CN107664701A - 血友病的重症度的判断方法及血液受试体分析装置 - Google Patents

Abstract

本发明涉及血友病的重症度的判断方法及血液受试体分析装置。本发明以提供能以高精度判断重症的血友病患者的血液受试体和出现针对凝血因子的抗体的血友病患者的血液受试体的血友病的重症度的判断方法作为课题。本发明由血友病的重症度的判断方法解决上述的课题，所述方法包括：使血液受试体凝固而取得凝固波形的工序、从上述凝固波形取得凝固速度的平均变化率的工序、及基于上述凝固速度的平均变化率，判断上述血液受试体的血友病的重症度的工序。

Description

血友病的重症度的判断方法及血液受试体分析装置

【技术领域】

本发明涉及血友病的重症度的判断方法及血液受试体分析装置。

【背景技术】

血友病是起因于凝固第VIII因子(FVIII)或凝固第IX因子(FIX)的先天的缺损或功能不全的出血性疾病。在FVIII是原因时称为血友病A，在FIX是原因时称为血友病B。在血友病患者中，在关节内、肌肉内等的深部组织见到出血症状，在重度的例中还发生颅内出血。

血友病的重症度基于血液中的FVIII活性或FIX活性分类。具体而言，以健康者的FVIII活性或FIX活性设为100％，将活性不足1％的患者分类为重症，将活性1％以上、不足5％的患者分类为中等症，将活性5％以上、不足40％的患者分类为轻症。重症血友病患者以与中等症及轻症的患者比显著地高的频度呈出血症状，近年得知，在重症血友病患者之中也特别是FVIII活性低的患者(不足0.2％；Very-Severe Haemophilia A；VS-HA)和不这样的患者(0.2％以上、不足1％；Modestly-Severe Haemophilia A；MS-HA)中，在临床上的重症度或后述的抑制剂的发生概率上有差异。

为了预防重症血友病患者的出血症状，向患者施用凝血因子制剂的补充疗法是有用的。但是，在血友病A患者的10～15％、血友病B患者的1～3％中有时发生针对这样的凝血因子的抗体(抑制剂)。在抑制剂值不足5BU(Bethesda单位)的患者中，也有抑制剂瞬时消失的，在抑制剂值5BU以上的患者中，有抑制剂在血中持续存在的倾向。对于这样的患者而言，由于用凝血因子制剂进行止血管理变得困难，切换为免疫耐受疗法或旁路制剂施用等，不得不变更治疗方针。再者，发生抑制剂的患者可变得比VS-HA患者更重症。从而，从选择适合的治疗方针的观点来看，在早期、以高精度检测抑制剂的出现是重要的。

已知有通过血液检查研究这样的抑制剂的有无的方法。例如，在Matsumoto etal.,A putative inhibitory mechanism in the tenase complex responsible forloss of coagulation function in acquired haemophilia A patients with anti-C2autoantibodies,Thorombosis and Haemostasis 107.2/2012中记载有：将中等症的血友病A患者的血浆受试体(Moderate type HA、2.1±0.9IU/dl)和出现抗体的血友病A患者的血浆受试体(2型)使用凝固曲线的一阶求导曲线的最小值min1(|min1|：最大绝对值)识别。

【发明内容】

【发明要解决的技术课题】

本发明以提供能以高精度判断VS-HA患者的血液受试体等的重症的血友病患者的血液受试体和变得比VS-HA患者更重症的出现对凝血因子的抗体的血友病患者的血液受试体的，血友病的重症度的判断方法作为课题。

【解决课题的技术方案】

由本发明提供血友病的重症度的判断方法，其包括：使血液受试体凝固而取得凝固波形的工序、从上述凝固波形取得凝固速度的平均变化率的工序、及基于上述凝固速度的平均变化率，取得关于上述血液受试体的血友病的重症度的信息的工序。

另外，由本发明提供血液受试体分析装置，其具备：调制含血液受试体和凝固时间测定用试剂的测定试样的测定试样调制部、从调制的测定试样取得凝固波形的信息取得部和控制部，上述控制部以从血液受试体和凝固时间测定用试剂调制测定试样的方式控制上述测定试样调制部，基于上述凝固波形，取得凝固速度的平均变化率，基于上述凝固速度的平均变化率，输出关于血友病的重症度的信息。

【发明效果】

可提供能以高精度判断重症的血友病患者、特别是VS-HA患者的血液受试体，和成为比VS-HA患者更重症的出现对凝血因子的抗体的血友病患者的血液受试体的血友病的重症度的判断方法。

【附图说明】

【图1A】是测定对于正常血浆受试体的透光率而得到的凝固波形的一例。

【图1B】是对图1A的凝固波形进行一阶求导而得到的速度的波形的一例。

【图2】是对凝固波形进行二阶求导而得到的凝固加速度的波形的一例。

【图3】是用本实施方式的方法可能的近似的一例。

【图4】是显示血液受试体分析装置的外观的构成的斜视图。

【图5】是俯视血液受试体分析装置的测定部的内部时的平面图。

【图6】是显示血液受试体分析装置的测定部的构成的图。

【图7】是显示测定装置所具备的灯单元的构成的图。

【图8A】是显示测定装置所具备的检测部的构成的图。

【图8B】是显示测定装置所具备的检测部的构成的图。

【图8C】是显示测定装置所具备的检测部的构成的图。

【图8D】是显示测定装置所具备的检测部的构成的图。

【图9】是显示血液受试体分析装置的控制装置的功能构成的图。

【图10】是显示血液受试体分析装置的控制装置的硬件构成的图。

【图11】是显示利用血液受试体分析装置的血液受试体的测定处理的流程图。

【图12】是显示利用血液受试体分析装置的血液受试体的分析处理的流程图。

【图13】是显示表示利用血液受试体分析装置的分析结果的画面的一例的图。

【图14】是显示使用本实施方式的参数的鉴别的结果的图。

【图15】是显示使用以往的参数的鉴别的结果的图。

【实施方式】

血友病的重症度的判断方法包括使血液受试体凝固而取得凝固波形的工序。

作为血液受试体可举出全血及血浆，优选为血浆。血液受试体优选疑似VS-HA患者的患者来源的血液受试体。在血液受试体中，也可添加有在凝固检查中通常使用的公知的抗凝固剂。作为这样的抗凝固剂，可举出例如柠檬酸3钠。在测定试样的调制前，也可预先将血液受试体加温至对于凝固反应适宜的温度(例如36℃以上38℃以下)。

