示于表5。
[表3]
[表3-A1]使用参数组A-1的分析结果
[表3-A2]使用参数组A-2的分析结果
[表3-A3]使用参数组A-3的分析结果
[表3-A4]使用参数组A-4的分析结果
[表4]
[表4-B1]使用参数组B-1的分析结果
[表4-B2]使用参数组B-2的分析结果
[表4-B3]使用参数组B-3的分析结果
[表4-B4]使用参数组B-4的分析结果
[表5]
[表5]使用参数组1的分析结果
将分析中使用的参数组的种类与FVIII缺乏一致率和FVIII活性水平一致率汇总于表6。使用参数组A或B的方法中,能够以高一致率判定被检检体的FVIII活性水平。
[表6]
实施例3由相关性的评价基准的不同所致的判定结果的差异
为了确认由相关性的评价基准的不同所致的判定结果的差异,在以下的2个条件下实施仅相关性的评价基准不同的比较研究。参数组使用A-4。
相关性评价基准1:在所有模板检体与被检检体之间求出参数组的线性回归方程,从中选出回归直线的斜率包含于0.87~1.13的范围的模板检体,从所选出的模板检体中选出相关系数最高的模板检体(与实施例2相同的评价基准)。
相关性评价基准2:在所有模板检体与被检检体之间求出参数组的线性回归方程,从中选出相关系数最高的模板检体。
将判定结果示于表7所示的(表7-1与表3A-4相同)。将分析中使用的参数的种类以及FVIII缺乏一致率和FVIII活性水平一致率汇总于表8。
[表7]
[表7-1]使用相关性评价基准1的分析结果
[表7-2]使用相关性评价基准2的分析结果
[表8]
实施例4 FIX活性水平的判定
对被检检体中判定为Other(FVIII>40%)但为FIX缺乏的8份检体实施FIX活性的判定。模板检体使用表9的模板检体。参数组使用实施例1中取得的参数组A-1,相关性的评价使用实施例3的相关性评价基准1。通过与实施例2(2)同样的步骤计算FIX活性水平一致率和FIX缺乏一致率。将评价结果示于表10。能够以高一致率判定被检检体的FIX活性水平。
[表9]
模板检体的构成
具有其它因素的检体:除FVIII以外的凝血因子缺失血浆、加入肝素的血浆以及LA阳性血浆
[表10]
[表10]使用参数组A-1的分析结果
实施例5 FVIII活性或异常的判定
(1)被检血液检体和模板检体
作为被检血液检体,使用FVIII活性或FIX活性降低的患者血浆46份检体。该46份检体由30份FVIII缺乏检体(重症(FVIII<1%)10份、中症(FVIII=1-5%)10份、轻症(FVIII=5-40%)10份)、FVIII>40%检体(Other)1份和15份FIX缺乏检体(Other)构成。
模板检体使用将市售的凝固因子缺乏血浆和LA血浆或正常血浆以各种比例混合的混合血浆、以及在市售的FVIII缺乏血浆中添加了FVIII制剂的FVIII添加血浆。凝固因子缺乏血浆和LA血浆使用VIII因子缺乏血浆、IX因子缺乏血浆、V因子缺乏血浆、X因子缺乏血浆、XI因子缺乏血浆、XII因子缺乏血浆、前激肽释放酶缺乏血浆、狼疮抗凝物阳性血浆(均为George King Bio-Medical,Inc.制)。FVIII制剂使用基因重组型凝血因子VIII制剂Advate(Shire Japan制)。作为正常血浆,使用各因子浓度视为100%的正常混合血浆。将正常血浆与各凝固因子缺乏血浆以各种比例混合,分别制备因子浓度为0.25%、0.5、0.75%、1%、2.5%、5%、10%、25%、50%的混合血浆。另外,在FVIII缺乏血浆中添加FVIII制剂而制备FVIII浓度为0.625%、1.25%、2.5%、5%、10%、20%、40%、80%、160%的FVIII添加血浆。此外,在另一FVIII缺乏血浆中添加FVIII制剂而制备FVIII浓度为0.3%、0.6%、1%、2%、4%、8%、16%、32%、64%、128%的FVIII添加血浆。通过以上步骤制备FVIII活性异常的59份检体、FVIII活性正常但其它凝固因子低下的因子缺乏检体80份和LA阳性4份检体这合计143份模板检体。该FVIII活性异常的59份检体的FVIII活性的水平属于血友病A重症(FVIII<1%)、中症(FVIII=1-5%)和轻症(FVIII=5-40%)以及其它(FVIII>40%为Other)中的任一者。剩余的84份检体由于FVIII活性为非异常,因此属于“Other”。
