CN113329789A - 作为血红蛋白调节剂的吡唑类 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及吡唑衍生物、其在药物中的用途、包含其的组合物、用于其制备的方法和这样的方法中所用的中间体。更特别地，本发明涉及式(I)的HbS调节剂
Figure 865872DEST_PATH_IMAGE002
(I)或其互变异构体，或所述调节剂或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中X、Y、R2和R3如说明书中所定义。HbS调节剂潜在地可用于治疗各类的病症，包括镰状细胞病(SCD)。

Description

作为血红蛋白调节剂的吡唑类
本发明涉及吡唑衍生物、其在药物中的用途、包含其的组合物、用于其制备的方法和这样的方法中所用的中间体。更特别地，本发明涉及血红蛋白(Hb)，特别地镰状血红蛋白(HbS)的调节剂，及其在治疗由HbS介导的疾病，如镰状细胞病(SCD)中的用途。
SCD是多系统病症。尽管保护HbS携带者免受疟疾感染(这可解释在地中海和非洲血统的人中SCD的高发病率)，但患有SCD的人遭受显著的医学并发症，包括慢性贫血、急性胸部综合征、中风、脾和肾功能障碍、疼痛危象和对细菌感染的易感性，并且受影响的那些人表现出早期死亡(Am J Epidemiol 第151卷, No. 9, 2000, 839-845)。
此外，SCD是一个显著的、并且正在增长的全球健康问题。在2017年，估计每年大约300,000名婴儿生而患有镰状细胞贫血，并且到2050年这可能上升到400,000名。虽然SCD的早期诊断，加上治疗如青霉素预防、输血、羟基脲和造血干细胞移植可以改善一些SCD患者的存活和生活质量，但是需要方便(例如口服片剂)、有效和廉价的治疗(N Engl J Med2017, 376(16), 1561-1571)。
Hb是红细胞(RBC)中的四聚体蛋白，其将氧从肺运输到组织和身体器官，并将二氧化碳从组织和身体器官返回到肺。Hb通过构象变化结合并释放氧：氧在其紧张(T)状态下不与Hb结合，而氧在其松弛(R)状态下与Hb结合。Hb的两种状态在变构调节下处于平衡，其中某些化合物如2,3-二磷酸甘油酸酯(2,3-BPG)、二氧化碳和质子源将Hb稳定在其脱氧T状态，而氧将Hb稳定在其氧化R状态(Contin Educ Anaesth Crit Care Pain 2012, 12,251-256)。
SCD的原因是称为HbS的β-珠蛋白基因的单基因突变，其中亲水谷氨酸残基βGlu6已被交换为疏水βVal6，从而在蛋白质的外部产生疏水区。在低氧条件下，HbS通过突变的βVal6聚合，由此一个HbS四聚体上的疏水区结合由来自相邻HbS四聚体的氨基酸残基β1Ala70、β1Phe85和β1Leu88形成的疏水腔。这些聚合物导致RBC失去其变形能力并且呈现镰刀状形状。镰刀形RBC不能通过狭窄的毛细血管，导致疼痛的血管闭塞危象，并且经历溶血，导致寿命缩短和贫血(ACS Med Chem Lett 2017, 8, 321-326; N Engl J Med 1997, 337(11), 762-769; Lancet 2010, 376, 2018-2031)。
治疗SCD的一种方法将是调节HbS的行为，以便将HbS保持在其R(即氧化)状态，从而防止聚合，因为HbS的聚合仅在HbS处于其T(即脱氧)状态时发生。
除了用于治疗SCD之外，HbS调节剂会用于治疗将受益于HbS以其R状态存在的任何病症或状况，例如：与组织中的氧缺乏相关的病症或状况(例如，由于细胞中的氧水平低而对放射疗法和/或化学疗法有抗性的癌症)，或将受益于增加的组织氧化的病症或状况(例如，高山病和肺动脉瓣关闭不全(pulmonary insufficiency))。
可能适用于尤其是SCD治疗的HbS调节剂是已知的。WO2013/102142和WO2013/102145分别公开了取代的苯甲醛和取代的杂芳基醛。然而，就其本质而言，这些醛是反应性物质并且实际上通过可逆的Schiff碱连接(即通过与可利用的氨基基团反应形成亚胺)共价结合到HbS。使用这样的反应性物质造成了对其它药理学过程的不期望改变或干扰的真正且实质的风险(即"脱靶"作用)，特别是在长期给药和以较高剂量水平给药的情况下。
因此，持续需要提供作为良好药物候选物的新HbS调节剂，特别是采用非共价方法进行HbS调节的新HbS调节剂。
根据本发明的第一方面，提供了式(I)的化合物
Figure 783093DEST_PATH_IMAGE001
(I)
或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中
X是氨基取代的萘啶或喹啉，其选自：
Figure 169075DEST_PATH_IMAGE002
其中所述萘啶的右手侧环任选被R1取代，并且其中所述喹啉的右手侧环任选独立地被一或二个R1取代；
Y是CH或N；
各R1独立地是卤素；CN；(C1-C4)烷基，其任选被OH取代；或CONR4R5；
R2和R3与它们所连接到的碳原子一起形成含1或2个N的5元杂芳基，其任选被R6取代；或
R2是H；OH；(C1-C4)烷基，其任选被OH或CO2R4取代；(C1-C4)烷氧基，其任选被OH或CO2R4取代；CO2R4；CONR4R5；SO2NR4R4；NR4SO2(C1-C4)烷基；或噁二唑酮；
R3是H或卤素；
各R4独立地是H或(C1-C4)烷基；
各R5独立地是H；(C1-C4)烷基，其任选被OH、O(C1-C4)烷基或CO2R4取代；SO2(C1-C4)烷基；或(C3-C6)环烷基，其任选被OH取代；和
R6是(C1-C4)烷基，其任选被OH、CO2R4或CONR4R5取代。
以下描述了本发明的这种第一方面的许多实施方案(E1)，其中为方便起见E1与其相同。
E1 如上所定义的式(I)的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐。
E2 根据实施方案E1的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中X是氨基取代的喹啉，选自
Figure 214391DEST_PATH_IMAGE003
。
E3 根据实施方案E2的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中X是氨基取代的喹啉，选自
Figure 937496DEST_PATH_IMAGE004
。
E4 根据实施方案E3的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中X是氨基取代的喹啉
Figure 17448DEST_PATH_IMAGE005
。
E5 根据实施方案E3的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中X是氨基取代的喹啉，选自
Figure 43173DEST_PATH_IMAGE006
。
E6 根据实施方案E5的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中X是氨基取代的喹啉
Figure 657343DEST_PATH_IMAGE007
。
E7 根据实施方案E1的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中X是氨基取代的萘啶，其选自：
Figure 121823DEST_PATH_IMAGE008
。
E8 根据实施方案E7的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中X是氨基取代的萘啶
Figure 993964DEST_PATH_IMAGE009
。
E9 根据实施方案E1至E8中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中各R1独立地是F，Cl，Br，CN，CH3或CONH2。
E10 根据实施方案E9的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中各R1独立地是F，Cl或CONH2。
E11 根据实施方案E10的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中各R1是F。
E12 根据实施方案E1至E11中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中Y是CH。
E13 根据实施方案E1至E11中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中Y是N。
E14 根据实施方案E12或E13的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R2和R3与它们所连接到的碳原子一起形成5元杂芳基，其选自
Figure 252907DEST_PATH_IMAGE010
。
E15 根据实施方案E14的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R2和R3与它们所连接到的碳原子一起形成吡唑基，其选自
Figure 600712DEST_PATH_IMAGE011
。
E16 根据实施方案E14或E15的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R6是被OH、CO2H或CONH2取代的(C1-C4)烷基。
E17 根据实施方案E16的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R6是被OH、CO2H或CONH2取代的(C1-C2)烷基。
E18 根据实施方案E12的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R2是被CO2R4取代的(C1-C4)烷基；被CO2R4取代的(C1-C4)烷氧基；CO2R4；CONR4R5；SO2NR4R4；或噁二唑酮。
E19 根据实施方案E18的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R2是被CO2R4取代的(C1-C2)烷基；被CO2R4取代的(C1-C2)烷氧基；CO2R4；CONR4R5；SO2NR4R4；
Figure 540986DEST_PATH_IMAGE012
。
E20 根据实施方案E13的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R2是H；OH；被OH取代的(C1-C4)烷基；(C1-C4)烷氧基；被OH或CO2R4取代的(C1-C4)烷氧基；CO2R4；或CONR4R5。
E21 根据实施方案E20的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R2是H；OH；被OH取代的(C1-C2)烷基；(C1-C2)烷氧基；被OH或CO2R4取代的(C1-C2)烷氧基；CO2R4；或CONR4R5。
E22 根据实施方案E21的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R2是H；OH；(C1-C2)烷氧基；被OH或CO2R4取代的(C1-C2)烷氧基；CO2R4；或CONR4R5。
E23 根据实施方案E1至E22中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R3是H或F。
E24 根据实施方案E23的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R3是H。
E25 根据实施方案E1至E24中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R4是H或甲基。
E26 根据实施方案E25的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R4是H。
E27 根据实施方案E1至E26中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R5是H或甲基。
E28 根据实施方案E27的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R5是H。
E29 根据实施方案E1的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其选自：
5-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺；
5-{(1S)-1-[(2-氨基-7-氯-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-溴喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸钾；
5-[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]-1,3,4-噁二唑-2(3H)-酮；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯磺酰胺；
[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酸；
5-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸；
N-[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰基]甘氨酸；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(2-甲氧基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(2-羟基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(3-羟基丙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(反-3-羟基环丁基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺；
[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基]乙酸；
3-[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]丙酸；
3-[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮；
N-[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]甲烷磺酰胺；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸；
5-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸；
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(甲基磺酰基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺；
6-溴-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
2-氨基-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲腈；
2-氨基-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺；
6-溴-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
2-氨基-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺；
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
6-{(1S)-1-[(2-氨基-7-氯-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酰胺；
6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
2-氨基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺；
2-氨基-8-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺；
3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-胺；
6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸；
6,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-3-氟-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸；
{[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙酸；
2-{[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙醇；
2-氨基-3-{(1S)-1-[6-(2-羟基乙氧基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺；
5,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
2-氨基-3-{(1S)-1-[6-羟基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺；
3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
6-{(1S)-1-[(2-氨基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-{(1S)-1-[(2-氨基-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-{(1S)-1-[(2-氨基-7-氟-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-[(1S)-1-{[2-氨基-6-(羟基甲基)喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-[(1S)-1-{[2-氨基-6-(2-羟基丙-2-基)喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-[(1S)-1-({2-氨基-6-[(1R)-1-羟基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-[(1S)-1-({2-氨基-6-[(1S)-1-羟基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-甲基-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
2-氨基-3-{(1S)-1-[6-(羟基甲基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺；
6,8-二氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
6-氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
2-氨基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺；
2-氨基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺；
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
6-氟-3-{(1S)-1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
2-氨基-7-氟-3-{(1R)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺；
(S)-2-(6-(1-((2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸叔丁酯；
[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸；
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸；
2-[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酰胺；
[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基]乙酸；
2-[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙醇；
2-[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙醇；
2-氨基-3-{(1S)-1-[1-(2-羟基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺；
7-甲基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-1,6-萘啶-2-胺；
2-氨基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺；和
2-[6-{(1S)-1-[(2-氨基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙醇。
E30 根据实施方案E1至E29中任一项的化合物，或其药学上可接受的盐。
E31 根据实施方案E29的化合物，其是3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸，或其互变异构体。
E32 根据实施方案E31的化合物，其是3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸三(羟基甲基)氨基甲烷盐，或其互变异构体。
E33 根据实施方案E29的化合物，其是6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇，或其互变异构体。
E34 根据实施方案E29的化合物，其是(S)-6-(1-((2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮，或其互变异构体。
E35 根据实施方案E29的化合物，其是2-氨基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺，或其互变异构体。
E36 根据实施方案E31至E35中任一项的化合物。
附图说明
图1是(S)-6-(1-((2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮的晶型(形式I)的PXRD图。
图2是(S)-6-(1-((2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮的晶型(形式I)的单晶结构的X射线晶体结构(ORTEP图)。
图3是2-氨基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺的晶型(形式1)的PXRD图。
在式(I)的化合物和其互变异构体中：
* 烷基是指式-CnH(2n+1)的直链或支链烃基。烷基的实例包括甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，仲丁基和叔丁基。
* 烷氧基是指通过氧原子连接的烷基取代基。烷氧基的实例包括甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，异丁氧基，仲丁氧基和叔丁氧基。
* 环烷基是指含有至少三个碳原子的式-CnH(2n-1)的环烃基。环烷基的实例包括环丙基，环丁基，环戊基和环己基。
* 卤素的实例包括氟(F)，氯(Cl)，溴(Br)和碘(I)。
* 含1或2个N的5元杂芳基的实例包括吡咯基，吡唑基和咪唑基(imidazoyl)。
在下文中，所有涉及本发明的化合物的内容包括式(I)的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，溶剂化物，或多组分复合物，或式(I)的化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐的药学上可接受的溶剂化物或多组分复合物，如下面更详细讨论的。
本发明的优选的化合物是式(I)的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐。
合适的酸加成盐是由形成无毒盐的酸形成的。实例包括乙酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐(besylate)、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、右旋樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环己烷氨基磺酸盐(cyclamate)、乙二磺酸盐(edisylate)、乙磺酸盐(esylate)、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐(hibenzate)、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐(hydroiodide)/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、1,5-萘二磺酸盐、萘甲酸盐(naphthylate)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐(pyroglutamate)、蔗糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐和xinofoate盐。
合适的碱盐由形成无毒盐的碱形成。实例包括铝盐、精氨酸盐、苄星青霉素(benzathine)盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺(diolamine)盐、甘氨酸盐、锂盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、乙醇胺(olamine)盐、钾盐、钠盐、氨基丁三醇(tromethamine)盐和锌盐。
也可形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。
本领域技术人员将理解，上述盐包括其中抗衡离子是光学活性的那些，例如d-乳酸盐或l-赖氨酸盐，或外消旋的，例如dl-酒石酸盐或dl-精氨酸盐。
对于合适的盐的综述，参见"Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties,Selection, and Use" Stahl 和 Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, 德国, 2002)。
式(I)的化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐可以通过三种方法中的一种或多种制备：
(i)通过使式(I)的化合物或其互变异构体与所期望的酸或碱反应；
(ii)通过使用所期望的酸或碱从式(I)的化合物或其互变异构体的合适前体中除去酸或碱不稳定的保护基团；或
(iii)通过与适当的酸或碱反应或通过适当的离子交换柱将式(I)的化合物或其互变异构体的一种盐转化为另一种盐。
所有三种反应通常在溶液中进行。所得的盐可沉淀出来并通过过滤收集，或者可通过蒸发溶剂回收。所得盐的电离度可以从完全电离到几乎非电离而变化。
式(I)的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐可以以非溶剂化和溶剂化形式存在。本文使用术语"溶剂化物"来描述包含式(I)的化合物或其互变异构体、或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐、以及一种或多种药学上可接受的溶剂分子(例如乙醇)的分子复合物。当所述溶剂是水时，使用术语"水合物"。本发明的药学上可接受的溶剂化物包括其中结晶溶剂可以被同位素取代的那些，例如D2O、d6-丙酮和d6-DMSO的那些。
目前可接受的有机水合物的分类系统是定义分离的位点、通道或金属离子配位水合物的系统-参见Polymorphism in Pharmaceutical Solids, K. R. Morris (Ed. H. G.Brittain, Marcel Dekker, 1995)，其通过引用并入本文。分离的位点水合物(Isolatedsite hydrates)是其中通过插入有机分子使水分子从彼此直接接触分离的水合物。在通道水合物(channel hydrates)中，水分子位于晶格通道中，在该处它们与其它水分子相邻。在金属离子配位水合物(metal-ion coordinated hydrates)中，水分子与金属离子键合。
当溶剂或水紧密结合时，复合物将具有独立于湿度的明确定义的化学计量。然而，当溶剂或水是弱结合的，如在通道溶剂化物和吸湿性化合物中，水/溶剂含量将取决于湿度和干燥条件。在这种情况下，非化学计量将是标准。
本发明范围内还包括式(I)的化合物或其互变异构体或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐的多组分复合物(除盐和溶剂化物之外)，其中药物和至少一种其它组分以化学计量或非化学计量的量存在。这种类型的复合物包括笼合物(药物-宿主包合复合物)和共晶体。后者通常定义为通过非共价相互作用结合在一起的中性分子组分的结晶复合物，但也可以是中性分子与盐的复合物。可以通过熔融结晶、从溶剂中再结晶或通过将各组分一起物理研磨来制备共晶体-参见Chem Commun, 17, 1889-1896, O. Almarsson和M. J. Zaworotko (2004)，其通过引用并入本文。对于多组分复合物的一般性综述，参见JPharm Sci, 64 (8), 1269-1288, Haleblian (1975年8月)，其通过引用并入本文。
本发明的化合物可以以从完全无定形到完全结晶的固态连续形式存在。术语"无定形"是指其中材料在分子水平缺乏长程有序性并且根据温度可表现出固体或液体的物理性质的状态。通常，这种材料没有给出独特的X-射线衍射图，并且尽管表现出固体的性质，但更正式地被描述为液体。在加热时，发生从固体到液体性质的变化，其特征在于状态的变化，通常是二阶的("玻璃化转变")。术语"结晶"是指固相，其中材料在分子水平具有规则有序的内部结构，并且给出具有确定峰的独特的X射线衍射图。当充分加热时，这种材料也将表现出液体的性质，但是从固体到液体的变化的特征在于相变，通常为一阶的("熔点")。
当经受合适的条件时，本发明的化合物还可以以介晶态(中间相或液晶)存在。介晶态是真晶态和真液态(熔体或溶液)之间的中间状态。由于温度变化而产生的介晶现象被描述为"热致的"，而由于加入第二组分如水或另一种溶剂而产生的介晶现象被描述为"溶致的"。具有形成溶致中间相的潜力的化合物被描述为"两亲的"，并且由具有离子(例如-COO-Na+、-COO-K+或-SO3 -Na+)或非离子(例如-N-N+(CH3)3)极性头部基团的分子组成。对于更多的信息，参见Crystals and the Polarizing Microscope. N. H. Hartshorne和A.Stuart, 第4版 (Edward Arnold, 1970)，其通过引用并入本文。
本发明的化合物可以作为前药给药。因而，式(I)的化合物或其互变异构体的某些衍生物，其本身可以具有很小或没有药理学活性，当给药至体内或体表时，例如通过水解裂解，可以被转化为具有所需活性的式(I)的化合物或其互变异构体。这样的衍生物被称为"前药"。关于前药用途的进一步信息可见于'Pro-drugs as Novel Delivery Systems, 第14卷, ACS Symposium Series (T Higuchi and W Stella) 和 'BioreversibleCarriers in Drug Design', Pergamon Press, 1987 (E B Roche著, AmericanPharmaceutical Association)。
例如，前药可以通过用作为'前体部分'，如例如在"DesignofProdrugs",HBundgaard(Elsevier,1985)中所述的，本领域技术人员已知的某些部分来替代式(I)的化合物或其互变异构体中存在的适当的官能团来制备。
前药的实例包括磷酸盐/酯前药，例如磷酸二氢盐或磷酸二烷基(例如二叔丁基)酯/盐前药。根据前述实例的替代基团的进一步实例和其它前药类型的实例可见于前述参考文献中。
本发明范围内还包括式(I)的化合物或其互变异构体的代谢物，即在给予药物后体内形成的化合物。根据本发明的代谢物的一些实例包括，当式(I)的化合物或其互变异构体含有苯基(Ph)部分时，其苯酚衍生物(-Ph>-PhOH)。
式(I)含有不对称碳原子，并且是立体特异性定义的。
本领域技术人员还将理解，式(I)中的一个或多个取代基可以引入一个或多个另外的不对称碳原子。含有所述一个或多个另外的不对称碳原子的本发明的化合物可以作为两种或更多种立体异构体存在；本发明范围内包括的是本发明的化合物的所有这样的立体异构体(包括差向异构体)和其两种或更多种的混合物。
制备/分离单个对映体的常规技术包括从合适的光学纯前体进行手性合成或使用例如手性高压液相色谱法(HPLC)拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)。
备选地，可使外消旋体(或外消旋前体)与合适的光学活性化合物反应，例如，醇，或者在式(I)的化合物或其互变异构体含有酸性或碱性部分的情况下，与碱或酸如1-苯基乙胺或酒石酸反应。所得的非对映体混合物可以通过色谱法和/或分级结晶法分离，并且通过本领域技术人员公知的方法将非对映体的一种或两种转化成相应的纯对映体。
本发明的手性化合物(及其手性前体)可以使用色谱法(通常为HPLC)在不对称树脂上以对映体富集形式获得，所述不对称树脂具有由烃(通常为庚烷或己烷)组成的流动相，含有0至50体积%的异丙醇(通常为2%至20%)和0至5体积%的烷基胺(通常为0.1%二乙胺)。浓缩洗脱液得到富集的混合物。
可以使用利用亚超临界流体和超临界流体的手性色谱法。可用于本发明的一些实施方案的手性色谱方法是已知的；参见，例如，Smith, Roger M., LoughboroughUniversity, Loughborough, UK; Chromatographic Science Series (1998), 75(Supercritical Fluid Chromatography with Packed Columns), 第223-249页以及其中引用的参考文献。
立体异构体的混合物可以通过本领域技术人员已知的常规技术分离；参见，例如，“Stereochemistry of Organic Compounds” , E. L. Eliel 和 S. H. Wilen (Wiley,New York, 1994)。
当结构异构体可通过低能障相互转化时，可能发生互变的异构现象("互变异构")和构象的异构现象。
互变异构现象可以在含有例如酰胺基的式(I)的化合物中采取质子互变异构现象的形式(即酰胺-亚胺酸互变异构现象)，或者在含有芳族部分的化合物中采取所谓的价互变异构现象。参考实施例58、58a和58b，这种互变异构现象的实例如下所示：
Figure 329950DEST_PATH_IMAGE013
。
本领域技术人员将理解，除了实施例58-58b以外，酰胺-亚胺酸互变异构现象可以在实施例44、46-54和78的化合物中发生。然而，为了简明，本文中已经以单一互变异构形式画出了式(I)的化合物，所有可能的互变异构形式，尤其是由质子互变异构现象产生的那些，并且特别是酰胺-亚胺酸互变异构体及其所有混合物包括在本发明的范围内。
构象异构是一种形式的立体异构现象，其中异构体可以仅仅通过围绕单键旋转而相互转化。这样的异构体通常称为构象异构体或构象体并且，特别地旋转异构体。虽然，为了简明，已经以单一构象形式画出了式(I)的化合物及其互变异构体，但所有可能的构象体都包括在本发明的范围内。
本发明的范围包括本发明的化合物的所有晶型，包括其外消旋体和外消旋混合物(集聚体)。立体异构集聚体也可以通过刚刚上文所述的常规技术分离。
本发明的范围包括所有药学上可接受的同位素标记的本发明的化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于自然界中占优势的原子质量或质量数的原子所替代。
适于包含在本发明化合物中的同位素的实例包括以下同位素：氢，如2H和3H；碳，例如11C、13C和14C；氮，例如13N和15N；和氧，例如15O、17O和18O。
本发明的某些同位素标记的化合物，例如，掺入放射性同位素的那些，可用于药物和/或底物组织分布研究。放射性同位素氚，即3H，和碳-14，即14C，由于它们易于掺入和易于检测，因此特别适用于该目的。用较重同位素如氘(D)，即2H取代可提供某些治疗优点，这是由于更大的代谢稳定性，例如体内半衰期增加或剂量需求降低，因此在一些情况下可能是优选的。用正电子发射同位素如11C、15O和13N取代可用于正电子放射断层造影术(PET)研究以检查底物受体占据情况。
同位素标记的式(I)的化合物及其互变异构体通常可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实施例和制备例中所述的那些类似的方法，使用合适的同位素标记的试剂代替先前使用的非标记的试剂来制备。
还在本发明的范围内的是如下定义的中间体化合物或其互变异构体，对于式(I)的化合物的如上定义的其全部的盐、溶剂化物和复合物以及其盐的全部的溶剂化物和复合物。本发明包括上述物质的所有多晶型物及其晶体特性。
当制备根据本发明的式(I)的化合物或其互变异构体时，本领域技术人员可常规选择中间体的形式，该中间体提供了为此目的的特征的最佳组合。这样的特征包括中间体形式的熔点、溶解性、可加工性和收率以及分离时产物可被提纯的难易程度。
本发明的化合物可以通过本领域已知的制备类似结构的化合物的任何方法制备。特别地，本发明的化合物可以通过参考以下方案描述的程序，或通过实施例中描述的具体方法，或通过与任一类似的方法制备。
本领域技术人员将理解，在以下方案中列出的实验条件是用于实现所示转化的合适条件的说明，并且可能需要或希望改变用于制备式(I)的化合物或其互变异构体的精确条件。还应进一步理解，可能需要或希望以与方案中所述不同的顺序进行转化，或改变一种或多种转化，以提供所需的本发明化合物。
此外，本领域技术人员将理解，在本发明化合物合成的任何阶段，保护一个或多个敏感基团以防止不期望的副反应可能是必需的或期望的。特别地，保护羟基、羧基和/或氨基基团可能是必需的或期望的。用于制备本发明的化合物的保护基可以以常规方式使用；参见，例如，Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Theodora W Greene和Peter G M Wuts, 第5版,(JohnWileyandSons,2014)中描述的那些，在此引入作为参考，并且分别具体参见第2、5和7章，其也描述了除去这些基团的方法。
在以下一般方法中：
* X, Y和R1-R6是如先前对式(I)的化合物或其互变异构体所定义的，除非另有说明；
* Z1和Z2选自CH或N并且带有Z1和Z2的环可被一或二个R1取代，使得提供式(I)的化合物或其互变异构体，其中X是如上定义的；
* PG为合适的氨基保护基如氨基甲酸酯、烷基、苄基或邻苯二甲酰基团，优选地Boc、tBu、苄基、PMB或邻苯二甲酰基；
* Hal为卤素，优选地方案6中的氯(Cl)和方案8中的碘(I)；以及
* LG是离去基团，如Cl，甲磺酸根或甲苯磺酸根(优选甲磺酸根)。
根据第一种方法，式(I)的化合物或其互变异构体可以由式(II)和(III)的醇制备，如方案1所说明的
Figure 838423DEST_PATH_IMAGE014
。
方案1
式(I)的化合物或其互变异构体可以由式(II)和(III)的醇在Mitsunobu反应条件下-即在过量的偶氮二羧酸酯和三烷基或三芳基膦的存在下和在极性非质子溶剂如THF或DMF中制备。优选的条件包括在过量的DIAD和PPh3或P(nBu)3的存在下在THF中，任选用DMF作为助溶剂，在0°C-50°C，式(II)和(III)的醇的反应。
根据第二种方法，式(I)的化合物或其互变异构体可以由式(III)、(IV)和(V)的化合物制备，如方案2所说明的。
Figure 345628DEST_PATH_IMAGE015
。
方案2
如之前方案1中所述的，式(V)的化合物可以由式(III)和(IV)的醇在Mitsunobu反应条件下制备。
使用本领域技术人员众所周知的方法如SFC、HPLC或重结晶，可以通过式(V)的化合物的手性提纯制备式(I)的化合物或其互变异构体。
根据第三种方法，式(I)的化合物或其互变异构体可以由式(II)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的化合物制备，如方案3所说明的
Figure 824014DEST_PATH_IMAGE016
。
方案3
如之前方案1中所述的，在Mitsunobu反应条件下，可以由式(II)和(VI)的醇制备式(VII)的化合物。
在有机碱如DIPEA的存在下，在溶剂如DCM中和在室温，可以通过用氯化剂如TsCl处理式(VII)的化合物制备式(VIII)的氯化物。
在有机碱如DIPEA或Et3N的存在下，在极性非质子溶剂如THF中并且在升高的温度如70°C，可以通过式(VIII)的氯化物与PGNH2如PMB-NH2的反应制备式(IX)的化合物。
在本领域技术人员众所周知的条件下，如在TFA的存在下在室温用苯甲醚处理，可以通过式(IX)的化合物的脱保护制备式(I)的化合物或其互变异构体。本领域技术人员会理解存在许多用于除去适当的氨基保护基的备选方法。
根据第四种方法，式(I)的化合物或其互变异构体，其中R2是OH；(C1-C4)烷氧基，其任选被OH或CO2R4取代；或CO2R4；可以由式(X)，(XI)，(XII)和(XIII)的化合物制备，如方案4所说明的
Figure 60960DEST_PATH_IMAGE017
。
方案4
如之前方案1中所述的，在Mitsunobu反应条件下，可以由式(X)和(XI)的醇制备式(XII)的化合物。
在本领域技术人员众所周知的条件下，可以通过式(XII)的化合物的脱保护制备式(XIII)的化合物。例如，当PG是Boc时，典型的条件包括在适当的溶剂如DCM中并且在0°C和室温之间，用强酸如HCl或优选地TFA处理。当PG是邻苯二甲酰亚胺基时，典型的条件包括或者与肼在EtOH中在升高的温度如85°C反应，或与NH3在THF中在-60°C和室温之间反应。
在本领域技术人员众所周知的用于芳基溴的转换的条件下，式(I)的化合物或其互变异构体可以由式(XII)或(XIII)的化合物制备。例如，当R2是OH时，芳基溴的过渡金属催化的羟基化可以在Pd催化剂如Pd2dba3的存在下，与配体如tBuXPhos一起，在碱如KOH的存在下，在溶剂如二氧杂环己烷/H2O中并且在室温至80°C进行(随后脱保护步骤，根据需要)。
备选地，在没有分离式(XIII)的化合物的情况下，式(I)的化合物或其互变异构体可以在一步中由式(XII)的化合物制备。
根据第五种方法，式(XIII)的化合物还可以由式(VI)和(X)的化合物制备，如方案5所说明的
Figure 661706DEST_PATH_IMAGE018
。
方案5
如之前方案1中所述的，在Mitsunobu反应条件下，可以由式(X)和(VI)的醇制备式(XIV)的化合物。
通过用活性剂如TsCl，有机碱如DIPEA，胺源如NH4PF6处理并且在溶剂如DCM中，或类似于Couturier等人(Org. Lett. 2006, 8, (9), 1929-1932)或Ferrell等人(Org.Lett. 2013, 15 (1), 168-171)的方法，可以由式(XIV)的化合物制备式(XIII)的化合物。典型的条件包括在NH4PF6、DIPEA和DCM的存在下，在-5°C和室温之间，式(XIII)的化合物与过量TsCl的反应。
根据第六种方法，还可以由式(XV)，(XVI)和(XVII)的化合物制备式(VII)的化合物，如方案6所说明的
Figure 593890DEST_PATH_IMAGE019
。
方案6
使用钯交叉偶联试剂如烯丙基氯化钯二聚物(S)-1-[(RP)-2-(双环己基膦基)二茂铁基]乙基二叔丁基膦，在碱如Cs2CO3或K2CO3的存在下，在溶剂如甲苯中，并且在室温和105°C之间的温度，可以由式(XV)和(XVI)的化合物制备式(XVII)的化合物。本领域技术人员会理解可以使用备选的有机金属偶联策略，包括备选的偶联配体，金属和溶剂组合。
在适当的氧化剂如MCPBA的存在下，在溶剂如DCM中并且在室温，通过氧化可以由式(XVII)的化合物制备式(VII)的化合物。
根据第七种方法，可以由式(XVIII)和(III)的化合物制备式(V)的化合物，如方案7所说明的
Figure 938283DEST_PATH_IMAGE020
。
方案7
在无机碱的存在下，在溶剂中并且在0°C和100°C之间，通过式(III)的醇与式(XVIII)的化合物的反应可以制备式(V)的化合物。优选的条件包括在Cs2CO3/MeCN的存在下，在60°C，式(XVIII)和(III)的化合物的反应。
根据第八种方法，式(I)的化合物或其互变异构体可以由式(XV)，(XIX)，(XX)，(XXI)，(XXII)和(XXIII)的化合物制备，如方案8所说明的
Figure 780468DEST_PATH_IMAGE021
。
方案8
在强碱如NaH的存在下，在极性非质子溶剂如THF中和在升高的温度，如60°C，可以通过式(XV)的化合物与式(XXII)的卤代烷基酯的反应制备式(XIX)的酯。
通过用NH3水溶液处理，任选在醇溶剂如EtOH或优选地MeOH的存在下，在密封容器中和在升高的温度，如90°C，可以通过式(XIX)的酯的酰胺化制备式(XX)的酰胺。
使用脱水剂如TFAA，在有机碱如Et3N的存在下，在溶剂如吡啶中和在0°C和室温之间，可以通过式(XX)的酰胺的脱水制备式(XXI)的腈。
在强碱如KOtBu的存在下，在极性非质子溶剂如DMSO中和在室温，可以通过式(XXIII)的醛和式(XXI)的腈的缩合制备式(I)的化合物或其互变异构体。
根据第九种方法，式(IX)的化合物可以由式(X)和(XI)的化合物制备，如方案9所说明的
Figure 755378DEST_PATH_IMAGE022
。
方案9
如之前方案1中所述的，在Mitsunobu反应条件下，可以由式(X)和(XI)的醇制备式(IX)的化合物。
根据第十种方法，式(II)和(XV)的化合物可以由式(XXIV)的化合物制备，如方案10所说明的
Figure 971595DEST_PATH_IMAGE023
.
