於式(I)化合物和彼之互變異構物中，
・烷基表示式-C
n
H
(2n+1)
之直鏈或支鏈烴基。烷基之實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基及三級丁基。
・烷氧基表示經由氧原子連接之烷基取代基。烷氧基之實例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、二級丁氧基及三級丁氧基。
・環烷基表示含有至少3個碳原子之式-C
n
H
(2n-1)
之環狀烴基。環烷基之實例包括環丙基、環丁基、環戊基及環己基。
・鹵素之實例包括氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)及碘(I)。
・含有1或2個N之5員雜芳基之實例包括吡咯基、吡唑基及咪唑基。
所有下文所稱之本發明之化合物包括式(I)化合物或彼之互變異構物、或該式(I)化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或多成分複合物、或該式(I)化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽的醫藥上可接受之溶劑合物或多成分複合物，彼等將更詳細地說明如下。
本發明之較佳化合物係式(I)化合物或彼之互變異構物、或該式(I)化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽。
自形成非毒性鹽之酸生成適當之酸加成鹽。實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、硼酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環己胺磺酸鹽、乙二磺酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、六氟磷酸鹽、羥苯醯苯酸鹽、氫氯化物/氯化物、氫溴化物/溴化物、氫碘化物/碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、1,5-萘二磺酸鹽、萘二甲酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸酸鹽、硝酸鹽、乳清酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、焦麩胺酸鹽、葡萄糖二酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽、三氟乙酸鹽及昔萘酸鹽(xinofoate)。
自形成非毒性鹽之鹼生成適當之鹼鹽。實例包括鋁鹽、精胺酸鹽、苄乙二胺鹽、鈣鹽、膽鹼鹽、二乙胺鹽、二乙醇胺鹽、甘胺酸鹽、鋰鹽、離胺酸鹽、鎂鹽、葡甲胺鹽、乙醇胺鹽、鉀鹽、鈉鹽、三羥甲基胺鹽及鋅鹽。
亦可生成酸和鹼之半鹽，例如半硫酸鹽和半鈣鹽。
熟習此技術之人士當能瞭解上述鹽類包括其中相對離子係光學活性者(例如d-乳酸鹽或l-離胺酸)或消旋性者(例如dl-酒石酸鹽或dl‑精胺酸)。
對於適當鹽之回顧，參閱文獻Stahl and Wermuth, “Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection，and Use”, Wiley-VCH, Weinheim，Germany, 2002。
藉由下述3種方法之一或多者可製備式(I)化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽：
(i) 藉由令該式(I)化合物或彼之互變異構物與所欲之酸或鹼反應；
(ii) 藉由使用所欲之酸或鹼除去該式(I)化合物或彼之互變異構物的適當前驅物之酸或鹼不安定性保護基；或
(iii) 藉由與適當之酸或鹼反應或藉由使用適當之離子交換管柱轉化該式(I)化合物或彼之互變異構物之一種鹽為該式(I)化合物或彼之互變異構物之另一種鹽。
典型上所有3種反應係於溶液中進行。所生成之鹽可沉澱析出並經過濾收集或可藉由蒸發溶劑回收。所生成之鹽的離子化程度可自完全離子化至幾乎非離子化之間變化。
該式(I)化合物或彼之互變異構物或該式(I)化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽可以非溶劑合物和溶劑合物二者型式存在。本文使用之‘溶劑合物’係指包含式(I)化合物或彼之互變異構物或該式(I)化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽與一或多種醫藥上可接受之溶劑分子(例如乙醇)的分子複合物。本文使用之‘水合物’係指其中該溶劑係水者。依據本發明之醫藥上可接受之溶劑合物包括其中結晶之溶劑可經同位素取代者(例如D
2
O、d
6
‑丙酮及d
6
-DMSO)。
有機水合物之目前接受的分類系統係定義分離部位、孔道或金屬離子配位之水合物者，參閱文獻K. R. Morris, Polymorphism in Pharmaceutical Solids (Ed. H. G. Brittain, Marcel Dekker, 1995)，彼併入本文作為參考。分離部位之水合物係其中藉由介入有機分子經彼此直接接觸而分離水分子者。於孔道之水合物中，水分子位於晶格孔道，其中該水分子鄰近其他水分子。於金屬離子配位之水合物中，水分子與該金屬離子鍵結。
當該溶劑或水呈緊密結合時，該複合物將具有與濕度不相關之充分界定的化學計量。然而，當該溶劑或水呈弱結合時，如於孔道溶劑合物和吸濕性化合物，該溶劑/水含量將取決於濕度和乾燥狀態。於該情況下，非化學計量將呈常態。
本發明之範圍亦包括式(I)化合物或彼之互變異構物或該式(I)化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽的多成分複合物(非為鹽和溶劑合物)，其中該藥物和至少一種其他成分係呈化學計量或非化學計量。此類型之複合物包括晶籠化合物(藥物-宿主包含複合物)和共晶體。典型上共晶體被定義為通過非共價交互作用結合在一起之中性分子組成分的結晶複合物，但亦可為中性分子與鹽之複合物。可藉由熔融結晶、自溶劑共結晶或一起物理性研磨成分以製備共晶體，參閱文獻O. Almarsson and M. J. Zaworotko, Chem Commun，17, 1889-1896, 2004，彼併入本文作為參考。對於多成分複合物之一般回顧，參閱文獻Haleblian，J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288, August 1975，彼併入本文作為參考。