本实施例中,所有被检检体为来自FVIII缺乏患者(血友病A)的检体或来自FIX缺乏患者(血友病B)的检体,另一方面,模板检体是在不使用血友病A、血友病B的患者检体的情况下以市售的因子缺乏血浆、LA阳性血浆为基础而制备的。通过这样的检体的构成,在本实施例中,与实施例2相比,设定了难以正确地判定被检检体的凝固因子的状态的条件。将本实施例中使用的被检检体和模板检体的构成示于表11。
[表11]
被检检体的构成
模板检体的构成
依照实施例1(1)的步骤得到各被检检体和模板检体的凝固反应曲线。将被检检体和模板检体的FVIII活性和APTT的分布示于图18。
(2)参数组的制作
对于各检体,由凝固反应曲线算出未校正1次曲线、未校正2次曲线、校正1次曲线和校正2次曲线。对于各曲线,提取基于10个运算对象区域值S(该曲线的最大高度的5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%和90%)的10个运算对象区域,取得表征各运算对象区域的参数。此外,取得作为以往参数的曲线的最大值和达到其为止的时间(Vmax、RVmax、VmaxT、Amax、RAmax、AmaxT)。将取得的参数示于表12。
[表12]
(3)使用参数组的被检检体的FVIII活性或异常的判定
(3-1)使用单一参数的判定
由表12所示的参数构成参数组。使用表征运算对象区域的参数时,将从基于10个运算对象区域值(x=5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%和90%)的10个运算对象区域中提取的同种的参数集合作为参数组使用。例如,使用参数“vHx”时,将[vH5%,vH10%,vH20%,vH30%,vH40%,vH50%,vH60%,vH70%,vH80%,vH90%]的集作为参数组使用。使用以往参数时,使用与实施例2的比较例相同的参数组。
通过使用该参数组的回归分析,进行被检检体的FVIII活性或异常的判定。在由被检检体得到的被检参数组与由各模板检体得到的对应的模板参数组之间进行一次回归分析。提取回归分析中得到的一次回归方程的斜率为1±0.15以内且该一次回归方程的相关系数大于0.90的模板检体。挑选所提取的模板检体中相关系数最大的模板检体。存在多个相关系数相同的检体时,挑选回归方程的斜率更接近1的模板检体。将所挑选的模板检体的FVIII活性的状态(血友病A重症(FVIII<1%)、中症(FVIII=1-5%)和轻症(FVIII=5-40%)或其它(Other))判定为被检检体的FVIII活性的状态。基于所有被检检体的判定结果,通过与实施例2同样的步骤计算FVIII缺乏一致率和FVIII活性水平一致率。
将所使用的参数组与所得到的FVIII缺乏一致率和FVIII活性水平一致率示于表13和14。FVIII缺乏一致率最大(63.0%)的参数为2次曲线的参数pHx。FVIII活性水平一致率最大(76.1%)的参数为2次曲线的参数mTx。FVIII缺乏一致率与FVIII活性水平一致率的高度不相关。使用以往参数(VmaxT、AmaxT、Vmax、Amax的组合)时的FVIII缺乏一致率为52.2%。
[表13]
[表14]
(3-1)使用组合参数的判定
组合多种表12所示的表征运算对象区域的参数而构成组合参数组。将从基于10个运算对象区域值(x=5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%和90%)的10个运算对象区域中提取的同种的参数集组合2个以上,作为参数组使用。例如,使用参数“vT”与“vB”的组合时,将[vT5%,vT10%,vT20%,vT30%,vT40%,vT50%,vT60%,vT70%,vT80%,vT90%]的集与[vB5%,vB10%,vB20%,vB30%,vB40%,vB50%,vB60%,vB70%,vB80%,vB90%]的集组合而作为参数组使用。
将FVIII缺乏一致率高的组合参数组与得到的FVIII缺乏一致率和FVIII活性水平一致率示于表15和16。表15中示出组合有2种参数时的结果,表16中示出组合有3种参数时的结果。表16中还记载了FVIII活性水平一致率最大的参数组(pNs_pNe_vTB)的结果。
[表15]
[表16]