方案10
在极性溶剂中在0°C和室温之间，可以通过用还原剂还原式(XXIV)的酮制备式(XV)和(II)的醇。优选的条件包括(i)在EtOH或MeOH中，任选用THF作为助溶剂，在0°C和室温之间，用NaBH4处理，随后在上面在方案2中描述的条件下分离对映体(本领域技术人员将理解式(IV)表示式(II)和(XV)的对映体的混合物，如外消旋混合物)；或(ii)在pH7磷酸盐缓冲液中在室温，利用(+)葡萄糖，NADP+，GDH-CDX901和适当的酮还原酶的生物催化还原。
通过本领域技术人员已知的官能团相互转化，式(I)的化合物或其互变异构体可以转化为备选的式(I)的化合物或其互变异构体。例如：CO2(C1-C4)烷基酯可以通过酸或碱催化的水解，优选使用含水的NaOH/THF或MeOH，转化为其相应的羧酸；苄腈化合物可以通过用K2CO3和H2O2/DMSO处理而水解为苯甲酰胺；在室温，在有机碱如Et3N/THF的存在下，通过与NH4Cl、偶联剂如HATU反应，羧酸可以被转化为羧酰胺；CO2(C1-C4)烷基酯可以通过在密封容器中在80℃用甲醇化NH3处理转化为酰胺；CO2(C1-C4)烷基酯可以使用NaBH4/MeOH/THF或LiAlH4/THF被还原；和CO2(C1-C4)烷基酯或腈可以分别在本领域技术人员众所周知的用于形成噁二唑酮的条件下通过酰肼或N-羟基脒基(N-hydroxycarbamimidoyl)的形成而转化成噁二唑酮。
式(III)、(V)、(IX)、(XI)、(XII)、(XIII)和(XVII)的化合物同样也可以相互转化成如上所述的式(III)、(V)、(IX)、(XI)、(XII)、(XIII)和(XVII)的备选化合物，以促进另外的式(I)的化合物或其互变异构体的制备。实例包括以下转化：Br至CO2(C1-C4)烷基酯，如制备例2和116中所示；Br至OH，如制备例3中所示；Br至烷基，任选地被CO2(C1-C4)烷基酯取代，如制备例5中所示；Br至任选保护的氨基基团，如制备例7中所示；Br至CN，如制备例30和33中所示；Cl至CN，如制备例32所示；Br至烷基醚，如制备例55中所示；和CN至甲酰胺，如实施例3中所示。
备选地，这种相互转化可以通过与文献中描述的方法如可见于以下中的那些类似的方法来实现：Buchwald-Hartwig amination (Name Reactions for Functional GroupTransformations (2007), 564-609), Palladium-Catalyzed carbonylationReactions-A Reaction coming of Age (Organometallics, 第27卷, 第21期, 5402) 和Levin等人 (ACS Cent. Sci 2016, 2, 5, 293)。
式(III)、(VI)、(X)、(XI)、(XVI)、(XVIII)、(XXII)和(XXIV)的化合物可以是：从商业来源获得；通过类似于文献方法制备，如由M. G.-A. Shvekhgeimer, Chemistry ofHeterocyclic Compounds, 第40卷, No. 3, 2004, 257 或 S. A. Yamashkin和E. A.Oreshkina, Chemistry of Heterocyclic Compounds, 第42卷, No. 6, 2006, 701所述的；或通过以下实验部分中描述的方法或本领域技术人员众所周知的其变体获得。
所有制备式(I)的化合物或其互变异构体的新方法以及用于该方法的相应的新中间体构成了本发明的其它方面。
用于药物用途的本发明的化合物可以作为结晶或无定形产品给药，或者可以以从完全无定形到完全结晶的固态连续形式存在。它们可以通过例如沉淀、结晶、冷冻干燥、喷雾干燥或蒸发干燥的方法以例如固体栓、粉末或薄膜的形式获得。微波或射频干燥可用于该目的。
它们可以单独地或与一种或多种本发明的其它化合物组合地或与一种或多种其它药物组合地(或以其任何组合的形式)给药。通常，它们将以与一种或多种药学上可接受的赋形剂结合的制剂的形式给药。术语"赋形剂"在本文中用于描述除本发明的化合物之外的任何成分。赋形剂的选择在很大程度上取决于诸如特定的给药方式、赋形剂对溶解度和稳定性的影响以及剂型的性质等因素。
在另一方面，本发明提供包含本发明的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
适于递送本发明的化合物的药物组合物及其制备方法对于本领域技术人员而言是显而易见的。这样的组合物及其制备方法可参见，例如 “Remington’s PharmaceuticalSciences”, 第19版(Mack Publishing Company, 1995)。
本发明的化合物可以口服，例如通过固体或液体剂型给药。口服给药可以包括吞咽，使得化合物进入胃肠道，或口腔或舌下给药(例如可以通过锭剂的方式实现)，使得化合物直接从口进入血流。
用于口服给药本发明化合物的固体剂型包括例如片剂、硬胶囊或软胶囊、锭剂、颗粒或粉末，各自含有至少一种本发明的化合物。在这样的固体剂型中，本发明的化合物通常与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合。口服给药的固体剂型如片剂和胶囊可以用肠溶衣制备。
口服给药的液体剂型包括，例如，药学上可接受的乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂，其含有本领域常用的惰性稀释剂(例如，水)。这样的组合物还可以包含赋形剂，例如润湿剂、乳化剂、悬浮剂、调味剂(例如甜味剂)和/或芳香剂。
本发明的化合物可以肠胃外给药，即直接进入到血流中、肌肉中或内部器官中。
静脉内给药代表了给药本发明的化合物的便利方式。其它适合的肠胃外给药的方法包括动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内和皮下给药。
用于肠胃外给药的合适装置包括针(包括微针)注射器、无针注射器和输注技术。
肠胃外制剂通常是水溶液，其可以含有赋形剂例如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选pH为3-9)，但是对于一些应用，它们可以更适合地配制为无菌非水溶液或干燥形式以便与合适的载体例如无菌无热原水结合使用。
在无菌条件下，例如通过冷冻干燥制备肠胃外制剂，可以使用本领域技术人员众所周知的标准药物技术容易地完成。
用于制备肠胃外溶液的式(I)的化合物及其互变异构体的溶解度可以通过使用适当的制剂技术如掺入增溶剂来增加。
用于口服和肠胃外给药的制剂可以配制成立即和/或改进释放。方便地，本发明的化合物被配制成立即释放的。
改进释放制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控释放、靶向释放和程序化释放。因此，本发明的化合物可以配制成固体、半固体或触变液体，用于以提供活性化合物的改进释放的植入储库形式给药。这种制剂的实例包括药物涂覆的支架和聚(dl-乳酸-共聚-羟基乙酸)(PGLA)微球。
其它给药方式包括局部、吸入/鼻内、直肠/阴道内和眼/耳给药。适于这些给药方式的制剂包括立即释放和/或改进释放。改进释放制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控释放、靶向释放和程序化释放。
本发明的化合物可以与可溶性大分子实体如环糊精及其合适的衍生物或含有聚乙二醇的聚合物组合，以便改善它们的溶解度、溶出速率、掩味、生物利用度和/或稳定性，用于任何上述给药方式。
例如，发现药物-环糊精复合物通常可用于大多数剂型和给药途径。可以使用包合和非包合复合物。作为与药物直接复合的备选方案，环糊精可以用作辅助添加剂，即作为载体、稀释剂或增溶剂。最常用于这些目的是α-、β-和γ-环糊精，包括羟丙基β环糊精和磺基丁基醚β环糊精钠，其实例可见于国际专利申请WO91/11172、WO94/02518和WO98/55148。
对于向人类患者给药，本发明的化合物的总日剂量通常在1mg至10g的范围内，例如60mg至6g，例如100mg至1.5g，或100mg至1.0g，当然取决于给药方式和功效。例如，给药可能需要250mg至1g的总日剂量，例如400mg至800mg。总日剂量可以以单剂量或分剂量给药，并且可以根据医师的判断落在本文给出的典型范围之外。这些剂量基于具有约60kg至70kg的体重的平均人类受试者。医生将能够容易地确定其体重超出该范围的受试者(例如婴儿和老年人)的剂量。
如上所述，本发明的化合物是有用的，因为它们在动物中显示药理学活性，即HbS调节。更特别地，本发明的化合物用于治疗HbS调节剂适应的病症。优选地，动物是哺乳动物，更优选地人。
在本发明的另一方面，提供了用作药物的本发明的化合物。
在本发明的另一方面，提供了用于治疗HbS调节剂适应的病症的本发明的化合物。
在本发明的另一方面，提供本发明的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗HbS调节剂适应的病症。
在本发明的另一方面，提供了治疗HbS调节剂适应的动物(优选地哺乳动物，更优选地人)中的病症的方法，包括向所述动物给药治疗有效量的本发明的化合物。
HbS调节剂适应的病症或状况包括：
* 与组织中的氧缺乏相关的病症或状况，由此Hb脱氧作用的延迟或减少将是有益的，例如：SCD及其变体；和由于低细胞氧水平而对放疗和/或化疗有抗性的癌症；以及
* 会受益于组织氧合作用增加，由此Hb对氧的亲合力增加将有助于当其通过肺时具有氧的Hb的更大饱和(从而允许氧向身体组织的通过增加)，的病症或状况,如：高山病和相关病症(例如高原性肺水肿(HAPE)和高原性脑水肿(HACE))；肺动脉瓣闭锁不全和相关病症(例如慢性阻塞性肺病(COPD)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和哮喘)；伤口愈合(例如溃疡和褥疮)；以及中风(如沉默梗塞)。
特别感兴趣的病症是SCD。
有许多不同的Hb基因型，其又产生SCD的变体(Lancet 2010, 376, 2018-2031)。常见的SCD变体包括镰状细胞贫血(HbS/S)、镰状血红蛋白C疾病(HbS/C)、镰状β-加-地中海贫血(HbS/β+)和镰状β-零-地中海贫血(HbS/β0)。相对罕见到非常罕见的变体包括HbS/OArab、HbS/CHarlem和HbC/S Antilles。SCD的所有这些变体都在本发明的范围内。
在一个实施方案中，SCD变体是HbS/S。在另一个实施方案中，SCD变体是HbS/C。
HbS调节剂可有效地与另一种药理学活性的化合物或与两种或更多种其它的药理学活性的化合物组合。这种组合提供了显著优点的可能性，包括患者依从性、给药的容易性和协同活性。
在这样的组合中，本发明的化合物可以与其它一种或多种治疗剂组合同时(例如以单一剂型，例如胶囊或片剂)、顺序或单独给药。
一种或多种另外的治疗剂可以选自以下任何药剂或药剂类型：
1)提高红细胞(RBC)中有利的血红蛋白(如胎儿血红蛋白、血红蛋白A等)水平的试剂，如：羟基脲；丁酸盐衍生物(例如丁酸钠)；地西他滨(decitabine)；沙利度胺(thalidomide)衍生物(例如泊马度胺(pomalidomide)或来那度胺(lenalidomide))；和lentiglobin(通过自体造血干细胞移植递送的离体基因治疗)；
2)破坏与镰状细胞病变体相关的不利细胞粘附相互作用的试剂，例如：选择蛋白(selectin)抑制剂，包括泛选择蛋白抑制剂(例如rivipansel)、E-选择蛋白抑制剂或P-选择蛋白抑制剂(例如crizanlizumab)；泊洛沙姆(poloxamer)(例如泊洛沙姆188)；和Nix-0999（Nicosan®）；
3)改善镰状RBC的水合作用的试剂，例如：gardos通道阻断剂(例如，senicapoc或克霉唑(clotrimazole))；和镁补充剂(例如吡酮酸镁(magnesium pidolate))；
4)有助于血管舒张的药剂，例如：吸入的一氧化氮；精氨酸；谷氨酸；和PDE5抑制剂(例如西地那非(sildenafil)或他达拉非(tadalafil))；
5) 抗炎剂，例如：磷脂酶A2抑制剂(例如伐瑞拉迪(varespladib))；皮质类固醇(例如甲泼尼龙(methylprednisolone))；和静脉内免疫球蛋白；以及
6)提高cGMP水平的药剂，其导致异型血细胞聚集物形成的减少和炎症状态的减少，如PDE9抑制剂(例如1,5-二氢-6-[(3S,4S)-4-甲基-1-(2-嘧啶基甲基)-3-吡咯烷基]-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮)。
在本发明的范围内，两种或更多种药物组合物，其中至少一种含有本发明的化合物，可以方便地以适于组合物共同给药的试剂盒的形式组合。因此，本发明的试剂盒包括两种或更多种单独的药物组合物，其中至少一种含有本发明的化合物，以及用于单独保存所述组合物的装置，例如容器、分开的瓶或分开的箔包装。这种试剂盒的一个实例是用于包装片剂、胶囊等的常见泡罩包装。本发明的试剂盒特别适合于给药不同的剂型，例如口服和肠胃外的，适合于以不同的剂量间隔给药单独的组合物，或者适合于彼此滴定单独的组合物。为了助于顺从性，试剂盒通常包括给药说明书，并且可以提供有所谓的记忆辅助工具。
另一方面，本发明提供了一种药物产品(例如试剂盒形式)，其包含本发明的化合物以及一种或多种另外的治疗活性剂，作为组合制剂同时、单独或顺序用于治疗HbS调节剂适应的的疾病。
应当理解，本文所有提及的治疗包括治愈性、减轻性和预防性治疗。
在说明本发明的以及在说明书中随后陈述的非限制性实施例和制备例中，以及在前述方案中，以下缩写、定义和分析方法可以是指：
°2θ是度2-θ；
AcCl是乙酰氯；
AcOH是乙酸；
ADH-101是醇脱氢酶101；
APCI是大气压力化学电离；
aq是含水的或水溶液；
BH3Me2S是(二甲硫)三氢化硼；
BINAP是1,1'-联萘-2,2'-二基)双(二苯基膦；
Bn是苄基；
Boc是叔丁氧基羰基；
Boc2O是二碳酸二叔丁酯；
br是宽峰；
tBu是叔丁基；
tBuOH是叔丁醇；
tBuOK是叔丁醇钾；
tBuXPhos是2-二叔丁基膦基-2',4',6'-三异丙基联苯；
tBuXPhos-Pd Gen-3是[(2-二叔丁基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)-2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)甲烷磺酸盐；
°C是摄氏度；
CDCl3是含氘氯仿；
CDI是1,1'-羰二咪唑；
δ是化学位移；
d是双峰；
dd是双二重峰；
ddd是双双二重峰；
dt是双三重峰；
DCE是1,2-二氯乙烷；
DCM是二氯甲烷；甲叉二氯；
DIAD是偶氮二甲酸二异丙酯；
(-)-DIP-Chloride™是(-)-B-二异松蒎基氯硼烷；
DIPEA是N-乙基二异丙基胺，亦称N,N-二异丙基乙胺；
DMA是N,N-二甲基乙酰胺；
DME是1,2-二甲氧基乙烷；
DMAP是4-二甲基氨基吡啶；
DMF是N,N-二甲基甲酰胺；
DMSO是二甲亚砜；
DMSO-d6是含氘的二甲亚砜；
DPPP是1,3-双(二苯基膦基)丙烷；
EDC是N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺；
EDC.HCl是N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐；
ESI是电喷射离子化；
Et2O是二乙醚；
EtOAc是乙酸乙酯；
EtOH是乙醇；
Et3N是三乙胺；
g是克；
HATU是1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐；
HPLC是高压液相色谱法；
HOBt是1-羟基苯并三唑水合物；
hr(s)是小时；
IPA是异丙醇；
iPrOAc是乙酸异丙酯；
Ir[dF(CF3)ppy]2(dtbpy)PF6是[4,4'-双(1,1-二甲基乙基)-2,2'-联吡啶-N1,N1']双[3,5-二氟-2-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基-N]苯基-C]铱(III)六氟磷酸盐；
KRED101是酮还原酶101酶；
L是升；
LCMS是液相色谱质谱；
m是多重峰；
M是摩尔浓度的；
m-CPBA是3-氯过苯甲酸；
MeCN是乙腈；
MeMgBr是溴化甲基镁；
MeNHOMeHCl是N,O-二甲基羟基胺盐酸盐；
MeOD d4是氘化甲醇；
MeOH是甲醇；
2-MeTHF是2-甲基四氢呋喃；
mg是毫克；
MHz是兆赫；
min(s)是分钟；
mL是毫升；
mmol是毫摩尔；
mol是摩尔；
MS(m/z)是质谱峰；
MsCl是甲磺酰氯；
MTBE是叔丁基甲基醚；
NADP+是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸；
NiCl2•glyme是氯化镍(II)乙二醇二甲醚复合物；
NMR是核磁共振；
ODS是十八烷基-二氧化硅；
ORTEP是橡树岭热椭球绘图程序；
Pd(tBu3P)2是双(三叔丁基膦)钯(0)；
Pd/C是钯/碳；
Pd2(dba)3是钯三(二苄叉基丙酮)二钯(0)；
Pd(dppf)Cl2是[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)；
Pd(PPh3)4是四(三苯基膦)钯(0)；
Pet.醚是由脂肪族烃组成并且沸程为35-60°C的石油馏分；
PMB是对甲氧基苄基；
PMB-NH2是对甲氧基苄胺；
Polycat 5 ®是双(2-二甲基氨基乙基)(甲基)胺
PPh3是三苯膦；
pH是氢离子浓度；
ppm是每百万份数；
PSD是位置灵敏探测器；
psi是磅/平方英寸；
PXRD是粉末X射线衍射；
q是四重峰；
rt是室温；
RT是保留时间；
s是单峰；
SEM-Cl是2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯；
SFC是超临界流体色谱法；
t是三重峰；
T3P是丙基膦酸酐；
TBAF是叔丁基氟化铵；
TBDMSCl是叔丁基二甲基甲硅烷基氯；
TFA是三氟乙酸；
THF是四氢呋喃；
TLC是薄层色谱法；
TMEDA是N,N,N’N’-四甲基乙二胺；
TMSCl是三甲基甲硅烷基氯；
TMSCN是氰化三甲基甲硅烷；
TMSCHN2是(二偶氮甲基)三甲基硅烷；
TsCl是对甲苯磺酰氯；
Ts2O是对甲苯磺酸酐；
uL是微升；
umol是微摩尔；和
Xantphos是4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨。
1H核NMR谱在所有情况下都与所提出的结构一致。特征δ是以每百万分之几的形式给出，在自四甲基硅烷的低磁场(对于1H-NMR)，使用常规缩写来表示主峰。如果合适，NMR数据中可记录互变异构体，一些可交换质子可能不是可见的。
使用ESI或APCI记录质谱。相关的和除非另有说明，提供的m/z数据是针对同位素19F、35Cl、79Br和127I的。
在已经使用制备型TLC或硅胶色谱法的情况下，本领域技术人员将理解可以使用任何合适的溶剂或溶剂组合来纯化所需的化合物。
实施例1
5-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺
Figure 181997DEST_PATH_IMAGE024
在20°C向5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基)-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺(制备例161, 222mg, 0.411 mmol)在甲醇(10 mL)中的溶液中添加N2H4.H2O(2.5 mL)。在密封小瓶中在70°C搅拌所得的反应混合物3小时并且然后在DCM(80 mL)和H2O(100 mL)之间分割并且用DCM(3×80 mL)萃取。用H2O(2×60 mL)洗涤有机萃取物，干燥(Na2SO4)，过滤并且在真空中蒸干而得到残余物，该残余物用制备型HPLC(DuraShell；0.225% HCO2H水溶液/MeCN；10-55%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(78.5mg, 46.6%)。LCMS m/z = 410 [M+H]+. 1HNMR (MeOH-d4, 400MHz) δ:1.73 (3H, d), 5.96 (1H, q), 6.71 (1H, t), 7.00 (1H, s), 7.05-7.20 (2H, m),7.41 (1H, d), 7.44 (1H, dd), 7.97 (1H, s), 8.15-8.20 (2H, m), 8.29 (1H, brs)。
实施例2
5-{(1S)-1-[(2-氨基-7-氯-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺
Figure 3322DEST_PATH_IMAGE025
在20°C将N2H4.H2O(2.5 mL)添加到5-[(1S)-1-{[7-氯-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺(制备例162；160mg, 0.279 mmol)在甲醇(10 mL)中的溶液。将样品小瓶密封并且在70°C搅拌3小时。将反应混合物在DCM(80 mL)和H2O(100 mL)之间分割并且进一步用DCM(3×80 mL)萃取。洗涤(H2O, 2×60 mL)有机萃取物，干燥(Na2SO4)并且在真空中蒸干。用制备型HPLC(DuraShell, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN)提纯残余物而得到标题化合物，为白色固体(30.2mg, 收率：24.4%)。LCMS m/z = 444 [M+H]+. 1HNMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.66(3H, d), 5.76 (1H, q), 6.64 (1H, s), 6.70-6.80 (3H, m), 7.27 (1H, d), 7.49(1H, d), 7.53 (1H, d), 7.80 (2H, br s), 7.98 (1H, d), 8.01 (1H, d), 8.41 (1H,d)。
实施例3
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-溴喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺
Figure 211450DEST_PATH_IMAGE026
第1部分
将K2CO3(197mg, 1.43 mmol)添加到3-(1-{[6-溴-2-(叔丁基氨基)喹啉-3-基]氧基}乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(制备例156, 100.0mg, 0.204 mmol)在DMSO(6.0 mL)中的溶液并且搅拌10分钟。向此混合物中添加H2O2(1.00 mL)并且搅拌该反应混合物1小时。将该反应萃取到EtOAc(20 mL)中，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并且在真空中蒸干。用硅胶色谱法(石油醚:EtOAc=1:0至0:1)提纯残余物而得到白色固体，其在接下来的步骤中在没有进一步提纯的情况下被使用。
第2部分
向第1部分(上文)的化合物在DCE(2 mL)中的溶液中添加TFA(0.5 mL)并且在70°C搅拌该反应混合物16.0小时。该反应混合物用DCM(20 mL)稀释并且用NaHCO3(含水，10 mL)淬灭。将合并的有机萃取物洗涤(盐水，20 mL)，干燥(Na2SO4)并且在真空中蒸干。用硅胶色谱法提纯残余物而得到黄色固体，其被进一步使用SFC(Chiralpak AS-H, 0.1% NH4OH/EtOH, 40%)来提纯而得到标题化合物(峰2)，为淡黄色固体(20.7mg, 17%)。LCMS m/z =410 [M+H]+. 1HNMR (CDCl3, 400MHz) δ: 1.68 (3H, d), 5.25 (2H, br s), 6.24 (1H,t), 6.90 (1H, s), 7.37-7.50 (4H, m), 7.7507.85 (2H, m), 7.89 (1H, s), 8.06(1H, d)。
实施例4
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
Figure 728013DEST_PATH_IMAGE027
将2M NaOH(53.3 mL, 107 mmol)添加到3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例145, 4400 mg, 8.201 mmol)在MeOH(100 mL)和THF(50 mL)中的溶液并且在25°C搅拌该混合物20小时。添加N2H2.H2O(20.0 mL)并且在40°C搅拌该混合物60小时。在真空中蒸发该反应混合物并且所得的含水混合物用3N HCl(pH=5-6)酸化。通过过滤收集所得的沉淀物并且用MeOH(2×20 mL)洗涤该滤饼并且在真空下干燥而得到固体(2.6g)，将其通过进一步沉淀来提纯。在15°C在MeOH/DCM/H2O(60 mL, 1:1:1)的混合物中搅拌该固体3小时。通过过滤除去该固体并且在真空下干燥而得到浅黄色固体(2.3 g)，将其溶于温DMSO(20 mL)中而得到澄清溶液。添加MeOH(30_mL)并且在15ºC搅拌该混合物2小时。通过过滤除去所得的固体并且干燥该滤饼得到标题化合物，为白色固体(1870 mg, 58%)。LCMS m/z = 393 [M+H]+. 1HNMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.67 (3H, d), 5.76 (1H, q), 6.49-6.65 (3H, m), 6.67-6.75 (1H, m), 7.02 (1H, dd), 7.15 (1H, dt), 7.37 (1H, dd), 7.58 (1H, d),7.92-8.02 (2H, m), 8.25 (1H, d), 8.42 (1H, d)。
实施例4a
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸钾
Figure 414209DEST_PATH_IMAGE028
将1M NaOH溶液(2.3 mL, 2.3 mmol)添加到3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例145, 120 mg, 0.224 mmol)在MeOH(3 mL)中的溶液并且在70°C搅拌该反应40小时。将被冷却的反应在真空中浓缩并且残余物用MeCN(2 mL)稀释和使用1N HCl酸化至pH=3-4。通过过滤收集所得的沉淀物，用50%MeCN/H2O(6 mL)、MeOH(2 mL)清洗，并且在真空烘箱中干燥而得到白色固体，96毫克。将该固体与根据上述方法制备的另外批次的产物(194 mg, 总计,0.49 mmol)合并，悬浮在IPA(5 mL)中，添加1M KOH(0.5 mL, 0.5 mmol)，并且搅拌该混合物4小时。混合物在真空中浓缩，与庚烷(3×30 mL)一起共沸，并且干燥所得的固体而得到标题化合物，为白色固体，207毫克。LCMS m/z = 393 [M+H]+。
实施例5
5-[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]-1,3,4-噁二唑-2(3H)-酮
Figure 90041DEST_PATH_IMAGE029
将CDI(108 mg, 0.664 mmol)添加到3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰肼(制备例163，90 mg, 0.22 mmol)，Et3N(0.5 mL, 4mmol)在THF(3 mL)中的溶液并且在室温搅拌1小时。蒸干反应混合物并且使用柱色谱法(12g硅胶，MeOH:DCM=0-5%)提纯而得到残余物，将其通过制备型HPLC(Boston Green ODS，0.05%HCl水溶液)/MeCN，5-95%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(62 mg, 65%)。LCMSm/z = 433 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.72 (3H, d), 5.90 (1H, q),6.66-6.74 (1H, m), 7.12 (1H, s), 7.35 (1H, dd), 7.44 (1H, dt), 7.59-7.72 (2H,m), 7.87 (1H, dd), 7.99 (1H, d), 8.15 (1H, d), 8.41 (1H, d), 8.74 (2H, br s),12.76 (1H, s)。
实施例6
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
Figure 796966DEST_PATH_IMAGE030
在15°C向3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(实施例4, 400 mg, 1.02 mmol)在DMSO(10 mL)中的溶液中滴加TMSCHN2(2.04 mL,2M，在己烷中)并且然后在15°C搅拌90分钟。反应用H2O(20 mL)淬灭并且用EtOAc(2×20mL)萃取。将合并的有机萃取物用H2O(30 mL)、盐水(30 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并且在真空中蒸干。用柱色谱法(12g硅胶, EtOAc:石油醚=10-100%)提纯残余物而得到残余物，将其通过制备型HPLC(Agela Durashell C18, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN, 53-73%)进一步提纯而得到标题化合物，为白色固体(35mg, 8.4%)。LCMS m/z = 407 [M+H]+. 1H NMR (CHCl3-d1,400MHz) δ: 1.72 (3H, br d), 3.92 (3H, s), 5.17 (2H, br s), 5.97 (1H, q), 6.63(1H, br s), 6.82 (1H, s), 6.89-7.03 (1H, m), 7.06-7.17 (1H, m), 7.42 (1H, d),7.51 (1H, br dd), 7.74-7.94 (2H, m), 8.05 (1H, br d), 8.30 (1H, s)。
实施例7
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯磺酰胺
Figure 987776DEST_PATH_IMAGE031
在室温搅拌3-[1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-N,N-双(4-甲氧基苄基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯磺酰胺(制备例153, 53 mg,0.066 mmol)、苯甲醚(25.1 mg, 0.232)和TFA(1 mL)的混合物18小时。在真空中蒸干反应混合物并且在7M NH3/MeOH(15 mL)中在室温搅拌18小时。在真空中浓缩反应混合物并且通过柱色谱法(10% MeOH/DCM)提纯残余物。进一步通过手性SFC(Chiral Technologies OD-H, 0.2% NH4OH/MeOH, 17%)提纯残余物而得到标题化合物。LCMS m/z = 428 [M+H]+。
实施例8
[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酸
Figure 415346DEST_PATH_IMAGE032
将2M NaOH(53.3 mL, 107 mmol)添加到{3-[1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}乙酸甲酯(制备例146, 186.0 mg, 0.338 mmol)在MeOH和THF中的溶液。在44°C搅拌该反应混合物20小时并且然后加热到70°C持续2天。混合物在真空中浓缩并且将残余物溶于H2O/MeOH(3mL)并且用1M HCl酸化至pH 3。通过过滤收集所得的白色固体并且用1:1MeCN:H2O和H2O(各1mL)洗涤该滤饼。进一步使用SFC色谱法(Lux Amylose, 0.2% NH4OH/MeOH；20%)提纯该固体而得到玻璃状标题化合物(峰1)(22.6mg, 16.5%)。LCMS m/z = 407 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6,400MHz) δ: 1.65 (3H, d), 3.65 (2H, s), 5.55 (1H, q), 6.60-6.85 (4H, m), 7.20-7.48 (5H, m), 7.55-7.78 (3H, m), 7.90 (1H, s), 8.30 (1H, s)。
实施例9
5-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
Figure 742422DEST_PATH_IMAGE033
将2M NaOH(2.48 mL, 4.97 mmol)添加到5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例149, 551 mg, 0.994 mmol)在MeOH(2 mL)和THF(6 mL)中的溶液并且在27°C搅拌16小时。添加水合肼(2.90 mL, 59.6 mmol)并且在40°C加热溶液5小时。添加另外的水合肼(2.0 mL, 41 mmol)并且进一步继续加热18小时。在真空中浓缩反应混合物并且使用4MHCl将残余物酸化至约pH 6而得到沉淀物，将其溶于DMSO(0.5mL，包含1-2滴的NH4OH水溶液)并且通过HPLC(DuraShell, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN, 19%-39%)提纯。获得标题化合物，为白色固体(240 mg, 59%)。LCMS m/z = 411 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ:1.66 (3H, d), 5.82 (1H, q), 6.57 (3H, d), 6.71-6.74 (1H, m), 7.02 (1H, dd),7.15 (1H, dt), 7.38 (1H, dd), 7.53 (1H, d), 7.99 (1H, d), 8.15 (1H, d), 8.45(1H, d)。
实施例10
N-[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰基]甘氨酸
Figure 102472DEST_PATH_IMAGE034
将T3P(53 mg, 0.084mmol, 0.050 mL)添加到3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸钾(实施例4a, 30 mg, 0.070 mmol)、甘氨酸甲酯.HCl(11 mg, 0.088 mmol)和DIPEA(36.0 mg, 0.279 mmol)在DMF(0.5 mL)中的混合物，并且在室温搅拌该混合物过夜。添加另外的甘氨酸甲酯.HCl(6 mg, 0.044 mmol)和DIPEA(18.0 mg, 0.14 mmol)并且继续搅拌18小时。在真空中蒸干反应混合物。将残余物再溶于MeOH(1 mL)和NaOH水溶液(10 mg, 0.4mmol, 0.350 mL, 1M)并且在室温搅拌所得的溶液。将该反应混合物酸化至pH 2-3并且在真空中蒸干而得到残余物，将其通过HPLC(WatersAtlantis dC18, 0.05%TFA/H2O/0.05%TFA/MeCN, 95/5至5/95)提纯而得到标题化合物(26mg, 76%)，为TFA盐。LCMS m/z = 450 [M+H]+。
实施例11
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(2-甲氧基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺
Figure 983840DEST_PATH_IMAGE035
将T3P(53.2 mg, 0.0836 mmol)添加到3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸钾(实施例4a, 20 mg, 0.046 mmol)、2-甲氧基乙胺(6.98 mg, 0.0929 mmol)和DIPEA(36.0 mg, 0.279 mmol)在DMF(0.5 mL)中的混合物，并且在室温搅拌该混合物18小时。该反应混合物用饱和NaHCO3水溶液(3 mL)和DCM(10 mL)稀释并且在室温搅拌10分钟。收集有机萃取物并且在真空中蒸干并且将残余物通过HPLC(Waters Atlantis dC18, 0.05%TFA/H2O/0.05%TFA/MeCN, 95/5至5/95)提纯而得到标题化合物(13.8 mg, 66%)，为TFA盐。LCMS m/z = 450 [M+H]+。
实施例12-14
使用适当的胺根据以上对于实施例11所述的方法制备下表中的实施例12-14。
实施例 名称，结构 数据
12 3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(2-羟基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺，为TFA盐
Figure 277418DEST_PATH_IMAGE036
 8.4 mg, 33% LCMS m/z= 436 [M+H]<sup>+</sup>
13 3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(3-羟基丙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺，为TFA盐
Figure 786897DEST_PATH_IMAGE037
 13.1 mg, 51% LCMS m/z = 450 [M+H]<sup>+</sup>
14 3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(反-3-羟基环丁基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺，为TFA盐
Figure 242149DEST_PATH_IMAGE038
 15.7 mg, 59% LCMS m/z = 462 [M+H]<sup>+</sup>。
实施例15
[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基]乙酸
Figure 345234DEST_PATH_IMAGE039
在20°C搅拌{3-[(1S)-1-({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基}乙酸叔丁酯(制备例154, 260 mg, 0.394 mmol)在TFA(2mL)中的溶液1小时。在真空中蒸干反应混合物，残余物溶于MeCN(3 mL)，用NH4OH(约1 mL)洗涤并且通过制备型HPLC(Agela Durashell C18, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN, 11-51%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(71 mg, 43%)。
LCMS m/z = 423 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.62 (3H, d), 4.66(2H, s), 5.42 (1H, q), 6.52 (2H, s), 6.63 (1H, t), 6.78 (1H, s), 6.92 (1H,dd), 7.09 (1H, dd), 7.16 (1H, dt), 7.27 (1H, d), 7.33 (1H, d), 7.39 (1H, dd),7.89 (1H, d), 8.21 (1H, d)。
实施例16
3-[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]丙酸
Figure 255553DEST_PATH_IMAGE040
向3-{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}丙酸叔丁酯(制备例147, 113 mg, 0.186 mmol)在MeOH(4 mL)和THF(2 mL)中的溶液中添加1M NaOH(7 mL)并且在室温搅拌该混合物64小时。加热该反应混合物至70°C达8小时。在真空中除去溶剂并且用1M HCl将浆液酸化至pH3。固体通过过滤收集并且进一步通过HPLC(Waters Atlantis dC18, 0.05%TFA/H2O/0.05%TFA/MeCN, 95/5-5/95)提纯而得到标题化合物(10 mg, 13%)。
LCMS m/z = 421 [M+H]+。
实施例17
3-[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮
Figure 822800DEST_PATH_IMAGE041
第1部分
向(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(N-羟基甲脒基)-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例164, 146 mg, 0.288 mmol)在1,4-二氧杂环己烷(4 mL)中的溶液中添加CDI(93.5 mg, 0.576 mmol)。加热该混合物至100°C达16小时。反应用H2O(5mL)淬灭并且用EtOAc(3×15 mL)萃取。合并的有机萃取物用H2O(5 mL)、盐水(5 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并且在真空中蒸干而得到粗制的(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯，为棕色油，其在没有进一步提纯的情况下使用。
第2部分
将TFA(1 mL)添加到来自第1部分的(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯在DCM(2mL)中的棕色溶液并且在室温(24°C)搅拌该反应混合物1小时。在真空中蒸干反应混合物，溶于MeOH(2.5 mL)和NH4OH(0.5 mL)，过滤，并且通过制备型HPLC(DuraShell, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN, 21-41%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(19.4 mg, 14%)。
LCMS m/z = 433 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.68 (3H, d), 5.80(1H, q), 6.52 (2H, br s), 6.66-6.78 (2H, m), 7.07 (1H, dd), 7.16 (1H, dt),7.39 (1H, dd), 7.68 (1H, d), 7.85 (1H, dd), 7.98 (1H, d), 8.21 (1H, d), 8.41(1H, d), 8.88 (1H, s)。
实施例18
N-[3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]甲烷磺酰胺
Figure 386637DEST_PATH_IMAGE042
第1部分
在0°C将Et3N(17.4 mg, 0.172 mmol)添加到2-(3-{(1S)-1-[5-氨基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例160, 50 mg,0.086 mmol)在无水DCM(3 mL)中的溶液。在0°C搅拌该反应混合物10分钟，然后添加甲烷磺酰氯(19.7 mg, 0.172 mmol)。在0°C搅拌该反应混合物2小时并且然后在30°C搅拌该反应混合物18小时。将该反应混合物冷却到0°C并且添加Et3N(17.4 mg, 0.172 mmol)、随后MsCl(19.7 mg, 0.172 mmol)并且在30°C搅拌该混合物16小时。将该反应混合物冷却到0°C并且添加另外部分的Et3N(17.4 mg, 0.172 mmol)、随后MsCl(19.7 mg, 0.172 mmol)并且在30°C搅拌该混合物2小时。该反应混合物用DCM(20 mL)稀释，用H2O(2 mL)、盐水(2 mL)洗涤，并且干燥(Na2SO4)。在降低的压力下蒸干有机萃取物而得到N-{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}甲烷磺酰胺，其在以下步骤中在没有进一步的提纯的情况下使用。
第2部分
在30°C向来自第1部分的N-{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}甲烷磺酰胺在无水的MeOH(5mL)中的溶液中添加NH2NH2.H2O(2.52 mg, 0.0427 mmol)并且在30°C搅拌该混合物10分钟。在降低的压力下蒸干反应混合物并且残余物用DCM(10 mL)稀释。通过过滤除去所得的固体并且用DCM(2×5 mL)洗涤该滤饼。将合并的有机萃取物用H2O(2 mL)、盐水(2 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并且在真空中蒸干。所得的残余物通过制备型HPLC(DuraShell, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN，28%-58%)提纯而得到白色固体，其进一步通过SFC(Chiralcel OJ, 0.1%NH4OH/EtOH, 30%)提纯。获得标题化合物，为浅红色固体(5 mg, 27%)。
LCMS m/z = 442 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.68 (3H, d), 2.82-2.88 (3H, m), 5.62 (1H, q), 6.66 (1H, t), 7.02 (1H, s), 7.11-7.17 (2H, m),7.27-7.32 (1H, m), 7.40 (1H, d), 7.46 (1H, dd), 7.52 (1H, d), 7.90 (1H, d),8.02 (1H, d)。
实施例19
3-{(1S)-1-[(2-氨基-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
Figure 367231DEST_PATH_IMAGE043
在65°C搅拌3-[(1S)-1-({5,8-二氟-2-[(4-甲氧基苄基)氨基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例157，240 mg, 0.441 mmol)在TFA(5 mL)中的溶液16小时。在真空中蒸干反应混合物并且用MeOH共蒸发而得到3-{(1S)-1-[(2-氨基-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯，为黄色胶，将该胶溶于MeOH(4 mL)，用NaOH水溶液(2M，3.3 mL, 6.61 mmol)处理并且在30°C搅拌1.5小时。用4M HCl中和该反应混合物至pH=6-7并且在真空中蒸干。使用制备型SFC色谱法(Chiralcel OJ, 0.1%NH4OH/EtOH, 25%)提纯残余物而得到标题化合物，为白色固体(152 mg, 84%)。
LCMS m/z = 411 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ = 1.67 (3H, d), 5.86(1H, q), 6.67 (1H, t), 6.74-6.88 (2H, m), 6.99-7.17 (3H, m), 7.53 (1H, d),7.89-7.99 (2H, m), 8.19-8.29 (2H, m)。
实施例20
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
Figure 2612DEST_PATH_IMAGE044
在-0.6°C，将对甲苯磺酰氯(18000 mg, 94.414 mmol)/二氯甲烷(100 mL)添加到3-{(1S)-1-[(6,8-二氟-1-氧化(oxido)喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例159, 20000 mg, 47.016 mmol)、六氟磷酸铵(31000 mg, 190.18 mmol)和DIPEA(37000 mg, 290mmol, 50 mL)在DCM(500 mL)中的悬浮液。在添加期间，内部温度是将混合物维持在低于1.5°C，并且然后在4小时内在0°C至室温搅拌该混合物。然后在室温搅拌混合物16小时。在室温添加进一步的六氟磷酸铵(3100 mg, 19.0 mmol)，和对甲苯磺酰氯(1800 mg, 9.4 mmol)/DCM(30 mL)，并且在室温搅拌该混合物2小时。在真空中浓缩反应混合物，在甲苯(400 mL)和2M碳酸钠(100 mL)之间分割残余物，并且用甲苯(100 mL)萃取水层。合并的有机萃取物用10%柠檬酸(100 mL)、盐水(100 mL)洗涤，干燥(MgSO4)并且在真空中蒸干。用Et2O(50 mL)研磨残余物并且通过过滤收集所得的固体。用Et2O(15 mL)洗涤滤饼并且在高真空下干燥而得到标题化合物，为浅黄色固体(12257 mg, 61%)。
LCMS m/z = 425 [M+H]+. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ = 1.68 (3H, d), 3.90(3H, s), 5.52 (2H, br s), 5.98 (1H, q), 6.60 (1H, s), 6.78-6.94 (3H, m), 7.40(1H, d), 7.80 (1H, s), 7.88 (1H, s), 8.04 (1H, d), 8.30 (1H, s)。
实施例21
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
Figure 96470DEST_PATH_IMAGE045
在室温将NaOH水溶液(4400 mg, 110mmol, 55 mL, 2.0M)添加到3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(实施例20, 11770mg, 27.733 mmol)在THF(200 mL)中的溶液并且在室温搅拌所得的混合物16小时。在真空中浓缩反应混合物而除去有机溶剂并且用MTBE(100 mL)萃取水层。使用2N HCl(42 mL)，将水层酸化至pH 3。通过过滤除去所得的悬浮液并且用H2O(100 mL)洗涤该固体。在氮气下过滤固体，然后在45°C用H2O(200 mL)打浆16小时。通过过滤收集固体，在真空中在60°C干燥滤饼16小时而得到标题化合物(10627 mg, 93%)。
LCMS m/z = 411 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.68 (3H, d), 5.78(1H, q), 6.64-6.92 (5H, m), 7.16 (1H, t), 7.58 (1H, d), 7.90-8.00 (2H, m),8.24 (1H, s), 8.40 (1H, s), 13.28 (1H, s)。
实施例21a
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸三(羟基甲基)氨基甲烷盐
Figure 159104DEST_PATH_IMAGE046
第1部分
向小瓶中添加3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(27.1 mg)和THF(0.500 mL)。将混合物加热至60°C，于是混合物变均匀。将三(羟基甲基)氨基甲烷的水溶液(26.76uL, 1.03当量)添加到混合物。使用搅拌，以-0.05°C/分钟的速度，将混合物冷却到21°C。使用N2从混合物中除去其溶剂，在真空中干燥残余物大约10分钟。将二氧杂环己烷(0.400 mL)添加到残余物。使用搅拌，将混合物加热至70°C并且然后以-0.1°C/分钟的速度冷却至21°C。在二氧杂环己烷中搅拌过夜后，混合物非常富含固体。使用离心过滤收集固体并且将其干燥。通过在开口锅中加热固体，形成晶种晶体。以10°C/分钟的速度将材料加热至150°C并且保持等温5分钟，然后通过偏光显微术分析。晶体颗粒是双折射的，具有消光，并且用于如下所述的第2部分。
第2部分
在30 mL 小瓶中混合3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(0.50g, 1.22 mmol)、9.1 mL 乙腈和0.32 mL 水。在60°C加热混合物约5分钟而得到灰白色/淡黄色悬浮液。将三(羟基甲基)氨基甲烷(0.15g, 1.26 mmol)溶于0.58 mL 水，将所得的水溶液添加到3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸的悬浮液。混合物变澄清。在60°C加热混合物约3分钟，然后添加5.3 mg 的来自第1部分的3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸三(羟基甲基)氨基甲烷盐的晶种晶体。冷却混合物并且在室温搅拌。在16小时后，过滤混合物，用乙腈(3x约1 mL)洗涤固体并且然后在真空中干燥而得到499 mg (77%)的标题化合物，为白色固体。1H NMR (D2O, 400MHz) δ: 1.69 (3H, d), 3.68(6H, s), 5.17 (q, 1H), 6.18 (1H, s), 6.53-6.49 (1H, m), 6.62 (1H, t), 6.72(1H, ddd), 7.36 (1H, d), 7.83 (1H, dd), 7.88-7.86 (2H, m), 8.10 (1H, d)。
实施例22
3-{(1S)-1-[(2-氨基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
Figure 846568DEST_PATH_IMAGE047
在10°C，向3-[(1R)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例28，45mg, 0.18 mmol)，(3-羟基-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例141，50 mg,0.18 mmol)和PPh3(144 mg, 0.548 mmol)在无水THF(0.5 mL)中的溶液中滴加DIAD(111mg, 0.548 mmol)。在25°C搅拌所得的混合物3小时并且然后添加NaOH水溶液(21.9 mgNaOH/0.5 mL H2O，0.548 mmol)。在25°C搅拌该反应混合物16小时。在真空中蒸干反应混合物。将残余物溶于DCM(0.5 mL)并且在25°C添加TFA(0.5 mL)并且在25°C搅拌所得的混合物2小时。在真空中蒸干反应混合物并且通过制备型HPLC(DuraShell, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN，11%-31%)提纯残余物而得到标题化合物，为白色固体(19 mg, 27%)。
LCMS m/z = 390 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.65 (3H, d), 2.43(3H, s), 5.81 (1H, q), 6.68 (1H, s), 6.70-6.74 (1H, m), 7.05 (1H, s), 7.12(2H, br s), 7.57 (1H, d), 7.93-8.01 (2H, m), 8.26 (1H, d), 8.35-8.43 (2H, m).
