CN113329791A - 作为腺苷受体拮抗剂的9-取代的氨基三唑并喹唑啉衍生物、药物组合物及其用途 - Google Patents

作为腺苷受体拮抗剂的9-取代的氨基三唑并喹唑啉衍生物、药物组合物及其用途 Download PDF

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Abstract

在其许多实施方案中，本发明提供了某些结构式(I)的9‑取代的氨基三唑并喹唑啉化合物：(I)，及其药学上可接受的盐(其中，环A、R1和R2如本文所定义)，包含一种或多种这样的化合物(单独和与一种或多种其它治疗活性剂组合)的药物组合物以及它们的制备和使用(单独和与其它治疗剂组合地，作为A2a和/或A2b受体的拮抗剂和在至少部分地由腺苷A2a受体和/或腺苷A2b受体所介导的各种疾病、状况或病症的治疗中)方法。

Description

作为腺苷受体拮抗剂的9-取代的氨基三唑并喹唑啉衍生物、 药物组合物及其用途
发明领域
本发明涉及抑制A2a和A2b腺苷受体中的至少一种的新化合物，及其药学上可接受的盐，以及包含此类化合物和盐的组合物，此类化合物的合成方法，以及它们在治疗至少部分地由腺苷A2a受体和/或腺苷A2b受体介导的多种疾病、状况或病症中的用途。这样的疾病、状况和病症包括但不限于癌症和免疫相关病症。本发明进一步涉及组合疗法，包括但不限于包含本发明的化合物和PD-1拮抗剂的组合。
发明背景
腺苷是一种嘌呤核苷化合物，其由腺嘌呤和呋喃核糖(一种核糖分子)组成。腺苷天然存在于哺乳动物中，并在各种生化过程，包括能量转移(如三磷酸腺苷和单磷酸腺苷)和信号传导(如环状单磷酸腺苷)中起重要作用。腺苷在与血管舒张(包括心脏血管舒张)相关的过程中也起着成因作用。它还起神经调质的作用(例如，其被认为参与促进睡眠)。除了参与这些生化过程外，腺苷还用作治疗性抗心律不齐药，用于治疗室上性心动过速和其它适应症。
腺苷受体是一类以腺苷为内源性配体的嘌呤型G蛋白偶联受体。人中的四种类型的腺苷受体称为A1、A2a、A2b和A3。其中A1的调节已经被提出用于管理和治疗神经性障碍、哮喘以及心脏和肾功能衰竭。A3的调节已经被提出用于管理和治疗哮喘和慢性阻塞性肺病、青光眼、癌症、中风和其它适应症。A2a和A2b受体的调节也被认为具有潜在的治疗用途。
在中枢神经系统中，A2a拮抗剂被认为显示出抗抑郁特性并刺激认知功能。A2a受体以高密度存在于已知在运动控制中很重要的基底神经节中。因此，A2a受体拮抗剂被认为可用于治疗抑郁症和改善由于神经变性疾病(如帕金森病、老年性痴呆(如阿尔茨海默氏病中的)引起和各种器质性精神病中的的运动障碍。
在免疫系统中，通过表达在多种免疫细胞和内皮细胞上的A2a受体和A2b受体的腺苷信号传递已被确定为在炎症应答过程中对保护组织具有重要作用。以这种方式(和其它方式)，肿瘤已经显示出通过抑制免疫功能和促进耐受而逃避宿主反应。(参见, 例如,Fishman, P., 等人, Handb. Exp. Pharmacol. (2009) 193：399-441)。此外，已经发现在各种肿瘤细胞中A2a和A2b细胞表面腺苷受体被上调。因此，A2a和/或A2b腺苷受体的拮抗剂代表了一类新的有希望的肿瘤治疗剂。例如，A2a腺苷受体的激活导致多种细胞类型的对肿瘤的免疫应答的抑制，其包括但不限于：抑制自然杀伤细胞的细胞毒性，抑制肿瘤特异性CD4 +/CD8+活性，促进LAG-3和Foxp3+调节性T细胞的产生，和介导调节性T细胞的抑制。腺苷A2a受体抑制还被证明通过增强的抗肿瘤T细胞应答来提高PD-1抑制剂的效力。由于已将这些免疫抑制途径中的每一种鉴定为肿瘤逃避宿主反应的机制，因此癌症免疫治疗方案(包括单独或与一种或多种被设计为减轻免疫抑制的其它治疗剂一起使用的A2a和/或A2b受体的拮抗剂)可能导致增强的肿瘤免疫疗法。(参见, 例如, P. Beavis, 等人, CancerImmunol. Res. DOI：10.1158/2326-6066. CIR-14-0211, 2015年2月11日; Willingham,SB., 等人, Cancer Immunol. Res., 6(10), 1136-49; 和Leone RD, 等人, CancerImmunol. Immunother., 2018年8月, 第67卷, 第8期, 1271-1284)。
当用化学疗法和放射疗法治疗时，癌细胞将ATP释放到肿瘤微环境中，其随后被转化为腺苷。(参见 Martins, I., 等人, Cell Cycle, 第8卷, 第22期, 第3723-3728页。)然后，腺苷可以结合A2a受体，并通过诸如上述那些的机制钝化抗肿瘤免疫应答。已经提出在化学疗法或放射疗法期间施用A2a受体拮抗剂导致肿瘤特异性T细胞的扩增，同时防止肿瘤特异性调节性T细胞的诱导。(Young, A., 等人, Cancer Discovery (2014) 4：879-888)。
考虑到它们的不同作用机理，A2a受体拮抗剂与抗肿瘤疫苗的组合被认为提供了至少累加的治疗作用。此外，A2a受体拮抗剂与检查点阻断剂联合可能是有用的。例如，PD-1抑制剂和腺苷A2a受体抑制剂的组合被认为减轻了肿瘤抑制肿瘤特异性效应T细胞的活性的能力。(参见, 例如, Willingham, SB., 等人, Cancer Immunol. Res.; 6(10), 1136-49; Leone, RD., 等人, Cancer Immunol. Immunother., 2018年8月, 第67卷, 第8期,第1271-1284页; Fishman, P., 等人, Handb. Exp. Pharmacol. (2009) 193：399-441;和Sitkovsky, MV., 等人, (2014) Cancer Immunol. Res 2：598-605。)。
A2b受体是一种存在于各种细胞类型中的G蛋白偶联受体。与包括A2a在内的其它腺苷受体亚型相比，A2b受体需要更高浓度的腺苷进行激活。(Fredholm, BB., 等人,Biochem. Pharmacol. (2001) 61：443-448)。例如，在观察到缺氧的肿瘤中已经看到激活A2b的状况。因此，A2b受体可能在与大量腺苷释放相关的病理生理状况中起重要作用。尽管与A2b受体介导的抑制有关的途径尚未得到很好的理解，但抑制A2b受体(单独或与A2a受体一起)被认为可能会阻断肿瘤微环境中腺苷的原致癌性功能，包括抑制T-细胞功能和血管生成，并因而扩展了通过抑制这些受体可治疗的癌症的类型。
A2b受体主要在髓样细胞上表达。A2b受体在髓源性抑制细胞(MDSC)上的接合导致其在体外扩增(Ryzhov, S. 等人, J. Immunol. 2011, 187：6120–6129)。MDSC抑制T-细胞增殖和抗肿瘤免疫应答。A2b受体的选择性抑制剂和A2b受体敲除已显示在小鼠模型中通过增加肿瘤微环境中的MDSC抑制肿瘤生长(Iannone, R., 等人, Neoplasia 第13卷 第12期, (2013) 第1400-1409页; Ryzhov, S., 等人, Neoplasia (2008) 10：987–995)。因此，A2b受体抑制已成为治疗涉及髓样细胞的多种癌症的有吸引力的生物学靶标。通过分析可公开获得的TCGA数据库，可以容易地获得表达A2b受体的癌症实例。其中，这样的癌症包括肺癌、结肠直肠癌、头颈癌和宫颈癌，且下面将对其进行进一步详细讨论。
血管生成在肿瘤生长中起重要作用。血管生成过程受到多种因素的高度调节，并在与缺氧有关的特定情况下由腺苷触发。A2b受体在人微血管内皮细胞中表达，在此处其在调节血管生成因子(例如血管内皮生长因子(VEGF))的表达中起着重要作用。在某些肿瘤类型中，已观察到缺氧引起A2b受体的上调，这表明抑制A2b受体可能会通过限制向肿瘤细胞的氧供应来限制肿瘤生长。此外，涉及腺苷酸环化酶激活的实验表明，A2b受体是某些肿瘤细胞中唯一的腺苷受体亚型，提示A2b受体拮抗剂可能对特定的肿瘤类型显示出作用。(参见, 例如, Feoktistov, I., 等人, (2003) Circ. Res. 92：485-492; 和P. Fishman,P., 等人, Handb. Exp. Pharmacol. (2009) 193：399-441)。
考虑到它们有希望的和变化的治疗潜力，本领域仍然需要用于单独或与其它治疗剂组合使用的A2a和/或A2b腺苷受体的强效和选择性抑制剂。本发明解决了这一和其它需求。
发明概述
在一方面中，本发明提供了令人惊奇且有利地发现为腺苷A2a受体和/或腺苷A2b受体抑制剂的化合物(以下称为本发明的化合物)。本发明的化合物具有根据结构式(I)的结构：
Figure 22228DEST_PATH_IMAGE001
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1和R2定义如下。
在另一方面中，本发明提供了在药学上可接受的载体或稀释剂中包含至少一种本发明的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。根据本发明的此类组合物可以任选地进一步包括一种或多种本文所述的另外的治疗剂。
在另一方面中，本发明提供了一种用于治疗或预防需要其的对象(例如，动物或人)中的至少部分地由腺苷A2a受体和/或腺苷A2b受体介导的疾病、状况或病症的方法，所述方法包括向所述对象施用单独或与一种或多种另外的治疗剂组合的治疗有效量的至少一种本发明的化合物或其药学上可接受的盐。下面更全面地描述本发明的这些和其它方面以及实施方案。
发明详述
对于每个以下实施方案，在该实施方案中未明确定义的任何变量如式(I)中所定义。在本文描述的每个实施方案中，除非另有说明，否则独立于彼此选择每个变量。
在一个实施方案中，本发明的化合物具有结构式(I)：
Figure 877052DEST_PATH_IMAGE002
或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自F、Cl、(C1-C6)烷基和O(C1-C6)烷基；
R2选自H、F、Cl、(C1-C6)烷基和O(C1-C6)烷基；
环A是选自以下的基团：
Figure 656789DEST_PATH_IMAGE003
R3选自吡唑基、三唑基和吡啶基，其中所述吡唑基和所述三唑基被1或2个R3A基团取代，并且其中所述吡啶基被1、2或3个R3A基团取代，其中：
每个R3A独立地选自(C1-C6)烷基、O(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-OH、(C1-C6)卤代烷基、O(C1-C6)卤代烷基、氧代、(C1-C4)烷基C(O)(C1-C3)烷基、(C1-C4)烷基CH(OH)(C1-C3)烷基、(C1-C4)烷基S(O)2(C1-C3)烷基、-(CH2)n(C3-C7)环烷基和包含1或2个选自氧和氮的环杂原子的-(CH2)n4-7元单环杂环烷基，其中所述(C3-C7)环烷基和所述4-7元单环杂环烷基各自是未取代的或被1、2或3个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、OH、(C1-C6)烷基和(C1-C6)卤代烷基；
n是0、1或2；
RA1选自H和(C1-C4)烷基；
RA2选自H、F和(C1-C4)烷基；
RA3选自H、F和(C1-C4)烷基；
RA4选自H和OH；和
RA5选自H、F和(C1-C4)烷基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物具有结构式(I.1)：
Figure 989681DEST_PATH_IMAGE004
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1和R2如式(I)中所定义。
在另一个实施方案中，本发明的化合物具有结构式(I.2)：
Figure 804054DEST_PATH_IMAGE005
或其药学上可接受的盐，其中环A、R1和R2如式(I)中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
R1选自F、Cl和OCH3；
R2选自H、F、Cl、CH3和OCH3。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
R1是F；和
R2选自H、F、Cl、CH3和OCH3。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
R1是Cl；和
R2选自H、F、Cl、CH3和OCH3。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
R1是F；和
R2是OCH3。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
R1是F；和
R2是F。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
R1是F；和
R2是H。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是选自以下的基团：
Figure 626516DEST_PATH_IMAGE006
和
Figure 831233DEST_PATH_IMAGE007
，其中R3、RA1、RA2、RA3和RA5如式(I)中所定义；并且其中R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是选自以下的基团：
Figure 30133DEST_PATH_IMAGE008
和
Figure 699012DEST_PATH_IMAGE009
，其中：
R3选自
Figure 630058DEST_PATH_IMAGE010
Figure 384388DEST_PATH_IMAGE011
其中：
每个R3A如式(I)中所定义；
每个RAa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；
RA1、RA2、RA3和RA5如式(I)中所定义；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是选自以下的基团：
Figure 121400DEST_PATH_IMAGE012
和
Figure 644785DEST_PATH_IMAGE013
，其中：
R3选自
Figure 12312DEST_PATH_IMAGE014
Figure 253938DEST_PATH_IMAGE015
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 529061DEST_PATH_IMAGE016
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；
RA1、RA2、RA3和RA5如式(I)中所定义；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在紧接在前的实施方案的一个替代方案中：
RA1选自H、CH3和CH2CH3；
RA2选自H、F、CH3和CH2CH3；
RA3选自H和F；和
RA5是H。
在紧接在前的实施方案的另一替代方案中：
RA1选自H和CH3；
RA2是H；
RA3是H；和
RA5是H。
在紧接在前的实施方案的另一替代方案中：
RA1是H；
RA2是H；
RA3是H；和
RA5是H。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 110215DEST_PATH_IMAGE017
，其中R3和RA3如式(I)中所定义；并且其中R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 445382DEST_PATH_IMAGE018
，其中：
R3选自
Figure 174303DEST_PATH_IMAGE019
Figure 211309DEST_PATH_IMAGE020
其中：
每个R3A 如式(I)中所定义；
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；
RA3 如式(I)中所定义；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 709286DEST_PATH_IMAGE021
，其中：
R3选自
Figure 480933DEST_PATH_IMAGE022
Figure 369255DEST_PATH_IMAGE023
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 251760DEST_PATH_IMAGE024
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；
RA3 如式(I)中所定义；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在紧接在前的实施方案的一个替代方案中：
RA3选自H和F。
在紧接在前的实施方案的另一替代方案中：
RA3是H。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 604244DEST_PATH_IMAGE025
，其中R3 如式(I)中所定义；并且其中R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 484475DEST_PATH_IMAGE026
，其中：
R3选自
Figure 922410DEST_PATH_IMAGE027
Figure 343027DEST_PATH_IMAGE028
其中：
每个R3A 如式(I)中所定义；
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 753280DEST_PATH_IMAGE029
，其中：
R3选自
Figure 866729DEST_PATH_IMAGE030
Figure 791960DEST_PATH_IMAGE031
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 953951DEST_PATH_IMAGE032
Figure 15448DEST_PATH_IMAGE033
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 299799DEST_PATH_IMAGE034
，其中R3 如式(I)中所定义；并且其中R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 650008DEST_PATH_IMAGE035
，其中：
R3选自
Figure 678007DEST_PATH_IMAGE036
Figure 859590DEST_PATH_IMAGE037
其中：
每个R3A 如式(I)中所定义；
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 986946DEST_PATH_IMAGE038
，其中：
R3选自
Figure 886769DEST_PATH_IMAGE039
Figure 452879DEST_PATH_IMAGE040
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 754548DEST_PATH_IMAGE041
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 52805DEST_PATH_IMAGE042
，其中R3、RA1、RA2和RA3如式(I)中所定义；并且其中R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 439924DEST_PATH_IMAGE043
，其中：
R3选自
Figure 809726DEST_PATH_IMAGE044
Figure 635075DEST_PATH_IMAGE045
其中：
每个R3A 如式(I)中所定义；
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；
RA1、RA2和RA3如式(I)中所定义；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 432129DEST_PATH_IMAGE046
，其中：
R3选自
Figure 40965DEST_PATH_IMAGE047
Figure 152141DEST_PATH_IMAGE048
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 162822DEST_PATH_IMAGE049
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；
RA1、RA2和RA3如式(I)中所定义；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在紧接在前的实施方案的一个替代方案中：
RA1选自H、CH3和CH2CH3；
RA2选自H、F、CH3和CH2CH3；和
RA3选自H和F。
在紧接在前的实施方案的另一替代方案中：
RA1选自H和CH3；
RA2是H；和
RA3是H。
在紧接在前的实施方案的另一替代方案中：
RA1是H；
RA2是H；和
RA3是H。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 130778DEST_PATH_IMAGE050
，其中R3、RA1、RA2和RA3如式(I)中所定义；并且其中R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 164593DEST_PATH_IMAGE051
，其中：
R3选自
Figure 876197DEST_PATH_IMAGE052
Figure 741385DEST_PATH_IMAGE053
其中：
每个R3A 如式(I)中所定义；
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；
RA1、RA2和RA3如式(I)中所定义；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 817925DEST_PATH_IMAGE054
，其中：
R3选自
Figure 401353DEST_PATH_IMAGE055
Figure 651069DEST_PATH_IMAGE056
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 574026DEST_PATH_IMAGE057
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；
RA1、RA2和RA3如式(I)中所定义；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在紧接在前的实施方案的一个替代方案中：
RA1选自H、CH3和CH2CH3；
RA2选自H、F、CH3和CH2CH3；和
RA3选自H和F。
在紧接在前的实施方案的另一替代方案中：
RA1选自H和CH3；
RA2是H；和
RA3是H。
在紧接在前的实施方案的另一替代方案中：
RA1是H；
RA2是H；和
RA3是H。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 883784DEST_PATH_IMAGE058
，其中R3、RA1、RA2、RA3和RA4如式(I)中所定义；并且其中R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 954509DEST_PATH_IMAGE059
，其中：
R3选自
Figure 945598DEST_PATH_IMAGE060
Figure 785378DEST_PATH_IMAGE061
其中：
每个R3A 如式(I)中所定义；
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；
RA1、RA2、RA3和RA4 如式(I)中所定义；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在另一个实施方案中，在式(I)、(I.1)和(I.2)中的每一个中：
环A是基团：
Figure 266038DEST_PATH_IMAGE062
，其中：
R3选自
Figure 558479DEST_PATH_IMAGE063
Figure 353260DEST_PATH_IMAGE064
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 47547DEST_PATH_IMAGE065
每个RAa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基；
RA1、RA2、RA3和RA4 如式(I)中所定义；和
R1和R2如式(I)中所定义或如上述R1和R2的任一备择的实施方案中所定义。
在紧接在前的实施方案的一个替代方案中：
RA1选自H、CH3和CH2CH3；
RA2选自H、F、CH3和CH2CH3；
RA3选自H和F；和
RA4选自H和OH。
在紧接在前的实施方案的一个替代方案中：
RA1是H；
RA2是H；
RA3是H；和
RA4选自H和OH。
在另一个实施方案中，本发明的化合物包含在本文中显示为下表中的实施例的那些化合物及其药学上可接受的盐。
在另一方面中，本发明提供了药物组合物，其包含药学上可接受的载体和本发明的化合物或其药学上可接受的盐。根据本发明的这样的组合物可以任选地进一步包括一种或多种如本文所述的另外的治疗剂。
在另一方面中，本发明提供了一种用于制备药物或组合物的方法，所述药物或组合物可用于治疗至少部分地由腺苷A2a受体和/或腺苷介导的疾病、状况或病症，所述方法包括将本发明的化合物与一种或多种药学上可接受的载体组合。
在另一方面中，本发明提供了一种用于治疗或预防需要其的对象(例如, 动物或人)中的至少部分地由腺苷A2a受体和/或腺苷A2b受体介导的疾病、状况或病症的方法，所述方法包括向需要其的对象施用单独或与一种或多种另外的治疗剂组合的治疗有效量的至少一种本发明的化合物或其药学上可接受的盐。本文描述了这样的疾病、状况和病症的具体非限制性实例。
肿瘤学
在一些实施方案中，所述疾病、状况或病症是癌症。本领域普通技术人员认为PD-1拮抗剂和/或A2a和/或A2b抑制剂对其有用的任何癌症均被认为是可通过该实施方案治疗的癌症(作为单一疗法或与在下面讨论的其它治疗剂组合)。表达高水平的A2a受体或A2b受体的癌症属于那些预期可通过本发明的化合物治疗的癌症。通过参考癌症基因组图谱(TCGA)数据库，本领域普通技术人员可以辨别表达高水平的A2a和/或A2b受体的癌症的实例。表达高水平的A2a受体的癌症的非限制性实例包括肾癌、乳腺癌、肺癌和肝癌。表达高水平的A2b受体的癌症的非限制性实例包括肺癌、结肠直肠癌、头颈癌和宫颈癌。
因此，一个实施方案提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向需要这样的治疗的对象施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症是表达高水平的A2a受体的癌症。一个相关的实施方案提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向需要这样的治疗的对象施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症选自肾(或肾脏)癌、乳腺癌、肺癌和肝癌。
另一个实施方案提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向需要这样的治疗的对象施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症是表达高水平的A2b受体的癌症。一个相关的实施方案提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向需要这样的治疗的对象施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症选自肺癌、结肠直肠癌、头颈癌和宫颈癌。
可以通过施用本发明的化合物(单独或与一种或多种下述的另外的药剂组合)治疗的癌症的另外的非限制性实例包括前列腺(包括但不限于转移性去势抗性前列腺癌) 、结肠、直肠、胰腺、宫颈、胃、子宫内膜、脑、肝、膀胱、卵巢、睾丸、头、颈、皮肤(包括黑色素瘤和基底癌)、间皮内膜、白细胞(包括淋巴瘤和白血病)食道、乳房、肌肉、结缔组织、肺(包括但不限于小细胞肺癌、非小细胞肺癌和肺腺癌)、肾上腺、甲状腺、肾脏或骨的癌症。可通过本发明的化合物治疗的另外的癌症包括胶质母细胞瘤、间皮瘤、肾细胞癌、胃癌、肉瘤、绒毛膜癌、皮肤基底细胞癌和睾丸精原细胞瘤，以及卡波西氏肉瘤。
CNS和神经学病症
在其它实施方案中，所述疾病、状况或病症是中枢神经系统或神经学病症。这样的疾病、状况或病症的非限制性实例包括运动障碍，例如震颤、运动迟缓、步态失调、张力失常、运动失调、迟发性运动障碍、其它锥体外系综合征、帕金森氏病和与帕金森氏病相关的病症。本发明的化合物还具有用于预防或减轻引起或加重这样的运动障碍的药物的作用的潜力、或被认为具有这种潜力。
感染
在其它实施方案中，所述疾病、状况或病症是感染性病症。这样的疾病、状况或病症的非限制性实例包括急性或慢性病毒感染、细菌感染、真菌感染或寄生虫感染。在一个实施方案中，病毒感染是人免疫缺陷病毒。在另一个实施方案中，病毒感染是巨细胞病毒。
免疫疾病
在其它实施方案中，所述疾病、状况或病症是免疫相关的疾病、状况或病症。免疫相关的疾病、状况或病症的非限制性实例包括多发性硬化症和细菌感染。(参见, 例如,Safarzadeh, E. 等人, Inflamm Res 2016 65(7)：511-20；和 Antonioli, L., 等人,Immunol Lett S0165-2478(18)30172-X 2018)。
另外的适应症
可能通过抑制A2a和/或A2b腺苷受体全部或部分治疗或预防的其它疾病、状况和病症也是本发明的化合物及其盐的候选适应症。本发明的化合物或其药学上可接受的盐可用于其中的其它疾病、状况或病症的非限制性实例包括对肿瘤抗原的超敏反应的治疗和与骨髓移植或外周血干细胞移植有关的一种或多种并发症的缓解。因此，在另一个实施方案中，本发明提供了通过向所述对象施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐来治疗接受骨髓移植或外周血干细胞移植的对象的方法，所述量足以增加对肿瘤抗原的迟发型超敏反应，延迟移植后恶性肿瘤的复发时间，增加移植后无复发的生存时间，和/或增加长期移植后的生存时间。
联合疗法
在另一方面中，本发明提供了将本发明的化合物或其药学上可接受的盐(或包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐的药学上可接受的组合物)与一种或多种另外的药剂组合使用的方法。这样的另外的药剂可以具有一些腺苷A2a和/或A2b受体活性，或者可替代地，它们可以通过不同的作用机理起作用。在治疗、预防、抑制或改善本发明的化合物或本文所述的其它药物可能具有效用的疾病或状况中，本发明的化合物可以与一种或多种其它药物组合使用，其中与任何一种单独的药物相比，这些一起使用的药物的组合都更安全或更有效。联合疗法可具有累加或协同作用。因此，这样的其它药物可以与本发明的化合物或其药学上可接受的盐同时或相继以通常使用的量施用。当本发明的化合物与一种或多种其它药物同时使用时，在特定的实施方案中，药物组合物可以在单独的剂量中或在单位剂型中含有这样的其它药物和本发明的化合物或其药学上可接受的盐。然而，联合疗法还可以包括其中本发明的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种其它药物以不同或重叠的时间表相继施用的疗法。还可以预期的是，当与一种或多种其它活性成分联合使用时，本发明的化合物和其它活性成分可以以比各自单独使用时更低的剂量使用。因此，除了本发明的化合物或其药学上可接受的盐之外，包含本发明的化合物的药物组合物还包括含有一种或多种其它活性成分的那些。
本发明的化合物与第二活性成分的重量比可以改变，并且将取决于每种成分的有效剂量。通常，将使用每种的有效剂量。因此，例如，当本发明的化合物与另一种试剂组合使用时，本发明的化合物与其它试剂的重量比通常可以在约1000：1至约1：1000的范围内，在特定的实施方案中在约200：1至约1：200的范围内。本发明的化合物和其它活性成分的组合通常也将在上述范围内，但是在每种情况下，通常应使用每种活性成分的有效剂量。
考虑到腺苷的免疫抑制作用，根据本发明的A2a受体拮抗剂、A2b受体拮抗剂和/或A2a/A2b受体双重拮抗剂的施用可以增强免疫疗法例如PD-1拮抗剂的功效。因此，在一个实施方案中，另外的治疗剂包含抗PD-1抗体。在另一个实施方案中，另外的治疗剂是抗PD-L1抗体。
如上所述，PD-1被认为在免疫调节和维持外周耐受中具有重要作用。PD-1在原代T细胞、B细胞和NKT细胞上适度表达，并通过淋巴细胞、单核细胞和髓样细胞上的T细胞和B细胞受体信号传递而上调(Sharpe 等人, Nature Immunology (2007)；8：239-245)。
PD-1的两个已知配体PD-L1 (B7-H1)和PD-L2 (B7-DC)在各种组织中产生的人类癌症中表达。在例如卵巢癌、肾癌、结肠直肠癌、胰腺癌和肝癌的大量样本集中，以及在黑色素瘤中，已显示PD-L1表达与预后不良和总生存期降低相关，而与随后的治疗无关。(Dong等人, Nat Med. 8(8)：793-800 (2002)；Yang 等人, Invest Ophthamol Vis Sci. 49：2518-2525 (2008)；Ghebeh 等人, Neoplasia 8：190-198 (2006)；Hamanishi 等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 104：3360-3365 (2007)；Thompson 等人, Cancer 5：206-211 (2006)；Nomi 等人, Clin. Cancer Research 13：2151-2157 (2007)；Ohigashi 等人, Clin. Cancer Research 11：2947-2953；Inman 等人, Cancer 109：1499-1505(2007)；Shimauchi 等人, Int. J. Cancer 121：2585-2590 (2007)；Gao 等人, Clin.Cancer Research 15：971-979 (2009)；Nakanishi J., Cancer Immunol Immunother.56：1173- 1182 (2007)；和 Hino 等人, Cancer 00：1-9 (2010))。
类似地，发现PD-1在肿瘤浸润淋巴细胞上的表达标记乳腺癌和黑色素瘤中的功能异常的T细胞(Ghebeh 等人, BMC Cancer. 2008 8：5714-15 (2008)；和 Ahmadzadeh 等人, Blood 114：1537-1544 (2009))并与肾癌的预后不良相关(Thompson 等人, ClinicalCancer Research 15：1757-1761(2007))。因此，已经提出表达PD-L1的肿瘤细胞与表达PD-1的T细胞相互作用以减弱T细胞的活化并逃避免疫监视，从而促成了针对肿瘤的免疫应答受损。
靶向PD-1轴的免疫检查点疗法已导致多种人类癌症的临床反应取得了突破性的改善(Brahmer, 等人, N Engl J Med 2012, 366：2455-65；Garon 等人, N Engl J Med2015, 372：2018-28；Hamid 等人, N Engl J Med 2013, 369：134-44；Robert 等人,Lancet 2014, 384：1109-17；Robert 等人, N Engl J Med 2015, 372：2521-32；Robert等人, N Engl J Med 2015, 372：320-30；Topalian 等人, N Engl J Med 2012, 366：2443-54；Topalian 等人, J Clin Oncol 2014, 32：1020-30；和 Wolchok 等人, N EnglJ Med 2013, 369：122-33)。
"PD-1拮抗剂"是指阻断癌细胞上表达的PD-L1与免疫细胞(T细胞、B细胞或NKT细胞)上表达的PD-1的结合，并优选也阻断癌细胞上表达的PD-L2与免疫细胞表达的PD-1的结合的任何化合物或生物分子。PD-1及其配体的替代名称或同义词包括：PDCD1、PD1、CD279和SLEB2(对于PD-1)；PDCD1L1、PDL1、B7H1、B7-4、CD274和B7-H (对于PD-Ll)；和 PDCD1L2、PDL2、B7-DC、Btdc和CD273(对于PD-L2)。在其中人类个体被治疗的本发明的任何治疗方法、药物和用途中，PD-1拮抗剂均阻断人PD-L1与人PD-1的结合，并且优选阻断人PD-Ll和PD-L2二者与人PD-1的结合。人PD-1 氨基酸序列可在NCBI Locus No.：NP 005009中找到。人PD-L1和PD-L2氨基酸序列可分别在NCBI Locus No.：NP_054862和NP_079515中找到。
在本发明的任何治疗方法、药物和用途中有用的PD-1拮抗剂包括单克隆抗体(mAh)或其抗原结合片段，其特异性结合PD-1或PD-L1，并且优选地特异性结合人PD-1或人PD-Ll。mAb可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，并且可以包括人恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，并且在优选的实施方案中，人恒定区是IgG1或IgG4恒定区。在一些实施方案中，抗原结合片段选自Fab、Fab'-SH、F(ab')2、scFv和Fv片段。PD-1拮抗剂的实例包括但不限于派姆单抗(KEYTRUDA®, Merck and Co., Inc.,Kenilworth, NJ, USA)。“派姆单抗” (以前称为MK-3475、SCH 900475 和lambrolizumab且有时称为“pembro”)是一种人源化的IgG4 mAb，其结构在WHO 药物信息, 第27卷, 第2期,第161-162页(2013)中描述。PD-1拮抗剂的另外的实例包括纳武单抗(OPDIVO®, Bristol-Myers Squibb Company, Princeton, NJ, USA)、阿特珠单抗(MPDL3280A；TECENTRIQ®,Genentech, San Francisco, CA, USA)、德瓦鲁单抗 (IMFINZI®, Astra ZenecaPharmaceuticals, LP, Wilmington, DE和阿维鲁单抗 (BAVENCIO®, Merck KGaA,Darmstadt, Germany and Pfizer, Inc., New York, NY)。
在US7488802、US7521051、US8008449、US8354509、US8168757、WO2004/004771、WO2004/072286、WO2004/056875和US2011/0271358中描述了与人PD-1结合且可用于本发明的治疗方法、药物和用途的单克隆抗体(mAb)的实例。
在WO2013/019906、W02010/077634 Al和US8383796中描述了与人PD-Ll结合且可用于本发明的治疗方法、药物和用途的mAb的实例。在本发明的治疗方法、药物和用途中可用作PD-1拮抗剂的具体抗人PD-L1 mAb包括MPDL3280A、BMS-936559、MEDI4736、MSB0010718C和分别包含WO2013/019906的SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：21的重链和轻链可变区的抗体。
可用于本发明的任何治疗方法、药物和用途中的其它PD-1拮抗剂包括特异性结合PD-1或PD-L1，并优选特异性结合人PD-1或人PD-L1的免疫粘附素，例如，含有与恒定区如免疫球蛋白分子的Fc区融合的PD-L1或PD-L2的细胞外或PD-1结合部分的融合蛋白。特异性结合PD-1的免疫粘附素分子的实例描述于WO2010/027827和WO2011/066342中。在本发明的治疗方法、药物和用途中可用作PD-1拮抗剂的具体融合蛋白包括AMP-224(也称为B7-DCIg)，它是与人PD-1结合的PD-L2-FC融合蛋白。
因此，一个实施方案提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向需要其的对象施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在这样的实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐和PD-1拮抗剂同时或相继施用。
根据该实施方案的这样的癌症的具体非限制性实例包括黑色素瘤(包括不可切除的或转移性的黑色素瘤)、头颈癌(包括复发性的或转移性的头颈鳞状细胞癌(HNSCC))、经典霍奇金淋巴瘤(cHL)、尿路上皮癌、胃癌、宫颈癌、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、微卫星高不稳定性(MSI-H)癌、非小细胞肺癌、肝细胞癌、透明细胞肾癌、结肠直肠癌、乳腺癌、鳞状细胞肺癌、基底癌、肉瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、胰腺癌、肝癌、胃肠道癌、多发性骨髓瘤、肾癌、间皮瘤、卵巢癌、肛门癌、胆道癌、食道癌和唾液腺癌。
在一个实施方案中，提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向需要其的人施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症选自不可切除的或转移性的黑色素瘤、复发性的或转移性的头颈鳞状细胞癌(HNSCC)、经典霍奇金淋巴瘤(cHL)、尿路上皮癌、胃癌、宫颈癌、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、微卫星高不稳定性(MSI-H)癌、非小细胞肺癌和肝细胞癌。在一个这样的实施方案中，该药剂是 PD-1拮抗剂。在一个这样的实施方案中，该药剂是派姆单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是纳武单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿特珠单抗。
派姆单抗已获美国FDA批准用于治疗具有不可切除的或转移性的黑色素瘤的患者和用于治疗具有复发性的或转移性的头颈鳞状细胞癌(HNSCC)、经典霍奇金淋巴瘤(cHL)、尿路上皮癌、胃癌、宫颈癌、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、微卫星高不稳定性(MSI-H)癌、非小细胞肺癌和肝细胞癌的某些患者，如KEYTRUDA™ (Merck & Co., Inc., WhitehouseStation, NJ USA；2014年首次获得美国批准，于2018年11月更新)的处方信息所述的那样。在另一个实施方案中，提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向需要其的人施用与派姆单抗组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症选自不可切除的或转移性的黑色素瘤、复发性的或转移性的头颈鳞状细胞癌(HNSCC)、经典霍奇金淋巴瘤(cHL)、尿路上皮癌、胃癌、宫颈癌、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、微卫星高不稳定性(MSI-H)癌、非小细胞肺癌和肝细胞癌。
在另一个实施方案中，提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向需要其的人施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症选自黑色素瘤、非小细胞肺癌、头颈鳞状细胞癌(HNSCC)、霍奇金淋巴瘤、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、尿路上皮癌、高度微卫星不稳定性癌、胃癌、Merkel细胞癌、肝细胞癌、食道癌和宫颈癌。在一个这样的实施方案中，该药剂是PD-1拮抗剂。在一个这样的实施方案中，该药剂是派姆单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是纳武单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿特珠单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是德瓦鲁单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿维鲁单抗。
在另一个实施方案中，提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向需要其的人施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症选自黑色素瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、头颈癌、膀胱癌、乳腺癌、胃肠道癌、多发性骨髓瘤、肝细胞癌、淋巴瘤、肾癌、间皮瘤、卵巢癌、食道癌、肛门癌、胆道癌、结肠直肠癌、宫颈癌、甲状腺癌和唾液腺癌。在一个这样的实施方案中，该药剂是 PD-1拮抗剂。在一个这样的实施方案中，该药剂是派姆单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是纳武单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿特珠单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是德瓦鲁单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿维鲁单抗。
在一个实施方案中，提供了一种治疗不可切除的或转移性的黑色素瘤的方法，该方法包括向需要其的人施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在一个这样的实施方案中，该药剂是派姆单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是纳武单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿特珠单抗。
在一个实施方案中，提供了一种治疗复发性的或转移性的头颈鳞状细胞癌(HNSCC)的方法，该方法包括向需要其的人施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在一个这样的实施方案中，该药剂是派姆单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是纳武单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿特珠单抗。
在一个实施方案中，提供了一种治疗经典霍奇金淋巴瘤(cHL)的方法，该方法包括向需要其的人施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在一个这样的实施方案中，该药剂是派姆单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是纳武单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿特珠单抗。
在一个实施方案中，提供了一种治疗尿路上皮癌的方法，该方法包括向需要其的人施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在一个这样的实施方案中，该药剂是派姆单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是纳武单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿特珠单抗。
在一个实施方案中，提供了一种治疗胃癌的方法，该方法包括向需要其的人施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在一个这样的实施方案中，该药剂是派姆单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是纳武单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿特珠单抗。
在一个实施方案中，提供了一种治疗宫颈癌的方法，该方法包括向需要其的人施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在一个这样的实施方案中，该药剂是派姆单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是纳武单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿特珠单抗。
在一个实施方案中，提供了一种治疗原发性纵隔大B细胞淋巴瘤的方法，该方法包括向需要其的人施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在一个这样的实施方案中，该药剂是派姆单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是纳武单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿特珠单抗。
在一个实施方案中，提供了一种治疗微卫星高不稳定性(MSI-H)癌的方法，该方法包括向需要其的人施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在一个这样的实施方案中，该药剂是派姆单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是纳武单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿特珠单抗。
在一个实施方案中，提供了一种治疗非小细胞肺癌的方法，该方法包括向需要其的人施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在一个这样的实施方案中，该药剂是派姆单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是纳武单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿特珠单抗。
在一个实施方案中，提供了一种治疗肝细胞癌的方法，该方法包括向需要其的人施用与PD-1拮抗剂组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在一个这样的实施方案中，该药剂是派姆单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是纳武单抗。在另一个这样的实施方案中，该药剂是阿特珠单抗。
在另一个实施方案中，另外的治疗剂是除A2a或A2b受体抑制剂以外的至少一种免疫调节剂。免疫调节剂的非限制性实例包括CD40L、B7、B7RP1、抗CD40、抗CD38、抗ICOS、4-IBB配体、树突状细胞癌症疫苗、IL2、IL12、ELC/CCL19、SLC/CCL21、MCP-1、IL-4、IL-18、TNF、IL-15、MDC、IFN-a/-13、M-CSF、IL-3、GM-CSF、IL-13、抗IL-10和吲哚胺2,3 -双加氧酶1(IDOl)抑制剂。
在另一个实施方案中，另外的治疗剂包含放射。这样的放射包括局部放射疗法和全身放射疗法。
在另一个实施方案中，另外的治疗剂是至少一种化学治疗剂。预期与本发明的化合物组合使用的化学治疗剂的非限制性实例包括：培美曲塞、烷化剂(例如氮芥类，例如苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、氮芥、美法仑和尿嘧啶氮芥；氮丙啶类，例如塞替派；甲磺酸酯类，例如白消安；核苷类似物(例如吉西他滨)；亚硝基脲类，例如卡莫司汀、洛莫司汀和链佐星；拓扑异构酶1抑制剂(例如伊立替康)；铂络合物，例如顺铂、卡铂和奥沙利铂；生物还原性烷化剂，例如丝裂霉素、丙卡巴肼、达卡巴嗪和六甲蜜胺)；基于蒽环类抗生素的疗法(例如多柔比星、柔红霉素、表柔比星和伊达比星)；DNA链断裂剂(例如博来霉素)；拓扑异构酶II抑制剂(例如，安吖啶、更生霉素、柔红霉素、伊达比星、米托蒽醌、多柔比星、依托泊苷和替尼泊苷)；DNA小沟结合剂(例如plicamydin)；抗代谢物(例如叶酸拮抗剂，例如甲氨蝶呤和三甲曲沙；嘧啶拮抗剂，例如氟尿嘧啶、氟脱氧尿苷、CB3717、阿扎胞苷、阿糖胞苷和氟尿苷；嘌呤拮抗剂，例如巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、氟达拉滨、喷司他丁；天冬酰胺酶；和核糖核苷酸还原酶抑制剂，例如羟基脲)；微管蛋白相互作用剂(例如长春新碱、雌莫司汀、长春碱、多西紫杉醇、爱波喜龙衍生物和紫杉醇)；激素剂(例如雌激素类；共轭雌激素类；乙炔基雌二醇；己烯雌酚；chlortrianisen；idenestrol；孕激素类，例如己酸羟孕酮、甲羟孕酮和甲地孕酮；和雄激素类，例如睾酮、丙酸睾酮、氟甲睾酮和甲睾酮)；肾上腺皮质类固醇(例如泼尼松、地塞米松、甲基泼尼松龙和泼尼松龙)；促黄体激素释放剂或促性腺素释放激素拮抗剂(例如醋酸亮丙瑞林和醋酸戈舍瑞林)；和抗激素抗原(例如他莫昔芬、抗雄激素药如氟他胺；和抗肾上腺剂如米托坦和氨鲁米特)。
在另一个实施方案中，另外的治疗剂是至少一种信号转导抑制剂(STI)。信号转导抑制剂的非限制性实例包括BCR/ABL激酶抑制剂、表皮生长因子(EGF)受体抑制剂、HER-2/neu受体抑制剂和法呢基转移酶抑制剂(FTI)。
在另一个实施方案中，另外的治疗剂是至少一种抗感染剂。抗感染剂的非限制性实例包括细胞因子，其非限制性实例包括粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和flt3-配体。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种用于治疗或预防病毒感染(例如，慢性病毒感染)的方法，所述病毒感染包括但不限于丙型肝炎病毒(HCV)、人乳头瘤病毒(HPV)、巨细胞病毒(CMV) 、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、水痘带状疱疹病毒、柯萨奇病毒和人免疫缺陷病毒(HIV)。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种用于治疗感染性病症的方法，所述方法包括向需要其的对象施用与疫苗组合的有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，疫苗是抗病毒疫苗，包括例如抗HTV疫苗。预期使用的其它抗病毒剂包括抗HIV、抗HPV、抗HCV、抗HSV剂等。在其它实施方案中，疫苗对结核病或疟疾有效。在其它实施方案中，疫苗是肿瘤疫苗(例如，有效对抗黑色素瘤的疫苗)；所述肿瘤疫苗可以包含遗传上修饰的肿瘤细胞或遗传上修饰的细胞系，包括已被转染以表达粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)的遗传上修饰的肿瘤细胞或遗传上修饰的细胞系。在另一个实施方案中，疫苗包括一种或多种免疫原性肽和/或树突状细胞。
在另一个实施方案中，本发明提供了通过施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种另外的治疗剂来治疗感染，其中相对于在单独施用任一种药剂后观察到的相同的感染的症状而言，在施用本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)和另外的治疗剂二者后观察到感染的症状有所改善。在一些实施方案中，观察到的感染的症状可以是病毒载量减少、CD4+T细胞计数增加、机会性感染减少、存活时间增加、根除慢性感染或其组合。
定义
如本文所有，除非另有说明，以下术语具有以下含义。
假定本文中的文本、方案、实施例、结构式和任何表中的未满足的化合价具有一个或多个氢原子(其数量足以满足化合价)。