将上述(3-1)和(3-2)中带来高的FVIII缺乏一致率或FVIII活性水平一致率的参数组的FVIII活性水平判定的结果示于表17。如果所使用的参数种类的数量增加,则发现FVIII缺乏一致率或FVIII活性水平一致率均变高的趋势。另外,根据这些结果,表明与2次曲线相关的参数对于判定有用。
[表17]
实施例6基于不同的判定基准的FVIII活性或异常的判定
(1)方法
使用实施例5中使用的检体,通过与实施例5同样的步骤在被检参数组与模板参数组之间进行一次回归分析。接着,依照以下的不同的判定基准判定被检检体的FVIII活性的状态。
判定基准1:
与实施例5同样地,将一次回归方程的斜率为1±0.15以内且该回归方程的相关系数大于0.90的模板检体中相关系数最高的模板检体的FVIII活性的状态判定为被检检体的FVIII活性的状态。没有适于上述一次回归方程的斜率和相关系数的条件的模板检体时,将被检检体判定为Other。
判定基准2(最多选出法):
提取一次回归方程的斜率为1±0.15以内且该回归方程的相关系数大于0.90的模板检体中相关系数最高的5份模板检体。将这5份检体中以最高频率发现的FVIII活性的状态判定为被检检体的FVIII活性的状态。不同状态的检体存在相同数量时,将更重症的状态判定为该被检检体的状态。没有适于上述一次回归方程的斜率和相关系数的条件的模板检体时,将被检检体判定为Other。
判定基准3(2阶段选出法):
提取来自血友病A患者(重症、中症和轻症)的检体一次回归方程的斜率为1±0.15以内且该回归方程的相关系数大于0.90的模板检体中相关系数最高的5份模板检体。适于上述一次回归方程的斜率和相关系数的条件的模板检体不足5份时,将不足的份数记为ND(参照表18)。求出这5份的血友病A患者(重症[L1]:FVIII<1%,中症[L2]:FVIII=1-5%和轻症[L3]:FVIII=5-40%)的合计数以及其它(Other和ND)的合计数。血友病A患者的合计数更多时,将以最高频率发现现的状态(重症、中症或轻症)判定为被检检体的状态。不同状态的检体存在相同数量时,将更重症的状态判定为被检检体的状态。其它的合计数更多时,将被检检体的状态判定为Other。
将判定步骤的例子示于表18。相关系数位次的<1>的模板检体的FVIII活性与判定基准1中的判定结果一致。占最大数的模板检体的FVIII活性与判定基准2中的判定结果一致。如果模板检体中的L1~L3的合计数更多,则判定基准3为L1~L3中的任一者,如果Other与ND的合计数更多,则判定基准3为Other。
[表18]
L1:FVIII=<1%、L2:FVIII=1-5%、L3:FVIII=5-40%
(2)判定
从表12所示的55种表征运算对象区域的参数中任意地组合3种参数而构成26235种的组合参数组。使用各组合参数组,进行在被检参数组与模板参数组之间使用的一次回归分析,接着,依照判定基准1~3判定被检检体的FVIII活性的状态。通过与实施例2同样的步骤计算FVIII缺乏一致率或FVIII活性水平一致率。进一步计算FVIII缺乏一致率或FVIII活性水平一致率的平均(平均一致率)。
将依照各判定基准求出的FVIII缺乏一致率、FVIII活性水平一致率和平均一致率(也汇总称为一致率)的例子示于表19。
[表19]
表20示出实现了一致率水平的组合参数组的数量。表20的最下行示出各判定基准下的一致率的最大值。FVIII缺乏一致率在任一基准下均为最大78.3%。满足最大的一致率水平(超过75%且为80%以下)的组合参数组的数量在判定基准1下为12,在判定基准2和3下为17。FVIII活性水平一致率在任一基准下均为最大91.3%。满足最大的一致率水平(超过90%且为95%以下)的参数组的数量在判定基准1和3下为1个,在判定基准2下为2个。平均一致率的最大值在判定基准1下为81.5%,在判定基准2和3下为84.8%。满足最大的一致率水平(超过80%且为85%以下)的参数组的数量在判定基准1下为9,在判定基准2和3下为13。
[表20]
实施例7基于不同的阈值的FVIII活性或异常的判定