实施例23
5-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
Figure 285640DEST_PATH_IMAGE048
将2M NaOH(0.33 mL, 0.66mmol, 5.0当量)添加到5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例150，75.8 mg, 0.132 mmol)在THF(1.5 mL)和MeOH(0.3 mL)中的溶液并且在26°C搅拌该溶液3小时。添加N2H4.H2O(0.4 mL, 8mmol, 60当量)并且在27°C搅拌该反应混合物6小时。然后添加另外的N2H4.H2O(0.5 mL, 10mmol, 80当量)并且将该反应混合物加热至40°C持续1.5小时，然后在27°C搅拌16小时。在真空中除去溶剂并且用4M HCl酸化水溶液至pH 7并且然后通过制备型HPLC(DuraShell, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN，20%-40%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(20 mg, 37%)。
LCMS m/z = 429 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.65 (3H, d), 5.80(1H, q), 6.64 (1H, s), 6.69-6.73 (1H, m), 6.83 (2H, br s), 6.90 (1H, dd),7.17 (1H, dt), 7.48 (1H, d), 7.97 (1H, d), 8.11 (1H, d), 8.42 (1H, d)。
实施例24
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(甲基磺酰基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺
Figure 499583DEST_PATH_IMAGE049
将DIPEA(87.9 mg, 0.12 mL, 0.680 mmol)添加到3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(实施例21，42.3 mg, 0.103 mmol)，甲烷磺酰胺(23.4 mg, 0.246 mmol)和HATU(46.1 mg, 0.121 mmol)在DMF(1 mL)中的溶液。在室温搅拌该反应混合物过夜。添加另外的甲烷磺酰胺(26.5 mg)和HATU(33 mg)并且在室温搅拌该混合物24小时。使用强力的N2流除去溶剂并且通过HPLC(Waters AtlantisdC18, 0.05%TFA/H2O/0.05%TFA/MeCN，95/5至5/95)提纯残余物而得到标题化合物(26.4mg, 52%)。
LCMS m/z = 488 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.66 (3H, d), 3.32(2H, br s), 3.38 (3H, s), 5.82 (1H, q), 6.64-7.20 (6H, m), 7.60 (1H, d), 7.92(1H, s), 8.00 (1H, d), 8.30 (1H, s), 8.40 (1H, s)。
实施例25
6-溴-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 733119DEST_PATH_IMAGE050
将6-溴-N-叔丁基-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(制备例186，180.0 mg, 0.372 mmol)在苯甲醚(40.2 mg, 0.372 mmol, 0.0404 mL)和TFA(2.2 mL)中的溶液加热至70°C持续3小时。蒸发该溶液而得到油，将其在H2O(5 mL)和DCM(20 mL)之间分割并且用50%NaOH水溶液(4 mL)调节pH至10。水层用DCM(4×20 mL)萃取，在真空中蒸干并且使用1至5%MeOH/DCM通过色谱法提纯而得到固体，将其进一步通过手性SFC(Lux-Amylose-1, 0.2% NH4OH/MeOH, 20%)提纯而得到标题化合物，为固体(60 mg, 38%)。
LCMS m/z = 428 [M+H]+. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ: 1.78 (3H, d), 5.51(2H, s), 5.83-5.94 (1H, m), 6.58 (1H, t), 6.69 (1H, s), 7.39 (2H, s), 7.41(1H, d), 7.44 (1h, s), 7.67 (1H, d), 7.84-7.89 (1H, m), 8.56 (1H, d)。
实施例26
2-氨基-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲腈
Figure 422726DEST_PATH_IMAGE051
按照实施例25的程序并且使用2-(叔丁基氨基)-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲腈(制备例190)，制备标题化合物，为固体(46 mg, 23%)。
LCMS m/z = 375 [M+H]+. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ: 1.79 (3H, d), 5.79(2H, br s), 5.95 (1H, q), 6.59-6.66 (1H, m), 6.79 (1H, s), 7.43-7.47 (1H, m),7.49-7.53 (2H, m), 7.65 (1H, s), 7.72 (1H, d), 7.90 (1H, d), 8.56 (1H, d)。
实施例27
2-氨基-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 337592DEST_PATH_IMAGE052
将2-(叔丁基氨基)-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲腈(制备例190, 207 mg, 0.481 mmol)在DMSO(10 mL)中的溶液冷却到0°C，添加K2CO3(225 mg, 1.44 mmol)和H2O2(81.8 mg, 0.721 mmol, 0.0737 mL)，并且在0°C搅拌该混合物4小时。反应用饱和Na2S2O3水溶液和饱和NaHCO3水溶液淬灭并且用DCM(3x)萃取。将合并的有机萃取物用H2O(3x)洗涤，干燥(Na2SO4)并且在真空中浓缩。将苯甲醚(52.0 mg,0.481 mmol, 52.0 uL)添加到粗制的混合物并且用TFA(20 mL)溶解并且混合物在70°C加热过夜。混合物在真空中浓缩并且用H2O和饱和NaHCO3水溶液淬灭并且用DCM(4×)萃取。合并的有机萃取物被干燥(Na2SO4)并且在真空中蒸干。通过硅胶色谱提纯残余物(100%至80%DCM/MeOH)而得到白色固体，将其进一步通过手性SFC(Chiral Tech AS-H, 0.2%异丙醇胺/IPA, 20%)提纯而得到标题化合物(9.4mg)。
LCMS m/z = 393 [M+H]+. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ: 1.63 (3H, d), 5.39(2H, br s), 5.74 (1H, q), 6.57 (1H, t), 7.07 (1H, dt), 7.10 (1H, ss), 7.23-7.27 (1H, m), 7.33 (1H, dd), 7.58 (1H, d), 7.70-7.76 (2H, m), 7.84 (1H, d),7.97 (1H, d)。
实施例28
6-溴-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 468359DEST_PATH_IMAGE053
通过6-溴-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(制备例191)的手性SFC分离(Chiralcel AD, 0.1% NH4OH/EtOH)，获得标题化合物，为淡白色固体(42.2mg, 44.5%收率)。
LCMS m/z = 410 [M+H]+. 1H NMR (MeOH-d4, 400MHz) δ: 1.79 (3H, d), 5.98(1H, q), 6.70 (1H, t), 7.11 (1H, s), 7.44 (1H, d), 7.54-7.60 (2H, m), 7.65(1H, d), 7.94-7.96 (2H, m), 8.11 (1H, d), 8.73 (1H, d)。
实施例29
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 685845DEST_PATH_IMAGE054
在N2下，向1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(制备例46, 267 mg, 1.41mmol)在无水THF(4 mL)中的溶液中添加2-氨基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇(制备例140, 150mg, 0.706 mmol)和PPh3(428 mg, 2.12 mmol)。在20°C搅拌该混合物，在N2下滴加DIAD(555mg, 2.12 mmol)，并且然后在20°C搅拌24小时。在真空中蒸干溶剂并且残余物部分通过柱色谱法(石油醚:EtOAc 100:0至0:100)提纯而得到黄色固体，将其进一步通过制备型HPLC(DuraShell, 0.225%HCO2H水溶液/MeCN, 38%-58%)提纯而得到固体。固体更进一步通过手性SFC(Chiralcel-AD, 0.1%NH4OH/MeOH, 50%)提纯而得到标题化合物，为固体(16.5 mg,38%)。
LCMS m/z = 384 [M+H]+. 1H NMR (MeOH-d4, 400MHz) δ: 1.79 (3H, d), 5.88(1H, q), 6.70 (1H, t), 6.88 (1H, s), 7.20 (1H, d), 7.50 (1H, d), 7.55-7.59(1H, m), 7.92-7.95 (2H, m), 8.10 (1H, d), 8.72 (1H, q)。
实施例30
2-氨基-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 534853DEST_PATH_IMAGE055
向2-氨基-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲腈(制备例192，270 mg, 0.758 mmol)在二甲亚砜(4 mL)中的溶液中添加碳酸钾(209.0 mg, 1.52mmol)。将混合物冷却到10°C并且滴加H2O2(30%在H2O中的溶液，0.380 mL, 3.79 mmol)，同时保持混合物的内部温度低于40°C。在完成添加后，在40°C搅拌该反应混合物30分钟。反应用饱和Na2SO3水溶液和H2O(50 mL)淬灭。通过过滤收集固体并且用H2O(2×10 mL)洗涤该滤饼。通过硅胶色谱法(DCM:MeOH；100:0至85:15)提纯固体而得到黄色固体(220.0 mg,77.6%)。进一步通过手性SFC(Chiralcel OD-H，0.1% NH4OH/EtOH, 40%)提纯固体而得到标题化合物，为白色固体(101.0 mg, 46%)。
LCMS m/z = 375 [M+H]+. 1H NMR (MeOH-d4, 400MHz) δ: 1.81 (3H, d), 5.90(1H, q), 6.72 (1H, t), 6.97 (1H, s), 7.47 (1H, d), 7.52-7.60 (1H, m), 7.81(1H, d), 7.90-7.97 (3H, m), 8.12 (1H, d)。
实施例31
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 987831DEST_PATH_IMAGE056
在70°C搅拌甲烷磺酸1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯(制备例58，200mg，0.701 mmol)，2-氨基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇(制备例140，149 mg, 0.701 mmol)和Cs2CO3(685 mg, 2.10 mmol)在MeCN(10 mL)中的溶液16小时。在真空中蒸干反应混合物并且通过硅胶色谱法(石油醚:EtOAc=100:0至50:50)提纯残余物而得到灰白色固体。进一步通过手性SFC(Chiralpak AD-H，0.1% NH4OH/EtOH, 45%)提纯固体而得到标题化合物，为灰白色固体(23.2 mg, 24%)。
LCMS m/z = 402 [M+H]+. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ: 1.81 (3H, d), 5.21(2H, br s), 5.92 (1H, q), 6.63 (1H, s), 6.73 (1H, s), 7.07 (1H, d), 7.47 (1H,dd), 7.60 (1H, d), 7.91 (1H, s), 8.60 (1H, d)。
实施例32
6-{(1S)-1-[(2-氨基-7-氯-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酰胺
Figure 566580DEST_PATH_IMAGE057
按照实施例31的程序，由甲烷磺酸1-[6-氨基甲酰基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯(制备例60，350mg，1.13mmol)和2-氨基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇(制备例140，264mg,1.24mmol)，使用制备型SFC(Chiralcel AD, 0.1% NH4OH/EtOH，40%)，制备标题化合物，为白色固体(40 mg)。
LCMS m/z = 427 [M+H]+。1H NMR (MeOH-d4, 400MHz) δ: 1.82 (3H, d), 6.19(1H, q), 6.69 (1H, t), 6.96 (1H, s), 7.21 (1H, d), 7.49 (1H, d), 7.94 (1H,s), 8.03 (1H, d), 8.12 (1H, d), 8.18 (1H, d)。
实施例33
6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 141917DEST_PATH_IMAGE058
在室温(约24°C)搅拌(6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例167，250 mg, 0.535 mmol)在TFA/DCM(3mL/3ml)中的溶液0.5小时。在真空中蒸干该反应混合物并且通过制备型HPLC(Agela DurashellC18，0.05% NH4OH水溶液/MeCN，29%-69%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(120 mg,61%)。
LCMS m/z = 368 [M+H]+. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ: 1.80 (3H, d), 4.92-5.29 (2H, m), 5.89 (1H, q), 6.60 (1H, t), 6.71 (1H, s), 6.97 (1H, dd), 7.12(1H, dt), 7.44 (1H, dd), 7.50 (1H, dd), 7.68 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.58 (1H,d)。
实施例34
2-氨基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 415904DEST_PATH_IMAGE059
在20°C搅拌2-氨基-7-氟-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸(制备例195，111 mg, 0.27 mmol)，HOBt(72.9mg, 0.540 mmol)，EDCl(103 mg,0.540 mmol)和Et3N(81.9mg, 0.810 mmol)在DMF(3 mL)中的混合物0.5小时。添加NH4Cl(43.3 mg, 0.810 mmol)并且在N2下，在20°C搅拌该混合物15小时。在真空中蒸干反应混合物而得到残余物，将其通过HPLC(Agela DuraShell，0.05%NH4OH水溶液)/MeCN，20-50%)提纯而得到30 mg 的白色固体。将此与通过遵循上述程序，从45 mg (0.11 mmol)的前体酸开始获得的产物(20mg)合并。通过手性SFC提纯合并的固体而得到标题化合物，为白色固体(17.9 mg, 36%)。
LCMS m/z = 411 [M+H]+. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ: 1.79 (3H, d), 5.45(2H, br s), 5.72 (1H, br s), 5.95 (1H, q), 6.63 (1H, t), 6.75 (1H, br d),6.84 (1H, s), 7.22 (1H, d), 7.43 (1H, d), 7.71 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.16(1H, d), 8.56 (1H, d)。
实施例35
2-氨基-8-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 734890DEST_PATH_IMAGE060
50 mL 带有玻璃插入物的Parr反应器装入CaCl2(344 mg, 3.10 mmol)，2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-8-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯(制备例169，860.0 mg, 1.55 mmol)和NH3/MeOH(3000 mg,200mmol, 25.0 mL, 7.0M)。在110°C搅拌该反应混合物30小时并且然后在室温搅拌30小时。在110°C，内压力到达140psi。将该反应混合物滤过Celite®垫，用MeOH和50:50MeOH/DCM洗涤，并且在真空中蒸干合并的有机萃取物。通过色谱法(RediSep GOLD 120g，庚烷/DCM/MeOH，25/67.5/7.5)提纯残余物而得到灰白色固体。通过逐渐地加热，将固体溶于MeOH(4mL)，然后添加2滴的H2O，白色晶体立即沉淀。通过过滤除去晶体而得到标题化合物，为白色晶体(156mg)。
LCMS m/z = 411 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.70 (3H, d), 5.90(1H, q), 6.65-6.90 (4H, m), 7.35 (1H, br s), 7.55 (1H, d), 7.70 (1H, d),7.90-7.96 (2H, m), 8.10 (1H, dd), 8.35 (1H, d), 8.75 (1H, d)。
实施例36
3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-胺
Figure 644509DEST_PATH_IMAGE061
在60°C搅拌甲烷磺酸(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯(制备例59, 71.7 mg, 0.251 mmol), 2-氨基-7-甲基-1,6-萘啶-3-醇三氟乙酸盐(制备例138, 44mg, 0.25 mmol)和Cs2CO3(175 mg, 0.537 mmol)在MeCN(2 mL)中的混合物过夜。用DCM(10mL)稀释混合物，通过过滤除去无机固体并且用DCM(10 mL)洗涤。在真空中蒸干合并的有机萃取物并且通过RediSep GOLD 12g(0-60%EtOH/EtOAc)提纯残余物而得到标题化合物，为白色固体(31 mg, 34%)。
LCMS m/z = 365 [M+H]+. 1H NMR (MeOH-d4, 400MHz) δ: 1.78 (3H, d), 2.55(3H, s), 5.55 (1H, s), 6.00 (1H, q), 6.65 (1H, s), 6.92 (1H, s), 7.18 (1H,s), 7.82 (1H, d), 7.90 (1H, s), 8.10 (1H, s), 8.43 (1H, s), 8.62 (1H, s)。
实施例37
6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸
Figure 594011DEST_PATH_IMAGE062
向6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯，制备例174，120 mg, 0.223 mmol)在MeOH(2.0 mL)和THF(1.0 mL)中的溶液中添加2M NaOH(116 mg, 2.0 mL, 2.9 mmol)并且在25°C搅拌该反应混合物36小时。添加N2H4(2 mL, 40 mmol)并且在45°C搅拌反应溶液3天。在真空中蒸干反应混合物并且通过制备型HPLC(DuraShell, 0.05%HCl水溶液/MeCN，15-31%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(11 mg, 13)。
LCMS m/z = 394 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.75 (3H, d), 6.18(1H, q), 6.61 (1H, t), 7.38 (1H, s), 7.40-7.50 (2H, m), 7.68 (1H, dd), 7.82(1H, d), 8.15 (2H, q), 8.31 (1H, d), 8.56 (2H, br s)。
实施例38
6,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 152031DEST_PATH_IMAGE063
向2-(6,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例168，120 mg, 0.233 mmol)在MeOH(2.0 mL)中的溶液中添加NH2NH2.H2O(0.4 mL)并且在室温(25-30°C)搅拌该混合物1小时。混合物被过滤并且通过制备型HPLC提纯而得到标题化合物，为白色固体(34.5 mg, 39%)。
LCMS m/z = 386 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.71 (3H, d), 5.85(1H, q), 6.52 (2H, br s), 6.63-6.72 (2H, m), 6.95 (1H, dt), 7.17 (1H, dt),7.92 (1H, d), 8.07 (1H, dd), 8.37 (1H, d), 8.74 (1H, d)。
实施例39
6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-3-氟-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸
Figure 337025DEST_PATH_IMAGE064
向6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-3-氟-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯(制备例180, 73.00 mg, 0.131mmol)在THF(1.5 mL)中的溶液中添加2M NaOH水溶液(0.329 mL, 0.657 mmol, 5.0当量)并且在室温搅拌所得的溶液3小时。添加NH2NH2.H2O(0.4 mL, 8mmol, 60当量)并且在室温搅拌19小时。在真空中蒸干混合物并且通过制备型HPLC(DuraShell C18, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN, 20%-40%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(15.5 mg, 29%)。
LCMS m/z = 412 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.75 (3H, d), 5.91-6.02 (1H, m), 6.28 (2H, br s), 6.66-6.77 (2H, m), 7.08-7.21 (2H, m), 7.39(1H, dd), 7.93 (1H, d), 8.17 (1H, d), 8.39 (1H, d)。
实施例40
{[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙酸
Figure 296890DEST_PATH_IMAGE065
在25°C搅拌({6-[(1S)-1-({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}氧基)乙酸叔丁酯(制备例176, 110 mg, 0.19 mmol)在TFA(1.5 mL)中的溶液30分钟。在真空中蒸干反应混合物并且通过制备型HPLC(DuraShellC18, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN, 22%-42%)提纯残余物而得到标题化合物，为白色固体(27mg, 34%)。
LCMS m/z = 424 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.65 (3H, d), 4.76-5.00 (2H, m), 5.56 (1H, q), 6.13 (2H, br s), 6.59 (1H, d), 6.77 (1H, s), 7.00(1H, d), 7.08-7.23 (2H, m), 7.38 (1H, dd), 7.77-7.91 (2H, m), 8.13 (1H, d)。
实施例41
2-{[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙醇
Figure 151714DEST_PATH_IMAGE066
向乙酸2-({6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}氧基)乙酯(制备例177, 130 mg,0.224 mmol)在THF/MeOH(1mL/1 mL)中的溶液中滴加水合肼(0.4 mL, 8 mmol)/MeOH(1mL)并且然后在22°C搅拌该反应混合物1.5小时。将反应溶液从4 mL小瓶转移至烧瓶并且在真空中浓缩。添加EtOH(10 mL)，通过过滤除去固体并且滤液用EtOH洗涤。在真空中蒸干合并的滤液并且通过制备型HPLC(DuraShell, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN，35%-65%)提纯残余物而得到标题化合物，为白色固体(45 mg, 49%)。
LCMS m/z = 410 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.69 (3H, d), 3.61-3.76 (2H, m), 4.24-4.40 (2H, m), 4.84 (1H, t), 5.53 (1H, q), 6.22 (2H, br s),6.62 (1H, s), 6.74 (1H, s), 6.88 (1H, d), 7.05-7.20 (2H, m), 7.38 (1H, dd),7.78 (1H, d), 7.88 (1H, s), 8.19 (1H, d)。
实施例42
2-氨基-3-{(1S)-1-[6-(2-羟基乙氧基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 462610DEST_PATH_IMAGE067
在钢管中在80℃搅拌3-[(1S)-1-{6-[2-(乙酰基氧基)乙氧基]-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}乙氧基]-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)喹啉-6-甲酸甲酯(制备例178, 220 mg, 0.354 mmol)在NH3/MeOH(约8M，20 mL)中的溶液72小时。在真空中蒸干反应混合物并且通过制备型HPLC(DuraShell, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN, 14%-44%)提纯残余物而得到标题化合物，为粉红色固体(13mg, 8.5%)。
LCMS m/z = 435 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.66 (3H, d), 3.57-3.74 (2H, m), 4.22-4.37 (2H, m), 4.83 (1H, t), 5.56 (1H, q), 6.52 (2H, br s),6.59-6.65 (1H, m), 6.87 (2H, d), 7.22 (1H, br s), 7.36 (1H, d), 7.73-7.81(2H, m), 7.85-7.90 (3H, m), 8.17 (1H, d)。
实施例43
5,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 936447DEST_PATH_IMAGE068
在0°C，向5,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉1-氧化物(制备例185, 300 mg, 0.777 mmol)和NH4OH(0.5 mL)在DCM(8 mL)中的溶液中添加TsCl(740 mg, 3.88 mmol)在DCM(2 mL)中的溶液。在15°C搅拌所得的悬浮液16小时。悬浮液用DCM(10 mL)稀释并且有机萃取物用盐水(2 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并且在真空中蒸干。使用CombiFlash(硅胶, 20g, 用EtOAc/石油醚=20-80%洗脱)提纯残余物而得到淡黄色固体。在手性SFC(Chiralpak AD-H, 0.1% NH4OH/EtOH)后，获得标题化合物，为白色固体(110 mg, 37%)。
LCMS m/z = 386 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.72 (3H, d), 5.99(1H, q), 6.63-6.71 (1H, m), 6.71-7.03 (4H, m), 7.08 (1H, dt), 7.93 (1H, d),8.08 (1H, dd), 8.30 (1H, d), 8.73 (1H, d)。
实施例44
2-氨基-3-{(1S)-1-[6-羟基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 954082DEST_PATH_IMAGE069
向2-氨基-3-{(1S)-1-[6-羟基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸(制备例193, 360 mg, 0.92 mmol)在DMF(4 mL)中的溶液中添加NH4Cl(148 mg, 2.76mmol), DIPEA(713 mg, 5.52 mmol)和HATU(525 mg, 1.38 mmol)，并且在室温搅拌所得的混合物2小时。混合物用H2O(5 mL)稀释并且用EtOAc(3×15 mL)萃取。在真空中蒸干合并的有机萃取物并且通过制备型HPLC(XBridge, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN, 0%-35%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(187 mg, 52%)。
LCMS m/z = 391 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.69 (3H, d), 5.27(1H, q), 6.37 (1H, br s), 6.65 (1H, s), 6.73-7.04 (3H, m), 7.26 (1H, br s),7.39 (1H, d), 7.51 (1H, br s), 7.76-7.84 (1H, m), 7.86-8.01 (3H, m), 8.16(1H, d), 12.04 (1H, br s)。
实施例45
3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 307703DEST_PATH_IMAGE070
在N2下在100°C加热6-溴-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(实施例25, 15.16g, 35.40 mmol)，Zn(CN)2(8.31g, 70.8 mmol)，Zn(463mg, 7.08 mmol)，Pd2(dba)3(3.24g, 3.54 mmol)和tBuXPhos(3.01g, 7.08 mmol)在DMA(177mL)中的混合物2.5小时。将混合物冷却到室温，用EtOAc稀释，滤过压制Celite®并且用pH7缓冲H2O，pH7缓冲盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并且然后在真空中蒸干而得到焦糖色油。将油溶于MeOH(259 mL)并且用H2O2(4.01 mL, 38.9 mmol)和DMSO(2.21 mL)处理并且搅拌1小时。在真空中除去MeOH并且将残余物在H2O(100 mL)中打浆1小时并且通过过滤收集固体。在50°C将固体在30%H2O/MeCN(22mL)中打浆过夜。浆料被冷却到室温，用30%H2O/MeCN(约10ml)稀释并且通过过滤除去固体并且用30%H2O/MeCN洗涤。合并的滤液被蒸干并且在120g柱上使用一定梯度的DCM/EtOH提纯残余物而得到残余物，将其进一步通过HPLC(WatersAtlantis dC18, 0.05%TFA/H2O/0.05%TFA/MeCN，95/5至5/95)提纯而得到标题化合物(43mg)。
LCMS m/z = 350 [M+H]+。
实施例46
6-{(1S)-1-[(2-氨基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
Figure 902632DEST_PATH_IMAGE071
在N2下，向(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例182，90 mg, 0.17 mmol)和KOH(28.8 mg, 0.514mmol)在二氧杂环己烷/H2O(7mL/3 mL)中的溶液中添加tBuXPhos(7.27 mg, 0.0171 mmol)和Pd2(dba)3(7.84 mg, 0.00856 mmol)。在90°C搅拌所得的混合物约3小时并且然后在真空中蒸干。用1N HCl将残余物酸化至pH 6，用MeOH稀释并且通过制备型HPLC(DuraShell C18,0.05% NH4OH水溶液/MeCN，8%-28%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(10 mg, 16%)。
LCMS m/z = 363 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.69 (3H, d), 2.46(3H, s), 5.29 (1H, q), 6.40 (1H, d), 6.64 (1H, t), 6.83 (1H, s), 7.09 (3H,s), 7.50 (1H, d), 7.90 (1H, d), 8.14 (1H, d), 8.46 (1H, s)。
实施例47
6-{(1S)-1-[(2-氨基-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
Figure 367112DEST_PATH_IMAGE072
按照实施例46的程序，由(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-1,5-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例181，270mg，0.528 mmol)，使用HPLC∶DuraShell C18，0.05% NH4OH水溶液/MeCN，8%-40%)，制备标题化合物，为黄色固体(58.9mg, 32%)。
LCMS m/z = 349 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.70 (3H, d), 5.38(1H, d), 6.41 (1H, br s), 6.63 (1H, t), 6.84 (2H, br s), 6.97 (1H, s), 7.34(1H, dd), 7.54 (1H, d), 7.74 (1H, dd), 7.86 (1H, d), 8.10 (1H, d), 8.42 (1H,dd), 11.96 (1H, br s)。
实施例48
6-{(1S)-1-[(2-氨基-7-氟-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
Figure 239253DEST_PATH_IMAGE073
按照实施例46的程序，由(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-7-氟-1,5-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例184，85 mg, 0.16 mmol)，使用HPLC∶DuraShell C18，0.05% NH4OH水溶液/MeCN，7%-47%)，制备标题化合物，为白色固体(7.5 mg,13%)。
LCMS m/z = 367 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.87 (3H, d), 5.57(1H, q), 6.41 (2H, br s), 6.57-6.71 (2H, m), 7.20 (1H, s), 7.38 (1H, br d),7.48-7.56 (1H, m), 7.74 (1H, d), 7.86 (1H, d), 8.42 (1H, d)。
实施例49
6-[(1S)-1-{[2-氨基-6-(羟基甲基)喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
Figure 576824DEST_PATH_IMAGE074
在0°C，将BH3Me2S(0.1 mL, 12M)添加到2-氨基-3-{(1S)-1-[6-羟基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸(制备例193，60 mg, 0.15 mmol)在THF(10 mL)中的悬浮液。在50°C搅拌所得的黄色悬浮液约4小时，然后用甲醇(10 mL)和1N HCl(5 mL)淬灭。在25°C搅拌所得的黄色溶液10分钟并且在真空中蒸干。通过制备型HPLC提纯残余物而得到标题化合物(12 mg, 21%)，为黄色固体。
LCMS m/z = 378 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.81 (3H, d), 4.68(2H, s), 5.40 (1H, q), 6.54 (1H, d), 6.67 (1H, t), 7.06 (1H, s), 7.39-7.43(1H, m), 7.44-7.49 (2H, m), 7.58 (1H, d), 7.90 (1H, d), 7.96 (1H, d)。
实施例50
6-[(1S)-1-{[2-氨基-6-(2-羟基丙-2-基)喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
Figure 596733DEST_PATH_IMAGE075
步骤1：
MeNHOMe.HCl(77.1 mg, 0.575 mmol)，DIPEA(297 mg, 2.3 mmol)和HATU(291mg, 0.767 mmol)被添加至2-氨基-3-{(1S)-1-[6-羟基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸(制备例193，150 mg, 0.383 mmol)在DMF(3 mL)中的棕色溶液。在室温搅拌该反应混合物1小时。混合物用H2O(5 mL)稀释并且用EtOAc/THF(v/v=3/1；5×15 mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机萃取物，并且在真空中蒸干而得到黄色胶，在没有提纯的情况下将其用于以下步骤2。
步骤2：
在0°C，向步骤1的化合物在THF(10 mL)中的溶液中添加MeMgBr(4 mL, 3M)。在室温搅拌该反应混合物6小时。将悬浮液用1N HCl(3 mL)淬灭并且在真空中蒸干。用H2O(15mL)稀释残余物并且用EtOAc/THF(v/v 2:1；10×20 mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机萃取物并且在真空中蒸干而得到黄色胶，在没有进一步提纯的情况下将其用于步骤3。
步骤3：
在0°C，向步骤2的化合物在THF(10 mL)中的棕色溶液中添加MeMgBr(4 mL, 3M)。在室温搅拌该反应混合物1小时。反应用1N HCl(3 mL)淬灭并且在真空中蒸干。用H2O(30mL)稀释残余物并且用EtOAc/THF(v/v=2/1，10×20 mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机萃取物，在真空中蒸干并且通过制备型HPLC提纯残余物而得到标题化合物，为黄色固体(15 mg,9.6%)。
LCMS m/z = 406 [M+H]+. 1H NMR (MeOH-d4, 400MHz) δ: 1.59 (6H, s), 1.81(3H, d), 5.42 (1H, br s), 6.54 (1H, br d), 6.65-6.70 (1H, m), 6.67 (1H, s),7.05 (1H, s), 7.41-7.46 (1H, m), 7.51-7.61 (7.90 (1H, s), 7.97 (1H, s)。
分别地，实施例51和实施例52
6-[(1S)-1-({2-氨基-6-[(1R)-1-羟基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇，和
6-[(1S)-1-({2-氨基-6-[(1S)-1-羟基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
Figure 537007DEST_PATH_IMAGE076
Figure 325972DEST_PATH_IMAGE077
重复实施例50的步骤1而得到黄色胶，在没有提纯的情况下，将其用于以下步骤2。
重复实施例50的步骤2而得到黄色胶，在没有进一步提纯的情况下，将其用于步骤3。
步骤3：
向步骤2的化合物在甲醇(10 mL)中的溶液中添加NaBH4(14.5 mg, 0.384 mmol)并且在20°C搅拌所得的溶液0.5小时。使用1N HCl，将该反应混合物酸化至pH6并且在真空中蒸干。通过制备型HPLC(XBridge0.05% NH4OH水溶液/MeCN，6%-46%)提纯残余物并且然后进一步通过SFC(YMC Chiral Amylose-C，0.1%NH4OH/IPA，40%)提纯而得到6-[(1S)-1-({2-氨基-6-[(1R)-1-羟基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇，为浅黄色固体(13 mg, 46%)。
LCMS m/z = 392 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.35 (3H, d), 1.70(3H, d), 4.70-4.82 (1H, m), 5.13 (1H, d), 5.26 (1H, q), 6.25-6.60 (3H, m),6.66 (1H, t), 6.83 (1H, s), 7.25-7.41 (3H, m), 7.51 (1H, br s), 7.91 (1H, s),8.14 (1H, d), 12.05 (1H, br d); 和
6-[(1S)-1-({2-氨基-6-[(1S)-1-羟基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇，为浅黄色固体(13 mg, 46%)。
LCMS m/z = 392 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.35 (3H, d), 1.71(3H, d), 4.72-4.82 (1H, m), 5.14 (1H, d), 5.28 (1H, br d), 6.39 (1H, br s),6.66 (3H, s), 6.86 (1H, s), 7.30-7.42 (3H, m), 7.53 (1H, br s), 7.91 (1H, s),8.15 (1H, d), 12.06 (1H, br s)。
实施例53
6-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
Figure 349291DEST_PATH_IMAGE078
在N2下，向2-(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6,8-二氟喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例172，4000 mg, 6.94 mmol)和KOH(1170mg, 20.8 mmol)在二氧杂环己烷/H2O(60mL/30 mL)中的溶液中添加tBuXPhos(295 mg,0.694 mmol)和Pd2(dba)3(318 mg, 0.347 mmol)。在90°C加热所得的溶液16小时并且在真空中蒸干。将残余物溶于MeOH(30 mL)并且添加N2H4.H2O(30 mL, 85%纯度)并且在35°C搅拌16小时。通过过滤除去悬浮液并且用H2O(30 mL)洗涤该滤饼。用HCl(12N)将滤液酸化至pH 10并且用DCM(2×100 mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的萃取物，真空蒸干并且通过柱色谱法(40 g, MeOH:DCM=0-5%)提纯残余物而获得固体，将其用MTBE:DCM打浆而得到标题化合物，为白色固体(1 g, 37%)。
LCMS m/z = 384 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.70 (3H, d), 5.26(1H, q), 6.38 (1H, br s), 6.64 (1H, t), 6.75-7.06 (4H, m), 7.16-7.31 (1H, m),7.51 (1H, br s), 7.91 (1H, s), 8.17 (1H, d), 12.04 (1H, br s)。
实施例54
6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-甲基-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
Figure 528600DEST_PATH_IMAGE079
使(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-甲基-1,5-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例183，124.00 mg, 0.236 mmol)，Pd2(dba)3(10.8 mg, 0.0012mmol)，tBuXPhos(10.0 mg, 0.0236 mmol)和KOH(39.7 mg, 0.708 mmol)在二氧杂环己烷/H2O(2.0mL/0.4 mL)中的混合物脱气并且用N2冲洗3次。在80°C加热所得的悬浮液1.5小时。添加另外的Pd2(dba)3(10.8 mg, 0.0012 mmol)，tBuXPhos(10.0 mg, 0.0236 mmol)和KOH(26.5 mg, 0.472 mmol)并且再次使该反应混合物脱气并且用N2冲洗3次并且然后在80°C加热1.5小时。用4M HCl(数滴)将该反应混合物酸化至pH 6-7并且在真空中蒸干。TFA(1.0mL)被添加至残余物在DCM(3 mL)中的溶液并且在室温搅拌所得的溶液2小时。在真空中蒸干反应混合物并且将残余物溶于MeOH/H2O(2.5mL/0.5 mL)并且通过制备型HPLC(XtimateC18, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN，6-46%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(15mg, 18%)。
LCMS m/z = 363 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.67 (3H, d), 2.52(3H, d), 5.37 (1H, q), 6.41 (1H, br s), 6.55-6.85 (3H, m), 6.93 (1H, s), 7.22(1H, d), 7.54 (1H, br d), 7.65 (1H, d), 7.85 (1H, d), 8.08 (1H, d), 12.02(1H, br s)。
实施例55
2-氨基-3-{(1S)-1-[6-(羟基甲基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 334882DEST_PATH_IMAGE080
2M NaOH(0.1 mL, 0.2 mmol)被添加至3-{(1S)-1-[6-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)喹啉-6-甲腈(制备例173, 66 mg, 0.1 mmol)在DMSO(0.3 mL)中的溶液并且在30°C搅拌该混合物16小时。添加N2H4.H2O(0.4 mL)并且继续在30°C搅拌16小时，然后在50°C加热48小时。在真空中蒸干反应混合物并且通过制备型HPLC(Xtimate C18, 0.225%HCO2H水溶液/MeCN, 5-25%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(7 mg, 15%)。
LCMS m/z = 427 [M+Na]+。1H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ = 1.69 (3H, d),4.53-4.66 (2H, m), 5.55 (1H, br t), 5.69 (1H, q), 6.52 (2H, br s), 6.60-6.69(1H, m), 6.82 (1H, s), 7.22 (1H, br s), 7.35 (1H, d), 7.58 (1H, d), 7.71-7.79(1H, m), 7.83-7.94 (4H, m), 8.14 (1H, s), 8.26 (1H, d)。
实施例56
6,8-二氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 56981DEST_PATH_IMAGE081
在10°C，向2-(6,8-二氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例175, 1030 mg, 1.7 mmol)在无水的MeOH(10 mL)中的悬浮液中滴加N2H4.H2O(196 mg, 3.32 mmol)并且在30°C搅拌该反应混合物30分钟。在真空中蒸干反应混合物并且通过柱色谱法(EtOAc/石油醚=0至40%)提纯残余物而得到黄色固体。用MTBE(3 mL)稀释固体(470 mg)并且在10°C搅拌16小时。通过过滤收集固体并且用MTBE(3×0.5 mL)洗涤该滤饼而得到标题化合物，为黄色固体(395 mg,60%)。
LCMS m/z = 398 [M+H]+. 1H NMR (MeOH-d4, 400MHz) δ: 1.76 (3H, d), 3.93-3.99 (3H, m), 5.65 (1H, q), 6.61 (1H, t), 6.85 (1H, d), 6.94-7.04 (3H, m),7.69 (1H, d), 7.86 (1H, d), 7.93 (1H, d)。
实施例57
6-氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 657727DEST_PATH_IMAGE082
按照实施例56的程序，由2-(6-氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例179)，获得标题化合物，为黄色固体(411.4 mg, 48%)。
LCMS m/z = 380 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ = 1.70 (3H, d),3.88 (3H, s), 5.55 (1H, q), 6.23 (2H, br s), 6.62 (1H, d), 6.76 (1H, s), 6.89(1H, d), 7.07-7.22 (2H, m), 7.38 (1H, dd), 7.78 (1H, d), 7.87 (1H, s), 8.18(1H, d)。
实施例58
6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇(以固体形式制备，为其酰胺互变异构体(S)-6-(1-((2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮)
Figure 855490DEST_PATH_IMAGE083
在室温，TMSCl(10300 mg, 94.5mmol, 12.0 mL)被添加至6-氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(实施例57，18600 mg, 49.025mmol)和NaI(13000 mg, 86.730 mmol)在MeCN(300 mL)中的微悬浮液并且在65°C搅拌该混合物3小时。在冰浴中冷却该反应混合物，添加饱和硫代硫酸钠(250 mL)并且在0°C搅拌该混合物1.5小时，然后过滤。通过过滤被除去的固体被添加至H2O(pH=7；140 mL)。在40°C搅拌悬浮液并且在2小时内用1N氢氧化钠(约34 mL)将pH不断地调节至pH 7。一旦pH稳定在7将该反应混合物冷却到室温并且通过过滤除去固体，并且在真空烘箱中干燥，而得到标题化合物，为无色固体(7554 mg, 72%)。
LCMS m/z = 366 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ: 1.71 (3H, d), 5.25(1H, q), 6.26-6.62 (3H, m), 6.65 (1H, t), 6.79 (1H, s), 7.10 (1H, dd), 7.20(1H, dt), 7.41 (1H, dd), 7.51 (1H, br d), 7.91 (1H, d), 8.17 (1H, d), 12.00(1H, br s)。PXRD数据与为实施例58a的化合物提供的PXRD数据一致并且证实制备了以固体形式的标题化合物，为其酰胺互变异构体。
实施例58a
(S)-6-(1-((2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮
Figure 262201DEST_PATH_IMAGE084
制备
用氮气吹扫在25°C的包含四氢呋喃(77.4L，9L/kg)和2.8M氢氧化钾水溶液(49.2kg，6.0当量，120.5mol)的200L反应器19分钟。装入3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-胺(制备例189，8.60kg，1.0当量，20.1mol)，并且反应器壁用四氢呋喃(4.3L，0.5L/kg)清洗。在46分钟内将所得的双相混合物加热至45°C。装入t-BuXPhos(172 g, 0.02当量，0.40mol)，并且使该反应混合物保持5分钟。装入三(二苄叉基丙酮)二钯(0)(184 g, 0.01当量，0.20mol)，并且反应器壁用四氢呋喃(4.3L，0.5L/kg)清洗。在18分钟内将混合物加热至60°C，保持4小时，并且冷却至45°C。混合物的分析指出反应完成。在1小时15分钟内将混合物进一步冷却至5°C，并且装入6M 盐酸水溶液(18.6kg，5.2当量，104.4mol)来中和碱性混合物，同时保持物料温度(batch temperature)低于15°C。在添加完成后，混合物被升温至25°C。接下来，在10分钟内装入含水的1 M磷酸钠缓冲液(8.6L，1L/kg)，并且保持混合物10分钟。此时，水层的pH是7.5。分离各层，并且在真空下有机层被蒸馏至约26L(3L/kg)。新鲜的四氢呋喃(60.2L，7L/kg)被装入，并且溶液被再一次蒸馏至约26L(3L/kg)。过程被重复两次，并且在最后的蒸馏之后，新鲜的四氢呋喃(17.2L，2L/kg)被装入。物料温度被调节到20°C。此时，残余水含量是0.29%。在Nutsche过滤器中，将混合物滤过硅藻土(2kg)的垫以除去从溶液中沉淀的盐和钯黑。用四氢呋喃(17.2L，2L/kg)洗涤反应器和Nutsche过滤器并且洗液与滤液合并。反应器和Nutsche过滤器再一次用四氢呋喃(51.6L，6L/kg)洗涤，并且在三个单独部分中收集洗液。在200L反应器中合并主要的滤液和含期望的产物的级分，容器用四氢呋喃(2 L)清洗并且装入反应器中。装入Ultra PureSi-Thiol硅胶(2.92kg，40wt%)。在搅动的情况下在25°C保持混合物23小时35分钟并且在Nutsche过滤器中滤过硅藻土(2kg)的垫。用2:1v/v四氢呋喃/乙醇混合物(8L×4+11L)洗涤反应器和Nutsche过滤器，在单独的容器中收集各个洗液。在反应器中合并主要的滤液和含期望的产物的级分。各个容器用2:1v/v四氢呋喃/乙醇混合物(2 L)清洗并且将洗液装入反应器。合并的溶液被蒸馏至约17L(2L/kg)，并且装入乙醇(51.6L，6L/kg)。此时，形成粗(robust)浆液。浆料被蒸馏至约17L(2L/kg)，并且装入乙醇(43.0L，5L/kg)。物料温度被调节到25°C。此时，残余的四氢呋喃含量是0.406wt/wt%。将混合物加热至70°C，保持1小时31分钟，在1小时9分钟内冷却至25°C，并且保持30分钟。在42分钟内混合物被进一步地冷却至0°C并且保持30分钟。浆料被滤过Nutsche过滤器，并且反应器和滤饼用冷乙醇(8.6L，1L/kg)洗涤。用氮气吹滤饼8小时39分钟。材料被转移到盘式干燥器并且在45°C在真空下在12小时14分钟内干燥，得到标题化合物，为白色固体(6.266kg，85.4%收率)。
对于相同的方法，进行另外的批次，得到标题化合物，为白色固体(6.236kg，85.1%收率)。
用Si-Thiol硅胶提纯
向从前述步骤中获得的6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮(12.48kg，1.0当量，34.2mol)在四氢呋喃(93.6L，7.5L/kg)中的室温溶液中装入Ultra Pure Si-Thiol硅胶(4.99kg，40wt%)。反应器壁用四氢呋喃(6.2L，0.5L/kg)清洗。在50分钟内将混合物加热至50°C，保持12小时17分钟，并且在43分钟内冷却至25°C。在Nutsche过滤器中，浆料被滤过硅藻土(1kg)的垫。用2:1v/v四氢呋喃/乙醇混合物(18L×4+21.6L)洗涤反应器和Nutsche过滤器，在单独的容器中收集各个洗液。在反应器中合并主要的滤液和含期望的产物的级分。各个容器用2:1v/v四氢呋喃/乙醇混合物(2 L)清洗并且将洗液装入反应器。合并的溶液被蒸馏至约37L(3L/kg)，并且装入乙醇(87.4L，7L/kg)。此时，形成粗(robust)浆液。浆料被蒸馏至约37L(3L/kg)，并且装入乙醇(87.4L，7L/kg)。蒸馏/装入过程被再次重复。物料温度被调节到25°C。此时，残余的四氢呋喃含量是0.081wt/wt%。将混合物加热至70°C，保持1小时2分钟，在1小时13分钟内冷却至25°C，并且保持31分钟。萃取浆料的样品，进行经PXRD的固态分析，如称为"PXRD分析"的下节中所述。在44分钟内混合物被进一步冷却至0°C并且保持30分钟。浆料被滤过Nutsche过滤器，并且反应器和滤饼用冷乙醇(25.0L，2L/kg)洗涤。用氮气吹滤饼1小时8分钟。材料被转移到盘式干燥器并且在50°C在真空下在40小时7分钟内干燥，得到标题化合物，为白色固体(11.624kg，93.1%收率)；从中的PXRD数据一致于以下对于浆料样品直接报道的数据。
PXRD分析
使用装备有Cu辐射源的Bruker AXS D8 Endeavor衍射计，对于在前述步骤中为固态分析而萃取的标题化合物的样品进行PXRD分析。发散狭缝被设置为11mm恒定照明。通过具有设置在2.949度的PSD开口的LYNXEYE检测器，检测衍射辐射。X射线管电压和电流分别设置到40kV和40mA。使用0.016度的步长和0.3秒的每步时间，在由3.0至40.0°2θ的Cu波长下，在θ-θ测向计中收集数据。
将浆料样品离心并且将被分离的滤液置于硅低背景的、小草皮样品夹持器并且在数据收集期间旋转。在EVA衍射+软件中分析数据。仔细检查手动进行的峰选择以保证全部低于30°2θ的峰已经被捕获并且全部峰位置已经被准确地分配。在峰位置中的±0.2°2θ的典型误差(USP-91)适用于该数据。因为各种因素，包括(a)样品制备(例如样品高度)、(b)仪器特性、(c)仪器校准、(d)操作员输入(例如在确定峰位置中)及(e)材料属性(例如优选的取向和透明效果)，与此测定有关的次要误差可能发生。标题化合物的晶型(形式I)的PXRD图提供于图1中。相应的峰列表提供在表1中。
表1
标题化合物的晶型(形式I)的PXRD峰列表
角度，°2-Theta (°2θ) 相对强度，% 角度，°2-Theta (°2θ) 相对强度，%
7.9* 25 20.4* 36
8.7* 31 21.2 19
13.2 1 21.9 5
13.8 2 22.2 24
14.0 3 22.6 2
14.5 3 23.0 26
15.4 6 23.6 48
15.8 18 24.6 68
15.9 30 25.3 26
16.6 7 25.8 12
17.0 13 25.9 16
17.4* 100 26.2 15
17.6 38 27.1 5
17.8 14 27.4 10
18.4* 32 27.7 6
18.8 2 28.3 6
19.5 27 29.2 8
20.0 4 30.0 9
用星号标记认为是诊断晶型1的PXRD峰。
在一种实施方案中，本发明提供了在以下位置具有PXRD峰的标题化合物的晶型1：7.9°±0.2° 2θ, 8.7°±0.2° 2θ, 17.4°±0.2° 2θ, 18.4°±0.2° 2θ 和 20.4°±0.2° 2θ。
在另一种实施方案中，本发明提供了具有一个、两个、三个或四个PXRD峰的标题化合物的晶型1，所述PXRD峰选自在以下位置的PXRD峰：7.9°±0.2° 2θ, 8.7°±0.2° 2θ,17.4°±0.2° 2θ, 18.4°±0.2° 2θ 和 20.4°±0.2° 2θ。
在另一种实施方案中，本发明提供了在以下位置具有PXRD峰的标题化合物的晶型1：7.9°±0.2° 2θ 和 8.7°±0.2° 2θ。
在另一种实施方案中，本发明提供了在以下位置具有PXRD峰的标题化合物的晶型1：7.9°±0.2° 2θ, 8.7°±0.2° 2θ 和 17.4°±0.2° 2θ。
在另一种实施方案中，本发明提供了在以下位置具有PXRD峰的标题化合物的晶型1： 7.9°±0.2° 2θ, 8.7°±0.2° 2θ, 17.4°±0.2° 2θ 和 18.4°±0.2° 2θ。
在另一种实施方案中，本发明提供了在以下位置具有PXRD峰的标题化合物的晶型1：7.9°±0.2° 2θ, 8.7°±0.2° 2θ, 17.4°±0.2° 2θ 和 20.4°±0.2° 2θ。
实施例58b
(S)-6-(1-((2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮
单晶求解(Solution)
以缩小的规模，按照实施例58a的方法，分离标题化合物(4.577g, 100质量%，12.53mmol, 91.5%收率，批号711743-532-12)，为白色结晶固体。
在室温，在Bruker D8 Venture衍射仪上进行单晶数据收集。数据收集由以下构成：Ω和Φ扫描。按单斜晶类空间群P21，使用SHELX套装软件，通过内部定相来求解结构。随后通过全矩阵最小二乘法细化结构。使用各向异性位移参数(anisotropic displacementparameters)发现并且细化全部非氢原子。最终的R-指数是2.9%。最终的差值傅里叶(difference Fourier)显示无丢失或误置的电子密度。表2包含相关的结构数据。