当变量在本发明的任何基团或任何化合物(例如芳基、杂环、N(R)2)中出现超过一次时，定义每次出现的变量的基团的选择与其在每次其它出现时的定义无关，除非在局部变量定义中另外指定。
如本文所用，除非另有说明，否则术语“ A2a受体拮抗剂”(等效地，A2a拮抗剂)和/或“A2b受体拮抗剂”(等效地，A2b拮抗剂)是指一种化合物，当根据本文描述的程序测定时，其分别相对于A2a和/或A2b受体显示出小于约1 µM的效能(IC50)。优选的化合物显示出相对于任何其它腺苷受体(例如，A1或A3)而言至少10倍的针对拮抗A2a受体和/或A2b受体的选择性。
如本文所述，除非另有说明，否则化合物在治疗中的使用意指通常以包含其它赋形剂的制剂的组分的形式存在的一定量的化合物以等分的量并在一定时间间隔内施用，其在剂量施用之间的时间间隔内，提供并维持化合物的至少一种药学活性形式的至少治疗性的血清水平。
就组成组合物的组分的数量而使用的短语“至少一种”，例如“至少一种药物赋形剂”是指在所述组合物中存在所指定的组群中的一个成员且可另外地存在多于一个成员。组合物中的组分典型地为所分离的加到所述组合物中的纯物质的等分部分，其中所分离的加到所述组合物中的物质的纯度水平为该类型试剂通常可接受的纯度水平。
无论是用于表示化合物上的取代基或药物组合物的组分，短语“一种或多种”均与“至少一种”相同。
“并行地”和“同时地”在其含义中都包括：(1)在时间上并举地(例如在相同的时间)；和(2)在不同的时间，但是都在共同的治疗时间表的过程内。
“连续地”是指一个接一个。
“相继地”是指多种治疗剂的一系列施用，其在给予每种另外的药剂之间等待一段时间以使有效性得以发挥；也就是说，在施用一种组分后，下一种组分在第一种组分后的有效时段后施用；有效时段是为了受益于第一种组分的施用的实现而给定的时间量。
“有效量”或“治疗有效量”旨在描述提供一定量的至少一种本发明的化合物或包含至少一种本发明的化合物的组合物，所述量可有效治疗或抑制本文描述的疾病或状况且由此产生所需要的治疗、改善、抑制或预防作用。例如，在用一种或多种本发明的化合物(任选与一种或多种另外的药剂组合)治疗本文所述的癌症时，“有效量”(或“治疗有效量”)是指例如提供如下量的至少一种本发明的化合物：在遭受所述疾病、状况或病症的患者中引起治疗反应(包括适于控制、缓解、改善或治疗所述状况或缓解、改善、减轻或消除归因于所述状况的一种或多种症状的应答)和/或长期稳定所述状况，这例如可通过对药效学标志物进行分析或对遭受所述状况的患者进行临床评价来确定。
“患者”和“对象”是指动物，例如哺乳动物(例如人)并且优选是人。
“前药”是指例如在体内通过在血液中水解而迅速转化为母体化合物的化合物，例如，将本发明的化合物的前药转化为本发明的化合物或其盐。充分的论述提供于T.Higuchi 和V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, A.C.S. SymposiumSeries第14卷和Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design,American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987，两者均通过引用并入本文；本发明的范围包括本发明的新型化合物的前药。
术语“取代的”是指对于所述取代基所附着的特定类型的底物而言，一个或多个被列举为取代基的基团(或，在没有具体列举取代基的列表中，在本申请中其它地方指定的取代基)，前提是这种取代不超过底物中存在的键合构型中的原子的正常价态规则，并且取代最终提供了稳定的化合物，也就是说，这种取代不提供彼此孪位或邻近定位的具有彼此反应性的取代基的化合物；并且其中所述取代提供了足够稳固以能够经受从反应混合物中分离到有用的纯度的化合物。
在描述了被基团任选取代的情况下(例如“任选取代的”)，该术语表示如果存在取代基，则作为指定的底物的任选取代基列出的一个或多个所列举的(或默认)基团可以在被默认取代基通常占据的键合位置处存在于底物上，例如，烷基链上的氢原子可以被根据本文提出的“取代的”的定义的任选取代基之一取代。
“烷基”是指可以是直链或支链的包含1至10个碳原子的脂族烃基。“(C1-C6)烷基”是指可以为直链或支链的包含1至6个碳原子的脂族烃基。支链的是指一个或多个低级烷基例如甲基、乙基或丙基连接到线性烷基链上。烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和叔丁基。
“卤代烷基”是指如上所定义的烷基，其中烷基上的一个或多个氢原子(至多并包括每个可利用的氢基团)被卤素原子代替。如本领域技术人员所理解的，本文所用的“卤代”或“卤素”旨在包括氯(Cl)、氟(F)、溴(Br)和碘(I)。通常优选氯(Cl)和氟(F)卤素。
“芳基”是指包含6至14个碳原子，优选6至10个碳原子的芳族单环或多环环系统。芳基可以任选地被一个或多个可以相同或不同并且如本文所定义的“环系统取代基”取代。合适的芳基的非限制性实例包括苯基和萘基。“单环芳基”是指苯基。
“杂芳基”是指包含5至14个环原子，优选5至10个环原子的芳族单环或多环环系统，其中一个或多个环原子是除碳以外的元素，例如氮、氧或硫(单独或组合)。优选的杂芳基含有5至6个环原子。“杂芳基”可以任选地被一个或多个如本文所定义的可以相同或不同的取代基取代。杂芳基根名称前的前缀氮杂、氧杂或硫杂分别表示作为环原子存在的至少一个氮、氧或硫原子。杂芳基的氮原子可任选地被氧化为相应的N-氧化物。“杂芳基”还可包括与如上定义的芳基稠合的如上定义的杂芳基。合适的杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基(其可替代地可称为噻吩基)、嘧啶基、吡啶酮(包括N-取代的吡啶酮类)、异噁唑基、异噻唑基、噁唑基、噁二唑基、噻唑基、噻二唑基、吡唑基、呋咱基、吡咯基、吡唑基、三唑基、1,2,4-噻二唑基、吡嗪基、哒嗪基、喹喔啉基、酞嗪基、氧化吲哚基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[2,1-b]噻唑基、苯并呋咱基、吲哚基、氮杂吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹啉基、咪唑基、噻吩并吡啶基、喹唑啉基、噻吩并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、异喹啉基、苯并氮杂吲哚基、1,2,4-三嗪基、苯并噻唑基等。术语“杂芳基”还指部分饱和的杂芳基基团，例如四氢异喹啉基、四氢喹啉基等。术语“单环杂芳基”是指如上所述的杂芳基的单环形式，并且包括包含1至4个环杂原子的4至7元单环杂芳基，所述环杂原子独立地选自N、O和S及其氧化物。与母体基团的连接点是任何可用的环碳或环杂原子。单环杂芳基基团的非限制性实例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、哒嗪基、吡啶基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、噁二唑基、异噁唑基、吡唑基、呋咱基、吡咯基、吡唑基、三唑基、噻二唑基(例如1,2,4-噻二唑基)、咪唑基和三嗪基(例如1,2,4-三嗪基)及其氧化物。
“环烷基”是指包含3至10个碳原子，优选3至6个碳原子的非芳族完全饱和的单环或多环环系统。环烷基可以任选地被一个或多个如本文所述的可以相同或不同的取代基取代。单环环烷基是指本文所述的环烷基基团的单环形式。合适的单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环戊基、环己基、环庚基等。多环环烷基的非限制性实例包括[1.1.1]-双环戊烷、1-萘烷基、降冰片基、金刚烷基等。
“杂环烷基”(或“杂环基”)是指包含3至10个环原子，优选5至10个环原子的非芳族饱和单环或多环环系统，其中该环系统中的一个或多个原子是除碳以外的元素，例如氮、氧或硫(单独或组合)。环系统中不存在相邻的氧和/或硫原子。优选的杂环烷基含有4、5或6个环原子。杂环基根名称前的前缀氮杂、氧杂或硫杂分别表示作为环原子存在的至少一个氮、氧或硫原子。杂环基环中的任何-NH可例如作为-N(Boc)、-N(CBz)、-N(Tos)基团等被保护而存在；这样的保护也被认为是本发明的一部分。杂环基可以任选地被一个或多个如本文所述的可以相同或不同的取代基取代。杂环基的氮或硫原子可任选地被氧化成相应的N-氧化物、S-氧化物或S,S-二氧化物。因此，术语“氧化物”当在本文所述的一般结构的变量的定义中出现时是指相应的N-氧化物、S-氧化物或S,S-二氧化物。“杂环基”还包括其中=O代替相同碳原子上的两个可用氢的环(即，杂环基包括在环中具有羰基的环)。这样的=O基团在本文中可以被称为“氧代”。这样的基团的一个实例是吡咯烷酮(或吡咯烷酮)：
Figure 699108DEST_PATH_IMAGE066
。如本文所用，术语“单环杂环烷基”是指本文所述的杂环烷基基团的单环形式，并且包括包含1至4个环杂原子的4至7元单环杂环烷基，所述环杂原子独立地选自 N、N-氧化物、O、S、S-氧化物、S(O)和S(O)2。与母体基团的连接点是任何可用的环碳或环杂原子。单环杂环烷基的非限制性实例包括哌啶基、氧杂环丁烷基、吡咯基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、噻唑烷基、1,4-二噁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、β-内酰胺、γ-内酰胺、δ-内酰胺、β-内酯、γ-内酯、δ-内酯和吡咯烷酮及其氧化物。低级烷基取代的氧杂环丁烷基的非限制性实例包括基团：
Figure 682107DEST_PATH_IMAGE067
。
应当指出，在本发明的含杂原子的环系统中，没有在与N、O或S相邻的碳原子上的羟基，并且没有与另一杂原子相邻的碳上的N或S基团。
Figure 77317DEST_PATH_IMAGE068
，没有直接连接到标记2和5的碳上的-OH。
作为键的线
Figure 626110DEST_PATH_IMAGE070
通常表示可能的异构体(例如含有(R)-和(S)-立体化学)的混合物或任一种。例如：
Figure 648905DEST_PATH_IMAGE071
表示含有
Figure 915938DEST_PATH_IMAGE072
和
Figure 114838DEST_PATH_IMAGE073
二者。
如本文所用，波浪线
Figure 455821DEST_PATH_IMAGE074
表示与化合物其余部分的连接点。绘制到环系统中的线(例如：
Figure 714764DEST_PATH_IMAGE075
)表示指示的线(键)可以连接到任何可取代的环原子上。
“氧代”定义为与在本文所述的环烷基、环烯基、杂环基、杂环烯基或其它环中的环碳双键合的氧原子，例如
Figure 469093DEST_PATH_IMAGE076
。
如本领域中众所周知的，除非另有说明，否则从特定原子绘制的键(其中在键的末端没有描述基团)表示通过该键与原子键合的甲基。例如：
Figure 143788DEST_PATH_IMAGE077
表示
Figure 667173DEST_PATH_IMAGE078
。
本发明的一种或多种化合物也可以作为溶剂化物存在或任选地转化为溶剂化物。溶剂化物的制备是众所周知的。因此，例如，M. Caira 等人, J. Pharmaceutical Sci.,93(3), 601-611 (2004)描述了在乙酸乙酯中以及从水中制备抗真菌的氟康唑的溶剂化物。溶剂化物和半溶剂化物，包括水合物(其中溶剂为水或基于水的)等的类似制备由E. C.van Tonder 等人, AAPS PharmSciTech., 5(1), 文章12 (2004)；和 A. L. Bingham 等人, Chem. Commun., 603-604 (2001)描述。典型的非限制性方法包括在高于环境温度下将本发明的化合物溶解在所需量的所需溶剂(例如，有机溶剂、水性溶剂、水或其中两种或更多种的混合物)中，并在有或没有抗溶剂存在的情况下，以足以形成晶体的速率冷却溶液，然后通过标准方法将晶体分离出来。分析技术，例如I.R.光谱法显示晶体中溶剂(包括水)以溶剂化物(或者水合物，在其中将水掺入结晶形式的情况下)的形式存在。
化合物的术语“纯化的”、“以纯化的形式”或“以分离和纯化的形式”是指所述化合物从合成方法或天然来源或其组合中分离后的物理状态。因此，化合物的术语“纯化的”、“以纯化的形式”或“以分离和纯化的形式”是指所述化合物从本文所述的或技术人员公知的一种或多种纯化方法获得后且纯度足以通过本文所述的或技术人员公知的标准分析技术进行表征的物理状态。
本发明还包括通过常规技术获得的分离和纯化形式的本发明的化合物。本发明的化合物及其盐、溶剂化物和前药的多晶型形式旨在包括在本发明中。本发明的某些化合物可以以不同的异构体形式(例如对映异构体、非对映异构体、阻转异构体)存在。本发明的化合物包括其所有异构形式，包括纯形式和两种或更多种的混合物，包括外消旋混合物。
以类似的方式，除非另有说明，否则呈现表现出互变异构的化合物的任何互变异构形式的结构表示均意在包括该化合物的所有这样的互变异构形式。因此，当本发明的化合物、它们的盐及其溶剂化物和前药可以以不同的互变异构形式存在或以这样的形式之间的平衡存在时，该化合物的所有这样的形式均被包含和包括在本发明的范围内。这样的互变异构体的实例包括但不限于酮/烯醇互变异构体形式、亚胺-烯胺互变异构体形式，和例如杂芳族形式，例如以下基团：
Figure 97018DEST_PATH_IMAGE079
。
当实施例中出现的反应方案采用具有一个或多个立体中心的化合物时，立体中心用星号表示，如下所示：
Figure 10747DEST_PATH_IMAGE080
。
因此，以上描述由以下异构体对组成：(i) 反式-异构体((2R,7aS)-2-甲基六氢-1H-吡呤-7a-基)甲胺(化合物 ABC-1)和((2S,7aR)-2-甲基六氢-1H-吡呤-7a-基)甲胺(化合物 ABC-2)；和 (ii) 顺式-异构体((2R,7aR)-2-甲基六氢-1H-吡呤-7a-基)甲胺(化合物ABC-3)和((2S,7aS)-2-甲基六氢-1H-吡呤-7a-基)甲胺(化合物 ABC-4)。
Figure 551450DEST_PATH_IMAGE081
本发明的化合物的所有立体异构体(包括本发明的化合物及其前药的盐和溶剂化物)，例如由于存在于本发明的化合物中的不对称碳而可能存在的立体异构体，并包括对映异构体形式(其可甚至在不存在不对称碳的情况下存在)、旋转异构体形式、阻转异构体和非对映异构体形式均涵盖在本发明的范围内。本发明的化合物的各个立体异构体可以以纯的形式(例如基本上不含其它异构体)分离，或者可以以两种或更多种立体异构体的混合物或外消旋体的形式分离。本发明的手性中心可以具有如IUPAC 1974 Recommendations所定义的S或R构型。术语“盐”、“溶剂化物”、“前药”等的使用旨在等同地应用于本发明的化合物的分离的对映异构体、立体异构体对或组、旋转异构体、互变异构体或外消旋体的盐、溶剂化物和前药。
当可以通过已知方法，例如通过手性色谱法和/或分步结晶，基于其物理化学差异将非对映异构体混合物分离成其单个非对映异构体时，化合物的简单结构表示考虑了该化合物的所有非对映异构体。如所知的，对映异构体也可以通过与合适的光学活性化合物(例如手性助剂，如手性醇或Mosher酰氯)反应而将对映异构体混合物转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构体并将单独分离的非对映异构体转化(例如，水解)为相应的纯的对映异构体而分离。
如本文所用之术语，本发明的化合物的盐，无论是与无机和/或有机酸形成的酸性盐，还是与无机和/或有机碱形成的碱性盐，包括两性离子特性的形成的盐，例如，当化合物含有碱性基团(例如但不限于氮原子，例如胺、吡啶或咪唑)以及酸性基团(例如但不限于羧酸)二者时，都包括在本文所述的本发明的化合物的范围内。由碱性(或酸性)药物化合物形成药学上有用的盐例如被S. Berge 等人, Journal of Pharmaceutical Sciences(1977) 66(1) 1-19；P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217；Anderson 等人, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), AcademicPress, New York；橙皮书(Food & Drug Administration, Washington, D.C. 在它们的网站上)；和 P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.), Handbook ofPharmaceutical Salts：Properties, Selection, and Use, (2002) Int'l. Union ofPure and Applied Chemistry, 第330-331页所讨论。这些公开内容通过引用并入本文。
本发明考虑了所有可用的盐，包括通常被认为可安全用于制备药物制剂的盐，以及目前可由本领域普通技术人员形成且随后被归类为“通常被认为是安全地”用于制备药物制剂的那些，在本文中称为“药学上可接受的盐”。药学上可接受的酸加成盐的实例包括但不限于乙酸盐(包括三氟乙酸盐)、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、扑酸盐、pectinates、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺酸盐(例如本文所提及的那些)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(也称为甲苯磺酸盐)、十一烷酸盐等。
药学上可接受的碱性盐的实例包括但不限于铵盐，碱金属盐(例如钠、锂和钾盐)，碱土金属盐(例如钙和镁盐)，铝盐，锌盐，与有机碱(例如有机胺)例如苄星类、二乙胺、二环己基胺类、哈胺类(与N,N-双(脱氢松香基)乙二胺形成)、N-甲基-D-葡萄糖胺类、N-甲基-D-葡萄糖酰胺类、叔丁基胺类、哌嗪、苯基环己胺、胆碱、氨丁三醇形成的盐以及与氨基酸如精氨酸、赖氨酸等形成的盐。碱性含氮基团可以转化为铵离子或用诸如低级烷基卤化物(例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯)、长链卤化物(例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳基烷基卤化物(例如苄基和苯乙基的溴化物)等的试剂进行季化。
所有这样的酸和碱盐均意图是在本发明的范围内的药学上可接受的盐，并且出于本发明的范围的目的，所有的酸和碱盐均被认为等同于相应化合物的游离形式。
化合物中被称为“被保护的”的官能团是指该基团呈修饰形式，以防止当被保护的化合物经受旨在修饰分子另一区域的特定反应条件时，在被保护的位点处发生不希望的副反应。合适的保护基是已知的，例如，通过参考标准教科书，例如，T. W. Greene 等人,Protective Groups in organic Synthesis (1991), Wiley, New York。
在本发明的化合物中，原子可以表现出其天然同位素丰度，或者一个或多个原子可以被人工富集具有相同原子序数，但是原子质量或质量数不同于主要存在于自然界中的原子质量或质量数的特定同位素。本发明旨在包括本发明的化合物的所有合适的同位素变体。例如，氢(H)的不同同位素形式包括氕(1H)和氘(2H)。氕是自然界中存在的最主要的氢同位素。富集氘可提供某些治疗优势，例如增加体内半衰期或降低剂量要求，或者可提供可用作表征生物样品的标准的化合物。可以通过本领域技术人员公知的常规技术或通过使用合适的同位素富集的试剂和/或中间体通过与本文方案和实施例中描述的那些类似的方法来制备本发明的同位素富集的化合物，而无需进行过度的实验。
本发明还包括与本文所述的那些在结构上相同但区别在于以下事实的同位素标记的本发明的化合物：该形式的化合物中统计学上显著百分比的一个或多个原子被具有不同于通常在自然界中存在的最丰富的同位素的原子质量或质量数的原子质量或质量数，因此改变了本发明的化合物中存在的该同位素的天然存在的丰度的原子代替。可以优先掺入本发明的化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、碘、氟和氯的同位素，例如但不限于：2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl、123I和125I。应当理解，其它同位素也可以通过已知的手段掺入。
本发明的某些同位素标记的化合物(例如，用3H、11C和14C标记的那些)被公认为在使用多种已知技术的化合物和/或底物组织分布测定中特别有用。由于它们易于制备和检测，特别优选氚化的(即3H)和碳-14(即14C)同位素。此外，将天然丰富的同位素替换为较重的同位素，例如，将氕替换为氘(即2H)可能会因更高的代谢稳定性(例如，增加的体内半衰期或降低的剂量要求)而提供某些治疗优势并因此在某些情况下可能是优选的。本发明的同位素标记的化合物通常可以通过用合适的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂，或通过适当制备的前体与为这样的“标记的”反应特别制备的本发明的化合物的众所周知的反应通过遵循类似于下文的反应方案和/或实施例中公开的那些的程序而制备。这些化合物也包括在本发明中。
术语“组合物”旨在涵盖包含指定量的指定成分的产品，以及直接或间接地由指定量的指定成分的组合产生的任何产品。
如本文所用，术语“药物组合物”涵盖包含一种或多于一种(例如两种)药物活性剂如本发明的化合物(任选地与本文所述的另外的药剂一起)以及任何药学上无活性的赋形剂的散装组合物和单个剂量单位。如本领域普通技术人员将理解的，赋形剂是使组合物适应于特定施用途径或帮助将组合物加工成剂型而不自身发挥活性药物作用的任何组分。散装组合物和每个单独的剂量单位可含有固定量的上述一种或多于一种的药物活性剂。散装组合物是尚未形成单个剂量单位的物质。
应当理解，本发明的药物制剂可以包含多于一种的本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)，例如，两种或三种本发明的化合物的组合，每种化合物通过向制剂中加入所需量的呈药学上可接受的纯净形式的化合物而存在于这样的组合物中。还应理解，在配制本发明的组合物中，组合物除一种或多种本发明的化合物外还可包含一种或多种如本文所述的也具有药理活性的其它药剂。
尽管本发明的制剂可以散装形式使用，但是应当理解，对于大多数应用而言，本发明的制剂将被掺入适合向患者施用的剂型中，每种剂型包含一定量的所选制剂，该制剂含有有效量的一种或多种本发明的化合物。合适的剂型的实例包括但不限于适合于以下方面的剂型：(i)口服施用，例如液体、凝胶、粉末、固体或半固体药物组合物(其被装入胶囊或压制成片剂并且可以另外包含一种或多种改变其释放性能的包衣，例如，赋予延迟释放的包衣或具有延长释放性能的制剂)；(ii)适于肌肉内施用(IM)的剂型，例如可注射溶液或混悬液，并且其可以适于形成具有延长释放性能的长效制剂(depot)；(iii)适于静脉内施用(IV)的剂型，例如溶液或混悬液，例如作为待注入盐水IV袋中的IV溶液或浓缩物；(iv)适于通过口腔组织施用的剂型，例如快速溶解的片剂、锭剂、溶液、凝胶、囊剂或针头阵列(适于提供粘膜内施用)；(v)适于通过鼻腔或上呼吸道的粘膜施用的剂型，例如溶液、悬浮液或乳液制剂(用于在鼻或气道中分散)；(vi)适于透皮施用的剂型，例如贴剂、乳膏或凝胶；(vii)适于真皮内施用的剂型，例如微针阵列；和(viii)适合通过直肠或阴道粘膜递送的剂型，例如栓剂。
为了制备包含本发明的化合物的药物组合物，通常将本发明的化合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合。这些赋形剂赋予组合物性能，使其更易于处理或加工，例如，意图压片的粉状药物中的润滑剂或压制助剂，或使制剂适应所需的施用途径，例如提供用于口服施用的制剂的赋形剂，例如通过从胃肠道吸收，透皮或透粘膜施用，例如通过粘性皮肤“贴剂”或含服施用，或注射，例如肌肉内或静脉内施用途径。这些赋形剂在本文中统称为“载体”。尽管可以制备具有更大量的制剂，但是通常制剂可以包含最高达约95％的活性成分。
药物组合物可以是固体、半固体或液体。固体形式制剂可以适应多种施用方式，其实例包括但不限于粉末、可分散颗粒、迷你片、珠，其可以例如用于压片、胶囊化或直接施用。液体形式制剂包括但不限于溶液、混悬液和乳液，其例如(但不仅限于)可以用于制备意图用于肠胃外注射、用于鼻内施用或用于向某些其它粘膜施用的制剂。制备用于向各种粘膜施用的制剂还可以包括使它们适于这种施用的另外的组分，例如粘度改进剂。
例如适合于通过吸入或通过鼻粘膜施用的气雾剂制剂可以包括溶液和粉末形式的固体，其可以与药学上可接受的抛射剂，例如惰性压缩气体如氮气组合。还包括固体形式制剂，其意图在使用前不久转变成混悬液或溶液，例如用于口服或肠胃外施用。这样的固体形式的实例包括但不限于冻干制剂和吸附到固体吸收剂介质中的液体制剂。
本发明的化合物也可以是可例如从液体、栓剂、乳膏、泡沫、凝胶或快速溶解的固体形式透皮或透粘膜地递送的。应当理解，透皮组合物也可以采取乳膏、洗剂、气雾剂和/或乳液的形式，并且可以以单位剂型提供，该剂型包括本领域中任何已知的透皮贴剂，例如掺入了包含药物活性化合物的基质或包含药物活性化合物的固体或液体形式的储库的贴剂。
用于上述各种组合物的药学上可接受的载体和制备方法的实例可以在A.Gennaro (ed.), Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 第20版,(2000), Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD中找到。
优选地，药物制剂为单位剂型。在这样的形式中，将制剂细分为适当大小的单位剂量，其含有适当量的活性组分，例如，达到期望目的的有效量。
所使用的实际剂量可以根据患者的需求和所治疗的状况的严重性而变化。确定用于特定情况的合适剂量方案在本领域技术范围内。为了方便起见，可将每日总剂量分开，并根据需要在一天中分批施用。
根据本发明，腺苷A2a和/或A2b受体的拮抗作用是通过向需要这种治疗的患者施用有效量的一种或多种本发明的化合物或其药学上可接受的盐来实现的。
在一些实施方案中，优选以包含本发明的化合物或其盐和至少一种药学上可接受的载体(本文所述的)的药物组合物的形式施用化合物。应当理解，本发明的药物制剂可以包含多于一种的本发明的化合物或其盐，例如，两种或三种本发明的化合物的组合，或者另外地或可替代地，另一种活性剂，例如本文所述的那些，它们各自通过向制剂中加入所需量的已经以药学上可接受的纯净形式分离的化合物或其盐(或药剂，如适用的话)而存在。
如上所述，优选通过将化合物掺入掺入到剂型(例如，包含有效量的至少一种本发明的化合物(例如1、2或3或1或2或1，且通常是1种本发明的化合物)或其药学上可接受的盐的上述剂型之一)中的药物制剂中来完成本发明的化合物的施用以对A2a和/或A2b受体产生拮抗作用。用于确定具有药学活性的化合物(例如本发明的化合物)的安全和有效的施用的方法是本领域技术人员已知的，例如，如标准文献中所述，例如，如“Physicians’ DeskReference” (PDR), 例如, 1996年版(Medical Economics Company, Montvale, NJ07645-1742, USA), Physician’s Desk Reference, 第56版, 2002 (由MedicalEconomics company, Inc. Montvale, NJ 07645-1742出版)或Physician’s DeskReference, 第57版, 2003 (由Thompson PDR, Montvale, NJ 07645-1742出版)中所述；其公开内容通过引用并入本文。本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐的施用量和频率将根据主治临床医生的判断(考虑诸如患者的年龄、状况和体型以及被治疗的症状的严重性等因素)来调节。本发明的化合物可以以最高达1,000mg的总日剂量施用，所述总日剂量可以以一个日剂量施用，或者可以分成每24小时时段的多个剂量，例如每日两至四个剂量。
如本领域普通技术人员将理解的，本发明的一种或多种化合物的合适剂量水平通常为每天每kg患者体重约0.01至500mg，其可以单剂量或多剂量施用。合适的剂量水平可以是每天约0.01至250mg/kg，每天约0.05至100mg/kg或每天约0.1至50mg/kg。在该范围内，剂量可以是每天0.05至0.5、0.5至5或5至50mg/kg。对于口服施用，可以以含有1.0至1000毫克活性成分，特别是1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克活性成分的片剂的形式提供组合物，用于对待治疗患者的剂量进行症状调节。化合物可以以每天1-4次的方案施用，或者可以每天一次或两次施用。
本领域技术人员将理解，可以根据患者的需要改变利用至少一种本发明的化合物的治疗方案。因此，本发明的方法中使用的本发明的化合物可以以上述方案的变化形式施用。例如，本发明的化合物可以在治疗周期中不连续地而非连续地施用。
通常，无论以何种形式施用，所施用的剂型都将含有一定量的至少一种本发明的化合物或其盐，其将在合适的时间段(例如至少2小时，更优选至少4小时或更长)内以某种形式提供该化合物的治疗有效的血清水平。通常，如本领域中已知的，提供本发明的化合物的治疗有效血清水平的药物组合物的剂量可以在时间上间隔开以在施用治疗的整个时段内连续地提供满足或超过最小治疗有效血清水平的血清水平。如将理解的，所施用的剂型也可以是为药物活性化合物提供延长释放时段的形式，其将在更长的时段内提供治疗性的血清水平，从而需要较不频繁的剂量间隔。如上所述，本发明的组合物可以掺入另外的药物活性成分，或者与其它药物活性剂同时、在相同时间或相继施用，因为这在提供治疗的过程中可能是另外需要或期望的。如将理解的，所施用的剂型也可以是提供药物活性化合物的延长释放时段的形式，其将在更长的时段内提供治疗性的血清水平，从而需要较不频繁的剂量间隔。
制备实施例
使用容易获得的起始物质、试剂和常规合成程序，可以根据以下方案和具体实施例或其变型容易地制备本发明的化合物。在这些反应中，还可以利用本身为本领域普通技术人员已知但未详细提及的变体。通过阅读以下方案和描述，本领域技术人员可以容易地了解和理解用于制备本发明所要求保护的化合物的一般程序。
一般方案1
Figure 194921DEST_PATH_IMAGE082
用于合成G1.6型化合物的一种一般策略是通过一般方案1中所示的四步程序，其中R4对应于式(I)中的环A，并且其中R1、R2和环A如式(I)中所定义。在第一步中，可以在诸如二氯甲烷和吡啶的组合的溶剂中，用1-(异氰酸根合甲基)-2,4-二甲氧基苯处理氨基苄腈G1.1，以形成中间体脲G1.2。在第二步中，可以在诸如二氯甲烷的溶剂中在三苯基膦、四溴化碳和三乙胺存在下将这些脲脱水为相应的碳二亚胺G1.3。在第三步中，在诸如二氯甲烷或二噁烷的溶剂中在乙酸存在下用G1.4型的酰肼处理碳二亚胺G1.3，产生G1.5型的产物。在第四步中，在酸性条件下除去G1.4的2,4-二甲氧基苄基，得到G1.6型的产物，其可以通过硅胶色谱法、制备型反相HPLC和/或手性SFC纯化。
一般方案2
Figure 467770DEST_PATH_IMAGE083
用于合成G2.5型化合物的一种一般策略是通过一般方案2中所示的三步程序，其中RA(n)对应于式(I)中的RA1、RA2、RA3和RA5，并且其中R1、R2、R3和RA(n) (作为RA1、RA2、RA3和RA5)如式(I)中所定义。在第一步中，可以通过用酸进行小心控制的处理将受保护的环胺G2.1转化为未受保护的胺G2.2。可以使用酸，例如在没有溶剂的情况下的甲酸，或在MeOH或DCM存在下的盐酸。在第二步中，可以通过过渡金属催化的与芳基溴化物G2.3的C-N偶联反应，将G2.2型的中间体转化为G2.4型的中间体。该反应在适当的温度下在脱氧条件下用钯催化剂如叔丁基X-Phos第三代预催化剂、碱如叔丁醇钠和溶剂如THF进行。在第三步中，在酸性条件下除去G2.4的2,4-二甲氧基苄基，得到G2.5型的产物，其可通过硅胶色谱法、制备型反相HPLC和/或手性SFC纯化。
一般方案3
Figure 196692DEST_PATH_IMAGE084
用于合成G3.6型化合物的一种一般策略是通过一般方案3中所示的四步程序，其中R4对应于式(I)中的环A，并且其中R1、R2和环A如式(I)中所定义。在第一步中，可以通过在于诸如EtOH的溶剂中的含水HCl存在下用氰胺处理，将氨基苯甲酸G3.1转化为氨基喹唑啉G3.2。在第二步中，可以通过与1,2,4-三唑偶联，随后用三氯氧磷(V)在诸如乙腈的溶剂中处理G3.2将G3.2型的中间体转化为G3.3型的中间体。在第三步中，可以在诸如THF的溶剂中用酰肼G3.4处理G3.3型的中间体，以提供G3.5型的产物。在第四步中，G3.5型的中间体在纯净的N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(BSA)中加热后经历重排，形成G3.6型的产物。可以通过硅胶色谱法、制备型反相HPLC和/或手性SFC纯化G3.6型的产物。
一般方案4
Figure 275506DEST_PATH_IMAGE085
用于合成G4.5型化合物的一种一般策略是通过一般方案4中概述的三步程序，其中R1、R2、R3、RA1、RA2和RA3在式(I)中定义。杂芳基环己醇G4.1可通过用Dess-Martin高碘烷氧化而转化为相应的环己酮G4.2。在第二步中，可以在低温下用R3-Li G4.3处理G4.2型的中间体，得到G4.4型的产物。在第三步中，可以用DDQ除去G2.4的2,4-二甲氧基苄基，得到G4.5型的产物，其可通过硅胶色谱法、制备型反相HPLC和/或手性SFC纯化。
实验
实验中使用的缩写可以包括但不限于以下内容：
18-冠-6 1,4,7,10,13,16-六氧杂环十八烷
℃ 摄氏度
AcOH 乙酸
aq. 含水的
Atm 大气压
Boc<sub>2</sub>O 二碳酸二叔丁酯
BSA <i>N</i>,<i>O</i>-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺
CD<sub>3</sub>OD 氘代甲醇-<i>d4</i>
DCM 二氯甲烷
DDQ 2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌
DEA 二乙基胺
DIAD 二氮烯-1,2-二甲酸二异丙酯
DIBAL 二异丁基氢化铝
DIPEA <i>N</i>,<i>N</i>-二异丙基乙基胺
DMAP 4-(二甲基氨基)-吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
DMP Dess–Martin高碘烷
DMSO 二甲亚砜
DMSO-<i>d6</i> 氘代二甲亚砜
dppf 双(二苯基膦基)二茂铁
ES 电喷射离子化
Et<sub>2</sub>O 乙醚
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
h 小时
HPLC 高效液相色谱法
M 摩尔
MeCN 乙腈
MeOD-<i>d4</i> 氘代甲醇
MeOH 甲醇
MHz 兆赫
min 分钟
mL 毫升
MS 质谱法
MsCl 对-甲苯磺酰氯
NaH 氢化钠
NBS <i>N</i>-溴琥珀酰亚胺
nm 纳米
NMR 核磁共振
Pd/C 碳载钯
PPTS 对-甲苯磺酸吡啶鎓
<i>p-</i>TsOH 4-甲基苯磺酸
Py 吡啶
<i>rac</i> 外消旋的
SFC 超临界流体(CO2)色谱法
T3P 三丙基膦酸酐
tBuXPhos-Pd G3
Figure 773484DEST_PATH_IMAGE086
Tf<sub>2</sub>O 三氟甲磺酸酐
TFA 三氟乙酸
TFE 2,2,2-三氟乙醇
THF 四氢呋喃
THP (四氢-2<i>H</i>-吡喃-2-基)氧基
TLC 薄层色谱法
一般实验信息：
除非另有说明，否则所有反应均被磁力搅拌并在惰性气氛如氮气或氩气下进行。
除非另有说明，否则以下描述的实验中使用的乙醚是Fisher ACS认证的物质并用BHT稳定。
除非另有说明，否则“脱气的”是指已从中除去氧气的溶剂，这通常通过用惰性气体(例如氮气或氩气)鼓泡通过溶液10至15分钟(用出口针将压力正常化)来实现。
除非另有说明，否则“浓缩的”是指使用旋转蒸发仪或真空泵从溶液或混合物中蒸发溶剂。
除非另有说明，否则“蒸发的”是指使用旋转蒸发仪或真空泵进行蒸发。
除非另有说明，否则硅胶色谱法是在使用市售的柱作为柱的ISCO®、Analogix®或Biotage®自动色谱系统上进行的。柱通常填充作为固定相的硅胶。反相制备型HPLC条件可以在实验部分的末尾找到。将水溶液在Genevac®蒸发器上浓缩或冻干。
除非另有说明，否则质子核磁共振(1H NMR)谱和质子去耦碳核磁共振(13C{1H}NMR)谱是在环境温度下于400、500或600 MHz的Bruker或Varian NMR谱仪上记录的。所有化学位移(δ)均以百万分数(ppm)的形式报告。质子共振是指NMR溶剂中残留的氕，所述溶剂可以包括但不限于CDCl3、DMSO-d 6和MeOD-d 4。碳共振是指NMR溶剂的碳共振。数据如下表示：化学位移，多重性(br =宽峰，br s =宽单峰，s =单峰，d =二重峰，dd =双二重峰，ddd =双重的双二重峰，t =三重峰，q =四重峰，m =多重峰)，耦合常数(J)(以赫兹(Hz)为单位)，积分。
中间体1：rac-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁烷-2-醇
Figure 217234DEST_PATH_IMAGE087
向4-溴-1H-吡唑(1.00 g, 6.80 mmol)于DMF (3.40 ml)中的搅拌的溶液中加入碳酸铯(2.22 g, 6.80 mmol)和2,2,3-三甲基环氧乙烷(820 mg, 9.52 mmol)。将混合物搅拌并在90℃加热4 h。将混合物冷却至室温，过滤，并蒸发滤液的溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(使用5-100％于己烷类中的EtOAc作为洗脱剂)，得到rac-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁烷-2-醇。LCMS (C8H13BrN2O) (ES, m/z) [M+H]+：233, 235。
下表1中的中间体是以与中间体1相似的方式从合适的吡唑和环氧化物制备的。
Figure 433452DEST_PATH_IMAGE088
Figure 315958DEST_PATH_IMAGE089
Figure 606125DEST_PATH_IMAGE090
中间体11：1-((4-溴-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇
步骤1：甲磺酸(1-羟基环丁基)甲酯
Figure 548673DEST_PATH_IMAGE091
在0℃向1-(羟基甲基)环丁烷-1-醇(9.00 g, 88.0 mmol)于 DCM (260 mL)中的搅拌的溶液中加入三乙基胺(17.2 ml, 123 mmol)，随后加入甲磺酰氯(7.0 mL, 90mmol)。将混合物在0℃搅拌10 min。然后将混合物温热至室温并搅拌15 min。然后将混合物用水分配。分离各层并将有机层用盐水洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并蒸发以得到甲磺酸(1-羟基环丁基)甲酯。
步骤2：1-((4-溴-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇
Figure 986607DEST_PATH_IMAGE092
在0℃向4-溴-1H-吡唑(7.70 g, 52.4 mmol)于 DMF (60 ml)中的溶液中分批加入NaH (60%于矿物油中, 2.30 g, 57.6 mmol)。将混合物在0℃在氮气下搅拌30 min。向混合物中加入甲磺酸(1-羟基环丁基)甲酯(13.1 g, 72.8 mmol)于 DMF (20 ml)中的溶液。将混合物搅拌并在90℃加热16 h。将混合物用水(70 mL)淬灭，然后用EtOAc萃取三次。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-30%于石油醚中的EtOAc作为洗脱液)以得到1-((4-溴-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇。LCMS (C8H11BrN2O) (ES, m/z)：231, 233 [M+H]+。
中间体12：4-溴-1-((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)-1H-吡唑
步骤1：甲磺酸(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲酯
Figure 344908DEST_PATH_IMAGE093
与中间体11的合成的步骤1类似地从适当的起始物质进行中间体12的合成的步骤1以得到甲磺酸(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲酯。
步骤2：4-溴-1-((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)-1H-吡唑
Figure 817477DEST_PATH_IMAGE094
向4-溴-1H-吡唑(5.04 g, 34.3 mmol)于 DMF (114 mL)中的溶液中加入甲磺酸(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲酯(6.18 g, 34.3 mmol)和碳酸铯(15.6 g, 48.0 mmol)。将混合物搅拌并在60℃加热6 h。蒸发溶剂。向残余物中加入DCM (100 mL)，并将混合物过滤。将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100%于己烷中的EtOAc)以得到4-溴-1-((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)-1H-吡唑。LCMS (C8H11BrN2O) (ES, m/z)：231,233 [M+H]+。
如下表2中所示的中间体13以与中间体12 类似的方式从适当的起始物质制备。
Figure 665347DEST_PATH_IMAGE095
中间体14：(1s,3s)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环丁醇
步骤1：4-溴-1-(5,8-二氧杂螺[3.4]辛烷-2-基)-1H-吡唑
Figure 525332DEST_PATH_IMAGE096
于8 mL小瓶中，向2-溴-5,8-二氧杂螺[3.4]辛烷(0.500 g, 2.59 mmol)和4-溴-1H-吡唑(0.761 g, 5.18 mmol)于 DMF (2.6 mL)中的溶液中加入碳酸钾(1.07 g, 7.77mmol)和18-冠-6 (0.137 g, 0.518 mmol)。将混合物搅拌并在90℃加热。5 min后，将混合物冷却至室温，并向混合物中加入另外的4-溴-1H-吡唑(400 mg, 2.72 mmol)。将混合物搅拌并在90℃加热48 h。然后将混合物冷却至室温并在EtOAc (25 mL)和水(25 mL)之间分配。分离各层并将有机层用盐水洗涤。合并两个水层并用EtOAc(15 mL)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤两次，经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-50%于己烷类中的EtOAc)以得到4-溴-1-(5,8-二氧杂螺[3.4]辛烷-2-基)-1H-吡唑。LCMS (C9H12BrN2O2) (ES, m/z)：259, 261 [M+H]+。
步骤2：3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)环丁酮
Figure 749640DEST_PATH_IMAGE097
向4-溴-1-(5,8-二氧杂螺[3.4]辛烷-2-基)-1H-吡唑(270 mg, 1.042 mmol)和PPTS (131 mg, 0.521 mmol)于二噁烷(2.6 mL)中的溶液中加入水(2.6 mL)。将混合物搅拌并在85℃加热95 h。将混合物冷却至室温。将混合物在EtOAc和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。分离各层，并将水层用EtOAc萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并蒸发溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100%于己烷中的EtOAc)以得到3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)环丁酮。LCMS (C7H8BrN2O) (ES, m/z)：215, 217 [M+H]+。
步骤3：(1s,3s)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环丁醇
Figure 76716DEST_PATH_IMAGE098
将3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)环丁酮(129 mg, 0.600 mmol)于乙醚(3.5 ml)中的溶液冷却至 0℃。向搅拌的混合物中逐滴加入甲基溴化镁(3 M于乙醚中, 0.240 ml, 0.720mmol)。将混合物搅拌16 h，使冰浴失效。将混合物在EtOAc和20% 柠檬酸水溶液之间分配并搅拌2 h。分离各层并将水层用EtOAc萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-60%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)以得到(1s, 3s)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环丁醇。LCMS (C8H12BrN2O)(ES, m/z)：231, 233 [M+H]+。
中间体15：4-溴-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑
Figure 298750DEST_PATH_IMAGE099
向反应小瓶中加入4-溴-1H-吡唑(1.50 g, 10.2 mmol)、4-碘四氢-2H-吡喃(2.16 g, 10.2 mmol)、碳酸钾(1.41 g, 10.2 mmol)和DMF (15 mL)。将混合物搅拌并在100℃加热16 h。将混合物通过硅胶色谱法纯化(用0-50% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到4-溴-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑。LCMS (C8H11BrN2O) (ES, m/z)：231, 233 [M+H]+。
中间体16：4-溴-5-甲基-1-三苯甲基-1H-吡唑和 4-溴-3-甲基-1-三苯甲基-1H- 吡唑的混合物
Figure 711276DEST_PATH_IMAGE100
向200 mL圆底烧瓶中加入4-溴-3-甲基-1H-吡唑(1.00 g, 6.21 mmol)和THF(62.1 ml)。将混合物在氮气气氛下搅拌。将混合物在0℃冷却。向混合物中分批加入NaH(0.311 g, 7.76 mmol)。将混合物历经30 min缓慢地温热至室温。然后将混合物在0℃冷却，并向混合物中加入三苯甲基氯(1.90 g, 6.83 mmol)。将混合物在室温搅拌16 h。将混合物用水(60 mL)淬灭并用EtOAc (60 mL)稀释。分离各层并将水层进一步用EtOAc(2 x 50mL)萃取。将合并的有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-25%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)以得到4-溴-3-甲基-1-三苯甲基-1H-吡唑和 4-溴-5-甲基-1-三苯甲基-1H-吡唑，为区域异构体的混合物。LCMS (C23H19BrN2)(ES, m/z)：425, 427 [M+Na]+。
中间体17：4-溴-3-(二氟甲基)-1-三苯甲基-1H-吡唑
Figure 473696DEST_PATH_IMAGE101
向4-溴-5-(二氟甲基)-1H-吡唑(250 mg, 1.27 mmol)、三苯甲基氯(460 mg,1.65 mmol)和吡啶 (201 mg, 2.54 mmol)于 DCM (4 mL)中的搅拌的混合物中加入DMAP(15.5 mg, 0.127 mmol)。将混合物在室温搅拌16 h。将混合物用水(5 mL)和饱和 NH4Cl水溶液(5 mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-50% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到4-溴-5-(二氟甲基)-1-三苯甲基-1H-吡唑。LCMS (C23H17BrF2N2) (ES, m/z)：461, 463 [M+Na]+。
中间体18：4-溴-3-(二氟甲基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑和 4-溴-5-(二 氟甲基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑的混合物
Figure 592962DEST_PATH_IMAGE102
向4-溴-5-(二氟甲基)-1H-吡唑(240 mg, 1.218 mmol)于 DMF (60 ml)中的溶液中加入碳酸铯(595 mg, 1.828 mmol)和甲磺酸四氢-2H-吡喃-4-酯(329 mg, 1.828mmol)。将混合物在80℃在氮气下搅拌并加热3 h。将混合物冷却至室温并用水(100 mL)稀释。将混合物用EtOAc萃取三次。将有机层先后用水和盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，并过滤。将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-90%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)以得到4-溴-3-(二氟甲基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑和 4-溴-5-(二氟甲基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑的混合物。
中间体19：2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1-醇
步骤1： 2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸甲酯
Figure 48214DEST_PATH_IMAGE103
向4-溴-1H-吡唑(2.00 g, 13.6 mmol)于 DMF (20 mL)中的溶液中加入2-溴-2-甲基丙酸甲酯(1.76 mL, 13.6 mmol)，随后加入碳酸铯(8.87 g, 27.2 mmol)。将混合物在80℃加热18 h。将混合物过滤，并将滤饼用DCM洗涤。将合并的滤液蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用10%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)以得到2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸甲酯。LCMS (C8H11BrN2O2) (ES, m/z)：247, 249 [M+H]+。
步骤2：2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1-醇
Figure 948037DEST_PATH_IMAGE104
在0℃向2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸甲酯(1.74 g, 7.04 mmol)于 EtOH(35 ml)中的溶液中加入硼氢化钠(0.799 g, 21.1 mmol)。将混合物在室温搅拌2 h。将混合物于DCM (50 mL)中稀释，用水和盐水溶液洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液蒸发以得到2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1-醇。LCMS (C7H11BrN2O) (ES, m/z)：219, 221 [M+H]+。
下表3中的中间体20以与针对中间体19的合成所述的类似的方式从适当的起始物质制备。
Figure 451830DEST_PATH_IMAGE105
中间体21：1-(4-溴-3-环丙基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
步骤1：1-(3-环丙基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 487920DEST_PATH_IMAGE106
以与用于中间体1的合成类似的方式从适当的起始物质进行中间体21的合成的步骤1以得到1-(3-环丙基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇。
步骤2：1-(4-溴-3-环丙基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 114073DEST_PATH_IMAGE107
向1-(3-环丙基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(1.55 g, 8.60 mmol)于 DCM(86 mL)中的溶液中加入1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲(1.23 g, 4.30 mmol)。将混合物在室温搅拌30 min。蒸发溶剂，并将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用10-90%于己烷类中的EtOAc)以得到1-(4-溴-3-环丙基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇。LCMS (C10H15BrN2O)(ES, m/z)：259, 261 [M+H]+。
中间体22：4-溴-1-乙基-3-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)-1H-吡唑
步骤1：(4-溴-1-乙基-1H-吡唑-3-基)甲醇
Figure 438875DEST_PATH_IMAGE108
中间体22的合成的步骤1以与中间体21的合成的步骤2类似的方式从适当的起始物质进行以得到(4-溴-1-乙基-1H-吡唑-3-基)甲醇。LCMS (C6H9BrN2O) (ES, m/z)：205,207 [M+H]+。
步骤2：rac-4-溴-1-乙基-3-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)-1H-吡唑
Figure 543097DEST_PATH_IMAGE109
向(4-溴-1-乙基-1H-吡唑-3-基)甲醇(570 mg, 2.78 mmol)于 DCM (27 mL)中的搅拌的溶液中加入3,4-二氢-2H-吡喃(468 mg, 5.56 mmol)，随后加入4-甲基苯磺酸(聚合物支持的) (239 mg, 1.39 mmol)。将混合物在室温搅拌2 h。将混合物过滤，并将滤液直接加载到硅胶柱上并用0-60%于己烷中的EtOAc为洗脱液纯化以得到rac-4-溴-1-乙基-3-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)-1H-吡唑。LCMS (C11H17BrN2O2) (ES, m/z)：289, 291[M+H]+。