本發明之化合物可以自完全無定形至完全結晶之範圍的連續固態存在。該‘無定形’係指一種狀態，其中材料於分子層級缺少長程秩序且取決於溫度可呈固體或液體之物理性質。典型上該材料不具有獨特的X射線繞射圖案，且雖然具有固體之性質，但較正式描述為液體。經加熱時，發生自固體性質至液體性質之變化，其特徵為狀態改變，典型上稱第二秩序(‘玻璃轉化’)。‘結晶狀’係指一種固相，其中材料於分子層級具有規則有序之內部結構且顯現具有界定波峰之獨特的X射線繞射圖案。經充分加熱時，該材料亦將具有液體性質，但自固體至液體之改變的特徵為相變化，典型上稱第一秩序(‘熔點’)。
當於適當條件時，本發明之化合物亦可呈介晶態(介晶相或液晶)。該介晶態係介於真正結晶狀態與真正液態(熔融或溶液)之間的中間相。由溫度改變所產生之介晶現象被稱為‘熱致性’且由加入第二成分(諸如水或另一溶劑)所產生之介晶現象被稱為‘溶致性’。具有形成溶致性介晶相之可能性的化合物被稱為‘兩親性’且係由具有離子性(諸如-COO
-
Na
+
、-COO
-
K
+
或-SO
3 -
Na
+
)或非離子性(諸如-N
-
N
+
(CH
3
)
3
)極性頭基團之分子組成。有關更多資訊，參閱文獻N. H. Hartshorne and A. Stuart, Crystals and the Polarizing Microscope，第4版(Edward Arnold, 1970)，彼併入本文作為參考。
本發明之化合物可以前藥施予。因此，式(I)化合物或彼之互變異構物的本身幾乎不具有或完全不具有藥理活性之某些衍生物當被施予至身體內或身體上時可經由例如水解裂解被轉化為具有所欲活性之式(I)化合物或彼之互變異構物。該等衍生物被稱為‘前藥’。關於使用前藥之進一步資訊，可見於文獻‘Pro-drugs as Novel Delivery Systems’, Vol. 14, ACS Symposium Series (T Higuchi and W Stella)和‘Bioreversible Carriers in Drug Design’, Pergamon Press, 1987(E B Roche編輯，American Pharmaceutical Association)。
藉由例如熟習此技術之人士所習知之稱為‘前基團’的某些基團取代式(I)化合物或彼之互變異構物的適當官能基可製備前藥，該‘前基團’描述於例如文獻H. Bundgaard, "Design of Prodrugs" (Elsevier, 1985)。
前藥之實例包括磷酸鹽/酯前藥，諸如磷酸二氫鹽或磷酸二烷酯(例如磷酸二(三級丁酯))前藥。依據上述實例，取代基之其他實例和其他前藥類型之實例可見於上述文獻。
本發明之範圍亦包括式(I)化合物或彼之互變異構物的代謝物，即經施予該藥物於活體內生成之化合物。依據本發明之代謝物的某些實例包括當該式(I)化合物或彼之互變異構物含有苯基(Ph)時的酚衍生物(即-Ph＞-PhOH)。
式(I)含有不對稱性碳原子且經立體特異性定義。
熟習此技術之人士亦當能瞭解於式(I)之一或多個取代基可導入一或多個額外之不對稱性碳原子。含有該一或多個額外之不對稱性碳原子的本發明之化合物可以2或多種立體異構物存在，且本發明之範圍包括本發明之化合物的所有立體異構物(其包括差向異構物)和該等立體異構物之二或多者的混合物。
用於製備/分離個別鏡像異構物之慣用技術包括自適當之光學純前驅物的手性合成或使用例如手性高壓液相層析(HPLC)之消旋物(或該消旋物之鹽或衍生物)的解析。
另一方面，可令消旋物(或消旋性前驅物)與適當之光學活性化合物(例如醇)反應或當該式(I)化合物或彼之互變異構物含有酸性或鹼性基團時與鹼或酸(諸如1‑苯乙胺或酒石酸)反應。藉由層析及/或分級結晶可分離所生成之非鏡像異構性混合物，且藉由熟習此技術之人士所習知之方法可將該等非鏡像異構物之一或二者轉化為對應之純鏡像異構物。
使用層析(典型上HPLC)於不對稱性樹脂上藉由一般為庚烷或己烷之烴(其含有0至50體積%(典型上2至20體積%)之異丙醇和0至5體積%之烷胺(典型上0.1%二乙胺))組成之移動相，自富含鏡像異構物之形式可得到本發明之手性化合物(和彼之手性前驅物)。濃縮析出液以生成該富含之混合物。
可使用次臨界和超臨界流體進行手性層析。可用於本發明之某些實施態樣的手性層析方法係為習知；參閱文獻例如Smith, Roger M., Loughborough University, Loughborough, UK, Chromatographic Science Series (1998), 75 (Supercritical Fluid Chromatography with Packed Columns), pp. 223-249和其中引述之文獻。
藉由熟習此技術之人士所習知之慣用技術可分離立體異構物之混合物；參閱文獻例如E. L. Eliel and S. H. Wilen, “Stereochemistry of Organic Compounds” (Wiley, New York, 1994)。
當結構異構物通過低能量障礙可相互轉化時，可發生互變異構化(‘互變異構現象’)和構形異構化。
於式(I)化合物含有例如醯胺基時，互變異構化可呈質子互變異構化之形式(即醯胺-醯亞胺酸互變異構化)，或於式(I)化合物含有芳香族基團時，互變異構化可呈所謂之價互變異構化。參閱實施例58、58a及58b，該互變異構化之實例係如下所示：
。
熟習此技術之人士當能瞭解：除了實施例58至58b以外，醯胺-醯亞胺酸互變異構化可發生於實施例44、46至54及78之化合物。為簡明起見，雖然式(I)化合物於本文中業已以單一互變異構形式表示，但是本發明之範圍包括所有可能之互變異構形式，特別是因質子互變異構化所生成之形式，且特定地醯胺-醯亞胺酸互變異構物和彼等之所有混合物。
構形異構化係一種立體異構化形式，其中構形異構物藉由單鍵旋轉可完全相互轉化。該等異構物通常被稱為構形異構物或構形物且特別地被稱為旋轉異構體。為簡明起見，雖然式(I)化合物和彼之互變異構物業已以單一構形異構形式表示，但是本發明之範圍包括所有可能之構形物。
本發明之範圍包括本發明之所有化合物的晶型，其包括消旋物和彼等之消旋性混合物(晶團)。藉由如本文上述之慣用技術，亦可分離立體異構性晶團。
本發明之範圍包括本發明之所有醫藥上可接受的同位素標記之化合物，其中一或多個原子係經由具有相同原子數但與天然佔多數之原子量或質量數不同之原子量或質量數之原子替代。
適合本發明之化合物包括之同位素的實例包括氫之同位素，諸如
2
H和
3
H；碳之同位素，諸如
11
C、
13
C及
14
C；氮之同位素，諸如
13
N和
15
N；及，氧之同位素，諸如
15
O、
17
O及
18
O。
本發明之某些同位素標記之化合物，例如併有放射性同位素之化合物，可用於藥物及/或受質組織分佈研究。放射性同位素氚(即