表2
对于标题化合物的晶型(形式1)的晶体结构数据
Figure 25757DEST_PATH_IMAGE085
通过这种求解证实标题化合物的绝对构型(-S)和互变状态。对于求解的不对称单元中的分子之一的ORTEP图示于图2中。来自单晶结构的模拟的PXRD图的峰位置列表示于表3中。
表3
来自标题化合物的形式I的单晶结构的模拟的PXRD图的峰位置列表
角度，°2-Theta (°2θ) 相对强度，% 角度，°2-Theta (°2θ) 相对强度，%
7.9 80 22.2 15
8.7 23 22.2 16
13.2 6 22.6 2
13.8 9 23.0 36
14.0 12 23.7 23
14.5 13 24.3 15
15.4 15 24.5 6
15.8 18 24.5 15
16.0 7 24.8 1
16.1 24 25.1 4
16.5 20 25.3 19
17.0 21 25.7 11
17.4 39 25.9 21
17.6 57 26.2 5
17.8 35 27.1 7
18.4 100 27.4 12
18.7 2 27.7 14
19.5 15 28.2 1
20.0 8 28.9 3
20.4 94 29.0 3
20.7 3 29.1 12
21.1 61 30.0 9
21.8 12
对于由单晶结构测定获得的目标化合物的形式1的模拟的PXRD图，表1中的数据与与表3所示的数据的比较显示良好的峰相关性。与模拟的图相比较，实验数据(表1和图1)中的某些峰的解析的缺乏或丧失将被预期且可归因于先前注记的实验PXRD数据的固有误差(即与因素(a)至(e)中的一个或多个有关的误差)。也应注意的是模拟的图的峰列表的特征在于相同峰位置(即22.2和24.5°2θ)的两个峰的两个实例。这是所引用的峰位置的精确度(至一个小数位)的结果。
实施例59
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 735087DEST_PATH_IMAGE086
在5°C，HCl/MeOH(0.5 mL, 4N)被添加至6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺(制备例196，42 mg, 0.089 mmol)在MeOH(2 mL)中的溶液。使反应混合物升温至室温并且搅拌1.5小时，然后添加另外的HCl/EtOAc(0.5 mL)并且在25°C继续搅拌3小时。添加另外的HCl/EtOAc(0.3 mL)并且在25°C搅拌该反应混合物另外的1.5小时。在真空中蒸干反应混合物而得到浅棕色固体，将其通过制备型HPLC(DuraShell, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN，36-56%)提纯而得到白色固体，将其进一步通过手性SFC(Chiralcel AD, 0.1%NH4OH/EtOH，30%)提纯而得到标题化合物(峰1)，为白色固体(4.95 mg, 14%)。
LCMS m/z = 389 [M+H]+. 1H NMR (MeCN-d3, 400MHz) : δ = 1.66 (3H, d),5.55-5.65 (3H, m), 6.61 (1H, t), 7.05-7.15 (3H, m), 7.45 (1H, dd), 7.81 (2H,s), 7.86 (1H, dd), 8.00 (1H, d), 8.09 (1H, s), 11.32 (1H, br s)。
实施例60
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 216884DEST_PATH_IMAGE087
由7-氯-6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺(制备例197，50 mg, 0.099 mmol)，通过按照实施例59的程序，使用HPLC：DuraShell，0.225%HCO2H水溶液/MeCN，38-58%和手性SFC：Chiralpak AD-H, 0.1%NH4OH/EtOH，30%)，获得标题化合物，为白色固体(6.15 mg)。
LCMS m/z = 423 [M+H]+. 1H NMR (MeOH-d4, 400MHz): δ = 1.66 (3H, d),4.62 (1H, br s), 5.60 (1H, q), 6.64 (1H, t), 7.17 (1H, s), 7.33 (1H, d), 7.51(1H, d), 7.79 (1H, s), 7.90 (2H, br s), 8.07 (1H, d), 8.15 (1H, s)。
实施例61
2-氨基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 440668DEST_PATH_IMAGE088
向2-氨基-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺(制备例217，600 mg, 1.21 mmol)在DCM(5 mL)中的黄色溶液中添加TFA(3 mL)并且在15°C搅拌所得的溶液约2小时。在真空中蒸干反应混合物，在NaHCO3(10mL)之间分割并且用DCM(3x20 mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的萃取物并且在真空中蒸干而得到残余物，将其通过制备型HPLC提纯(Xtimate C18，0.05% NH4OH水溶液/MeCN，22-42%)。进一步通过手性SFC(Chiral Tech IC，0.2%异丙醇胺/IPA，50%)提纯残余物而得到标题化合物，为灰白色固体(36.4 mg)。
LCMS m/z = 414 [M+H]+. 1H NMR (MeOH-d4, 400MHz): δ = 1.64 (3H, d),5.60 (1H, q), 6.62 (1H, s), 7.20 (1H, s), 7.48 (1H, d), 7.76-8.16 (7H, m)。
实施例62
2-氨基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 996414DEST_PATH_IMAGE089
在25°C搅拌2-氨基-3-[(1S)-1-{5-(1H-吡唑-1-基)-1-[(2S)-四氢-2H-吡喃-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}乙氧基]喹啉-6-甲酰胺(制备例221，00708245-1609-001，971mg，1.947mmol)在TFA(5mL)中的溶液约2小时。在真空中蒸干反应混合物并且在DCM(50 mL)和NaHCO3水溶液(20 mL)之间分割残余物。水相用DCM(3x20 mL)萃取，干燥(Na2SO4)并且在真空中蒸干。通过CombiFlash(SiO2，MeOH/DCM=0至10%)提纯残余物并且所得的固体由DCM/EtOAc(5mL/25 mL)再结晶。然后进一步通过SFC(Phenomenex-Amylose-1, 0.1%NH4OH/EtOH，40%)提纯固体而得到标题化合物，为黄色固体(135 mg, 16%)。
LCMS m/z = 415 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) : δ = 1.69 (3H, d),5.56 (1H, q), 6.40-6.79 (3H, m), 6.96 (1H, s), 7.23 (1H, br s), 7.36 (1H, d),7.75 (1H, dd), 7.82-8.00 (3H, m), 8.24 (1H, s), 8.31 (1H, d), 8.42 (1H, s),14.00 (1H, s)。
实施例63
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 204541DEST_PATH_IMAGE090
在55°C搅拌6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺(制备例223，240 mg, 0.463 mmol)和TBAF(1.0M，在THF中，3.0 mL, 3.0 mmol)的黄色溶液1小时。在真空中蒸干反应混合物而得到黄色油，将其通过制备型TLC(DCM:MeOH=15:1)提纯而得到白色固体(72.4 mg)。获得标题化合物，为白色固体(9.9 mg)，来自SFC分离(Chiralcel OJ, 0.1%NH4OH/MeOH，25%)的峰1。
LCMS m/z = 389 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) : δ = 1.69 (3H, d),5.54 (1H, q), 6.64 (1H, s), 7.05-7.20 (3H, m), 7.42 (1H, q), 7.67 (1H, br s),7.80-7.90 (2H, m), 8.54 (1H, s), 8.27 (1H, s)。
实施例64
6-氟-3-{(1S)-1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 970372DEST_PATH_IMAGE091
向6-氟-3-{1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺(制备例225，130 mg, 0.244 mmol)在二氧杂环己烷(5 mL)中的溶液中添加HCl/二氧杂环己烷(4 mL, 4M)。在25°C搅拌所得的溶液16小时并且在真空中蒸干。通过添加饱和NaHCO3水溶液，残余物被碱化，用EtOAc(3×15 mL)萃取，干燥(Na2SO4)并且在真空中蒸干而得到白色胶，将其通过制备型TLC(DCM/MeOH/NH4OH，10/1/0.5)提纯而得到白色固体。在SFC提纯(Chiralcel AD, 0.1%NH4OH/MeOH，30%)后，获得标题化合物，为白色固体(14.93 mg, 20%)。
LCMS m/z = 403 [M+H]+. 1H NMR (MeOH-d4, 400MHz) : δ = 1.64 (3H, d),2.55 (3H, s), 5.49 (1H, q), 6.65 (1H, t), 7.00-7.15 (3H, m), 7.41 (1H, dd),7.52 (1H, br s), 7.73 (1H, br s), 7.89 (1H, d), 8.03 (1H, d)。
实施例65
2-氨基-7-氟-3-{(1R)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 656568DEST_PATH_IMAGE092
由2-氨基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺(制备例216，50 mg, 0.89 mmol)，通过按照实施例64的程序并且使用SFC：Chiralcel OJ, 0.1%NH4OH/MeOH，35%，获得标题化合物，为白色固体(1.5 mg)。
LCMS m/z = 432 [M+H]+. 1H NMR (MeOH-d4, 400MHz) : δ = 1.68 (3H, d),5.62 (1H, q), 6.65 (1H, t), 7.16 (1H, d), 7.25 (1H, s), 7.80 (1H, s), 7.85-7.95 (2H, m), 7.99 (1H, d), 8.08 (1H, s), 8.15 (1H, s)。
实施例66
(S)-2-(6-(1-((2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸叔丁酯
Figure 332400DEST_PATH_IMAGE093
35%NH2NH2.H2O(105 mg, 1.15 mmol)被添加至{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸叔丁酯(制备例207，145 mg, 0.229 mmol)在CDCl3(0.4 mL)和MeOH(1.6 mL)中的溶液并且使所得的稠的(thick)白色沉淀物在室温静置过夜。添加MeOH和EtOAc并且通过过滤除去固体。滤液用EtOAc稀释并且用NaOH(1×5 mL)，H2O和盐水洗涤。在EtOAc和1N NaOH之间分割之前过滤的固体。水层被进一步用EtOAc萃取并且有机萃取物被合并，干燥(MgSO4)并且蒸发而得到标题化合物，为灰白色固体(98 mg, 85%)。
LCMS m/z = 503。
实施例67
[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸
Figure 524478DEST_PATH_IMAGE094
HCl(1mL, 4M，在二氧杂环己烷中)被添加至(S)-2-(6-(1-((2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸叔丁酯(实施例66，98.3 mg,0.196 mmol)在DCM(1 mL)中的溶液。形成不可溶的半固体，通过添加MeOH(约0.5 mL)将其溶解。用KOH(1N，在MeOH中)，pH被调节到约pH 12，并且在室温搅拌所得的混合物。用1NHCl，pH被调节到pH7并且在真空中蒸干反应混合物而得到固体，将其与庚烷一起共沸(2×)。在热的MeCN中，固体被吸收并且滤过Celite®的垫。滤液被蒸干并且与庚烷一起共沸(2×)而得到灰白色固体，将其通过HPLC(Waters Atlantis dC18, 0.05%TFA/H2O/0.05%TFA/MeCN，95/5至5/95)提纯。所得的固体用Et2O研磨，有力地搅拌并且然后使其在未被搅拌的情况下静置过夜。Et2O被倾析并且固体被溶于温EtOAc(约3 mL)并且然后滤过0.2微米尼龙烧结料。使滤液慢慢地冷却并且部分地蒸发而得到标题化合物，为棕褐色固体(10 mg,11%)。
LCMS m/z = 447 [M+H]+. 1H NMR (MeOH-d4, 400MHz) δ: 1.68 (3H, d), 4.10(1H, q), 5.52 (1H, q), 6.80 (1H, s), 7.02-7.38 (3H, m), 7.40 (1H, dd), 7.78-7.90 (3H, m), 8.00 (1H, s), 8.10 (1H, s)。
实施例68
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 715288DEST_PATH_IMAGE095
向2-(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例202，288 mg, 0.443 mmol)在MeOH(3 mL)中的溶液中添加N2H4.H2O(1500 mg, 1.5 mL, 31mmol)并且在室温搅拌该混合物2小时。在真空中蒸干反应混合物，用TFA(10 mL)处理并且在室温搅拌1小时。蒸干反应混合物并且通过制备型HPLC(DuraShell, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN；23-63%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(63.3 mg, 37%)。
LCMS m/z = 390 [M+H]+1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) : δ = 1.68 (3H, d), 5.51(1H, q), 6.60 (1H, t), 6.75 (2H, br s), 7.01 (1H, s), 7.07 (1H, d), 7.50 (2H,br d), 7.71 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.23 (1H, s), 8.28 (1H, d), 8.39 (1H, s),13.98 (1H, s)。
实施例69
[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸
Figure 142859DEST_PATH_IMAGE096
向{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯(制备例198，949 mg, 0.94mmol)在甲醇(10 mL)和THF(5 mL)中的溶液中添加NaOH水溶液(2N，5 mL)并且在室温搅拌所得的混合物1.5小时。N2H4.H2O(4 mL)被添加至混合物并且在室温继续搅拌37小时。在真空中蒸干反应混合物并且在H2O(10 mL)和EtOAc(15 mL)之间分割残余物。用1N HCl将水层的pH调节到pH=5-6并且用EtOAc(15 mL×3)萃取。在真空中蒸干合并的有机萃取物并且通过制备型HPLC(DuraShell；0.05% NH4OH水溶液/MeCN，15-35%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(258.5 mg, 36%)。
LCMS m/z = 465 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) : δ = 1.62 (3H, d),5.13-5.00 (2H, m), 5.42 (1H, q), 6.61 (1H, t), 6.77 (2H, br s), 6.97 (1H, s),7.01 (1H, dt), 7.16 (1H, ddd), 7.82 (1H, s), 7.88 (1H, d), 7.99 (1H, s), 8.11(1H, d), 8.24 (1H, d)。
实施例70
2-[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酰胺
Figure 63410DEST_PATH_IMAGE097
在钢管中在80℃搅拌{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯(制备例201，295 mg, 0.499 mmol)在NH3/MeOH(约8M，10 mL)中的溶液48小时。在真空中蒸干反应混合物并且通过HPLC(DuraShell C18, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN，22-62%)并且然后SFC(Chiralcel OD-H, 0.1% NH4OH/EtOH，45%)提纯残余物而得到标题化合物，为白色固体(51mg, 23%)。
LCMS m/z = 446 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) : δ = 1.64 (3H, d),5.08 (2H, d), 5.43 (1H, d), 6.46 (2H, s), 6.63 (1H, t), 6.92 (1H, s), 7.08-7.20 (2H, m), 7.29 (1H, s), 7.38 (1H, br d), 7.61 (1H, s), 7.84 (1H, s), 7.90(1H, d), 8.03 (1H, s), 8.15 (1H, d), 8.26 (1H, d)。
实施例71
[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基]乙酸
Figure 613340DEST_PATH_IMAGE098
在28°C搅拌{6-[(1S)-1-({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸(制备例219，80 mg, 0.15mmol)在DCM/TFA(3mL/2 mL)中的溶液1小时。在真空中浓缩反应混合物，添加THF(3×10 mL)并且在真空中蒸干溶液而除去痕量的TFA。通过制备型HPLC(Phenomenex Gemini-NX，0.05% NH4OH水溶液/MeCN，22-42%)提纯残余物而得到标题化合物，为白色固体(11.6 mg, 18%)。
LCMS m/z = 447 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) : δ = 1.59 (3H, s),5.24 (2H, d), 5.43 (1H, q), 6.54 (2H, s), 6.62 (1H, t), 6.94 (1H, s), 7.09-7.18 (2H, m), 7.38 (1H, dd), 7.83 (1H, s), 7.85-7.91 (2H, m), 8.27 (1H, d),8.47 (1H, s)。
实施例72
2-[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙醇
Figure 229129DEST_PATH_IMAGE099
向{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯(制备例198，328 mg, 0.555mmol)在无水THF/MeOH(3mL/3mL)中的溶液中添加NaOH(222 mg, 5.55mmol, 2M，水溶液)。在28°C搅拌所得的反应混合物1小时。N2H4.H2O(0.5 mL)被添加至反应混合物并且在约25°C搅拌所得的反应混合物16小时。添加另外的N2H4.H2O(0.5 mL)并且在40°C继续搅拌22小时。在真空中蒸干反应混合物并且在H2O(10 mL)和EtOAc(15 mL)之间分割残余物。用1N HCl将水溶液酸化至pH 4-5并且然后用EtOAc(3×15 mL)萃取，干燥(Na2SO4)并且在真空中蒸干而得到灰白色固体(143 mg)。在冷却的情况下添加THF而得到冰冷的THF溶液，向其中添加BH3SMe2(0.308 mL, 3.08 mmol)。在室温搅拌所得的反应混合物约1.5小时，然后添加另外的BH3SMe2(0.5 mL, 5 mmol)并且在室温继续搅拌过夜(约16小时)。慢慢地将MeOH添加到混合物，然后将其在真空中蒸干。残余物部分地使用柱色谱法(4g硅胶柱，EtOAc/石油醚=50%/100%)提纯而得到残余物，将其进一步通过制备型HPLC(DuraShell, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN，39-69%)和SFC(Chiralcel-OD；0.1% NH4OH/EtOH, 30%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(15 mg, 6%)。
LCMS m/z = 451 [M+H]+. 1H NMR (MeOH-d4, 400MHz) : δ = 1.68 (3H, d),3.93 (2H, t), 4.50 (2H, t), 5.56 (1H, q), 6.61 (1H, t), 6.93-7.04 (2H, m),7.16 (1H, d), 7.83 (1H, s), 7.87 (1H, d), 7.91 (1H, s), 8.01 (1H, d), 8.11(1H, d)。
实施例73
2-[6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙醇
Figure 257128DEST_PATH_IMAGE100
在室温搅拌(6-氟-3-{(1S)-1-[1-(2-羟基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例218，79 mg, 0.15 mmol)在DCM/TFA(3mL/2mL)中的溶液1.5小时。在真空中蒸干反应混合物，与THF(3×5 mL)共沸并且通过制备型HPLC(DuraShell, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN，35-65%)提纯残余物。所得的材料与来自由氨基甲酸酯的第二次合成的材料(制备例218，155 mg, 0.29 mmol)结合并且通过SFC(Chiralcel-OD, 0.1% NH4OH/EtOH，30%)提纯而得到标题化合物，为白色固体(30 mg)。
LCMS m/z = 433 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) : δ = 1.67 (3H, d),3.80 (2H, br s), 4.06 (1H, br s), 4.41-4.51 (2H, m), 4.86 (1H, br s), 5.46(1H, q), 6.63 (1H, t), 7.01 (2H, s), 7.16-7.25 (2H, m), 7.44 (br dd), 7.83(1H, s), 7.90 (1H, d), 8.05 (1H, s), 8.14 (1H, d), 8.25 (1H, d)。
实施例74
2-氨基-3-{(1S)-1-[1-(2-羟基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 517339DEST_PATH_IMAGE101
在室温(15°C)向2-氨基-3-{1-[1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺(制备例215，2400 mg, 4.198mmol)在无水DCM(50 mL)中的溶液中添加TFA(5 mL)并且在室温搅拌该混合物5小时。在真空中蒸干反应混合物并且通过添加饱和NaHCO3水溶液将残余物碱化至pH=9。搅拌所得的悬浮液10分钟，用DCM/MeOH(50/1，200 mL)稀释，用H2O(10 mL)并且然后盐水(10 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并且然后在真空中蒸干。通过SFC(Chiralcel-OJ, 0.1% NH4OH/EtOH，40%)提纯残余物而得到标题化合物，为淡黄色固体(峰2，650 mg, 33%)。
LCMS m/z = 480 [M+Na]+。1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) : δ = 1.63 (3H, d),3.79 (2H, br s), 4.39-4.50 (2H, m), 4.86 (1H, br s), 5.48 (1H, d), 6.65 (1H,t), 6.81 (2H, br s), 7.02 (1H, s), 7.23 (1H, br s), 7.36 (1H, d), 7.76 (1H,dd), 7.84 (1H, s), 7.88 (2H, br d), 7.92 (1H, d), 8.03 (1H, s), 8.14 (1H, s),8.25 (1H, d)。
实施例75
7-甲基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-1,6-萘啶-2-胺
Figure 238171DEST_PATH_IMAGE102
在室温搅拌(7-甲基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-1,6-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例205，90 mg, 0.15 mmol)在DCM/TFA(1mL/1 mL)中的溶液1小时。在真空中蒸干反应混合物并且通过制备型HPLC(DuraShell C18, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN，10-50%)提纯残余物而得到标题化合物，为黄色固体(10 mg, 18%)。
LCMS m/z = 387 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) : δ = 1.71 (3H, d),2.40-2.47 (3H, m), 5.52-5.63 (1H, m), 6.56-6.64 (1H, m), 6.91 (2H, s), 7.05(1H, s), 7.88 (1H, d), 8.25 (1H, s), 8.30 (1H, d), 8.40 (1H, s), 8.47 (1H,s), 14.01 (1H, s)。
实施例76
2-氨基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 341256DEST_PATH_IMAGE103
通过按照实施例75的程序，由2-氨基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺(制备例222，95.7 mg, 0.17 mmol)制备标题化合物，为白色固体(13.49 mg, 18%)。
LCMS m/z = 433 [M+H]+。1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) : δ = 1.68 (3H, d),5.51 (1H, q), 6.60 (1H, t), 6.75 (2H, br s), 7.01 (1H, s), 7.07 (1H, d), 7.50(2H, br d), 7.71 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.23 (1H, s), 8.28 (1H, d), 8.39 (1H,s), 13.98 (1H, s)。
实施例76a
2-氨基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
在室温搅拌2-氨基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺(制备例222，1800mg, 3.2 mmol)在TFA(5 mL)中的溶液1小时。在真空中蒸干反应混合物并且通过CombiFlash(硅胶，DCM/MeOH=100/0至20/1)提纯残余物而得到部分提纯的产物(1100 mg)，为黄色固体。将固体溶于二氧杂环己烷(40 mL)和NH4OH(10 mL)并且在20°C搅拌该黄色溶液2小时。该黄色溶液被浓缩并且通过制备型HPLC(DAICEL CHIRALPAK AS，0.1%NH4OH/EtOH，40%)提纯而得到标题化合物，为黄色固体(475 mg, 34%)。
在8打兰(dram)小瓶中将固体吸收在EtOH(5 mL)中并且加热到65°C持续30分钟。将混合物冷却到室温并且搅拌浆料60小时。然后过滤混合物，用乙醇(2 mL)洗涤并且在真空下干燥1小时。收集固体并且进一步使用高真空并且加热到55°C持续16小时，干燥，然后在没有加热的情况下保持在高真空下达另外三天而得到标题化合物，为结晶固体，然后对其通过PXRD进行分析。
使用装备有Cu辐射源的Bruker AXS D8 Endeavor衍射计进行PXRD分析。发散狭缝设置在11mm连续照明。通过PSD-Lynx Eye检测器来检测衍射辐射，其中检测器PSD开口设置在2.949度。X射线管电压和电流分别设置到40kV和40mA。使用0.016度的步长和0.3秒的每步时间，在由3.0至40.0°2θ的Cu波长(CuKᾱλ=1.5418Å)下，在θ-θ测向计中收集数据。使用0.012mm厚的镍kβ过滤器。抗散射筛设置为自动模式。通过将样品置于硅低背景的样品夹持器并且在数据收集期间旋转来制备样品。使用Bruker DIFFRAC+软件收集数据且通过EVA衍射+软件进行分析。
对于标题化合物的晶型(形式1)的PXRD图提供于图3中。
实施例77
2-[6-{(1S)-1-[(2-氨基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙醇
Figure 500842DEST_PATH_IMAGE104
在10°C将TFA(1 mL)添加至(3-{(1S)-1-[1-(2-羟基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例220，114mg，0.215 mmol)在DCM(2 mL)中的溶液并且搅拌1小时。在真空中蒸干反应混合物并且通过制备型HPLC(DuraShell, 0.05% NH4OH水溶液/MeCN，23-43%)提纯残余物而得到标题化合物(7.8 mg, 43%)。
LCMS m/z = 431 [M+H]+. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) : δ = 1.80 (3H, d),2.53 (3H, s), 4.02 (2H, dt), 4.64-4.70 (2H, m), 5.82 (1H, q), 6.59 (1H, t),7.19 (2H, d), 7.86 (1H, d), 8.00 (1H, d), 8.19 (1H, s), 8.53 (1H, s)。
实施例78
(S)-6-(1-((2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d4)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
Figure 802510DEST_PATH_IMAGE105
在氮气下，250 mL三颈烧瓶装上(3-(1-(6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙氧基-1,2,2,2-d4)-6-氟喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例227，2.8g, 5.2 mmol)在1,4-二氧杂环己烷(50 mL)和水(25 mL)中的悬浮液。向此悬浮液中添加氢氧化钾(879mg, 15.7mmol)，二叔丁基(2',4',6'-三异丙基[1,1'-联苯]-2-基)磷烷(phosphane)(222 mg,522.0umol)和Pd2(dba)3(239 mg, 261.0umol)。在90°C加热混合物过夜，获得澄清暗红溶液。在冷却后，在降低的压力下浓缩混合物，得到红色固体以及棕色水悬浮液。向此混合物中添加50 mL饱和NH4Cl(水溶液)来中和碱。在真空中除去有机溶剂。将所得的水层溶于300mL DCM和65 mL EtOH。分离有机层，并且水层用100 mL DCM/20 mL EtOH萃取两次。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并且部分地在降低的压力下浓缩，此时在溶液中形成沉淀。通过过滤分离该沉淀物并且洗涤（3×5 mL EtOH）。在降低的压力下干燥残余物直到恒重，获得6-(1-((2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d4)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇(1.25g, 64.8%)，为灰白色固体。
LCMS m/z = 370.0 [M+H]+. 1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 6.50 (d, 1H), 6.60-6.55 (m, 1H), 7.20-7.05 (m, 3H), 7.30-7.35 (m, 3H), 7.42 (d, 1H), 7.45-7.55(m, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.82 (s, 1H)。
在手性柱上通过制备型SFC分离标题化合物。
实施例79
(S)-3-(1-((2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d4)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
Figure 631926DEST_PATH_IMAGE106
在15分钟的时间内在20°C向3-(1-((2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d4)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例229，1.35g,2.42 mmol)在MeOH(15 mL)和THF(10 mL)的混合溶剂中的搅拌溶液中滴加NaOH(966.76mg, 24.17mmol, 10当量)在H2O(15 mL)中的溶液。混合物的内部温度被增加到25°C。在5小时后，添加NH2NH2.H2O(3.63g, 72.53mmol, 3.53 mL)，然后将混合物加热至30°C。在16小时后，过滤混合物，并且用1NHCl水溶液将滤液酸化至pH≈6。沉淀物被过滤，并且滤饼用MeOH(2×5 mL)清洗。滤饼被悬浮在蒸馏H2O(20 mL)中并且冻干而得到3-(1-((2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d4)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(518 mg, 50.5%收率)，为白色固体。
LCMS m/z 414.8 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.67 (s, 1H), 6.71(t, 1H), 6.94-6.82 (m, 3H), 7.21-7.13 (m, 1H), 7.58 (d, 1H), 8.00-7.95 (m,2H), 8.26 (d, 1H), 8.41 (d, 1H)。
在手性柱上通过制备型SFC分离标题化合物。
实施例80
(S)-3-(3-(1-((2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮
Figure 284624DEST_PATH_IMAGE107
步骤1：在室温，向(S)-3-(1-((2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(制备例230, 940 mg, 1.80 mmol)在无水的MeOH(8 mL)和THF(8 mL)中的溶液中添加NH2OH.HCl(188 mg, 2.70 mmol)和Et3N(547 mg,5.41 mmol)并且在80°C搅拌该反应混合物16小时。在冷却至室温后，在真空中浓缩反应混合物而得到期望的羟基苯甲脒(756 mg)，为黄色固体，在没有进一步提纯的情况下将其用于下一步。
LCMS m/z 424.8 [M+1]+。
步骤2：向来自步骤1的羟基苯甲脒(756 mg)在1,4-二氧杂环己烷(16 mL)中的溶液中添加CDI(322 mg, 1.98 mmol)。将混合物加热至100°C达16小时。在冷却至室温后，在真空中浓缩反应混合物。通过用DCM:MeOH(100:0至75:25)的梯度洗脱的快速色谱法(硅胶)提纯残余物两次而得到黄色固体(540 mg)。进一步通过SFC(Daicel ChiralPak AD, 250mm×30mm×10um，等浓度的CO2:EtOH(0.1%NH4OH)，75:25)提纯黄色固体而得到标题化合物(240 mg, 30%)，为白色固体。
LCMS m/z 450.9 [M+1]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.68 (d, 3H), 5.78(q, 1H), 6.70 (pseudo t, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.80 (br s, 2H), 6.97-6.93 (m,1H), 7.21-7.15 (m, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.85 (dd, 1H), 7.97 (d, 1H), 8.19 (d,1H), 8.40 (d, 1H), 13.08 (br s, 1H)。
制备例1
1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
Figure 733054DEST_PATH_IMAGE108
向1-(5-溴-2-氟苯基)乙酮(1100 g, 5.07 mol)和1H-吡唑(414 g, 6.08 mol)在DMF(7000 mL)中的溶液中添加K2CO3(2099 g, 15.21 mol)并且在110°C搅拌所得的褐色悬浮液24小时。混合物被过滤并且用EtOAc(10 L)和H2O(4 L)稀释滤液。有机层被分离并且用H2O(3×3L)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。将残余物从石油醚:EtOAc(5:1)中再结晶，用100 mL的石油醚:EtOAc(5:1)洗涤该滤饼并且干燥而得到标题化合物，800g(59%)，为固体。
1H NMR (400 MHz, MeOD d4) δ: 1.98 (s, 3H), 6.56 - 6.60 (m, 1H), 7.49(d, 1H), 7.71 - 7.74 (m, 2H), 7.79 (dd, 1H), 8.07 (d, 1H)。
制备例2
3-乙酰基-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
Figure 92491DEST_PATH_IMAGE109
在CO(50psi)气氛下在85°C搅拌1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(制备例1，350g, 1.32 mol)，DPPP(45 g, 0.11 mol)，Pd(OAc)2(23.7g, 0.11 mol)和Et3N(307 g,3.04 mol)在MeOH:DMF(1894ml:494 mL)中的混合物20小时。将被冷却的混合物过滤并且在降低的压力下在真空中浓缩滤液。残余物被悬浮在EtOAc(5000 mL)中，混合物被过滤并且滤液用H2O(2×1000 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并且过滤。在真空中将有机溶液浓缩至300 mL并且冷却至0°C，导致固体形成。过滤悬浮液并且固体在真空中干燥而得到标题化合物，260g, 80%。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 2.05 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 6.65 (d, 1H),7.82-7.84 (m, 2H), 8.02 (d, 1H), 8.16 (d, 1H), 8.48 (d, 1H)。
制备例3
1-[5-羟基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
Figure 155125DEST_PATH_IMAGE110
H2O(10 mL)，随后1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(制备例1，2000 mg,7.54 mmol)在二氧杂环己烷(15 mL)中的溶液被添加至在钢管中的KOH(974 mg, 17.4mmol)，Pd2(dba)3(345 mg, 0.38 mmol)和tBuXPhos(320 mg, 0.75 mmol)的混合物。将混合物排空并且在氩气的气氛下在80°C搅拌16小时。使混合物冷却至室温，用3M HCl洗涤而达到4-5的pH，然后用EtOAc(3×30 mL)萃取，并且合并的有机溶液用盐水(50 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且蒸发。用EtOAc:石油醚(0:100至60:40)洗脱通过柱色谱法提纯所得的粗制材料而得到标题化合物，为黄色固体，40%。
LCMS m/z = 203 [M+H]+
制备例4
[3-乙酰基-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基]乙酸叔丁酯
Figure 91857DEST_PATH_IMAGE111
在室温在N2下，溴乙酸叔丁酯(1570 mg, 8.04 mmol)被添加至1-[5-羟基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(制备例3，650 mg, 3.21 mmol)和Cs2CO3(3140 mg, 9.64 mmol)在MeCN(30 mL)中的混合物并且搅拌该反应混合物16小时。该反应混合物用H2O(60 mL)稀释，用EtOAc(2×60 mL)萃取并且合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。用EtOAc:石油醚(0:100至30:70)洗脱通过柱色谱法提纯残余物而得到标题化合物，为淡黄色油，700 mg, 68.8%。
LCMS m/z = 317 [M+H]+
制备例5
2-[3-乙酰基-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酸甲酯
Figure 530929DEST_PATH_IMAGE112
在密封小瓶中用N2吹扫Ir[dF(CF3)ppy]2(dtbpy)PF6(25.4 mg, 0.023 mmol)，1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(制备例1，300 mg, 1.13 mmol)，一氯乙酸甲酯(184mg, 1.7 mmol)，三(三乙基甲硅烷基)硅烷(848 mg, 2.26 mmol)，和2,6-二甲基吡啶(364mg, 3.39 mmol)的混合物，然后添加DME(1.5 mL)。用N2吹扫NiCl2·甘醇二甲醚(12.4 mg,0.057 mmol)和4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶(15.2 mg, 0.057 mmol)在DME(1 mL)中的溶液，然后添加到反应小瓶并且在由蓝色Kessil LED灯的照射下搅拌该混合物16小时。通过暴露于空气将反应淬灭并且在真空中浓缩。将残余物在盐水和EtOAc之间分割，分离各层并且有机相用EtOAc(2×50 mL)萃取。合并的有机层被干燥(Na2SO4)，过滤并且在降低的压力下蒸发。通过用EtOAc:庚烷(0:100至50:50)洗脱在硅胶上快速色谱法提纯粗制棕色油而得到标题化合物，165 mg, 56%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 2.00 (s, 3H), 3.74 (s, 2H), 3.76 (s, 3H),6.51-6.53 (m, 1H), 7.42-7.77 (m, 5H)。
制备例6
3-[3-乙酰基-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]丙酸叔丁酯
Figure 744872DEST_PATH_IMAGE113
由1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(制备例1)和3-溴丙酸叔丁酯，按照制备例5中所述的程序，区别在于使用三(三甲基甲硅烷基)硅烷代替三(三乙基甲硅烷基)硅烷，制备标题化合物，77%收率(459 mg)。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.44 (s, 9H), 1.97 (s, 3H), 2.57-2.61 (m,2H), 2.97-3.01 (m, 2H), 6.49-6.50 (m, 1H), 7.36-7.41 (m, 3H), 7.72-7.73 (m,2H)。
制备例7
[3-乙酰基-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯
Figure 978408DEST_PATH_IMAGE114
向1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(制备例1，1000 mg, 3.77 mmol)，氨基甲酸叔丁酯(663 mg, 5.66 mmol)，Xantphos(437 mg, 0.75 mmol)和Cs2CO3(2460 mg,7.54 mmol)在无水1,4-二氧杂环己烷(40 mL)中的悬浮液中添加Pd(OAc)2(84.7 mg, 0.38mmol)，使混合物脱气，然后在N2下在100°C加热4小时。被冷却的反应混合物用H2O(20 mL)稀释并且用EtOAc(3×30 mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水(10 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在降低的压力下浓缩。通过用EtOAc:石油醚(0:100至25:75)洗脱的硅胶色谱法提纯粗产物而得到标题化合物，为灰色固体，446 mg, 39.2%。
LCMS m/z = 302 [M+H]+
制备例8
5-氯-4-氟-2-肼基苯甲酸盐酸盐
Figure 421677DEST_PATH_IMAGE115
将亚硝酸钠(57.3g, 831 mmol)在H2O(500 mL)中的溶液滴加至2-氨基-5-氯-4-氟苯甲酸(105 g, 554 mmol)在12M HCl(420 mL)和H2O(140 mL)中的冰冷却的混合物，使得保持温度低于5°C，然后搅拌该反应混合物30分钟。滴加氯化锡(II)二水合物(1.79g,7.91 mmol)/37%HCl(水溶液)(140 mL)，使得保持温度低于5°C并且在室温搅拌所得的悬浮液20小时。过滤悬浮液，用冷H2O和Et2O洗涤固体并且干燥而得到标题化合物，98.0g,86.5%，为黄色固体。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.25 (d, 1H), 8.01 (d, 1H), 9.30 (br s,1H)。
制备例9
5-溴-4-氟-2-肼基苯甲酸盐酸盐
Figure 70964DEST_PATH_IMAGE116
按照制备例8中所述的程序，由2-氨基-5-溴-4-氟苯甲酸制备标题化合物，为固体，78%收率(10.7 g)。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 7.12 (d, 1H), 7.98-8.13 (m, 1H), 9.05-9.53(m, 1H)。
制备例10
5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯
Figure 467310DEST_PATH_IMAGE117
将1,1,3,3-四甲氧基丙烷(118 g, 719 mmol)添加到5-氯-4-氟-2-肼基苯甲酸盐酸盐(制备例8, 98.0g, 479 mmol)在EtOH(1000 mL)中的溶液并且在100°C搅拌该反应混合物1小时。在真空中浓缩被冷却的反应混合物并且通过用石油醚:EtOAc(0:100至80:20)洗脱在硅胶上快速色谱法提纯残余物两次而得到标题化合物，为黄色固体，44.0g, 34.2%，黄色固体。
LCMS m/z = 269 [M+H]+。
制备例11
5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
Figure 934064DEST_PATH_IMAGE118
向5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯(制备例10, 13.5g, 50.25 mmol)/EtOH/THF/H2O(39mL/60mL/30 mL)的溶液中逐份加入LiOH(4.22g, 100 mmol)并且在室温搅拌该反应混合物1小时。混合物在真空中浓缩以除去有机溶剂，在冰浴中冷却并且添加1NHCl以达到pH 3。过滤所得的悬浮液，用H2O洗涤固体并且然后与甲苯共蒸发并且干燥而得到标题化合物，为苍白色固体，11.3g, 93.5%。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 6.55 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.82 (d, 1H),7.96 (d, 1H), 8.23 (s, 1H), 13.24 (br s, 1H)。
制备例12
5-溴-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
Figure 783071DEST_PATH_IMAGE119
在80℃搅拌5-溴-4-氟-2-肼基苯甲酸盐酸盐(制备例9, 9.2g, 36.94 mmol)和1,1,3,3-四甲氧基丙烷(8.49g, 51.7 mmol)在AcOH(30 mL)中的溶液3小时并且然后在室温搅拌48小时。该反应混合物小心地用饱和NaHCO3水溶液(400×3 mL)洗涤并且合并的水溶液用DCM(2×200 mL)洗涤。然后酸化合并的水层至pH 4并且用DCM(3×200 mL)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥并且在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为淡黄色固体, 8.5g,80.7%。
LCMS m/z = 285, 287 [M+H]+。
制备例13
5-氯-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺
Figure 501628DEST_PATH_IMAGE120
将DIPEA(7.0g, 72.07 mmol)添加到5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(制备例11, 7.0g, 29.09 mmol), N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(3.41g, 34.9 mmol)和HATU(16.6g, 43.6 mmol)在DMF(80 mL)中的溶液并且在室温搅拌该反应混合物16小时。将混合物倒入EtOAc(300 mL)并且用盐水(3×160 mL)洗涤，有机相用Na2SO4干燥并且在真空中浓缩。通过在硅胶上快速色谱法提纯粗产物，用石油醚:EtOAc(100:0至70:30)洗脱而得到标题化合物，为苍白色固体，6.4g, 78%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 3.28 (s, 3H), 3.37 (s, 3H), 6.49 (s, 1H),7.48 (d, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.81 (s, 1H)。
制备例14
5-溴-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺
Figure 565530DEST_PATH_IMAGE121
在室温向5-溴-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(制备例12，5.71g, 20.03 mmol)在DCM(32 mL)和DMF(32 mL)中的溶液中添加HOBt(3.03g, 22.4 mmol)，EDC.HCI(4.30g,22.4 mmol)，N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(2.44g, 25.0 mmol)和DIPEA(4.36 mL, 25.0mmol)并且搅拌该反应混合物19小时。在真空中浓缩反应混合物，然后用EtOAc(200 mL)稀释并且用H2O(100 mL)洗涤。分离有机层并且水相用EtOAc(2×80 mL)萃取。合并的有机萃取物用H2O(80 mL)和盐水(80 mL)洗涤，然后在降低的压力下蒸发。用EtOAc:石油醚(0:100至50:50)洗脱，通过硅胶柱色谱提纯粗制品，而得到标题化合物，为黄色胶。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 3.24 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 6.46 (br s, 1H),7.40 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.79 (s, 1H)。
制备例15
1-[5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
Figure 140868DEST_PATH_IMAGE122
MeMgBr(3.4 M，在2-MeTHF中，60.9 mL, 207 mmol)被滴加至5-氯-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺(制备例13，23.5g, 82.8 mmol)在THF(350 mL)中的冰冷却的溶液，搅拌该反应混合物10分钟，然后使其升温至室温并且搅拌另外18小时。在降低的压力下在没有加热的情况下除去THF并且残余物在饱和NH4Cl溶液和EtOAc之间分割。有机层用H2O、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩至大约其体积的1/3。将所得的固体溶于DCM并且在真空中浓缩溶液至大约其体积的1/3。过滤所得的悬浮液，用己烷和Et2O洗涤固体并且干燥而得到标题化合物，13.23g。在降低的压力下蒸发滤液，用己烷:EtOAc(100:0至50:50)洗脱，在Redisep® GOLD柱上通过硅胶色谱法提纯黄色固体而得到另外的化合物，2.3g。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 2.04 (s, 3H), 6.58 (s, 1H), 7.28 (d, 1H),7.65-7.78 (m, 3H)。
制备例16
1-[5-溴-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
Figure 414855DEST_PATH_IMAGE123
在-70°C，向5-溴-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺(制备例14，7.05g, 21.48 mmol)在THF(221 mL)中的溶液中滴加MeMgBr(21.5 mL, 64.5mmol, 3.0M，在Et2O中)并且在-70°C搅拌该反应混合物30分钟并且然后使其升温至室温并且搅拌30分钟。反应用冰冷的1N HCl溶液(160 mL)淬灭并且用EtOAc(300 mL)稀释。水层用EtOAc(2×100 mL)萃取并且在降低的压力下蒸发合并的有机萃取物。用EtOAc:石油醚(0:100至80:20)洗脱，通过柱色谱法(硅胶)提纯残余物而得到标题化合物，为黄色固体，3.38g, 55.6%。
LCMS m/z = 283 [M+H]+。
制备例17
3-乙酰基-4-溴-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺
Figure 733841DEST_PATH_IMAGE124
在0°C在10分钟内向3-乙酰基-4-溴苯-1-磺酰氯(500 mg, 1.68 mmol)和Et3N(340 mg, 3.36 mmol)在DCM(5 mL)中的溶液中添加双(4-甲氧基苄基)胺(865 mg, 3.36mmol)并且在室温搅拌该反应混合物16小时。该反应混合物用EtOAc(50 mL)稀释，用HCl(1M，10 mL)淬灭并且分离各层。有机相用饱和NaHCO3(水溶液)溶液(26 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并且在真空中浓缩而得到白色固体。用EtOAc:庚烷洗脱，对此通过硅胶柱色谱提纯而得到标题化合物，580 mg, 67%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 2.52 (s, 3H), 3.74 (s, 6H), 4.20 (s, 4H),6.72 (d, 4H), 6.94 (d, 4H), 7.54-7.62 (m, 3H)。
制备例18
3-乙酰基-N,N-双(4-甲氧基苄基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯磺酰胺
Figure 167096DEST_PATH_IMAGE125
在N2下，在105°C搅拌3-乙酰基-4-溴-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺(制备例17，450 mg, 0.87 mmol)，K2CO3(360 mg, 2.60 mmol)，1H-吡唑(177 mg, 2.60 mmol)，CuI(49.6 mg, 2.60 mmol)和(R,R)(-)-N,N’-二甲基-1,2-环己烷二胺(30.9 mg, 2.60 mmol)在DMF(3 mL)中的混合物16小时。在真空中浓缩冷却的混合物并且残余物在DCM和NaHCO3水溶液之间分割并且分离各层。水相用DCM(3×5 mL)萃取，合并的有机萃取物用Na2SO4干燥并且在降低的压力下蒸发。用EtOAc:庚烷(0:100至50:50)洗脱，在硅胶柱上提纯粗制材料而得到标题化合物，305 mg, 70%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 2.10 (s, 3H), 3.81 (s, 6H), 4.32 (s, 4H),6.59 (s, 1H), 6.80 (d, 4H), 7.08 (d, 4H), 7.45 (d, 1H), 7.82-7.95 (m, 4H)。
制备例19
1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇
Figure 851018DEST_PATH_IMAGE126
向1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(制备例1，20.0g，75.44 mmol)在MeOH(200 mL)和THF(200 mL)中的冰冷溶液中逐份加入NaBH4(3.43g, 90.5 mmol)。在0°C搅拌该反应混合物1小时，然后在室温搅拌另外的30分钟。混合物用HCl(1N，30 mL)和H2O(100mL)稀释并且用EtOAc(3×100 mL)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。用EtOAc:石油醚(0:100至60:40)洗脱，通过柱色谱法(硅胶)提纯残余物而得到标题化合物，为棕色油状液体，17.76g, 88%。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 1.14 (d, 3H), 4.73-4.84 (m, 1H), 5.37 (d,1H), 6.47-6.54 (m, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.57 (dd, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.84 (d,1H), 8.03 (d, 1H)。
制备例20至23
Figure 409039DEST_PATH_IMAGE127
根据制备例19中所描述的程序通过还原适当的乙酮制备下表中的各醇。
20<sup>A</sup>
Figure 344765DEST_PATH_IMAGE128
2-[3-(1-羟基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酸甲酯, 120 mg (74%) 1H NMR (400MHz,CDCl3)δ: 1.41 (d, 3H), 3.72-3.75 (m, 5H), 4.68-4.73 (m, 1H), 5.10 (d, 1H), 6.51-6.53 (m, 1H),7.28-7.35 (m, 3H), 7.52 (s, 1H), 7.55 (dd, 1H)
21<sup>A</sup>
Figure 304630DEST_PATH_IMAGE129
1-[5-溴-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇，黄色胶，定量收率；LCMS m/z = 267 [M-H2O]+
22<sup>A</sup>
Figure 159454DEST_PATH_IMAGE130
1-[5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇，10.8g(97%), 为无色油；1H NMR (400MHz, CDCl3)δ: 1.45 (d, 3H), 4.72-4.75 (m, 1H), 6.56 (s, 1H), 7.15 (d, 1H), 7.66-7.80 (m, 3H)。
23
Figure 798246DEST_PATH_IMAGE131
3-(1-羟基乙基)-N,N-双(4-甲氧基苄基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯磺酰胺，205 mg (67%)，为白色固体； 1H NMR (400MHz, CDCl3)δ: 1.43 (d, 3H), 3.81 (s, 6H), 4.34 (s, 4H), 4.72-4.75 (m, 1H),6.58 (s, 1H), 6.80 (d, 4H), 7.08 (d, 4H), 7.42 (d, 1H), 7.82-7.85 (m, 3H), 8.08 (s, 1H)。
A MeOH用作反应溶剂
制备例24至26
Figure 459034DEST_PATH_IMAGE132
根据制备例19中所描述的程序通过还原适当的乙酮制备下表中的各醇，并且然后使用所描述的条件通过SFC提纯。
24<sup>B</sup>
Figure 211090DEST_PATH_IMAGE133
{3-[(2R)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基}乙酸叔丁酯，柱∶Chiralpak AS-H，85% CO2，(15% MeOH+0.1% 7N NH3/MeOH)，流速：60mL/min，峰1，199 mg, 37.5%, 无色油1H NMR (400MHz,CDCl3) δ:1.38 (d, 3H), 1.51 (s, 9H), 4.58 (s, 2H), 4.60-4.66 (m, 1H), 4.83 (d, 1H), 6.47 (dd,1H), 6.87 (dd, 1H), 7.13 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.65 (d, 1H), 7.72 (d, 1H).