中间体23：rac-4-溴-1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑
步骤1：甲磺酸rac-(1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲酯
Figure 699272DEST_PATH_IMAGE110
在0℃向rac-(1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲醇(8.00 g, 43.0 mmol)于 DCM (150 mL)中的搅拌的溶液中加入三乙基胺(8.38 mL, 60.1 mmol)，随后加入甲磺酰氯(4.02 mL, 51.5 mmol)。将混合物在0℃搅拌10 min并然后温热至室温并搅拌40 min。然后将混合物用水分配。分离各层，并将有机层用盐水洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并蒸发以得到甲磺酸rac-(1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲酯, LCMS(C11H20O5S) (ES, m/z)：287 [M+Na]+。
步骤2：rac-4-溴-1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑
Figure 434010DEST_PATH_IMAGE111
在0℃向4-溴-1H-吡唑(5.40 g, 36.7 mmol)于 DMF (60 mL)中的溶液中分批加入NaH (60%于矿物油中, 1.62 g, 40.4 mmol)。将混合物在0℃在氮气下搅拌1 h。向混合物中加入甲磺酸rac-(1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲酯(10.7 g, 40.4 mmol)。将混合物搅拌并在90℃在氮气下加热16 h。将混合物用水(200 mL)淬灭并用EtOAc萃取三次。将合并的有机层先后用水和盐水洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-30% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到rac-4-溴-1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑(中间体23)。LCMS(C13H19BrN2O2) (ES, m/z)：315, 317 [M+H]+。
中间体24和中间体25：1-(4-溴-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1- (4-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 42846DEST_PATH_IMAGE112
将1-(4-溴-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体7)的混合物通过SFC分离(Chiral Technologies IG21 x 250 mm柱(用15% (MeOH w/ 0.1% NH4OH改性剂)为共溶剂))以得到1-(4-溴-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体24, 第一个洗脱的峰)和1-(4-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体25, 第二个洗脱的峰)。
对于中间体24：LCMS (C13H19BrN2O2) (ES, m/z)：233, 235 [M+H]+。
对于中间体25：LCMS (C8H13BrN2O) (ES, m/z)：233, 235 [M+H]+。
下表4中的中间体26和中间体27以与中间体24和中间体25的制备类似的方式通过SFC分离外消旋混合物中间体1制备。
Figure 216338DEST_PATH_IMAGE113
中间体28：rac-2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)环丁烷-1-酮
Figure 164703DEST_PATH_IMAGE114
向2-溴环丁酮(16.2 g, 109 mmol)于 MeCN (30 mL)中的溶液中加入4-溴-1H-吡唑(8.00 g, 54.4 mmol)和碳酸钾(30.1 g, 218 mmol)。将混合物在20℃搅拌10 h。将混合物过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBDPrep柱, 19 mm X 100 mm MeCN/水(含有0.1% TFA改性剂)为洗脱液)以得到rac-2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)环丁酮。LCMS (C7H7BrN2O) (ES, m/z) [M+H]+：215, 217。
中间体29：2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环丁烷-1-醇
Figure 132659DEST_PATH_IMAGE115
在-78℃将甲基溴化镁(0.248 ml, 0.744 mmol, 3 M于乙醚中)加入rac-2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)环丁酮(中间体28) (80.0 mg, 0.372 mmol)于 THF (2 mL)中的搅拌的混合物中，并将混合物在该温度搅拌3 h。将反应用饱和NH4Cl水溶液(2 mL)淬灭，并用EtOAc(2 x 20 mL)从混合物萃取所需的层。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并蒸发。将所得残余物通过制备型硅胶TLC纯化(用30% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环丁醇。LCMS (C8H11BrN2O) (ES, m/z) [M+H]+：231, 233。
中间体30：rac-4-溴-1-(2,2-二甲氧基环丁基)-1H-吡唑
Figure 228791DEST_PATH_IMAGE116
向三甲氧基甲烷(592 mg, 5.58 mmol)和rac-2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)环丁酮(中间体28) (600 mg, 2.79 mmol)于 MeOH (5 mL)中的搅拌的混合物中加入4-甲基苯磺酸水合物(53.1 mg, 0.279 mmol)。将混合物在28℃搅拌12 h。将混合物用EtOAc (50 mL)稀释并用水(30 mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-10% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到rac-4-溴-1-(2,2-二甲氧基环丁基)-1H-吡唑。LCMS (C9H13BrN2O2) (ES, m/z) [M+H]+：261, 263。
中间体31：rac-4-溴-5-甲基-1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)- 1H-吡唑和rac-4-溴-3-甲基-1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑 的混合物
Figure 612499DEST_PATH_IMAGE117
向rac-(1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲醇(1.00 g, 5.37 mmol)、4-溴-5-甲基-1H-吡唑(0.864 g, 5.37 mmol)和三苯基膦(1.41 g, 5.37 mmol)于 THF(10.2 mL)中的搅拌的溶液中加入二氮烯-1,2-二甲酸二异丙酯(1.09 g, 5.37 mmol)。将混合物搅拌并在60℃加热16 h。蒸发溶剂。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-80%于己烷中的EtOAc)以得到rac-4-溴-5-甲基-1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑和 rac-4-溴-3-甲基-1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑的混合物。LCMS (C14H21BrN2O2) (ES, m/z)：329, 331 [M+H]+。
中间体32：rac-4-溴-1-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环戊基)-1H-吡唑
Figure 743266DEST_PATH_IMAGE118
向2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)环戊醇(中间体5) (3.00 g, 13.0 mmol)于 DCM (45mL)中的搅拌的溶液中加入3,4-二氢-2H-吡喃(2.4 mL, 26 mmol)，随后加入4-甲基苯磺酸(聚合物键合的, 2.0 g)。将混合物在室温搅拌16 h。将混合物过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过反相C18 色谱法纯化(用0-100% 于水中的MeCN为洗脱液)以得到rac-4-溴-1-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环戊基)-1H-吡唑。LCMS (C13H19BrN2O2) (ES, m/z)：315, 317 [M+H]+。
中间体33：1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
步骤1：2-甲基-1-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇
Figure 882123DEST_PATH_IMAGE119
向500 mL圆底烧瓶中加入4-硝基-1H-吡唑(15.0 g, 133 mmol)、碳酸铯(64.8 g,199 mmol)和DMF (195 mL)。向混合物中加入2,2-二甲基环氧乙烷(23.6 mL, 265 mmol)。将混合物在80℃加热16 h。将混合物冷却至室温。将混合物过滤并用EtOAc洗涤。将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-80%于己烷类中的EtOAc)，得到2-甲基-1-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇。LCMS (C7H11N3O3) (ES, m/z)：186 [M+H]+。
步骤2：1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 400304DEST_PATH_IMAGE120
向500 mL烧瓶中加入2-甲基-1-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇(18.8 g, 102mmol)、10%碳载钯(1.08 g, 1.01 mmol)和EtOAc (300 mL)。将混合物在真空下脱气并再填充氮气三次。将混合物脱气并从气囊再填充氢气。将混合物在氢气气氛下搅拌21 h。将混合物通过西莱特®(硅藻土)过滤。将滤液的溶剂蒸发，得到1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇。LCMS (C7H13N3O) (ES, m/z)：156 [M+H]+。
中间体34：2-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1-醇
步骤1：2-甲基-2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯
Figure 650020DEST_PATH_IMAGE121
向4-硝基-1H-吡唑(3.00 g, 26.5 mmol)和2-溴-2-甲基丙酸乙酯(5.69 g, 29.2mmol)于 DMF (50 mL)中的搅拌的混合物中加入K2CO3 (11.00 g, 80.00 mmol)。将混合物搅拌并在80℃加热10 h。将混合物冷却，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(5-20% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到2-甲基-2- (4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯。LCMS (C9H13N3O4) (ES, m/z)：228 [M+H]+。
步骤2：2-甲基-2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙烷-1-醇
Figure 635294DEST_PATH_IMAGE122
向2-甲基-2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯(3.00 g, 13.2 mmol)于 EtOH(50 mL)中的搅拌的混合物中加入NaBH4 (0.999 g, 26.4 mmol)。将混合物在室温搅拌2h。将混合物用水(40 mL)稀释并用EtOAc(2 x 50 mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发以得到2-甲基-2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙烷-1-醇。
步骤3：2-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1-醇
Figure 882735DEST_PATH_IMAGE123
中间体34的合成的步骤3以与中间体33的合成的步骤2类似的方式使用2-甲基-2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙烷-1-醇作为起始物质进行，得到2-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1-醇。LCMS (C7H13N3O) (ES, m/z)：156 [M+H]+。
中间体35：2-氨基-5-氟-4-甲氧基苄腈
步骤1：2-溴-4-氟-5-甲氧基苯胺
Figure 953460DEST_PATH_IMAGE124
将4-氟-3-甲氧基苯胺(350.0 g, 2.48 mol)于 EtOAc (3.5 L)中的溶液在0-5℃冷却。向混合物中分批加入三溴化四正丁基铵(14.0 kg, 2.90 mol)。将混合物温热至15℃，并在该温度搅拌1 h。将混合物用饱和Na2CO3水溶液调节至pH 8。将混合物用EtOAc萃取并将合并的有机层用水(2 x 1.5 L)洗涤并用无水Na2SO4干燥。通过过滤除去固体，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到2-溴-4-氟-5-甲氧基苯胺。LCMS (C7H7BrFNO) (ES, m/z)：220, 222 [M+H]+。
步骤2：2-氨基-5-氟-4-甲氧基苄腈
Figure 6866DEST_PATH_IMAGE125
向2-溴-4-氟-5-甲氧基苯胺(300 g, 1.36 mol)于 DMF (2.1 L)中的溶液中加入Zn(CN)2 (327 g, 2.78 mol)和Pd(PPh3)4 (90.0 g, 0.0778 mol)。将混合物在真空下脱气并用氮气净化。将混合物搅拌并在130℃在氮气下加热1 h。将混合物倒入冰水(4 L)中。将混合物用EtOAc(3 L, 2 L, 1 L)萃取，并将合并的有机层用盐水(2 L, 1.5 L)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到2-氨基-5-氟-4-甲氧基苄腈。LCMS(C8H7FN2O) (ES, m/z)：167 [M+H]+。
中间体36：2-氨基-4-氯-5-氟苄腈
Figure 784329DEST_PATH_IMAGE126
向20 mL微波小瓶中加入2-溴-5-氯-4-氟苯胺(1.00 g, 4.46 mmol)、氰化亚铜(I)(0.472 g, 4.90 mmol)和NMP (8 mL)。将混合物搅拌并在180℃在微波中加热1 h。将混合物稀释于乙醚(100 mL)中并通过西莱特®(硅藻土)过滤。将滤液用水(3 x 100 mL)洗涤。将有机层经无水硫酸镁干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发，得到2-氨基-4-氯-5-氟苄腈(LCMS (C7H4ClFN2) (ES, m/z)：171 [M+H]+。
中间体37：2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-5-氟-4-甲氧基苄腈
步骤1：1-(2-氰基-4-氟-5-甲氧基苯基)-3-(2,4-二甲氧基苄基)脲
Figure 264989DEST_PATH_IMAGE127
向20 mL小瓶中加入2-氨基-5-氟-4-甲氧基苄腈(中间体35) (817 mg, 4.92mmol)、DCM (6 mL)和吡啶(1 mL)。将混合物搅拌。向混合物中加入1-(异氰酸根合甲基)-2,4-二甲氧基苯(1425 mg, 7.380 mmol)。将混合物搅拌并在40℃加热16 h。将固体通过过滤进行收集并用 MeOH (3 x 3 mL)洗涤，得到1-(2-氰基-4-氟-5-甲氧基苯基)-3-(2,4-二甲氧基苄基)脲。
步骤2：2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-5-氟-4-甲氧基苄腈
Figure 557430DEST_PATH_IMAGE128
向100 mL圆底烧瓶中加入1-(2-氰基-4-氟-5-甲氧基苯基)-3-(2,4-二甲氧基苄基)脲 (1.16 g, 3.22 mmol)、三苯基膦(1.69 g, 6.44 mmol)、三乙基胺(1.80 ml, 12.9mmol)和DCM (25 mL)。将混合物搅拌并在0℃冷却。向混合物中逐滴加入四溴化碳(2.14 g,6.44 mmol)于 DCM (5 mL)中的溶液。30 min后，将混合物浓缩。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-70%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)，得到2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-5-氟-4-甲氧基苄腈。LCMS (C18H16FN3O3) (ES, m/z) [M+Na]+：364。
下表中的中间体5以与中间体37类似的方式从合适的中间体和起始物质制备。
Figure 352211DEST_PATH_IMAGE129
中间体43：(R)-哌啶-1,3-二甲酸1-(叔丁基) 3-乙基酯
Figure 46498DEST_PATH_IMAGE130
将(R)-哌啶-3-甲酸乙酯(200.0 g, 1270 mmol)、三乙基胺(257.5 g, 2540mmol)和DMAP (15.5 g, 130 mmol )于 DCM(2 L)中的溶液在0℃冷却。向混合物中分批加入二碳酸二叔丁酯(305.4 g, 1400 mmol)。将混合物在室温搅拌3 h。然后将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(3 x 1 L)洗涤。将合并的有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发以得到(R)-哌啶-1,3-二甲酸1-(叔丁基) 3-乙基酯。
下表6中的中间体44以与中间体43类似的方式从适当的起始物质制备。
Figure 698059DEST_PATH_IMAGE131
中间体45：5-甲基哌啶-1,3-二甲酸1-(叔丁基) 3-甲基酯
步骤1：5-甲基哌啶-3-甲酸
Figure 681058DEST_PATH_IMAGE132
在20℃向5-甲基烟酸(10g, 72.9 mmol)和浓HCl水溶液(0.599 mL, 7.29 mmol)于 MeOH (100 mL)中的搅拌的混合物中加入氧化铂(IV)(1.67 g, 7.29 mmol)。将混合物脱气并用氮气净化，然后用氢气加压至50 psi。将混合物搅拌10 h。将混合物过滤，并将滤液的溶剂蒸发以得到5-甲基哌啶-3-甲酸。
步骤2：1-(叔丁氧基羰基)-5-甲基哌啶-3-甲酸
Figure 76267DEST_PATH_IMAGE133
在20℃向二碳酸二叔丁酯(5.84 ml, 25.1 mmol)和5-甲基哌啶-3-甲酸(3.00 g,21.0 mmol)于 MeCN (20 mL)和水(20 mL)中的搅拌的混合物中加入碳酸氢钠(7.04 g,84.0 mmol)。将混合物在20℃搅拌5 h。将混合物用水(20 mL)稀释，用浓HCl水溶液调节至pH 5，并用EtOAc(3 x 30 mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发以得到1-(叔丁氧基羰基)-5-甲基哌啶-3-甲酸。LCMS (C12H21NO4)(ES, m/z) [M+H]+：244。
步骤3：5-甲基哌啶-1,3-二甲酸1-(叔丁基) 3-甲基酯
Figure 625060DEST_PATH_IMAGE134
在0℃向1-(叔丁氧基羰基)-5-甲基哌啶-3-甲酸(5.00 g, 20.5 mmol)于 DCM(10 mL)和MeOH (10 mL)中的搅拌的混合物中加入三甲基甲硅烷基-重氮甲烷(15.4 mL,30.8 mmol)。将混合物在室温搅拌2 h。蒸发溶剂以得到5-甲基哌啶-1,3-二甲酸1-叔丁基3-甲基酯。LCMS (C13H23NO4) (ES, m/z) [M+H]+：258。
中间体46：4-甲基哌啶-1,3-二甲酸1-(叔丁基) 3-甲基酯
步骤1：4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯
Figure 650785DEST_PATH_IMAGE135
中间体46的合成的步骤1以与中间体45的合成的步骤1类似的方式从适当的起始物质进行以得到4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯。LCMS (C8H15NO2) (ES, m/z) [M+H]+：158。
步骤2：4-甲基哌啶-1,4-二甲酸1-(叔丁基) 3-甲基酯
Figure 917819DEST_PATH_IMAGE136
中间体46的合成的步骤2以与中间体45的合成的步骤2类似的方式从适当的起始物质进行(除了粗物质通过硅胶色谱法纯化(用0-30% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以外)以得到4-甲基哌啶-1,4-二甲酸1-(叔丁基) 3-甲基酯。
中间体47：rac,顺式-5-氟哌啶-1,3-二甲酸1-(叔丁基) 3-乙基酯和rac,反式-5- 氟哌啶-1,3-二甲酸1-(叔丁基) 3-乙基酯的混合物
Figure 851140DEST_PATH_IMAGE137
向含有rac,顺式-5-氟哌啶-1,3-二甲酸1-(叔丁基) 3-乙基酯(2.00 g, 7.26mmol)的250 mL圆底烧瓶中加入EtOH (73 mL)。在搅拌下向混合物中逐滴加入叔丁醇钠(7.26 mL, 14.5 mmol) (2 M于THF中的溶液)。将混合物在室温搅拌3 h。将混合物浓缩至约10 mL的体积。向混合物中加入EtOAc (10 mL)。蒸发溶剂。将残余物溶解于EtOAc (60mL)中并用水(3 x 20 mL)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并蒸发溶剂以得到rac, 顺式-5-氟哌啶-1,3-二甲酸1-(叔丁基) 3-乙基酯和rac,反式-5-氟哌啶-1,3-二甲酸1-(叔丁基) 3-乙基酯的混合物。
中间体48和49：(3S,6R)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌 啶-3-甲酸甲酯和(3R,6S)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-甲 酸甲酯
Figure 520018DEST_PATH_IMAGE138
向100 mL烧瓶装入1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(4.66 g, 30.0mmol)、2-亚甲基-5-氧代己酸甲酯1 (3.12 g, 20.0 mmol)和LiBF4 (1.88 g, 20.0 mmol)。向烧瓶中加入TFE (31.2 mL)。给烧瓶安装回流冷凝器，其具有氮气入口。将混合物在回流下加热48 h。将混合物冷却至室温，并向混合物中加入10%碳载钯(0.639 g, 6.00 mmol)。将混合物置于氢气气氛下并在室温搅拌6 h。将混合物过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-4%于DCM中的MeOH为洗脱液)，得到具有顺式相对立体化学的外消旋体。将外消旋混合物通过手性SFC拆分(Chiral Technologies AD-H 21 x 250mm柱(用15% (MeOH w/ 0.1% NH4OH改性剂)为共溶剂))，得到(3S,6R)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(中间体48, 第一个洗脱的峰)和(3R,6S)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(中间体49, 第二个洗脱的峰)。
对于中间体48：LCMS (C15H25N3O3) (ES, m/z)：296 [M+H]+。对于中间体49：LCMS(C15H25N3O3) (ES, m/z)：296 [M+H]+。1Bizet, V.；Lefebvre, V.；Baudoux, J.；Lasne, M.；Boulange, A.；Leleu, S.；Franck, X.；Rouden, J. Eur. J. Org. Chem. 2011, 4170。
下表7中的中间体以与中间体48和中间体49类似的方式从合适的中间体和起始物质制备(除了这些化合物作为没有通过SFC分离而拆分的非对映异构体的外消旋混合物分离以外)。
Figure 716644DEST_PATH_IMAGE139
中间体52：6-乙基-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氧代哌啶-3- 甲酸乙酯
步骤1：2-(3-氧代戊基)丙二酸二乙酯
Figure 205395DEST_PATH_IMAGE140
将丙二酸二乙酯(10.0 g, 62.4 mmol)、戊-1-烯-3-酮(5.78 g, 68.7 mmol)和碳酸钾(0.863 g, 6.24 mmol)的混合物在室温在密封的管中搅拌3天。将所得混合物过滤以提供滤液，其为纯净的2-(3-氧代戊基)丙二酸二乙酯。LCMS (C12H20O5) (ES, m/z)：245 [M+H]+。粗物质未经进一步纯化即使用。
步骤2：rac-2-(3-((1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)戊基)丙二酸 二乙酯
Figure 207986DEST_PATH_IMAGE141
向1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体33) (2.00 g, 12.9mmol)于 DCM (129 mL)中的搅拌的溶液中加入2-(3-氧代戊基)丙二酸二乙酯(6.93 g,28.4 mmol)和AcOH (0.077 mL, 1.3 mmol)。将混合物在室温搅拌30 min。向混合物中分批加入氰基硼氢化钠(1.62 g, 25.8 mmol)。将混合物在室温搅拌另外30 min。将混合物用1M HCl水溶液(150 mL)淬灭。分离有机层，并将水层再用DCM萃取两次。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发以得到rac-2-(3-((1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)戊基)丙二酸二乙酯。LCMS (C19H33N3O5) (ES, m/z)：384 [M+H]+。
步骤3：6-乙基-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氧代哌啶-3-甲酸 乙酯
Figure 669054DEST_PATH_IMAGE142
向rac-2-(3-((1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)戊基)丙二酸二乙酯(1.70 g, 4.43 mmol)于甲苯(22 mL)中的溶液中加入AcOH (0.530 mL, 8.87 mmol)。将混合物在90℃搅拌2天。将混合物冷却至室温，并蒸发溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)以得到6-乙基-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氧代哌啶-3-甲酸乙酯。LCMS (C17H27N3O4) (ES, m/z)：338 [M+H]+。
中间体53：3-羟基环己烷甲酸乙酯
Figure 833319DEST_PATH_IMAGE143
在0℃向3-氧代环己烷甲酸乙酯(2.00 g, 11.7 mmol)于 THF (20 mL)中的溶液中加入硼氢化钠(0.889 g, 23.5 mmol)于 THF (10 mL)中的溶液。将混合物在0℃搅拌2h。向混合物中加入水(10 mL)，并将混合物用EtOAc(3 x 15 mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用10-50%于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到3-羟基环己烷甲酸乙酯。
中间体54：(R)-3-(肼羰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 74945DEST_PATH_IMAGE144
将(R)-哌啶-1,3-二甲酸1-叔丁基3-乙基酯(320.0 g, 1243 mmol)和肼水合物(311.3 g, 6217 mmol)于 EtOH (1.6 L)中的溶液搅拌并在80℃加热16 h。蒸发溶剂。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用DCM洗脱)以得到(R)-3-(肼羰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。LCMS (C11H21N3O3) (ES, m/z)：244 [M+H]+。
下表8中的中间体以与中间体54类似的方式从合适的中间体和起始物质制备。
Figure 550401DEST_PATH_IMAGE145
Figure 928292DEST_PATH_IMAGE146
中间体67：(R)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-碳酰肼
步骤1：1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-甲酸乙酯
Figure 529038DEST_PATH_IMAGE147
向40 mL反应小瓶装入1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-甲酸乙酯(1.00 g,6.36 mmol)和THF (15 mL)。向混合物中加入4-溴-1-甲基-1H-吡唑(4.96 mL, 48.0mmol)，随后加入tBuXPhos-Pd G3 (2.02 g, 2.54 mmol)和叔丁醇钠(4.61 g, 48.0mmol)。将氮气鼓泡通过混合物10 min。将小瓶密封并在65℃加热24 h。将混合物冷却至室温并用EtOAc (40 mL)稀释。将混合物通过西莱特®(硅藻土)过滤。将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-10%于DCM中的MeOH)以得到1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-甲酸乙酯。LCMS (C12H19N3O2) (ES, m/z)：238 [M+H]+。
步骤2：(R)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-碳酰肼
Figure 930064DEST_PATH_IMAGE148
向圆底烧瓶装入1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-甲酸乙酯(7.72 g, 32.5mmol)和EtOH (77 mL)。向混合物中加入肼水合物(31.7 mL, 651 mmol)。给圆底烧瓶安装回流冷凝器，并将混合物在80℃加热16 h。将混合物冷却至室温，并蒸发溶剂以得到(R和S)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-碳酰肼(中间体67)。将外消旋混合物通过手性SFC分离拆分(Chiral Technologies AD-H 21 x 250 mm柱(用40% (MeOH w/0.25% DEA改性剂)作为共溶剂))以得到分别对应于中间体67a和中间体67b的作为第一个洗脱的峰的(R或S)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-碳酰肼和作为第二个洗脱的峰的(S或R)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-碳酰肼。LCMS (C10H17N5O) (ES, m/z)：224 [M+H]+。
下表9中的中间体68以与中间体67类似的方式制备(除了没有进行SFC分离以外)。因此，该化合物作为异构体的混合物分离。
Figure 274457DEST_PATH_IMAGE149
中间体69：(R)-3-(肼羰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure 772435DEST_PATH_IMAGE150
向100 mL圆底烧瓶中加入(R)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-甲酸(2.00 g, 9.29mmol)和THF (18.6 mL)。向混合物中加入1,1'-羰基二咪唑(1.96 g, 12.1 mmol)。将混合物在60℃加热30 min。将混合物冷却至室温并历经25 min逐滴转移至肼水合物(0.447 g,13.9 mmol)于 THF (10 mL)中的搅拌的混合物中。将混合物在室温搅拌2 h。将混合物用水(50 mL)淬灭并用EtOAc(2 x 60 mL)萃取。将合并的有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发以得到(R)-3-(肼羰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。LCMS (C10H19N3O3) (ES, m/z)：230 [M+H]+。
下表9A中的中间体以与中间体60的制备类似的方式制备。
Figure 216185DEST_PATH_IMAGE151
中间体74：3-氟-3-(肼羰基)哌啶-1-甲酸苄酯
Figure 432403DEST_PATH_IMAGE152
向肼水合物(0.155 mL, 7.11 mmol)、1-((苄基氧基)羰基)-3-氟哌啶-3-甲酸(2.00 g, 7.11 mmol)和DIPEA (5.02 ml, 28.4 mmol)于 DCM (70 mL)中的搅拌的溶液中逐滴加入三丙基膦酸酐(50% v/v于EtOAc中的溶液, 6.38 mL, 14.2 mmol)。将混合物在室温搅拌12 h。将反应混合物通过加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭。将混合物搅拌5 min，分离有机层，经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发以得到3-氟-3-(肼羰基)哌啶-1-甲酸苄酯。LCMS (C14H18FN3O3) (ES, m/z)：296 [M+H]+。
中间体75和中间体76：(2R,5S或2S,5R)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟- 8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯和(2S,5R或 2R,5S)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑 啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 314909DEST_PATH_IMAGE153
向rac,顺式-5-(肼羰基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体66) (5.00 g, 19.4mmol)于 DCM (7 mL)中的溶液加入AcOH (0.556 ml, 9.72 mmol)。将混合物在室温搅拌。向混合物中加入2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基) 亚甲基) 氨基)-5-氟-4-甲氧基苄腈(中间体37) (6.63 g, 19.4 mmol)。将混合物搅拌60 h。将混合物过滤，并将滤液直接加载到硅胶柱上并纯化(用0-100%于己烷中的EtOAc为洗脱液)，得到外消旋的(2R,5S和2S,5R)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯。将外消旋混合物通过手性SFC拆分(Chiral Technologies AD-H 50 x 250 mm柱, 用35% EtOH为共溶剂)以得到(2R,5S或2S,5R)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体75 , 第一个洗脱的峰)和(2S,5R或2R,5S)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体76, 第二个洗脱的峰)。
下表10中的中间体以与中间体75和中间体76类似的方式从合适的中间体和起始物质制备。
Figure 605076DEST_PATH_IMAGE154
中间体79-81：(3S,5R或3R,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧 基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯和(3R,5S或3S,5R)-3- (5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5- 氟哌啶-1-甲酸叔丁酯和(3R,5R和3S,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧 基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 282045DEST_PATH_IMAGE156
中间体79-81以与用于中间体75和中间体76的制备类似的方式从中间体37和中间体58制备。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100%于己烷中的EtOAc为洗脱液)以得到(3S,5R 和3R,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(第一个洗脱的峰, 中间体79和中间体80的混合物)和(3R,5R 和3S,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(第二个洗脱的峰, 中间体81)。对于中间体81：LCMS (C29H34F2N6O5) (ES, m/z)：585 [M+H]+。中间体79和中间体80的混合物通过手性SFC拆分(Chiral Technologies AD-H 50 x 250 mm柱(用35% MeOH为共溶剂))以得到(3S,5R或3R,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体79, 第一个洗脱的峰)和(3R,5S或3S,5R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体80, 第二个洗脱的峰)。对于中间体79：LCMS(C29H34F2N6O5) (ES, m/z)：585 [M+H]+。对于中间体80：LCMS (C29H34F2N6O5) (ES, m/z)：585[M+H]+。
中间体82：(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
步骤1：( R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 719979DEST_PATH_IMAGE157
向40 mL小瓶中加入(R)-3-(肼羰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体54) (596 mg,2.45 mmol)、DCM (7 mL)和AcOH (0.070 ml, 1.2 mmol)。向混合物中加入2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-5-氟-4-甲氧基苄腈(中间体37) (836 mg, 2.45 mmol)。将混合物搅拌16 h。将溶液加载到硅胶柱上并用0-80%于己烷中的EtOAc为洗脱液纯化以得到(R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯LCMS (C29H35FN6O5) (ES, m/z) [M+H]+：567。
步骤2：(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三 唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 343858DEST_PATH_IMAGE158
向20 mL小瓶中加入(R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.40 g, 2.47 mmol)和甲酸(4mL)。将溶液搅拌16 h。将混合物用DCM (50 mL)稀释并用2 M碳酸钾水溶液(75 mL)洗涤。将混合物用另外的DCM (50 mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发以得到(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体82)。LCMS (C24H27FN6O3) (ES, m/z) [M+H]+：467。
下表11中的中间体以与用于中间体82的制备类似的方式从合适的中间体和起始物质合成。对于中间体89的合成，在甲酸中的脱保护步骤(步骤2)不是必要的。
Figure 550849DEST_PATH_IMAGE159
Figure 664298DEST_PATH_IMAGE160
Figure 527212DEST_PATH_IMAGE161
中间体90和中间体91：(S或R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-(3-氟哌啶-3- 基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R或S)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9- 氟-2-(3-氟哌啶-3-基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
步骤1：rac-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-3-氟哌啶-1-甲酸苄酯
Figure 751520DEST_PATH_IMAGE162
向rac-3-氟-3-(肼羰基)哌啶-1-甲酸苄酯(中间体74) (1.73 g, 5.86 mmol)于DCM (25 mL)中的搅拌的溶液中加入AcOH (0.201 mL, 3.52 mmol)。将混合物在室温搅拌10 min。向混合物中加入2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-5-氟-3-甲氧基苄腈(中间体38) (2.00 g, 5.86 mmol)。将混合物搅拌并在40℃加热16 h。将混合物冷却至室温。将混合物用DCM (100 mL)稀释并然后用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用于异己烷中的EtOAc为洗脱液)以得到rac-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-3-氟哌啶-1-甲酸苄酯。LCMS (C32H32F2N6O5)(ES, m/z)：619 [M+H]+。
步骤2：(S或R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-(3-氟哌啶-3-基)-7-甲氧基-[1, 2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R或S)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-(3-氟哌啶-3- 基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 78596DEST_PATH_IMAGE163
向200 mL圆底烧瓶装入rac-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-3-氟哌啶-1-甲酸苄酯(2.00 g, 3.23 mmol)、10%Pd/C (800 mg, 3.23 mmol)和MeOH (50 mL)。将混合物在氢气气氛下搅拌16 h。将混合物通过西莱特®(硅藻土)过滤。并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-8%于DCM中的MeOH (含有0.2% NH4OH)为洗脱液)以得到外消旋的混合物，将其通过手性SFC分离拆分(Chiral Technologies, IC 20 x 250 mm柱(用50%(含有0.2% DEA改性剂的EtOH)为共溶剂))以得到(S或R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-(3-氟哌啶-3-基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(第一个洗脱的峰, 中间体90)和(R或S)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-(3-氟哌啶-3-基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(第二个洗脱的峰, 中间体91)。对于中间体90：LCMS (C24H26F2N6O3) (ES, m/z)：485 [M+H]+。对于中间体91：LCMS (C24H26F2N6O3) (ES, m/z)：485 [M+H]+。
中间体92：(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-7-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
步骤1：(R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 300630DEST_PATH_IMAGE164
向(R)-3-(肼羰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体54) (1.52 g, 6.25 mmol)于 DCM(25 mL)中的溶液中加入AcOH (0.201 mL, 3.52 mmol)。将混合物在室温搅拌10 min。向该混合物中加入2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-5-氟-3-甲氧基苄腈(中间体38) (2.00 g, 5.86 mmol)。将混合物搅拌16 h。将混合物用DCM (100 mL)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，通过过滤除去固体，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用于异己烷中的EtOAc为洗脱液)以得到(R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。LCMS (C29H35FN6O5) (ES, m/z)：567 [M+H]+。
步骤2：(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-7-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三 唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 447578DEST_PATH_IMAGE165
向(R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.12 g, 3.74 mmol)于 DCM (30 mL)中的溶液中加入4 M 于二噁烷中的HCl(10 mL, 40.0 mmol)。将混合物在室温搅拌2 h。蒸发溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-8%于DCM中的MeOH (含有0.2% NH4OH)为洗脱液)以得到(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-7-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体92)。LCMS (C24H27FN6O3) (ES, m/z)：467 [M+H]+。
下表12中的中间体以与用于中间体92的制备类似的方式从合适的中间体和起始物质制备。
Figure 475577DEST_PATH_IMAGE166
下表12A中的中间体以与用于中间体92的制备的步骤2类似的方式从合适的中间体和起始物质制备。
Figure 594842DEST_PATH_IMAGE167
Figure 50094DEST_PATH_IMAGE168
Figure 949917DEST_PATH_IMAGE169
中间体104：rac-N'-(2-氨基-6-氟-8-甲氧基喹唑啉-4-基)-1-(1-甲基-1H-吡唑- 4-基)哌啶-3-碳酰肼
步骤1：2-氨基-6-氟-8-甲氧基喹唑啉-4-醇
Figure 450781DEST_PATH_IMAGE170
向2-氨基-5-氟-3-甲氧基苯甲酸(278 mg, 1.50 mmol)于 EtOH (1.5 mL)中的搅拌的混合物中加入氰胺 (158 mg, 3.75 mmol)和盐酸(325 µL, 1.95 mmol) (6 M, 水溶液)。将混合物在回流下加热16 h。将混合物冷却。通过过滤收集沉淀并在高真空下干燥以得到2-氨基-6-氟-8-甲氧基喹唑啉-4-醇。LCMS (C9H8FN3O2) (ES, m/z)：210 [M+H]+。
步骤2：6-氟-8-甲氧基-4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)喹唑啉-2-胺
Figure 486870DEST_PATH_IMAGE171
在室温历经15 min将POCl3 (295 µL, 3.16 mmol)逐滴加入至1,2,4-三唑(524mg, 7.59 mmol)、2-氨基-6-氟-8-甲氧基喹唑啉-4-醇(264.7 mg, 1.265 mmol)和DIPEA(553 µL, 3.16 mmol)于乙腈(5 mL)中的搅拌的混合物中。将混合物搅拌并在40℃加热3 h并然后在室温保持16 h。将混合物通过西莱特®(硅藻土)过滤。用乙腈和乙醚洗涤以得到6-氟-8-甲氧基-4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)喹唑啉-2-胺。LCMS (C11H9FN6O) (ES, m/z)：261[M+H]+。
步骤3：rac-N'-(2-氨基-6-氟-8-甲氧基喹唑啉-4-基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4- 基)哌啶-3-碳酰肼
Figure 113024DEST_PATH_IMAGE172
向20 mL反应小瓶装入6-氟-8-甲氧基-4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)喹唑啉-2-胺(41.1 mg, 0.158 mmol)、(R 和S)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-碳酰肼中间体67)(38.8 mg, 0.174 mmol)、THF (1 mL)和DIPEA (138 µl, 0.790 mmol)。将混合物搅拌并在50℃加热4 h。将混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(20 mL)洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发以得到rac-N'-(2-氨基-6-氟-8-甲氧基喹唑啉-4-基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-碳酰肼。LCMS (C19H23FN8O2) (ES, m/z)：415 [M+H]+。
下表13中的中间体以与中间体104类似的方式从适当的起始物质制备(除了使用对映纯的酰肼中间体67b以外)。
Figure 172247DEST_PATH_IMAGE173
Figure 542048DEST_PATH_IMAGE174
中间体113-116：1-(4-((2R或2S,5S或5R)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9- 氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)- 2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-((2S或2R,5R或5S)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8- 甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基 丙烷-2-醇和1-(4-((2S或2R,5S或5R)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基- [1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2- 醇和1-(4-((2R或2S,5R或5S)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4] 三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