血液受试体的凝固方法不特别限定，可由本领域技术人员公知的方法进行。例如，可通过使凝固时间测定用试剂接触于血液受试体而调制测定试样，在上述测定试样中使血液受试体凝固进行。

凝固时间测定用试剂只要是用于基于现有技术中公知的测定原理的测定凝固时间的试剂即可。例如，可举出用于测定活化部分促凝血酶原激酶时间、凝血酶原时间、稀释凝血酶原时间、稀释活化部分促凝血酶原激酶时间、高岭土凝固时间、稀释鲁塞尔蝰蛇毒时间、凝血酶时间、及稀释凝血酶时间的至少1种的试剂。凝固时间测定用试剂优选为用于测定活化部分促凝血酶原激酶时间的试剂。也可使用市售的凝固时间测定用试剂及试剂盒。

凝固时间测定用试剂优选含凝固系的活化剂。凝固系的活化剂只要是使与凝固系相关的任何的凝血因子活化的物质即可。作为凝固系的活化剂，例如，可举出鞣花酸、氧化硅、高岭土、硅藻土、组织因子、凝血酶及蛇毒等。鞣花酸也可处于与金属离子形成鳌合物的状态。组织因子可为兔脑或人胎盘来源的组织因子，也可为重组型组织因子。作为蛇毒，可举出鲁塞尔蝰蛇毒、Textarin蛇毒及Ecarin蛇毒等。这些凝固系的活化剂可单独使用，也可将2种以上组合使用。通常，在市售的凝固时间测定用试剂及试剂盒中，根据测定的凝固时间的种类，含任何的凝固系的活化剂。

测定试样中的凝固系的活化剂的终浓度可根据凝固系的活化剂的种类适宜决定。当凝固系的活化剂是鞣花酸时，测定试样中的鞣花酸的终浓度通常是3.5μM以上150μM以下，优选为10μM以上50μM以下。当凝固系的活化剂是组织因子时，测定试样中的组织因子的终浓度通常是0.4μg/mL以上0.7μg/mL以下，优选为0.5μg/mL以上0.6μg/mL以下。

由于磷脂促进凝固反应，凝固时间测定用试剂也可还含磷脂。作为磷脂，可举出磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰胆碱(PC)及磷脂酰丝氨酸(PS)。在本实施方式中，可向凝固时间测定用试剂添加选自PE、PC及PS的1种、优选为2种、更优选为全部种类的磷脂。磷脂可为天然来源磷脂，也可为合成磷脂。在它们之中也优选合成磷脂或纯化至纯度99％以上的天然来源磷脂。PE、PC及PS的脂肪酸侧链不特别限定，例如，可举出棕榈酸、油酸、硬脂酸等。在它们之中也优选油酸。在本实施方式中，磷脂优选处于溶解于适合的溶剂的液体的形态。

测定试样中的磷脂的终浓度可根据磷脂的种类适宜决定。当磷脂是PE时，测定试样中的磷脂的终浓度通常是1μg/mL以上150μg/mL以下，优选为5μg/mL以上50μg/mL以下。当磷脂是PC时，测定试样中的磷脂的终浓度通常是1μg/mL以上100μg/mL以下，优选为5μg/mL以上80μg/mL以下。当磷脂是PS时，测定试样中的磷脂的终浓度通常是0.1μg/mL以上50μg/mL以下，优选为1μg/mL以上10μg/mL以下。当使用2种以上的磷脂时，只要在测定试样中的各磷脂的浓度的合计通常是5μg/mL以上400μg/mL以下，优选为20μg/mL以上100μg/mL以下即可。

凝固时间测定用试剂优选含磷脂及凝固系的活化剂。作为含磷脂及凝固系的活化剂的凝固时间测定用试剂，例如可举出活化部分促凝血酶原激酶时间(APTT)测定用试剂。此时，凝固系的活化剂优选使内源性凝固途径的接触因子活化的物质，例如，可举出鞣花酸、氧化硅、高岭土及硅藻土。

为了在测定试样中使血液凝固开始需要钙离子。在本实施方式中，通过在测定试样的调制中使用含钙离子的水溶液，向测定试样提供钙离子。作为含钙离子的水溶液，优选钙盐的水溶液，例如，可举出氯化钙水溶液、乳酸钙水溶液等。测定试样中的钙离子含量是对于使凝固发生充分的量即可，例如，以氯化钙的浓度表示，通常2mM以上20mM以下，优选为4mM以上10mM以下。以下，含钙离子的水溶液也称为“钙溶液”。

由于添加钙溶液则凝固开始，在测定试样的调制中，钙溶液优选最后添加。测定试样的调制顺序如下。首先，可通过将血液受试体和凝固时间测定用试剂混合，接下来，将得到的混合物和钙溶液混合调制。或者，也可首先，通过将血液受试体和凝固时间测定用试剂混合，接下来，将得到的混合物和钙溶液混合，调制测定试样。当使用市售的凝血酶原时间(PT)测定用试剂时，由于该试剂含组织因子及钙离子，可通过将血液受试体和PT测定用试剂混合调制测定试样。由何顺序调制测定试样根据使用的凝固时间测定用试剂决定即可。

在本实施方式中，在钙溶液的添加前，也可将上述的混合物在对于凝固反应适宜的条件下温育。例如，可举出在35℃以上40℃以下的温度温育2分钟以上5分钟以下的时间的条件。测定试样的调制可用手动方法进行，也可由全自动测定装置进行。作为这样的装置，例如，可举出全自动血液凝固测定装置的CS系列(Sysmex株式会社)等。

当使用含磷脂及凝固系的活化剂的凝固时间测定用试剂时，优选如以下一样调制测定试样。首先，将血液受试体和含磷脂及凝固系的活化剂的凝固时间测定用试剂混合。接下来，将得到的混合物和钙溶液混合。