25<sup>A</sup>
Figure 564710DEST_PATH_IMAGE134
3-{3-[(1R)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}丙酸叔丁酯，柱：Chiral TechIG 250mm×21.2mm 5um，80% CO2，20%(MeOH+0.2% 7N NH3/MeOH)，流速：80 mL/min，分离的峰1，125 mg, 27% SFC分析条件：Chiral Tech IG 250mm×4.6mm 5um柱 CO2:(MeOH+0.2%7N NH3/MeOH)从5:95至40:60 在8分钟内，以3mL/min，RT=5.542 min(峰1)
26<sup>A</sup>
Figure 910372DEST_PATH_IMAGE135
{3-[(1R)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}氨基甲酸叔丁酯，柱：AD(250mm×30mm 5um)，70% CO2，30%(MeOH+0.2% 7N NH3/EtOH)，流速：60mL/min，分离的峰1，235 mg, 38%，为无色液体；1H NMR (400MHz,DMSO-d6) δ: 1.13 (d, 3H), 1.50 (s, 9H), 4.60-4.69 (m, 1H), 5.16 (d, 1H), 6.47 (dd, 1H), 7.16 (d,1H), 7.39 (dd, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.91 (d, 1H), 8.54 (s, 1H)。
A MeOH用作反应溶剂
B 仅仅0.6当量的NaBH4用于反应。
制备例27
3-［(1S)-1-羟基乙基］-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
Figure 312535DEST_PATH_IMAGE136
搅拌3-乙酰基-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例2，200g, 0.81mol)和DCM(0.8 L)20分钟并且用N2吹扫。在-50°C在2小时内将(-)-DIP-Cl(965mL, 1.64mol)滴加至反应混合物并且然后在15°C搅拌混合物。在降低的压力下浓缩反应混合物并且将残余物溶于MTBE(4 L)。添加2,2'-亚氨基二-1-乙醇(350 g, 3.30 mol)并且在20°C搅拌溶液3小时。过滤混合物，蒸发滤液并且用石油醚:EtOAc(90：10至80：20)洗脱，通过硅胶柱提纯粗产物而得到粗产物。在40°C将此溶于MTBE(1 L)，添加正己烷(1.6 L)，在20°C搅拌悬浮液12小时，然后过滤并且在30°C在真空下干燥固体而得到标题化合物，191g, 47.6%。RT=3.274分钟(AD-3 150mm×4.6mm 3um柱，CO2:0.1% TFA/EtOH，由5:95至45:65，在7.5分钟内，以2.5mL/min)。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.46 (d, 3H), 3.95 (s, 3H), 4.81 (q, 1H),5.15 (br s, 1H), 6.53 (s, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.78 (s, 2H), 8.03 (d, 1H), 8.31(s, 1H)。
备选方法
将3-乙酰基-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例2，30g, 120 mmol)在DMSO(200 mL)中的混合物加热至50°C而形成溶液，然后使其冷却至室温。在35°C将KRED101(12g)，ADH-101(1 g)和NADP+(500 mg)溶于pH 7.5磷酸钾缓冲液(500 mL)并且添加到2L具有高架搅拌的反应器，用另外的缓冲液(250 mL)冲洗。添加IPA(50 mL)，随后缓慢添加酮/DMSO溶液并且在35°C搅拌该反应混合物7小时。添加另外的ADH-101(500 mg)和NADP+(250mg)/缓冲液(总计10 mL)并且搅拌该反应混合物14小时。再一次添加另外的ADH-101(500mg)和NADP+(250 mg)/缓冲液(10 mL 总计)并且搅拌该反应混合物8小时。再一次添加另外的ADH-101(250 mg)和NADP+(125 mg)并且搅拌该反应混合物另外的14小时。EtOAc(500mL)被添加至被冷却的反应混合物，并且搅拌该混合物30分钟。反应器的内容物被转移到2L瓶子，添加Celite®，并且搅拌该混合物另外的30分钟。将混合物滤过H2O-润湿的Celite®，同时用EtOAc(100 mL)冲洗。MeOH(20 mL)被添加至滤液，分离各层并且有机层用盐水(400mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。10%(IPA/iPrOAc)(500 mL)被添加至水相并且有力地搅拌该混合物，然后再次过滤通过H2O润湿的Celite®。MeOH(20 mL)被添加至滤液，分离各层并且有机层用盐水(400 mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。合并的有机层被过滤，滤液被合并并且在降低的压力下浓缩，与庚烷一起共沸而得到28g的粗产物。将此与根据相同方法制备的另外批次的13.14 g粗产物结合并且将固体悬浮在MTBE(120 mL)中。在回流下加热悬浮液并且热混合物被过滤而除去不溶性物质。将滤液冷却到0°C，添加庚烷并且搅拌所得的悬浮液1小时，然后使其升温至室温。将固体过滤掉并且在真空中干燥而得到标题化合物，为白色固体，35.2g。
LCMS m/z = 269 [M+Na]+。
制备例28
3-[(1R)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
Figure 246993DEST_PATH_IMAGE137
Pd(OAc)2(1870 mg, 8.33 mmol)被逐份添加到1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇(制备例19，44.5g, 166.6 mmol)，Et3N(116 mL, 833 mmol)和DPPP(6.87g, 16.7mmol)在MeOH(500 mL)中的溶液中并且在80°C在CO(50psi)下搅拌该反应混合物48小时。被冷却的反应混合物被过滤并且在降低的压力下蒸发。用EtOAc:石油醚(0:100至60:40)洗脱，通过柱色谱法(硅胶)提纯残余物而得到浅棕色液体，34.0g, 83%。一些产物通过SFC，使用Chiralpak AD-H250x30 5u柱并且用25%(0.1%NH3水溶液/EtOH)洗脱，以60mL/min的流速，提纯而得到标题化合物(峰1), 为无色油，454 mg, 47.8%。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ : 1.17 (d, 3H), 3.90 (s, 3H), 4.91-5.01 (m,1H), 5.40 (d, 1H), 6.53-6.58 (m, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.94 (dd,1H), 8.14 (d, 1H), 8.35 (d, 1H)。
制备例29
2-氟-5-[(1R)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
Figure 833832DEST_PATH_IMAGE138
根据制备例28中所描述的程序，由1-[5-溴-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇(制备例21)制备标题化合物，64%收率(2.0 g)，为白色固体。进一步通过SFC，使用AY(250mmx30mm 10u)柱，用20%(0.1%NH3水溶液/EtOH)洗脱，以50mL/min的流速，提纯产物而得到标题化合物，42.4%收率，黄色固体。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.48 (d, 3H), 3.98 (s, 3H), 4.76-4.85 (m,1H), 5.06 (d, 1H), 6.55-6.59 (m, 1H), 7.12 (d, 1H), 7.79-7.81 (m, 2H), 8.23(d, 1H)。
制备例30和31
3-(1-羟基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈
和
3-[(1R)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈
Figure 588161DEST_PATH_IMAGE139
Figure 794015DEST_PATH_IMAGE140
用N2(g)鼓泡1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇(制备例19，1.8g, 6.7mmol)，Zn(CN)2(2.37g, 20.2 mmol)，和Pd(PPh3)4(779 mg, 0.674 mmol)在无水DMF(15mL)中的混合物5分钟。管被立即密封并且加热到140°C达7小时。将H2O(20 mL)，随后EtOAc(40 mL)添加到冷却的混合物。过滤所得的悬浮液，滤液用EtOAc(3×30 mL)萃取并且合并的有机层用H2O(20 mL)和盐水(20 mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩而得到棕色油。粗产物通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至30：70)洗脱，提纯而得到3-(1-羟基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(制备例30), 为无色油，1320 mg, 92%。将其通过SFC，使用Chiralpak AD-H柱，用30%(0.1%NH3水溶液/EtOH)洗脱，提纯而得到3-[(1R)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(制备例31), 为无色油，335 mg, 48%。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 1.17 (d, 3H), 4.97-5.00 (m, 1H), 5.47 (d,1H), 6.58 (s, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.88 (d, 1H), 8.10 (s, 1H),8.18 (s, 1H)。
制备例32
2-氟-5-[(1R)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈
Figure 582979DEST_PATH_IMAGE141
二氧杂环己烷(125 mL)和H2O(125 mL)被添加至1-[5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇(制备例22，11.11g, 46.2 mmol)，K4[Fe(CN)6]*3H2O(11.7g, 27.7 mmol)，tBuXPhos-Pd Gen-3预催化剂(220 mg, 0.28 mmol)和tBuXPhos(118 mg, 0.277 mmol)的混合物并且在N2下使混合物脱气。在100°C加热反应混合物18小时，然后添加另外的tBuXPhos-Pd Gen-3预催化剂(110 mg, 0.14 mmol)和tBuXPhos(59 mg, 0.139 mmol)。使混合物脱气并且在100°C加热另外的22小时。添加另外的K4[Fe(CN)6]*3H2O(11.7g, 27.7mmol)，tBuXPhos-Pd Gen-3预催化剂(220 mg, 0.28 mmol)和tBuXPhos(118 mg, 0.277mmol)，使混合物脱气并且在100°C搅拌该反应混合物另外的24小时。冷却的混合物在真空中浓缩，水溶液用DCM稀释，所得的悬浮液被过滤而除去固体，并且分离各层。有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。粗产物通过色谱法，使用80g RediSep GOLD硅胶柱，用己烷:EtOAc洗脱，提纯而得到标题化合物，为淡黄色油，1.07g。将其进一步通过SFC，RT = 3.781分钟，(LUX Amylose-1250mm×4.6mm 5um柱)，用CO2:0.2%NH4+MeOH，5:95至40:60洗脱，在8分钟内，以3mL/min，提纯而得到标题化合物，490 mg, 4.6%。
制备例33
1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲腈(picolinonitrile)
Figure 88522DEST_PATH_IMAGE142
Cs2CO3(26.7g, 82 mmol)被添加至1H-吡唑(11.2g, 164 mmol)在DMF(250 mL)中的溶液并且在室温搅拌该混合物45分钟。添加3-溴-吡啶-2-甲腈(10 g, 55 mmol)，CuI(1.04g, 5.46 mmol)和(R,R)(-)-N,N’-二甲基-1,2-环己烷二胺(0.466g, 3.28 mmol)并且在N2下，在130°C搅拌该反应混合物12小时。NH3水溶液(300 mL)被添加至被冷却的反应混合物并且混合物用EtOAc(2×250 mL)萃取。合并的有机层用盐水(3×500 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过在硅胶上快速色谱法，用石油醚:EtOAc(100:0至50:50)洗脱，提纯粗产物而得到期望的产物，为白色固体，8.6g, 92%。
LCMS m/z = 171 [M+H]+。
制备例34
1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
Figure 533410DEST_PATH_IMAGE143
将K2CO3(66.2g, 479 mmol)添加到1-(6-溴-3-氟-4-(三乙基甲硅烷基)吡啶-2-基)乙酮(WO2016071211，103g, 160 mmol)并且1H-吡唑(10.9g, 160 mmol)在无水MeCN(1300 mL)中的悬浮液并且在80°C搅拌该反应混合物16小时。冷却的混合物被过滤，用MeCN(3×60 mL)冲洗并且合并的滤液在降低的压力下蒸发。通过在硅胶上快速色谱法，用EtOAc:石油醚(0:100至20:80)洗脱，提纯粗产物而得到标题化合物，为棕色油，14.8g,34.8%。
LCMS m/z = 268 [M+H]+。
制备例35
5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲腈
Figure 339692DEST_PATH_IMAGE144
在20°C搅拌3,5-二氟-吡啶-2-甲腈(21.59g, 0.154mol)，1H-吡唑(10.5g,0.154mol)和K2CO3(53.2g, 0.385mol)在MeCN(1000 mL)中的混合物16小时。反应混合物被过滤并且在真空中浓缩滤液。在硅胶上经由快速色谱法，两次，用石油醚:EtOAc(100:0至50:50)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为白色固体，15.2g, 52.5%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 6.63 (dd, 1H), 7.87 (d, 1H), 8.09 (dd, 1H),8.46 (d, 1H), 8.53 (d, 1H)。
制备例36
1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
Figure 45480DEST_PATH_IMAGE145
MeMgBr(3M，在Et2O中，49.9 mL, 150 mmol)被添加至1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲腈(制备例33，8.50g, 49.95 mmol)在THF(250 mL)中的搅拌溶液并且在25°C搅拌该反应混合物16小时。反应用HCl水溶液淬灭并且用EtOAc(2×200 mL)萃取。合并的有机萃取物用饱和NaHCO3水溶液(200 mL)和盐水(3×200 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩而得到暗棕色油。将此通过在硅胶上色谱法，用石油醚:EtOAc(100：0至60:40)洗脱，提纯而得到标题化合物，为黄色油，6.15g, 65.8%。
LCMS m/z = 188 [M+H]+。
制备例37
6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯
Figure 911805DEST_PATH_IMAGE146
在室温，向1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(制备例34，5.30g, 19.92mmol)在MeOH(53 mL)中的悬浮液中添加DPPP(1640 mg, 3.99 mmol)，Pd(OAc)2(447 mg,1.99 mmol)和Et3N(13.9 mL, 99.6 mmol)。用N2(g)使混合物脱气并且在80°C在50psi的CO下加热反应混合物68小时。冷却的混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至100:0)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为黄色固体，3.7g,75.4%。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 2.52 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 6.64 (dd, 1H),7.83 (d, 1H), 8.29 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 8.51 (d, 1H)。
制备例38
6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸
Figure 578409DEST_PATH_IMAGE147
LiOH(200 mg, 8.35 mmol)被添加至6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯(制备例37，700 mg, 2.85 mmol)在THF/MeOH/H2O(6mL/6mL/6 mL)中的溶液并且在20°C搅拌该反应混合物2小时。该反应混合物用另外的DCM/MeOH/H2O(50mL/5mL/50 mL)稀释，使用浓HCl将pH调节到4并且分离各层。水相用DCM/MeOH(5×50mL/5 mL)萃取并且合并的有机相被过滤并且在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为淡黄色固体，660 mg, 100%。
LCMS m/z = 232 [M+H]+。
制备例39
6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酰胺
Figure 267011DEST_PATH_IMAGE148
在20°C搅拌6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸(制备例38，750 mg, 3.24mmol)，HOBt(877 mg, 6.49 mmol)，EDC.HCl(1.24g, 6.49 mmol)和Et3N(1.41 mL, 9.73mmol)在DMF(10 mL)中的混合物0.5小时。添加NH4Cl(521 mg, 9.73 mmol)并且在20°C搅拌该反应混合物16小时。在真空中浓缩反应混合物并且通过在硅胶上快速色谱法，用EtOAc:MeOH(30:70)洗脱提纯残余物而得到标题化合物，为黄色固体，470 mg, 63%。
LCMS m/z = 231 [M+H]+。
制备例40
1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
Figure 30568DEST_PATH_IMAGE149
在0°C，将MeMgBr(213 mL, 638mmol, 3 M，在Et2O中)滴加至5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲腈(制备例35，30.0g, 159.4 mmol)在THF(1300 mL)中的无色溶液并且在室温搅拌该反应混合物3小时。将反应混合物倒入1M HCl水溶液(360 mL)/冰，搅拌该混合物30分钟，然后用5M NaOH处理直到pH约7至8。所得的溶液用EtOAc(100 mL×2)萃取，合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。橙色胶通过柱色谱法(硅胶)，用石油醚:EtOAc(100:0至80:20)洗脱，提纯而得到标题化合物，为黄色油，19.5g, 60%。
LCMS m/z = 206 [M+H]+。
制备例41
1-[5-氟-1-氧化-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
Figure 739898DEST_PATH_IMAGE150
m-CPBA(66.9g, 330 mmol)被添加至1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(制备例40，27.05g, 131.83 mmol)在DCM(400 mL)中的溶液并且在45°C搅拌该反应混合物64小时。反应混合物被滤过Celite®的薄垫并且用DCM(100 mL)洗涤。6M KOH水溶液(100mL)被添加至滤液并且搅拌溶液20分钟。分离有机层，用饱和Na2SO3水溶液(每次在室温搅拌20分钟，3×200 mL)洗涤并且然后在真空中浓缩。粗产物通过柱色谱法(120g硅胶)，用EtOAc:石油醚(15:85至100:0)洗脱两次，提纯而得到标题化合物，为黄色固体，14.48g,50%。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3.14 (s, 3H), 6.51 (dd, 1H), 7.23 (dd, 1H),7.70 (d, 1H), 7.81 (d, 1H), 8.08 (dd, 1H)。
制备例42
1-[6-溴-5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
Figure 549591DEST_PATH_IMAGE151
在75°C加热1-[5-氟-1-氧化-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(制备例41，13.1g, 59.23 mmol)/THF(300 mL)15分钟直到获得溶液。分三份添加新鲜的POBr3(34.0g,118 mmol)并且在75°C搅拌该反应混合物1小时。将冷却的混合物倒入饱和Na2CO3溶液(500mL)并且用EtOAc(100 mL)稀释。分离各层，水层用EtOAc(100 mL)萃取并且有机相在真空中浓缩。通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至25:75)洗脱两次，提纯残余物而得到标题化合物，为白色固体，15.4%。
LCMS m/z = 284 [M+H]+。
制备例43
6-乙酰基-3-氟-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯
Figure 697675DEST_PATH_IMAGE152
在CO(45psi)下在室温搅拌1-[6-溴-5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(制备例42，1000 mg, 3.52 mmol)，DIPEA(1.84 mL, 10.6 mmol)和Pd(tBu3P)2(198 mg,0.387 mmol)在MeOH(70.4 mL)中的混合物18小时。在真空中浓缩反应混合物并且通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至70:30)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为红黄色固体，73%。
LCMS m/z =264 [M+H]+。
制备例44
{[6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙酸叔丁酯
Figure 253421DEST_PATH_IMAGE153
用N2使1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(制备例34，1.50g, 5.64mmol)，2-羟基乙酸叔丁酯(1.49g, 11.3 mmol)，Cs2CO3(9.18g, 28.2 mmol)，tBuXPhos(239mg, 0.56 mmol)和tBuXPhos-Pd Gen-3(224 mg, 0.28 mmol)在二氧杂环己烷(15 mL)中的混合物脱气5分钟并且在80°C搅拌16小时。被冷却的反应混合物用EtOAc(60 mL)稀释并且用H2O(60 mL)洗涤。有机层用Na2SO4干燥并且在降低的压力下蒸发。通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至50:50)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为黄色油，990 mg,55%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.48 (s, 9H), 2.54 (s, 3H), 4.85 (s, 2H),6.46 (dd, 1H), 7.10 (d, 1H), 7.69 (dd, 2H), 7.79 (d, 1H)。
制备例45
乙酸2-{[6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙酯
Figure 195970DEST_PATH_IMAGE154
由1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(制备例34)和乙酸2-羟乙酯，按照制备例44中所述的程序，获得标题化合物，为黄色胶，138 mg, (13%)。
LCMS m/z = 290 [M+H]+。
制备例46
1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
Figure 712533DEST_PATH_IMAGE155
NaBH4(2450 mg, 64.9 mmol)被添加至1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(制备例36，6.07g, 32.43 mmol)在MeOH(162 mL)中的溶液，溶液用N2吹扫并且在30°C搅拌该反应混合物1小时。反应用丙酮淬灭，混合物被过滤并且滤液在真空中浓缩。粗产物通过柱色谱法，在硅胶上快速色谱法，用石油醚:EtOAc(100:0至80:20)洗脱提纯而得到标题化合物，为黄色油，4.1g, 67%。
LCMS m/z = 190 [M+H]+。
制备例47
6-(1-羟基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酰胺
Figure 664308DEST_PATH_IMAGE156
NaBH4(154 mg, 4.08 mmol)被添加至6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酰胺(制备例39，0.47g, 2.04 mmol)在无水EtOH(20 mL)中的溶液并且在20°C搅拌该反应混合物1小时。在真空中浓缩反应混合物并且通过柱色谱法，在硅胶上，用MeOH:DCM(4:96)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为白色固体，260 mg, 54.8%。
LCMS m/z = 233 [M+H]+。
制备例48至50
Figure 340140DEST_PATH_IMAGE157
根据制备例47中所描述的程序通过还原适当的乙酮制备下表中的各醇，并且使用所描述的SFC条件分离对映体。
48<sup>A,B</sup>
Figure 781486DEST_PATH_IMAGE158
乙酸2-({6-[(1R)-1-羟基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}氧基)乙酯，柱：Chiralpak AY，75%CO2，25%EtOH，分离的峰1，180 mg, 45.5%收率；1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ: 1.37 (d,3H), 2.12 (s, 3H), 4.37-4.42 (m, 1H), 4.44-4.49 (m, 2H), 4.61-4.65 (m, 2H), 4.77-4.79 (m,1H), 5.31 (d, 1H), 6.50 (dd, 1H), 6.80 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.74 (d, 1H).
49<sup>C</sup>
Figure 175558DEST_PATH_IMAGE159
({6-[(1R)-1-羟基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}氧基)乙酸叔丁酯，柱：Chiralpak IC-H，80% CO2，20%(0.1%NH3水溶液/IPA)，分离的峰2，为无色油，224 mg, 86.2%；1H NMR(400MHz, CDCl3) δ: 1.34 (d, 3H), 1.49 (s, 9H), 4.33-4.35 (m, 1H), 4.70-5.00 (m, 3H), 6.50(d, 1H), 6.90 (d, 1H), 7.51-7.67 (m, 2H), 7.74 (d, 1H).
50<sup>C</sup>
Figure 744074DEST_PATH_IMAGE160
3-氟-6-[(1R)-1-羟基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯，柱：C2，80% CO2，20%IPA，分离的峰2，为黄色固体，445 mg, 46%；1H NMR (400MHz, CDCl3) : δ: 1.41 (d, 3H), 4.03 (s,3H), 4.34-4.79 (m, 1H), 5.13-5.18 (m, 1H), 6.59 (dd, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.83 (dd, 2H)。
A MeOH用作反应溶剂
B 仅仅0.6当量的NaBH4用于反应
C 仅仅0.8当量的NaBH4用于反应。
制备例51
6-[(1R)-1-羟基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯
Figure 336729DEST_PATH_IMAGE161
向6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯(制备例37，800 mg, 3.26mmol)在THF(8 mL)和MeOH(8 mL)中的溶液中逐份添加NaBH4(98.7 mg, 2.61 mmol)，并且在0°C搅拌该反应混合物5分钟。反应用NaHCO3水溶液(20 mL)淬灭并且用EtOAc(3x20 mL)萃取。合并的有机层用盐水(50 mL)洗涤，并且用Na2SO4干燥，过滤并且在降低的压力下蒸发。通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(10:90至80:20)洗脱，提纯残余物而得到无色的油，690 mg, 85.5%。将其进一步通过SFC，使用Lux Cellulose-2，用25%(0.1%NH3水溶液/IPA)洗脱，提纯而得到标题化合物，为峰2，353 mg, 42.7%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.35 (d, 3H), 4.02 (s, 3H), 4.78 (d, 1H),5.18-5.20 (m, 1H), 6.51-6.63 (m, 1H), 7.73-7.87 (m, 3H), 8.16 (d, 1H)。
制备例52
(1R)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
Figure 824342DEST_PATH_IMAGE162
1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(制备例34，50.0g, 190 mmol)被溶解于温(50°C)DMSO(40 mL)，并且使所得的溶液冷却至室温。D+葡萄糖(40.8g, 225 mmol)在0.1M pH 7缓冲液(500 mL)中的溶液被添加至具有pH控制器的2L反应器，用另外的缓冲液(100 mL)清洗。添加NADP+(250 mg)，GDH-CDX901(250 mg)和KRED101(5.0 g)在缓冲液(200 mL)中的溶液，用另外的缓冲液(150 mL)清洗并且在30°C搅拌该混合物。以大约10.0mL等份添加1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮的溶液并且在30°C搅拌该反应混合物。监视反应混合物的pH并且通过添加2N NaOH进行调节来保持7.0的pH直到不再需要添加。添加10%IPA/iPrOAc(600 mL)并且搅拌该混合物1小时。反应器被排空并且用另外的10%IPA/iPrOAc(300 mL)清洗。添加Celite®(40 g)，有力地搅拌该混合物0.5小时，并且然后滤过H2O-润湿的Celite®垫，用10%IPA/iPrOAc(100 mL)冲洗。分离滤液，用10%IPA/iPrOAc(30mL)搅拌水层并且再次滤过Celite®。合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并且在降低的压力下浓缩，与庚烷一起共沸。在真空下干燥所得的产物而得到标题化合物，为固体，47g。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.39 (d, 3H), 4.98 (q, 1H), 6.57 (s, 1H),7.28-7.7.82 (m, 4H)。RT=4.43分钟。HPLC分析状况：XBridge C18 4.6mm×150mm×5u。MeCN:H2O，5:95至100:0，在7分钟内，以1.5mL/min。
制备例53
(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
Figure 236869DEST_PATH_IMAGE163
在DMSO(40 mL)中在50°C保温1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(制备例40，100g, 487 mmol)直到获得溶液，然后冷却溶液。添加葡萄糖(106 g, 406 mmol)和pH7磷酸钾缓冲液(0.1M，800 mL)，并且在30°C搅拌该混合物直到获得溶液。pH被调节到6.5，添加NADP+(500 mg)，GDH-CDX901(500 mg)和KRED101(5.0 g)，以固体形式，用缓冲液(200mL)冲洗。搅拌该混合物5分钟并且然后连同2M NaOH以10mL计量添加1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮溶液，以致保持pH在6.5。一旦280 mL 的2M NaOH已经添加，在室温搅拌该反应混合物18小时。混合物用EtOAc(800 mL)稀释并且搅拌1小时。添加Celite®(50g)，搅拌该混合物230分钟，然后滤过H2O润湿的Celite®垫，用EtOAc冲洗并且分离滤液。水相用EtOAc(2×400 mL)萃取，合并的有机萃取物用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为浅黄色固体，99.6g。
1H NMR (400MHZ, CDCl3) δ: 1.36 (d, 3H), 4.47-4.49 (m, 1H), 4.98-5.02(m, 1H), 6.55 (s, 1H), 7.48-7.83 (m, 3H), 8.56 (s, 1H)。
制备例54
1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
Figure 592764DEST_PATH_IMAGE164
在0°C，向5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲腈(制备例35，3.59g, 19.08 mmol)在THF(90.9 mL)中的溶液中添加MeMgBr(3M，在2-MeTHF中，19.1 mL, 57.2 mmol)，使反应混合物升温至室温并且搅拌30分钟。反应用6N HCl中和，并且用EtOAc萃取。水层用饱和Na2CO3水溶液淬灭并且用EtOAc(3x)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在降低的压力下蒸发。将残余物溶于MeOH(87.4 mL)，将溶液冷却至0°C并且添加NaBH4(1.08g, 28.6 mmol)并且在室温搅拌该反应混合物18小时。混合物用1N HCl淬灭，然后添加饱和Na2CO3并且混合物用EtOAc(3x)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，并且用Na2SO4干燥。溶剂在降低的压力下蒸发而得到粗制化合物，为黄色油，2.55g, 64.5%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.31-1.41 (m, 3H), 4.45-4.46 (m, 1H), 4.99-5.02 (m, 1H), 6.50-6.59 (m, 1H), 7.47 (dd, 1H), 7.71-7.83 (m, 2H), 8.53 (d,1H)。
制备例55
(1R)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
Figure 243188DEST_PATH_IMAGE165
向NaH(60%，在矿物油中，2.16g, 54.0 mmol)在MeOH(30 mL)中的溶液中添加(1R)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(制备例52，1.81g, 6.75 mmol)并且在室温搅拌溶液20分钟，并且然后在60°C搅拌16小时。在真空中浓缩被冷却的反应混合物并且残余物，通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至50:50)洗脱，提纯而得到标题化合物，为白色固体，1.36g, 91%。
LCMS m/z = 220 [M+H]+。
制备例56
(1R)-1-[6-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
Figure 964020DEST_PATH_IMAGE166
在室温向6-[(1R)-1-羟基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯(制备例51，50.00 mg, 0.202 mmol)在MeOH(4.0 mL)中的无色溶液中添加LiBH4(2.0M，在THF中，0.404mL, 0.81 mmol)并且搅拌该反应混合物3小时。使用10%AcOH/MeOH，反应被中和至pH 7至8并且在真空中浓缩而得到黄色胶，44.34 mg。在室温向该胶(40.00 mg, 0.182 mmol)和咪唑(14.9 mg, 0.22 mmol)在DCM(2.0 mL)中的黄色溶液中添加TBDMSCl(30.2 mg, 0.20mmol)并且搅拌该反应混合物18小时。该反应混合物用DCM和H2O(6 mL)稀释，分离各层，分离有机相和水层用DCM(5 mL)萃取。在真空中浓缩合并的有机相并且通过在硅胶上柱色谱法，用EtOAc:石油醚(0:100至40:60)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为黄色胶，35mg, 58%。
LCMS m/z = 334 [M+H]+。
制备例57
甲烷磺酸1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯
Figure 957120DEST_PATH_IMAGE167
在0°C，MsCl(218.0 mg, 1.90 mmol)被添加至1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(制备例46，300.0 mg, 1.59 mmol)和Et3N(321.0 mg, 3.17 mmol)在DCM(10 mL)中的溶液并且在0°C搅拌该反应混合物30分钟。反应用H2O(5 mL)淬灭并且用DCM(2×10 mL)萃取。合并的有机层用NaHCO3水溶液(2×5 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤和在真空中浓缩而得到标题化合物，为黄色油，420.0 mg, 99.1%。
LCMS m/z = 268 [M+H]+。
制备例58
甲烷磺酸1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯
Figure 788809DEST_PATH_IMAGE168
由1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(制备例54)，通过按照制备例57中所述的程序获得标题化合物，为灰白色固体，97%收率。
LCMS m/z = 286 [M+H]+。
制备例59
甲烷磺酸(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯
Figure 28161DEST_PATH_IMAGE169
由(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(制备例53)，通过按照制备例57中所述的程序，获得标题化合物，为油，定量收率。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 1.77 (d, 3H), 2.84 (s, 3H), 6.01 (q, 2H),7.42-7.45 (m, 2H), 7.79-7.81 (m, 2H), 8.62 (s, 1H)。
制备例60
甲烷磺酸1-[6-氨基甲酰基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯
Figure 247790DEST_PATH_IMAGE170
MsCl(0.3 mL, 4 mmol)被添加至6-(1-羟基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酰胺(制备例47，260 mg, 1.12 mmol)和DIPEA(0.8 mL, 4 mmol)在无水DCM(20 mL)中的冰冷却的溶液并且在20°C搅拌该反应混合物30分钟。反应用H2O(20 mL)淬灭并且用DCM(2×20 mL)萃取。分离有机层，用NaHCO3水溶液(20 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为黄色油，350 mg，其在没有进一步提纯的情况下进行使用。
LCMS m/z = 311 [M+H]+。
制备例61
5-溴-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-甲酸
Figure 634908DEST_PATH_IMAGE171
向5-溴-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-甲酸甲酯(J. Med. Chem. 57(12);5129-5140; 2014. 35 g, 100 mmol)在MeOH(250 mL)和THF(100 mL)中的溶液中添加2NNaOH(258 mL, 516 mmol)并且在50°C搅拌该反应混合物2小时。在真空中浓缩该黄色溶液而除去MeOH并且使用2N HCl将溶液的pH小心地调节到约6。所得的固体通过过滤收集并且在高真空下干燥而得到标题化合物，为白色固体，32.0g, 95%。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ: 1.68-1.85 (m, 3H), 2.06-2.16 (m, 2H),2.45-2.52 (m, 1H), 3.80-3.87 (m, 1H), 3.98-4.03 (m, 1H), 5.87 (dd, 1H), 8.09(s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.14 (s, 1H)。
制备例62
5-溴-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-甲酸甲酯
Figure 207972DEST_PATH_IMAGE172
在0°C按份向5-溴-1H-吲唑-6-甲酸甲酯(28 g, 110 mmol)在THF(500 mL)中的悬浮液中添加NaH(5.71g, 143mmol, 60%，在矿物油中)并且搅拌悬浮液30分钟。添加SEM-Cl(22.0g, 132 mmol)并且在室温搅拌该反应混合物16小时。黄色悬浮液用H2O(600 mL)稀释并且用EtOAc(3×600 mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水(1200 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩而得到粗产物，为黄色油。将此通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至10:90)洗脱，提纯而得到标题化合物，为黄色油，15.8g, 37%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: -0.04 (s, 9H), 0.88-0.92 (m, 2H), 3.53-3.57(m, 2H), 3.98 (s, 3H), 5.77 (s, 2H), 8.02 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.06 (s,1H)。
制备例63
5-溴-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-甲酸
Figure 629726DEST_PATH_IMAGE173
向5-溴-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-甲酸甲酯(制备例62，11.4g, 29.6 mmol)在MeOH(250 mL)中的溶液中添加2N NaOH(88.8 mL, 178 mmol)并且在50°C搅拌该反应混合物3小时。在真空中浓缩被冷却的溶液，并且使用1N HCl，将残余物的pH调节到6。所得的混合物被过滤，并且固体被干燥而得到标题化合物，为黄色固体，11.0g。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ: 0.02 (s, 9H), 0.95 (dd, 2H), 3.68 (dd,2H), 5.78 (s, 2H), 8.11 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.46 (s, 1H)。
制备例64
1-[5-溴-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮
Figure 505410DEST_PATH_IMAGE174
向5-溴-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-甲酸(制备例61，32.0g, 98.4mmol)在THF(400 mL)中的溶液中添加HATU(44.9g, 118 mmol)和N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(10.6g, 108 mmol)并且在室温搅拌白色悬浮液20分钟。添加Et3N(29.9g, 295 mmol)并且在室温搅拌该反应混合物16小时。黄色悬浮液用饱和NH4Cl水溶液(400 mL)稀释并且用EtOAc(3×400 mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水(1200 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩而得到黄色胶。将此通过柱色谱法，用EtOAc:石油醚(20:80至70:30)洗脱，提纯而得到标题化合物，为黄色胶，38.0g。将胶溶于THF(500 mL)，将溶液冷却至-70°C，滴加MeMgBr(103 mL, 310mmol, 3M在Et2O中)，搅拌悬浮液30分钟，然后使其升温至室温并且搅拌16小时。滴加H2O(400 mL)来淬灭反应，混合物用EtOAc(400 mL)稀释，然后滤过Celite®并且分离。有机相用Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩而得到粗产物，为黄色胶。将此通过柱色谱法，用EtOAc:石油醚(0:100至50:50)洗脱，提纯而得到标题化合物，为无色胶，19.5g,58%。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ: 1.68-1.86 (m, 3H), 2.03-2.16 (m, 2H),2.46-2.55 (m, 1H), 2.68 (s, 3H), 3.81-3.84 (m, 1H), 3.97-4.03 (m, 1H), 5.87-5.89 (m, 1H), 7.89 (s, 1H), 8.10 (s, 2H)。
制备例65
1-(5-溴-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基)乙酮
Figure 583087DEST_PATH_IMAGE175
由5-溴-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-甲酸(制备例63)，通过按照制备例64中所述的程序，获得标题化合物，为黄色油，4.5g, 46%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 0.03 (s, 9H), 0.96 (t, 2H), 2.67 (s, 3H),3.62 (t, 2H), 5.73 (s, 2H), 7.88 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 8.10 (s, 1H)。
制备例66
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮
Figure 756579DEST_PATH_IMAGE176
向1-[5-溴-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮，(制备例64，19.5g,60.3 mmol)在DMF(300 mL)中的溶液中添加1H-吡唑(6.16g, 90.49 mmol)，(R,R)(-)-N,N’-二甲基-1,2-环己烷二胺(858 mg, 6.03 mmol)，CuI(1720 mg, 9.05 mmol)和K2CO3(2.5g, 181 mmol)并且在130°C搅拌悬浮液16小时。被冷却的黑色悬浮液用H2O(500 mL)稀释，用EtOAc(3×500 mL)萃取，合并的有机萃取物用盐水(1000 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩。粗产物通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(20:80至60:40)洗脱，提纯而得到标题化合物，为黄色胶，15.5g, 82.8%。
LCMS m/z = 311 [M+H]+。
制备例67
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{［2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基］甲基}-1H-吲唑-6-基］乙酮
Figure 95157DEST_PATH_IMAGE177
由1-(5-溴-1-{［2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基］甲基}-1H-吲唑-6-基)乙酮(制备例65)，通过按照制备例66中所述的程序，获得标题化合物，为黄色固体，3.3g, 76%。
LCMS m/z = 357 [M+H]+。
制备例68
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基］乙酮
Figure 328692DEST_PATH_IMAGE178
在室温搅拌1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基］乙酮(制备例66，5.0g, 16.11 mmol)在4M HCl/二氧杂环己烷(100 mL)中的悬浮液2小时。过滤混合物，用EtOAc洗涤固体并且在真空中干燥而得到标题化合物(粗制)，为灰白色固体，其在没有进一步提纯的情况下进行使用。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 1.91 (s, 3H), 6.55 (dd, 1H), 7.67-7.77 (m,2H), 7.97 (s, 1H), 8.25 (dd, 2H)。
制备例69
［6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基］乙酸甲酯
Figure 893666DEST_PATH_IMAGE179
将Cs2CO3(29.8g, 91.7 mmol)和溴乙酸甲酯(9.3g, 60.8 mmol)添加到1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基］乙酮(制备例68，6.9g, 30.50 mmol)在DMF(100 mL)中的溶液并且在室温搅拌该反应混合物48小时。添加另外的Cs2CO3(15 g, 46.2 mmol)和溴乙酸甲酯(4.5g, 29.42 mmol)并且搅拌该反应混合物另外的16小时。过滤混合物，用EtOAc冲洗。添加H2O(250 mL)，分离各层，水相用EtOAc(3×150 mL)萃取，合并的有机层用H2O(2×100mL)，盐水(200 mL)洗涤，然后无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。粗产物通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至60:40)洗脱，提纯两次而得到标题化合物，为白色固体，5.2g, 57.2%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.93 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 5.25 (s, 2H),6.54 (dd, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.73-7.84 (m, 3H), 8.16 (d, 1H)。
制备例70
［6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基］乙酸叔丁酯
Figure 683898DEST_PATH_IMAGE180
由1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基］乙酮(制备例68)和溴乙酸叔丁酯，遵循与制备例69中所述的程序相似的程序，获得标题化合物，为淡黄色固体，62.8%收率(632mg)。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.46 (s, 9H), 1.93 (s, 3H), 5.13 (s, 2H),6.54 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.76-7.79 (m, 2H), 7.81 (s, 1H), 8.16 (s, 1H)。
制备例71
［6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基］乙酸甲酯
Figure 80244DEST_PATH_IMAGE181
向1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基］乙酮(制备例68，2.3g, 10.17 mmol)在THF(20 mL)中的溶液中添加N,N-双环己基甲胺(3.97g, 20.3 mmol)和溴乙酸甲酯(3.11g,20.3 mmol)并且在70°C搅拌该反应混合物18小时。被冷却的反应混合物被过滤，用EtOAc洗涤，添加H2O(20 mL)并且分离各层。水相用EtOAc(2×35 mL)萃取，合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。粗产物通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至70:30)洗脱，提纯而得到两个产物。第一洗脱产物用MeOH和MTBE研磨而得到标题化合物，为灰白色固体，929 mg, 24.3%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 2.09 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 5.28 (s, 2H),6.49 (dd, 1H), 7.72-7.74 (m, 3H), 7.98 (s, 1H), 8.13 (d, 1H)。
制备例72
5-溴-1H-吡唑并［3,4-b］吡啶7-氧化物
Figure 422364DEST_PATH_IMAGE182
在30分钟内在室温，向5-溴-1H-吡唑并［3,4-b］吡啶(95 g, 480 mmol)在无水EtOAc(1920 mL)中的悬浮液中添加m-CPBA(166 g, 816 mmol)，并且然后在45°C至50°C搅拌反应混合物5小时。被冷却的反应混合物被过滤，用EtOAc(2×50 mL)洗涤固体并且在真空下干燥而得到标题化合物，为浅棕色固体，93.6g, 91%。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 8.14 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.68 (s, 1H),14.69 (br s, 1H)。
制备例73
5-溴-1H-吡唑并［3,4-b］吡啶-6-甲腈
Figure 5792DEST_PATH_IMAGE183
向5-溴-1H-吡唑并［3,4-b］吡啶7-氧化物(制备例72，46.6g, 210 mmol)在MeCN(1050 mL)中的悬浮液中添加Et3N(58.3 mL, 420 mmol)和TMSCN(52.5 mL, 420 mmol)并且在80°C搅拌该反应混合物16小时。在真空中浓缩被冷却的反应混合物并且残余物悬浮在MTBE中60小时。所得的固体被过滤掉，用MTBE(2×30 mL)冲洗并且在真空下干燥而得到标题化合物，为红色固体，89.9%。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 8.31 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 14.34 (br s,1H)。
制备例74
1-(5-溴-1H-吡唑并［3,4-b］吡啶-6-基)乙酮
Figure 848983DEST_PATH_IMAGE184
在40分钟内，在0°C，向5-溴-1H-吡唑并［3,4-b］吡啶-6-甲腈(制备例73，25.0g,100 mmol)在THF(500 mL)中的溶液中添加MeMgBr(3.0 M，在Et2O中，101 mL, 303 mmol)的溶液。使反应混合物升温至20°C并且搅拌另外的3小时。将反应混合物倒在6M HCl水溶液(120 mL)/冰水(300 mL)上并且所得的黑色溶液被搅拌50分钟。使用10M NaOH水溶液，中和溶液，并且分离各层。水层用EtOAc(3×250 mL)萃取，合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩而得到标题化合物，为红色固体，84.9%。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 2.67 (s, 3H), 8.24 (s, 1H), 8.68-8.74 (m,1H), 14.15 (br s, 1H)。
制备例75
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并［3,4-b］吡啶-6-基］乙酮
Figure 303098DEST_PATH_IMAGE185
用N2吹扫1-(5-溴-1H-吡唑并［3,4-b］吡啶-6-基)乙酮(制备例74，29.6g, 110mmol)，1H-吡唑(18.1g, 266 mmol)，Cs2CO3(72.3g, 222 mmol)，和(R,R)(-)-N,N'-二甲基-1,2-环己烷二胺(12.6g, 88.8 mmol)在DMF(185 mL)中的悬浮液。添加CuI(4.23g, 22.2mmol)并且在130°C在密封容器中有力地搅拌该混合物4小时。被冷却的反应混合物用H2O(600 mL)稀释，混合物被过滤并且滤液被分离。水层用EtOAc(5×150 mL)萃取，合并的有机层用H2O(50 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在降低的压力下蒸发。所得的黑色油通过在硅胶上快速柱色谱法，用EtOAc:石油醚(0:100至100:0)洗脱，提纯而得到标题化合物，为黄色固体，4.6g, 和另外的粗产物，约8.1g。将其在MTBE(10 mL)中搅拌15分钟，固体滤出，用MTBE洗涤并且干燥而得到另外的标题化合物，5.1g，为白色固体。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2.60 (s, 3H), 6.52 (dd, 1H), 7.72-7.79 (m,2H), 8.21-8.23 (m, 2H), 11.80 (br s, 1H)。
制备例76
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮
Figure 878436DEST_PATH_IMAGE186
在10分钟内在0°C向1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮(制备例75，19.35g, 85.16 mmol)和N,N-双环己基甲胺(29.2 mL, 136 mmol)在无水DMF(426 mL)中的溶液中添加SEM-Cl(21.1 mL, 119 mmol)并且在室温搅拌该反应混合物40小时。混合物用H2O(1500 mL)稀释，并且用EtOAc(5×300 mL)萃取。合并的有机层用H2O(50mL)，盐水(50 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。粗产物通过柱色谱法，硅胶柱，用EtOAc:石油醚(0:100至50:50)洗脱，提纯两次而得到标题化合物，为橙色油，19.85g。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: -0.01- -0.04 (m, 9H), 0.94-1.01 (m, 2H),2.70 (s, 3H), 3.70-3.75 (m, 2H), 5.95 (s, 2H), 6.52 (d, 1H), 7.74 (d, 1H),7.77 (d, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.21 (s, 1H)。
制备例77
[6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酸甲酯
Figure 762210DEST_PATH_IMAGE187
向1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮(制备例75，400 mg,1.6 mmol)在无水THF(5 mL)中的溶液中添加N,N-双环己基甲胺(0.68 mL, 3.17 mmol)和溴乙酸甲酯(0.3 mL, 3.17 mmol)并且在70°C搅拌该反应混合物18小时。被冷却的反应混合物被过滤，用EtOAc(10 mL)洗涤，添加H2O(10 mL)，并且分离各层。水层用EtOAc(2×30mL)萃取，合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。粗产物通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至70:30)洗脱，提纯而得到标题化合物，为白色固体，(峰1)，120 mg, 25%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 2.64 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 5.40 (s, 2H),6.52 (dd, 1H), 7.75 (dd, 2H), 8.21 (d, 2H)。
制备例78
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮
Figure 81196DEST_PATH_IMAGE188
向1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮(制备例75，2.69g,11.8 mmol)在THF(60 mL)中的溶液中添加2,3-二氢吡喃(5.00g, 59.4 mmol)，随后pTsOH(299.7 mg, 1.74 mmol)并且在50°C搅拌该反应混合物3小时。在真空中浓缩反应混合物而除去大多数溶剂并且在盐水(30 mL)中吸收残余物并且用EtOAc(3×30 mL)萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，并且在降低的压力下蒸发而得到深色油。将此通过在硅胶上快速柱色谱法，用EtOAc:石油醚(0:100至49:51)洗脱，提纯而得到标题化合物，为黄色油2.39g,64.8%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.65-1.70 (m, 1H), 1.82-1.88 (m, 2H), 2.02-2.05 (m, 1H), 2.19-2.20 (m, 1H), 2.64-2.66 (m, 4H), 3.82-3.86 (m, 1H), 4.14-4.18 (m, 1H), 6.20 (dd, 1H), 6.50 (s, 1H), 7.74 (d, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.20(s, 1H)。
制备例79
4-溴-2-硝基-5-(1H-吡唑-1-基)苯胺
Figure 124238DEST_PATH_IMAGE189
向4-溴-5-氟-2-硝基苯胺(10.0g, 4.55 mmol)和1H-吡唑(5.79g, 85.1mmol)在DMF(200 mL)中的悬浮液中添加K2CO3(17.6g,128 mmol)并且在100°C搅拌该反应混合物4小时。冷却的混合物在真空中浓缩，残余物用DCM(250 mL)稀释并且用饱和NaHCO3水溶液(2×80 mL)洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。粗产物通过从EtOAc/石油醚中再结晶来提纯而得到标题产物，为黄色固体，8.0g, 66%。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.38 (br s, 2H), 7.32 (s, 1H), 7.77 (s,1H), 8.08 (s, 1H)。
制备例80
1-[4-氨基-5-硝基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
Figure 198373DEST_PATH_IMAGE190
步骤1：
4-溴-5-氯-2-硝基苯胺
Figure 21973DEST_PATH_IMAGE191
在130°C搅拌5-氯-2-硝基苯胺(23.40g, 135.6 mmol)和N-溴琥珀酰亚胺(24.10g, 136.0 mmol)在乙酸(400 mL)中的混合物1小时。将反应混合物倒入水(400 mL)。通过过滤收集沉淀物并且用石油醚(5×50 mL)洗涤。然后在真空中干燥滤饼3小时而得到29g(85%)的标题化合物，为浅棕色固体。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8.24 (s, 1 H), 7.63 (br s, 2 H), 7.29 (s, 1H).