3
H)及碳-14(即
14
C)係鑒於彼等容易併入及現成的檢測方式而特別有用於此目的。經較重的同位素(諸如氘(D)(即
2
H))取代可因較大的代謝安定性(例如增加的活體內半生期)或降低的劑量需求而提供某些特定的治療優勢，且因此在某些狀況下可能較佳。以正子發射同位素(諸如
11
C、
15
O和
13
N)取代可用於正子放射斷層攝影(PET)研究以檢查受質受體佔有率。
經同位素標記之式(I)化合物和彼之互變異構物通常可藉由熟習此技術之人士習知的慣用技術或藉由類似於附隨之實施例和製備例所描述之方法且使用適當的經同位素標記之試劑代替先前使用的未經標記之試劑而製得。
本文隨後定義之式(I)化合物的中間體化合物或彼等之互變異構物、該中間體化合物或彼等之互變異構物的所有鹽、溶劑合物及複合物以及上述該等鹽之所有溶劑合物和複合物亦屬於本發明之範圍。本發明包括上述化合物和彼等之晶型的所有多晶型物。
當製備本發明之式(I)化合物或彼之互變異構物時，熟習此技術之人士可慣常地選擇能提供達到製備目的之最佳特徵組合的中間體型式。該特徵包括該中間體型式之熔點、溶解度、可處理性及產率和所造成之產物可經分離純化的容易性。
本發明之化合物可藉由用於製備具有類似結構之化合物的此技術領域習知之任何方法製備。特定地，本發明之化合物可藉由下述反應圖記載之方法或下述實施例描述之特定方法或與該任一者類似之方法製備。
熟習此技術之人士當能瞭解：下述反應圖記載之實驗條件係說明用於達成所示之轉換的適當條件，且改變用於製備式(I)化合物或彼之互變異構物的精確條件可能是必要或所欲的。亦當進一步瞭解的是：與該反應圖所描述者不同之順序進行轉換或修飾一或多個轉換反應以提供所欲之本發明之化合物可能是必要或所欲的。
此外，熟習此技術之人士當能瞭解：於合成本發明之化合物的任何階段，保護一或多個敏感性基團以防止發生不欲之副反應可能是必要或所欲的。特定地，保護羥基、羧基及/或胺基可能是必要或所欲的。可以慣用之方式使用用於製備本發明之化合物的保護基；參閱例如文獻Theodora W Greene and Peter G M Wuts, 'Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis'，第5版，John Wiley and Sons, 2014 (彼之內容併入本文作為參考；特別是第2、5及7章，其中亦描述除去該保護基之方法)所描述者。
於下述一般方法中：
・除非另有說明，X、Y及R
1
至R
6
係如前述式(I)化合物或彼之互變異構物所定義者；
・Z
1
和Z
2
係選自CH或N，且含有Z
1
和Z
2
之環可適當地經1或2個R
1
取代以提供式(I)化合物或彼之互變異構物，其中X係如前述定義者；
・PG係適當之胺基保護基，諸如胺甲酸酯基、烷基、苄基或酞醯基，且較佳地係Boc、tBu、苄基、PMB或酞醯基；
・Hal係鹵素，較佳地於反應圖6中為氯(Cl)且於反應圖8中為碘(I)；且
・LG係離去基，諸如Cl、甲磺酸酯或甲苯磺酸酯(較佳地甲磺酸酯)。
依據第一方法，如示於反應圖1，自式(II)和(III)之醇可製備式(I)化合物或彼之互變異構物：
。
反應圖1
於光延(Mitsunobu)反應條件下(即於過量之偶氮二羧酸酯和三烷基膦或三芳基膦之存在下且於極性非質子溶劑(諸如THF或DMF)中)，自式(II)和(III)之醇可製備式(I)化合物或彼之互變異構物。較佳之條件包含於0℃至50℃下，於THF中且於過量之DIAD和PPh
3
或P(nBu)
3
之存在下並可選擇地使用DMF為共溶劑，令式(II)和(III)之醇反應。
依據第二方法，如示於反應圖2，自式(III)、(IV)及(V)之化合物可製備式(I)化合物或彼之互變異構物：
。
反應圖2
如示於前揭反應圖1，於光延反應條件下，自式(III)和(IV)之醇可製備式(V)化合物。
使用熟習此技術之人士習知之方法，諸如SFC、HPLC或再結晶，藉由手性純化式(V)化合物可製備式(I)化合物或彼之互變異構物。
依據第三方法，如示於反應圖3，自式(II)、(VI)、(VII)、(VIII)及(IX)之化合物可製備式(I)化合物或彼之互變異構物：
。
反應圖3
如示於前揭反應圖1，於光延反應條件下，自式(II)和(VI)之醇可製備式(VII)化合物。
於室溫下，於溶劑(諸如DCM)中且於有機鹼(諸如DIPEA)之存在下，藉由令式(VII)化合物與氯化劑(諸如TsCl)反應，可製備式(VIII)之氯化物。
於升溫(諸如70℃)下，於極性非質子溶劑(諸如THF)中且於有機鹼(諸如DIPEA或Et
3
N)之存在下，藉由令式(VIII)之氯化物與PGNH
2
(諸如PMB-NH
2
)反應，可製備式(IX)化合物。
於熟習此技術之人士習知之條件下，諸如於室溫下且於TFA之存在下與苯甲醚反應，藉由使式(IX)化合物去保護，可製備式(I)化合物或彼之互變異構物。熟習此技術之人士當能瞭解：對於除去適當之胺基保護基，有許多可替代之方法。
依據第四方法，如示於反應圖4，自式(X)、(XI)、(XII)及(XIII)之化合物可製備式(I)化合物或彼之互變異構物，其中R
2
係OH；可選擇地經OH或CO
2
R
4
取代之(C
1
-C
4
)烷氧基；或CO
2
R
4
：
。
反應圖4
如示於前揭反應圖1，於光延反應條件下，自式(X)和(XI)之醇可製備式(XII)化合物。
於熟習此技術之人士習知之條件下，藉由使式(XII)化合物去保護，可製備式(XIII)化合物。例如，當PG係Boc時，一般條件包含於0℃至室溫下且於適當之溶劑(諸如DCM)中與強酸(諸如HCl或較佳地TFA)反應。當PG係酞醯亞胺基時，一般條件包含於升溫(諸如85℃)下與於EtOH中之聯胺反應或於-60℃至室溫下與於THF中之NH
3
反應。
於熟習此技術之人士習知之轉化芳基溴化物的條件下，自式(XII)或(XIII)之化合物可製備式(I)化合物或彼之互變異構物。例如，當R
2
係OH時，於室溫至80℃下，於溶劑(諸如二噁烷/H
2
O)中，於鹼(諸如KOH)之存在下且於Pd觸媒(諸如Pd
2
dba
3
)和配體(諸如tBuXPhos)之存在下，可達成芳基溴化物之經過渡金屬催化之羥基化(如有需要隨後可進行去保護步驟)。
可替代地，於未分離式(XIII)化合物之情況下，自式(XII)化合物經1步驟可製備式(I)化合物或彼之互變異構物。
依據第五方法，如示於反應圖5，自式(VI)和(X)之化合物亦可製備式(XIII)化合物：
。
反應圖5
如示於前揭反應圖1，於光延反應條件下，自式(X)和(VI)之醇可製備式(XIV)化合物。
藉由於溶劑(諸如DCM)中與活化劑(諸如TsCl)、有機鹼(諸如DIPEA)及胺源(諸如NH
4
PF
6
)反應或藉由類似於文獻Couturier et al.,
Org. Lett.