在本实施方式的方法中，凝固波形使用如上所述调制的测定试样取得。凝固波形是指表示伴随血液受试体的凝固的进行而发生的该血液受试体的光学特性等的经时变化的波形。在本实施方式中，凝固波形也可由光学测定法取得。作为光学测定法，例如，可举出向测定试样照射光而取得透光率等的光学信息的方法。测定也可由全自动测定装置进行。例如，全自动血液凝固测定装置的CS系列(Sysmex株式会社)可测定透光率等的光学信息。

光学信息的取得，从始点起至凝固结束时之间、连续或断续地进行。基于在凝固的过程中连续或断续地测定的光学信息，在该过程的任意的时间点或时间取得关于后述的凝固波形的微分的参数变得可能。其中，始点是指为了取得后述的凝固速度的平均变化率而开始取得构成凝固波形的各标绘的数据的时间点。始点只要是凝固速度的平均变化率的取得无障碍，就不特别限定，优选设定在凝固速度变得最大的时间点之前。例如，始点设定为凝固时间的测定开始点(在图1A及B中的a点)或对表示凝固的开始点(在图1A及B中的b点)或其时间点的数值加算或减算任意的系数而得到的数值所示的时间点，优选设定为凝固时间的测定开始点。

测定时间从通常5秒钟以上1800秒钟以下，优选为10秒钟以上600秒钟以下的范围确定即可。再者，在本实施方式的方法中，当以正常血浆(从健康者得到的血浆)作为血液受试体使用时，通常，在从测定试样的调制时起30秒钟以内凝固结束。

凝固波形优选从向测定试样照射光而得到的光学信息取得。作为这样的光学信息，例如，可举出连续或断续地测定的散射光量、透光率及吸光度等。此时，凝固波形是表示散射光量、透光率或吸光度的经时变化的波形。照射到测定试样的光是在凝固时间的测定中通常使用的光即可，例如，可举出波长660nm左右、优选为660nm的光。光源不特别限定，例如，可举出发光二极管、卤素灯等。另外，在本实施方式中取得的凝固波形中，含凝固波形的曲线自身、及构成凝固波形的各标绘的数据。作为构成凝固波形的各标绘的数据，可举出从始点起的时间及在该时间点的测定试样的光学特定的测定值。

其中，参照图1A，对于在本实施方式的方法中得到的凝固波形的一例进行说明。在图1A中所示的凝固波形中，a点是凝固时间的测定开始点，b点是纤维蛋白析出点(凝固的开始点)，c点是凝固的终点。在一般的凝固时间测定法中，以至纤维蛋白析出的时间作为凝固时间。在图1A中，a-b间的时间表示凝固时间。由于由凝固时间测定用试剂的作用进行凝固，如图1A的a～c所示，测定试样的透光率降低。

血友病的重症度的判断方法包括从凝固波形取得凝固速度的平均变化率的工序。

凝固速度的平均变化率只要反映相对于从始点起的时间的凝固速度的平均变化率，就不特别限制。例如，凝固速度的平均变化率也可为反映凝固速度的平均变化率的近似值。在本实施方式中，取得由凝固波形的微分得到的曲线或微分所涉及的参数等，使用它们，取得凝固速度的平均变化率。

由凝固波形的微分得到的曲线优选为通过对凝固波形进行一阶求导而得到的第一阶求导曲线(速度的波形)。其中，参照图1B，对于速度的波形进行说明。对图1A的凝固波形进行一阶求导，就得到了图1B中所示的表示凝固的速度的波形。在图1B中，以凝固速度(a-c间的速度)成为正值的方式表示波形，但也可以凝固的速度成为负值的方式表示。即，也可取得纵轴的正负与图1B反转的波形。图1B的a点～c点各自对应于图1A的a点～c点。在图1B中，作为凝固的终点的c点是升高的速度成0的点。

由凝固波形的微分得到的曲线优选为不是通过对凝固波形进行二阶求导而得到的二阶求导曲线。原因在于，由于在二阶求导曲线中容易进入噪声，可示不均一的波形(例如图2)，从而在凝血因子的微量定量中，有得不到正确的信息的情况。对于通过对凝固波形进行3次以上微分而得到的曲线也推测同样地变得容易进入噪声。从而，由凝固波形的微分得到的曲线特别优选为一阶求导曲线。

关于凝固波形的微分的参数只要是通过对凝固波形进行至少一阶求导而得到的表示凝固速度等的至少1个的值，就不特别限定。作为关于凝固波形的微分的参数，例如，可举出凝固速度(凝固波形的斜率)、最大凝固速度(凝固波形的斜率的最大值)(|min1|)、至凝固速度变得最大的时间(至|min1|的时间)、至凝固速度成最大的a倍(其中，0<a<1)的时间(至a×|min1|的时间)、凝固波形的平均变化率、至凝固加速度(速度的波形的斜率)变得最大的时间(至|min2|的时间)、至凝固加速度成最大的a倍(其中，0<a<1)的时间(至a×|min2|的时间)或它们的近似值等。关于凝固波形的微分的参数的数可为1个，也可为2个以上。另外，关于凝固波形的微分的参数可为将2个以上的参数组合而得到的值，例如，可举出上述例示的参数的至少2个的和、差、积、比等。

凝固速度的平均变化率基于对凝固波形进行微分而得到的速度的波形算出。作为凝固速度的平均变化率，例如，可举出连接速度的波形上的2点的直线的斜率的大小。速度的波形上的2点选自速度的波形上的任意的点及接近其的周边的点。此2点均优选将速度的波形上的任意的点用(时间,凝固速度)＝(x,f(x))表示，从(0,f(0))～(至|min1|的时间,|min1|)的范围内选择。其中，时间x＝0是始点。凝固速度的平均变化率更优选为，可举出连接点(至|min1|的时间,|min1|)和点(至|min2|的时间,f(至|min2|的时间))的直线的斜率的大小。再者，至|min1|的时间、f(至|min1|的时间)、至|min2|的时间、及f(至|min2|的时间)可各自使用它们的近似值。其中，f(至|min2|的时间)因为可与1/2×|min1|近似，作为f(至|min2|的时间)，可使用1/2×|min1|。另外，至凝固速度成1/2×|min1|的时间(至1/2×|min1|的时间)可与至|min2|的时间近似。因此，作为点(至|min2|的时间,f(至|min2|的时间))，例如，可使用点(至|min2|的时间,1/2×|min1|)、点(至1/2×|min1|的时间,1/2×|min1|)等。