步骤1：3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5- c]喹唑啉-2-基)-6-乙基-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-2-酮
Figure 698223DEST_PATH_IMAGE175
向6-乙基-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氧代哌啶-3-碳酰肼(中间体64) (270 mg, 0.835 mmol)于二噁烷(7 mL)中的溶液中加入AcOH (0.024 mL,0.42 mmol)。将混合物在室温搅拌30 min。向该混合物中加入2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-5-氟-4-甲氧基苄腈(中间体37) (285 mg, 0.835 mmol)。将混合物在室温搅拌3天。将混合物过滤，并将滤液通过硅胶色谱法纯化(用0-100% 3：1 EtOAc：EtOH(于己烷类中)为洗脱液)以得到3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-6-乙基-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-2-酮。LCMS (C33H39FN8O5) (ES, m/z)：647 [M+H]+。
步骤2：1-(4-((2R或2S,5S或5R)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧 基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙 烷-2-醇和1-(4-((2S或2R,5R或5S)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基- [1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2- 醇和1-(4-((2S或2R,5S或5R)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4] 三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1- (4-((2R或2S,5R或5S)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 495278DEST_PATH_IMAGE176
向3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-6-乙基-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-2-酮(320 mg,0.495 mmol)于 THF (4.9 mL)中的溶液中加入于THF中的硼烷(1.0 M, 2.47 mL, 2.47mmol)。将混合物在室温搅拌24 h。将反应混合物用MeOH淬灭，并然后蒸发溶剂。将所得残余物通过制备型反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBD Prep柱, 19 mm X 100 mm(用MeCN/水(含有0.1% TFA)为洗脱液))以得到两种相应的非对映异构体的外消旋混合物。各外消旋体通过手性SFC拆分。
将第一个洗脱的外消旋体通过手性SFC分离拆分(Chiral Technologies, AS-H,21 x 250mm柱(用50% (IPA + 0.2% DIPA)作为共溶剂))以得到分别对应于中间体113和中间体114的1-(4-((2R或2S,5S或5R)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(第一个洗脱的峰)和1-(4-((2S或2R,5R或5S)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(第二个洗脱的)。对于中间体113：LCMS (C33H41FN8O4) (ES, m/z)：634 [M+H]+。对于中间体114：LCMS (C33H41FN8O4) (ES, m/z)：634 [M+H]+。
将第二个洗脱的外消旋体通过手性SFC分离拆分(AS-H, 21 x 250mm柱(用50%(IPA + 0.2% DIPA)作为共溶剂))以得到分别对应于中间体115和中间体116的1-(4-((2S或2R,5S或5R)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(第一个洗脱的峰)和1-(4-((2R或2S,5R或5S)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(第二个洗脱的峰)。对于中间体115：LCMS (C33H41FN8O4) (ES, m/z)：634 [M+H]+。对于中间体116：LCMS (C33H41FN8O4) (ES, m/z)：634 [M+H]+。
中间体117：(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(3-甲基-1H-吡 唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)- 9-氟-8-甲氧基-2-(1-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑 啉-5-胺的混合物
步骤1：(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(5-甲基-1-三苯甲基- 1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R)-N-(2,4-二甲氧基 苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(3-甲基-1-三苯甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三 唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的混合物
Figure 41797DEST_PATH_IMAGE177
向20 mL微波小瓶装入(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体82) (500 mg, 1.07 mmol)和THF (6.7mL)。向混合物中加入4-溴-5-甲基-1-三苯甲基-1H-吡唑和 4-溴-3-甲基-1-三苯甲基-1H-吡唑的混合物(中间体16) (865 mg, 2.14 mmol)，随后加入tBuXPhos-Pd G3 (412 mg,4.29 mmol)和叔丁醇钠(412 mg, 4.29 mmol)。将氮气鼓泡通过混合物10 min。将混合物搅拌并在90℃加热16 h。将混合物冷却至室温。向混合物中加入西莱特® (硅藻土)和饱和NH4Cl水溶液。将混合物剧烈地搅拌5 min。将混合物通过用无水MgSO4覆盖的西莱特®(硅藻土)过滤并用DCM洗涤。将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-20%于DCM中的MeOH)以得到(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(5-甲基-1-三苯甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(3-甲基-1-三苯甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的混合物。LCMS (C47H45FN8O3) (ES, m/z)：789 [M+H]+。
步骤2：(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(3-甲基-1H-吡唑-4- 基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟- 8-甲氧基-2-(1-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺 的混合物
Figure 949710DEST_PATH_IMAGE178
向(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(3-甲基-1-三苯甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的混合物(565 mg, 0.716 mmol)于 MeOH (7.2 mL)中的搅拌的溶液中加入4 MHCl于二噁烷中的溶液(1.79 mL, 7.16 mmol)。将混合物在室温搅拌1 h。蒸发溶剂，并将残余物溶解于 DCM (50 mL)中。向混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(50 mL)。将两相混合物分离，并将水层用另外的DCM (50 mL)萃取。将合并的有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发以得到(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(3-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的混合物。LCMS (C28H31FN8O3) (ES, m/z)：547 [M+H]+。
下表14中的中间体以与用于中间体117的制备类似的方式从适当的起始物质制备。
Figure 960391DEST_PATH_IMAGE179
中间体120和中间体121：N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3R,6S或 3S, 6R)-6-甲基-1-(1-((1R,2R或1S,2S)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环戊基)-1H-吡 唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和N-(2,4-二甲氧基苄基)-9- 氟-8-甲氧基-2-((3R,6S或3S, 6R)-6-甲基-1-(1-((1S,2S或1R,2R)-2-((四氢-2H-吡喃- 2-基)氧基)环戊基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 866030DEST_PATH_IMAGE180
向含有N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3R,6S或3S,6R)-6-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体95) (150 mg, 0.312 mmol)于 THF(4 mL)的溶液的反应小瓶中加入4-溴-1-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环戊基)-1H-吡唑(中间体32) (177 mg, 0.562 mmol)，随后加入tBuXPhos-Pd G3 (124 mg, 0.156 mmol)和叔丁醇钠(105 mg, 1.09 mmol)。将混合物用氮气鼓泡10 min。将混合物搅拌并在90℃加热16 h。向混合物中加入另外的4-溴-1-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环戊基)-1H-吡唑(中间体32) (88.5 mg, 0.281 mmol)、tBuXPhos-Pd G3 (62 mg, 0.078 mmol)和叔丁醇钠(52.5 mg, 0.547 mmol)。将混合物搅拌并在90℃加热16 h。将混合物通过制备型硅胶TLC纯化(用4%于DCM中的MeOH为洗脱液)以得到异构体的混合物。将混合物通过手性SFC分离拆分(ID 21 x 250 mm柱(用50% (MeOH w/ACN 1：1 +0.2% DIPA)作为共溶剂))以得到分别对应于中间体120和中间体121的N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3R,6S或3S,6R)-6-甲基-1-(1-((1R,2R或1S,2S)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环戊基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(第一个洗脱的峰, 中间体120) 和N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3R,6S或3S, 6R)-6-甲基-1-(1-((1S,2S或1R,2R)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环戊基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(第四个洗脱的峰, 中间体121)。(注意：峰2和3具有差的分离)。对于中间体120：LCMS (C38H47FN8O5) (ES, m/z)：715 [M+H]+。对于中间体121：LCMS(C38H47FN8O5) (ES, m/z)：715 [M+H]+。
中间体122和中间体123：1-(4-((3R,5S和3R,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨 基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑- 1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-((3R,5R和3S,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9- 氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)- 2-甲基丙烷-2-醇
Figure 962162DEST_PATH_IMAGE181
在氮气气氛下在手套箱中向叔丁醇钠(300 mg, 3.12 mmol)、1-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体4) (274 mg, 1.25 mmol)和N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体85)(300 mg, 0.624 mmol)于 THF (2 mL)中的搅拌的混合物中加入tBuXPhos-Pd G3 (149mg, 0.187 mmol)。将混合物搅拌并在100℃加热14 h。将混合物通过制备型硅胶TLC纯化(用10%于DCM中的MeOH为洗脱液)以得到两种非对映异构体：分别对应于中间体122和中间体123的1-(4-((3R,5S和3R,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-((3R,5R 和3S,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇。对于中间体122, LCMS (C32H39FN8O4) (ES, m/z)：619 [M+H]+。对于中间体123, LCMS (C32H39FN8O4)(ES, m/z)：619 [M+H]+。
中间体124：(R)-5-(4-(3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2, 4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)戊烷-2-酮
Figure 673766DEST_PATH_IMAGE182
向叔丁醇钠(66.5 mg, 0.692 mmol)、(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体82) (89.0 mg, 0.190mmol)、2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环丁醇(中间体29) (40.0 mg, 0.173 mmol)于THF (2 mL)中的搅拌的混合物中加入tBuXPhos-Pd G3 (41.3 mg, 0.0520 mmol)。将混合物搅拌并在80℃加热12 h。将混合物冷却，用EtOAc (10 mL)稀释，并用水(10 mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过制备型硅胶TLC纯化(用EtOAc为洗脱液)，得到开环产物(R)-5-(4-(3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)戊烷-2-酮。LCMS (C32H37FN8O4) (ES, m/z)：617 [M+H]+。
中间体125：2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑 啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)环丁烷-1-酮
步骤1：N-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((3R)-1-(1-(2,2-二甲氧基环丁基)-1H-吡唑- 4-基)哌啶-3-基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 742217DEST_PATH_IMAGE183
向叔丁醇钠(177 mg, 1.84 mmol)、(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体82) (236 mg, 0.506 mmol)、4-溴-1-(2,2-二甲氧基环丁基)-1H-吡唑(中间体30) (120 mg, 0.460 mmol)于 THF (4mL)中的搅拌的混合物中加入tBuXPhos-Pd G3 (110 mg, 0.138 mmol)。将混合物搅拌并在80℃在氮气下加热12 h。将混合物冷却，用EtOAc (10 mL)稀释，并然后用水(10 mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物用硅胶色谱法纯化(用0-100% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到N-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((3R)-1-(1-(2,2-二甲氧基环丁基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺。LCMS (C33H39FN8O5) (ES, m/z)：647 [M+H]+。
步骤2：2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2- 基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)环丁烷-1-酮
Figure 881074DEST_PATH_IMAGE184
将N-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((3R)-1-(1-(2,2-二甲氧基环丁基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(130 mg, 0.201mmol)和甲酸(2 mL)的混合物搅拌并在40℃加热15 h。将混合物冷却并用饱和碳酸氢钠水溶液调节至pH=8。将混合物用DCM (3 x 10 mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过制备型硅胶TLC纯化(用EtOAc为洗脱液)以得到2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)环丁烷-1-酮。LCMS (C22H23FN8O2) (ES, m/z)：451 [M+H]+。
中间体126和中间体127：rac-(1R或1S,3R或3S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1, 2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇和rac-(1S或 1R,3S或3R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙 基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇
步骤1：3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5- c]喹唑啉-2-基)环己烷-1-醇
Figure 198923DEST_PATH_IMAGE185
向3-羟基环己烷碳酰肼(中间体65) (0.556 g, 3.52 mmol)于 DCM (30 mL)中的搅拌的混合物中加入AcOH (0.084 mL, 1.5 mmol)。向溶液中加入2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-5-氟-4-甲氧基苄腈(中间体37) (1.00 g, 2.93 mmol)。将混合物搅拌并在35℃加热10 h。将混合物浓缩。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用10-50%于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)环己醇。LCMS (C25H28FN5O4) (ES, m/z) [M+H]+：482。
步骤2：3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5- c]喹唑啉-2-基)环己烷-1-酮
Figure 651901DEST_PATH_IMAGE186
在0℃向3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)环己醇(780 mg, 1.62 mmol)于 DCM (10 mL)中的搅拌的溶液中加入DMP(1.37 g, 3.24 mmol)。将混合物温热至室温并搅拌3 h。将混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(5 mL)淬灭，并将混合物过滤。将滤液用EtOAc(3 x 10 mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30 mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用10-50%于石油醚中的EtOAc)以得到3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)环己酮。LCMS (C25H26FN5O4) (ES, m/z) [M+H]+：480。
步骤3：3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5- c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇
Figure 637174DEST_PATH_IMAGE187
在-78℃向4-溴-1-乙基-1H-吡唑(621 mg, 3.55 mmol)于 THF (3 mL)中的搅拌的溶液中加入正丁基锂(1.42 mL, 3.55 mmol, 2.5 M于己烷中)。将混合物在-78℃搅拌20min。在-78℃向混合物中加入3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)环己酮(340 mg, 0.709 mmol)于 THF (3 mL)中的溶液，并将混合物在该温度搅拌1 h。将混合物用饱和NH4Cl水溶液 (5 mL)淬灭并用EtOAc(3 x 10mL)萃取。将合并的有机相用盐水(20 mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用10-50% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)。LCMS (C30H34FN7O4) (ES, m/z) [M+H]+：576。
步骤4：rac-(1R或1S,3R或3S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5- c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇和rac-(1S或1R,3S或3R)-3-(5- 氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)环 己烷-1-醇
Figure 946933DEST_PATH_IMAGE188
在0℃向3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)环己醇(180 mg, 0.313 mmol)于 DCM (4 mL)和水(2 mL)中的溶液中分批加入DDQ (106 mg, 0.469 mmol)。将混合物在0℃搅拌30 min。将混合物用DCM (10 mL)稀释并用Na2SO3 (2 M水溶液, 5 mL)和盐水(2 x 10 mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过反相HPLC纯化(Waters XBridge C18 OBD Prep柱, 19 mm X 100 mm(用MeCN/水(w/ 10 mM NH4HCO3改性剂)为洗脱液))以得到分别对应于中间体126和中间体127的两种非对映异构体 rac-(1R或1S,3R或3S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇和rac-(1S或1R,3S或3R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇。对于中间体126：LCMS (C21H24FN7O2) (ES, m/z) [M+H]+：426。对于中间体127：LCMS (C21H24FN7O2) (ES,m/z) [M+H]+：426。
中间体128：(2S,3S和2R,3R)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇
Figure 689761DEST_PATH_IMAGE189
向4-溴-1H-吡唑(2.00 g, 13.6 mmol)和碳酸铯(13.3 g, 40.8 mmol)于 MeCN(20 mL)中的混合物中加入顺式-2,3-二甲基环氧乙烷(2.38 ml, 27.2 mmol)。将混合物搅拌并在80℃加热16 h。将混合物冷却至室温并通过过滤除去固体。将滤液浓缩，并将残余物用DCM稀释并用水和盐水溶液洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)以得到(2S,3S和2R,3R)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇。LCMS (C7H11BrN2O) (ES, m/z) [M+H]+：219, 221。
下表15中的中间体以与中间体128类似的方式从适当的起始物质制备。
Figure 743168DEST_PATH_IMAGE190
中间体136：3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯
Figure 582948DEST_PATH_IMAGE191
向4-溴-1H-吡唑(0.500 g, 3.40 mmol)于 DMF (10 mL)中的搅拌的混合物中加入K2CO3 (1.18 g, 8.50 mmol)和3-溴丙酸乙酯(0.924 g, 5.10 mmol)。将混合物搅拌并在60℃加热8 h。将混合物用水(30 mL)稀释，过滤，并将滤液用EtOAc(2 x 30 mL)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶柱色谱法纯化(用3-25% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯。LCMS(C8H11BrN2O2) (ES, m/z) [M+H]+：247, 249。
下表16中的中间体以与用于中间体136的制备类似的方式从合适的吡唑和烷基卤化物或甲磺酸酯制备。
Figure 1291DEST_PATH_IMAGE192
Figure 559311DEST_PATH_IMAGE193
中间体145：rac-1-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁烷-2-醇
Figure 150829DEST_PATH_IMAGE194
在0℃在氮气气氛下向1-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-酮(中间体141) (2.00 g,9.85 mmol)于 Et2O (22 mL)中的溶液中逐滴加入3 M乙基溴化镁溶液(9.85 mL, 29.6mmol)。将溶液在0℃搅拌1 h，然后温热至室温并搅拌15 h。将混合物用饱和氯化铵水溶液(50 mL)淬灭，用EtOAc (50 mL)和水(50 mL)稀释。将水层用EtOAc(3 x 100 mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2 x 100 mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发溶剂。将所得残余物通过反相HPLC纯化(MeCN/含有0.05% TFA的水)以得到rac-1-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁烷-2-醇。LCMS (C8H13BrN2O) (ES, m/z) [M+H]+：233, 235。
中间体146：1-((5-甲基-2-苯基-1,3-二噁烷-5-基)甲基)-4-硝基-1H-吡唑
Figure 45448DEST_PATH_IMAGE195
向(5-甲基-2-苯基-1,3-二噁烷-5-基)甲醇(4.00 g, 19.2 mmol)于 THF (20mL)中的溶液中加入4-硝基-1H-吡唑(2.61 g, 23.1 mmol)、三苯基膦(10.1 g, 38.4mmol)。向混合物中缓慢地加入于 DCM(20 mL)中的DIAD (5.83 g, 28.8 mmol)。将混合物在室温搅拌15 h。蒸发溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-30% 于石油醚中的EtOAc)以得到1-((5-甲基-2-苯基-1,3-二噁烷-5-基)甲基)-4-硝基-1H-吡唑。LCMS (C15H17N3O4)(ES, m/z) [M+H]+：304。
下表17中的中间体以与对于中间体146的合成所述的类似的方式从合适的吡唑和醇制备。
Figure 697010DEST_PATH_IMAGE196
中间体148：rac-3-(4-溴-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-醇
Figure 476747DEST_PATH_IMAGE197
向3-(4-溴-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-酮(中间体138) (1.27 g,5.18 mmol)于 EtOH (25.9 ml)中的混悬液中加入硼氢化钠(0.588 g, 15.5 mmol)。将混合物搅拌16 h。将混合物用EtOAc (50 mL)稀释，用水(50 mL)和氢氧化钾水溶液(1 M, 20mL)洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发以得到3-(4-溴-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-醇，其未经进一步纯化而使用。LCMS (C9H15BrN2O) (ES, m/z) [M+H]+：247, 249。
下表18中的中间体以与中间体148的制备中所述的类似的方式从合适的含有吡唑的酮或酯制备。
Figure 809639DEST_PATH_IMAGE198
中间体153：4-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁烷-2-醇
Figure 624011DEST_PATH_IMAGE199
在15℃在氮气气氛下向3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丙酸乙酯(100 mg, 0.405 mmol)(中间体136)于 THF (4 mL)中的溶液中加入3 M MeMgBr于乙醚中的溶液(1.35 mL, 4.05mmol)。将混合物在15℃搅拌1 h。将混合物在0℃冷却，用水(5 mL)稀释，用EtOAc(2 x 5mL)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过制备型硅胶TLC纯化(用25% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到4-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁烷-2-醇。LCMS (C8H13BrN2O) (ES, m/z) [M+H]+：233, 235。
中间体154：4-溴-1-((外消旋的, 反式)-3-((rac-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁 烷-2-基)-1H-吡唑
Figure 446474DEST_PATH_IMAGE200
向中间体129 (9.40 g, 42.9 mmol)于 DCM (100 mL)中的溶液中加入3,4-二氢-2H-吡喃 (19.6 mL, 215 mmol)和PPTS (10.8 g, 42.9 mmol)。将混合物在室温搅拌4 h。将混合物用DCM(15 mL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液和盐水溶液洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)以得到rac-4-溴-1-((2S,3R)-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丁烷-2-基)-1H-吡唑。LCMS (C12H19BrN2O2) (ES, m/z) [M+H]+：303, 305。
下表19中的中间体以与对于中间体154的合成所述的类似的方式从适当的起始物质制备。
Figure 651190DEST_PATH_IMAGE201
中间体156：rac-3-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-醇
Figure 850091DEST_PATH_IMAGE202
向100 mL圆底烧瓶装入10% Pd/C (200 mg, 0.188 mmol)、3-甲基-3-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇(中间体151) (750 mg, 3.76 mmol)和EtOH (31.4 mL)。将混合物通过抽真空并用氮气回填三次脱气。然后将混合物抽真空并从气囊再填充氢气。将混合物搅拌3 h。将混合物通过西莱特过滤，并将滤液的溶剂蒸发以得到3-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-醇。LCMS (C8H15N3O) (ES, m/z) [M+H]+：170。
下表20中的中间体以与对于中间体156的制备所述的类似的方式从合适的硝基-吡唑制备。
Figure 518969DEST_PATH_IMAGE203
Figure 450016DEST_PATH_IMAGE204
中间体165：(1-(4-((2S,5R和2R,5S)-5-(肼羰基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑- 1-基)-2-甲基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure 204346DEST_PATH_IMAGE205
步骤1：(3R,6S和3S,6R)-1-(1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-吡 唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯
向20 mL小瓶中加入(1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体157) (85.0 mg, 0.334 mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(106 mg, 0.501 mmol)和DCE (1.5 mL)。将混合物搅拌。向混合物中加入2-亚甲基-5-氧代己酸甲酯(0.063 ml,0.40 mmol)。20分钟后，向混合物中加入1 M KOH水溶液(3 mL)、水(3 mL)和DCM (3 mL)。用相分离器收集有机层。蒸发溶剂。将所得残余物溶解于MeOH (1 mL)和水(0.4 mL)中。将混合物在室温搅拌72 h。向混合物中加入水(20 mL)。将混合物用DCM (2 x 20 mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并蒸发溶剂。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)以得到(3R,6S和3S,6R)-1-(1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯。LCMS (C20H34N4O4) (ES, m/z) [M+H]+：395。
步骤2：(1-(4-((2S,5R和2R,5S)-5-(肼羰基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1- 基)-2-甲基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向20 mL小瓶中加入(3R,6S和3S,6R)-1-(1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(99.1 mg, 0.251 mmol)、EtOH (1 mL)和肼水合物(0.175 ml, 3.77 mmol)。将混合物在90℃加热16 h。蒸发溶剂以得到(1-(4-((2S, 5R和2R,5S)-5-(肼羰基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-基)氨基甲酸 叔丁酯。LCMS (C19H34N6O3) (ES, m/z) [M+H]+：395。
下表21中的中间体以与对于中间体165的制备所述的类似的方式从合适的氨基-吡唑制备。
Figure 206937DEST_PATH_IMAGE206
Figure 730322DEST_PATH_IMAGE207
中间体171：1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-甲基哌啶-3- 碳酰肼
Figure 832270DEST_PATH_IMAGE208
步骤1：4-甲基-2-亚甲基-5-氧代戊酸甲酯
将2-(溴甲基)丙烯酸甲酯(6.04 ml, 50.3 mmol)和DMAP (6.76 g, 55.3 mmol)于 DCM (201 mL)中的溶液在室温搅拌30分钟。向混合物中加入丙醛(5.41 ml, 75 mmol)和L-脯氨酸(5.79 g, 50.3 mmol)。将混合物在23℃搅拌48小时。将混合物用水(200 mL)、1M HCl水溶液(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并蒸发溶剂。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-2.5%于DCM中的MeOH为洗脱液)以得到4-甲基-2-亚甲基-5-氧代戊酸甲酯。
步骤2：(3R,5R和3S,5S)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-5- 甲基哌啶-3-甲酸甲酯
将1-(4-氨基-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体163) (1.43 g,8.45 mmol)溶解于MeOH (25.6 mL)中。向混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(6.51 g,30.7 mmol)，随后加入4-甲基-2-亚甲基-5-氧代戊酸甲酯(1.20 mL, 7.68 mmol)。将混合物搅拌5 min (直到三乙酰氧基硼氢化钠进入溶液中)。将混合物用1 M氢氧化钠水溶液(30.7 mL, 30.7 mmol)淬灭并搅拌48 h。蒸发MeOH，并向混合物中加入DCM (30 mL)。分离各层并将DCM 层用无水MgSO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-10%于DCM中的MeOH)以得到(3R,5R和3S,5S)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-甲基哌啶-3-甲酸甲酯。LCMS (C16H27N3O3) (ES, m/z) [M+H]+：310。
步骤3：(3S,5R和3R,5S)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-5- 甲基哌啶-3-甲酸甲酯和(3R,5R和3S,5S)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑- 4-基)-5-甲基哌啶-3-甲酸甲酯的混合物
在60℃将(3R,5R和3S,5S)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(1.39 g, 4.49 mmol)于MeOH (35.9 ml)中与叔丁醇钾(1.01 g,8.98 mmol)搅拌18 h。将混合物冷却至室温，并蒸发溶剂。将所得残余物溶解于DCM中并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。使用Biotage Isolute®相分离器分离各层并将DCM层浓缩。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-10%于DCM中的MeOH)以得到(3S,5R和3R,5S)-1-(1-(2-羟 基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-甲基哌啶-3-甲酸甲酯和(3R,5R和3S,5S)-1- (1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-甲基哌啶-3-甲酸甲酯的混合物。LCMS (C16H27N3O3) (ES, m/z) [M+H]+：310。
步骤4：(3R,5S和3S,5R)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-5- 甲基哌啶-3-碳酰肼和(3R,5R和3S,5S)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4- 基)-5-甲基哌啶-3-碳酰肼
向来自步骤3的产物(1.18 g, 3.81 mmol)于乙醇(15.3 mL)中的溶液中加入肼水合物(1.87 mL, 38.1 mmol)。将混合物搅拌并在80℃加热16 h。将混合物冷却至室温并蒸发溶剂以得到(3R,5S和3S,5R)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-甲 基哌啶-3-碳酰肼和(3R,5R和3S,5S)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4- 基)-5-甲基哌啶-3-碳酰肼LCMS (C15H27N5O2) (ES, m/z) [M+H]+：310。
中间体172和中间体173：N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3R,5S和 3S,5R)-5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和N-(2,4-二甲氧基苄 基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3S,5S和3R,5R)-5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑 啉-5-胺
Figure 73896DEST_PATH_IMAGE209
将N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体85) (2.52 g, 5.24 mmol)进行手性SFC分离(PhenomenexLux-3 21 x 250 mm柱(用20% MeOH (w/ 0.1% NH4OH)为共溶剂))以得到rac-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3R,5S)-5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(峰2和3的组合)和rac-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3S,5S)-5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(峰1和4的组合)。LCMS (C25H29FN6O3)(ES, m/z) [M+H]+：481。
中间体174和中间体175：N-(2,4-二甲氧基苄基)-7,9-二氟-2-((3R,5S和3S,5R)- 5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和N-(2,4-二甲氧基苄基)-7,9-二 氟-2-((3S,5S和3R,5R)-5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 614598DEST_PATH_IMAGE210
步骤1：(3R,5S和3S,5R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7,9-二氟-[1,2,4]三 唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯和(3S,5S和3R,5R)-3-(5-((2,4-二 甲氧基苄基)氨基)-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-甲酸 叔丁酯
向100 mL圆底烧瓶中加入3-(肼羰基)-5-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体56)(1.56 g, 6.07 mmol)、1,4-二噁烷(20 mL)和乙酸(0.174 mL, 3.04 mmol)。将混合物搅拌。向该搅拌的混合物中加入2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-3,5-二氟苄腈(中间体41) (2.00 g, 6.07 mmol)。将混合物在75℃搅拌16 h。将混合物通过硅胶色谱法纯化(用0-50%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)以得到(3R,5S和3S,5R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(第一个洗脱的)和(3S,5S和3R,5R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(第二个洗脱的)。LCMS(C29H34F2N6O4) (ES, m/z) [M+H]+：569。
步骤2：N-(2,4-二甲氧基苄基)-7,9-二氟-2-((3R,5S和3S,5R)-5-甲基哌啶-3- 基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和N-(2,4-二甲氧基苄基)-7,9-二氟-2-((3S,5S 和3R,5R)-5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
以类似于中间体82的合成的方式用甲酸将来自步骤1的(3R,5S和3S,5R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯和(3S,5S和3R,5R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯转化为N-(2,4-二甲氧基苄基)-7,9-二氟-2-((3R,5S和3S,5R)-5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体174)和N-(2,4-二甲氧基苄基)-7,9-二氟-2-((3S,5S和3R,5R)-5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体175) (LCMS (C24H26F2N6O2) (ES, m/z)[M+H]+：469)。
下表22中的中间体以与对于中间体174的合成所述的类似的方式从合适的酰肼和碳二亚胺制备。
Figure 930173DEST_PATH_IMAGE211
中间体178：(R)-8-(二氟甲氧基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-(哌啶-3-基)- [1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
步骤1：2-氨基-4-(二氟甲氧基)-5-氟苄腈
Figure 530919DEST_PATH_IMAGE212
向2-溴-5-(二氟甲氧基)-4-氟苯胺(1.40 g, 5.47 mmol)和氰化锌(1.28 g,10.9 mmol)于NMP (4 mL)中的混合物中加入双(三叔丁基膦)钯(0) (0.699 g, 1.37mmol)。将混合物搅拌并在微波反应器中在氮气下在160℃加热1 h。将混合物冷却至室温。向混合物中加入盐水 (60 mL)，并将混合物用石油醚：乙酸乙酯(3：1) (3 x 25 mL)萃取，将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用25% 于石油醚中的EtOAc)以得到2-氨基-4-(二氟甲氧基)-5-氟苄腈。
步骤2：(2-氰基-5-(二氟甲氧基)-4-氟苯基)氨基甲酸甲酯
Figure 994261DEST_PATH_IMAGE213
将2-氨基-4-(二氟甲氧基)-5-氟苄腈(500 mg, 2.47 mmol)于氯甲酸甲酯(3.04g, 32.2 mmol)中的溶液搅拌并在氮气气氛下在75℃加热15 h。将混合物冷却，用水(10mL)稀释，用EtOAc(3 x 20 mL)萃取，经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化以得到(2-氰基-5-(二氟甲氧基)-4-氟苯基)氨基甲酸甲酯。
步骤3：(R)-3-(8-(二氟甲氧基)-9-氟-5-羟基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2- 基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 276338DEST_PATH_IMAGE214
向(2-氰基-5-(二氟甲氧基)-4-氟苯基)氨基甲酸甲酯(400 mg, 1.537 mmol)于NMP (4 mL)中的溶液中加入(R)-3-(肼羰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(411 mg, 1.691 mmol)(中间体54)。将混合物搅拌并在170℃加热30 min。将混合物冷却，用水(30 mL)稀释并用EtOAc(3 x 30 mL)萃取。合并的有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-30%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)以得到(R)-3-(8-(二氟甲氧基)-9-氟-5-羟基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。LCMS (C20H22F3N5O4) (ES, m/z) [M+H]+：454。
步骤4：3-(8-(二氟甲氧基)-5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 508736DEST_PATH_IMAGE215
在90℃在氮气气氛下向3-(8-(二氟甲氧基)-9-氟-5-羟基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.00 g, 2.21 mmol)于MeCN (10 mL)中的溶液中加入DBU (0.831 mL, 5.51 mmol)、PyBroP (1.34 g, 2.87 mmol)和(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(0.553 g, 3.31 mmol)。将混合物在90℃搅拌12 h。蒸发溶剂。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-50%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)以得到3-(8-(二氟甲氧基)-5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。LCMS(C29H33F3N6O5) (ES, m/z) [M+H]+：603。
步骤5：(R)-8-(二氟甲氧基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-(哌啶-3-基)-[1, 2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 280383DEST_PATH_IMAGE216
在15℃在氮气气氛下向3-(8-(二氟甲氧基)-5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(700 mg, 1.16 mmol)于DCM(7 mL)中的溶液中加入TFA (0.7 mL)。将混合物在15℃搅拌2 h。将混合物冷却，用NaHCO3(15 mL)稀释，用DCM (3 x 20 mL)萃取，经无水Na2SO4干燥，并蒸发溶剂。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-50% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到(R)-8-(二氟甲氧基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺。LCMS(C24H25F3N6O3) (ES, m/z) [M+H]+：503。