2006,
8
, (9), 1929-1932或Ferrell et al.,
Org. Lett
. 2013,
15
(1), 168-171描述之方法，自式(XIV)化合物可製備式(XIII)化合物。一般條件包含於-5℃至室溫下且於NH
4
PF
6
、DIPEA及DCM之存在下令式(XIII)化合物與過量之TsCl反應。
依據第六方法，如示於反應圖6，自式(XV)、(XVI)及(XVII)之化合物亦可製備式(VII)化合物：
。
反應圖6
於室溫至105℃之溫度下，於溶劑(諸如甲苯)中且於鹼(諸如Cs
2
CO
3
或K
2
CO
3
)之存在下，藉由使用鈀偶聯反應劑(諸如氯化烯丙基鈀二聚體(
S
)-1-[(
R P
)-2-(二環己基膦基)二茂鐵基]乙基二(三級丁基)膦)，自式(XV)和(XVI)之化合物可製備式(XVII)化合物。熟習此技術之人士當能瞭解可使用可替代之有機金屬偶合方法，其涉及可替代之偶合配體、金屬及溶劑的組合。
於室溫下，於溶劑(諸如DCM)中且於適當氧化劑(諸如MCPBA)之存在下，藉由氧化可自式(XVII)化合物製備式(VII)化合物。
依據第七方法，如示於反應圖7，自式(XVIII)和(III)之化合物可製備式(V)化合物：
。
反應圖7
於0℃至100℃下，於溶劑中且於無機鹼之存在下，藉由令式(III)之醇與式(XVIII)化合物反應可製備式(V)化合物。較佳之條件包含於60℃下，於MeCN中且於Cs
2
CO
3
之存在下，藉由令式(XVIII)與式(III)之化合物反應。
依據第八方法，如示於反應圖8，自式(XV)、(XIX)、(XX)、(XXI)、(XXII)及(XXIII)之化合物可製備式(I)化合物或彼之互變異構物：
。
反應圖8
於升溫(諸如60℃)下，於極性非質子溶劑(諸如THF)中且於強鹼(諸如NaH)之存在下，藉由令式(XV)化合物與式(XXII)之鹵烷基酯反應可製備式(XIX)之酯。
於升溫(諸如90℃)下，於密封容器中且可選擇地於醇溶劑(諸如EtOH或較佳地MeOH)之存在下，藉由與NH
3
水溶液反應使式(XIX)之酯醯胺化，可製備式(XX)之醯胺。
於0℃至室溫下，於溶劑(諸如吡啶)中且於有機鹼(諸如Et
3
N)之存在下，藉由使用脫水劑(諸如TFAA)使式(XX)之醯胺脫水，可製備式(XXI)之腈。
於室溫下，於極性非質子溶劑(諸如DMSO)中且於強鹼(諸如KOtBu)之存在下，藉由使式(XXIII)之醛與式(XXI)之腈縮合，可製備式(I)化合物或彼之互變異構物。
依據第九方法，如示於反應圖9，自式(X)和(XI)之化合物可製備式(IX)化合物：
。
反應圖9
如示於前揭反應圖1，於光延反應條件下，自式(X)和(XI)之醇可製備式(IX)化合物。
依據第十方法，如示於反應圖10，自式(XXIV)化合物可製備式(II)和(XV)之化合物：
。反應圖10
於0℃至室溫下且於極性溶劑中，藉由使用還原劑使式(XXIV)之酮還原，可製備式(XV)和(II)之醇。較佳之條件包含(i)於0℃至室溫下並於EtOH或MeOH中且可選擇地使用THF為共溶劑，與NaBH
4
反應，隨後於上述反應圖2描述之條件下使鏡像異構物分離(熟習此技術之人士當能瞭解式(IV)表示式(II)和(XV)之鏡像異構物的混合物，諸如消旋性混合物)；或(ii)於室溫下且於磷酸鹽緩衝液(pH 7)中，藉由使用(+)葡萄糖、NADP+、GDH-CDX901及適當之酮還原酶以進行生物催化性還原反應。
藉由熟習此技術之人士所習知之官能基相互轉換，式(I)化合物或彼之互變異構物可被轉換為另一式(I)化合物或彼之互變異構物。例如，藉由酸或鹼催化之水解(較佳地於THF或MeOH中使用NaOH水溶液)，可將CO
2
(C
1
-C
4
)烷基酯轉化為彼之對應的羧酸；藉由於DMSO中與K
2
CO
3
和H
2
O
2
反應，可將苄腈化合物水解成苯甲醯胺；於室溫下，於THF中且於有機鹼(諸如Et
3
N)之存在下，藉由與NH
4
Cl和偶合劑(諸如HATU)反應，可將羧酸轉化為羧醯胺；於80℃下且於密封容器中，藉由與NH
3
之甲醇溶液反應，可將CO
2
(C
1
-C
4
)烷基酯轉化為醯胺；藉由使用NaBH
4
之MeOH/THF溶液或LiAlH
4
之THF溶液，可使CO
2
(C
1
-C
4
)烷基酯還原；且，於熟習此技術之人士習知之噁二唑酮生成的條件下，分別經由生成醯肼或N-羥基甲脒，可將CO
2
(C
1
-C
4
)烷基酯或腈轉化為噁二唑酮。
同樣地，如上所述，式(III)、(V)、(IX)、(XI)、(XII)、(XIII)及(XVII)之化合物亦可經相互轉化為另一式(III)、(V)、(IX)、(XI)、(XII)、(XIII)及(XVII)之化合物以促進其他式(I)化合物或彼之互變異構物的製備。實例包括下述之轉換：如示於製備例2和116，Br轉換為CO
2
(C
1
-C
4
) 烷基酯；如示於製備例3，Br轉換為OH；如示於製備例5，Br轉換為烷基，該烷基係可選擇地經CO
2
(C
1
-C
4
)烷基酯取代；如示於製備例7，Br轉換為可選擇地經保護之胺基；如示於製備例30和33，Br轉換為CN；如示於製備例32，Cl轉換為CN；如示於製備例55，Br轉換為烷基醚；及，如示於實施例3，CN轉換為羧醯胺。
可替代地，藉由類似於文獻(諸如Buchwald-Hartwig amination (Name Reactions for Functional Group Transformations (2007), 564-609)；Palladium-Catalyzed carbonylation Reactions-A Reaction coming of Age (Organometallics, vol 27, issue 21, 5402)；及，Levin et al., ACS Cent. Sci 2016, 2, 5, 293)所描述之方法，可完成該等相互轉換。
由商業來源獲得、由類似於文獻(諸如M. G. A. Shvekhgeimer, Chemistry of Heterocyclic Compounds, Vol. 40, No. 3, 2004, 257或S. A. Yamashkin and E. A. Oreshkina, Chemistry of Heterocyclic Compounds, Vol. 42, No. 6, 2006, 701)所描述之方法製備、或由下述之實驗部份所描述之方法或熟習此技術之人士所習知之該等方法的變體製備，可得到式(III)、(VI)、(X)、(XI)、(XVI)、(XVIII)、(XXII)及(XXIV)之化合物。
製備式(I)化合物或彼之互變異構物的所有新穎製程和該等製程使用之對應新穎中間體形成本發明之其他方面。
欲用於醫藥用途的本發明之化合物可以呈結晶狀或無定形之產物施予或可以介於完全無定形至完全結晶狀之連續固體狀態存在。藉由諸如沉澱、結晶、冷凍乾燥、噴霧乾燥或蒸發乾燥之方法，可得到呈例如固態栓、粉末或膜的本發明之化合物。為達到此目的，可使用微波乾燥或射頻乾燥。
本發明之化合物可經單獨施予或可與一或多種本發明之其他化合物組合施予或可與一或多種其他藥物(或彼等之任何組合)組合施予。通常，將以本發明之化合物與一或多種醫藥上可接受之賦形劑組合的調製劑施予本發明之化合物。本文使用之‘賦形劑’描述非為本發明之化合物的任何成分。賦形劑之選擇於大程度上將取決於多種因素，諸如特定之投藥模式、該賦形劑於溶解度和安定性上之功效及劑型之本性。
於另一方面，本發明提供一種醫藥組成物，其包含本發明之化合物和醫藥上可接受之賦形劑。