通过与实施例6同样的步骤,依照判定基准1~3,但变更一次回归方程的斜率的允许范围和相关系数的阈值来判定被检检体的FVIII活性的状态。参数组使用实施例5中显示最大的FVIII缺乏一致率和FVIII活性水平一致率的组合参数组pTW_vTs_vW。一次回归方程的斜率从1±0.05阶段性地变更到1±0.25(即,允许范围0.05~0.25)。另外,相关系数的阈值从>0.75阶段性地变更到>0.98。计算各条件下的FVIII缺乏一致率和FVIII活性水平一致率。将结果示于图19~21。
Claims (22)
1.一种血液检体的分析方法,包括:
取得与将被检血液检体与凝固时间测定试剂混合而成的试样的凝固速度或凝固加速度相关的波形,
提取表征该与凝固速度或凝固加速度相关的波形的多个参数,以及
基于该多个参数判定该被检血液检体中的凝固因子的活性水平或活性异常。
2.根据权利要求1所述的分析方法,其中,所述多个参数包含分别表征与所述凝固速度相关的波形的多个运算对象区域的多个参数,或者包含分别表征与所述凝固加速度相关的波形的多个运算对象区域的多个参数,或者包含它们的组合。
3.根据权利要求2所述的分析方法,其中,所述多个参数包含选自下述参数中的1种以上:
与所述凝固速度相关的波形的多个运算对象区域的加权平均时间vT、加权平均高度vH、峰宽vB、加权平均峰宽vW、加权平均高度的B扁平率vAB、加权平均高度的W扁平率vAW、加权平均时间的B时间率vTB、加权平均时间的W时间率vTW、平均时间vTa、平均高度vHa、平均高度的B扁平率vABa、平均高度的W扁平率vAWa、区域起点时间vTs、区域终点时间vTe、区域中央时间vTm、区域时间宽度vTr、主峰起点时间vNs、主峰终点时间vNe和主峰宽vN,
与所述凝固加速度相关的波形的正峰的多个运算对象区域的加权平均时间pT、加权平均高度pH、峰宽pB、加权平均峰宽pW、加权平均高度的B扁平率pAB、加权平均高度的W扁平率pAW、加权平均时间的B时间率pTB、加权平均时间的W时间率pTW、主峰起点时间pNs、主峰终点时间pNe和主峰宽pN,以及
与所述凝固加速度相关的波形的负峰的多个运算对象区域的加权平均时间mT、加权平均高度mH、峰宽mB、加权平均峰宽mW、加权平均高度的B扁平率mAB、加权平均高度的W扁平率mAW、加权平均时间的B时间率mTB、加权平均时间的W时间率mTW、主峰起点时间mNs、主峰终点时间mNe和主峰宽mN。
4.根据权利要求3所述的分析方法,其中,将与所述凝固速度相关的波形设为F(t)、将F(t)为规定值x的时间设为t1、t2时,所述运算对象区域为满足F(t)≥x的区域,其中,t为时间,t1<t2,所述vT和vH由下述式表示,
这里,
F(t)、t1和t2为与所述F(t)、t1和t2相同的定义,在将从F(t1)到F(t2)的数据分数设为n时,所述vTa、vHa和vTm分别由下述式表示,
所述vB为从所述t1到t2的F(t)≥x的时间长度,
所述vW为从所述t1到t2的F(t)≥vH的时间长度,
所述vTs、vTe分别为t1、t2,
所述vTr为从vTs到vTe的时间长度,
所述vNs为该运算对象区域中小于F(t)显示最大值的时间且显示F(t)=x的时间中的最大的时间,
所述vNe为该运算对象区域中大于F(t)显示最大值的时间且显示F(t)=x的时间中的最小的时间,
所述vN为从vNs到vNe的时间长度,
所述vAB表示该vH与该vB之比,
所述vAW表示该vH与该vW之比,
所述vTB表示该vT与该vB之比,
所述vTW表示该vT与该vW之比,
所述vABa表示该vHa与该vB之比,
所述vAWa表示该vHa与该vW之比。
5.根据权利要求3所述的分析方法,其中,将与所述凝固加速度相关的波形设为F’(t)、将F’(t)为规定值x的时间设为t1、t2时,所述运算对象区域为满足F’(t)≥x的区域,其中,t为时间,t1<t2,所述pT和pH由下述式表示,
这里,
所述pB为从所述t1到t2的F’(t)≥x的时间长度,
所述pW为从所述t1到t2的F’(t)≥pH的时间长度,
所述pNs为该运算对象区域中小于F’(t)显示最大值的时间且显示F’(t)=x的时间中的最大的时间,
所述pNe为该运算对象区域中大于F’(t)显示最大值的时间且显示F’(t)=x的时间中的最小的时间,
所述pN为从pNs到pNe的时间长度,
所述pAB表示该pH与该pB之比,
所述pAW表示该pH与该pW之比,
所述pTB表示该pT与该pB之比,
所述pTW表示该pT与该pW之比。