实施例1：(R)-1-(3-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉- 2-基)哌啶-1-基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 168705DEST_PATH_IMAGE217
向5 mL微波小瓶装入(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体82) (100 mg, 0.214 mmol)、tBuXPhos-Pd G3 (68.1 mg, 0.086 mmol)和叔丁醇钠(82 mg, 0.86 mmol)。向混合物中加入于THF(1.4 mL)中的1-(3-溴-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体2) (94 mg,0.429 mmol)。将混合物用氮气鼓泡10 min。将混合物搅拌并在90℃加热16 h。将混合物冷却至室温，并通过过滤除去固体并用DCM洗涤。将滤液的溶剂蒸发。向所得残余物中加入TFA(0.5 mL)。将混合物搅拌并在50℃加热3 h。将混合物冷却至室温，并蒸发溶剂。将残余物通过制备型反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBD Prep柱, 19 mm X 100 mm MeCN/H2O(含有0.1% TFA)为洗脱液)以得到(R)-1-(3-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇。LCMS(C21H26FN9O2) (ES, m/z)：458 [M+H]+。1H NMR (499 MHz, DMSO-d 6) δ 8.17 (s, 1H),7.89 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.81 (s, 2H), 7.19 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.31 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 3.97 (s, 4H), 3.91 (s, 2H), 3.15 (ddt, J = 10.9, 6.7, 3.4 Hz,1H), 3.11 – 3.04 (m, 1H), 2.86 (td, J = 12.5, 2.7 Hz, 1H), 2.23 (d, J = 12.1Hz, 1H), 1.92 – 1.77 (m, 2H), 1.75 – 1.63 (m, 1H), 1.10 (d, J = 2.4 Hz, 6H)。
下表15中的本发明的实施例化合物以与实施例1中所述的类似的方式从合适的起始芳基卤化物和胺中间体制备。
Figure 51210DEST_PATH_IMAGE218
Figure 403694DEST_PATH_IMAGE219
Figure 116933DEST_PATH_IMAGE220
Figure 554868DEST_PATH_IMAGE221
Figure 241064DEST_PATH_IMAGE222
Figure 385737DEST_PATH_IMAGE223
Figure 499187DEST_PATH_IMAGE224
Figure 424418DEST_PATH_IMAGE225
Figure 586409DEST_PATH_IMAGE226
Figure 913485DEST_PATH_IMAGE227
实施例40：1-((4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇
步骤1：N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3R,6S或3S,6R)-6-甲基-1- (1-((1-(((RS)-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1, 2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 932256DEST_PATH_IMAGE228
向含有N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3R,6S或3S,6R)-6-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体95) (600 mg, 1.25 mmol)于THF(12 ml)中的溶液的反应小瓶中加入rac-4-溴-1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑(中间体23) (590 mg, 1.87 mmol)，随后加入tBuXPhos-Pd G3 (298mg, 0.375 mmol)和叔丁醇钠(420 mg, 4.37 mmol)。将氮气鼓泡通过混合物10 min。将混合物搅拌并在90℃加热4 h。将混合物冷却至室温。向混合物中加入另外的tBuXPhos-Pd G3(149 mg, 0.188 mmol)，随后加入叔丁醇钠(210 mg, 2.19 mmol)。将氮气鼓泡通过混合物另外10 min。将混合物搅拌并在90℃加热18 h。将混合物冷却至室温，并然后蒸发溶剂。将残余物在DCM和水之间分配。将有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，并通过过滤除去固体。将滤液浓缩。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-40%EtOAc：EtOH (3：1)(于己烷中)为洗脱液)。将所得残余物进一步通过制备型硅胶TLC纯化(用4%于DCM中的MeOH为洗脱液)以得到N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3R,6S或3S,6R)-6-甲基-1-(1-((1-(((RS)-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺。LCMS (C38H47FN8O5) (ES, m/z)：715 [M+H]+。
步骤2：1-((4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1, 5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇
Figure 282466DEST_PATH_IMAGE229
向反应小瓶中加入N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3R,6S或3S,6R)-6-甲基-1-(1-((1-(((RS)-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(1.40 g, 2.22 mmol)和TFA (1.65 mL, 22.2mmol)。将混合物搅拌并在60℃加热1 h。将混合物冷却至室温，并然后蒸发溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用6%于DCM中的(7 M 于MeOH中的氨溶液)为洗脱液)以得到1-((4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇(实施例40)。LCMS (C24H29FN8O2) (ES, m/z)：481 [M+H]+。1H NMR (500 MHz, 甲醇-d 4) δ 7.87 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.35 (s,1H), 7.27 (s, 1H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.14 (s, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.73(d, J = 4.9 Hz, 1H), 3.47 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.36 – 3.20 (m, 3H), 2.11 (d,J = 7.9 Hz, 3H), 2.02 (p, J = 10.7, 9.6 Hz, 2H), 1.89 – 1.69 (m, 2H), 1.55(dq, J = 19.0, 9.6 Hz, 1H), 1.37 – 1.20 (m, 2H), 1.12 (d, J = 6.6 Hz, 3H),0.96 – 0.82 (m, 2H)。
下表16中的本发明的实施例化合物以与对于实施例40的制备所述的类似的方式从合适的起始芳基卤化物和中间体95制备。
Figure 310465DEST_PATH_IMAGE230
Figure 492048DEST_PATH_IMAGE231
实施例48和实施例49：(R或S)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧 基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁 烷-2-醇和(S或R)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1, 5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁烷-2-醇
步骤1：(R或S)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟- 8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲 基丁烷-2-醇和(S或R)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟- 8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲 基丁烷-2-醇
Figure 947300DEST_PATH_IMAGE232
实施例48和实施例49的合成的步骤1以与实施例40的合成的步骤1中所述的类似的方式用中间体95和中间体1进行。将所得非对映异构体混合物通过SFC纯化(ChiralTechnologies AD-H 21 x 250 mm柱(用55% (IPA + 0.2% DIPA)作为共溶剂))，得到对应于(R或S)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁烷-2-醇和(S或R)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁烷-2-醇的峰1和峰2。对于峰1, LCMS (C33H41FN8O4) (ES, m/z)：633 [M+H]+。对于峰2, LCMS(C33H41FN8O4) (ES, m/z)：633 [M+H]+。
步骤2：(R或S)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑 并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁烷-2-醇和(S或R)- 3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2- 基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁烷-2-醇
Figure 519227DEST_PATH_IMAGE233
实施例48和实施例49的合成的步骤2以与实施例40的步骤2中所述的类似的方式进行，其中峰1被转化为(R或S)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁烷-2-醇(实施例48)且峰2被转化为(S或R)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丁烷-2-醇(实施例49)。
对于实施例48：LCMS (C24H31FN8O2) (ES, m/z)：483 [M+H]+。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.99 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H),7.01 (s, 1H), 5.74 (s, 2H), 4.14 (s, 1H), 4.02 (m, 1 H), 4.00 (s, 3H), 3.74(m, 1H), 3.49 (s, 1H), 3.45 (dd, J = 11.6, 3.8 Hz, 1H), 3.32 (dd, J = 11.3,4.0 Hz, 1H), 3.20 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 2.18 – 2.00 (m, 3H), 1.78 (d, J = 9.9Hz, 1H), 1.52 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.14 (s, 3H), 1.11 (d, J = 6.7 Hz, 2H),1.01 (s, 3H)。
对于实施例49：LCMS (C24H31FN8O2) (ES, m/z)：483 [M+H]+。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.99 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H),7.01 (s, 1H), 5.78 (s, 2H), 4.18 (s, 1H), 4.03 (m, 1 H), 4.00 (s, 4H), 3.74(m, 1H), 3.49 (s, 1H), 3.44 (dd, J = 11.6, 3.9 Hz, 1H), 3.33 (dd, J = 11.0,4.2 Hz, 1H), 3.21 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 2.18 – 2.00 (m, 3H), 1.78 (d, J = 9.7Hz, 1H), 1.52 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.14 (s, 3 H), 1.11(m, J = 6.9 Hz, 3H),1.02 (s, 3H)。
实施例50和实施例51：1-((4-((2R,5S或2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1, 2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁 烷-1-醇和1-((4-((2R,5S或2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹 唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇
步骤1：N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3S,6R或3R,6S)-6-甲基-1- (3-甲基-1-((1-(((RS)-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3- 基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2- ((3S,6R,或3R,6S)-6-甲基-1-(5-甲基-1-((1-(((RS)-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基) 甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 85337DEST_PATH_IMAGE234
向反应小瓶中加入N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3S,6R,或3R,6S)-6-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体96) (240 mg, 0.499mmol、tBuXPhos-Pd G3 (119 mg, 0.150 mmol)、rac-4-溴-3-甲基-1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑(中间体31) (329 mg, 0.999 mmol)、叔丁醇钠(288mg, 3.00 mmol)和THF (5 mL)。将混合物用氮气鼓泡5 min。将混合物搅拌并在100℃加热19 h。蒸发溶剂并将残余物通过制备型硅胶TLC纯化(用4% 于DCM中的(7 M于MeOH中的氨)为洗脱液)以得到N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3S,6R或3R,6S)-6-甲基-1-(3-甲基-1-((1-(((RS)-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3S,6R或3R,6S)-6-甲基-1-(5-甲基-1-((1-(((RS)-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的混合物。
步骤2：1-((4-((2R,5S或2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1, 5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇和1- ((4-((2R,5S或2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)- 2-甲基哌啶-1-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇
Figure 387006DEST_PATH_IMAGE235
向N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3S,6R或3R,6S)-6-甲基-1-(3-甲基-1-((1-(((RS)-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3S,6R或3R,6S)-6-甲基-1-(5-甲基-1-((1-(((RS)-四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的混合物(12.0 mg,0.0186 mmol)中加入TFA (2 mL)。将混合物搅拌并在60℃加热1 h。将混合物冷却至室温。将混合物浓缩并将残余物通过制备型硅胶TLC纯化(用4% 于DCM中的(7 M于MeOH中的氨)为洗脱液)，随后通过反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBD Prep柱, 19 mm X 100 mmMeCN/水w/ 0.1% TFA改性剂为洗脱液)以得到1-((4-((2R,5S或2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇(实施例50)和1-((4-((2R,5S或2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇(实施例51)。
对于实施例50：LCMS (C25H31FN8O2) (ES, m/z)：495 [M+H]+。1H NMR (500 MHz, 甲醇-d 4) δ 8.02 (s, 1H), 7.95 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 7.7 Hz, 1H),4.22 (s, 2H), 4.18 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.91 (s, 2H), 3.74 (s,1H), 3.57 – 3.43 (m, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.36 – 2.26 (m, 1H), 2.22 – 2.12 (m,3H), 2.04 (q, J = 9.7 Hz, 3H), 1.84 – 1.73 (m, 1H), 1.68 – 1.58 (m, 1H), 1.27(d, J = 6.5 Hz, 3H)。
对于实施例51：LCMS (C25H31FN8O2) (ES, m/z)：495 [M+H]+。1H NMR (500 MHz, 甲醇-d 4) δ 7.98 – 7.91 (m, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.26 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.27(s, 2 H), 4.03 (s, 3H), 3.96 (d, J = 11.8 Hz, 2H), 3.76 (d, J = 20.2 Hz, 1H),2.61 (s, 2H), 2.45 (d, J = 15.4 Hz, 2H), 2.40 – 2.29 (m, 2H), 2.26 (s, 1H),2.15 (d, J = 10.4 Hz, 3H), 2.11 – 1.97 (m, 3H), 1.89 – 1.74 (m, 1H), 1.75 –1.58 (m, 1H), 1.28 (d, J = 6.6 Hz, 3H)。
下表17中的本发明的实施例化合物以与对于实施例50和实施例51所述的类似的方式从合适的起始芳基卤化物和中间体96制备。
Figure 216421DEST_PATH_IMAGE236
实施例54：1-((4-((3R,5S或3S,5R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇
步骤1：N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-((3R,5S或3S,5R)-5-氟-1-(1-((1-((四 氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-8-甲氧基-[1,2,4]三 唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 337961DEST_PATH_IMAGE237
向含有N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-((3R,5S或3S,5R)-5-氟哌啶-3-基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体99) (80.0 mg, 0.165 mmol)于THF(1.5 mL)中的溶液的反应小瓶中加入4-溴-1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑(中间体23) (83.0 mg, 0.260 mmol)，随后加入tBuXPhos-Pd G3 (39.3 mg,0.0500 mmol)和叔丁醇钠(47.6 mg, 0.495 mmol)。将混合物用氮气吹扫10 min。将混合物搅拌并在90℃加热2 h。蒸发溶剂。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-40%EtOAc：EtOH(3：1)(于己烷类中)为洗脱液)以得到N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-((3R,5S或3S,5R)-5-氟-1-(1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺。LCMS (C37H44F2N8O5) (ES, m/z)：719 [M+H]+。
步骤2：1-((4-((3R,5S或3S,5R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1, 5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇
Figure 707762DEST_PATH_IMAGE238
将N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-((3R,5S或3S,5R)-5-氟-1-(1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(105 mg, 0.146 mmol)于TFA (1.2 mL)中的混合物搅拌并在60℃加热1 h。将混合物浓缩。将残余物通过制备型硅胶TLC纯化(用5%于DCM中的(7 M于MeOH中的氨)为洗脱液)以得到1-((4-((3R,5S或3S,5R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇。LCMS(C23H26F2N8O2) (ES, m/z)：485 [M+H]+。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.96 (d, J = 10.7Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.15 (t, J = 3.8 Hz, 2H), 5.91 (s, 2H), 4.90 (dtt, J =48.1, 9.9, 4.7 Hz, 1H), 4.13 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.74 – 3.64 (m, 2H), 3.42(d, J = 12.6 Hz, 1H), 2.86 (t, J = 11.4 Hz, 1H), 2.71 (dq, J = 10.3, 7.2, 5.2Hz, 2H), 2.17 – 1.92 (m, 3H), 1.88 – 1.73 (m, 2H), 1.57 (dq, J = 18.2, 9.1Hz, 2H)。
下表18中的本发明的实施例化合物以与对于实施例54的制备所述的类似的方式从合适的起始芳基卤化物和中间体99制备。
Figure 536041DEST_PATH_IMAGE239
实施例57：1-((4-((1R,5R或1S,5S)-1-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇
步骤1：N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((1R,5R或1S,5S)-3-(1-((1- ((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-1- 基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 333096DEST_PATH_IMAGE240
向含有2-((1R,5R或1S,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-1-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体97) (60.0 mg, 0.129mmol)于THF (1.5 mL)中的溶液的反应小瓶中加入4-溴-1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑(中间体23) (61.1 mg, 0.194 mmol)，随后加入tBuXPhos-PdG3 (30.8 mg, 0.039 mmol)和叔丁醇钠(43.4 mg, 0.452 mmol)。将氮气鼓泡通过混合物10 min。将混合物搅拌并在90℃加热18 h。将混合物冷却至室温。蒸发溶剂，并将所得残余物通过制备型硅胶TLC纯化(用5%于DCM中的MeOH为洗脱液)以得到N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((1R,5R或1S,5S)-3-(1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-1-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺。LCMS (C37H43FN8O5) (ES, m/z)：699 [M+H]+。
步骤2：1-((4-((1R,5R或1S,5S)-1-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1, 5-c]喹唑啉-2-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇2, 2,2-三氟乙酸盐
Figure 941932DEST_PATH_IMAGE241
将N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((1R,5R或1S,5S)-3-(1-((1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-1-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺( 59 mg, 0.084 mmol)和TFA (1.0 mL)的混合物搅拌并在60℃加热1 h。将混合物冷却至室温。蒸发溶剂。将所得残余物通过制备型硅胶TLC纯化(用8%于DCM中的(7 M于MeOH中的氨)为洗脱液)。将所得残余物进一步通过制备型反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBD Prep柱, 19 mm X 100 mm MeCN/H2O(含有0.1% TFA改性剂)为洗脱液)以得到1-((4-((1R,5R或1S,5S)-1-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)环丁烷-1-醇2,2,2-三氟乙酸盐)。LCMS (C23H25FN8O2) (ES, m/z)：465 [M+H]+。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.96 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.06 (s, 1H),4.18 (s, 2H), 4.08 (s, 3H), 3.79 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.69 (d, J = 8.7 Hz,1H), 3.54 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.35 (s, 2H), 3.20 (dd, J = 8.8, 3.8 Hz, 2H),2.32 (s, 1H), 2.13 – 2.04 (m, 3H), 1.75 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 1.58 (d, J = 4.9Hz, 1H)。
下表19中的实施例58以与对于实施例57的制备所述的类似的方式从中间体97和合适的起始芳基卤化物制备。
Figure 787528DEST_PATH_IMAGE242
实施例59：9-氟-2-((3S,5R或3R,5S)-5-氟-1-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡 唑-4-基)哌啶-3-基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
步骤1：N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-((3S,5R或3R,5S)-5-氟-1-(1-(四氢-2H- 吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 798209DEST_PATH_IMAGE243
向反应小瓶中加入N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-((3S,5R或3R,5S)-5-氟哌啶-3-基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体100) (50.0 mg, 0.103mmol)、tBuXPhos-Pd G3 (24.6 mg, 0.0310 mmol)、4-溴-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑(中间体15) (23.9 mg, 0.103 mmol)、叔丁醇钠(59.5 mg, 0.619 mmol)和THF (1 mL)。将混合物用氮气吹扫5 min。将混合物搅拌并在100℃加热4 h。蒸发溶剂，并将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100%于己烷类中的(30% 于EtOAc中的MeOH))，得到N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-((3S,5R或3R,5S)-5-氟-1-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺。
步骤2：9-氟-2-((3S,5R或3R,5S)-5-氟-1-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4- 基)哌啶-3-基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 766165DEST_PATH_IMAGE244
向反应小瓶中加入N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-((3S,5R或3R,5S)-5-氟-1-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(85.0 mg, 0.130 mmol)加入TFA (2 mL)。将混合物搅拌并在60℃加热1 h。蒸发溶剂，并将残余物通过制备型反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBD Prep柱, 19 mmX 100 mm MeCN/H2O(含有0.1% TFA改性剂)为洗脱液)，得到9-氟-2-((3S,5R或3R,5S)-5-氟-1-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺。LCMS (C23H26F2N8O2) (ES, m/z)：485 [M+H]+。1H NMR (500 MHz, 甲醇-d 4) δ 7.93 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.23 (d, J = 7.5Hz, 1H), 4.95 (dt, J = 10.3, 5.4 Hz, 1H), 4.32 (dq, J = 11.0, 6.1, 5.6 Hz,1H), 4.13 – 3.95 (m, 4H), 3.78 (d, J = 11.1 Hz, 2H), 3.65 – 3.52 (m, 2H),3.46 (t, J = 11.2 Hz, 1H), 2.89 (t, J = 11.4 Hz, 1H), 2.82 – 2.59 (m, 2H),2.12 – 1.92 (m, 4H)。
实施例60和实施例61：(R或S)-1-(4-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)氮杂环庚烷-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和(S或R)-1- (4-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)氮杂环庚烷-1-基)- 1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 797051DEST_PATH_IMAGE245
向5 mL微波小瓶装入rac-2-(氮杂环庚烷-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体83) (100 mg, 0.208 mmol)和THF(1.3 mL)。向混合物中加入1-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体4) (91.0mg, 0.420 mmol)，随后加入tBuXPhos-Pd G3 (66.1 mg, 0.0830 mmol)和叔丁醇钠(80.0mg, 0.832 mmol)。将氮气鼓泡通过混合物10 min。将混合物搅拌并在90℃加热12 h。将混合物冷却至室温，并然后通过过滤除去固体并用DCM洗涤。将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物溶解于TFA (802 µL, 10.4 mmol)中并在50℃加热3 h。将混合物冷却至室温，并蒸发溶剂。将所得残余物通过制备型反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBD Prep柱, 19 mm X100 mm MeCN/H2O(含有0.1% TFA改性剂)为洗脱液)以得到外消旋的产物。将外消旋混合物通过手性SFC分离拆分(Chiral Technologies OJ-H 21 x250 mm柱(用25% (异丙醇w/0.1% NH4OH改性剂)作为共溶剂))，得到(R或S)-1-(4-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)氮杂环庚烷-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例60, 第一个洗脱的峰)和(S或R)-1-(4-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)氮杂环庚烷-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例61,第二个洗脱的峰)。
对于实施例60：LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z)：469 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d6) δ 7.88 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 26.0 Hz, 2H), 7.18 (d, J =7.9 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 4.63 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.87 (s,2H), 3.75 (dd, J = 14.3, 3.9 Hz, 1H), 3.53 (dd, J = 14.3, 10.0 Hz, 1H), 3.45(dq, J = 9.7, 5.0, 4.6 Hz, 1H), 3.37 (dd, J = 14.0, 6.1 Hz, 1H), 3.23 (ddd, J= 13.3, 7.6, 5.1 Hz, 1H), 2.07 – 1.82 (m, 3H), 1.71 (s, 1H), 1.58 – 1.45 (m,2H), 1.03 (d, J = 3.5 Hz, 6H)。
对于实施例61：LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z)：469 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d6) δ 7.88 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.70 (s, 2H), 7.18 (d, J = 7.7 Hz, 1H),7.13 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 4.62 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.87 (s, 2H), 3.75(dd, J = 14.4, 3.8 Hz, 1H), 3.53 (dd, J = 14.2, 10.2 Hz, 1H), 3.45 (dt, J =9.5, 4.9 Hz, 1H), 3.38 (s, 1H), 3.24 (dd, J = 13.6, 5.5 Hz, 2H), 2.08 – 1.84(m, 3H), 1.71 (s, 1H), 1.50 (d, J = 12.7 Hz, 2H), 1.03 (d, J = 3.4 Hz, 6H)。
下表20中的本发明的实施例化合物以与对于实施例60和实施例61的制备所述的类似的方式从合适的起始胺和芳基卤化物制备，其中通过SFC分离对应的最终化合物的所得异构体混合物。
Figure 508655DEST_PATH_IMAGE246
Figure 373843DEST_PATH_IMAGE247
实施例68和实施例69：1-(4-((3R,5S或3S,5R)-3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2, 4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1- (4-((3S,5R或3R,5S)-3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)- 5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
步骤1：rac-1-(4-((3R,5S或3S,5R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7- 甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙 烷-2-醇
Figure 450383DEST_PATH_IMAGE248
向40 mL小瓶中加入rac-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-((3R,5S或3S,5R)-5-氟哌啶-3-基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体102) (736 mg, 1.52mmol)、1-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体4) (998 mg, 4.56 mmol)、tBuXPhos-Pd G3 (965 mg, 1.22 mmol)、叔丁醇钠(876 mg, 9.11 mmol)和THF (15.0mL)。将混合物用氮气净化5 min。将混合物搅拌并在80℃加热6 h。将混合物冷却至室温。蒸发溶剂，并将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100% EtOAc：EtOH (3：1)(于己烷类中)为洗脱液)以得到rac-1-(4-((3R,5S或3S,5R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇。LCMS (C31H36F2N8O4) (ES, m/z)：623 [M+H]+。
步骤2：1-(4-((3R,5S或3S,5R)-3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5- c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-((3S,5R或 3R,5S)-3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1- 基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 33811DEST_PATH_IMAGE249
向20 mL小瓶中加入rac-1-(4-((3R,5S或3S,5R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(550 mg, 0.883 mmol)和TFA (8.83 mL, 115 mmol)。将混合物搅拌并在50℃加热2 h。蒸发溶剂。向所得残余物中加入MeOH并将混合物过滤。将滤液的溶剂蒸发。将外消旋混合物通过手性SFC分离拆分(Chiral Technologies AS-H 21 x 250 mm柱(用15% (MeOH w/ 0.1% NH4OH改性剂)作为共溶剂))以得到1-(4-((3R,5S或3S,5R)-3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例68, 第一个洗脱的峰)和1-(4-((3S,5R或3R,5S)-3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例69, 第二个洗脱的峰)。
对于实施例68：LCMS (C22H26F2N8O2) (ES, m/z)：473 [M+H]+。1H NMR (600 MHz,DMSO-d6) δ 7.82 (s, 2H), 7.43 (dd, J = 8.3, 2.6 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.28(s, 1H), 7.18 (dd, J = 11.0, 2.6 Hz, 1H), 4.94 (dtt, J = 48.3, 10.3, 4.8 Hz,1H), 4.65 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.89 (s, 2H), 3.78 – 3.71 (m, 1H), 3.66 (d,J = 11.5 Hz, 1H), 3.40 (t, J = 11.8 Hz, 1H), 2.75 (t, J = 11.5 Hz, 1H), 2.66(d, J = 6.1 Hz, 1H), 2.58 (td, J = 10.4, 5.2 Hz, 1H), 1.92 (p, J = 11.3 Hz,1H), 1.04 (s, 6H)。
对于实施例69：LCMS (C22H26F2N8O2) (ES, m/z)：473 [M+H]+。1H NMR (600 MHz,DMSO-d6) δ 7.82 (s, 1H), 7.44 (dd, J = 8.3, 2.7 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.28(s, 1H), 7.19 (dd, J = 11.1, 2.7 Hz, 1H), 4.95 (ddt, J = 48.3, 10.4, 5.2 Hz,1H), 4.64 (s, 1H), 3.94 (s, 2H), 3.89 (s, 1H), 3.74 (d, J = 10.6 Hz, 1H),3.66 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 3.40 (t, J = 11.8 Hz, 1H), 2.74 (d, J = 11.5 Hz,1H), 2.65 (s, 1H), 2.58 (dt, J = 10.3, 5.2 Hz, 1H), 1.97 – 1.89 (m, 1H), 1.04(s, 6H)。
下表21中的本发明的实施例化合物以与对于实施例68和实施例69的制备所述的类似的方式从中间体102和合适的起始芳基卤化物制备，其中通过SFC分离对应的最终化合物的所得异构体混合物。
Figure 549106DEST_PATH_IMAGE251
实施例74和实施例75：1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2, 4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1- (4-((3S,5S或3R,5R)-3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)- 5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
步骤1：rac-1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7- 甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙 烷-2-醇
Figure 268800DEST_PATH_IMAGE252
向20 mL小瓶中加入rac-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-((3R,5R或3S,5S)-5-氟哌啶-3-基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体102) (434 mg, 0.896mmol)、1-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体4) (589 mg, 2.69 mmol)、tBuXPhos-Pd G3 (569 mg, 0.717 mmol)、叔丁醇钠(517 mg, 5.37 mmol)和THF (9.0mL)。将混合物用氮气净化5 min。将混合物搅拌并在80℃加热6 h。将混合物冷却至室温。蒸发溶剂。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用30-50%EtOAc：EtOH (3：1)(于己烷中)为洗脱液)，得到rac-1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇。LCMS (C31H36F2N8O4) (ES, m/z)：623 [M+H]+。
步骤2：1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5- c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-((3S,5S或 3R,5R)-3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1- 基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 781821DEST_PATH_IMAGE253
向含有rac-1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(439 mg, 0.705 mmol)的20 mL小瓶中加入TFA (7.05 mL, 92.0 mmol)。将混合物搅拌并在50℃加热2 h。蒸发溶剂。向残余物中加入MeOH。将混合物过滤，并然后将滤液的溶剂蒸发。将外消旋混合物通过手性SFC分离拆分(Chiral Technologies AS-H 21 x 250 mm柱(用15% (MeOH w/ 0.1% NH4OH改性剂)作为共溶剂))，得到1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例74, 第一个洗脱的峰)和1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例75, 第二个洗脱的峰)。
对于实施例74：LCMS (C22H26F2N8O2) (ES, m/z)：473 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d6) δ 7.83 (s, 2H), 7.43 (dd, J = 8.4, 2.7 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.24(s, 1H), 7.19 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.11 (d, J = 46.5 Hz, 1H), 4.64 (s, 1H),3.94 (s, 3H), 3.89 (s, 2H), 3.69 – 3.48 (m, 3H), 2.97 – 2.89 (m, 1H), 2.90 –2.79 (m, 1H), 2.40 (s, 1H), 2.14 (dt, J = 40.9, 11.8 Hz, 1H), 1.04 (s, 6H)。
对于实施例75：LCMS (C22H26F2N8O2) (ES, m/z)：473 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d6) δ 7.83 (s, 2H), 7.43 (dd, J = 8.4, 2.7 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.24(s, 1H), 7.19 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.11 (d, J = 47.5 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H),3.89 (s, 2H), 3.67 – 3.50 (m, 3H), 2.97 – 2.90 (m, 1H), 2.90 – 2.79 (m, 1H),2.41 (s, 1H), 2.14 (dt, J = 40.8, 12.8 Hz, 1H), 1.04 (s, 6H)。
下表22中的本发明的实施例化合物以与对于实施例74和实施例75的制备所述的类似的方式从中间体103和合适的起始芳基卤化物制备，其中通过SFC分离对应的最终化合物的所得异构体混合物。
Figure 852546DEST_PATH_IMAGE254
实施例80和实施例81：1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2, 4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1- (4-((3S,5S或3R,5R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)- 5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
步骤1：rac-1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8- 甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙 烷-2-醇
Figure 905952DEST_PATH_IMAGE255
实施例80和实施例81的步骤1以与实施例74和实施例75的步骤1类似的方式用中间体101和中间体4进行以得到rac-1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇。LCMS (C31H36F2N8O4) (ES, m/z)：623 [M+H]+。
步骤2：1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5- c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-((3S,5S或 3R,5R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1- 基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 417836DEST_PATH_IMAGE256
实施例80和实施例81的步骤2以与实施例74和实施例75的步骤2类似的方式进行，其中rac-1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇被转化为对应的最终化合物的外消旋的混合物。将外消旋混合物通过手性SFC分离拆分(Chiral Technologies OJ-H 21 x250 mm柱(用25% (MeOH w/ 0.2% DIPA改性剂)作为共溶剂))，得到1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例80, 第一个洗脱的峰)和1-(4-((3S,5S或3R,5R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例81, 第二个洗脱的峰)。