熟習此技術之人士當能瞭解適合投遞本發明之化合物的醫藥組成物和製備該醫藥組成物之方法。該等醫藥組成物和製備該等醫藥組成物之方法可見於文獻，例如“Remington’s Pharmaceutical Sciences”，第19版，Mack Publishing Company, 1995。
藉由諸如固體或液體劑型，本發明之化合物可經口服施予。口服施予可能涉及吞嚥，使得該化合物進入胃腸道，或經頰或舌下施予(諸如可藉由口含錠達成)，使得該化合物由口直接進入血流。
口服施予本發明之化合物的固體劑型包括例如藥片、硬或軟膠囊、口含錠、顆粒或粉末，彼等皆含有至少一種本發明之化合物。於該等固體劑型中，本發明之化合物通常係與一或多種醫藥上可接受之賦形劑組合。可以腸溶衣製備用於口服施予之固體劑型，諸如藥片和膠囊。
用於口服施予之液體劑型包括例如醫藥上可接受之乳化液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑，彼等含有此技術慣用之惰性稀釋劑(例如水)。該等組成物亦可包含賦形劑，諸如潤濕劑、乳化劑、懸浮劑、調味劑(例如甜味劑)及/或芳香劑。
本發明之化合物可經腸道外施予，即直接進入血流、肌肉或內部器官。
靜脈內施予表示一種施予本發明之化合物的方便方式。用於腸道外施予之其他適當方式包括動脈內、腹膜內、鞘內、腦室內、尿道內、胸骨內、顱內、肌內及皮下施予。
用於腸道外施予之適當裝置包括針(其包括微針)注射器、無針注射器及輸注技術。
腸道外調製劑通常係可含有賦形劑(諸如鹽類)、碳水化合物及緩衝劑(較佳地具有pH 3至9)之水溶液，但於某些應用上，腸道外調製劑可較適當地經調製成無菌非水溶性溶液或將與適當載體(諸如無菌且無熱原之水)併用之乾燥型式。
使用熟習此技術之人士所習知之標準藥劑技術，於無菌條件下，藉由例如冷凍乾燥，可方便地完成腸道外調製劑之製備。
藉由使用適當之調製技術(諸如倂入溶解增進劑)，可增加用於製備腸道外溶液之式(I)化合物和彼之互變異構物的溶解度。
用於口服和腸道外施予之調製劑可經調製呈立即釋出及/或修改釋出。方便地，本發明之化合物經調製呈立即釋出。
修改釋出型調製劑包括呈遲延釋出、維持釋出、脈衝釋出、控制釋出、標靶釋出及程式化釋出。因此，本發明之化合物可經調製呈固體、半固體或觸變性液體以利植入式貯藏器投藥以提供修改釋出之活性化合物。該等調製劑之實例包括經塗覆藥物之支架和聚(dl-乳酸-乙醇酸)(PGLA)微球體。
其他施予模式包括局部、吸入/鼻內、直腸/陰道內及經眼/耳施予。適合該等施予模式之調製劑包括立即釋出及/或修改釋出。修改釋出型調製劑包括呈遲延釋出、維持釋出、脈衝釋出、控制釋出、標靶釋出及程式化釋出。
於使用任何上述施予模式時，本發明之化合物可與可溶性大分子實體(諸如環糊精和彼之適當衍生物或含有聚乙二醇之聚合物)組合以改善本發明之化合物的溶解性、溶解速率、掩味性、生物可利用性及/或安定性。
例如，發現藥物-環糊精複合物通常可用於大多數之劑型和投藥途徑。可使用包容複合物和非包容複合物二者。作為與藥物直接複合之替代者，可使用環糊精作為輔助添加劑，即作為載劑、稀釋劑或助溶劑。為此等目的，最常使用的是α、β及γ環糊精，其包括羥丙基β環糊精和磺丁基醚β環糊精鈉鹽，彼等之實例可見於國際專利申請案號WO 91/11172、WO 94/02518及WO 98/55148。
對施予人病患，當然取決於投藥途徑和功效，本發明之化合物的每日總劑量一般係介於1 mg至10 g，諸如60 mg至6 g，例如100 mg至1.5 g或100 mg至1.0 g。例如，投藥可要求每日總劑量介於250 mg至1 g，諸如400 mg至800 mg。可以單一或分開劑量施予每日總劑量，且基於醫師之自由裁量，該每日總劑量可落於本文描述之一般範圍以外。該等劑量係基於具有體重約60至70 kg之平均人個體。醫師將能輕易地決定體重位於該範圍以外之個體(諸如嬰兒和老年人)的劑量。
如上所述，因為於動物體內能顯現藥理活性(即HbS調節作用)，本發明之化合物係有用的。更特定地，本發明之化合物可用於治療HbS調節劑適應之病症。該動物較佳地係哺乳動物且更佳地係人。
於本發明之另一方面，本發明之化合物係作為藥物。
於本發明之另一方面，本發明之化合物係用於治療HbS調節劑適應之病症。
本發明之另一方面提供本發明之化合物於製備藥物之用途，該藥物係用於治療HbS調節劑適應之病症。
本發明之另一方面提供一種治療動物(較佳地哺乳動物且更佳地人)之HbS調節劑適應的病症之方法，其包含對該動物施予治療有效量的本發明之化合物。
HbS調節劑適應之病症或徵狀包括：
・與組織之氧缺乏有關且遲延或減少Hb去氧將會有益的病症或徵狀，諸如SCD和彼之變化型及因為低細胞氧濃度對放射治療及/或化學治療呈現抗性之癌症；和
・將受益於增加之組織氧化且增加Hb對氧之親和性將有助於當Hb通過肺時較大之Hb的氧飽和(藉以允許增加氧輸送至身體組織)的病症或徵狀，諸如高原反應和相關病症(例如高山肺水腫(HAPE)和高山腦水腫(HACE))、肺功能不全和相關病症(例如慢性阻塞性肺病(COPD)、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)及氣喘)、創傷癒合(例如潰瘍和壓瘡)及中風(例如無症狀性梗塞)。
特別關注之病症係SCD。
存有多種不同之Hb基因型，該等Hb基因型產生多種SCD變異(Lancet 2010, 376, 2018-2031)。常見之SCD變異包括鐮刀型紅血球貧血症(HbS/S)、鐮刀型血紅素C疾病(HbS/C)、鐮刀型β
+
地中海型貧血(HbS/β
+
)及鐮刀型β
0
地中海型貧血(HbS/β
0
)。相對罕見至極罕見之SCD變異包括HbS/O Arab、HbS/CHarlem及HbC/S Antilles。所有該等SCD變異皆屬於本發明之範圍。
於一實施態樣中，該SCD變異係HbS/S。於另一實施態樣中，該SCD變異係HbS/C。
HbS調節劑可與另一藥理活性化合物或2或多種其他藥理活性化合物組合。該等組合能提供可能之顯著優點，其包括病患順從性、投藥容易性及協同活性。
於該等組合中，本發明之化合物可與該(等)其他治療劑同時(例如於單一劑型，諸如膠囊或藥片)、依序或分開施予。
該一或多種其他治療劑可選自下述之劑或下述類型之劑中任一者：
1)增加紅血球(RBC)內有益之血紅素(例如胎兒血紅素、血紅素A等)的量之藥劑，諸如羥基脲、丁酸鹽衍生物(例如丁酸鈉)、地西他濱(decitabine)、沙利多邁(thalidomide)衍生物(例如泊馬度胺(pomalidomide)或來那度胺(lenalidomide))及藍替國濱(lentiglobin)(一種藉由自體造血幹細胞移植投遞之活體外基因療法)；
2)破壞與鐮刀型紅血球疾病變化型有關之不利的細胞黏著交互作用之藥劑，諸如選擇素抑制劑(其包括泛選擇素抑制劑(例如利非泮索(rivipansel))、E選擇素抑制劑或P選擇素抑制劑(例如克南利茲單抗(crizanlizumab)))、泊洛沙姆(poloxamer)(例如泊洛沙姆188)及Nix-0999 (Nicosan®)；
3)改善鐮刀型RBC水合之藥劑，諸如加爾多(gardos)通道阻斷劑(例如塞尼卡泊(senicapoc)或克氯黴唑)和鎂補充劑(例如吡酮酸鎂)；
4)有助於血管舒張之藥劑，諸如吸入性一氧化氮、精胺酸、麩胺酸及PDE5抑制劑(例如昔多芬(sildenafil)或他達拉非(tadalafil))；
5)抗發炎劑，諸如磷脂酶A2抑制劑(例如伐瑞拉迪(varespladib))、皮質類固醇(例如甲基去氫皮質醇)及靜脈內免疫球蛋白；及