其中，参照图3，对于本实施方式的方法中可能的近似的一例详细地进行说明。图3左下图的波形是来源于健康人的血液受试体的速度的波形，图3右上图是来源于血友病A患者的速度的波形。在这些图中，a的虚线表示与通过点(至|min1|的时间,0)的纵轴平行的直线，其直线和速度的波形的交点相当于点(至|min1|的时间,|min1|)。一方面，b的虚线表示与通过点(至|min2|的时间,0)的纵轴平行的直线，其直线和速度的波形的交点相当于点(至|min2|的时间,f(至|min2|的时间))。其中，f(至|min2|的时间)因为可用1/2×|min1|近似，凝固速度的平均变化率作为连接点(至|min1|的时间,|min1|)和点(至|min2|的时间,1/2×|min1|)的2点的直线的斜率的大小算出。图3中所示的三角形是这样的近似的概念图。

图3中未示，但对于重症血友病患者、特别MS-HA患者及VS-HA患者以及出现抗体的血友病患者(HA-inh)也是同样、可能与上述的近似。

在别的观点来看，凝固速度的平均变化率优选使用最大凝固速度(|min1|)及至凝固速度变得最大的时间(至|min1|的时间)算出，更优选为，进一步使用至凝固加速度变得最大的时间(至|min2|的时间)算出。

在特别优选的实施方式中，凝固速度的平均变化率由以下的式1算出。【数1】(1/2×|min1|)/(至|min1|的时间-至|min2|的时间)…式1

通过使用上述的式1，可仅使用在微分涉及的参数中可简便地取得的参数，算出凝固速度的平均变化率。这基于本发明人依经验发现，在算出使用重症血友病患者、出现抗体的血友病患者及健康人的血液受试体取得的凝固速度的平均变化率时，可将至凝固速度成1/2×|min1|的时间(至1/2×|min1|的时间)用至|min2|的时间近似。从这样的观点看，在本实施方式的方法中，至凝固加速度变得最大的时间也称为是在凝固速度变得最大之前成最大凝固速度的1/2的时间。

血友病的重症度的判断方法包括基于凝固速度的平均变化率，判断血液受试体的血友病的重症度的工序。

血友病是血友病A或血友病B之任一者，优选为血友病A。

在本实施方式中，在凝固速度的平均变化率是基准值以下时，判断为在血液受试体中出现针对凝血因子的抗体的忧虑高，在超基准值时，判断为在血液受试体中出现针对凝血因子的抗体的忧虑不高。其中，“出现抗体”是指在血中抗体以至少能检测的水平存在，但也可指血中抗体水平成为5BU以上的状态。这样的判断结果可成辅助医师诊断在血友病患者的血中出现抑制剂的数据。这样，当出现抗体时，可认为血友病比VS-HA患者重症。与此相比，在凝固速度的平均变化率超基准值时，可成辅助医师诊断在血友病患者的血中不出现抑制剂，但是重症的数据。

在重症血友病、特别第VIII因子活性<0.2IU/dl的VS-HA和出现抗体的血友病中，由于在APTT检查中凝固时间均显著地延长，在凝血因子定量检查中均成定量界限以下，用这样的一般的检查简便地检测抑制剂是困难的。一方面，在血友病患者中，在发生抑制剂时，由于在一般在补充疗法中使用的第VIII因子制剂中止血管理变得困难，有考虑免疫耐受疗法或旁路制剂的施用的必要，在治疗法的选择中早期，以高的特异性并且信赖度检测抑制剂表达是重要的。由本实施方式的方法，如上所述，因为可鉴别第VIII因子活性<0.2IU/dl的VS-HA和出现抗体的血友病，变得可选择适宜于各自的患者的治疗方针。这是无法从现有技术预测的成果。再者，血友病B的情况也是除了第VIII因子被置换为第IX因子之外同样。

基准值不特别限定，本领域技术人员可预先适宜设定。例如，可设定为使用来自重症血友病A患者组及出现抗体的血友病患者组的血液受试体预先取得凝固波形，基于其得到上述的式1的值，可以最高精度分类重症血友病患者组、特别是VS-HA患者组和出现抗体的血友病患者组的值。

[2.血液受试体分析装置]

接下来，参照附图说明血液受试体分析装置的一例。但是，本实施方式不仅限于此例。如图4所示，血液受试体分析装置10具备进行测定试样的调制及测定的测定装置50，与分析由测定装置50取得的测定数据一同给测定装置50指示的控制装置40。测定装置50具备取得来自测定试样的光学信息的测定部20，配置于测定部20的前方的受试体搬送部30。

在测定部20中，设有盖20a及20b、盖20c和电源按钮20d。使用者可开盖20a，将设置于试剂台11及12(参照图5)的试剂容器103更换为新的试剂容器103，或另外新追加别的试剂容器103。在试剂容器103中，贴附着印刷有含收容的试剂的种类和由赋予试剂的序列号组成的试剂ID的条码的条码标记103a。

使用者可开盖20b，更换灯单元27(参照图5)。另外，使用者可开盖20c，更换穿孔机17a(参照图5)。受试体搬送部30将支持在受试体架102上的受试体容器101搬送至由穿孔机17a的抽吸位置。受试体容器101由橡胶制的盖101a密封。

当使用血液受试体分析装置10时，使用者，首先，按下测定部20的电源按钮20d而使测定部20启动，按下控制装置40的电源按钮439而使控制装置40启动。控制装置40启动，则在显示部41显示登录画面。使用者向登录画面输入使用者名及密钥而登录到控制装置40，开始血液受试体分析装置10的使用。

(测定装置的构成)

对于测定装置50的构成，接下来说明。测定部20，如图5所示，具备试剂台11及12、比色杯台13、条码读取器14、比色杯供给部15、捕集器16、受试体分注臂17、试剂分注臂18、紧急受试体设置部19、光纤21、检测部22、比色杯移送部23、加温部24、废弃口25、流体部26和灯单元27。

(测定试样调制部)