对于实施例80：LCMS (C22H26F2N8O2) (ES, m/z)：473 [M+H]+。1H NMR (500 MHz,甲醇-d 4) δ 7.94 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.24 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 5.12 (d, J = 46.8 Hz, 1H), 4.02 (d, J = 3.8 Hz, 3H), 3.84 (d,J = 12.4 Hz, 1H), 3.82 – 3.74 (m, 1H), 3.74 – 3.62 (m, 1H), 3.11 (t, J = 11.0Hz, 1H), 3.08 – 2.95 (m, 1H), 2.67 (s, 1H), 2.59 (s, 1H), 2.31 – 2.12 (m,1H), 1.16 (s, 6H)。
对于实施例81：LCMS (C22H26F2N8O2) (ES, m/z)：473 [M+H]+。1H NMR (500 MHz,甲醇-d 4) δ 7.94 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.24 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 47.0 Hz, 1H), 4.02 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 3.85 (d,J = 11.0 Hz, 1H), 3.82 – 3.73 (m, 1H), 3.73 – 3.60 (m, 1H), 3.11 (t, J = 11.0Hz, 1H), 3.04 (dd, J = 36.0, 12.9 Hz, 1H), 2.59 (s, 1H), 2.30 – 2.12 (m, 1H),1.16 (s, 6H)。
实施例82和实施例83：(1R或1S,2R或2S)-2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基- [1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环戊烷-1-醇和 (1S或1R,2S或2R)-2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉- 2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环戊烷-1-醇
步骤1：(1R或1S,2R或2S)-2-(4-((R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8- 甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环戊烷- 1-醇和(1S或1R,2S或2R)-2-(4-((R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基- [1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环戊烷-1-醇
Figure 898496DEST_PATH_IMAGE257
向含有(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体82) (150 mg, 0.322 mmol)于THF (3.0 mL)中的溶液的反应小瓶中加入2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环戊醇2,2,2-三氟乙酸盐(中间体6)(184 mg, 0.514 mmol)，随后加入tBuXPhos-Pd G3 (77.0 mg, 0.0960 mmol)和叔丁醇钠(93.0 mg, 0.965 mmol)。将氮气鼓泡通过混合物10 min。将混合物搅拌并在90℃加热4 h。将混合物冷却至室温，并然后将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-40%EtOAc：EtOH (3：1)(于己烷中)为洗脱液)，得到产物的非对映异构体混合物。将混合物通过SFC分离纯化(Chiral Technologies OJ-H 21 x250 mm柱(用30% MeOH作为共溶剂))，得到对应于(1R或1S,2R或2S)-2-(4-((R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环戊烷-1-醇和(1S或1R,2S或2R)-2-(4-((R)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环戊烷-1-醇的峰1和峰2 。对于峰1,LCMS (C33H39FN8O4) (ES, m/z)：631 [M+H]+。对于峰2, LCMS (C33H39FN8O4) (ES, m/z)：631[M+H]+。
步骤2：(1R或1S,2R或2S)-2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环戊烷-1-醇和(1S或1R,2S或 2R)-2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1- 基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环戊烷-1-醇
Figure 456516DEST_PATH_IMAGE258
实施例82和实施例83的步骤2以与实施例40的步骤2类似的方式进行，其中从步骤1获得的峰1和峰2被转化为(1R或1S,2R或2S)-2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环戊烷-1-醇和(1S或1R,2S或2R)-2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环戊烷-1-醇，它们分别是实施例82和实施例83的最终化合物。
对于实施例82：LCMS (C24H29FN8O2) (ES, m/z)：481 [M+H]+。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.97 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.13 (d, J = 7.6 Hz, 1H),7.07 (s, 1H), 5.89 (s, 2H), 4.36 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.68 (dd,J = 11.5, 3.6 Hz, 1H), 3.38 (tt, J = 7.5, 3.8 Hz, 2H), 2.95 (t, J = 11.1 Hz,1H), 2.67 (td, J = 11.3, 4.4 Hz, 1H), 2.40 – 2.07 (m, 3H), 1.99 – 1.73 (m,7H), 0.88 (s, 3H)。
对于实施例83：LCMS (C24H29FN8O2) (ES, m/z)：481 [M+H]+。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.97 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.13 (d, J = 7.6 Hz, 1H),7.07 (s, 1H), 5.88 (s, 2H), 4.35 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.74 –3.64 (m, 1H), 3.43 – 3.31 (m, 2H), 2.95 (t, J = 11.1 Hz, 1H), 2.67 (td, J =11.2, 4.5 Hz, 1H), 2.39 – 2.10 (m, 3H), 2.00 – 1.74 (m, 7H), 0.88 (s, 3H)。
下表23中的本发明的实施例化合物以与对于实施例82和实施例83的制备所述的类似的方式从合适的中间体和起始物质制备。在每种情况下，都对从第一步形成的中间混合物进行SFC分离。显示了用于分离这些中间体的SFC条件，以及从第二步形成的相应最终产物。
Figure 985718DEST_PATH_IMAGE259
实施例88：(1R或1S,2R或2S)-2-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧 基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)环戊烷-1-醇
Figure 680004DEST_PATH_IMAGE260
将N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3R,6S或3S,6R)-6-甲基-1-(1-((1R或1S,2R或2S)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环戊基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体120) (5.0 mg, 7.0 μmol)于TFA (0.3 mL)中的混合物在60℃加热25 min。将混合物浓缩。将残余物通过制备型硅胶TLC纯化(用5% 于DCM中的(7 M于MeOH中的氨)洗脱)以得到(1R或1S,2R或2S)-2-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)环戊烷-1-醇。LCMS (C24H29FN8O2) (ES, m/z)：481 [M+H]+。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.99 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.02(s, 1H), 5.87 (s, 2H), 4.35 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.21 (d, J = 8.7 Hz, 1H),4.01 (s, 3H), 3.74 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 3.47-3.41 (m, 1H), 3.32 (d, J=11.0Hz, 1H), 3.23 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 2.26 (m, 1H), 2.16 – 2.08 (m, 3H), 2.08 –2.00 (m, 2H), 1.90 – 1.71 (m, 4H), 1.13 (d, J = 6.7 Hz, 3H)。
实施例89：(1S或1R,2S或2R)-2-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧 基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)环戊烷-1-醇
Figure 597145DEST_PATH_IMAGE261
实施例89以与实施例88类似的方式从中间体121制备以得到(1S或1R,2S或2R)-2-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)环戊烷-1-醇。LCMS (C24H29FN8O2) (ES, m/z)：481 [M+H]+。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.99 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.15(d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 5.81 (s, 2H), 4.36 (q, J = 7.1 Hz, 1H),4.27 – 4.15 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.79 – 3.67 (m, 1H), 3.44 (dd, J = 11.5,4.2 Hz, 1H), 3.37 – 3.28 (m, 1H), 3.22 (t, J = 11.1 Hz, 1H), 2.34 – 2.21 (m,1H), 2.19 – 1.96 (m, 4H), 1.94 – 1.62 (m, 6H), 1.12 (d, J = 6.7 Hz, 3H)。
实施例90和91：1-(4-((3R,5S或3S,5R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑 并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4- ((3S,5R或3R,5S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲 基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 580144DEST_PATH_IMAGE262
向rac-1-(4-((3S,5R或3R,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体122) (150 mg, 0.242 mmol)于DCM (2 mL)中的溶液中加入TFA (2 mL)。将混合物在50℃搅拌10 h。将混合物浓缩。将外消旋混合物纯化并通过手性SFC拆分(Phenomenex Lux-2 4.6 x 150 mm柱(用0-40% (EtOH w/ 0.05% DEA)为共溶剂))以得到分别对应于实施例90和实施例91的1-(4-((3R,5S或3S,5R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(第一个洗脱的峰)和1-(4-((3S,5R或3R,5S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(第二个洗脱的峰)。
对于实施例90：LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z) [M+H]+：469。1H NMR (400MHz, 甲醇-d 4) δ = 7.66 (d, J=10.8 Hz, 1H), 7.32 (d, J=10.0 Hz, 2H), 6.94 (d, J=7.8Hz, 1H), 3.98 (s, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.81 - 3.71 (m, 1H), 3.38 (br d, J=9.0Hz, 1H), 3.32 - 3.22 (m, 2H), 2.69 (t, J=11.6 Hz, 1H), 2.32 - 2.13 (m, 2H),2.02 - 1.89 (m, 1H), 1.36 (q, J=12.5 Hz, 1H), 1.14 (s, 6H), 1.00 (d, J=6.6Hz, 3H)。
对于实施例91：LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z) [M+H]+：469。1H NMR (400MHz, 甲醇-d 4) δ = 7.68 (d, J=10.8 Hz, 1H), 7.37 (d, J=19.1 Hz, 2H), 6.98 (d, J=7.8Hz, 1H), 3.99 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.84 - 3.76 (m, 1H), 3.42 (br d, J=10.3Hz, 1H), 3.34 - 3.26 (m, 2H), 2.77 (t, J=11.6 Hz, 1H), 2.32 - 2.20 (m, 2H),1.99 (br d, J=6.6 Hz, 1H), 1.40 (q, J=12.5 Hz, 1H), 1.19 - 1.09 (m, 7H), 1.02(d, J=6.6 Hz, 3H)。
实施例92：rac-1-(4-((3R,5R或3S,5S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑 并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 975353DEST_PATH_IMAGE263
向1-(4-((3R,5R和3S,5S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体123) (20 mg, 0.032 mmol)于DCM (2 mL)中的溶液中加入TFA (2 mL)。将混合物搅拌并在45℃加热5 h。将混合物浓缩。将残余物通过反相HPLC纯化 (Waters SunFireC18 OBD Prep柱, 19 mm X 100 mm(用MeCN/水(w/ 0.1% TFA作为改性剂)为洗脱液))，以得到1-(4-((3R,5R和3S,5S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇。LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z) [M+H]+：469。1H NMR (400MHz, 甲醇-d 4) δ = 8.02 - 7.90 (m, 2H), 7.73 (s, 1H),7.27 - 7.15 (m, 1H), 4.22 (br d, J=11.2 Hz, 1H), 4.13 - 4.07 (m, 2H), 4.00(s, 4H), 3.78 - 3.65 (m, 2H), 3.57 - 3.47 (m, 1H), 3.11 (t, J=11.0 Hz, 1H),2.54 (br d, J=13.7 Hz, 1H), 2.27 - 2.14 (m, 1H), 1.90 - 1.80 (m, 1H), 1.17(s, 6H), 1.11 (d, J=6.8 Hz, 3H)。
实施例93：(R)-5-(4-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑 啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)戊烷-2-酮
Figure 789726DEST_PATH_IMAGE264
向TFA (0.5 mL)于DCM (0.5 mL)中的搅拌的混合物中加入(R)-5-(4-(3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)戊烷-2-酮(中间体124) (28.0 mg, 0.0450 mmol)。将混合物搅拌并在50℃加热15 h。将混合物冷却，并蒸发溶剂。将所得残余物通过制备型反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBD Prep柱, 19 mm X 100 mm(用MeCN/水(w/ 0.1% TFA作为改性剂)为洗脱液))，以得到(R)-5-(4-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)戊烷-2-酮。LCMS (C23H27FN8O2) (ES, m/z) [M+H]+：467。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ：7.90 (d, J=10.96 Hz, 1 H), 7.36 (s, 1 H), 7.31(s, 1 H), 7.19 (d, J=7.45 Hz, 1 H), 4.62 (br s, 1 H), 4.05 (t, J=6.80 Hz, 2H), 3.99 (s, 3 H), 3.67 - 3.78 (m, 1 H), 3.39 (br d, J=11.84 Hz, 1 H), 2.95(t, J=11.18 Hz, 1 H), 2.60 - 2.74 (m, 1 H), 2.44 (t, J=7.02 Hz, 2 H), 2.28(br d, J=9.21 Hz, 1 H), 2.10 (s, 3 H), 2.02 (quin, J=7.02 Hz, 2 H), 1.81 -1.95 (m, 3 H)。
实施例94和95：(S或R)-5-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)戊烷-2-醇和(R或S)-5-(4-((R)-3-(5- 氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)戊 烷-2-醇
Figure 284292DEST_PATH_IMAGE265
向(R)-5-(4-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)戊烷-2-酮(实施例93) (15.0 mg, 0.0320 mmol)于THF (2mL)中的搅拌的混合物中加入NaBH4 (2.4 mg, 0.064 mmol)。将混合物在25℃搅拌3 h。将反应混合物用1 M HCl水溶液(2 mL)淬灭。将混合物用EtOAc(2 x 30 mL)萃取，并将有机层经硫酸钠干燥，过滤并然后将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过反相HPLC纯化(WatersSunFire C18 OBD Prep柱, 19 mm X 100 mm(用MeCN/水(w/ 0.1% TFA作为改性剂)为洗脱液))，得到分别对应于实施例94和实施例95的(S或R)-5-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)戊烷-2-醇和(R或S)-5-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)戊烷-2-醇。
对于实施例94：LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z) [M+H]+：469。1H NMR (400 MHz,CD3OD) δ：7.94 (d, J=10.83 Hz, 1 H), 7.89 (s, 1 H), 7.67 (s, 1 H), 7.25 (d, J=7.63 Hz, 1 H), 4.19 (br t, J=7.10 Hz, 2 H), 4.08 - 4.00 (m, 4 H), 3.78 - 3.66(m, 2 H), 3.57 (br s, 2 H), 3.36 (t, J=1.68 Hz, 1 H), 2.40 (br s, 1 H), 2.16– 1.85 (m, 5 H), 1.48 - 1.36 (m, 2 H), 1.17 (d, J=6.26 Hz, 3 H)。
对于实施例95：LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z) [M+H]+：469。1H NMR (400 MHz,CD3OD) δ：7.95 (d, J=10.68 Hz, 1 H), 7.46 (s, 1 H), 7.37 (s, 1 H), 7.24 (d, J=7.78 Hz, 1 H), 4.11 (t, J=6.87 Hz, 3 H), 4.03 (s, 4 H), 3.84 - 3.62 (m, 3 H),3.48 - 3.37 (m, 5 H), 3.31 (br s, 1 H), 3.19 (s, 1 H), 2.33 (s, 1 H), 2.02 –1.77 (m, 5 H), 1.41 (br d, J=5.80 Hz, 2 H), 1.16 (d, J=6.10 Hz, 3 H)。
实施例96和实施例97：rac-(1r,4s或1r,4r)-4-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基- 9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1- 基)-1-甲基环己烷-1-醇和rac-(1r,4r或1r,4s)-4-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9- 氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)- 1-甲基环己烷-1-醇
步骤1：4-硝基-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑
Figure 551325DEST_PATH_IMAGE266
在氮气气氛下向1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-醇(5.00 g, 31.6 mmol)、PPh3(12.4 g, 47.4 mmol)和4-硝基-1H-吡唑(4.29 g, 37.9 mmol)于DCM (80 mL)中的搅拌的混合物中加入二氮烯-1,2-二甲酸二叔丁酯(18.2 g, 79.0 mmol)，并将混合物在25℃搅拌10 h。将混合物浓缩并通过硅胶色谱法纯化(用10-25% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到4-硝基-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑。LCMS (C11H15N3O4) (ES, m/z) [M+H]+：254。
步骤2：1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-4-胺
Figure 750226DEST_PATH_IMAGE267
向4-硝基-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑(5.50 g, 21.7 mmol)于MeOH (50 mL)和EtOAc (50 mL)中的搅拌的混合物中加入10% Pd/C (0.462 g, 4.34mmol)。将混合物用氮气净化两次并在氢气气氛下搅拌6 h。将混合物过滤并蒸发溶剂。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用20-50% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-4-胺。LCMS (C11H17N3O2) (ES, m/z) [M+H]+：224。
步骤3：1-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-甲 酸甲酯
Figure 622367DEST_PATH_IMAGE268
向1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-4-胺(2.14 g, 9.60 mmol)和四氟硼酸锂(0.600 g, 6.40 mmol)于TFE (15 mL)中的搅拌的混合物中加入2-亚甲基-5-氧代己酸乙酯(1.00 g, 5.88 mmol)。将混合物搅拌并在80℃加热10 h。将混合物冷却，用水(15 mL)稀释，并用EtOAc(2 x 30 mL)萃取。将有机层干燥(无水Na2SO4)，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。向所得残余物中加入MeOH (15 mL)和10% Pd/C (0.068 g, 0.64 mmol)。将混合物脱气并用氮气净化两次并在氢气气氛下搅拌10 h。将混合物过滤，并然后将滤液浓缩。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用10-50% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到1-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-甲酸乙酯。LCMS (C20H31N3O4)(ES, m/z) [M+H]+：378。
步骤4：1-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳 酰肼
Figure 615730DEST_PATH_IMAGE269
向1-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-甲酸酯(450 mg, 1.192 mmol)于EtOH (10 mL)中的搅拌的混合物中加入肼水合物(382 mg,11.92 mmol)。将混合物搅拌并在80℃加热10 h。将混合物浓缩以得到1-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼，其未经进一步纯化地使用。LCMS(C18H29N5O3) (ES, m/z) [M+H]+ 364。
步骤5：rac-2-((3R,6S或3S,6R)-1-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡 唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1, 5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 370060DEST_PATH_IMAGE270
向40 mL小瓶装入1-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼(351 mg, 0.967 mmol)和DCM (2 mL)。向该混合物中加入AcOH (0.025 mL,0.44 mmol)，随后加入2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-5-氟-4- 甲氧基苄腈(中间体37) (300 mg, 0.879 mmol)。将混合物搅拌并在35℃加热16 h。然后将混合物浓缩。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用10-50% 于石油醚中的EtOAc为洗脱液)以得到顺式非对映异构体, 2-((3R,6S和3S,6R)-1-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺。LCMS (C36H43FN8O5) (ES, m/z) [M+H]+ 687。
步骤6：4-(4-((2S,5R和2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5- c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)环己酮
Figure 107072DEST_PATH_IMAGE271
向2-((3R,6S和3S,6R)-1-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(40.0 mg, 0.0580 mmol)于DCM (2 mL)中的搅拌的混合物中加入TFA (2 mL)。将混合物搅拌10 h。将混合物浓缩。向残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液。将混合物用EtOAc(2 x 5 mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过制备型硅胶TLC纯化(用EtOAc为洗脱液)以得到rac-4-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)环己酮。LCMS (C25H29FN8O2) (ES, m/z) [M+H]+ 493。
步骤7：(1r,4s或1r,4r)-4-(4-((2S,5R和2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1, 2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环己烷-1- 醇和(1r,4r或1r,4s)-4-(4-((2S,5R和2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环己烷-1-醇
Figure 299631DEST_PATH_IMAGE272
向rac-4-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)环己酮(18 mg, 0.037 mmol)于THF(5 mL)中的搅拌的混合物中加入甲基溴化镁(0.122 mL, 0.365 mmol)。将混合物在0℃搅拌12 h 。将反应混合物用NH4Cl水溶液(5 mL)淬灭并用EtOAc(2 x 5 mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过制备型反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBD Prep柱, 19 mm X 100 mm(用MeCN/水(w/0.1% TFA改性剂)为洗脱液))以得到对应于实施例96和实施例97的(1r,4s或1r,4r)-4-(4-((2S,5R和2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环己烷-1-醇和(1r,4r或1r,4s)-4-(4-((2S,5R和2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环己烷-1-醇。
对于实施例96：1H NMR (400MHz, MeOD) δ 7.98 (s, 1H), 7.92 (d, J=11.2Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.22 (d, J=7.6 Hz, 1H), 4.18 - 4.29 (m, 1H), 4.01 (s,4H), 3.85 - 3.97 (m, 2H), 3.63 - 3.65 (m, 1H), 2.46 -2.48(m, 1H), 2.15 - 2.30(m, 2H), 1.90 - 2.13 (m, 5H), 1.73 - 1.84 (m, 2H), 1.60- 1.72 (m, 2H), 1.31(s, 3H), 1.20 (d, J=6.8 Hz, 3H)。LCMS (C26H33FN8O2) (ES, m/z) [M+H]+ 509。
对于实施例97：1H NMR (400MHz, MeOD) δ 8.01 (s, 1H), 7.91 (d, J=11.2Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.21 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.06 - 4.25 (m, 2H), 4.00 (s,3H), 3.84 - 3.98 (m, 2H), 3.65 -3.68(m, 1H), 2.48 -2.50(m, 1H), 2.10 - 2.32(m, 3H), 2.02 -2.08 (m, 2H), 1.87 - 1.96 (m, 2H), 1.80-1.82 (m, 2H), 1.56 -1.67 (m, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.21 (d, J=6.8 Hz, 3H)。LCMS (C26H33FN8O2) (ES, m/z)[M+H]+ 509。
实施例98和99：(1S或1R,2S或2R)-2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2, 4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环丁烷-1-醇和(1R或 1S,2R或2S)-2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基) 哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环丁烷-1-醇
Figure 729475DEST_PATH_IMAGE273
将甲基溴化镁(0.318 ml, 0.955 mmol, 3 M于乙醚中)于THF (1.00 ml)中的混合物在0℃冷却。向混合物中加入于THF (1.0 mL)中的2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)环丁酮(中间体125)(86.0 mg, 0.191 mmol)。将混合物在0℃搅拌5 h。向混合物中加入水(3 mL)，并然后将混合物用EtOAc(3 x 20 mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过制备型硅胶TLC纯化(用10%于DCM中的MeOH为洗脱液)。将异构体混合物通过SFC纯化(OJ-3 100 x 4.6 mm柱(用5-40% (MeOH w/ 0.05% DEA)作为共溶剂))以得到分别对应于实施例98和实施例99的(1S或1R,2S或2R)-2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环丁烷-1-醇(第一个洗脱的峰)和(1R或1S,2R或2S)-2-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-1-甲基环丁烷-1-醇(第二个洗脱的峰)。
对于实施例98：LCMS (C23H27FN8O2) (ES, m/z) [M+H]+：467。1H NMR (400 MHz,CD3OD) δ = 7.98 (d, J=10.68 Hz, 1 H), 7.37 (s, 1 H), 7.15 (d, J=7.48 Hz, 1H), 7.09 (s, 1 H), 5.78 (br s, 2 H), 4.48 - 4.34 (m, 1 H), 4.05 – 3.96 (m, 3H), 3.81 - 3.73 (m, 1 H), 3.72 - 3.62 (m, 1 H), 3.42 - 3.31 (m, 2 H), 2.98(t, J=11.06 Hz, 1 H), 2.76 - 2.59 (m, 1 H), 2.52 - 2.38 (m, 1 H), 2.33 - 2.15(m, 3 H), 2.06 – 1.77 (m, 5 H), 1.42 (s, 3H)。
对于实施例99：LCMS (C23H27FN8O2) (ES, m/z) [M+H]+：467。1H NMR (400 MHz,CD3OD) δ = 7.98 (d, J=10.68 Hz, 1 H), 7.37 (s, 1 H), 7.15 (d, J=7.48 Hz, 1H), 7.09 (s, 1 H), 5.78 (br s, 2 H), 4.48 - 4.34 (m, 1 H), 4.05 – 3.96 (m, 3H), 3.81 - 3.73 (m, 1 H), 3.72 - 3.62 (m, 1 H), 3.42 - 3.31 (m, 2 H), 2.98(t, J=11.06 Hz, 1 H), 2.76 - 2.59 (m, 1 H), 2.52 - 2.38 (m, 1 H), 2.33 - 2.15(m, 3 H), 2.06 – 1.77 (m, 5 H), 1.42 (s, 3 H)。
实施例100：(R)-9-氟-7-甲氧基-2-(1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1, 2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
Figure 971101DEST_PATH_IMAGE274
将BSA (2 mL, 8.18 mmol)加入至N'-(2-氨基-6-氟-8-甲氧基喹唑啉-4-基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-碳酰肼(中间体104) (25.0 mg, 0.0600 mmol)中，并将混合物在120℃搅拌2 h。然后蒸发溶剂。将所得残余物用氯仿/异丙醇- 3：1 (5 mL)稀释，用碳酸氢钠水溶液(饱和, 5 mL)洗涤并使用相分离器柱收集有机层(25 mL)并浓缩。将残余物通过制备型反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBD Prep柱, 19 mm X 100 mm MeCN/水(含有0.1% TFA改性剂)为洗脱液)。将外消旋混合物通过手性SFC分离拆分(OJ-H柱 21 x250 mm柱(用20% (MeOH w/0.25% DMEA改性剂)作为共溶剂))以得到(R或S)-9-氟-7-甲氧基-2-(1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(实施例100, 第一个洗脱的峰)。LCMS (C19H21FN8O) (ES, m/z)：397 [M+H]+。1H NMR (600 MHz,DMSO-d 6) δ 7.79 (s, 2H), 7.42 (dd, J = 8.4, 2.7 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.21 -7.16 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.60 (dd, J = 11.5, 3.7 Hz, 1H),3.32 - 3.30 (m, 1H), 3.29 - 3.23 (m, 1H), 2.83 (t, J = 11.1 Hz, 1H), 2.58 -2.52 (m, 2H), 2.20 - 2.12 (m, 1H), 1.88 - 1.81 (m, 1H), 1.80 - 1.74 (m, 2H)。
下表24中的本发明的实施例化合物以类似于实施例100的方式从合适的中间体制备(除了起始物质是对映体纯的，因此对于这些实施例没有进行SFC分离以外)。
Figure 183908DEST_PATH_IMAGE275
Figure 827378DEST_PATH_IMAGE276
实施例109：1-(4-((2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c] 喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
步骤1：1-(4-((2S,5R)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2, 4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 162545DEST_PATH_IMAGE277
向100 mL圆底烧瓶中加入(3R,6S)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼(中间体61) (1.00 g, 3.39 mmol)、2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)-亚甲基)氨基)-5-氟-4-甲氧基苄腈(中间体37) (1.21 g, 3.55 mmol)和DCM (10mL)。将混合物在室温搅拌18 h。将混合物浓缩，并将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100 %于己烷中的EtOAc为洗脱液)，得到1-(4-((2S,5R)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇。LCMS (C32H39FN8O4) (ES, m/z)：619 [M+H]+。使用振动圆二色性(VCD)光谱可靠地将步骤1的产物的绝对构型指定为(2S,5R)。通过将实验数据与具有(2S,5R)构型的产物的计算的VCD和IR谱进行比较，进行了分析。该产物的实验VCD谱与计算的(2S,5R)谱在1000-1500 cm-1的区域内匹配良好，从而得到(2S,5R)的赋值。
步骤2：1-(4-((2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑 啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 94729DEST_PATH_IMAGE278
向20 mL小瓶中加入1-(4-((2S,5R)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(962 mg, 1.56 mmol)和TFA (7 mL)。将混合物搅拌并在50℃加热1 h。然后将混合物浓缩。向所得残余物中加入1 M HCl水溶液(50 mL)和DCM (50 mL)。将水层用DCM(2 x50 mL)洗涤，然后过滤。然后用10 M NaOH水溶液将水层的pH调节至~pH 10。将水层用10%于DCM中的MeOH (2 x100 mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-10%于DCM中的MeOH)，得到1-(4-((2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例109)。LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z)：469 [M+H]+。1HNMR (499 MHz, DMSO-d 6) δ 7.90 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.72 (s, 2H), 7.20 (s,1H), 7.19 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 3.69 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 3.35(d, J = 3.9 Hz, 1H), 3.20 (dt, J = 11.1, 5.8 Hz, 1H), 3.10 (t, J = 11.5 Hz,1H), 2.00 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 1.70 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 1.03 (d, J = 4.4 Hz,9H)。
下表25中的本发明的实施例化合物以与对于实施例109的制备所述的类似的方式从合适的酰肼和碳二亚胺中间体制备。
Figure 173543DEST_PATH_IMAGE279
实施例114-117：1-(4-((2R或2S,5R或5S)-5-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三 唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇 和1-(4-((2S或2R,5R或5S)-5-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2- 基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-((2S或2R,5S或 5R)-5-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1- 基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-((2R或2S,5S或5R)-5-(5-氨基-9- 氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑- 1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
步骤1：1-(4-(5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基) 2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 671521DEST_PATH_IMAGE280
向2打兰小瓶中加入1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼(中间体63) (133 mg, 0.431 mmol)和2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-5-氟-3-甲氧基苄腈(中间体38) (140 mg, 0.410 mmol)。向混合物中加入二噁烷(1.6 mL)和乙酸(24 µL, 0.41 mmol)并然后将混合物搅拌并然后在60℃加热2 h。然后使混合物缓慢地冷却至室温。将混合物用DCM (10 mL)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(2 x 10 mL)和盐水洗涤。将合并的有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用10-100%于己烷类中的EtOAc)以得到作为外消旋的非对映异构体的混合物的1-(4-(5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇。LCMS (C33H42FN8O4) (ES, m/z)：633 [M+H]+
步骤2：1-(4-((2R或2S,5R或5S)-5-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1, 5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4- ((2S或2R,5R或5S)-5-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2- 甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-((2S或2R,5S或5R)-5- (5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲 基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-((2R或2S,5S或5R)-5-(5-氨基-9-氟-7-甲氧 基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2- 甲基丙烷-2-醇
Figure 443168DEST_PATH_IMAGE281
向20 mL小瓶中加入1-(4-(5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(80 mg, 0.126 mmol)，随后加入TFA (0.13 mL)。将混合物搅拌并在50℃加热2h。然后将混合物浓缩。将所得残余物通过制备型反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBDPrep柱, 19 mm X 100 mm(用MeCN/水w/ 0.1% TFA为洗脱液))以得到作为非对映异构体的混合物的产物。将四种异构体通过手性SFC分离拆分(IC, 21 x 250 mm柱(用35% (2-丙醇w/ 0.1% NH4OH改性剂)为共溶剂))以得到1-(4-((2R或2S,5R或5S)-5-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例114, 第一个洗脱的峰)和1-(4-((2S或2R,5R或5S)-5-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例115, 第二个洗脱的峰)和1-(4-((2S或2R,5S或5R)-5-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例116, 第三个洗脱的峰)和1-(4-((2R或2S,5S或5R)-5-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例117, 第四个洗脱的峰)。
对于实施例114：LCMS (C24H32FN8O2) (ES, m/z)：483 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.70 (br s, 2H), 7.42 (dd, J = 8.4, 2.7 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H),7.18 (dd, J = 11.1, 2.7 Hz, 1H), 4.75 (br s, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.80 (s, 2H),3.37 - 3.31 (m, 1H), 3.23 - 3.16 (m, 1H), 2.18 - 2.15 (m, 1H), 2.01 (s, 3H),2.09 - 1.94 (m, 2H), 1.70 - 1.59 (m, 1H), 1.25 - 1.10 (m, 2H), 1.04 (s, 3H),1.03 (s, 3H), 0.95 (d, J = 12.0 Hz, 3H)。
对于实施例115：LCMS (C24H32FN8O2) (ES, m/z)：483 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.61 (br s, 2H), 7.40 (dd, J = 8.2, 2.4 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H),7.18 (dd, J = 11.0, 2.1 Hz, 1H), 4.75 (br s, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.80 (s, 2H),3.38 - 3.30 (m, 1H), 3.19 - 3.12 (m, 1H), 2.15 - 2.10 (m, 1H), 2.07 (s, 3H),2.09 - 1.94 (m, 2H), 1.72 - 1.65 (m, 1H), 1.25 - 1.10 (m, 2H), 1.07 (s, 3H),1.06 (s, 3H), 0.93 (d, J = 11.8 Hz, 3H)。
对于实施例116：LCMS (C24H32FN8O2) (ES, m/z)：483 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.52 (br s, 2H), 7.41 (dd, J = 8.4, 2.7 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H),7.15 - 7.11 (m, 1H), 4.41 (br s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 3.30 - 3.20(m, 1H), 3.13 - 3.09 (m, 1H), 2.18 - 2.11 (m, 1H), 2.00 (s, 3H), 2.00 - 1.84(m, 2H), 1.75 - 1.66 (m, 1H), 1.24 - 1.10 (m, 2H), 1.04 (m, 6H), 0.91 (d, J =6.5 Hz, 3H)。
对于实施例117：LCMS (C24H32FN8O2) (ES, m/z)：483 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.77 (br s, 2H), 7.43 (dd, J = 8.4, 2.7 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H),7.18 (dd, J = 11.1, 2.7 Hz, 1H), 4.60 (br s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.83 (s, 2H),3.26 - 3.22 (m, 1H), 3.10 - 3.06 (m, 1H), 2.18 - 2.16 (m, 1H), 2.04 (s, 3H),2.01 - 1.87 (m, 2H), 1.75 - 1.69 (m, 1H), 1.24 - 1.10 (m, 2H), 1.03 (s, 3H),1.02 (s, 3H), 0.93 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。