6)增加cGMP量而導致異型血球聚積之形成減少和降低之發炎狀態的藥劑，諸如PDE9抑制劑(例如1,5-二氫-6-[(3S,4S)-4-甲基-1-(2-嘧啶基甲基)-3-吡咯啶基]-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮)。
屬於本發明之範圍的是：2或多種醫藥組成物可方便地組合成適合共同施予該等醫藥組成物之套組型式，其中該等醫藥組成物中至少一者含有本發明之化合物。因此，本發明之套組包含2或多種個別之醫藥組成物和用於分別維持該等醫藥組成物之工具，其中該等醫藥組成物中至少一者含有本發明之化合物且該工具係諸如容器、分開之瓶或分開之鋁箔包。該套組之實例係用於包裝藥片、膠囊及類似物之熟悉的氣泡包裝。本發明之套組係特別適用於施予不同之劑型，例如於不同劑量間隔施予該等個別之醫藥組成物或該等個別之醫藥組成物彼此相互滴定的口服和腸道外劑型。為有助於順從性，該套組一般包含給藥指引且可提供所謂之記憶輔助。
本發明之另一方面提供一種醫藥產物(諸如呈套組型式)，其包含供同時、各別或依序使用之呈組合製劑的本發明之化合物和一或多種額外之治療活性劑，該組合製劑係用於治療HbS調節劑適應之病症。
應瞭解的是：本文記載之治療包括治癒性、緩和性及預防性治療。
於說明本發明且位於實施方式之後的非限制性實施例和製備例中且於上述反應圖中，記載之簡稱、定義及分析方法係說明如下：
°2θ係2θ度；
AcCl係乙醯氯；
AcOH係乙酸；
ADH-101係醇去氫酶101；
APCI係大氣壓力化學游離；
aq係水溶性；
BH
3
Me
2
S係(二甲硫)硼烷；
BINAP係(1,1’-聯萘-2,2’-二基)雙(二苯基膦)；
Bn係苄基；
Boc係三級丁氧羰基；
Boc
2
O係二碳酸二(三級丁酯)；
br係寬；
tBu係三級丁基；
tBuOH係三級丁醇；
tBuOK係三級丁氧化鉀；
tBuXPhos係2-二-三級丁基膦基-2’,4’,6’-三異丙基聯苯；
tBuXPhos-Pd Gen-3係甲磺酸[(2-二-三級丁基膦基-2’,4’,6’-三異丙基-1,1’-聯苯)-2-(2’-胺基-1,1’-聯苯)]鈀(II)；
℃係攝氏；
CDCl
3
係氘-氯仿；
CDI係1,1’-羰基二咪唑；
δ係化學位移；
d係雙重線；
dd係雙重雙重線；
ddd係三重雙重線；
dt係雙重三重線；
DCE係1,2-二氯乙烷；
DCM係二氯甲烷；
DIAD係偶氮二羧酸二異丙酯；
(-)-DIP-氯化物™係(-)-B-二異松蒎基氯硼烷；
DIPEA係N-乙基二異丙胺(亦稱為N,N-二異丙基乙胺)；
DMA係N,N-二甲基乙醯胺；
DME係1,2-二甲氧基乙烷；
DMAP係4-二甲基胺基吡啶；
DMF係N,N-二甲基甲醯胺；
DMSO係二甲亞碸；
DMSO-d
6
係氘-二甲亞碸；
DPPP係1,3-雙(二苯基膦基)丙烷；
EDC係N-(3-二甲基胺基丙基)-N’-乙基碳二亞胺；
EDC
.
HCl係N-(3-二甲基胺基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；
ESI係電噴灑游離；
Et
2
O係乙醚；
EtOAc係乙酸乙酯；
EtOH係乙醇；
Et
3
N係三乙胺；
g係克；
HATU係六氟磷酸1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物；
HPLC係高壓液相層析；
HOBt係1-羥基苯并三唑水合物；
hr(s)係小時；
IPA係異丙醇；
iPrOAc係乙酸異丙酯；
Ir[dF(CF
3
)ppy]
2
(dtbpy)PF
6
係六氟磷酸[4,4’-雙(1,1-二甲基乙基)-2,2’-聯吡啶-
N
1,
N
1’]雙[3,5-二氟-2-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基-
N
]苯基-C]銥(III)；
KRED101係酮還原酶101；
L係升；
LCMS係液相層析質譜；
m係多重線；
M係莫耳；
m-CPBA係3-氯過苯甲酸；
MeCN係乙腈；
MeMgBr係甲基溴化鎂；
MeNHOMe HCl係N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽；
MeOD_d
4
係氘化甲醇；
MeOH係甲醇；
2-MeTHF係2-甲基四氫呋喃；
mg係毫克；
MHz係兆赫；
min(s)係分鐘；
mL係毫升；
mmol係毫莫耳；
mol係莫耳；
MS (m/z)係質譜峰；
MsCl係甲磺醯氯；
MTBE係三級丁基甲醚；
NADP+係菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸；
NiCl
2
•glyme係氯化鎳(II)乙二醇二甲醚錯合物；
NMR係核磁共振；
ODS係十八烷基二氧化矽；
ORTEP係“Oak Ridge Thermal Ellipsoid Plot”解析軟體；
Pd(tBu
3
P)
2
係雙(三-三級丁基膦)鈀(0)；
Pd/C係碳上鈀；
Pd
2
(dba)
3
係三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)；
Pd(dppf)Cl
2
係[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)；
Pd(PPh
3
)
4
係四(三苯基膦)鈀(0)；
石油醚係由脂肪烴所構成且沸點介於35至60℃之石油餾分；
PMB係對甲氧基苄基；
PMB-NH
2
係對甲氧基苄胺；
Polycat 5 ®係雙(2-二甲基胺基乙基)(甲基)胺；
PPh
3
係三苯基膦；
pH係氫離子濃度；
ppm係百萬分點；
PSD係位置感測器；
psi係磅/平方吋；
PXRD係粉末X射線繞射；
q係四重線；
rt係室溫；
RT係滯留時間；
s係單線；
SEM-Cl係2-(三甲基矽基)乙氧基甲基氯；
SFC係超臨界流體層析；
t係三重線；
T
3
P係丙基膦酸酐；
TBAF係氟化三級丁基銨；
TBDMSCl係三級丁基二甲基氯矽烷；
TFA係三氟乙酸；
THF係四氫呋喃；
TLC係薄層層析；
TMEDA係
N,N,N’N’
-四甲基乙二胺；
TMSCl係三甲基氯矽烷；
TMSCN係三甲基氰基矽烷；
TMSCHN
2
係(重氮甲基)三甲基矽烷；
TsCl係對甲苯磺醯氯；
Ts
2
O係對甲苯磺酸酐；
µL係微升；
µmol係微莫耳；且
Xantphos係4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃。
於所有情況下，
1
H核NMR光譜係與所提出之結構相符。對指定之主要峰使用慣用之簡稱，自四甲基矽烷之百萬分點低磁場(針對
1
H-NMR)記載δ特性。適當地，NMR數據可記錄互變異構物且可能不會看到某些可交換之質子。
使用ESI或APCI記錄質譜。當相關且除非另有說明，對同位素
19
F、
35
Cl、
79
Br及
127
I提供m/z數據。
當使用製備性TLC或矽膠層析時，熟習此技術之人士當能瞭解可使用任何適當之溶劑或溶劑組合以純化所欲之化合物。
實施例1
5-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
於20℃下對5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基)-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺(製備例161；222 mg，0.411 mmol)之MeOH (10 mL)溶液加入N
2
H
4 .