步骤2：
N-(4-溴-5-氯-2-硝基苯基)乙酰胺
Figure 816753DEST_PATH_IMAGE192
在120°C加热4-溴-5-氯-2-硝基苯胺(11.0g, 43.7 mmol)/乙酸(200 mL)。然后，滴加乙酸酐(8.93g, 87.5 mmol)。在120°C搅拌棕色溶液10小时。在降低的压力下浓缩反应混合物而除去大部分乙酸并且然后添加饱和碳酸氢钠水溶液来调节pH至约7。混合物然后用乙酸乙酯(2×100 mL)萃取。合并的有机层用水(50 mL)，盐水(50 mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，和在降低的压力下浓缩而得到14g的包含标题化合物的黄色固体，在没有进一步提纯的情况下将其用于下一步。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.09 (s, 3H), 7.97 (s, 1H), 8.34 (s, 1H),10.38 (br s, 1H).
步骤3：
N-(5-氯-4-(1-乙氧基乙烯基)-2-硝基苯基)乙酰胺
Figure 42198DEST_PATH_IMAGE193
在氮气气氛下，向N-(4-溴-5-氯-2-硝基苯基)乙酰胺(14 g)和Pd(PPh3)4(2.52 g,2.18 mmol)在1,4-二氧杂环己烷(200 mL)中的溶液中添加三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(15.80g, 43.6 mmol)。用N2(×3)排空反应混合物并且然后在100°C搅拌16小时。将该反应混合物冷却到室温并且在降低的压力下浓缩。将所得的黑色油倒入水(50 mL)并且用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并且浓缩而得到标题化合物，为黑色油，在没有另外的提纯的情况下将其用于下一步。
LCMS m/z 284.9 [M+H]+.
步骤4：
N-(4-乙酰基-5-氯-2-硝基苯基)乙酰胺
Figure 35038DEST_PATH_IMAGE194
向N-(5-氯-4-(1-乙氧基乙烯基)-2-硝基苯基)乙酰胺在乙酸乙酯(60 mL)中的溶液中添加4N HCl(水溶液)(120mmol, 30 mL)。在室温搅拌该混合物1小时。然后用乙酸乙酯(3×80 mL)萃取反应混合物。合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(25 mL)，水(50 mL)，盐水(50 mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，并且在降低的压力下浓缩而得到黑色油。黑色油然后经由快速色谱法(硅胶)，用梯度的石油醚:乙酸乙酯(100:0至40:60，然后0:100)洗脱，提纯而得到11g的黑色油。该油然后经由快速色谱法(硅胶)，用梯度的石油醚:乙酸乙酯(100:0至70:30)洗脱，再提纯而得到黑色固体，将其用MTBE(2×15 mL)研磨而得到6.5g的棕色固体。该固体然后经由快速色谱法(硅胶)，用石油醚:乙酸乙酯(100:0至60:40)洗脱，提纯而得到固体。该固体用MTBE(3×15 mL, 然后3×5 mL)研磨而得到4.88g(44%，对于3个步骤）)的标题化合物，为黄色固体。
LCMS m/z = 257 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.12 (s, 3H), 2.63(s, 3H), 7.93 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 10.53 (s, 1H).
步骤5：
1-[4-氨基-5-硝基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
Figure 18037DEST_PATH_IMAGE190
向N-(4-乙酰基-5-氯-2-硝基苯基)乙酰胺(4.63g, 18.04 mmol)，1H-吡唑(1.60g, 23.5 mmol)，t-BuOK(4.05g, 36.1 mmol)，CuI(687 mg, 3.61 mmol)和1,10-菲咯啉(650 mg, 3.61 mmol)的混合物中添加DMF(100 mL)。N2被鼓泡通过悬浮液10分钟并且在110°C搅拌该反应混合物16小时。过滤被冷却的悬浮液并且用EtOAc(150 mL)和水(300 mL)稀释滤液。水相用EtOAc(2×150 mL)萃取，合并的有机层用盐水(2×150 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。粗产物通过在硅胶上柱色谱法，用EtOAc:石油醚(100:0至50:50)洗脱，提纯而得到标题化合物，为黄色固体，1.85g, 41.6%。
LCMS m/z = 247 [M+H]+。
制备例81
4-溴-5-(1H-吡唑-1-基)苯-1,2-二胺
Figure 678826DEST_PATH_IMAGE195
向4-溴-2-硝基-5-(1H-吡唑-1-基)苯胺(制备例79，8.0g, 28.0 mmol)在THF(150.0 mL)，EtOH(150.0 mL)和H2O(50.0mL)中的溶液中添加铁粉(9.47g, 10.0 mmol)和NH4Cl(3.02g, 56.5 mmol)，并且在95°C加热反应混合物2小时。冷却的混合物用EtOH稀释，滤过Celite®直到没有进一步的颜色通过过滤器，并且在真空中浓缩。将残余物溶于EtOAc(250 mL)，用H2O(80 mL)，盐水(80 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并且浓缩而得到标题化合物，为棕色油，7g, 98%收率。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ: 6.45 (dd, 1H), 6.76 (s, 1H), 6.95 (s,1H), 7.64 (d, 1H), 7.73 (d, 1H)。
制备例82
1-[4,5-二氨基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
Figure 821094DEST_PATH_IMAGE196
向1-[4-氨基-5-硝基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(制备例80，1.85g, 7.51mmol)在MeOH(80 mL)中的黄色悬浮液中添加润湿的Pd/C(50%，在H2O中，900 mg)并且在室温搅拌黑色悬浮液5小时。混合物被过滤并且滤液在降低的压力下蒸发而得到标题产物，为棕色胶，1600 mg, 98.5%。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 1.82 (s, 3H), 3.47-3.50 (m, 2H), 3.8-3.86(m, 2H), 6.45 (d, 1H), 6.72 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.71 (s,1H)。
制备例83
6-溴-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑
Figure 909136DEST_PATH_IMAGE197
HCl(5mL)被添加至4-溴-5-(1H-吡唑-1-基)苯-1,2-二胺(制备例81，7.0g, 27.66mmol)在甲酸(50mL)中的溶液并且在70°C搅拌该反应混合物2小时。被冷却的反应混合物在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为棕色固体。在没有进一步提纯的情况下，将其用于下一步，7.0g, 96%。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ: 6.63 (dd, 1H), 7.84 (d, 1H), 8.05 (d,1H), 8.11 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 9.58 (s, 1H)。
制备例84
1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙酮
Figure 379431DEST_PATH_IMAGE198
向1-[4,5-二氨基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(制备例82，1.6g, 7.40 mmol)和原乙酸三乙酯(3.60g, 22.2 mmol)在THF(60 mL)中的溶液中添加TsOH(63.7 mg, 0.37mmol)并且在60°C搅拌该反应混合物16小时。被冷却的溶液在真空中浓缩并且通过在硅胶上柱色谱法，用EtOAc:石油醚(0:100至20:80)洗脱，提纯残余物而得到黄色胶(2.0 g)。将它溶于EtOH(35 mL)，添加TsOH(100 mg, 0.58 mmol)并且在85°C搅拌该反应混合物2小时。被冷却的溶液在真空中浓缩，所得的固体溶于DCM(20 mL)，添加固体NaHCO3并且搅拌该混合物10分钟，然后过滤。滤液在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为棕色固体，1.39g,78.2%。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 1.90 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 6.55 (d, 1H),7.60 (s, 1H), 7.70-7.80 (m, 3H)。
制备例85
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙醇
Figure 843911DEST_PATH_IMAGE199
向1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮(制备例66，1.00g, 3.22 mmol)在无水EtOH(15.0 mL)中的溶液中添加NaBH4(244 mg, 6.44 mmol)并且在室温搅拌该反应混合物12小时。混合物用H2O(500 mL)稀释并且用EtOAc(3×500mL)萃取。合并的有机层用H2O(2×300 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩而得到粗产物。将此通过快速色谱法(在硅胶上)，用石油醚:EtOAc(100:0至0:100)洗脱，提纯两次而得到标题化合物，为黄色油，900 mg, 89.4%。
LCMS m/z = 335 [M+Na]+。
制备例86
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙醇
Figure 591418DEST_PATH_IMAGE200
由1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙酮(制备例67)，按照制备例85中所述的程序，获得标题化合物，为淡黄色胶，99%收率。
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ: 0.01 (s, 9H), 0.95 (t, 2H), 1.28 (d, 3H),3.68 (dt, 2H), 4.73-4.78 (m, 1H), 2.07 (s, 2H), 6.56 (dd, 1H), 7.76-7.77 (m,2H), 7.91 (d, 1H), 8.01 (s, 1H), 8.51 (s, 1H)。
制备例87
{6-[(1R)-1-羟基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯
Figure 53623DEST_PATH_IMAGE201
将NaBH4(63.4 mg, 1.68 mmol)逐份添加至[6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸甲酯(制备例69，1000 mg, 3.35 mmol)在MeOH(40 mL)中的0°C溶液并且在此温度搅拌该反应混合物2小时。通过添加1N HCl至pH 5使反应淬灭并且在真空中浓缩溶液而得到黄色固体。使用柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至80:20)洗脱，提纯粗产物而得到外消旋产物。将其进一步通过SFC，使用AD 250mmx30mm 5u柱，用40%(0.1%NH3(水溶液)/IPA)洗脱，以50mL/min，提纯而得到标题化合物，为白色固体，42.5%。RT=4.816分钟[5:95至40:60 (0.05%DEA/IPA):CO2，在5分钟内，以2.5mL/min的流速]。
LCMS m/z = 301 [M+H]+。
制备例88至91
Figure 73532DEST_PATH_IMAGE127
根据制备例87的方法，通过还原适当的乙酮制备下表中的各醇，并且然后使用所描述的条件通过SFC提纯。
88
Figure 404019DEST_PATH_IMAGE202
{6-[(1R)-1-羟基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸甲酯，AS柱，用25%(0.1%NH3/EtOH)洗脱，峰1，302 mg, 32.3%，为白色固体。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 1.07 (d,3H), 3.72 (s, 3H),4.72-4.76 (m, 1H), 5.23 (d, 1H), 5.48 (s, 2H), 6.48-6.51 (m, 1H), 7.70(s, 1H), 7.71-7.74 (m,1H), 7.85 (d, 1H), 8.02 (d, 1H), 8.48 (d, 1H)。
89
Figure 192984DEST_PATH_IMAGE203
{6-[(1R)-1-羟基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基}乙酸甲酯，Chiralpak IC，用45%(0.1%NH3(水溶液)/MeOH)洗脱，峰2，86 mg, 44%，为无色液体。1H NMR (400MHz,CDCl3) δ: 1.35 (d, 3H), 3.80 (s, 3H), 4.64 (br s, 1H), 4.93-4.98 (m, 1H), 5.38 (d, 2H),6.54 (dd, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 8.04 (s, 1H), 8.15 (s, 1H)。
90
Figure 560511DEST_PATH_IMAGE204
{6-[(1R)-1-羟基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸叔丁酯，ChiralTech IC柱，用25%(0.2%NH3/MeOH)洗脱，峰2，277 mg, 35.8%。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.47(d, 3H), 4.86 (s, 3H), 5.08-5.12 (m, 1H), 6.06 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.72(s, 1H), 7.76 (s, 1H), 8.06 (s, 1H)。
91<sup>A</sup>
Figure 146344DEST_PATH_IMAGE205
(1R)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙醇，Phenomenex-Cellulose-2，用30%(0.1%NH3(水溶液)/IPA)洗脱，峰1，405 mg, 42.2%，为黄色胶。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: -0.07- -0.02 (m, 9H), 0.94-0.99 (m,2H), 1.36 (d, 3H), 3.69-3.73 (m, 2H), 4.96 (q, 1H), 5.87-5.98 (m, 2H), 6.55 (d, 1H), 7.70(d, 1H), 7.80 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.13 (s, 1H)。
A 1当量NaBH4用于反应中
制备例92
1-[1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙醇
Figure 952626DEST_PATH_IMAGE206
向[6-乙酰基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸甲酯(制备例69，5.10g,17.1 mmol)在MeOH(100 mL)中的0°C溶液中逐份添加NaBH4(1290 mg, 34.2 mmol)并且在室温搅拌该反应混合物5小时。通过添加3M HCl水溶液至pH 5使反应淬灭，在真空中浓缩溶液并且在EtOAc/H2O(100mL/10 mL)之间分割残余物。分离各层并且水相用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥并且在降低的压力下蒸发而得到黄色胶。将胶溶于无水DCM(100 mL)，将溶液冷却至0°C，然后添加咪唑(2.33g, 34.2 mmol)和TBDMSCl(2.58g,17.1 mmol)并且在室温搅拌该反应混合物16小时。该反应混合物用H2O(20 mL)稀释，用DCM(2×30 mL)萃取，合并的有机层用Na2SO4干燥并且在真空中浓缩。通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(10:90至40:60)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为白色固体，5.20g,78.8%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: -0.16 (d, 6H), 0.74 (s, 9H), 1.44 (d, 3H),4.02-4.12 (m, 2H), 4.55 (t, 2H), 4.72 (br d, 1H), 4.99 (br s, 1H), 6.50 (t,1H), 7.63 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 8.03 (s, 1H)。
制备例93
[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]甲醇
Figure 533780DEST_PATH_IMAGE207
在0°C，向6-溴-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑(制备例83，7.0g, 26.61 mmol)和DIPEA(14.7 mL, 79.80 mmol)在THF(100 mL)中的溶液中滴加SEM-Cl(5.65 mL, 31.90mmol)并且在10°C搅拌该反应混合物2小时。混合物用EtOAc(250 mL)稀释并且用饱和NaHCO3水溶液(2×60mL)洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩而得到油。将此通过快速色谱法(在硅胶上)，用EtOAc:石油醚(0:100至30：70)洗脱，提纯而得到黄色油，8g, 76.4%，为异构体的混合物。将MeOH(100mL)添加到此黄色油(8 g, 20.34 mmol)，Et3N(8.82 mL, 61.0 mmol)和Pd(dppf)Cl2(1.49g, 2.03 mmol)在DMF(100 mL)中的悬浮液并且在80°C在CO(50psi)气氛下搅拌该反应混合物16小时。在真空中浓缩被冷却的反应混合物并且通过快速色谱法(在硅胶上)，用EtOAc:石油醚(80:20)洗脱，提纯粗产物而得到黄色油，7.0g, 92.4%。在0°C，LiAlH4(1.1g, 28.98 mmol)被添加至该油(7 g, 18.79 mmol)在THF(100 mL)中的溶液，并且在2小时内使反应混合物升温至室温。滴加H2O(1 mL)，混合物用Na2SO4干燥，并且在室温搅拌1小时。混合物被过滤并且在真空中浓缩。通过在硅胶上快速色谱法，用EtOAc:MeOH(100:0至95:5)洗脱，提纯粗产物而得到标题化合物，为黄色油，5.0g, 77.2%。
LCMS m/z = 345 [M+H]+。
制备例94
5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-甲醛
Figure 400105DEST_PATH_IMAGE208
向[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]甲醇(制备例93，2.5g, 7.26 mmol)在DCM(20 mL)中的溶液中添加二氧化锰(IV)(6.31g, 72.3 mmol)，并且在50°C搅拌该混合物2小时。通过Celite®将不溶性物质滤掉并且滤液在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为淡黄色固体，1.5g, 60.4%。
LCMS m/z = 343 [M+H]+。
制备例95
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙醇
Figure 191344DEST_PATH_IMAGE209
在-30°C在氩气(g)下向5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-甲醛(制备例94，1.5g, 4.38 mmol)在THF(20 mL)中的溶液中滴加MeMgBr(2.92 mL, 8.76mmol, 3M，在Et2O中)，并且在室温搅拌该反应混合物1小时。将混合物冷却到0°C，并且通过添加饱和NH4Cl水溶液(100 mL)淬灭并且用EtOAc萃取。有机层用饱和NaHCO3水溶液(2×100 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过快速色谱法(在硅胶上)，用EtOAc:石油醚(90:10)洗脱，提纯粗产物而得到标题化合物，为淡黄色油，1.3g, 82.9%。
LCMS m/z = 359 [M+H]+。
制备例96
(1R)-1-{5-(1H-吡唑-1-基)-1-[(2S)-四氢-2H-吡喃-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}乙醇
Figure 4579DEST_PATH_IMAGE210
在0°C，NaBH4(441.5 mg, 11.67 mmol)被添加至1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮(制备例78，2.39g, 7.68 mmol)在MeOH(50 mL)中的溶液并且在室温搅拌该反应混合物4小时。通过添加饱和NH4Cl水溶液(25 mL)使反应淬灭并且在真空中浓缩混合物至约30 mL的体积。悬浮液用EtOAc(3×20 mL)萃取，合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，并且在降低的压力下蒸发而得到浅黄色油。通过柱色谱法(在硅胶上)提纯粗制品而得到浅黄色胶(2.10g, 87.3%收率)。将其进一步通过SFC，使用Chiralpak AY柱，用30%(0.1%NH3(水溶液)/EtOH)洗脱，提纯而得到标题化合物，峰3，为黄色固体，620.0 mg, 24.8%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.32 (d, 3H), 1.64-1.70 (m, 1H), 1.77-1.91(m, 2H), 2.0-2.07 (m, 1H), 2.14-2.24 (m, 1H), 2.63-2.74 (m, 1H), 3.83 (dt,1H), 4.12-4.18 (m, 1H), 4.72 (br d, 1H), 5.00 (q, 1H), 6.18 (dd, 1H), 6.53-6.55 (m, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.79 (d, 1H) 8.02 (s, 1H), 8.14 (s, 1H)。
制备例97
乙酸6-氟喹啉-3-基酯
Figure 502556DEST_PATH_IMAGE211
向6-氟-喹啉-3-醇(28.0g, 172 mmol)和吡啶(77.7 mL, 961.1 mmol)在DCM(250mL)中的混合物中滴加乙酰氯(13.7 mL, 192 mmol)，同时用冰冷却，并且在室温搅拌该反应混合物1小时。混合物用DCM(150 mL)稀释，用H2O(100 mL)，然后1N HCl(100 mL)洗涤。干燥(Na2SO4)分离的有机相，过滤，并且在降低的压力下浓缩而得到残余物。通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至100:0)洗脱，提纯此粗产物而得到标题化合物，为灰白色固体，21.3g(61%)。
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ: 2.46 (s, 3H), 7.48-7.52 (m, 2H), 7.07 (s,1H), 8.20-8.23 (m, 1H), 8.72 (s, 1H)。
制备例98
乙酸6-溴喹啉-3-基酯
Figure 352832DEST_PATH_IMAGE212
由6-溴-喹啉-3-醇，按照制备例97中所述的程序，获得标题化合物，为淡黄色固体，36g, 56.1%。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2.38-2.47 (m, 3H), 7.76-7.83 (m, 1H), 7.89(d, 1H), 7.96-8.03 (m, 2H), 8.73 (d, 1H)。
制备例99
乙酸5,8-二氟喹啉-3-基酯
Figure 772312DEST_PATH_IMAGE213
将AcCl(2.80g, 35.6 mmol)滴加至5,8-二氟-喹啉-3-醇(5.38g, 29.70 mmol)和吡啶(4.7g, 59.4 mmol)在无水DCM(50 mL)中的冰冷的悬浮液并且在完成添加后，在室温搅拌该反应混合物2小时。将反应混合物倒入H2O(50 mL)并且用DCM(2×50 mL)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥并且在降低的压力下蒸发而得到粗产物。将此再溶于EtOAc(100mL)，顺序地用柠檬酸水溶液(10 mL)，H2O(10 mL)和盐水(10 mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤并且在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，6.63g，为淡黄色固体。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2.45 (s, 3H), 7.21-7.25 (m, 1H), 7.32-7.36(m, 1H), 8.21 (d, 1H), 8.82 (d, 1H)。
制备例100
乙酸6-溴-1-氧化喹啉-3-基酯
Figure 920396DEST_PATH_IMAGE214
将m-CPBA(18.7g, 108 mmol)逐份添加至乙酸6-溴喹啉-3-基酯(制备例98，16g,60.13 mmol)在DCM(300 mL)中的冰冷却的溶液，并且在室温搅拌该反应混合物15小时。所得的悬浮液被过滤并且用DCM(500 mL)稀释滤液，用饱和Na2S2O3溶液(800 mL)，饱和Na2CO3溶液(400 mL)和盐水(100 mL)洗涤，然后无水Na2SO4干燥，过滤并且在降低的压力下蒸发，而得到标题化合物，为淡黄色固体，16g, 94%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 2.38 (s, 3H), 7.49 (d, 1H), 7.79 (dd, 1H),8.00 (d, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.56 (d, 1H)。
制备例101
乙酸6-氟-1-氧化喹啉-3-基酯
Figure 600776DEST_PATH_IMAGE215
在0°C，在搅拌的情况下，向乙酸6-氟喹啉-3-基酯(制备例97，41.0g, 200 mmol)在DCM(400 mL)中的溶液中逐份添加m-CPBA(48.7g, 240 mmol)并且在完成添加后，在室温搅拌溶液16小时。悬浮液被过滤并且滤液在降低的压力下蒸发。通过柱色谱法，用EtOAc:石油醚:MeOH:DCM(70:30:0:0至0:0:10:90)洗脱，提纯粗产物而得到标题化合物，为黄色固体，41g, 90%。
LCMS m/z = 180 [M+H]+。
制备例102
乙酸5,8-二氟-1-氧化喹啉-3-基酯
Figure 808904DEST_PATH_IMAGE216
在0°C在搅拌的情况下向乙酸5,8-二氟喹啉-3-基酯(制备例99，2.5g, 11.2mmol)在无水DCM(100 mL)中的溶液中逐份添加m-CPBA(4.83g, 27.99 mmol)并且在完成添加后，在室温搅拌溶液60小时。将淡黄色溶液倒入Na2CO3水溶液(1.5g，在50 mL H2O中)并且用DCM(2×50 mL)萃取。合并的有机层用饱和Na2S2O3水溶液(2×10 mL)，盐水(10 mL)洗涤，用Na2SO4干燥并且溶剂蒸发而得到粗产物(3 g)，为棕色固体。将此通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至100:0)洗脱，提纯而得到标题化合物，600 mg ，为淡黄色固体。
LCMS m/z = 240 [M+H]+。
制备例103
6-溴喹啉-3-醇1-氧化物
Figure 715680DEST_PATH_IMAGE217
向乙酸6-溴-1-氧化喹啉-3-基酯(制备例100，25.17g, 89.23 mmol)在无水的MeOH(472 mL)中的悬浮液中一次性添加K2CO3(4.09 mg, 296 mmol)并且在80°C搅拌所得的悬浮液16小时。在降低的压力下蒸发被冷却的悬浮液并且残余物用H2O(400 mL)稀释，并且然后用1N HCl(约350 mL)中和。通过过滤收集所得的沉淀物，用H2O(50 mL)清洗并且在真空中干燥而得到标题化合物，为淡黄色固体，86%。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 7.15 (d, 1H), 7.60 (dd, 1H), 8.17 (d, 1H),8.24-8.31 (m, 2H)。
制备例104
5,8-二氟喹啉-3-醇1-氧化物
Figure 483434DEST_PATH_IMAGE218
由乙酸5,8-二氟-1-氧化喹啉-3-基酯(制备例102)，通过按照制备例103中所述的程序，获得标题化合物，为米色固体(450 mg)，91%收率。
LCMS m/z = 198 [M+H]+。
制备例105
(6-氟-3-羟基喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure 956004DEST_PATH_IMAGE219
在20分钟内向乙酸6-氟-1-氧化喹啉-3-基酯(制备例101，35.0g, 158 mmol)，N-(二乙氧基磷酰基)氨基甲酸叔丁酯(52.1g, 206 mmol)和DIPEA(61.6g, 475 mmol)在DCM(600 mL)中的冰冷却的溶液中添加TsCl(45.3g, 237 mmol)在DCM(200 mL)中的溶液并且在此温度搅拌该反应混合物1.5小时。在室温，搅拌该反应混合物另外的17小时，用DCM(700mL)稀释并且用饱和柠檬酸水溶液(500 mL)洗涤。在真空中浓缩有机相并且通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(5:95至80:20)洗脱，提纯而得到黄色胶，72g, 99%。K2CO3(43.6g,316 mmol)被添加至乙酸2-[(叔丁氧基羰基)(二乙氧基磷酰基)氨基]-6-氟喹啉-3-基酯(制备例105，72.0g, 160 mmol)在MeOH(720 mL)中的混合物并且在室温搅拌该反应混合物16小时。在真空中浓缩黄色悬浮液，用H2O(500 mL)稀释，然后在0°C用1N HCl水溶液中和至pH 7。通过过滤收集所得的沉淀物并且残余物用MTBE(200 mL)研磨并且搅拌10分钟。悬浮液被过滤并且用MTBE(2×50 mL)洗涤。在真空中干燥固体而得到标题化合物，为灰白色固体，30g, 68%。
LCMS m/z = 279 [M+H]+。
制备例106
6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
Figure 272716DEST_PATH_IMAGE220
向2-氨基-5-氟苯甲醛(2 g, 14.38 mmol)和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(制备例231，2.8g, 15.8 mmol)在DMSO(20 mL)中的溶液中慢慢地添加t-BuOK(2.42g, 21.6mmol)并且在室温搅拌该反应混合物3小时。在18个批次中重复该反应。合并的反应混合物用H2O(800 mL)稀释并且用EtOAc(2×800 mL)萃取。合并的有机层用H2O(2×1.5L)和盐水(1.5 L)洗涤，然后干燥(Na2SO4)，过滤，并且在真空中浓缩。残余物由EtOAc:DCM:石油醚(2:1:10，200 mL)中再结晶而得到标题化合物，为黄色固体，24g, 29.5%。在真空中浓缩滤液并且通过柱色谱法(在硅胶上)，用EtOAc:DCM(0:100至20:80)洗脱，提纯残余物并且然后从(EtOAc:DCM:石油醚=2:1:10，100 mL)中再结晶而得到附加产物，6.2g, 7.6%。
LCMS m/z = 299 [M+H]+。
制备例107
6-溴-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
Figure 791422DEST_PATH_IMAGE221
由2-氨基-5-溴苯甲醛和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(制备例231)，通过按照制备例106中所述的程序，获得标题化合物，为黄色固体，42%收率(49 g)。
LCMS m/z = 359 [M+H]+。
制备例108
7-氯-6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
Figure 281309DEST_PATH_IMAGE222
t-BuOK(4.85g, 43.2 mmol)被添加至2-氨基-4-氯-5-氟苯甲醛(5g，28.81mmol)和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(制备例231，6.13g, 34.6 mmol)在DMSO(50 mL)中的溶液并且在50°C搅拌该反应混合物4小时。混合物用EtOAc(200 mL)稀释并且用盐水(3×100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且滤液在降低的压力下蒸发。残余物用EtOAc(10 mL)处理，滤出所得的固体并且干燥而得到标题化合物，为黄色固体，1.98g, 20.7%。
LCMS m/z = 333 [M+H]+
制备例109至112
通过按照制备例108中所述的程序，由2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(制备例231)和适当的苯甲醛制备下表中的化合物。
109
Figure 811648DEST_PATH_IMAGE223
6,8-二氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺，10%收率(620 mg)；LCMS m/z = 317 [M+H]+
110<sup>A</sup>
Figure 95998DEST_PATH_IMAGE224
3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-7-甲基-1,6-萘啶-2-胺，100 mg, 46%，为黄色固体。LCMS m/z = 296.1 [M+H]+.