下表26中的本发明的实施例化合物以与对于实施例114-117的制备所述的类似的方式从合适的酰肼和碳二亚胺中间体制备。通过SFC分离拆分所得异构体混合物。
Figure 65910DEST_PATH_IMAGE282
Figure 948415DEST_PATH_IMAGE283
Figure 300899DEST_PATH_IMAGE284
实施例129和实施例130：(R)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(3-甲基-1-((甲基磺酰基)甲 基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R)-9-氟-8-甲氧 基-2-(1-(5-甲基-1-((甲基磺酰基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1, 5-c]喹唑啉-5-胺
步骤1：(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(3-甲基-1-((甲基硫 基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R)-N-(2,4- 二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(5-甲基-1-((甲基硫基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌 啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的混合物
Figure 446710DEST_PATH_IMAGE285
向1-打兰小瓶装入于二噁烷(7.0 mL)中的(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(3-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的混合物(中间体117) (391 mg, 0.715 mmol)和(氯甲基)(甲基)硫烷(359 µL, 4.29 mmol)。向混合物中加入碳酸铯(466 mg, 1.43 mmol)并然后将混合物搅拌并在75℃加热60 h。将混合物冷却至室温。将混合物用水和DCM稀释。将混合物倒入相分离器中。收集并浓缩DCM层。将所得残余物通过硅胶柱色谱法纯化(用0-10%于DCM中的MeOH为洗脱液)以得到(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(3-甲基-1-((甲基硫基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(5-甲基-1-((甲基硫基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的混合物。LCMS(C30H35FN8O3S) (ES, m/z)：607 [M+H]+。
步骤2：(R)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(3-甲基-1-((甲基磺酰基)甲基)-1H-吡唑-4- 基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(5-甲 基-1-((甲基磺酰基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5- 胺
Figure 884644DEST_PATH_IMAGE286
将(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(3-甲基-1-((甲基硫基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(5-甲基-1-((甲基硫基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的混合物(328 mg, 0.541 mmol)溶解于丙酮(4mL)和水(1.35 mL)中。向混合物中加入Oxone® (过氧单硫酸钾, 665 mg, 1.08 mmol)。将混合物在室温搅拌10 min。将混合物浓缩以除去丙酮，用水和DCM稀释，并将有机层通过相分离器收集。浓缩有机层。向所得残余物中加入和TFA (2.08 mL, 27.0 mmol)，并将混合物搅拌并在50℃加热16 h。然后将混合物用水和DCM稀释，并将 DCM层通过相分离器收集并浓缩。将所得残余物通过制备型反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBD Prep柱, 19 mm X100 mm, MeCN/水(w/ 0.1% TFA改性剂)为洗脱液)以得到(R)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(3-甲基-1-((甲基磺酰基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺, TFA (实施例129, 第一个洗脱的峰)和(R)-9-氟-8-甲氧基-2-(1-(5-甲基-1-((甲基磺酰基)甲基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺, TFA,(实施例130, 第二个洗脱的峰)。
对于实施例129：LCMS (C21H25FN8O3S) (ES, m/z)：489 [M+H]+。1H NMR (500 MHz,DMSO-d 6) δ 7.87 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.19 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 5.67 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.44 (m, 1H), 3.17 (s, 1H), 2.99(s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.20 (m, 1H), 1.87 (m, 3H)。
对于实施例130：LCMS (C21H25FN8O3S) (ES, m/z)：489 [M+H]+。1H NMR (500 MHz,DMSO-d 6) δ 7.87 (dd, J = 10.9, 3.6 Hz, 1H), 7.78 (s, 2H), 7.58 (s, 1H), 7.19(d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.48 (d, J = 9.4 Hz, 1H),3.32 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 3.21 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.65 (m,1H), 2.18 (s, 3H), 1.97 – 1.71 (m, 3H)。
下表27中的本发明的实施例化合物以与对于实施例129和实施例130的制备所述的类似的方式从合适的中间体和可商购获得的起始物质制备。
Figure 305261DEST_PATH_IMAGE287
实施例133：(S或R)-1-(4-(3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹 唑啉-2-基)-3-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
步骤1：(S或R)-1-(4-(3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2, 4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-3-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 715514DEST_PATH_IMAGE288
向反应小瓶中加入于THF (3 mL)中的(S或R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-2-(3-氟哌啶-3-基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体90) (78 mg,0.161 mmol)、1-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体4) (52.9 mg, 0.241mmol)、tBuXPhos-Pd G3 (38.4 mg, 0.048 mmol)和叔丁醇钠(93 mg, 0.97 mmol)。将混合物用氮气吹扫10 min。将混合物搅拌并在90℃加热16 h。将混合物冷却至室温，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-8%于DCM中的MeOH (含有0.2%NH4OH)为洗脱液)以得到(S或R)-1-(4-(3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-3-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇。LCMS (C31H36F2N8O4) (ES, m/z)：623 [M+H]+。
步骤2：(S或R)-1-(4-(3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑 啉-2-基)-3-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 828964DEST_PATH_IMAGE289
向8 mL闪烁小瓶装入(S或R)-1-(4-(3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-3-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(70.0 mg, 0.112 mmol)和TFA (750 µL, 9.73 mmol)。将混合物搅拌并在40℃加热2 h。然后将混合物冷却，并蒸发溶剂。将所得残余物通过制备型反相HPLC纯化(WatersSunFire C18 OBD Prep柱, 19 mm X 100 mm MeCN/H2O(含有0.05%TFA)为洗脱液)以得到(S或R)-1-(4-(3-(5-氨基-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-3-氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2甲基丙烷-2-醇2,2,2-三氟乙酸盐。LCMS (C22H26F2N8O2) (ES,m/z)：473 [M+H]+。1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 7.89 (s, 2H), 7.48 (dd, J = 8.3,2.7 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.24 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 7.21 (dd, J = 11.1, 2.8Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.88 (s, 2H), 3.68 – 3.47 (m, -1H), 3.45 – 3.42 (m,1H), 3.22 – 3.08 (m, 1H), 2.84 – 2.65 (m, 1H), 2.45 – 2.18 (m, 2H), 1.99 (d,J = 9.7 Hz, 1H), 1.80 (dd, J = 9.0, 4.0 Hz, 1H), 1.03 (d, J = 2.7 Hz, 6H)。
下表28中的实施例134以与对于实施例133的制备所述的类似的方式从中间体91和合适的起始物质制备。
Figure 754194DEST_PATH_IMAGE290
实施例135：1-(4-((2R或2S,5S或5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 978502DEST_PATH_IMAGE291
将1-(4-((2R或2S,5S或5R)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体113) (28.0 mg, 0.0440 mmol)于TFA (50.5 mg, 0.443 mmol)中的混合物在60℃加热1 h。蒸发溶剂，并将所得残余物通过制备型反相HPLC纯化(Waters SunFire C18OBD Prep柱, 19 mm X 100 mm MeCN/H2O(含有0.1%TFA)为洗脱液)以得到1-(4-((2R或2S,5S或5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇。：LCMS (C24H31FN8O2) (ES, m/z)：483 [M+H]+。1HNMR (500 MHz, 甲醇-d 4) δ 7.97 – 7.89 (m, 2H), 7.70 (s, 1H), 7.24 (d, J = 7.5Hz, 1H), 4.12 (s, 2H), 4.08 – 3.92 (m, 5H), 3.72 – 3.57 (m, 2H), 2.52 – 2.38(m, 1H), 2.31 – 2.14 (m, 2H), 2.09 – 1.98 (m, 1H), 1.75 – 1.56 (m, 2H), 1.18(s, 6H), 0.94 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。
实施例136：1-(4-((2S或2R,5S或5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 712103DEST_PATH_IMAGE292
实施例136 以与对于实施例135的制备所述的类似的方式从中间体114制备。LCMS(C24H31FN8O2) (ES, m/z)：483 [M+H]+。1H NMR (500 MHz, 甲醇-d 4) δ 7.93 (d, J = 11.9Hz, 2H), 7.70 (s, 1H), 7.24 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.12 (s, 2H), 4.07 – 3.93(m, 5H), 3.69 – 3.58 (m, 2H), 2.51 – 2.37 (m, 1H), 2.32 – 2.15 (m, 2H), 2.10– 1.99 (m, 1H), 1.74 – 1.58 (m, 2H), 1.17 (s, 6H), 0.94 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。
实施例137：1-(4-((2S或2R,5S或5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 996454DEST_PATH_IMAGE293
实施例137 以与对于实施例135的制备所述的类似的方式从中间体115制备。LCMS(C24H31FN8O2) (ES, m/z)：483 [M+H]+。1H NMR (500 MHz, 甲醇-d 4) δ 8.11 (s, 1H),7.90 – 7.81 (m, 2H), 7.21 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.14 (d, J = 20.7 Hz, 3H),3.98 (d, J = 12.7 Hz, 4H), 3.72 – 3.54 (m, 2H), 2.56 (d, J = 16.8 Hz, 1H),2.45 (d, J = 20.5 Hz, 1H), 2.21 – 2.07 (m, 1H), 1.98 – 1.82 (m, 1H), 1.81 –1.69 (m, 1H), 1.56 – 1.43 (m, 1H), 1.19 (s, 6H), 0.97 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。
实施例138：1-(4-((2S或2R,5S或5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 408981DEST_PATH_IMAGE294
实施例138 以与对于实施例135的制备所述的类似的方式从中间体116制备。LCMS(C24H31FN8O2) (ES, m/z)：483 [M+H]+。1H NMR (500 MHz, 甲醇-d 4) δ 8.13 (s, 1H),7.86 (d, J = 13.4 Hz, 2H), 7.21 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.15 (d, J = 13.4 Hz,3H), 3.99 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 3.74 – 3.54 (m, 2H), 2.57 (d, J = 11.0 Hz,1H), 2.50 – 2.39 (m, 1H), 2.24 – 2.05 (m, 1H), 1.96 – 1.83 (m, 1H), 1.82 –1.67 (m, 1H), 1.59 – 1.42 (m, 1H), 1.18 (s, 6H), 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3H)。
实施例139：rac-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2- 基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-2-酮
步骤1：rac-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-2-酮
Figure 640242DEST_PATH_IMAGE295
向20 mL小瓶中加入rac-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-2-酮(中间体89) (0.102 g, 0.212 mmol)、1-(4-碘-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(0.172 g, 0.646 mmol)、碘化亚铜(I)(42.7 mg,0.224 mmol)、磷酸钾(267 mg, 1.26 mmol)和无水DMF(2.1 mL)。将混合物用氮气鼓泡5min。向混合物中加入N 1 ,N 2 -二甲基乙烷-1,2-二胺(0.046 mL, 0.43 mmol)。将混合物搅拌并在100℃加热2 h。将混合物通过反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBD Prep柱, 19mm X 100 mm(用MeCN/H2O (含有0.1%TFA)为洗脱液))，得到rac-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-2-酮。LCMS (C31H35FN8O5) (ES, m/z)：619 [M+H]+。
步骤2：rac-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1- (1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-2-酮
Figure 821824DEST_PATH_IMAGE296
向20 mL小瓶中加入rac-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-2-酮(11.9 mg, 0.0192 mmol)和TFA (0.26 mL)。将混合物搅拌并在50℃加热1 h。将混合物浓缩。将残余物通过制备型反相HPLC纯化(Waters SunFire C18 OBD Prep柱, 19 mm X 100mm(用MeCN/H2O (含有0.1%TFA)为洗脱液))以得到rac-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)哌啶-2-酮。LCMS (C22H25FN8O3) (ES, m/z)：469 [M+H]+。1H NMR (499 MHz, DMSO-d 6) δ 8.05 (s,1H), 7.88 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.79 (br s, 2H), 7.66 (s, 1H), 7.18 (d, J =7.8 Hz, 1H), 4.18 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 3.99 – 3.93 (m, 5H), 3.86 – 3.76 (m,2H), 2.28 – 2.16 (m, 3H), 2.10 – 2.00 (m, 1H), 1.03 (s, 3H), 1.03 (s, 3H)。
实施例140和实施例141：(R)-1-(4-(2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8- 甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)吗啉代)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙 烷-2-醇和(R)-1-(4-(2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)吗啉代)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
步骤1：(R)-1-(4-(2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三 唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)吗啉代)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和(R)-1- (4-(2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2- 基)吗啉代)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇的混合物
Figure 11497DEST_PATH_IMAGE297
向20 mL小瓶中加入(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(吗啉-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体87) (49.4 mg, 0.105 mmol)、1-(4-溴-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇的混合物(中间体7) (31.0 mg, 0.133 mmol)、tBuXPhos-Pd G3 (33.5 mg,0.0422 mmol)、叔丁醇钠(60.8 mg, 0.633 mmol)和无水THF (1.5 mL)。将混合物用氮气鼓泡。然后将混合物搅拌并在100℃加热几分钟，然后冷却至 23℃，并加入另外的THF (1mL)。将混合物搅拌并在80℃加热14 h。加入另外的量的1-(4-溴-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇的混合物(中间体7) (42.5 mg, 0.182 mmol)和tBuXPhos-Pd G3 (33.5 mg, 0.0422 mmol)。将混合物搅拌并在80℃加热8 h。将混合物用DCM和MeOH稀释并通过西莱特®(硅藻土)过滤。将滤液浓缩。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100% EtOAc：EtOH (3：1)(于己烷类中)为洗脱液)以得到(R)-1-(4-(2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)吗啉代)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和(R)-1-(4-(2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)吗啉代)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇的混合物。LCMS (C31H37FN8O5) (ES, m/z)：621 [M+H]+。
步骤2：(R)-1-(4-(2-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2- 基)吗啉代)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和(R)-1-(4-(2-(5-氨基-9-氟-8- 甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)吗啉代)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙 烷-2-醇
Figure 79030DEST_PATH_IMAGE298
向4 mL小瓶中加入(R)-1-(4-(2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)吗啉代)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和(R)-1-(4-(2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)吗啉代)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇的混合物(4.6 mg,0.0074 mmol)和TFA (0.10 mL)。将混合物在23℃搅拌2 h。然后将混合物搅拌并在50℃加热50 min。向单独的小瓶中加入(R)-1-(4-(2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)吗啉代)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和(R)-1-(4-(2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)吗啉代)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇的混合物(35.6 mg,0.0574 mmol)和TFA (0.78 mL)，并将该混合物搅拌并在50℃加热50 min。将两个反应小瓶的内容物合并并浓缩成残余物。将残余物混悬于MeOH中并过滤。将滤液浓缩成残余物。将所得残余物进行手性SFC分离(Chiral Technologies OJ-H 21 x250 mm柱(用15% (MeOH w/0.1% NH4OH改性剂)作为共溶剂))，得到作为峰1的(R)-1-(4-(2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)吗啉代)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例140)和第二个峰。第二个峰含有杂质，并因此通过SFC纯化(Chiral Technologies AS-H 21 x 250 mm柱(用20% (MeOH w/ 0.1% NH4OH改性剂)作为共溶剂))，得到(R)-1-(4-(2-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)吗啉代)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例141)。
对于实施例140：LCMS (C22H27FN8O3) (ES, m/z)：471 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.90 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.80 (br s, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.18 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 4.95 (dd, J = 10.0, 2.5 Hz, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.07 – 4.00(m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.88 (td, J = 11.1, 2.3 Hz, 1H), 3.83 (s, 2H), 3.07 –2.97 (m, 2H), 2.72 (td, J = 11.5, 3.1 Hz, 1H), 2.12 (s, 3H), 1.03 (s, 3H),1.02 (s, 3H)。
对于实施例141：LCMS (C22H27FN8O3) (ES, m/z)：471 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.89 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.79 (br s, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.18 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 4.95 (dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.08 – 4.00(m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.92 – 3.82 (m, 3H), 3.25 – 3.20 (m, 1H), 3.11 (dd, J= 11.5, 10.0 Hz, 1H), 2.96 – 2.90 (m, 1H), 2.87 (td, J = 11.3, 3.1 Hz, 1H),2.22 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 1.06 (s, 3H)。
实施例142-145：(R或S)-2-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑 啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物和 (S或R)-2-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基- 2-甲基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物和(R或S)-2-(5-氨基-9-氟- 8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H- 吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物和(S或R)-2-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1, 1-二氧化物
步骤1：2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5- c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧 化物和2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉- 2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物的混 合物
Figure 848403DEST_PATH_IMAGE299
向20 mL小瓶中加入rac-2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物(中间体88) (100 mg, 0.194mmol)、tBuXPhos-Pd G3 (154 mg, 0.194 mmol)、1-(4-溴-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇和1-(4-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇的混合物(中间体7) (140mg, 0.598 mmol)和干燥的THF (3 mL)。将混合物用氮气鼓泡4 min。向混合物中加入叔丁醇钠(112 mg, 1.16 mmol)。将混合物搅拌并在80℃加热18 h。将混合物浓缩。将所得残余物混悬于DCM中，与西莱特® (硅藻土)混合，并过滤。将滤液浓缩。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-70% EtOAc：EtOH (3：1)(于己烷类中)为洗脱液)，得到rac-2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物和rac-2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物的混合物。LCMS (C31H37FN8O6S)(ES, m/z)：669 [M+H]+。
步骤2：(R或S)-2-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2- 基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物和(S或 R)-2-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲 基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物和(R或S)-2-(5-氨基-9-氟-8-甲 氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡 唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物和(S或R)-2-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1, 1-二氧化物
Figure 150071DEST_PATH_IMAGE300
向20 mL小瓶中加入rac-2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物和rac-2-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物的混合物(48.1 mg, 0.0719 mmol)和TFA (0.96 mL)。将混合物搅拌并在50℃加热1 h。将混合物浓缩成残余物。将所得残余物混悬于MeOH中并过滤。将滤液浓缩成残余物，将其通过SFC纯化(Chiral Technologies AS-H 21 x 250 mm柱(用20% (MeOH w/0.1% NH4OH改性剂)作为共溶剂))以得到四个峰，将其浓缩。随后通过制备型反相HPLC分别纯化每个峰(Waters SunFire C18 OBD Prep柱, 19 mm X 100 mm(用MeCN/H2O (含有0.1%TFA)为洗脱液))以得到分别对应于实施例142 (SFC 峰1)、实施例143 (SFC 峰2)、实施例144 (SFC 峰3)和实施例145 (SFC 峰4)的最终的化合物(R或S)-2-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物和(S或R)-2-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物和(R或S)-2-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物和(S或R)-2-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-4-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)硫代吗啉 1,1-二氧化物。
对于实施例142：LCMS (C22H27FN8O4S) (ES, m/z)：519 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.91 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.88 (br s, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.21 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 4.96 (dd, J = 10.3, 3.5 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.87 – 3.76(m, 3H), 3.72 – 3.65 (m, 1H), 3.65 – 3.53 (m, 2H), 3.53 – 3.45 (m, 1H), 3.44– 3.34 (m, 1H), 2.06 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.04 (s, 3H)。
对于实施例143：LCMS (C22H27FN8O4S) (ES, m/z)：519 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.91 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.88 (br s, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.21 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 4.96 (dd, J = 10.3, 3.5 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.87 – 3.76(m, 3H), 3.72 – 3.65 (m, 1H), 3.65 – 3.53 (m, 2H), 3.53 – 3.45 (m, 1H), 3.44– 3.34 (m, 1H), 2.06 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.04 (s, 3H)。
对于实施例144：LCMS (C22H27FN8O4S) (ES, m/z)：519 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.89 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.86 (br s, 2H), 7.48 (s, 1H), 7.20 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 4.96 (dd, J = 10.1, 3.4 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.87 – 3.78(m, 3H), 3.64 – 3.54 (m, 3H), 3.51 – 3.35 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 1.05 (s,3H), 1.04 (s, 3H)。
对于实施例145：LCMS (C22H27FN8O4S) (ES, m/z)：519 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.89 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.86 (br s, 2H), 7.48 (s, 1H), 7.20 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 4.96 (dd, J = 10.1, 3.4 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.87 – 3.78(m, 3H), 3.64 – 3.54 (m, 3H), 3.51 – 3.35 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 1.05 (s,3H), 1.04 (s, 3H)。
实施例146和实施例147：(1R或1S,3R或3S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4] 三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇和(1S或1R,3S或 3R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡 唑-4-基)环己烷-1-醇
Figure 448328DEST_PATH_IMAGE301
将中间体124 (70.0 mg, 0.170 mmol)通过手性SFC拆分(AD 250 x 30 mm柱(用MeOH (0.1% NH4OH改性剂)为共溶剂))以得到(1R或1S,3R或3S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇(实施例146, 第一个洗脱的峰)和(1S或1R,3S或3R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇(实施例147, 第二个洗脱的峰)。
对于实施例146：LCMS (C21H24FN7O2) (ES, m/z) [M+H]+：426。1H NMR (400MHz,MeOD-d 4 ) δ (ppm) 7.81 (s, 1H), 7.59-7.70 (m, 2H), 6.91 (br d, J=7.9 Hz, 1H),4.20 (q, J=7.3 Hz, 2H), 3.88-3.99 (m, 3H), 2.89-3.01 (m, 1H), 2.75 (br d, J=13.2 Hz, 1H), 2.39 (br d, J=12.3 Hz, 1H), 1.97-2.13 (m, 2H), 1.88 (br dd, J=9.9, 3.3 Hz, 1H), 1.58-1.77 (m, 2H), 1.50-1.55 (m, 1H), 1.42-1.49 (m, 3H)。
对于实施例147：LCMS (C21H24FN7O2) (ES, m/z) [M+H]+：426。1H NMR (400MHz,MeOD-d 4 )δ (ppm) 7.71-7.87 (m, 2H), 7.64 (d, J=2.6 Hz, 1H), 6.96-7.18 (m, 1H),4.20 (q, J=7.3 Hz, 2H), 3.97 (br d, J=13.2 Hz, 3H), 2.89-3.05 (m, 1H), 2.73(br d, J=12.7 Hz, 1H), 2.40 (br d, J=12.7 Hz, 1H), 1.99-2.13 (m, 2H), 1.91(br d, J=13.2 Hz, 1H), 1.62-1.79 (m, 2H), 1.52-1.59 (m, 1H), 1.47 (t, J=7.5Hz, 3H)。
实施例148和实施例149：(1S或1R,3R或3S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4] 三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇和(1S或1R,3R或 3S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡 唑-4-基)环己烷-1-醇
Figure 835447DEST_PATH_IMAGE302
将中间体125 (50.0 mg, 0.120 mmol)通过手性SFC拆分(AD 250 x 30 mm柱(用IPA (0.1% NH4OH改性剂)为共溶剂))以得到(1S或1R,3R或3S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇(实施例148, 第一个洗脱的峰)和(1S或1R,3R或3S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇(实施例149, 第二个洗脱的峰)。
对于实施例148：LCMS (C21H24FN7O2) (ES, m/z) [M+H]+：426。1H NMR (400MHz,MeOD-d 4 ) δ (ppm) 7.78-7.94 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.01-7.23 (m,1H), 4.14 (q, J=7.2 Hz, 2H), 3.99 (br s, 3H), 3.46-3.56 (m, 1H), 2.38 (br d,J=14.0 Hz, 1H), 1.92-2.25 (m, 4H), 1.63-1.85 (m, 3H), 1.42 (t, J=7.2 Hz, 3H)。
对于实施例149：LCMS (C21H24FN7O2) (ES, m/z) [M+H]+：426。1H NMR (400MHz,MeOD-d 4 )δ (ppm) 7.81 (br s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.11 (br s, 1H),4.09-4.20 (m, 2H), 3.96 (br s, 3H), 3.51 (br s, 1H), 2.38 (br d, J=13.6 Hz,1H), 1.96-2.24 (m, 4H), 1.59-1.85 (m, 3H), 1.42 (t, J=7.2 Hz, 3H)。
实施例150：(1R,3R或1S,3S)-3-(5-氨基-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑 啉-2-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇
步骤1：3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯
Figure 142932DEST_PATH_IMAGE303
向100 mL圆底烧瓶中加入2,6-二-叔丁基吡啶(11.1 ml, 49.4 mmol)、3-氧代环己烷-1-甲酸乙酯(6.32 ml, 35.3 mmol)和DCE (70.5 mL)。将混合物搅拌并在0℃冷却。历经5 min向混合物中逐滴加入1 M Tf2O于THF中的溶液(45.8 mL, 45.8 mmol)。将混合物搅拌30 min。将混合物温热至室温。2 h后，将混合物浓缩。向所得残余物中加入1：1 DCM：己烷类(20 mL)且固体沉淀。通过过滤除去固体。将滤饼用1：1 DCM：己烷类洗涤。将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)，得到3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯。
步骤2：3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-3-烯-1-甲酸 乙酯
Figure 33527DEST_PATH_IMAGE304
向100 mL圆底烧瓶中加入乙酸钾(3.96 g, 40.4 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (0.660 g,0.808 mmol)、双(频哪醇合)二硼(8.21 g, 32.3 mmol)和3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯(7.08 mL, 26.9 mmol)。将烧瓶抽真空并再填充氮气三次。向烧瓶中加入DMA (40 mL)。将混合物搅拌并在90℃加热16 h。将混合物冷却至室温。将混合物倒入含有乙醚(150 mL)的烧瓶中。将混合物搅拌15 min。通过过滤除去固体。将滤液用水(3 x100 mL)洗涤。将有机层经无水硫酸镁干燥，过滤，并蒸发溶剂。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-30%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)以得到3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯。LCMS (C15H25BO4) (ES, m/z) [M+H]+：281。
步骤3：(R或S)-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环己-3-烯-1-甲酸乙 酯
Figure 830582DEST_PATH_IMAGE305
向100 mL烧瓶中加入Pd(dppf)Cl2 (0.708 g, 0.968 mmol)、K3PO4 (15.4 g,72.6 mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯(7.12 g, 25.4 mmol)和1-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体4) (5.30 g,24.2 mmol)。向烧瓶中加入二噁烷(60 mL)和水(12 mL)。将混合物用氮气鼓泡5 min。将混合物搅拌并在90℃加热2 h。将混合物于EtOAc (10 mL)中稀释并通过用无水硫酸钠覆盖的西莱特®(硅藻土)过滤。将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-70%于己烷类中的EtOAc为洗脱液)，得到外消旋体。将外消旋体通过手性SFC拆分(ESIndustries CCA 21 x 250 mm柱, 15% (MeOH w/ NH4OH改性剂)为共溶剂)以得到(R或S)-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯(第一个洗脱的峰)。LCMS (C16H24N2O3) (ES, m/z) [M+H]+：293。
步骤4：(1R,3R或1S,3S)-3-羟基-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环 己烷-1-甲酸乙酯
Figure 377101DEST_PATH_IMAGE306
向250 mL圆底烧瓶中加入(R或S)-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环己-3-烯-1-甲酸酯(933 mg, 3.19 mmol)、乙酰丙酮钴(II)水合物(220 mg, 0.798 mmol)和THF (50 mL)。向混合物中加入苯基甲硅烷(1.18 mL, 9.57 mmol)，并将混合物在室温搅拌(对空气开放) 5天。向混合物中加入1 M TBAF于THF中的溶液(6.38 mL, 6.38 mmol)。将混合物搅拌15 min。蒸发溶剂。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-10%于DCM中的MeOH为洗脱液)，得到反式-非对映异构体(1R,3R或1S,3S)-3-羟基-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-甲酸乙酯。LCMS (C16H26N2O4) (ES, m/z) [M+H]+：311。
步骤5：(1R,3R或1S,3S)-3-羟基-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环 己烷-1-碳酰肼
Figure 550593DEST_PATH_IMAGE307
向20 mL小瓶中加入(1R,3R或1S,3S)-3-羟基-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-甲酸乙酯(190 mg, 0.612 mmol)、EtOH (1.5 mL)和肼水合物(0.210ml, 3.67 mmol)。将混合物在90℃加热24 h。蒸发溶剂以得到(1R,3R或1S,3S)-3-羟基-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-碳酰肼。LCMS (C14H24N2O4) (ES, m/z)[M+H]+：297。
步骤6：(1R,3R或1S,3S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-甲氧基-[1,2,4]三 唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇
Figure 561275DEST_PATH_IMAGE308
上面的方案中的星号(*)指示手性中心。向20 mL小瓶中加入(1R,3R或1S,3S)-3-羟基-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-碳酰肼(70.0 mg, 0.236mmol)、2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-5-氟-3-甲氧基苄腈(105 mg,0.307 mmol)、二噁烷(0.5 mL)和AcOH (7 µl, 0.12 mmol)。将混合物搅拌并在65℃加热2h。蒸发溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100% EtOAc：EtOH (3：1)(于己烷类中)为洗脱液)以得到(1R,3R或1S,3S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇。LCMS (C32H39N7O5) (ES, m/z) [M+H]+：602。
步骤7：(1R,3R或1S,3S)-3-(5-氨基-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2- 基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇
Figure 466914DEST_PATH_IMAGE309