6.根据权利要求3所述的分析方法,其中,将与所述凝固加速度相关的波形设为F’(t)、将F’(t)为规定值x的时间设为t1、t2时,所述运算对象区域为满足F’(t)≤x的区域,其中,t为时间,t1<t2,所述mT和mH由下述式表示,
这里,
所述mB为从所述t1到t2的F’(t)≤x的时间长度,
所述mW为从所述t1到t2的F’(t)≤mH的时间长度,
所述mNs为该运算对象区域中小于F’(t)显示最小值的时间且显示F’(t)=x的时间中的最大的时间,
所述mNe为该运算对象区域中大于F’(t)显示最小值的时间且显示F’(t)=x的时间中的最小的时间,
所述mN为从mNs到mNe的时间长度,
所述mAB表示该mH与该mB之比,
所述mAW表示该mH与该mW之比,
所述mTB表示该mT与该mB之比,
所述mTW表示该mT与该mW之比。
7.根据权利要求4~6中任一项所述的分析方法,其中,所述规定值x为所述F(t)的最大值的0.5~99%,或者为所述F’(t)的正峰的最大值的0.5~99%,或者为所述F’(t)的负峰的最小值的0.5~99%。
8.根据权利要求2~7中任一项所述的分析方法,其中,所述多个运算对象区域为5~20个的不同的区域。
9.根据权利要求1~8中任一项所述的分析方法,其中,所述判定包括:
将所述多个参数组与多个模板血液检体所对应的参数组进行比较,以及,
基于该比较的结果判定所述被检血液检体中的凝固因子的活性水平或活性异常;
该模板血液检体为已知该凝固因子的活性水平或有无活性异常的血液检体。
10.根据权利要求9所述的分析方法,其中,所述比较包括求出所述被检血液检体的参数组与所述多个模板血液检体所对应的参数组各自之间的相关性。
11.根据权利要求10所述的分析方法,其中,所述判定包括:
选出所述相关性满足规定条件的模板血液检体,以及
将选出的模板血液检体中的所述凝固因子的活性水平或活性异常判定为所述被检血液检体中的凝固因子的活性水平或活性异常。
12.根据权利要求1~11中任一项所述的分析方法,其中,所述凝固因子为凝血因子VIII或凝血因子IX。
13.根据权利要求12所述的分析方法,其中,所述判定包括对来自所述血友病A患者的被检血液检体进行判定。
14.根据权利要求12所述的分析方法,其中,所述判定包括对来自重症、中症或轻症的血友病A患者的被检血液检体进行判定。
15.根据权利要求12所述的分析方法,其中,所述判定包括对来自极重度血友病A、中度重度血友病A、中症或轻症的血友病A患者的被检血液检体进行判定。
16.根据权利要求12所述的分析方法,其中,所述判定包括对来自所述血友病B患者的被检血液检体进行判定。
17.根据权利要求12所述的分析方法,其中,所述判定包括对来自重症、中症或轻症的血友病B患者的被检血液检体进行判定。
18.根据权利要求12所述的分析方法,其中,进一步包括对判定为凝血因子VIII非异常的被检血液检体中的凝血因子IX的活性水平或活性异常进行判定的第2判定工序,
该第2判定工序包括:
将该被检血液检体的所述参数组与已知凝血因子IX的活性水平或有无活性异常的多个模板血液检体所对应的参数组进行比较,以及
基于该比较的结果判定所述被检血液检体中的凝血因子IX的活性水平或活性异常。
19.根据权利要求18所述的分析方法,其中,所述判定包括对来自所述血友病B患者的被检血液检体进行判定。
20.根据权利要求18所述的分析方法,其中,所述判定包括对来自重症、中症或轻症的血友病B患者的被检血液检体进行判定。
21.一种用于进行权利要求1~20中任一项所述的血液检体的分析方法的程序。
22.一种用于进行权利要求1~20中任一项所述的血液检体的分析方法的装置。
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Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115244402A (zh) * | 2020-03-06 | 2022-10-25 | 积水医疗株式会社 | 血液凝固时间测定方法 |
EP4212880A1 (en) * | 2020-09-08 | 2023-07-19 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Blood coagulation reaction analysis method |