111<sup>B</sup>
Figure 587154DEST_PATH_IMAGE225
7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-1,5-萘啶-2-胺，155 mg, 14.5%，为浅棕色固体。LCMS m/z = 300 [M+H]+
112<sup>B</sup><sup>,C</sup>
Figure 880732DEST_PATH_IMAGE226
3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-6-甲基-1,5-萘啶-2-胺，1.64g, 43.6%，为黄色固体。LCMS m/z = 296 [M+H]+。
A 1当量的tBuOK用于反应
B 通过柱色谱法，用EtOAc/石油醚(20:80至90:10)洗脱而提纯
C 1.2当量的tBuOK用于反应。
制备例113
6-溴-7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
Figure 265577DEST_PATH_IMAGE227
在50°C搅拌2-氨基-5-溴-4-氟苯甲醛(5.0g, 22.93 mmol)，2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(制备例231，4.88g, 27.5 mmol)和tBuOK(27.5 mL, 1M，27.5 mmol)在无水DMSO(40 mL)中的混合物1.5小时。混合物用盐水(100 mL)稀释并且用EtOAc(3×200 mL)萃取，合并的有机萃取物用Na2SO4干燥并且在真空中浓缩。通过硅胶色谱法，用石油醚:EtOAc(100:0至50:50)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为黄色固体，1.4g, 16%。
LCMS m/z = 377 [M+H]+。
制备例114
6-溴-8-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
Figure 314304DEST_PATH_IMAGE228
由2-氨基-5-溴-3-氟苯甲醛和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(制备例231)，通过按照制备例113中所述的程序，获得标题化合物，为黄色固体(4.1g, 18%)。
LCMS m/z = 377 [M+H]+。
制备例115
3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-1,5-萘啶-2-胺
Figure 214127DEST_PATH_IMAGE229
由3-氨基吡啶-2-甲醛(picolinaldehyde)和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(制备例231)，通过按照制备例113中所述的程序，获得标题化合物，为黑色油，52%收率，3.6g。
LCMS m/z = 282 [M+H]+。
制备例116
2-氨基-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-甲酸甲酯
Figure 983500DEST_PATH_IMAGE230
向6-溴-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(制备例107，24.5g, 68.2 mmol)，Et3N(47.5 mL, 341 mmol)和Pd(dppf)Cl2(4.99g, 6.82 mmol)在DMF(250 mL)中的溶液中添加MeOH(700 mL)并且在80°C在CO(50psi)的气氛下搅拌该反应混合物16小时。过滤被冷却的反应混合物并且滤液在真空中浓缩。残余物被悬浮在H2O(500 mL)中，滤出固体，用H2O(2×50 mL)冲洗并且在真空下干燥而得到标题化合物，为棕色固体，91%。
LCMS m/z = 339 [M+H]+。
制备例117
2-氨基-7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-甲酸甲酯
Figure 550748DEST_PATH_IMAGE231
甲醇(10 mL)被添加至6-溴-7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(制备例113，1.47g, 4.00 mmol)，Et3N(789 mg, 7.79 mmol)，Pd(OAc)2(87.5 mg, 0.390 mmol)和DPPP(161 mg, 0.39 mmol)在DMF(10 mL)中的混合物并且在80°C在CO(50psi)气氛下搅拌该反应混合物16小时。过滤被冷却的反应混合物并且滤液在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为棕色固体，900 mg, 65%。
LCMS m/z = 357 [M+H]+。
制备例118
2-氨基-8-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-甲酸甲酯
Figure 521109DEST_PATH_IMAGE232
MeOH(50 mL)被添加至6-溴-8-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(制备例114，1500 mg, 3.98 mmol)，Et3N(805 mg, 7.95 mmol)，Pd(OAc)2(89.3 mg, 0.40 mmol)和DPPP(164 mg, 0.40 mmol)在DMF(50 mL)中的混合物并且在80°C在CO(50psi)气氛下搅拌该反应混合物16小时。在真空中浓缩冷却的混合物，将残余物悬浮在EtOAc(20 mL)中并且滤出所得的固体。固体再一次被悬浮在EtOAc(20 mL)中，过滤悬浮液并且在真空中干燥固体而得到标题化合物，为红色固体，900 mg, 63.5%。
LCMS m/z = 357 [M+H]+。
制备例119
2-{6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-基}-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮
Figure 845911DEST_PATH_IMAGE233
在20°C，向6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(制备例106，2.4g, 80.45mmol)，Et3N(32.60g, 322 mmol)和DMAP(9.83g, 80.5 mmol)在无水二氧杂环己烷(600mL)中的混合物中滴加邻苯二甲酰二氯(24.5g, 121 mmol)并且在90°C搅拌该反应混合物15小时。在真空中浓缩被冷却的反应混合物并且在H2O(1000 mL)和DCM(2×1100 mL)之间分割残余物。合并的有机层用H2O(2×1000 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，并且在真空中浓缩而提供棕色固体。将此悬浮在DCM(约200 mL)中，搅拌30分钟，然后过滤，用H2O(100 mL)洗涤并且在真空中干燥而得到标题化合物，为浅黄色固体，11g, 32%。在真空中浓缩滤液并且通过柱色谱法，用(EtOAc:DCM:THF 40:40:1):石油醚(0:100至30:70)洗脱，提纯而得到棕色油，将其从石油醚:DCM(10:1)中再结晶而得到附加产物(6.2g, 18%)，为黄色固体。
LCMS m/z = 429 [M+H]+
制备例120至125
通过按照制备例119中所述的程序，由适当的胺和邻苯二甲酰氯制备下表中的邻苯二甲酰亚胺。
120
Figure 481292DEST_PATH_IMAGE234
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-甲酸甲酯，为棕色固体，60.5%。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 3.70 (s, 3H), 3.96 (s, 3H),5.25 (s, 2H), 6.86 (d, 2H), 7.30 (d, 2H), 7.95-8.01 (m, 2H), 8.05-8.15 (m, 4H), 8.43 (s,1H), 8.72 (s, 1H)
121
Figure 965362DEST_PATH_IMAGE235
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-甲酸甲酯，(700 mg, 62.5%)，为黄色固体。LCMS m/z = 487 [M+H]+
122
Figure 27996DEST_PATH_IMAGE236
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-8-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-甲酸甲酯，3.0g，44%，为黄色固体。LCMS m/z = 487 [M+H]+
123
Figure 840095DEST_PATH_IMAGE237
2-{6-溴-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-基}-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮，4.7g, 57.5%，为黄色固体。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 3.70 (s, 3H), 5.22 (s, 2H), 6.85 (d,2H), 7.28 (d, 2H), 7.81 (dd, 1H), 7.91-8.00 (m, 3H), 8.01-8.09 (m, 2H), 8.16 (s, 1H),8.28 (d, 1H)
124
Figure 92216DEST_PATH_IMAGE238
2-{7-氯-6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-基}-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮，960 mg, 86.3%，为黄色固体。LCMS m/z = 485 [M+Na]+
125
Figure 368476DEST_PATH_IMAGE239
2-{6,8-二氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-基}-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮，2.4g, 74%，为黄色固体。LCMS m/z = 469 [M+Na]+。
制备例126
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-甲腈
Figure 539694DEST_PATH_IMAGE240
将Pd2(dba)3(880 mg, 0.96 mmol)和BINAP(1.2g, 1.92 mmol)添加到2-{6-溴-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-基}-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例123，4.7g, 9.61mmol)和Zn(CN)2(2.4g, 20.44 mmol)在DMF(60 mL)中的悬浮液，用N2使混合物脱气，并且在100°C搅拌该反应混合物18小时。被冷却的悬浮液用DCM(100 mL)稀释，用H2O(2×100 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中干燥。通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:DCM(10:90至100:0)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为黄色固体，1.2g, 28.7%。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 3.70 (s, 3H), 5.26 (s, 2H), 6.86 (d, 2H),7.29 (d, 2H), 7.95-8.10 (m, 5H), 8.17 (d, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.64 (d, 1H)。
制备例127
2-(6-氟-3-羟基喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮
Figure 901406DEST_PATH_IMAGE241
在15°C，向2-{6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-基}-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例119，17.20g, 40.15 mmol)在DCM(18 mL)中的溶液中添加TFA(18 mL)并且搅拌该反应混合物17小时。添加H2O(50 mL)并且搅拌该混合物15分钟。所得的沉淀物被过滤掉，用H2O(20 mL)和DCM(2×20 mL)洗涤，然后在真空下干燥而得到标题化合物，为浅黄色固体，11.3g, 91%。
LCMS m/z = 309 [M+H]+。
制备例128至133
通过按照制备例127中所述的程序，由适当的喹啉制备下表中的化合物。
128
Figure 940906DEST_PATH_IMAGE242
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-羟基喹啉-6-甲酸甲酯，为黄色固体，59.9%收率(13.8 g)。LCMS m/z = 349 [M+H]+
129
Figure 71673DEST_PATH_IMAGE243
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-羟基-7-氟喹啉-6-甲酸甲酯，430 mg, 81.6%，为黄色固体。LCMS m/z = 367 [M+H]+
130
Figure 679372DEST_PATH_IMAGE244
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-羟基-8-氟喹啉-6-甲酸甲酯，2.01g, 88%，为白色固体。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 4.03 (s, 3H), 6.92-6.94 (m, 1H),7.86-7.90 (m, 4H), 8.04 (d, 1H), 8.25 (d, 1H)。
131
Figure 338499DEST_PATH_IMAGE245
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-羟基喹啉-6-甲腈，670 mg, 77.1%，为淡黄色固体，LCMS m/z = 316 [M+H]+
132<sup>A</sup>
Figure 119373DEST_PATH_IMAGE246
2-(7-氯-6-氟-3-羟基喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮，612 mg,收率：85.9%，为浅黄色固体。LCMS m/z = 343 [M+H]+
133
Figure 42329DEST_PATH_IMAGE247
2-(6,8-二氟-3-羟基喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮，1440mg, 82%，为浅黄色固体。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ : 7.52-7.62 (m, 1H), 7.64-7.70 (m, 1H), 7.87(d, 1H), 7.93-8.09 (m, 4H), 11.35 (s, 1H)。
A DCM/NaHCO3后处理。从DCM/石油醚中再结晶。
制备例134
2-氨基-6-氟喹啉-3-醇
Figure 945563DEST_PATH_IMAGE248
Pd(OH)2(47.1 mg, 0.067 mmol)被添加至6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(制备例106，200 mg, 0.67 mmol)在甲醇(10 mL)中的溶液并且在室温在H2的气氛下搅拌该反应混合物18小时。反应混合物被过滤并且在真空中浓缩滤液而得到标题化合物，为棕色固体。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 6.32 (br s, 2H), 7.12-7.24 (m, 2H), 7.55(dd, 1H), 7.70-7.80 (m, 1H)。
制备例135
2-氨基-6-溴喹啉-3-醇
Figure 281867DEST_PATH_IMAGE249
在室温搅拌6-溴-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(制备例107，97 mg, 0.27mmol)在DCM(2 mL)和TFA(2 mL)中的溶液2小时。反应混合物在降低的压力下蒸发并且将残余物悬浮在EtOAc(5 mL)中并且使用NaHCO3水溶液中和。分离各层，干燥有机相并且在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为黄色固体，583 mg, 88%收率。
LCMS m/z = 240 [M+H]+。
制备例136
6-溴-2-(叔丁基氨基)喹啉-3-醇
Figure 538536DEST_PATH_IMAGE250
在0°C，向乙酸6-溴-1-氧化喹啉-3-基酯(制备例100，2.53g, 8.94 mmol)和叔丁胺(0.92 mL, 8.74 mmol)在DCM(100 mL)中的溶液中逐份添加TS2O(8.75g, 26.8 mmol)使得保持反应混合物温度<5°C并且搅拌该反应混合物20分钟。添加另外的叔丁胺(1.0当量)和TS2O(0.5当量)并且搅拌该反应混合物30分钟。反应混合物用1N NaOH(10 mL)和H2O(10mL)洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。将产物溶于MeOH(60 mL)，添加K2CO3(2.79g, 17.9 mmol)并且在室温搅拌该反应混合物18小时。混合物在真空中浓缩，将残余物悬浮在DCM中并且过滤。将滤液倒入冷H2O，添加饱和NH4Cl并且混合物用DCM(4×50 mL)萃取。合并的有机萃取物用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。在ISCO®上，用9:1 DCM/MeOH洗脱，提纯粗产物而得到黄色泡沫，1.0g, 37.9%。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 1.53-1.65 (m, 9H), 6.93 (s, 1H), 7.34-7.41(m, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.51 (d, 1H)。
制备例137
2-氨基-7-氟-1,5-萘啶-3-醇三氟乙酸盐
Figure 643895DEST_PATH_IMAGE251
在室温搅拌7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-1,5-萘啶-2-胺(制备例111，155 mg,0.518 mmol)在TFA(4 mL)中的溶液16小时。在真空中浓缩棕色溶液，与EtOAc共沸并且在真空中干燥产物而得到标题化合物，为棕色固体，92.8 mg, 100%。
LCMS m/z = 180 [M+H]+。
制备例138
2-氨基-7-甲基-1,6-萘啶-3-醇三氟乙酸盐
Figure 203184DEST_PATH_IMAGE252
由3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-7-甲基-1,6-萘啶-2-胺(制备例110)，通过按照制备例137中所述的程序，获得标题化合物，88%收率(990 mg)。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 2.60 (s, 3H), 7.32 (s, 1H), 7.45 (s, 1H),7.75 (br s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 11.61 (br s, 1H)。
制备例139
2-氨基-1,5-萘啶-3-醇三氟乙酸盐
Figure 26783DEST_PATH_IMAGE253
由3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-1,5-萘啶-2-胺(制备例115)，通过按照制备例137中所述的程序，获得标题化合物，92%收率(3.5 g)。
LCMS m/z = 276 [M+H]+。
制备例140
2-氨基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇
Figure 87143DEST_PATH_IMAGE254
在室温搅拌7-氯-6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(制备例108，1g,3.01 mmol)在DCM(4 mL)和TFA(4 mL)中的溶液1小时。混合物在真空中浓缩，用NaHCO3水溶液洗涤残余物，并且所得的固体被滤出并且干燥而得到标题化合物，为灰色固体，600 mg,94%。
LCMS m/z = 213 [M+H]+。
制备例141
(3-羟基-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure 109326DEST_PATH_IMAGE255
向2-氨基-7-甲基-1,6-萘啶-3-醇三氟乙酸盐(制备例138，970 mg, 3.35 mmol)在THF(10 mL)和H2O(3 mL)中的溶液中添加NaOH(537 mg, 13.4 mmol)，DMAP(82 mg,0.671 mmol)和Boc2O(952 mg, 4.36 mmol)并且在室温搅拌该反应混合物16小时。用1NHCl将反应中和至pH=6并且混合物用EtOAc(2×20 mL)萃取。合并的有机萃取物用Na2SO4干燥并且在真空中浓缩。使用柱色谱柱(硅胶)，用MeOH:DCM(0:100至6:94)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为黄色固体，500 mg, 54%。
LCMS m/z = 276 [M+H]+。
制备例142
(3-羟基-1,5-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure 292045DEST_PATH_IMAGE256
由2-氨基-1,5-萘啶-3-醇三氟乙酸盐(制备例139)，通过按照制备例141中所述的程序，获得标题化合物，为棕色固体，710 mg, 21.4%。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 1.48 (s, 9H), 7.47-7.50 (m, 2H), 8.10 (d,1H), 8.70 (br s, 1H), 8.86 (s, 1H), 11.00-11.46 (m, 1H)。
制备例143
(7-氟-3-羟基-1,5-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure 275045DEST_PATH_IMAGE257
向2-氨基-7-氟-1,5-萘啶-3-醇三氟乙酸盐(制备例137，92.8 mg, 0.518 mmol)在THF(5 mL)和H2O(1 mL)中的溶液中添加NaOH水溶液以调节pH至9，然后，添加DMAP(12.7mg, 0.104 mmol)和Boc2O(147 mg, 0.67 mmol)并且在20°C搅拌该反应混合物4小时。在真空中浓缩反应混合物并且通过柱色谱法(硅胶)，用MeOH:DCM(0:100至5:95)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为淡黄色固体，65 mg, 45%。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1.49 (s, 9H), 6.76 (br s, 1H), 7.54 (s,1H), 8.79 (d, 1H), 8.98-8.90 (m, 1H), 11.29 (br s, 1H)。
制备例144
(3-羟基-6-甲基-1,5-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure 935833DEST_PATH_IMAGE258
在室温，向3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-6-甲基-1,5-萘啶-2-胺(制备例112，1.64g,5.55 mmol)在DCM(7.0 mL)中的悬浮液中添加TFA(7.0 mL, 94 mmol)并且在25°C搅拌该反应混合物7小时。在真空中浓缩棕色溶液并且用MeOH(20 mL)和EtOAc(20 mL)共蒸发而得到黄色固体，1.61g。将此溶于THF(14 mL)和H2O(3 mL)，添加NaOH(666 mg, 16.7 mmol)，DMAP(136 mg, 1.11 mmol)和Boc2O(970 mg, 4.44 mmol)并且在25°C搅拌所得的棕色溶液4小时。添加另外的H2O(3 mL)和Boc2O(606 mg, 2.78 mmol)中的NaOH(222 mg, 5.55 mmol)并且在25°C搅拌该反应混合物16小时。用1N HCl将反应中和，然后用EtOAc(3×50 mL)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，在真空中浓缩并且通过柱色谱法(硅胶)，用MeOH:DCM(0:100至5:95)洗脱，提纯粗制品而得到标题化合物，为黄色固体，400 mg, 26.2%。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 1.47 (s, 9H), 2.60 (s, 3H), 7.24-7.55 (m,2H), 7.98 (d, 1H), 8.84 (s, 1H), 11.04 (br s, 1H)。
制备例145至153
在0°C，向适当的醇(1当量)，喹啉醇(1当量)和PPh3(3当量)在无水THF(10-12.5mL/ mmol)中的溶液中滴加DIAD(3当量)并且在25°C搅拌该反应混合物15小时。在真空中浓缩反应混合物而得到粗产物，将其通过硅胶色谱法，用石油醚:EtOAc（适当的梯度）洗脱，提纯而得到标题化合物。
145<sup>A</sup>
Figure 94413DEST_PATH_IMAGE259
3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯，为浅黄色油，4700 mg, 91%。LCMS m/z = 537 [M+H]+
146<sup>B,C</sup>
Figure 120138DEST_PATH_IMAGE260
{3-[1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}乙酸甲酯，186 mg, 73%。LCMS m/z = 551 [M+H]+
147
Figure 652751DEST_PATH_IMAGE261
3-{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}丙酸叔丁酯, 黄色油, 定量收率。LCMS m/z = 607 [M+H]+
148
Figure 179547DEST_PATH_IMAGE262
{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}氨基甲酸叔丁酯，70 mg, 61%，为黄色液体。LCMS m/z =594 [M+H]+
149
Figure 317267DEST_PATH_IMAGE263
5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯，341 mg, 92.9%，为黄色胶。LCMS m/z =577 [M+Na]+
150
Figure 576210DEST_PATH_IMAGE264
5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯，定量收率，为黄色胶。LCMS m/z =573 [M+H]+
151<sup>D</sup>
Figure 409168DEST_PATH_IMAGE265
5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基)-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈，280 mg, 86.2%，为黄色固体。LCMS m/z = 522[M+H]+
152<sup>B</sup>
Figure 411759DEST_PATH_IMAGE266
5-[(1S)-1-{[7-氯-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈，180 mg, 68.1%，为黄色油。LCMS m/z =556 [M+H]+
153<sup>E</sup>
Figure 138407DEST_PATH_IMAGE267
3-[1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-N,N-双(4-甲氧基苄基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯磺酰胺，53 mg, 43%。LCMS m/z= 799 [M+H]+。
A 1.5当量Et3N被添加到反应混合物
B 1.2当量的DIAD和PPh3用于反应
C 还进行H2O/EtOAc后处理
D 还进行NH4Cl水溶液/DCM后处理
E 1.7当量DIAD和PPh3用于反应。
制备例154
{3-[(1S)-1-({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基}乙酸叔丁酯
Figure 833830DEST_PATH_IMAGE268
由{3-[(2R)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基}乙酸叔丁酯(制备例24)和(6-氟-3-羟基喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例105)，通过遵循为制备例145至153所述的程序，制备标题化合物，为黄色液体，93 mg。
LCMS m/z = 579 [M+H]+。
制备例155
(3-{(1S)-1-[5-氰基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure 668931DEST_PATH_IMAGE269
由(6-氟-3-羟基喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例105)和3-[(1R)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(制备例31)，遵循为制备例145至153所述的程序，制备标题化合物，为棕色油，170 mg, 95.2%。
LCMS m/z = 496 [M+Na]+。
制备例156
3-(1-{[6-溴-2-(叔丁基氨基)喹啉-3-基]氧基}乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈
Figure 147317DEST_PATH_IMAGE270
由3-(1-羟基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(制备例30)和6-溴-2-(叔丁基氨基)喹啉-3-醇(制备例136)，通过遵循与为制备例145至153所述的程序相似的程序，区别在于1.2当量的DIAD和PPh3用于反应，制备标题化合物，为灰色固体，100 mg, 21.7%。
LCMS m/z = 492 [M+H]+。
制备例157
3-{(1S)-1-[(5,8-二氟-1-氧化喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
Figure 56367DEST_PATH_IMAGE271
在室温，向5,8-二氟喹啉-3-醇1-氧化物(制备例104，300 mg, 1.52 mmol)，3-[(1R)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例28，330 mg, 1.34 mmol)和Ph3P树脂(1390 mg, 4.18 mmol)在无水THF(14 mL)和DMF(2.4 mL)中的黄色混合物中滴加DIAD(846 mg, 4.18 mmol)。用N2吹扫混合物，在室温搅拌30分钟并且然后在50°C加热16小时。在真空中浓缩被冷却的反应混合物并且通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至60:40)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为黄色胶，47.5%。
LCMS m/z = 426 [M+H]+。
制备例158
3-{(1S)-1-[(6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
Figure 461373DEST_PATH_IMAGE272
搅拌烯丙基氯化钯二聚物(674 mg, 1.84 mmol)和(S)-1-[(RP)-2-(双环己基膦基)二茂铁基]乙基二叔丁基膦(2.66g, 4.80 mmol)在甲苯(250 mL)中的混合物20分钟。添加3-溴-6,8-二氟喹啉(18.04g, 73.9mmol)和3-[(1S)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例27，20.04g, 81.4 mmol)并且搅拌该反应混合物直到获得溶液。添加Cs2CO3(49.9g, 153 mmol)并且在105°C(内部温度)搅拌该反应混合物22小时。然后使反应混合物冷却至室温。在EtOAc(200 mL)和H2O(200 mL)之间分割残余物并且分离各层。水相用EtOAc(2x200 mL)萃取并且合并的有机萃取物用盐水(50 mL)洗涤，干燥(MgSO4)，滤过Celite®并且在降低的压力下浓缩滤液。通过柱色谱法(金硅胶柱)，用庚烷:EtOAc(100:0至70:30)洗脱，提纯粗制材料而得到标题化合物，为玻璃状固体，23.1g, 76.3%。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.71 (d, 3H), 3.96 (s, 3H), 5.98-6.02 (m,1H), 6.64 (s, 1H), 7.00-7.45 (m, 4H), 7.83 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 8.17 (d,1H), 8.36 (s, 1H), 8.70 (s, 1H)。
制备例159
3-{(1S)-1-[(6,8-二氟-1-氧化喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
Figure 455874DEST_PATH_IMAGE273
m-CPBA(72.47g, 290 mmol)被添加至3-{(1S)-1-[(6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例158，30.5g, 74.5 mmol)在DCM(700 mL)中的溶液并且在室温搅拌该反应混合物16小时。将混合物冷却到-1.9°C并且以1mL/min的速度添加饱和Na2SO3溶液(25 mL)。添加2M Na2CO3溶液(400 mL)，搅拌该混合物15分钟并且分离各层。水相用DCM(200 mL)萃取，合并的有机萃取物用盐水(250 mL)洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。通过快速柱色谱法(在硅胶上)，用EtOAc:庚烷(30:70至75:25)洗脱，提纯粗产物而得到标题化合物，为淡橙色泡沫，17.33g, 55%。
LCMS m/z = 426 [M+H]+。
制备例160
2-(3-{(1S)-1-[5-氨基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮
Figure 3530DEST_PATH_IMAGE274
TFA(1 mL)被添加至{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}氨基甲酸叔丁酯(制备例148，70 mg,0.1 mmol)在DCM(2 mL)中的溶液并且在25°C搅拌该反应混合物1小时。反应混合物在降低的压力下蒸发并且将粗制品悬浮在EtOAc(20 mL)中并且用H2O(5 mL)，盐水(5 mL)洗涤，用Na2SO4干燥并且在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为黄色液体，50 mg, 98%。
LCMS m/z = 572 [M+H]+。
制备例161
5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基)-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺
Figure 829403DEST_PATH_IMAGE275
K2CO3(213 mg, 1.54 mmol)被添加至5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基)-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(制备例151，230mg, 0.441 mmol)在DMSO(7.5 mL)中的溶液，并且搅拌该混合物10分钟。添加H2O2(1.5 mL)并且搅拌该反应混合物1小时。添加水(100 mL)并且水相混合物用DCM(3×90 mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水(100 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩而得到标题化合物，为黄色油，182 mg, 76.5%。
LCMS m/z = 548[M+H2O]+
制备例162
5-[(1S)-1-{[7-氯-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺
Figure 866629DEST_PATH_IMAGE276
通过按照制备例161中所述的程序，由5-[(1S)-1-{[7-氯-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(制备例152)，获得标题化合物，为黄色油，97%收率，160 mg。
LCMS m/z = 592 [M+H]+。
制备例163
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酰肼
Figure 20530DEST_PATH_IMAGE277
向3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例145，300 mg, 0.56 mmol)在MeOH(15 mL)中的溶液中添加水合肼(1.5 mL, 15 mmol)，并且在15°C搅拌该反应混合物60小时。在真空中浓缩反应混合物并且通过HPLC，使用Agela Durashell C18柱并且用0.05%NH4OH水溶液:MeCN(30:70至60:40)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为白色固体，96 mg, 42%。
LCMS m/z = 407 [M+H]+。
制备例164
(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(N-羟基甲脒基(carbamimidoyl))-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure 168615DEST_PATH_IMAGE278
在室温向(3-{(1S)-1-[5-氰基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例155，170 mg, 0.36 mmol)在无水的MeOH(2 mL)和THF(2 mL)中的溶液中添加NH2OH.HCl(37.4 mg, 0.54 mmol)和Et3N(109 mg, 1.08 mmol)并且在80°C搅拌该反应混合物20小时。被冷却的反应混合物用H2O(10 mL)淬灭并且用EtOAc(3x20 mL)萃取。合并的有机层用盐水(10 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩而得到粗制物。将此通过柱色谱法(硅胶)，用MeOH:DCM(0:100至5:95)洗脱，提纯而得到标题化合物，为无色油，156 mg, 85.8%。
LCMS m/z = 507 [M+H]+。
制备例165
3-{(1S)-1-[(2-氯-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
Figure 865307DEST_PATH_IMAGE279
TsCl(194 mg, 1.02 mmol)在DCM(2 mL)中的溶液被添加至3-{(1S)-1-[(5,8-二氟-1-氧化喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例157，360 mg,0.846 mmol)和DIPEA(219 mg, 1.69 mmol)在DCM(6 mL)中的冰冷却的溶液并且在室温搅拌溶液18小时。在真空中浓缩反应混合物并且通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至20:80)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，70.1%。
LCMS m/z = 444 [M+H]+。
制备例166
3-[(1S)-1-({5,8-二氟-2-[(4-甲氧基苄基)氨基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
Figure 11117DEST_PATH_IMAGE280
向3-{(1S)-1-[(2-氯-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例165，300 mg, 0.68 mmol)在THF(8 mL)中的溶液中添加PMB-NH2(464 mg,3.38 mmol)和DIPEA(0.353 mL,2.03 mmol)并且在70°C加热反应混合物40小时。在降低的压力下浓缩被冷却的反应混合物并且通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至20:80)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为黄色胶，240 mg, 65.2%。
LCMS m/z = 567 [M+Na]+。
制备例167至180
在0°C向适当的醇(1当量)，和喹啉醇(1当量)和PPh3(3当量)在无水THF(10-12.5mL/mmol)中的溶液中滴加DIAD(3当量)，并且在25°C搅拌该反应混合物15小时。在真空中浓缩反应混合物而得到粗产物，将其通过硅胶色谱法，用石油醚:EtOAc（适当的梯度）洗脱，提纯而得到标题化合物。
167
Figure 714631DEST_PATH_IMAGE281
(6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯，250 mg, 99%收率，为黄色胶。LCMS m/z = 368[M-Boc]+
168
Figure 463144DEST_PATH_IMAGE282
2-(6,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮, 为淡黄色油, 120mg, 96%。LCMS m/z = 538 [M+H]+
169<sup>A</sup>
Figure 201293DEST_PATH_IMAGE283
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-8-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯, 白色固体, 1.188g, 78.3%。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ: 1.66 (d, 3H), 4.03 (s, 3H), 4.14 (q,1H), 5.94-5.97 (m, 1H), 6.50 (d,1H), 7.46 (dd, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.74-8.04 (m, 6H), 8.22 (s, 1H), 8.48 (d, 1H)。
170
Figure 518005DEST_PATH_IMAGE284
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯, 5.16g, 83%, 为黄色泡沫。1H NMR (400MHz,CDCl3) δ: 1.64 (d, 3H), 4.00 (s, 3H), 4.15 (q, 1H), 5.88 (q, 1H), 6.42 (s, 1H), 7.42-8.18 (m, 9H), 8.43 (dd, 2H)。
171
Figure 787443DEST_PATH_IMAGE285
3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)喹啉-6-甲酸甲酯, 黄色油, 定量收率。LCMS m/z = 600 [M+H]+
172
Figure 277330DEST_PATH_IMAGE286
2-(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6,8-二氟喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮, 淡黄色油, 定量收率。LCMS m/z = 578 [M+H]+
173
Figure 542090DEST_PATH_IMAGE287
3-{(1S)-1-[6-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)喹啉-6-腈, 黄色胶, 定量收率。LCMS m/z = 631 [M+H]+
174<sup>B</sup>
Figure 92020DEST_PATH_IMAGE288
6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯, 120mg, 92%, 为无色油。LCMSm/z = 538, 560 [M+H]+, [M+Na]+
175
Figure 832443DEST_PATH_IMAGE289
2-(6,8-二氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮，1030 mg, 84.9%，为黄色固体。1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ: 1.53 (d, 3H), 3.58 (s, 3H), 5.63 (q, 1H), 6.57 (d, 1H), 6.86 (d,1H), 7.47 (dd, 1H), 7.62-7.72 (m, 2H), 7.77 (d, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.98-8.02 (m, 3H),8.06-8.10 (m, 2H)。
176
Figure 329283DEST_PATH_IMAGE290
({6-[(1S)-1-({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}氧基)乙酸叔丁酯，定量收率，为淡黄色油。LCMS m/z = 580 [M+H]+
177
Figure 776445DEST_PATH_IMAGE291
乙酸2-({6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}氧基)乙酯，130 mg,93%，为黄色胶。LCMS m/z = 582 [M+H]+
178
Figure 44746DEST_PATH_IMAGE292
3-[(1S)-1-{6-[2-(乙酰基氧基)乙氧基]-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}乙氧基]-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)喹啉-6-甲酸甲酯，(收率)，为淡黄色油。LCMS m/z = 644 [M+Na]+
179
Figure 413411DEST_PATH_IMAGE293
2-(6-氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮，定量收率，为黄色固体。LCMS m/z = 532 [M+Na]+
180
Figure 245100DEST_PATH_IMAGE294
6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-3-氟-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯，73 mg, 50%，为黄色固体。LCMS m/z = 578 [M+Na]+。
A 1.2当量的DIAD和PPh3用于反应
B 4当量Et3N被添加至反应混合物。
制备例181至184
在0°C，向(1R)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(制备例52)(1当量)和适当的喹啉醇(1当量)和PPh3(3当量)在无水THF(10-12.5mL/mmol)中的溶液中滴加DIAD(3当量)并且在25°C搅拌该反应混合物15小时。在真空中浓缩反应混合物而得到粗产物，将其通过硅胶色谱法，用石油醚:EtOAc（适当的梯度）洗脱，提纯而得到标题化合物。
181
Figure 874665DEST_PATH_IMAGE295
(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-1,5-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯，270 mg, 69%，为绿色胶。LCMS m/z = 413[M-Boc]+
182
Figure 500818DEST_PATH_IMAGE296
(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯，90 mg, 79%，为无色油。LCMS m/z = 527 [M+H]+
183
Figure 91200DEST_PATH_IMAGE297
(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-甲基-1,5-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯，黄色固体，定量收率。LCMS m/z = 527 [M+H]+
184
Figure 726580DEST_PATH_IMAGE298
(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-7-氟-1,5-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯，85 mg, 69%，为淡黄色固体。LCMS m/z = 531 [M+H]+。
制备例185
5,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉1-氧化物
Figure 958454DEST_PATH_IMAGE299
DIAD(903 mg, 4.46 mmol)被滴加到5,8-二氟喹啉-3-醇1-氧化物(制备例104，400.0 mg, 2.03 mmol)，(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(制备例53，420mg, 2.03 mmol)和Ph3P树脂(1490 mg, 4.46 mmol)在无水THF(10 mL)/DMF(1.0 mL)中的悬浮液，用N2吹扫混合物并且在室温搅拌该反应混合物5分钟，然后在50°C搅拌18小时。在真空中浓缩被冷却的混合物并且通过柱色谱法(硅胶)，用MeOH:DCM(0:100至95:5)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为黄色胶，650 mg, 83%。
LCMS m/z = 387 [M+H]+。
制备例186
6-溴-N-叔丁基-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 958771DEST_PATH_IMAGE300
PPh3(709 mg, 2.70 mmol)和DIAD(546 mg, 2.70 mmol)在THF(10.7 mL)中的溶液被冷却到0°C，然后添加1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(制备例54，400 mg,1.93 mmol)和6-溴-2-(叔丁基氨基)喹啉-3-醇(制备例136，627 mg, 2.12 mmol)在THF(10.7 mL)中的溶液。在0°C搅拌该反应混合物5分钟并且在室温搅拌18小时，然后过滤并且滤液在真空中浓缩。通过ISCO柱色谱法(在硅胶上)，用己烷:EtOAc洗脱(15:85至50:50)，提纯粗产物而得到标题化合物，为黄色固体，830 mg, 89%。
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ: 1.54 (s, 9H), 1.79 (d, 3H), 5.45 (s, 1H),5.79 (q, 1H), 6.52-6.56 (m, 1H), 6.58 (t, 1H), 7.34-7.41 (m, 2H), 7.41-7.48(m, 2H), 7.63 (d, 1H), 7.84-7.89 (m, 1H), 8.59 (d, 1H)。
制备例187
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-7-氟-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯
Figure 833186DEST_PATH_IMAGE301
向2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-羟基-7-氟喹啉-6-甲酸甲酯(制备例129，120 mg, 0.328 mmol)在无水THF(2 mL)中的溶液中添加1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(制备例54，81.5 mg, 0.39 mmol)和PPh3(172 mg, 0.66 mmol)。在0°C搅拌该反应混合物，滴加DIAD(132 mg, 0.655 mmol)并且在20°C搅拌该反应混合物16小时。该反应混合物用EtOAc(10 mL)稀释，用盐水(3×5 mL)洗涤，合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。粗制残余物通过色谱法(在硅胶上)，用石油醚:EtOAc(100:0至30:70)洗脱，提纯而得到标题化合物，为白色固体，150 mg, 82.4%。
LCMS m/z = 578 [M+Na]+。
制备例188
(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure 334575DEST_PATH_IMAGE302
向(1R)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(制备例52，12.0g, 43.12mmol)和PPh3(13.80g, 52.6 mmol)在THF(120 mL)中的冷却(-6°C)悬浮液中滴加DIAD(9.34 mL, 47.4 mmol)使得保持内部温度低于3°C。在-6°C搅拌该反应混合物10分钟，然后在15分钟内滴加(6-氟-3-羟基喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例105，11.60g, 43.1mmol)在THF(40 mL)中的溶液。使反应混合物慢慢地升温至室温并且搅拌17小时。反应混合物在MTBE(120 mL)和1N NaOH(80 mL)之间分割，分离各层和水相用MTBE(120 mL)萃取。合并的有机相用1N NaOH(80 mL)，然后盐水(80 mL)洗涤并且用MgSO4干燥。混合物被滤过Celite®垫，用MTBE(120 mL)冲洗，并且在降低的压力下浓缩滤液。残余物与Et2O共沸并且然后使用CombiFlash Rf(金硅胶柱)，用EtOAc:DCM(0:100至20:80)洗脱，提纯而得到标题化合物。
LCMS m/z = 528 [M+H]+。
制备例189
3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-胺
Figure 814098DEST_PATH_IMAGE303
TFA(10 mL, 187 mmol)被滴加到(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例188，9.9g, 18.74 mmol)在DCM(50mL)中的溶液中并且在室温搅拌该反应混合物17小时。添加另外的TFA(2 mL)并且搅拌该反应混合物另外的24小时。在降低的压力下浓缩溶液并且残余物与DCM(20 mL)和庚烷(200mL)共沸。粗制材料在1N NaOH(150 mL)和DCM(100 mL)之间分割并且分离各层。水相用DCM(100 mL)萃取，合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并且在降低的压力下浓缩。产物从热EtOAc/庚烷再结晶而得到标题化合物，为白色固体，6.71g。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ:1.84 (d, 3H), 5.16 (br s, 2H), 5.82-5.87 (m, 1H), 6.60 (s, 1H), 6.74 (s, 1H),6.98-7.00 (m, 1H), 7.12-7.18 (m, 2H), 7.52-7.58 (m, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.88(s, 1H)。
制备例190
2-(叔丁基氨基)-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲腈
Figure 47633DEST_PATH_IMAGE304
向6-溴-N-叔丁基-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(制备例186，600 mg, 1.24 mmol)在t-BuOH(6 mL)和H2O(6 mL)中的溶液中添加K3Fe(CN)6(209 mg, 0.495 mmol)，聚合物结合的Pd(PPh3)4(71.6 mg, 0.062 mmol)和Polycat® 5催化剂(1M，0.31 mL, 0.31 mmol)，用N2吹扫系统2分钟并且然后在85°C搅拌18小时。被冷却的反应混合物被滤过Celite®，用EtOAc冲洗。滤液用盐水和H2O洗涤，用Na2SO4干燥并且在真空中浓缩。在硅胶筒上，用庚烷:EtOAc(50:50)洗脱，提纯粗产物而得到标题化合物，为白色固体。
LCMS m/z = 431 [M+H]+。
制备例191
6-溴-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 222393DEST_PATH_IMAGE305
在60°C搅拌甲烷磺酸1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯(制备例57，376.0mg, 1.41 mmol)，2-氨基-6-溴喹啉-3-醇(制备例135，280.0 mg, 1.17 mmol)和Cs2CO3(763.0 mg, 2.34 mmol)在MeCN(15 mL)中的悬浮液16小时。在真空中浓缩被冷却的反应混合物并且所得的黄色固体通过快速硅胶色谱法，用DCM:MeOH(100:0至85:15)洗脱，提纯而得到标题产物，为黄色固体，360.0 mg, 74.9%。
LCMS m/z = 411 [M+H]+。
制备例192
2-氨基-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲腈
Figure 199577DEST_PATH_IMAGE306
氮气被鼓泡通过6-溴-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(制备例191，360 mg, 0.88 mmol)，Pd2(dba)3(121.0 mg, 0.132 mmol)，tBuXPhos(123.0mg, 0.26 mmol)，Zn(CN)2(155.0 mg, 1.32 mmol)和TMEDA(20.4 mg, 0.175 mmol)在无水DMF(10 mL)中的混合物，反应管被密封并且在微波辐射下将反应混合物加热到160°C持续1.5小时。在真空中浓缩被冷却的混合物并且通过柱色谱法(硅胶)，用DCM:MeOH(100:0至92:8)洗脱，提纯残余物而得到标题产物，为黄色固体，270.0 mg, 86.3%。
LCMS m/z = 357 [M+H]+。
制备例193
2-氨基-3-{(1S)-1-[6-羟基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸
Figure 268027DEST_PATH_IMAGE307
在N2下，向3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)喹啉-6-甲酸甲酯(制备例171，670 mg, 1.12 mmol)和KOH(188 mg, 3.36 mmol)在1,4-二氧杂环己烷/H2O(40mL/20 mL)中的溶液中添加tBuXPhos(47.5 mg, 0.112 mmol)和Pd2(dba)3(51.3 mg, 0.056 mmol)。用N2使混合物脱气并且在90°C搅拌该反应混合物3小时。混合物在真空中浓缩而除去有机溶剂并且用1N HCl将pH调节到6。用DCM(3x20 mL)萃取混合物并且用H2O(5 mL)和盐水(5 mL)洗涤。混合物被过滤并且用MTBE(2×10 mL)洗涤该滤饼，然后在真空下干燥而得到标题化合物，为棕色固体，438 mg。
LCMS m/z = 392 [M+H]+。
制备例194
1-(2-氨基-3-{(1S)-1-[6-羟基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-基)乙酮
Figure 359DEST_PATH_IMAGE308
向2-氨基-3-{(1S)-1-[6-羟基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸(制备例193，150 mg, 0.38 mmol)在DMF(3 mL)中的溶液中添加MeNHOMeHCl(77.1 mg,0.58 mmol)，DIPEA(297 mg, 2.3 mmol)和HATU(291 mg, 0.767 mmol)并且在室温搅拌该反应混合物1小时。混合物用H2O(5 mL)淬灭并且用EtOAc:THF(v:v=3:1，5×15 mL)萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩而得到黄色胶。将此溶于THF(10 mL)，将溶液冷却至0°C，添加MeMgBr(4 mL, 3M，在Et2O中)并且在室温搅拌该反应混合物1小时。将悬浮液用1N HCl(3 mL)淬灭并且在真空中浓缩。残余物在H2O(15 mL)和EtOAc/THF，(v/v=2/1，40 mL)之间分割，分离各层并且有机萃取物用Na2SO4干燥，过滤并且在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为黄色胶，150 mg。
LCMS m/z = 390 [M+H]+。
制备例195
2-氨基-7-氟-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸
Figure 849367DEST_PATH_IMAGE309
向2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-7-氟-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯(制备例187，150 mg, 0.270 mmol)在THF/MeOH/H2O(2mL/2mL/2mL)中的溶液中添加NaOH(54.0 mg, 1.35 mmol)并且在20°C搅拌该反应混合物12小时。使用HCl水溶液将反应混合物的pH调节到6，在降低的压力下蒸发混合物并且通过冻干来干燥产物而得到白色固体，将其在没有进一步提纯的情况下进行使用，111mg。
LCMS m/z = 412 [M+H]+。
制备例196
6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 302345DEST_PATH_IMAGE310
MsCl(0.023 mL,0.298 mmol)被滴加至1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙醇(制备例85，62 mg, 0.20 mmol)和Et3N(60.3 mg, 0.60 mmol)在无水DCM(4 mL)中的0°C溶液并且使溶液升温至室温和搅拌1.5小时。该反应混合物用DCM(5 mL)稀释，用盐水(5 mL)淬灭并且分离各层。有机相用NaHCO3(5 mL)和盐水(5 mL)洗涤，用Na2SO4干燥并且在真空中浓缩而得到淡黄色油。在80℃搅拌该油，2-氨基-6-氟喹啉-3-醇(制备例134，40 mg, 0.23 mmol)和Cs2CO3(200 mg, 0.615 mmol)在MeCN(5 mL)中的悬浮液16小时。反应混合物被过滤并且在真空中浓缩滤液。通过快速硅胶柱，用石油醚:EtOAc(100:0至0:100)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为浅棕色油，42 mg, 43%。
LCMS m/z = 473 [M+H]+。
制备例197
7-氯-6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 553198DEST_PATH_IMAGE311
由1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙醇(制备例85)和2-氨基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇(制备例140)，通过按照制备例196中所述的程序，获得标题化合物，35%收率，50 mg。
LCMS m/z = 507 [M+H]+
制备例198至206
在0°C，向适当的醇(1当量)和喹啉醇或萘啶醇(1当量)和PPh3(3当量)在无水THF(10-12.5mL/mmol)中的溶液中滴加DIAD(3当量)并且在25°C搅拌该反应混合物15小时。在真空中浓缩反应混合物而得到粗产物，将其通过硅胶色谱法，用石油醚:EtOAc（适当的梯度）洗脱，提纯而得到标题化合物。