测定试样调制部由试剂台11及12、比色杯台13、条码读取器14、比色杯供给部15、捕集器16、受试体分注臂17、试剂分注臂18、紧急受试体设置部19、比色杯移送部23、加温部24、废弃口25、流体部26、及受试体搬送部30构成。试剂台11及12和比色杯台13各自有圆环形状，能旋转地构成。试剂台11及12相当于试剂收纳部，其中加载有试剂容器103。加载在试剂台11及12上的试剂容器103的条码由条码读取器14读取。从条码读取的信息(试剂的种类、试剂ID)被输入控制装置40，储存到硬盘434(参照图9)。

在本实施方式的血液受试体分析装置中，在试剂台11及/或12上加载有各自收容凝固时间测定用试剂、钙溶液等的试剂容器103。另外，试剂台11及/或12也可加载有作为对照受试体收容有正常血浆的试剂容器103。

在比色杯台13中，形成了由能支持比色杯104的多个孔构成的支持部13a。由使用者投入到比色杯供给部15的新的比色杯104由比色杯供给部15依次移送，由捕集器16设置到比色杯台13的支持部13a。

在受试体分注臂17和试剂分注臂18中，以可各自上下移动及旋转移动地方式连接有步进电机。在受试体分注臂17的尖端，以可穿刺受试体容器101的盖101a的方式设置有尖端锐利地形成的穿孔机17a。在试剂分注臂18的尖端中设置有移液器18a。移液器18a的尖端与穿孔机17a不同，平坦地形成。另外，在移液器18a中，连接静电容量式的液面检测传感器213(参照图6)。

由受试体搬送部30(参照图4)将受试体容器101搬送到指定位置，则穿孔机17a由受试体分注臂17的旋转移动位于受试体容器101的正上方。进而，受试体分注臂17向下方移动，穿孔机17a贯通受试体容器101的盖101a，收容到受试体容器101中的血液受试体由穿孔机17a抽吸。当要求紧急的血液受试体被设置于紧急受试体设置部19时，穿孔机17a剌入从受试体搬送部3供给的受试体，抽吸要求紧急的血液受试体。由穿孔机17a抽吸的血液受试体吐出到比色杯台13上的空的比色杯104。

吐出血液受试体的比色杯104由比色杯移送部23的捕集器23a，从比色杯台13的支持部13a移送到加温部24的支持部24a。加温部24将收容到设置在支持部24a的比色杯104的血液受试体用指定的温度(例如36～38℃)加温一定时间。由加温部24的血液受试体的加温结束，则此比色杯104由捕集器23a再把持。进而，此比色杯104在由捕集器23a把持的状态下位于指定位置，在此状态下，由移液器18a抽吸的试剂被吐出到比色杯104内。

在由移液器18a的试剂的分注中，首先，试剂台11及12旋转，收容对应于测定项目的试剂的试剂容器103被搬送到由移液器18a的抽吸位置。进而，基于用于检测原点位置的传感器，移液器18a的上下方向的位置位于原点位置之后，由液面检测传感器213而至移液器18a的下端与试剂的液面接触，移液器18a下降。移液器18a的下端与试剂的液面接触，则移液器18a再下降至可抽吸必要的量的试剂的程度。进而，移液器18a的下降停止，由移液器18a抽吸试剂。由移液器18a抽吸的试剂吐出到由捕集器23a把持的比色杯104。进而，由捕集器23a的振动功能搅拌比色杯104内的血液受试体和试剂。由此，进行测定试样的调制。其后，收容测定试样的比色杯104由捕集器23a，移送到检测部22的支持部22a。

(信息取得部)

信息取得部由光纤21、检测部22及灯单元27构成。灯单元27供给在由检测部22的光学信号的检测中使用的多种波长的光。参照图7说明灯单元27的构成的一例。灯单元27相当于光源，具备卤素灯27a、灯罩27b、聚光透镜27c～27e、圆盘形状的滤器部27f、电机27g、光透过型的传感器27h和光纤偶联器27i。

参照图5，来自灯单元27的光经光纤21供给于检测部22。在检测部22上设有多个孔状的支持部22a，比色杯104变得能插入各支持部22a。在各支持部22a上各自安装有光纤21的端部，来自光纤21的光变得能照射到支持在支持部22a上的比色杯104。检测部22经光纤21向比色杯104照射从灯单元27供给的光，检测透过比色杯104的光(或者来自比色杯104的散射光)的光量。

参照图8A～D显示配在检测部22上的多个支持部22a中之一的构成的例，其他支持部22a也有同样的构成。参照图8A，在检测部22中，形成了插入有光纤21的尖端的圆形的孔22b。再者，在检测部22中，形成了使孔22b与支持部22a连通的圆形的连通孔22c。孔22b的直径大于连通孔22c的直径。在孔22b的端部，配置有使来自光纤21的光聚光的透镜22d。再者，在支持部22a内壁面，在面对连通孔22c的位置上形成了孔22f。此孔22f的里面配置有光检测器22g。光检测器22g相当于光接收部，输出对应于光接收光量的电信号。透过透镜22d的光经连通孔22c、支持部22a及孔22f而聚光到光检测器22g的光接收面。光纤21在端部被插入孔22b的状态下，由片簧22e保持。

参照图8B，比色杯104支持在支持部22a上，则由透镜22d聚光的光透过比色杯104及收容到比色杯104中的试样，入射到光检测器22g。在试样中进行血液凝固反应，则试样的浊度升高。伴随其而透过试样的光的光量(透射光量)减少，光检测器22g的检测信号的水平降低。

参照图8C说明使用散射光时的检测部22的构成。在支持部22a的内侧面，与连通孔22c相同的高度的位置设有孔22h。此孔22h的里面配置有光检测器22i。比色杯104插入于支持部22a，从光纤21发射光，则由比色杯104内的测定试样散射的光经孔22h照射到光检测器22i。在此例中，来自光检测器22i的检测信号示由测定试样的散射光的强度。另外，如图8D所示，也可采用如下形式：可检测透过测定试样的透射光和从测定试样散射的散射光这两者。

如上所述，检测部22向比色杯104照射从灯单元27供给的光，取得来自测定试样的光学信息。取得的光学信息被发送到控制装置40。控制装置40基于光学信息进行分析，将分析结果显示在显示部41。