H
2
O (2.5 mL)。於70℃下令所生成之反應混合物於密封小瓶中經攪拌3小時且隨後分佈於DCM (80 mL)和H
2
O (100 mL)且經DCM (3 x 80 mL)萃取。令有機萃取液經H
2
O (2 x 60 mL)沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)，經過濾且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成殘餘物，該殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.225% HCO
2
H/MeCN水溶液；10至55%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(78.5 mg，46.6%)。LCMS
m/z
=410 [M+H]
+
。
1
HNMR (MeOH-d
4,
400 MHz) δ：1.73 (3H, d), 5.96 (1H, q), 6.71 (1H, t), 7.00 (1H, s), 7.05-7.20 (2H, m), 7.41 (1H, d), 7.44 (1H, dd), 7.97 (1H, s), 8.15-8.20 (2H, m), 8.29 (1H, br s)。
實施例2
5-{(1S)-1-[(2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
於20℃下令N
2
H
4 .
H
2
O (2.5 mL)加入至5-[(1S)-1-{[7-氯-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺(製備例162；160 mg，0.279 mmol)之MeOH (10 mL)溶液。令樣品小瓶經密封並於70℃下經攪拌3小時。令反應混合物分佈於DCM (80 mL)和H
2
O (100 mL)且進一步經DCM (3 x 80 mL)萃取。令有機萃取液經沖洗(H
2
O，2 x 60 mL)，經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液)純化以生成呈白色固體之標的化合物(30.2 mg，產率24.4%)。LCMS
m/z
=444 [M+H]
+
。
1
HNMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.66 (3H, d), 5.76 (1H, q), 6.64 (1H, s), 6.70-6.80 (3H, m), 7.27 (1H, d), 7.49 (1H, d), 7.53 (1H, d), 7.80 (2H, br s), 7.98 (1H, d), 8.01 (1H, d), 8.41 (1H, d)。
實施例3
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-溴喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
部分1
令K
2
CO
3
(197 mg，1.43 mmol)加入至3-(1-{[6-溴-2-(三級丁基胺基)喹啉-3-基]氧基}乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例156；100.0 mg，0.204 mmol)之DMSO (6.0 mL)溶液並經攪拌10分鐘。對此混合物加入H
2
O
2
(1.00 mL)並令反應混合物經攪拌1小時。令反應物經EtOAc (20 mL)萃取，經鹽水沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經矽膠層析(石油醚：EtOAc=1:0至0:1)純化以生成白色固體，其未經進一步純化而用於隨後之步驟。
部分2
對(上述)部分1之化合物的DCE (2 mL)溶液加入TFA (0.5 mL)並令反應混合物於70℃下經攪拌16小時。令反應混合物經DCM (20 mL)稀釋並經NaHCO
3
水溶液(10 mL)驟冷。令結合之有機萃取液經沖洗(鹽水, 20 mL)，經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經矽膠層析純化以生成黃色固體，其係進一步經SFC (Chiralpak AS-H；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液；40%)純化以生成呈淡黃色固體之標的化合物(峰2；20.7 mg，17%)。LCMS
m/z
= 410 [M+H]
+
。
1
HNMR (CDCl
3
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 5.25 (2H, br s), 6.24 (1H, t), 6.90 (1H, s), 7.37-7.50 (4H, m), 7.7507.85 (2H, m), 7.89 (1H, s), 8.06 (1H, d)。
實施例4
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
令2M NaOH (53.3 mL，107 mmol)加入至3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例145；4400 mg，8.201 mmol)於MeOH (100 mL)和THF (50 mL)之溶液並令混合物於25℃下經攪拌20小時。加入N
2
H
2 .
H
2
O (20.0 mL)並令混合物於40℃下經攪拌60小時。令反應混合物經真空下蒸發並令所生成之水溶性混合物經3N HCl酸化(pH=5至6)。藉由過濾收集所生成之沉澱物並令濾餅經MeOH (2 x 20 mL)沖洗且於真空下經乾燥以生成固體(2.6 g)，令該固體藉由進一步沉澱純化。令該固體於15℃下於MeOH/DCM/H
2
O (60 mL，1:1:1)之混合物中經攪拌3小時。藉由過濾移除固體並於真空下經乾燥以生成淡黃色固體(2.3 g)，令該固體溶解於溫熱DMSO (20 mL)以生成澄清溶液。加入MeOH (30 mL)並令混合物於15℃下經攪拌2小時。藉由過濾移除所生成之固體並令濾餅經乾燥以生成呈白色固體之標的化合物(1870 mg，58%)。LCMS
m/z
=393 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.67 (3H, d), 5.76 (1H, q), 6.49-6.65 (3H, m), 6.67-6.75 (1H, m), 7.02 (1H, dd), 7.15 (1H, dt), 7.37 (1H, dd), 7.58 (1H, d), 7.92-8.02 (2H, m), 8.25 (1H, d), 8.42 (1H, d)。
實施例4a
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸鉀
令1M NaOH溶液(2.3 mL，2.3 mmol)加入至3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例145；120 mg，0.224 mmol)之MeOH (3 mL)溶液並令反應物於70℃下經攪拌40小時。令經冷卻之反應物於真空下經濃縮並令殘餘物經MeCN (2 mL)稀釋且經1N HCl酸化至pH 3至4。藉由過濾收集所生成之沉澱物，經50% MeCN/H
2
O (6 mL)和MeOH (2 mL)輕洗且於真空乾燥爐中經乾燥以生成白色固體(96 mg)。令該固體與依據上述方法所製備之另一批產物結合(總計194 mg，0.49 mmol)並懸浮於IPA (5 mL)，加入1M KOH (0.5 mL，0.5 mmol)且令混合物經攪拌4小時。令該混合物於真空下經濃縮，經與庚烷(3 x 30 mL)共沸且令所生成之固體經乾燥以生成呈白色固體之標的化合物(207 mg)。LCMS
m/z
=393 [M+H]
+
。
實施例5
5-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]-1,3,4-噁二唑-2(3H)-酮
令CDI (108 mg，0.664 mmol)加入至3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯並醯肼(製備例163；90 mg，0.22 mmol)和Et
3
N (0.5 mL，4 mmol)之THF (3 mL)溶液並於室溫下經攪拌1小時。令反應混合物經蒸發至乾燥狀態並經管柱層析(12 g矽膠；MeOH：DCM=0至5%)純化以生成殘餘物，令該殘餘物經製備性HPLC (Boston Green ODS；0.05% HCl/MeCN水溶液；5至95%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(62 mg，65%)。LCMS
m/z
=433 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.72 (3H, d), 5.90 (1H, q), 6.66-6.74 (1H, m), 7.12 (1H, s), 7.35 (1H, dd), 7.44 (1H, dt), 7.59-7.72 (2H, m), 7.87 (1H, dd), 7.99 (1H, d), 8.15 (1H, d), 8.41 (1H, d), 8.74 (2H, br s), 12.76 (1H, s)。
實施例6
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
於15℃下令TMSCHN
2
(2.04 mL，2M己烷溶液)逐滴加入至3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(實施例4；400 mg，1.02 mmol)之DMSO (10 mL)溶液並隨後於15℃下經攪拌90分鐘。令反應物經H