向20 mL小瓶中加入DDQ (30.3 mg, 0.133 mmol)和DCM (1.0 mL)。将混合物在0℃冷却。向混合物中加入水(0.05 mL)。向混合物中加入作为于DCM (1 mL)中的溶液的(1R,3R或1S,3S)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇(53.5 mg, 0.089 mmol)。将混合物搅拌4 h。向混合物中加入1 M KOH水溶液(20 mL)，并然后将混合物用DCM (2 x20 mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-100% EtOAc：EtOH (3：1)(于己烷中)为洗脱液)。将产物通过手性SFC进一步纯化(Chiral Technologies OJ-H 21 x250 mm柱, 用20% (MeOH(含有NH4OH改性剂))为共溶剂)以得到(1R,3R或1S,3S)-3-(5-氨基-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-醇(实施例150)。LCMS (C23H29N7O3) (ES, m/z) [M+H]+：452。1H NMR (499 MHz, DMSO-d 6) δ 7.73 (dd, J =8.0, 1.2 Hz, 3H), 7.56 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.29 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.24– 7.10 (m, 1H), 4.81 (s, 1H), 4.65 (s, 1H), 3.95 (s, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.48– 3.40 (m, 1H), 2.22 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.09 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 1.98 –1.84 (m, 3H), 1.73 – 1.58 (m, 3H), 1.16 – 0.89 (m, 9H)。
实施例151：(R)-2-(4-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑 啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1-醇
Figure 563046DEST_PATH_IMAGE310
向20 mL小瓶中加入(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体82) (400 mg, 0.857 mmol)、叔丁醇钠(330 mg, 3.43 mmol)、4-溴-1-(2-甲基-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烷-2-基)-1H-吡唑(中间体151) (520 mg, 1.72 mmol)、 tBuXPhos-Pd G3 (272 mg, 0.343 mmol)和THF(5.7 mL)。将混合物用氮气净化5 min，密封，并在105℃加热16 h。将反应混合物冷却至室温。向混合物中加入水(10 mL)和DCM (10 mL)。将混合物搅拌10 min并过滤。用相分离器收集有机层。蒸发溶剂。向所得残余物中加入TFA (3.8 mL, 49 mmol)，并将混合物在50℃加热3 h。蒸发溶剂，并向所得残余物中加入DCM (10 mL)和7 M氨于MeOH中的溶液(1.07 mL,7.52 mmol)。将混合物搅拌1 h。将混合物用水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发。将所得残余物通过硅胶色谱柱纯化(用0-40 %于DCM中的MeOH为洗脱液)以得到(R)-2-(4-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1-醇(实施例151)。LCMS(C22H27FN8O2) (ES, m/z)：455 [M+H]+。1H NMR (600 MHz, 甲醇-d 4) δ 8.18 (s, 1H),7.92 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.25 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.14 (dd,J = 12.0, 3.5 Hz, 1H), 3.84 (dd, J = 26.2, 11.7 Hz, 2H), 3.76 (s, 2H), 3.66(dt, J = 9.9, 5.9 Hz, 1H), 3.57 – 3.46 (m, 1H), 2.51 – 2.39 (m, 1H), 2.30 –2.02 (m, 3H), 1.59 (s, 6H)。
下表29中的本发明的实施例化合物以与对于实施例151的制备所述的类似的方式从合适的起始芳基卤化物和胺中间体制备。
Figure 274650DEST_PATH_IMAGE311
实施例157和实施例158：1-(4-((3R,5S或3S,5R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1, 2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇 和1-(4-((3S,5R或3R,5S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2- 基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure 139838DEST_PATH_IMAGE312
向20 mL配备搅拌棒的微波小瓶中装入rac, 顺式-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体83) (400mg, 0.832 mmol)和THF (5.20 mL)。向混合物中加入1-(4-溴-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(中间体24) (388 mg, 1.67 mmol)，随后加入tBuXPhos-Pd G3 (264 mg,0.333 mmol)和叔丁醇钠(320 mg, 3.33 mmol)。将氮气鼓泡通过混合物10 min。然后将小瓶用新盖密封并在90℃加热16 h。将反应冷却，用饱和氯化铵(1 mL)淬灭并加入西莱特。将两相混合物经用无水MgSO4覆盖的西莱特过滤，并将滤液的溶剂浓缩。将所得残余物溶解于TFA (3.2 mL, 42 mmol)中并在50℃加热3 h。将反应混合物冷却，用DCM稀释，并用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将两相混合物分离并将水相进一步用DCM萃取。将有机层合并，经无水MgSO4干燥，过滤，并将滤液的溶剂浓缩。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-20%于DCM中的MeOH为洗脱液)。然后将纯化的产物进行手性SFC分离(Chiral Technologies AD-H 21x 250 mm柱(用30% (IPA w/ 0.1% NH4OH改性剂)作为共溶剂))，得到1-(4-((3R,5S或3S,5R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例157, 第一个洗脱的峰)和1-(4-((3S,5R或3R,5S)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇(实施例158, 第二个洗脱的峰)。
对于实施例157：LCMS (C24H31FN8O2) (ES, m/z)：483 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.87 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.69 (s, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.18 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 4.61 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.83 (s, 2H), 3.46 (d, J = 10.9Hz, 1H), 3.28 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 3.13 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 2.64 (t, J =11.3 Hz, 1H), 2.22 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.16 (t, J = 11.1 Hz, 1H), 2.11 (s,3H), 1.94 (s, 1H), 1.38 (q, J = 12.3 Hz, 1H), 1.03 (d, J = 3.1 Hz, 6H), 0.97(d, J = 6.6 Hz, 3H)。
对于实施例158：LCMS (C24H31FN8O2) (ES, m/z)：483 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.87 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.69 (s, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.18 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 4.61 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.83 (s, 2H), 3.47 (d, J = 8.4 Hz,1H), 3.29 (s, 1H), 3.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 2.64 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 2.22(d, J = 12.5 Hz, 1H), 2.16 (t, J = 11.0 Hz, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.96 (s, 1H),1.38 (q, J = 12.4 Hz, 1H), 1.03 (d, J = 3.1 Hz, 6H), 0.97 (d, J = 6.6 Hz,3H)。
下表30中的本发明的实施例化合物以与对于实施例157和实施例158的制备所述的类似的方式从合适的起始胺和芳基卤化物制备，其中通过SFC分离对应的最终化合物的所得异构体混合物。
Figure 216378DEST_PATH_IMAGE313
Figure 799806DEST_PATH_IMAGE314
Figure 49522DEST_PATH_IMAGE315
Figure 972479DEST_PATH_IMAGE316
Figure 282237DEST_PATH_IMAGE317
Figure 352961DEST_PATH_IMAGE318
Figure 341121DEST_PATH_IMAGE319
Figure 180901DEST_PATH_IMAGE320
Figure 661561DEST_PATH_IMAGE321
Figure 891686DEST_PATH_IMAGE322
Figure 748783DEST_PATH_IMAGE323
Figure 443070DEST_PATH_IMAGE324
Figure 94631DEST_PATH_IMAGE325
Figure 77630DEST_PATH_IMAGE326
Figure 472840DEST_PATH_IMAGE327
Figure 21633DEST_PATH_IMAGE328
Figure 47357DEST_PATH_IMAGE329
Figure 314391DEST_PATH_IMAGE330
实施例228-231：(2S,3S或2R,3R)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲 氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇 和(2S,3S或2R,3R)-3-(4-((2R,5S或2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并 [1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇和(2R,3R或2S,3S)- 3-(4-((2R,5S或2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2- 基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇和(2R,3R或2S,3S)-3-(4-((2S,5R或2R, 5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1- 基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇
Figure 513291DEST_PATH_IMAGE331
步骤1：(2S,3S和2R,3R)-3-(4-((2S,5R或2R,5S )-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇的非对映异构体的混合物。
向N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-((3R,6S和3S,6R)-6-甲基-1-(1H-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体177) (530 mg,0.970 mmol)于DMF (10 mL)中的溶液中加入顺式-2,3-二甲基环氧乙烷(846 µl, 9.70mmol)和碳酸铯(1.26 g, 3.88 mmol)。将混合物搅拌并在125℃加热5 h。将混合物冷却至室温，并将混合物用水(20 mL)和乙酸乙酯(20 mL)稀释。将两相混合物分离并将水相进一步用乙酸乙酯(20 mL)萃取。然后将合并的有机层用水(2 x 20 mL)和盐水(1 x 20 mL)洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤，并蒸发溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(用0-20%于DCM中的MeOH为洗脱液)以得到(2S,3S和2R,3R)-3-(4-((2S,5R或2R,5S )-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇的非对映异构体的中间体混合物。
步骤2：(2S,3S或2R,3R)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1, 2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇和(2S,3S 或2R,3R)-3-(4-((2R,5S或2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹 唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇和(2R,3R或2S,3S)-3-(4-((2R, 5S或2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌 啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇和(2R,3R或2S,3S)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨 基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1- 基)丁烷-2-醇
向20 mL小瓶中加入3-(4-(5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇(475mg, 0.768 mmol)和TFA (1.77 mL 23.0 mmol)。将混合物搅拌并在50℃加热3 h。将混合物在室温冷却，并蒸发溶剂。将残余物溶解于MeOH (10 mL)中并用7 M氨于MeOH中的溶液(1.10 mL, 7.68 mmol)淬灭。将混合物搅拌20分钟。将混合物过滤，用MeOH漂洗固体，并将滤液浓缩。将残余物混悬于DCM中并过滤以除去剩余的铵盐。将滤液直接加载到硅胶柱上，用0-15%于DCM中的MeOH洗脱以得到异构体的混合物。将混合物提交用于手性SFC分离(Phenomenex Lux-2 21 x 250 mm柱(用45% (MeOH w/ 0.1% NH4OH改性剂)作为共溶剂))，得到实施例228和实施例229 (峰1)、(2R,3R或2S,3S)-3-(4-((2R,5S或2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇(实施例230, 峰2)和(2R,3R或2S,3S)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇(实施例231, 峰3)的混合物。将峰1中获得的混合物通过SFC分离进一步纯化(Chiral Technologies AS-H 21 x 250 mm柱(用20% (MeOH w/ 0.1% NH4OH改性剂)作为共溶剂))，得到(2S,3S或2R,3R)-3-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇(实施例228, 峰1)和(2S,3S或2R,3R)-3-(4-((2R,5S或2S,5R)-5-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)丁烷-2-醇(实施例229, 峰2)。
对于实施例228：LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z)：469 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.90 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 7.73 (s, 2H), 7.22 (s, 1H), 7.19 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 4.73 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.13 – 4.05 (m, 1H),3.98 (s, 3H), 3.88 – 3.78 (m, 1H), 3.70 (s, 1H), 3.19 (s, 1H), 3.10 (t, J =11.5 Hz, 1H), 2.01 (d, J = 21.4 Hz, 3H), 1.70 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 1.34 (d, J= 6.9 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 6.1 Hz, 3H)。
对于实施例229：LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z)：469 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.90 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.73 (s, 2H), 7.25 – 7.21 (m, 1H), 7.19(d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.09 (s, 1H),3.98 (d, J = 2.7 Hz, 3H), 3.83 (s, 1H), 3.70 (s, 1H), 3.19 (s, 1H), 3.10 (t,J = 10.5 Hz, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.72 (s, 1H), 1.43 – 1.30 (m, 3H), 1.03 (d, J= 3.4 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 3.0 Hz, 3H)。
对于实施例230：LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z)：469 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.90 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.72 (s, 2H), 7.22 (s, 1H), 7.18 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 4.77 – 4.64 (m, 1H), 4.14 – 4.04 (m, 1H), 4.02 –3.94 (m, 3H), 3.88 – 3.78 (m, 1H), 3.71 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 3.18 (dd, J =6.4, 4.4 Hz, 1H), 3.09 (t, J = 11.4 Hz, 1H), 2.01 (d, J = 22.2 Hz, 3H), 1.70(d, J = 10.4 Hz, 1H), 1.38 – 1.31 (m, 3H), 1.03 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.95 –0.89 (m, 3H)。
对于实施例231：LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z)：469 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.90 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.73 (s, 2H), 7.22 (s, 1H), 7.19 (d, J =6.7 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 4.73 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 4.15 – 4.03 (m, 1H),3.98 (s, 3H), 3.83 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.70 (s, 1H), 3.19 (s, 1H), 3.10 (t,J = 11.0 Hz, 1H), 2.01 (d, J = 21.8 Hz, 3H), 1.70 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 1.33(d, J = 5.7 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 5.0 Hz, 3H)。
下表31中的本发明的实施例化合物以与对于实施例228-231的制备所述的类似的方式从适当的起始物质和中间体制备，其中通过SFC分离对应的最终化合物的所得异构体混合物。
Figure 854273DEST_PATH_IMAGE332
Figure 113217DEST_PATH_IMAGE333
Figure 867546DEST_PATH_IMAGE334
Figure 542241DEST_PATH_IMAGE335
实施例242和实施例243：(R或S)-3-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4] 三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-醇和(S或R)-3- (4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)- 1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-醇
Figure 65626DEST_PATH_IMAGE336
步骤1：(R)-3-(4-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2- 基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-酮
向5 mL配备搅拌棒的微波小瓶中装入(R)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9-氟-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(中间体82) (100 mg, 0.214mmol)和THF (1.3 mL)。向混合物中加入3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-酮(中间体137) (99.0 mg, 0.429 mmol)，随后加入tBuXPhos-Pd G3 (85.0 mg, 0.107 mmol)和叔丁醇钠(82.0 mg, 0.857 mmol)。将氮气鼓泡通过混合物10 min。然后将小瓶用新盖密封并在105℃加热16 h。将反应混合物冷却至室温，并向混合物中加入水(10 mL)和DCM (10mL)。将混合物搅拌10 min并过滤。收集有机层并浓缩。向所得残余物中加入TFA (826 µL,10.7 mmol)，并将混合物在50℃加热3 h。蒸发溶剂。将所得残余物溶解于MeOH (5 mL)中，并向混合物中加入7 M 氨于MeOH中的溶液(1.53 mL, 10.7 mmol)。将混合物搅拌30 min并过滤。将固体用甲醇洗涤。将滤液浓缩。将残余物溶解于DCM中，并将所得溶液用水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并蒸发溶剂。将所得残余物通过硅胶色谱法纯化(用5-30%于DCM中的MeOH为洗脱液)以得到(R)-3-(4-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-酮LCMS (C23H27FN8O2)(ES, m/z)：467 [M+H]+。
步骤2：(R或S)-3-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹 唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-醇和(S或R)-3-(4-((R)-3-(5-氨 基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-3- 甲基丁烷-2-醇
向(R)-3-(4-(3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-酮(49.0 mg, 0.105 mmol)于EtOH (1 mL)中的溶液中加入NaBH4 (11.9 mg, 0.315 mmol)，并将混合物在室温搅拌1 h。蒸发溶剂。向所得残余物中加入DCM，并将混合物用洗涤水。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液的溶剂蒸发以得到异构体的混合物。将混合物提交用于SFC手性分离(Chiral TechnologiesIA 21 x 250 mm柱(用45% (MeOH w/ 0.1% NH4OH改性剂)作为共溶剂))，得到(R或S)-3-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-醇(实施例242, 峰1)和(S或R)-3-(4-((R)-3-(5-氨基-9-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁烷-2-醇(实施例243, 峰2)。
对于实施例242：LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z)：469 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.88 (dd, J = 10.9, 2.3 Hz, 1H), 7.71 (s, 2H), 7.42 – 7.34 (m,1H), 7.24 – 7.07 (m, 2H), 4.80 (s, 1H), 3.97 (d, J = 2.2 Hz, 3H), 3.82 (s,1H), 3.62 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 3.36 (s, 1H), 3.24 (s, 1H), 2.82 (t, J = 10.2Hz, 1H), 2.15 (s, 1H), 1.80 (d, J = 40.9 Hz, 3H), 1.48 – 1.42 (m, 3H), 1.42 –1.34 (m, 3H), 0.73 (dd, J = 6.1, 2.3 Hz, 3H)。
对于实施例243：LCMS (C23H29FN8O2) (ES, m/z)：469 [M+H]+。1H NMR (499 MHz,DMSO-d 6) δ 7.93 – 7.83 (m, 1H), 7.71 (s, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.22 – 7.10 (m,2H), 4.81 (s, 1H), 4.01 – 3.95 (m, 3H), 3.82 (s, 1H), 3.62 (d, J = 10.8 Hz,1H), 3.37 (s, 1H), 3.24 (s, 1H), 2.82 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 2.55 (d, J = 9.7Hz, 1H), 2.15 (s, 1H), 1.90 – 1.67 (m, 3H), 1.45 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 0.76– 0.67 (m, 3H)。
下表32中的本发明的实施例化合物以与对于实施例242和实施例243的制备所述的类似的方式从合适的起始胺和芳基卤化物制备，其中通过SFC分离对应的最终化合物的所得异构体混合物。
Figure 495470DEST_PATH_IMAGE337
实施例248和实施例249：2-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-7,9-二氟-[1,2,4] 三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1,3-二醇 和2-(4-((2R,5S或2S,5R)-5-(5-氨基-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2- 甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1,3-二醇
Figure 409200DEST_PATH_IMAGE338
步骤1：2-(4-(5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5- c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1,3-二醇
在50℃在氮气气氛下向1-(1-(1,3-二羟基-2-甲基丙烷-2-基)-1H-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼(105 mg, 0.336 mmol) (中间体166)于DMF (1 mL)中的溶液中加入AcOH (9.63 µl, 0.168 mmol)、2-((((3,4-二甲基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-3,5-二氟苄腈(中间体37) (100 mg, 0.336 mmol)。将混合物搅拌并在50℃加热16 h。将混合物冷却，用水(20 mL)稀释，并用EtOAc(2 x 20 mL)萃取。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发溶剂。将所得残余物通过制备型硅胶TLC纯化(用10%于DCM中的MeOH为洗脱液)以得到2-(4-(5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1,3-二醇。LCMS (C31H36F2N8O4) (ES, m/z)：623 [M+H]+。
步骤2：2,2,2-三氟乙酸2-(4-(5-(5-氨基-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑 啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-3-羟基-2-甲基丙酯
在10℃在氮气气氛下向2-(4-(5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1,3-二醇(60 mg, 0.096 mmol)于DCM (2 mL)中的溶液中加入TFA (2.0 mL, 26 mmol)。将混合物在10℃搅拌16 h。蒸发溶剂以得到2,2,2-三氟乙酸2-(4-(5-(5-氨基-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-3-羟基-2-甲基丙酯的粗产物，将其未经任何进一步纯化即用于下一步骤。LCMS (C24H25F5N8O3) (ES, m/z)：569[M+H]+。
步骤3：2-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹 唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1,3-二醇和2-(4-((2R,5S或 2S,5R)-5-(5-氨基-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)- 1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1,3-二醇
在10℃在氮气气氛下向2,2,2-三氟乙酸2-(4-(5-(5-氨基-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-3-羟基-2-甲基丙酯(40mg, 0.070 mmol)于MeOH (2 mL)中的溶液中加入Na2CO3 (7.5 mg, 0.070 mmol)。将混合物在10℃搅拌1h。蒸发溶剂以得到异构体的混合物。将混合物提交用于SFC手性分离(Chiralpak AD-3 4.6 x 150 mm柱(用5-40% (MeOH w/ 0.05% DEA改性剂)作为共溶剂))，得到2-(4-((2S,5R或2R,5S)-5-(5-氨基-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1,3-二醇(实施例248, 峰1)和2-(4-((2R,5S或2S,5R)-5-(5-氨基-7,9-二氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1,3-二醇(实施例249, 峰2)。
对于实施例248：LCMS (C22H26F2N8O2) (ES, m/z)：473 [M+H]+。1H NMR (500MHz,甲醇-d4) δ = 7.71 (br dd, J=1.3, 6.8 Hz, 1H), 7.38 - 7.26 (m, 2H), 7.22 (s,1H), 3.78 - 3.68 (m, 4H), 3.64 (br dd, J=3.8, 6.1 Hz, 1H), 3.41 (br d, J=8.2Hz, 1H), 2.96 (s, 1H), 2.82 (s, 1H), 2.06 - 1.99 (m, 2H), 1.98 (s, 1H), 1.73(br dd, J=3.1, 12.7 Hz, 1H), 1.42 (s, 3H), 1.03 (d, J=6.7 Hz, 3H)。
对于实施例249：LCMS (C22H26F2N8O2) (ES, m/z)：473 [M+H]+。1H NMR (500MHz,甲醇-d4) δ = 7.84 (br s, 1H), 7.53 - 7.41 (m, 2H), 7.36 (br s, 1H), 3.93 -3.79 (m, 4H), 3.78 (br s, 1H), 3.55 (br s, 1H), 2.22 (br s, 1H), 2.18 - 2.09(m, 2H), 1.87 (br d, J=10.1 Hz, 1H), 1.54 (s, 3H), 1.31 (s, 2H), 1.16 (d, J=6.6 Hz, 3H)。
下表33中的本发明的实施例化合物以与对于实施例248和实施例249的制备所述的类似的方式从合适的起始酰肼制备，其中通过SFC分离对应的最终化合物的所得异构体混合物。
Figure 949903DEST_PATH_IMAGE339
Figure 593373DEST_PATH_IMAGE340
Figure 866223DEST_PATH_IMAGE341
Figure 595145DEST_PATH_IMAGE342
Figure 673959DEST_PATH_IMAGE343
Figure 106690DEST_PATH_IMAGE344
Figure 612758DEST_PATH_IMAGE345
Figure 828975DEST_PATH_IMAGE346
生物学测定
为下表中所示的每种本发明的化合物报道的IC50值是根据下述方法测量的。
A2a受体亲和力结合测定测量在不同浓度的本发明的化合物存在下对A2a腺苷受体具有高亲和力的氚化配体与从重组地表达人A2a腺苷受体的HEK293或CHO细胞制备的膜的结合的量。在每个测定中，将本发明的测试化合物溶解于100％DMSO中，并进一步于100％DMSO中稀释以通常产生10点滴定(以半对数间隔)，使得最终测定浓度不超过10 μM化合物或1％DMSO。
使用放射性配体结合测量A2a结合亲和力
将148 μL (5 μg/mL)膜(Perkin Elmer, 目录号RBHA2aM400UA)和2 μL待测试的本发明的化合物(测试化合物)转移至96孔聚丙烯测定板的各个孔中，并在室温下温育15至30分钟。将[3H] SCH58261 ((7-(2-苯基乙基)-5-氨基-2-(2-呋喃基)-吡唑并-[4,3-e]-1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶))于测定缓冲液(50 mM Tris pH 7.4, 10 mM MgCl2, 0.005% 吐温20)中稀释至4 nM的浓度并将50 μL转移至测定板的每个孔中。为了确定总结合和非特异性结合，也包括分别含有1% DMSO和1 μM ZM241385 (Tocris Bioscience, 目录号1036)的孔。将测定板在室温下在搅拌下温育60分钟。使用FilterMate Harvester® (PerkinElmer)，通过UniFilter-96® PEI涂层板(Perkin Elmer 目录号6005274或6005277)过滤测定板的内容物。通过抽吸测定板的内容物5秒钟，然后用冰冷却的洗涤缓冲液(50 mMTris-HCl pH 7.4，150 mM NaCl)洗涤并抽吸内容物3次实现过滤，并用真空歧管将板干燥30秒。将滤板在55oC温育至少1小时，并使其干燥。将滤板的底部用衬带(backing tape)密封。将40 μL Ultima Gold™ (Perkin Elmer, 目录号6013329)加入至滤板的每个孔中并将板的顶部用TopSeal-A PLUS®透明封板条(Perkin Elmer, 目录号6050185)密封。将板温育至少20分钟，并然后使用TopCount® (Perkin Elmer)闪烁计数器确定每个孔中剩余的放射性的量。在归一化为总结合和非特异性结合后，计算在每种化合物浓度下的效应百分比。使用基于 Levenberg-Marquardt算法的4参数逻辑斯谛(logistic)拟合以电子方式分析效应百分比对化合物浓度的对数的图，以生成IC50值。
A2b结合亲合力的测量
使用放射性配体过滤结合测定通过实验确定本发明的化合物对人A2b腺苷受体的报道的亲和力。该测定测量在存在和不存在本发明的化合物的情况下氚化的受专利保护的(proprietary)A2b受体拮抗剂与从重组地表达人A2a腺苷受体的HEK293细胞制备的膜(Perkin Elmer, 目录号ES-013-C)的结合的量。
为了进行测定，首先将要测试的本发明的化合物溶解于100％DMSO中，并进一步于100％DMSO中稀释以通常产生10点滴定(以半对数间隔)，使得最终测定浓度不超过10 μM化合物或1％DMSO。将148 μL (135 μg/mL)膜和2 μL测试化合物转移至96孔聚丙烯测定板的各个孔中，并在室温下在搅拌下温育15至30分钟。将氚化的放射性配体于测定缓冲液(不含镁和钙的磷酸盐缓冲盐水, pH 7.4；GE Healthcare Life Sciences, 目录号SH30256.01)中稀释至14 nM的浓度，并且然后将50 μL溶液转移至测定板的每个孔中。为了确定总结合和非特异性结合，也包括分别含有1% DMSO和20 μM N-乙基甲酰氨基腺苷(TocrisBioscience, 目录号1691)的孔。将测定板的孔在室温下在搅拌下温育60分钟，然后使用FilterMate Harvester® (Perkin Elmer)或类似的设备通过UniFilter-96® PEI涂层板(Perkin Elmer 目录号6005274或6005277)过滤。通过抽吸测定板的内容物5秒钟，然后用冰冷却的洗涤缓冲液(补充了0.0025% Brij58的测定缓冲液)洗涤并抽吸内容物3次实现过滤，并用真空歧管将板干燥30秒。将滤板在55oC温育至少1小时，并使其干燥。然后将滤板的底部用衬带(backing tape)密封。将40 μL Ultima Gold™ (Perkin Elmer, 目录号6013329)加入至滤板的每个孔中并将板的顶部用TopSeal-A PLUS®透明封板条(PerkinElmer, 目录号6050185)密封。然后将板温育至少20分钟，并然后使用TopCount® (PerkinElmer)闪烁计数器确定每个孔中剩余的放射性的量。在归一化为总结合和非特异性结合后，计算在每种化合物浓度下的效应百分比。使用基于 Levenberg-Marquardt算法的4参数逻辑斯谛(logistic)拟合以电子方式分析效应百分比对化合物浓度的对数的图，以生成IC50值。
Figure 649164DEST_PATH_IMAGE347
Figure 1648DEST_PATH_IMAGE348
Figure 944196DEST_PATH_IMAGE349
Figure 319814DEST_PATH_IMAGE350
Figure 740431DEST_PATH_IMAGE351
基于cAMP细胞的测定中A2A和A2B拮抗作用的测量
使用试剂盒测量细胞内环状AMP水平的变化(LANCE cAMP 384 Kit, PerkinElmer, 目录号AD0264)来确定化合物拮抗人A2A和A2B腺苷受体的能力。将先前冷冻在回收培养基(Recovery Medium)(Life Technologies, 目录号12648-010)中的重组地表达人A2A或A2B受体的HEK293细胞解冻并稀释于刺激缓冲液(HBSS (Hyclone SH 30268.01), 5 mMHEPES (Gibco 15630-106), 200 nM咯利普兰(Tocris, 目录号0905)和1.5 %(V/v) BSA稳定剂(kit component))中。将细胞混悬液以200 x g离心10 min，并且然后重悬于补充了Alexa Fluor 647抗cAMP抗体的1:10 000稀释液的刺激缓冲液中至6.0 x105个细胞/mL的密度。使用Labcyte Echo 550声学分配器将溶解于DMSO中的最多达25 nL的测试化合物转移到干燥的Optiplate-384板(Perkin Elmer, 目录号6008289)的孔中。使用多道移液器进行所有随后的液体加入。接下来，将5µL的细胞混悬液加入至Optiplate-384的孔中并在增湿的环境中在37℃和5% CO2下温育30分钟。在这段时间之后，对于A2A和A2B分别加入5 µL300 nM或600 nM腺苷(Sigma 目录号A9251)并在增湿的环境中在37℃和5% CO2下温育30分钟。此时，通过根据制造商的方案将LANCE Eu-W8044标记的链霉亲和素和生物素-cAMP组合在检测缓冲液中来制备检测混合物。将10 µL的检测混合物加入到Optiplate-384的每个孔中，所述Optiplate-384用封板条覆盖并在环境条件下温育2小时，然后使用Envision(Perkin Elmer, Waltham, MA)多模式读板器读取板。通过将最小效应定义为在0.25％(v/v)DMSO存在下的刺激并将最大效应定义为在1 μM ZM241385 (Cayman, 目录号1036)存在下的刺激，将数据归一化。效应百分比数据相对于化合物浓度的对数的曲线拟合使用4参数浓度浓度响应曲线拟合算法来计算IC50值。测试的化合物浓度为10,000、3,333、1,111、370.4、123.4、41.2、13.7、4.6、1.5和0.5 nM(具有0.25%残留的DMSO)。
Figure 213000DEST_PATH_IMAGE352
Figure 998554DEST_PATH_IMAGE353
Figure 923784DEST_PATH_IMAGE354
Figure DEST_PATH_IMAGE355

Claims (17)

1.具有结构式(I)的化合物：
Figure 394085DEST_PATH_IMAGE001
或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自F、Cl、(C1-C6)烷基和O(C1-C6)烷基；
R2选自H、F、Cl、(C1-C6)烷基和O(C1-C6)烷基；
环A是选自以下的基团：
Figure 107963DEST_PATH_IMAGE002
R3选自吡唑基、三唑基和吡啶基，其中所述吡唑基和所述三唑基被1或2个R3A基团取代，并且其中所述吡啶基被1、2或3个R3A基团取代，其中：
每个R3A独立地选自(C1-C6)烷基、O(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-OH、(C1-C6)卤代烷基、O(C1-C6)卤代烷基、氧代、(C1-C4)烷基C(O)(C1-C3)烷基、(C1-C4)烷基CH(OH)(C1-C3)烷基、(C1-C4)烷基S(O)2(C1-C3)烷基、-(CH2)n(C3-C7)环烷基和包含1或2个选自氧和氮的环杂原子的-(CH2)n4-7元单环杂环烷基，其中所述(C3-C7)环烷基和所述4-7元单环杂环烷基各自是未取代的或被1、2或3个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、OH、(C1-C6)烷基和(C1-C6)卤代烷基；
n是0、1或2；
RA1选自H和(C1-C4)烷基；
RA2选自H、F和(C1-C4)烷基；
RA3选自H、F和(C1-C4)烷基；
RA4选自H和OH；和
RA5选自H、F和(C1-C4)烷基。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1选自F、Cl和OCH3；和
R2选自H、F、Cl、CH3和OCH3。
3.权利要求1或2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
环A是选自以下的基团：
Figure 622121DEST_PATH_IMAGE003
，其中：
R3选自
Figure 797756DEST_PATH_IMAGE004
Figure 408866DEST_PATH_IMAGE005
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 965750DEST_PATH_IMAGE006
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基。
4.权利要求1或2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中
环A是基团：
Figure 232783DEST_PATH_IMAGE007
，其中：
R3选自
Figure 228421DEST_PATH_IMAGE008
Figure 631720DEST_PATH_IMAGE009
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 156242DEST_PATH_IMAGE010
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基。
5.权利要求1或2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
环A是基团：
Figure 458042DEST_PATH_IMAGE011
，其中：
R3选自
Figure 929475DEST_PATH_IMAGE012
Figure 249597DEST_PATH_IMAGE013
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 413863DEST_PATH_IMAGE014
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基。
6.权利要求1或2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
环A是基团：
Figure 452226DEST_PATH_IMAGE015
，其中：
R3选自
Figure 461770DEST_PATH_IMAGE016
Figure 901979DEST_PATH_IMAGE017
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 971566DEST_PATH_IMAGE018
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基。
7.权利要求1或2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
环A是基团：
Figure 746493DEST_PATH_IMAGE019
，其中：
R3选自
Figure 559728DEST_PATH_IMAGE020
Figure 854443DEST_PATH_IMAGE021
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 360511DEST_PATH_IMAGE022
每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基。
8.权利要求1或2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
环A是基团：
Figure 107887DEST_PATH_IMAGE023
，其中：
R3选自
Figure 724813DEST_PATH_IMAGE024
Figure 874035DEST_PATH_IMAGE025
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 551004DEST_PATH_IMAGE026
并且每个R3Aa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基。
9.权利要求1或2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
环A是基团：
Figure 536408DEST_PATH_IMAGE027
，其中：
R3选自
Figure 691446DEST_PATH_IMAGE028
Figure 695174DEST_PATH_IMAGE029
其中：
每个R3A是选自以下的基团：
Figure 605361DEST_PATH_IMAGE030
每个RAa独立地选自(C1-C4)烷基、O(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和O(C1-C4)卤代烷基。
10.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：
Figure 265013DEST_PATH_IMAGE031
Figure 489321DEST_PATH_IMAGE032
Figure 347555DEST_PATH_IMAGE033
Figure 366327DEST_PATH_IMAGE034
Figure 576858DEST_PATH_IMAGE035
Figure 604857DEST_PATH_IMAGE036
Figure 317598DEST_PATH_IMAGE037
Figure 304008DEST_PATH_IMAGE038
Figure 938252DEST_PATH_IMAGE039
Figure 301100DEST_PATH_IMAGE040
Figure 337189DEST_PATH_IMAGE041
Figure 245234DEST_PATH_IMAGE042
Figure 366773DEST_PATH_IMAGE043
Figure 533313DEST_PATH_IMAGE044
Figure 158329DEST_PATH_IMAGE045
Figure 752121DEST_PATH_IMAGE046
Figure 95378DEST_PATH_IMAGE047
Figure 65608DEST_PATH_IMAGE048
Figure 810710DEST_PATH_IMAGE049
Figure 824671DEST_PATH_IMAGE050
Figure 655224DEST_PATH_IMAGE051
Figure 163566DEST_PATH_IMAGE052
Figure 763174DEST_PATH_IMAGE053
Figure 698769DEST_PATH_IMAGE054
Figure 16618DEST_PATH_IMAGE055
Figure 63072DEST_PATH_IMAGE056
Figure 782766DEST_PATH_IMAGE057
Figure 639995DEST_PATH_IMAGE058
Figure 445140DEST_PATH_IMAGE059
Figure 295284DEST_PATH_IMAGE060
。
11.一种药物组合物，其包含权利要求1至10中任一项的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
12.一种治疗癌症的方法，该方法包括向需要其的人施用有效量的权利要求1至10中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
13.权利要求12的方法，其中所述癌症选自黑色素瘤、头颈癌、经典霍奇金淋巴瘤、尿路上皮癌、胃癌、宫颈癌、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、高度微卫星不稳定性癌、非小细胞肺癌、肝细胞癌、透明细胞肾癌、结肠直肠癌、乳腺癌、鳞状细胞肺癌、基底癌、肉瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、胰腺癌、肝癌、胃肠道癌、多发性骨髓瘤、肾癌、间皮瘤、卵巢癌、肛门癌、胆道癌、食道癌、唾液腺癌和前列腺癌和转移性的去势抗性前列腺癌。
14.权利要求13的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐与另一种治疗剂组合施用。
15.权利要求14的方法，其中所述另外的治疗剂是PD-1拮抗剂。
16.权利要求15的方法，其中所述另外的治疗剂选自派姆单抗纳武单抗、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗(dunvalumab)和阿维鲁单抗。
17.权利要求15的方法，其中所述另外的治疗剂是派姆单抗。
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