测定结束后，不要的比色杯104由比色杯台13搬送，由捕集器16废弃到废弃口25。再者，在测定动作时，穿孔机17a和移液器18a由从流体部26供给的清洗液等的液体适宜清洗。

接下来说明测定装置的硬件构成。如图6所示，测定部20含控制部200、步进电机部211、旋转编码器部212、液面检测传感器213、传感器部214、结构部215、光学信息取得部216和条码读取器14。

参照图6，控制部200含CPU201、存储器202、通信接口203和I/O界面204。CPU201执行存储到存储器202中的计算机程序。存储器202由ROM、RAM、硬盘等构成。另外，CPU201经通信接口203使受试体搬送部30驱动的同时，在控制装置40之间进行指示信号及数据的发送接收。另外，CPU201经I/O界面204控制测定部20内的各部的同时，接收从各部输出的信号。

步进电机部211含用于各自驱动试剂台11及12、比色杯台13、捕集器16、受试体分注臂17、试剂分注臂18和比色杯移送部23的步进电机。旋转编码器部212含输出对应于步进电机部211中所含的各步进电机的旋转变位量的脉冲信号的旋转编码器。

液面检测传感器213与设置在试剂分注臂18的尖端的移液器18a连接，检测移液器18a的下端与试剂的液面接触。传感器部214含检测移液器18a的上下方向的位置位于原点位置的传感器和检测电源按钮20d被按下的传感器。机构部215含由比色杯供给部15、紧急受试体设置部19、加温部24、用于驱动流体部26的机构、穿孔机17a和移液器18a的分注动作变得可能的方式向穿孔机17a和移液器18a供给压力的空压源。光学信息取得部216，参照图5，至少含灯单元27和光纤21和检测部22。

(控制部)

接下来说明控制装置40(控制部)的构成。如图4所示，控制装置40由显示部41、输入部42和计算机本体43构成。使用者经输入部42输入血液受试体的测定开始指示，则控制装置40将测定开始指示发送到测定部20使测定开始。控制装置40从测定部20接收光学信息。进而，控制装置40的处理器基于光学信息，算出凝固波形的一阶求导曲线或微分涉及的参数等。另外，控制装置40的处理器也可基于光学信息算出凝固时间。进而，控制装置40的处理器执行用于血液受试体的分析的计算机程序。从而，控制装置40也作为用于血液受试体的分析的计算机系统发挥功能。

对于控制装置40的功能构成，如图9所示，控制装置40具备取得部401、存储部402、算出部403、判断部404和输出部405。取得部401与测定部20能经网络通信地连接。输出部404与显示部41能通信地连接。

取得部401取得从测定部20发送的光学信息。存储部402存储用于算出关于凝固波形的微分的各种参数的值的式、对应于各种参数的正常范围或指定的基准值等。另外，存储部402也可存储用于算出凝固时间的式。算出部403使用用取得部401取得的信息，根据存储部402中存储的式算出各种参数的值。判断部404判断由算出部403算出的参数的值从存储部402中存储的对应于该参数的正常范围脱落与否。输出部405以由算出部403算出的参数的值作为对于血液受试体的参考信息输出。

如图10所示，控制装置40的计算机本体43具备CPU431、ROM432、RAM433、硬盘434、读取装置435、输入输出界面436、通信接口437、图像输出界面438和电源按钮439。CPU431、ROM432、RAM433、硬盘434、读取装置435、输入输出界面436、通信接口437、图像输出界面438及电源按钮439由总线440能通信地连接。

CPU431执行存储到ROM432中的计算机程序及加载到RAM433上的计算机程序。CPU431通过执行应用程序，实现上述的各功能块。由此，计算机系统作为血液受试体分析装置的终端发挥功能。

ROM432由掩模型ROM、PROM、EPROM、EEPROM等构成。在ROM432中记录由CPU431执行的计算机程序及在其中使用的数据。

RAM433由SRAM、DRAM等构成。RAM433在ROM432及硬盘434中记录的计算机程序的阅读出中使用。另外，RAM433在执行这些计算机程序之时，也作为CPU431的作业区域利用。

硬盘434上安装有操作系统、用于CPU431执行的应用程序(用于血液受试体的分析的计算机程序)等的计算机程序、在所述计算机程序的执行中使用的数据、及控制装置40的设定内容。

读取装置435由软盘驱动器、CD-ROM驱动器、DVDROM驱动器等构成。读取装置435可阅读出在CD、DVD等的可移动型记录介质441中记录的计算机程序或数据。

输入输出界面436，例如，由USB、IEEE1394、RS-232C等的串行接口，SCSI、IDE、IEEE1284等的并行接口，由D/A变换器、A/D变换器等组成的模拟接口构成。在输入输出界面436，连接键盘、鼠标等的输入部42。使用者经输入部42输入指示，输入输出界面436接受经输入部42输入的信号。

通信接口437是例如，Ethernet(注册商标)界面等。控制装置40是能由通信接口437向打印机发送打印数据的。通信接口437与测定部20连接，CPU431经通信接口437，在测定部20之间进行指示信号及数据的发送接收。

图像输出界面438与由LCD、CRT等构成的显示部41连接。图像输出界面438将对应于图像数据的影像信号输出到显示部41，显示部41基于从图像输出界面438输出的影像信号显示图像。

参照图6，测定动作时、测定部20的CPU201将使从检测部22(参照图5)输出的检测信号数字化的数据(光学信息)暂时储存在存储器202。存储器202的存储区域在每支持部22a上区分割。在各区中，依次储存在对于在对应的支持部22a上支持的比色杯104照射指定波长的光之时取得的数据(光学信息)。由此，经指定的测定时间而数据依次储存在存储器202。经过测定时间，则CPU201中止对于存储器202的数据的储存，将储存的数据经通信接口203发送到控制装置40。控制装置40对接收的数据进行处理而进行解析，将解析结果显示在显示部41。

(血液受试体分析装置的处理顺序)