198
Figure 941585DEST_PATH_IMAGE312
{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯，黄色胶，定量收率。LCMS m/z = 631 [M+Na]+
199
Figure 277888DEST_PATH_IMAGE313
{6-[(1S)-1-({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸甲酯，淡黄色油，定量收率。LCMS m/z =561 [M+H]+
200
Figure 800136DEST_PATH_IMAGE314
{6-[(1S)-1-({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯，170 mg, 91%，为淡黄色油。LCMS m/z =561 [M+H]+
201
Figure 967812DEST_PATH_IMAGE315
{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯，295 mg, ，为绿色胶。LCMS m/z =591 [M+H]+
202<sup>A</sup>
Figure 714052DEST_PATH_IMAGE316
2-(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮，浅黄色胶，定量收率。LCMS m/z = 672 [M+Na]+
203
Figure 475334DEST_PATH_IMAGE317
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-[(1S)-1-{5-(1H-吡唑-1-基)-1-[(2S)-四氢-2H-吡喃-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}乙氧基]喹啉-6-甲酸甲酯，黄色胶，定量收率。LCMS m/z = 644 [M+H]+
204
Figure 411060DEST_PATH_IMAGE318
{6-[(1S)-1-({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-7-甲基-1,6-萘啶-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基}乙酸甲酯，黄色液体，定量收率。LCMS m/z = 559 [M+H]+
205
Figure 370926DEST_PATH_IMAGE319
(7-甲基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-1,6-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯，黄色胶，定量收率。LCMS m/z = 617 [M+H]+
206
Figure 225750DEST_PATH_IMAGE320
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯，绿色胶。LCMS m/z = 730 [M+Na]+。
A 1.5当量的DIAD和PPh3用于反应中
制备例207
{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸叔丁酯
Figure 536645DEST_PATH_IMAGE321
在冰/丙酮浴中，DIAD(86.3 mg, 0.427 mmol)/THF(0.5 mL)被滴加到PPh3(112mg, 0.43 mmol)在THF(2 mL)中的溶液中，并且在0°C搅拌溶液5分钟。添加2-(6-氟-3-羟基喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例127，101 mg, 0.328 mmol)在THF(0.7 mL)中的悬浮液，随后{6-[(1R)-1-羟基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸甲酯(制备例90，112 mg, 0.328 mmol)/THF(0.3 mL)，并且使反应混合物升温至室温和搅拌16小时。混合物用EtOAc稀释，用H2O(10 mL)，1N NaOH(10 mL)和盐水(10 mL)洗涤然后用MgSO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过硅胶色谱法，用EtOAc:庚烷(0:100至50:50)洗脱，提纯粗产物而得到标题化合物，为白色固体，147.9 mg。
LCMS m/z = 633 [M+H]+。
制备例208至210
在0°C，向适当的醇(1当量)和喹啉醇或萘啶醇(1当量)和PPh3(3当量)在无水THF(10-12.5mL/mmol)中的溶液中滴加DIAD(3当量)并且在25°C搅拌该反应混合物15小时。在真空中浓缩反应混合物而得到粗产物，将其通过硅胶色谱法，用石油醚:EtOAc（适当的梯度）洗脱，提纯而得到标题化合物。
208<sup>A</sup>
Figure 259751DEST_PATH_IMAGE322
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯，65 mg, 32%，为黄色固体。LCMS m/z = 665 [M+H]+
209<sup>B</sup>
Figure 277385DEST_PATH_IMAGE323
3-{1-[1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)喹啉-6-甲酸甲酯9.50g, 75.3%，为黄色固体。LCMS m/z = 717 [M+H]+
210<sup>C,B</sup>
Figure 631006DEST_PATH_IMAGE324
2-(6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮，(421 mg,100%收率)，为黄色固体。LCMS m/z = 649 [M+H]+。
A 1.2当量的DIAD和PPh3用于反应中
B 进行水溶液后处理，然后色谱法
C 1.5当量的DIAD和PPh3用于反应中
制备例211
2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯
Figure 979598DEST_PATH_IMAGE325
向1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙醇(制备例86，800 mg, 2.23 mmol)和2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-羟基-7-氟喹啉-6-甲酸甲酯(制备例129，899 mg, 2.45 mmol)在THF(15 mL)中的溶液中添加PPh3(878 mg, 3.35 mmol)和DIAD(677 mg, 3.35 mmol)并且在N2下，在30°C搅拌该反应混合物16小时。该黄色溶液用H2O(15 mL)稀释，用EtOAc(3×15 mL)萃取并且合并的有机萃取物用盐水(40 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩。该黄色胶通过柱色谱法，用EtOAc:石油醚(5:95至50:50)洗脱，提纯而得到标题化合物，为黄色固体，1000 mg, 63.4%。
LCMS m/z = 707 [M+H]+。
制备例212
2-氨基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯
Figure 444077DEST_PATH_IMAGE326
向2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯(制备例211，1000 mg, 1.42 mmol)在EtOH(40 mL)中的悬浮液中添加水合肼(8 mL)并且在85°C搅拌黄色悬浮液40分钟。在真空中浓缩被冷却的反应混合物并且将残余物悬浮在MeOH(15mL)中，过滤并且滤液在真空中浓缩而提供粗制品。将此通过柱色谱法(硅胶)，用MeOH:DCM(0:100至20:80)洗脱，提纯而得到标题化合物，为黄色固体，430 mg, 52.7%。
LCMS m/z = 577 [M+H]+。
制备例213
2-氨基-3-{1-[1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯
Figure 50639DEST_PATH_IMAGE327
在-60°C，NH3气体被鼓泡通过3-{1-[1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)喹啉-6-甲酸甲酯(制备例209，9.5g, 13.25 mmol)在THF(150 mL)中的溶液并且在室温在密封容器中搅拌该反应混合物16小时。在降低的压力下蒸发该溶液而得到标题化合物，为淡黄色固体。
LCMS m/z = 587 [M+H]+。
制备例214
2-氨基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸
Figure 903057DEST_PATH_IMAGE328
向2-氨基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯(制备例212，380 mg, 0.66 mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加2N NaOH(3 mL, 6 mmol)并且在15°C搅拌该黄色溶液80小时。添加另外的2N NaOH(0.5 mL, 1 mmol)并且在30°C搅拌该反应混合物另外的4.5小时。使用1N HCl中和混合物并且所得的悬浮液用EtOAc(3×5 mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水(10 mL)洗涤，用Na2SO4干燥并且在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为黄色固体，320 mg,86.3%。
LCMS m/z = 563 [M+H]+。
制备例215
2-氨基-3-{1-[1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 922966DEST_PATH_IMAGE329
在-60°C，NH3气体被鼓泡通过2-氨基-3-{1-[1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯(制备例213，7.78g, 0.86 mmol)在MeOH(70 mL)中的溶液10分钟，然后将反应混合物密封在高压釜中并且在80°C搅拌90小时。在真空中浓缩被冷却的溶液并且在真空中干燥残余物而得到粗制品。将此通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(30:70至100:0)洗脱，提纯而得到标题化合物，为淡黄色固体，2.2g, 29%。
LCMS m/z = 572 [M+H]+。
制备例216
2-氨基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 863240DEST_PATH_IMAGE330
向2-氨基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸(制备例214，310 mg, 0.55 mmol)在THF(3 mL)中的黄色溶液中添加HATU(209 mg, 0.55 mmol)和NH4Cl(29.5 mg, 0.55 mmol)并且在15°C搅拌该混合物20分钟。添加Et3N(167 mg, 1.65 mmol)并且搅拌该反应混合物36小时。黄色悬浮液用H2O(8 mL)稀释，用EtOAc(3×8 mL)萃取，合并的有机萃取物用盐水(20 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩。通过制备型-TLC，用EtOAc洗脱，提纯粗产物而得到标题化合物，为黄色固体，60 mg, 19%。
LCMS m/z = 562 [M+H]+。
制备例217
2-氨基-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 652204DEST_PATH_IMAGE331
氯化钙(518 mg, 4.67 mmol)被添加至2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯(制备例208，1.0g, 1.56 mmol)在甲醇化NH3(30 mL, 7.0M)中的溶液并且在80°C在密封管中搅拌该反应混合物18小时。在真空中浓缩被冷却的反应混合物，添加H2O(10mL)并且用DCM(3x20 mL)萃取溶液。合并的有机萃取物用Na2SO4干燥，过滤并且在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为黄色胶，600 mg, 77.5%。
LCMS m/z = 498 [M+H]+。
制备例218
(6-氟-3-{(1S)-1-[1-(2-羟基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure 160677DEST_PATH_IMAGE332
在室温，向{6-[(1S)-1-({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯(制备例200，103 mg, 0.184 mmol)在MeOH/THF(1mL/3 mL)中的溶液中逐份添加NaBH4(34.8 mg, 0.92 mmol)。在室温搅拌该反应混合物3小时，然后添加另外的NaBH4(34.8 mg, 0.92 mmol)并且搅拌该反应混合物另外的3小时。将混合物倒入饱和NaHCO3水溶液并且在真空中浓缩而除去有机溶剂，然后用EtOAc(2×15 mL)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。通过柱色谱法(硅胶)，用EtOAc:石油醚(0:100至80:20)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为淡黄色胶，79 mg, 81%。
LCMS m/z = 533 [M+H]+。
制备例219
{6-[(1S)-1-({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸
Figure 402303DEST_PATH_IMAGE333
向{6-[(1S)-1-({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸甲酯(制备例199, 190 mg, 0.34 mmol)在无水THF/MeOH(3mL/3mL)中的溶液中添加2M NaOH(1.1 mL, 2.2 mmol)并且在室温搅拌该反应混合物1小时。反应混合物用EtOAc(3×10 mL)萃取，合并的有机萃取物用H2O(2×5 mL)洗涤，将水层合并并且使用1N HCl酸化至pH 3-5。该水溶液用EtOAc(3×10 mL)萃取，这些合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩而得到标题化合物，为淡黄色胶，80 mg, 43%。
LCMS m/z = 547 [M+H]+。
制备例220
(3-{(1S)-1-[1-(2-羟基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure 146268DEST_PATH_IMAGE334
在0°C，向{6-[(1S)-1-({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-7-甲基-1,6-萘啶-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基}乙酸甲酯(制备例204，120mg, 0.215 mmol)在无水THF(2 mL)中的溶液中添加LiAlH4(16.3 mg, 0.43 mmol)并且搅拌该反应混合物1小时。通过添加H2O(16.3 mL)，随后15%NaOH水溶液(16.3 mL)，将反应混合物淬灭，并且在室温搅拌该混合物15分钟。所得的固体被过滤掉并且滤液在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为棕色固体。
LCMS m/z = 531 [M+H]+。
制备例221
2-氨基-3-[(1S)-1-{5-(1H-吡唑-1-基)-1-[(2S)-四氢-2H-吡喃-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}乙氧基]喹啉-6-甲酰胺
Figure 383214DEST_PATH_IMAGE335
在密封管中在80℃搅拌2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-[(1S)-1-{5-(1H-吡唑-1-基)-1-[(2S)-四氢-2H-吡喃-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}乙氧基]喹啉-6-甲酸甲酯(制备例203，1.25g, 1.95 mmol)在甲醇化NH3(25 mL, 7M)中的溶液18小时。被冷却的溶液在降低的压力下蒸发而得到黄色胶。将此溶于新鲜的甲醇化NH3(25mL, 7M)并且在密封容器中在80°C搅拌该反应混合物66小时。被冷却的溶液在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，为红色胶。
LCMS m/z = 499 [M+H]+。
制备例222
2-氨基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺
Figure 983960DEST_PATH_IMAGE336
在密封管中在80℃搅拌2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酸甲酯(制备例206，120 mg, 0.17 mmol)在甲醇化NH3(约8M，10 mL)中的溶液16小时。被冷却的反应混合物在降低的压力下蒸发而得到标题化合物，将其直接用于下一步中。
LCMS m/z = 585 [M+Na]+。
制备例223
6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 916144DEST_PATH_IMAGE337
在85°C搅拌2-(6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例210，421 mg, 0.65 mmol)和N2H4.H2O(3 mL)在EtOH(20 mL)中的黄色溶液1小时。在真空中浓缩该黄色溶液，添加MeOH(20 mL)并且滤出黄色固体。在真空中浓缩滤液并且通过制备型-TLC(DCM:MeOH 20:1)提纯该黄色油而得到标题化合物，为黄色油，241 mg, 71.6%。
LCMS m/z = 519 [M+H]+。
制备例224
2-(6-氟-3-{1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮
Figure 260537DEST_PATH_IMAGE338
向1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙酮(制备例84，50 mg,0.21 mmol)在DMF(2 mL)中的黄色溶液中添加NaH(13.3 mg, 0.333 mmol)并且在15°C搅拌悬浮液0.5小时。悬浮液被冷却到0°C，添加SEMCl(55.5 mg, 0.333 mmol)并且在室温搅拌该反应混合物1.5小时。将悬浮液用H2O(5 mL)淬灭，用EtOAc(20 mL)和H2O(15 mL)稀释。用EtOAc(2×15 mL)萃取被分离的水相，合并的有机萃取物用盐水(2×20 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过制备型-TLC(DCM:MeOH=12:1)提纯粗产物而得到浅黄色油，50 mg, 65%。重复反应使得获得150 mg 的产物。向该黄色油(150 mg, 0.405 mmol)在甲醇(10 mL)中的溶液中添加NaBH4(58.2 mg, 1.54 mmol)并且在室温搅拌溶液2小时。在真空中浓缩反应混合物而得到白色残余物，将其在DCM(20 mL)和H2O(15 mL)之间分割，分离各层并且水相用DCM(2×15 mL)萃取。合并的有机萃取物用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩而得到期望的产物(145 mg, 96.1%)，为无色胶。重复反应使得获得195 mg 的产物。在0°C，向该胶(195 mg, 0.523 mmol)，2-(6-氟-3-羟基喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例127，194 mg, 0.628 mmol)和PPh3(206 mg, 0.785 mmol)在THF(11 mL)的溶液中添加DIAD(159 mg, 0.785 mmol)在THF(1 mL)中的溶液并且然后在室温搅拌反应混合物16小时。在真空中浓缩溶液并且通过柱色谱法(在硅胶上)，用MeOH(NH4OH):DCM(0-1.3%)洗脱，提纯残余物而得到标题化合物，为浅黄色胶，230 mg, 66.3%。
LCMS m/z = 663 [M+H]+。
制备例225
6-氟-3-{1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
Figure 102723DEST_PATH_IMAGE339
向2-(6-氟-3-{1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例224，230mg, 0.347 mmol)在EtOH(5 mL)中的黄色溶液中添加N2H4.H2O(3 mL)并且在85°C搅拌该黄色溶液1小时。在真空中浓缩溶液，该胶被悬浮在MeOH(5 mL)中并且白色固体被过滤掉。在真空中浓缩滤液并且通过制备型-TLC，用DCM:MeOH:NH3(20:1:0.5)洗脱，提纯产物而得到期望的产物，为浅黄色胶，110 mg, 59.5%。
LCMS m/z = 533 [M+H]+。
制备例226
1-(6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙烷-1,2,2,2-d4-1-醇
Figure 812053DEST_PATH_IMAGE340
步骤1：在20°C向1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(制备例34, 2.1 g,7.9 mmol)在THF(10 mL)中的黄色溶液中添加LiOD在D2O中的溶液(3M, 10.5 mL)。在48小时后，红色溶液用DCM(3x20 mL)萃取，用Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩而得到1-(6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙烷-1-酮-2,2,2-d3 (2.09g, 98.4%)，为红色固体。
步骤2：在25°C向1-(6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙烷-1-酮-2,2,2-d3(2.09 g, 7.8 mmol)在CD3OD(10.0 mL)中的黄色溶液中添加NaBD4(260 mg, 6.21 mmol)。在1小时后，该反应混合物用丙酮(5 mL)淬灭并且在真空中除去溶剂。残余物通过柱色谱法(20g硅胶，EtOAc/PE=0~25%~35%)提纯而得到标题化合物(1.96 g, 92.7%)，为黄色固体。
LCMS m/z = 272/274 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 5.33 - 5.26 (m,1H), 6.59 (t, 1H), 7.76 - 7.71 (m, 1H), 7.83 (dd, 2H), 8.20 (d, 1H)。
制备例227
(3-(1-(6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙氧基-1,2,2,2-d4)-6-氟喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure 293850DEST_PATH_IMAGE341
通过遵循为制备例167-180所述的程序，由(6-氟-3-羟基喹啉-2-基)氨基甲酸叔丁酯(制备例105)和1-(6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙烷-1,2,2,2-d4-1-醇(制备例226)，获得标题化合物，为淡黄色固体，2.8 g, 73%。
LCMS m/z = 530.3/532.3 [M-H]-. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.60 (s, 6H),1.65 (s, 3H), 6.57 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 7.04 (dd, 1H), 7.16-.7.24 (m, 1H),7.45-7.60 (m, 3H), 7.86 (s, 1H), 7.90-7.95 (m, 2H)。
制备例228
3-(1-羟乙基-1,2,2,2-d4)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
Figure 504251DEST_PATH_IMAGE342
步骤1：在室温，向3-[(1S)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例27, 1.20g, 4.92 mmol)在D2O(24 mL)中的悬浮液中添加NaOD(40wt%，在D2O中，1 mL,14.75 mmol)和THF(6 mL)。在室温搅拌过夜后，LCMS分析显示所期望的中间体的形成。然后，在室温一次性添加NaBD4(210 mg, 4.92 mmol)。在搅拌1小时后，该反应混合物用冰浴冷却，用2M HCl水溶液酸化并且用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并且蒸发而得到3-(1-羟乙基-1,2,2,2-d4)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(1.4g, 定量收率)，为白色固体。
步骤2：在室温，向3-(1-羟乙基-1,2,2,2-d4)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(1.40g,4.92 mmol)在甲醇(25 mL)中的溶液中添加95%浓硫酸(5-6滴)。在回流下加热所得的溶液10小时，冷却至室温并且蒸干。将残余物溶于乙酸乙酯，用饱和NaHCO3洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且蒸发。然后在硅胶(4g, 用0至20%乙酸乙酯/庚烷洗脱)上提纯粗产物而得到标题化合物(1.1g, 89%), 为无色油。
LCMS m/z = 251.2 [M+H]+. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 3.95 (s, 3H), 6.53(t, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.78 (d, 2H), 8.05 (d, 1H), 8.30 (d, 1H)。
制备例229
3-(1-((2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d4)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
Figure 122314DEST_PATH_IMAGE343
通过遵循对制备例145至153所述的程序，由2-(6,8-二氟-3-羟基喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例133)和3-(1-羟乙基-1,2,2,2-d4)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(制备例228)获得标题化合物，为淡黄色固体，1.35g, 74%。
LCMS m/z = 580.8 [M+Na]+。
制备例230
(S)-3-(1-((2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈
Figure 268125DEST_PATH_IMAGE344
通过遵循对制备例145至153所述的程序，由2-(6,8-二氟-3-羟基喹啉-2-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(制备例133)和3-[(1R)-1-羟基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(制备例31)获得标题化合物，为黄色胶，940 mg, 96%。
LCMS m/z 522.2 [M+1]+。
制备例231
2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈
Figure 50267DEST_PATH_IMAGE345
在0°C向氢化钠(16.9g, 706 mmol)在无水THF(500 mL)中的悬浮液中滴加(4-甲氧基苯基)甲醇(75g, 540 mmol)在无水THF(100 mL)中的溶液。在0°C搅拌所得的混合物2小时并且然后用2-溴乙腈(78.1g, 651 mmol)在无水THF(154 mL)中的溶液滴加处理1小时。在室温搅拌所得的反应混合物16小时。然后小心地添加饱和的氯化铵水溶液(200 mL)。在完成添加后，过滤混合物。添加EtOAc(250 mL)，并且分层。然后用EtOAc(2×250 mL)萃取水层。用盐水(50 mL)洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，并且在减压下浓缩。然后通过用梯度的石油醚:乙酸乙酯(100:0至80:20)洗脱的快速色谱法(硅胶)提纯粗产物而得到60.8g(63%)的标题化合物，为淡黄色液体。
LCMS m/z = 200.1 [M + Na]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.81 (s, 3H),4.19 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 6.90 (d, 2H), 7.28 (d, 2H)。
生物学测定
体外研究
结合亲和力, Kd (uM)
使用表面等离子体共振(SPR)测定化合物与纯化的镰状细胞血红蛋白(HbS)的结合亲和力。患者镰状细胞血是按照Institutional Review Board协议从波士顿儿童医院获得的。从纯合S/S患者的血液中获得HbS，并使用Antonini和Brunori, Hemoglobin andMyoglobin in their Reactions with Ligands, Amsterdam, London, North-HollandPublishing Company, 1971中描述的方法纯化。通过离心将全血分离成红血细胞和血浆组分，然后倾析并弃去血浆。用生理盐水(0.9% NaCl)洗涤包装的红细胞，然后用冷去离子水以2:1稀释进行裂解。将溶血产物离心以除去细胞碎片，并加入Drabkin缓冲液(2.8M磷酸钾)进一步纯化，并用Celite®离心。通过用Sephadex® G-25凝胶过滤除去有机磷酸酯(2,3-BPG)。HbS和野生型血红蛋白—血红蛋白A (HbA)通过阳离子交换层析，使用二乙基氨基乙基(DEAE)-Sepharose® 快速流分离，并使用pH 8.5-pH 7.5的pH梯度洗脱。所得HbS和HbA的纯度通过天然凝胶电泳测定并进一步使用HbS级分。
为了稳定血红蛋白的四聚体结构，使用富马酸双(3,5-二溴水杨基)酯在β亚单位(Lys82-Lys82)之间交联HbS，如以下所述：Shibayama N.等人, J Am Chem Soc 2014,136, 13, 5097-5105 和 Shibayama N.等人, Biochemistry 1991, 39, 33, 8158-8165)。交联的HbS随后被生物素化(biotynylate)并在定制的链霉抗生物素传感器上被捕获，以在表面上获得4000至5000共振单位(RU)的蛋白质密度。使用SPR在Sierra SensorsMASS-1仪器上测试化合物与HbS的结合。运行缓冲液含有100mM磷酸钾，pH 7.5，0.005%Tween-20，1mM乙二胺四乙酸(EDTA)，0.1mg/mL牛血清白蛋白和1% DMSO。以30uL/min的流速注射化合物样品，持续2分钟的缔合和至少5分钟的解离时间。对每种化合物测试含有至少4个浓度的2或3倍稀释系列。如果可行，基于化合物在生物化学测定中的活性选择剂量范围。在每个化合物系列之前和之后进行运行缓冲液的多次空白注射，以允许在分析软件中对化合物数据减去空白。在每个实验中进行阳性对照以监测和维持表面上的HbS活性。在每个数据集的开始运行DMSO曲线，以在分析期间对数据应用排除体积校正。使用Sierra Sensors和Scrubber 2.0软件处理和分析数据。通过将传感图拟合到1:1结合模型来计算结合亲和力(解离常数Kd)。本发明化合物的Kd (uM)值列于下表4中。
'R'-'T' 测定(HbS的氧合作用，以及由此的聚合的延迟), IC50 (uM)
在化合物存在下，进行从氧合(oxy) (R，松弛态)到脱氧(deoxy) (T，紧张态) HbS的转化，以测定化合物在脱氧条件下稳定氧合(oxy) (R)态的能力。该测定运行类似于Oksenberg等人, Br J Haematology, 2016, 175, 141–153中所述的“氧解离分析”。
通过首先由100% DMSO中的30 mM起始化合物储备液制备主系列稀释板，而制备测定即用化合物板。使用声学分配，167 nL所需化合物浓度从该主系列稀释板被递送到测定即用板。将板在-20℃冷冻直至需要。将纯化的HbS-O2 (即氧合(oxy) HbS)在100mM磷酸钾缓冲液（pH = 7.4）中稀释至3 uM。将50 uL的3 uM储备溶液加入测定即用板的各孔中并机械混合八次。混合后，将板覆盖并在室温下温育一小时，同时适度振荡。温育后，将板置于脱氧环境(＜1% O2)中两小时，监测随时间变化的向脱氧(deoxy) HbS的转化。分别用在415和430nm处Soret峰的吸光度检测氧合和脱氧形式的血红蛋白，并在0、90和120分钟进行吸光度测量(光密度，OD)。在700nm收集用于校正的背景吸光度。
通过首先在每个时间点从415nm和430nm数据中减去700nm处的基线吸光度，然后取415/430 nm数据的比率(比率= [(OD415 - OD700)/(OD430 - OD700)]，来分析数据。在时间0和每个目标时间点使用来自前次计算的比率计算每个时间点的效果(效果时间 x = 比率时间 x/比率时间 0)。通过比较化合物对仅HbS的效果与由阳性对照化合物妥卡雷锁(Tucaresol)观察到的效果来计算百分比效果(百分比效果 = [(效果时间x 化合物 - 效果时间 x HbS)/ (效果时间 x 妥卡雷锁 - 效果时间 x HbS)] x 100)。数据报告为单点的百分比效果。用以确定HbS'R'-'T'转化的50%抑制的化合物浓度(IC50 (uM))的计算是基于变化的化合物浓度的百分比效果。本发明化合物的IC50 (uM)值呈现于下表4中。
表4:
体外研究数据
Ex Kd n IC<sub>50</sub> n Ex Kd n IC<sub>50</sub> n Ex Kd n IC<sub>50</sub> n
1 0.020 2 4.50 4 27 0.183 4 5.36 4 53 0.016 6 4.25 4
2 0.021 2 6.82 2 28 0.157 2 6.56 1 54 0.892 2 11.23 2
3 0.067 1 5.06 3 29 0.067 2 4.58 3 55 0.406 2 5.71 2
4 0.100 8 4.92 6 30 1.510 1 6.25 2 56 0.053 1 5.68 2
5 0.014 2 4.38 2 31 0.069 4 4.96 4 57 0.184 2 4.84 2
6 0.035 4 4.48 2 32 0.057 2 4.75 4 58 0.034 3 4.80 4
7 0.126 2 NT 33 0.034 2 4.30 2 59 0.047 2 4.50 2
8 0.271 2 7.18 2 34 0.121 2 5.53 2 60 0.055 4 4.11 2
9 0.087 4 4.72 4 35 0.068 2 3.93 2 61 0.036 2 5.45 4
10 0.211 4 5.86 2 36 0.160 2 7.71 2 62 0.040 2 NT
11 0.061 4 4.35 2 37 0.579 2 6.77 4 63 0.152 2 8.36 2
12 0.038 4 4.48 2 38 0.045 2 3.62 2 64 0.220 2 5.73 2
13 0.065 6 4.33 2 39 0.464 2 6.22 2 65 0.015 3 6.17 2
14 0.041 2 4.30 2 40 0.164 2 5.27 2 66 NT NT
15 0.063 2 3.89 2 41 0.044 2 3.83 2 67 0.009 6 3.71 4
16 0.188 2 3.60 2 42 0.142 2 5.26 5 68 0.015 4 4.61 4
17 0.014 3 5.05 4 43 0.020 2 4.63 2 69 0.010 4 4.67 6
18 0.194 2 7.16 2 44 0.063 4 4.40 4 70 0.013 4 4.60 4
19 0.064 6 4.50 4 45 0.185 2 5.58 2 71 0.048 2 4.61 2
20 NT NT 46 0.102 2 5.22 2 72 0.011 2 3.03 2
21 0.037 8 4.62 9 47 0.384 2 6.32 2 73 0.020 2 4.51 2
22 0.172 2 5.40 2 48 0.253 2 4.71 2 74 0.059 6 4.28 4
23 0.043 2 4.01 2 49 0.178 2 6.39 2 75 0.036 2 3.76 1
24 0.015 2 4.66 2 50 1.334 2 100.00 1 76 0.014 4 28.88 2
25 0.067 2 4.78 2 51 6.884 2 52.09 2 77 0.195 2 6.30 2
26 0.138 2 4.91 2 52 10.000 2 100.00 2 80 0.036 2 NT
NT 未试验
与HbA的共结晶
通过共结晶实验进一步研究实施例58的化合物与血红蛋白(Hb)的结合。考虑到HbS和HbA的结构和功能相似性，以及结构研究所需的大量材料，纯化的HbA被用于这些研究。
根据公开的方案(Lee等人. "Crowning proteins: modulating the proteinsurface properties using crown ethers”, Angew Chem Int Ed Engl 2014; 53(48):13054-13058)使含实施例58的HbA结晶。简言之，将20 mg/mL HbA的20 mM Tris-HCl (pH8.0)溶液与等体积的50 mM 18-冠-6溶液混合，并在20℃温育20分钟。然后加入实施例58至终浓度为1.5 mM，再温育另外的1小时。通过混合等体积的蛋白质和含有0.1 M Tris-HCl(pH 8.0)、0.2 M Li2SO4和30-32% PEG 3350的储存溶液，使用悬滴蒸气扩散法在20℃进行结晶。在约2天内晶体生长至最大尺寸，并用10 mM实施例58将晶体浸泡过夜。在ArgonneNational Laboratory Advanced Photon Source, 光束线17-ID收集衍射数据。使用AutoPROC (Global Phasing Limited)处理数据，并使用3WHM (PDB代码)作为起始模型求解结构。使用COOT (Emsley P, Cowtan K. “Coot: model-building tools formolecular graphics”, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 2004; 60(Pt 12 Pt1):2126-32)和BUSTER (Global Phasing Limited)进行模型构建和改进。该结构的最终分辨率为1.85埃(Å)。
与人HbA复合的实施例58的高分辨率(1.85 Å)共晶结构表明Ex 58结合Hb的氧合(R态)构象，并以双点位(ditopic)方式结合，化合物与Hb四聚体的化学计量比为2:1。这些结构研究与上表4中关于结合相互作用和本发明化合物的建议作用机理(即HbS的oxy (R态)的稳定化并因此延迟聚合)所报道的数据一致。
HbS聚合测定
该测定用于确定本发明化合物在变化的HbS占有程度下对HbS聚合的抑制程度。用于该测定的方法根据He 和 Russell (He, Z.和J. E. Russell, "A high-ThroughputMicroplate Method for Assessing Aggregation of Deoxygenated Hemoglobin SHeterotetramers in Vitro", Anal Biochem 306(2): 349-352 (2002))中所述的方法进行调整。
将纯化的HbS交换到1.25M磷酸钾（pH = 7.4）中，并浓缩至1.1 mM。血红蛋白浓度固定在0.15 mM，并使用1.25M磷酸钾（pH = 7.4）将HbS稀释至适当浓度。将本发明的化合物以如下浓度加入0.15 mM HbS中：0.03 mM (10%)、0.075 mM (25%)和0.15 mM (50%)。由于这些化合物是双点位结合剂，因此将浓度加倍以计算覆盖率%，即0.15 *0.5 = 0.075 *2 =0.15。对于所有化合物浓度，以及无化合物对照和HbA，匹配DMSO浓度。温育后，将33.5μLHbS溶液加入Costar 96孔半面积板的每个孔中。为了诱导脱氧，将在1.25M磷酸钾中制备的16.5μL 1M连二亚硫酸钠加入到每个孔中，使最终测定浓度为330 mM，并充分混合。将五十微升的矿物油覆盖在每个孔中的溶液上以防止再氧合，并将板在4℃下放置五分钟。冷温育后，将板置于已在37℃平衡的分光光度计中，以引发聚合过程(温度突变)。在700 nm下监测反应40分钟，每30秒收集数据点。对于每种条件使用四个孔，并且在每个点将数据平均以用于分析。使用Graph Pad Prism分析数据，并将数据拟合到Boltzman S形(Sigmoidal)方程，其中将V50 (t1/2)作为延迟时间。使用DMSO作为初始延迟时间计算百分比变化。使用当拟合到Boltzman S形方程时产生的V50误差混合(compounded)百分比变化的误差。
如通过作为% HbS占有率(% HbS Occ)的函数的增加的延迟时间所测量的HbS聚合延迟，在下表5中报告为对于10%、25%和50% HbS占有率(n = 3)的延迟时间(DT)的增加。
表5
HbS聚合的延迟时间增加
Ex 10% HbS Occ的DT增加 25% HbS Occ的DT增加 50% HbS Occ的DT增加
21 NT 64 ± 6 % NT
58 18 ± 5 % 70 ± 8 % 74 ± 21 %
NT 未试验
HbS聚合的高浓度依赖性是在较高HbS占有水平下效果的非线性的原因。
全血氧亲和力测定
氧亲和力是Hb结合和释放溶液中氧的能力的标志。它可通过在全血中测量在给定氧浓度下存在的氧合和脱氧Hb的百分比来确定。氧亲和力表示为p50，即溶液中50% Hb具有结合的氧时的氧分压，或p20，即溶液中20% Hb具有结合的氧时的氧分压。全血中Hb的氧合状态的稳定通过p20和p50值向更低氧分压的移动来证明。
为了确定本发明化合物对氧亲和力的影响，使用Hemeox分析仪(TCS Scientific)在人、狗和小鼠全血中测量p50和p20。将本发明化合物掺入(spiked)到血液达1 mM的浓度，并在25℃下采用恒定旋转温育1小时。选择1 mM化合物的浓度以使全血中血红蛋白占有率约为20%。具有相同浓度的DMSO，但没有化合物的对照以相同的方式同时温育。温育后，立即使用Hemox分析仪测定样品的氧亲和力。将五十微升血样稀释到预温育到37℃的5毫升的Hemox缓冲液(TCS Scientific)中。稀释后，将样品装载到分析室中，并使用压缩空气完全氧合。一旦样品达到＞150托的pO2，通过转换到N2开始测量，并记录作为分压函数的氧合血红蛋白百分比。从仪器读数记录每个样品的p20和p50。根据以下计算，数据以相对于DMSO的百分比(%)变化报告：
Figure 736463DEST_PATH_IMAGE346
本发明的化合物减少了来自人、狗和小鼠的全血中的p20和p50，如下表6中所示(在n至少为2下收集样品)。
表6
p20和p50 (%)的降低
Figure 412295DEST_PATH_IMAGE347
体内研究
小鼠模型
在单剂量研究中，在雄性镰状Townes小鼠中评价本发明化合物的效果。本发明化合物以表7、8和9中列出的量通过口服管饲法给药。对照小鼠接受媒介物。在0.5小时、1小时、4小时、7小时、10小时和24小时抽取血液(50 uL)。为测量全血中的暴露，使用20 uL样品。还评价了在0.5小时时抽取的血液的细胞镰状化。
在24孔板中用300μL Hemeox溶液将来自处理动物的红细胞(RBC)稀释至约107细胞/ mL，并在缺氧室（5% CO2和3% O2）中温育4 h。然后，在镰状固定溶液(sicklingfixative solution)中在室温下固定细胞30分钟，并在室温下用TER119 Alexa488缀合抗体(BioLegend)染色30分钟，洗涤并用200μL Hemox缓冲液(TCS Scientific)以50,000细胞/孔铺板。使用GraphPad Prism (版本5)显现数据。结果表示为平均值±平均值的标准误差(SEM)。使用非参数单向方差分析(ANOVA)，随后Dunnett氏多重比较进行统计学分析。当p<0.01时接受显著性。
对于长期定量给药(dosing)研究，6-8只小鼠(Townes SCD小鼠)用媒介物或媒介物中的本发明化合物以下表7、8和9中列出的量每天定量给药两次(BID)。定量给药15天后，从所有动物收集血样，在Hemeox分析仪中运行以产生氧亲和力曲线，使用Idexx血液分析仪进行全血分析，并如上所述评价细胞镰状化。可溶性血管粘附分子1水平(sVCAM1)通过来自R&D Systems的酶联免疫吸附测定(ELISA)来评估。结果列于下表7、8和9中。
表7
实施例21的化合物的体内药理学结果的总结
在SCD小鼠中在0.5h单剂量实施例21后的反应 (n=3)
剂量(mg/kg) 血液暴露(µM) % RBC镰状化的变化
30 14.7 2.03
100 302.8 -0.02
300 1136.4 24.6
900 1502.7 29.0
实施例21 (200 mg/kg)每天两次定量给药持续15天后的反应(n=6-8)
参数 变化
RBC镰状化 30.8 ± 14.5 % 减少
p20 76.1 ± 13.9 % 减少
p50 26.2 ± 9.7 % 减少
Hb 43.7 ± 9.83 % 增加
血细胞比容 29.1 ± 11.2 % 增加
网织红细胞 32.7 ± 9.37 % 减少
RBC 44.6 ± 9.04 % 增加
sVCAM1 6.57 ± 3.75 % 减少
表8
实施例27的化合物的体内病理学结果的总结
在SCD小鼠中在0.5h单剂量实施例27后的反应 (n=3)
剂量(mg/kg) 血液暴露(µM) % RBC镰状化的变化
5 7.4 NT
50 208 NT
实施例27 (100 mg/kg)每天两次定量给药持续 15天后的反应(n=4-5)
参数 变化
RBC镰状化 19.2 ± 5.4 % 减少
p20 10.8 ± 3.8 % 减少
p50 7.89 ± 3.36 % 减少
Hb 54.4 ± 8.7 % 增加
血细胞比容 42.0 ± 12.7 % 增加
网织红细胞 18.4 ± 5.5 % 减少
RBC 51.9 ± 8.3 % 增加
NT = 未试验
表9
实施例58的化合物的体内病理学结果的总结
在SCD小鼠中在0.5h单剂量实施例58后的反应(n=3)
剂量(mg/kg) 血液暴露(µM) % RBC镰状化的变化
10 35.8 -6.2
40 285 4.6
220 1450 50.8
490 2870 48.3
实施例58 (200 mg/kg)每天两次定量给药持续 15天后的反应 (n=6-8) *
参数 变化
RBC镰状化 37.8 ± 9.0 %减少
p20 84.4 ± 2.6 % 减少
p50 53.7 ± 21.2 % 减少
Hb 42.4 ± 4.2 % 增加
血细胞比容 30.9 ± 0.7 % 增加
网织红细胞 54.7 ± 2.4 % 减少
RBC 39.2 ± 9.3 % 增加
sVCAM1 9.98 ± 7.1 % 减少
* n=6-7 包括上述计算。

Claims (30)

1.式(I)的化合物
Figure 809857DEST_PATH_IMAGE002
(I)
或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中
X是氨基取代的萘啶或喹啉，其选自：
Figure 726997DEST_PATH_IMAGE004
其中所述萘啶的右手侧环任选被R1取代，并且其中所述喹啉的右手侧环任选独立地被一或二个R1取代；
Y是CH或N；
各R1独立地是卤素；CN；(C1-C4)烷基，其任选被OH取代；或CONR4R5；
R2和R3与它们所连接到的碳原子一起形成含1或2个N的5元杂芳基，其任选被R6取代；或
R2是H；OH；(C1-C4)烷基，其任选被OH或CO2R4取代；(C1-C4)烷氧基，其任选被OH或CO2R4取代；CO2R4；CONR4R5；SO2NR4R4；NR4SO2(C1-C4)烷基；或噁二唑酮；
R3是H或卤素；
各R4独立地是H或(C1-C4)烷基；
各R5独立地是H；(C1-C4)烷基，其任选被OH、O(C1-C4)烷基或CO2R4取代；SO2(C1-C4)烷基；或(C3-C6)环烷基，其任选被OH取代；和
R6是(C1-C4)烷基，其任选被OH、CO2R4或CONR4R5取代。
2.权利要求1的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中X是选自以下的氨基取代的喹啉：
Figure 444417DEST_PATH_IMAGE006
。
3.权利要求2的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中X是选自以下的氨基取代的喹啉：
Figure 839627DEST_PATH_IMAGE008
。
4.权利要求3的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中X是下述的氨基取代的喹啉：
Figure 653999DEST_PATH_IMAGE010
。
5.权利要求3的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中X是下述的氨基取代的喹啉：
Figure 460150DEST_PATH_IMAGE012
。
6.权利要求1的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中X是选自以下的氨基取代的萘啶：
Figure 727183DEST_PATH_IMAGE014
。
7.权利要求1至6中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中各R1独立地是F，Cl，Br，CN，CH3或CONH2。
8.权利要求7的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中各R1独立地是F、Cl或CONH2。
9.权利要求1至8中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中Y是CH。
10.权利要求1至8中任一项的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Y是N。
11.权利要求9或权利要求10的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R2和R3与它们所连接到的碳原子一起形成5元杂芳基，该5元杂芳基选自
Figure 926083DEST_PATH_IMAGE016
。
12.权利要求11的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R2和R3与它们所连接到的碳原子一起形成吡唑基，该吡唑基选自
Figure 735907DEST_PATH_IMAGE018
。
13.权利要求9的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R2是被CO2R4取代的(C1-C4)烷基；被CO2R4取代的(C1-C4)烷氧基；CO2R4；CONR4R5；SO2NR4R4；或噁二唑酮。
14.权利要求10的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R2是H；OH；被OH取代的(C1-C4)烷基；(C1-C4)烷氧基；被OH或CO2R4取代的(C1-C4)烷氧基；CO2R4；或CONR4R5。
15.权利要求1至14中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R3是H或F。
16.权利要求1至15中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R4是H或甲基。
17.权利要求1至16中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，其中R5是H或甲基。
18.根据权利要求1的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，选自：
3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸；
6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
(S)-6-(1-((2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮；和
2-氨基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺。
19.权利要求18的化合物，其是3-{(1S)-1-[(2-氨基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸，或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐。
20.权利要求18的化合物，其是6-{(1S)-1-[(2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇，或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐。
21.权利要求18的化合物，其是(S)-6-(1-((2-氨基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮，或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐。
22.权利要求18的化合物，其是2-氨基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-甲酰胺，或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐。
23.药物组合物，其包含根据权利要求1至22中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐，和药学上可接受的赋形剂。
24.根据权利要求23的药物组合物，其包含一种或多种另外的治疗剂。
25.用作药物的根据权利要求1至22中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐。
26.用于治疗HbS调节剂适应的病症的根据权利要求1至22中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐。
27.根据权利要求26的化合物，其中HbS调节剂适应的病症是镰状细胞病(SCD)。
28.根据权利要求1至22中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物治疗HbS调节剂适应的病症。
29.治疗在人或动物中的HbS调节剂适应的病症的方法，包括给予所述人或动物治疗有效量的根据权利要求1至22中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐。
30.与另一种药理学活性的化合物或与两种或更多种其它的药理学活性的化合物结合的根据权利要求1至22中任一项的化合物或其互变异构体，或所述化合物或其互变异构体的药学上可接受的盐。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CR20210284A (es) * 2018-11-29 2021-07-09 Pfizer Pirazoles como modulares de hemoglobina
JP7449390B2 (ja) 2020-01-24 2024-03-13 ファイザー・インク 抗ｅ－セレクチン抗体、組成物および使用の方法
CN112079774A (zh) * 2020-10-17 2020-12-15 甘肃天后光学科技有限公司 软性隐形眼镜用蓝光吸收剂、其制备方法及应用方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011138751A2 (en) * 2010-05-04 2011-11-10 Pfizer Inc. Heterocyclic derivatives as alk inhibitors
WO2013102145A1 (en) * 2011-12-28 2013-07-04 Global Blood Therapeutics, Inc. Substituted heteroaryl aldehyde compounds and methods for their use in increasing tissue oxygenation
CN104135859A (zh) * 2011-12-28 2014-11-05 全球血液疗法公司 取代的苯甲醛化合物及其用于增加组织氧合的方法

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR0166088B1 (ko) 1990-01-23 1999-01-15 . 수용해도가 증가된 시클로덱스트린 유도체 및 이의 용도
US5376645A (en) 1990-01-23 1994-12-27 University Of Kansas Derivatives of cyclodextrins exhibiting enhanced aqueous solubility and the use thereof
GB9711643D0 (en) 1997-06-05 1997-07-30 Janssen Pharmaceutica Nv Glass thermoplastic systems
US7169797B2 (en) 2003-02-14 2007-01-30 Abbott Laboratories Protein-tyrosine phosphatase inhibitors and uses thereof
US20040167188A1 (en) 2003-02-14 2004-08-26 Zhili Xin Protein-tyrosine phosphatase inhibitors and uses thereof
EP1760071A4 (en) 2004-06-23 2008-03-05 Ono Pharmaceutical Co COMPOUND WITH S1P RECEPTOR BINDING ABILITY AND USE THEREOF
WO2006003923A1 (ja) 2004-06-30 2006-01-12 Sankyo Company, Limited 置換ベンゼン化合物
JP2007176799A (ja) 2005-12-27 2007-07-12 Sankyo Co Ltd 置換ベンゼン化合物を含有する医薬
US8039442B2 (en) 2007-07-18 2011-10-18 Glycomimetics, Inc. Compounds and methods for treatment of sickle cell disease or complications associated therewith
WO2011015524A2 (en) 2009-08-03 2011-02-10 Bayer Cropscience Ag Fungicide heterocycles derivatives
CN102206172B (zh) 2010-03-30 2015-02-25 中国医学科学院医药生物技术研究所 一组取代双芳基化合物及其制备方法和抗病毒应用
EP2616442B8 (en) 2010-09-14 2018-10-17 Exelixis, Inc. Inhibitors of pi3k-delta and methods of their use and manufacture
WO2012129562A2 (en) 2011-03-24 2012-09-27 The Scripps Research Institute Compounds and methods for inducing chondrogenesis
WO2014150289A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Global Blood Therapeutics, Inc. Compounds and uses thereof for the modulation of hemoglobin
US8952171B2 (en) 2013-03-15 2015-02-10 Global Blood Therapeutics, Inc. Compounds and uses thereof for the modulation of hemoglobin
US9604999B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Global Blood Therapeutics, Inc. Compounds and uses thereof for the modulation of hemoglobin
SG11201507453VA (en) 2013-03-15 2015-10-29 Global Blood Therapeutics Inc Compounds and uses thereof for the modulation of hemoglobin
JP6463327B2 (ja) 2013-03-15 2019-01-30 グローバル ブラッド セラピューティクス インコーポレイテッド ヘモグロビンの修飾のための化合物及びその使用
JP6426694B2 (ja) 2013-03-15 2018-11-21 グローバル ブラッド セラピューティクス インコーポレイテッド ヘモグロビンの修飾のための化合物及びその使用
US20140271591A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Global Blood Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the modulation of hemoglobin (s)
US9422279B2 (en) 2013-03-15 2016-08-23 Global Blood Therapeutics, Inc. Compounds and uses thereof for the modulation of hemoglobin
US9458139B2 (en) 2013-03-15 2016-10-04 Global Blood Therapeutics, Inc. Compounds and uses thereof for the modulation of hemoglobin
US10266551B2 (en) 2013-03-15 2019-04-23 Global Blood Therapeutics, Inc. Compounds and uses thereof for the modulation of hemoglobin
US9248199B2 (en) * 2014-01-29 2016-02-02 Global Blood Therapeutics, Inc. 1:1 adducts of sickle hemoglobin
JP2017518339A (ja) 2014-06-20 2017-07-06 インスティチュート パスツール コリア 抗感染化合物
WO2016043849A2 (en) 2014-07-24 2016-03-24 Global Blood Therapeutics, Inc. Compounds for treating acute respiratory distress syndrome or a negative effect thereof
EP3215514B1 (en) 2014-11-03 2018-11-21 F. Hoffmann-La Roche AG Bace1 inhibitors
JP6914834B2 (ja) 2014-11-16 2021-08-04 アレイ バイオファーマ インコーポレイテッド （Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩の結晶形
EP3383392A1 (en) 2015-12-04 2018-10-10 Global Blood Therapeutics, Inc. Dosing regimens for 2-hydroxy-6-((2-(1-isopropyl-1h-pyrazol-5-yl)pyridin-3-yl)methoxy)benzaldehyde
EP3472150A1 (en) 2016-06-17 2019-04-24 Fronthera U.S. Pharmaceuticals LLC Hemoglobin modifier compounds and uses thereof
CN109843294A (zh) 2016-08-15 2019-06-04 普渡研究基金会 4-取代的氨基异喹啉衍生物
CR20210284A (es) * 2018-11-29 2021-07-09 Pfizer Pirazoles como modulares de hemoglobina

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011138751A2 (en) * 2010-05-04 2011-11-10 Pfizer Inc. Heterocyclic derivatives as alk inhibitors
WO2013102145A1 (en) * 2011-12-28 2013-07-04 Global Blood Therapeutics, Inc. Substituted heteroaryl aldehyde compounds and methods for their use in increasing tissue oxygenation
CN104135859A (zh) * 2011-12-28 2014-11-05 全球血液疗法公司 取代的苯甲醛化合物及其用于增加组织氧合的方法

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