JPWO2022092248A1 (zh) * | 2020-10-29 | 2022-05-05 | ||
EP4303586A1 (en) * | 2021-03-05 | 2024-01-10 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method for estimating factor of prolonged coagulation time |
JP2022145224A (ja) | 2021-03-19 | 2022-10-03 | シスメックス株式会社 | 被検者の出血傾向を解析する解析方法、解析装置、解析システム、及び解析プログラム |
CN117881968A (zh) * | 2021-08-31 | 2024-04-12 | 积水医疗株式会社 | 凝血反应异常的检测方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6524861B1 (en) * | 1999-01-22 | 2003-02-25 | Medical Laboratory Automation, Inc. | Blood coagulation analyzer |
CN103688177A (zh) * | 2011-06-17 | 2014-03-26 | 学校法人东日本学园 | 狼疮抗凝物检测用血液凝固时间的测定方法 |
WO2014089346A1 (en) * | 2012-12-07 | 2014-06-12 | T2 Biosystems, Inc. | Methods for monitoring tight clot formation |
CN107533071A (zh) * | 2015-04-24 | 2018-01-02 | 公立大学法人奈良县立医科大学 | 血液受试体的凝固能力的评价方法、以及用于在该方法中使用的试剂、试剂盒及装置 |
JP2018017619A (ja) * | 2016-07-28 | 2018-02-01 | 公立大学法人奈良県立医科大学 | 血友病の重症度の判定方法及び血液検体分析装置 |
JP2018185160A (ja) * | 2017-04-24 | 2018-11-22 | シスメックス株式会社 | 血液検体の分析方法、分析装置及びコンピュータプログラム |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7957793B2 (en) * | 2004-12-22 | 2011-06-07 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Methods for identifying neuronal spikes |
US20130344519A1 (en) * | 2012-06-25 | 2013-12-26 | Bayer Healthcare Llc | Methods and systems for assessment of turbidity kinetics (waveform analysis) in coagulation testing |
JP6430809B2 (ja) | 2014-12-19 | 2018-11-28 | 公立大学法人奈良県立医科大学 | 血液検体を判定するための方法、システム及びコンピュータプログラム、並びに血液検体分析装置 |
JP6871673B2 (ja) | 2015-03-31 | 2021-05-12 | 学校法人東日本学園 | 血液検体を判定するための方法、装置及びコンピュータプログラム、並びに血液検体分析装置 |
JP7220055B2 (ja) | 2017-11-07 | 2023-02-09 | 積水メディカル株式会社 | 血液凝固機能の評価方法 |
-
2020
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Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6524861B1 (en) * | 1999-01-22 | 2003-02-25 | Medical Laboratory Automation, Inc. | Blood coagulation analyzer |