在测定部20中的处理主要在测定部20的CPU201的控制之下进行，在控制装置40中的处理主要在控制装置40的CPU431的控制之下进行。从控制装置40接收由使用者输入的测定开始指示，则测定部20开始测定处理。参照图11，测定处理开始，则测定部20从由受试体搬送部搬送的受试体容器101抽吸指定量的血液受试体，将其分注到比色杯台13上的空的比色杯104中。再者，当作为对照受试体还测定正常血浆时，测定部20从试剂收容部中收容的放入正常血浆的试剂容器103抽吸指定量的正常血浆，将其分注到空的比色杯104中。测定部20将分注了受试体的比色杯104移送到加温部24而将比色杯104内的血浆加温到指定温度(例如37℃)。其后，测定部20向比色杯104添加凝固时间测定用试剂及钙溶液而调制测定试样(步骤S11)。

测定部20将添加了各种试剂的比色杯104移送到检测部22，向比色杯104照射光而测定测定试样(步骤S12)。测定部20从始点起的时间、优选为从向比色杯104添加钙溶液的时间点起开始时间的测量。在此测定中，基于波长660nm的光的数据(散射光量或透射光量)在测定时间之间、依次被储存到存储器202。此时，数据在对应于从始点起的经过时间、优选为从钙溶液的添加时间点起的经过时间的状态下储存到存储器202。进而，经过测定时间，则测定部20中止测定，将存储器202中储存的测定结果(数据)发送到控制装置40(步骤S13)。由此，控制装置40从测定部20接收测定结果(数据)(步骤S21：YES)，则控制装置40对于接收的测定结果执行分析处理(步骤S22)。即，控制装置40对于测定试样，从凝固波形算出关于凝固波形的微分的参数。再者，控制装置40也可算出测定试样的凝固时间、凝固波形及速度的波形等。进行分析处理之后，控制装置40执行分析结果的表示处理(步骤S23)。

(关于凝固速度的平均变化率的取得的处理顺序及血友病的重症度的信息的输出)

参照图12说明凝固速度的平均变化率的取得的处理的流程的一例。但是，本实施方式不仅限于此例。

在步骤S101中，控制装置40的取得部401基于从测定部20接收的数据(散射光量或透射光量)，取得光学信息(散射光强度、或者透光率或吸光度)。在步骤S102中，算出部403从取得部401取得的光学信息取得凝固波形，根据存储部402中存储的式算出关于凝固波形的微分的参数。算出部403也可从取得部401取得的光学信息进一步算出凝固时间、凝固波形及速度的波形等。进而，算出部403基于这些算出结果等，根据存储部402中存储的上述式1，算出式1的值。

在步骤S103中，判断部404判断用算出部403算出的式1的值超存储到存储部402中的基准值与否。其中，当式1的值超基准值之时，处理进行到步骤S104。在步骤S104中，判断部404将在血液受试体中出现针对凝血因子的抗体的忧虑不高的判断结果发送到输出部405。一方面，当式1的值在基准值以下之时，处理进行到步骤S105。在步骤S105中，判断部404将在血液受试体中出现针对凝血因子的抗体的忧虑高的判断结果发送到输出部405。

在步骤S106中，输出部405输出判断结果，显示在显示部41，或由打印机打印。或者，也可以声音输出。由此，可将判断结果作为对于血液受试体的参考信息提供给使用者。

作为表示分析结果的画面的一例，参照图13，使用APTT测定用试剂及钙溶液对于表示分析血液受试体的凝固的过程的结果的画面进行说明。画面D1含表示受试体编号的区域D11、表示测定项目名的区域D12、用于表示详细画面的按钮D13、用于表示测定日期的区域D14、表示测定结果的区域D15、表示分析信息的区域D16和表示凝固波形及其一阶求导曲线的区域D17。

在区域D15中显示测定项目和测定值。在区域D15中，“APTTsec”是活化部分促凝血酶原激酶时间。在区域D15中，也可表示式1的值、|min1|等的关于凝固波形的微分的参数的值。

在区域D16中显示分析项目和参考信息。在区域D16中，“Index”是在判断中使用的关于凝固波形的微分的参数的值。“基准值(参考)”是对应于判断中使用的参数值的基准值。“判断(参考)”是利用血液受试体分析装置的判断结果。在图13中示出在血液受试体中出现针对凝血因子的抗体的忧虑高。再者，患者出现针对凝血因子的抗体与否的诊断不仅为此判断结果，优选也考虑其他检查结果等的信息进行。从而，为了示本实施方式涉及的利用血液受试体分析装置的判断结果及基准值是参考信息，表示为“(参考)”。在图13中，将判断结果以“抗体出现的忧虑”的文字表示，也可以标志等的记号或图形标记表示。或者，也可将判断结果用声音输出。

以下，将本发明由实施例说明，但本发明不限于这些实施例。

【实施例】

【实施例：由凝固速度的平均变化率的鉴别】

(1)试剂

作为市售的APTT测定试剂，使用ThromboCheckAPTT-SLA(Sysmex株式会社)及肌动蛋白FS(Siemens Healthcare Diagnostics公司)。作为含钙离子的凝固开始试剂，使用20mM氯化钙液(Sysmex株式会社)。

(2)血液受试体－重症血友病A血浆受试体10个受试体(Severe Haemophilia A；第VIII因子活性<1.0IU/dl)：

VS-HA受试体5个受试体(第VIII因子活性<0.2IU/dl)

MS-HA受试体5个受试体(第VIII因子活性0.2IU/dl～1.0IU/dl)·出现抗体的血友病A受试体10个受试体：

HA-inh 10个受试体(第VIII因子活性<0.2IU/dl)

(3)测定试样的调制及测定

在测定试样的调制及测定中，使用全自动血液凝固测定装置CS-2000i(Sysmex株式会社)。向血浆受试体(50μL)添加血液凝固分析用试剂(50μL)，于37℃温育3分钟。进而，添加20mM氯化钙液(50μL)而调制测定试样。将测定试样的透光率从氯化钙液的添加时起连续测定420秒钟。再者，使用以下血浆受试体。

(4)解析结果

标绘透光率的经时变化而得到凝固波形。另外，对凝固波形的数据进行一阶求导而得到速度的波形数据。再者，作为关于凝固时间和凝固波形的微分的参数，算出至|min1|的时间、|min1|及至|min2|的时间。将这些参数适用于以下的式1，算出凝固速度的平均变化率。结果示于图14。

【数2】(1/2×|min1|)/(至|min1|的时间-至|min2|的时间)…式1

从图14可知，通过对用上述式1算出的凝固速度的平均变化率进行比较，能以非常高的精度(p<0.01)识别出现抗体的受试体(HA-inh)和重症血友病A受试体(VS-HA、MS-HA)。如在后述的比较例中所示，在已知的参数中，将这些用p＜0.05识别。上述的结果在可以相比已知的参数更高精度识别出现抗体的受试体(HA-inh)和重症血友病A受试体(VS-HA、MS-HA)的方面优良。通过由用上述式1算出的参数的鉴别可抑制假阳性及假阴性的概率。由此，因为可以相比以往更高精度鉴别第VIII因子活性＜0.2IU/dl的VS-HA和出现抗体的血友病，变得可选择适宜于各自的患者的治疗方针。

【比较例：由最大凝固速度|min1|的鉴别】

对于出现抗体的受试体(HA-inh)及重症血友病A受试体(VS-HA、MS-HA)，对在上述的实施例的凝固波形解析中取得的微分涉及的参数|min1|(最大凝固速度)进行比较。结果示于图15。

从图15可知，通过对最大凝固速度进行比较，能识别出现抗体的受试体(HA-inh)和重症血友病A受试体(VS-HA、MS-HA)(p＜0.05)。但是，不能以p＜0.01识别。即，由最大凝固速度的鉴别不如由用式1算出的参数的鉴别结果那样精度高。在由最大凝固速度的鉴别中，不如由用式1算出的参数的鉴别那样能抑制假阳性及假阴性的概率。

【符号的说明】

10	血液受试体分析装置
		11、12	试剂台(试剂收容部)
20	测定部
		22g、22i	光检测器(光接收部)
27	灯单元(光源)
		30	受试体搬送部
40	控制装置(控制部)
		41	显示部
42	输入部
		43	计算机本体
50	测定装置(测定试样调制部及信息取得部)

Claims (21)

1.血液受试体分析装置，其具备：

调制含血液受试体和凝固时间测定用试剂的测定试样的测定试样调制部，

从调制的测定试样取得凝固波形的信息取得部，和

控制部，

上述控制部

以从血液受试体和凝固时间测定用试剂调制测定试样的方式控制上述测定试样调制部，

基于上述凝固波形，取得凝固速度的平均变化率，

基于上述凝固速度的平均变化率，输出关于血友病的重症度的信息。

2.权利要求1所述的血液受试体分析装置，其中上述凝固速度的平均变化率基于对上述凝固波形微分而得到的速度的波形算出。

3.权利要求2所述的血液受试体分析装置，其中上述凝固速度的平均变化率是连接上述速度的波形上的2点的直线的斜率的大小。

4.权利要求1～3之任一项所述的血液受试体分析装置，其中上述凝固速度的平均变化率使用最大凝固速度(|min1|)及至凝固速度变得最大的时间(至|min1|的时间)算出。

5.权利要求4所述的血液受试体分析装置，其中上述凝固速度的平均变化率进一步使用至凝固加速度变得最大的时间(至|min2|的时间)算出。

6.权利要求5或6所述的血液受试体分析装置，其中上述凝固速度的平均变化率由以下的式1算出：

(1/2×|min1|)/(至|min1|的时间-至|min2|的时间)…式1。

7.权利要求5所述的血液受试体分析装置，其中至上述凝固加速度变得最大的时间是凝固速度变得最大之前、且至成最大凝固速度的1/2的时间。

8.权利要求1所述的血液受试体分析装置，其中在上述凝固速度的平均变化率在基准值以下时，判断为在上述血液受试体中出现针对凝血因子的抗体的忧虑高。

9.权利要求1所述的血液受试体分析装置，其中上述血液受试体是疑似VS-HA患者的患者来源的血液受试体，

在上述凝固速度的平均变化率在基准值以下时，判断为在上述血液受试体中出现针对凝血因子的抗体的忧虑高，

在上述凝固速度的平均变化率超基准值时，判断为上述血液受试体是VS-HA患者的忧虑不高。

10.权利要求1所述的血液受试体分析装置，其中上述血友病的重症度是血友病A的重症度。

11.权利要求1所述的血液受试体分析装置，其中上述凝固波形是使凝固时间测定用试剂接触于上述血液受试体而调制测定试样，基于向上述测定试样照射光而得到的光学信息取得。

12.权利要求1所述的血液受试体分析装置，其中上述凝固时间测定用试剂是用于测定活化部分促凝血酶原激酶时间的试剂。

13.权利要求1所述的血液受试体分析装置，其中上述光学信息是光的透光率、散射光量或吸光度。

14.血友病的重症度的判断方法，其包括：

使血液受试体凝固而取得凝固波形的工序，

从上述凝固波形取得凝固速度的平均变化率的工序，及

基于上述凝固速度的平均变化率，判断上述血液受试体的血友病的重症度的工序。

15.权利要求14所述的血友病的重症度的判断方法，其中上述凝固速度的平均变化率基于对上述凝固波形微分而得到的速度的波形算出。

16.权利要求15所述的血友病的重症度的判断方法，其中上述凝固速度的平均变化率是连接上述速度的波形上的2点的直线的斜率的大小。

17.权利要求14～16之任一项所述的血友病的重症度的判断方法，其中上述凝固速度的平均变化率使用最大凝固速度(|min1|)及至凝固速度变得最大的时间(至|min1|的时间)算出。

18.权利要求17所述的血友病的重症度的判断方法，其中上述凝固速度的平均变化率进一步使用至凝固加速度变得最大的时间(至|min2|的时间)算出。

19.权利要求18所述的血友病的重症度的判断方法，其中上述凝固速度的平均变化率由以下的式1算出：

(1/2×|min1|)/(至|min1|的时间-至|min2|的时间)…式1。

20.在权利要求18或19所述的血友病的重症度的判断方法，其中至上述凝固加速度变得最大的时间是凝固速度变得最大之前、且至成最大凝固速度的1/2的时间。

21.下列部件用于制造血友病的重症度的判断用装置的用途：

取得血液受试体的凝固波形的部件，

从上述凝固波形取得凝固速度的平均变化率的部件，及

基于上述凝固速度的平均变化率，判断上述血液受试体的血友病的重症度的部件。