CN103688177A (zh) * | 2011-06-17 | 2014-03-26 | 学校法人东日本学园 | 狼疮抗凝物检测用血液凝固时间的测定方法 |
WO2014089346A1 (en) * | 2012-12-07 | 2014-06-12 | T2 Biosystems, Inc. | Methods for monitoring tight clot formation |
CN107533071A (zh) * | 2015-04-24 | 2018-01-02 | 公立大学法人奈良县立医科大学 | 血液受试体的凝固能力的评价方法、以及用于在该方法中使用的试剂、试剂盒及装置 |
JP2018017619A (ja) * | 2016-07-28 | 2018-02-01 | 公立大学法人奈良県立医科大学 | 血友病の重症度の判定方法及び血液検体分析装置 |
CN107664701A (zh) * | 2016-07-28 | 2018-02-06 | 希森美康株式会社 | 血友病的重症度的判断方法及血液受试体分析装置 |
JP2018185160A (ja) * | 2017-04-24 | 2018-11-22 | シスメックス株式会社 | 血液検体の分析方法、分析装置及びコンピュータプログラム |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
J.HAKU 等: "Optimal monitoring of bypass therapy in Hemophilia A patients with inhibitors by the use of clot waveform analysis", J OF THORMBOSIS AND HAEMOSTASIS, vol. 12, no. 3, 30 March 2014 (2014-03-30), pages 355 - 362 * |
KATAYAMA H 等: "An Evaluation of Hemostatic Abnormalities in Patients With Hemophilia According to the Activated Partial Thromboplastin Time Waveform", CLIN APPL THROMB HEMOST, vol. 24, no. 7, 13 February 2018 (2018-02-13), pages 1171 * |
SHIMA M 等: "Scientific and Standardization Committee. Towards standardization of clot waveform analysis and recommendations for its clinical applications", J THROMB HAEMOST, vol. 11, 31 July 2013 (2013-07-31), pages 1417 - 1420 * |
燕姿辰;杨新春;张新;游松;周丽娜;: "用血栓弹力图评价肝素浓度变化对凝血系统的影响", 沈阳药科大学学报, no. 08, 20 August 2012 (2012-08-20), pages 644 - 649 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20220146537A1 (en) | 2022-05-12 |
JP7402468B2 (ja) | 2023-12-21 |
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EP3919913A4 (en) | 2022-11-09 |
WO2020158948A1 (ja) | 2020-08-06 |
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
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