2
O (20 mL)驟冷並經EtOAc (2 x 20 mL)萃取。令結合之有機萃取液經H
2
O (30 mL)和鹽水(30 mL)沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經管柱層析(12 g矽膠；EtOAc：石油醚=10至100%)純化以生成殘餘物，其係進一步經製備性HPLC (Agela Durashell C18；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；53至73%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(35 mg，8.4%)。LCMS
m/z
=407 [M+H]
+
。
1
H NMR (CHCl
3
-d
1
, 400 MHz) δ：1.72 (3H, br d), 3.92 (3H, s), 5.17 (2H, br s), 5.97 (1H, q), 6.63 (1H, br s), 6.82 (1H, s), 6.89-7.03 (1H, m), 7.06-7.17 (1H, m), 7.42 (1H, d), 7.51 (1H, br dd), 7.74-7.94 (2H, m), 8.05 (1H, br d), 8.30 (1H, s)。
實施例7
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯磺醯胺
令3-[1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-N,N-雙(4-甲氧基苄基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯磺醯胺(製備例153；53 mg，0.066 mmol)、苯甲醚(25.1 mg，0.232)及TFA (1 mL)之混合物於室溫下經攪拌18小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並於室溫下於7M NH
3
之MeOH (15 mL)溶液中經攪拌18小時。令反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(10% MeOH之DCM溶液)純化。令殘餘物進一步經手性SFC (Chiral Technologies OD-H；0.2% NH
4
OH之MeOH溶液；17%)純化以生成標的化合物。LCMS
m/z
=428 [M+H]
+
。
實施例8
[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酸
令2M NaOH (53.3 mL，107 mmol)加入至{3-[1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}乙酸甲酯(製備例146；186.0 mg，0.338 mmol)於MeOH和THF之溶液。令反應混合物於44℃下經攪拌20小時且隨後經加熱至70℃達2天。令該混合物於真空下經濃縮並令殘餘物溶解於H
2
O/MeOH (3 mL)且經1M HCl酸化至pH 3。藉由過濾收集所生成之白色固體並令濾餅經1：1 MeCN：H
2
O和H
2
O (各1 mL)沖洗。令固體進一步經SFC層析(Lux Amylose；0.2% NH
4
OH之MeOH溶液；20%)純化以生成呈玻璃之標的化合物(峰1；22.6 mg，16.5%)。LCMS
m/z
=407 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.65 (3H, d), 3.65 (2H, s), 5.55 (1H, q), 6.60-6.85 (4H, m), 7.20-7.48 (5H, m), 7.55-7.78 (3H, m), 7.90 (1H, s), 8.30 (1H, s)。
實施例9
5-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
令2M NaOH (2.48 mL，4.97 mmol)加入至5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例149；551 mg，0.994 mmol)於MeOH (2 mL)和THF (6 mL)之溶液並於27℃下經攪拌16小時。加入聯胺水合物(2.90 mL，59.6 mmol)並令溶液於40℃下經加熱5小時。加入額外之聯胺水合物(2.0 mL，41 mmol)並再持續加熱18小時。令反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經4M HCl酸化至約pH 6以生成沉澱物，令該沉澱物溶解於DMSO (0.5 mL；含有1至2滴NH
4
OH水溶液)且經HPLC (DuraShell；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；19%至39%)純化。得到呈白色固體之標的化合物(240 mg，59%)。LCMS
m/z
=411 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.66 (3H, d), 5.82 (1H, q), 6.57 (3H, d), 6.71-6.74 (1H, m), 7.02 (1H, dd), 7.15 (1H, dt), 7.38 (1H, dd), 7.53 (1H, d), 7.99 (1H, d), 8.15 (1H, d), 8.45 (1H, d)。
實施例10
N-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯基]甘胺酸
令T
3
P (53 mg，0.084 mmol, 0.050 mL)加入至3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸鉀(實施例4a；30 mg，0.070 mmol)、甘胺酸甲酯
.
HCl (11 mg，0.088 mmol)及DIPEA (36.0 mg，0.279 mmol)於DMF (0.5 mL)之混合物並令混合物於室溫下經隔夜攪拌。加入額外之甘胺酸甲酯
.
HCl (6 mg，0.044 mmol)和DIPEA (18.0 mg，0.14 mmol)並持續攪拌18小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物再溶解於MeOH (1 mL)和NaOH水溶液(10 mg，0.4 mmol, 0.350 mL，1M)並令所生成之溶液於室溫下經攪拌。令反應混合物經酸化至pH 2至3並於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成殘餘物，令該殘餘物經HPLC (Waters Atlantis dC18；0.05% TFA水溶液/0.05% TFA之MeCN溶液；95/5至5/95)純化以生成呈TFA鹽之標的化合物(26 mg，76%)。LCMS
m/z
=450 [M+H]
+
。
實施例11
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(2-甲氧基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
令T
3
P (53.2 mg，0.0836 mmol)加入至3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸鉀(實施例4a；20 mg，0.046 mmol)、2-甲氧基乙胺(6.98 mg，0.0929 mmol)及DIPEA (36.0 mg，0.279 mmol)於DMF (0.5 mL)之混合物並令混合物於室溫下經攪拌18小時。令反應混合物經飽和NaHCO
3
水溶液(3 mL)和DCM (10 mL)稀釋並於室溫下經攪拌10分鐘。收集有機萃取液並於真空下經蒸發至乾燥狀態且令殘餘物經HPLC (Waters Atlantis dC18；0.05% TFA水溶液/0.05% TFA之MeCN溶液；95/5至5/95)純化以生成呈TFA鹽之標的化合物(13.8 mg，66%)。LCMS
m/z
=450 [M+H]
+
。
實施例12至14
依據上述實施例11描述之方法，藉由使用適當之胺，製備下表之實施例12至14。
實施例15
[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基]乙酸
令{3-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基}乙酸三級丁酯(製備例154；260 mg，0.394 mmol)之TFA (2 mL)溶液於20℃下經攪拌1小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態，並令殘餘物溶解於MeCN (3 mL)，經NH
4
OH (約1 mL)沖洗且經製備性HPLC (Agela Durashell C18；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；11至51%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(71 mg，43%)。LCMS
m/z
=423 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.62 (3H, d), 4.66 (2H, s), 5.42 (1H, q), 6.52 (2H, s), 6.63 (1H, t), 6.78 (1H, s), 6.92 (1H, dd), 7.09 (1H, dd), 7.16 (1H, dt), 7.27 (1H, d), 7.33 (1H, d), 7.39 (1H, dd), 7.89 (1H, d), 8.21 (1H, d)。
實施例16
3-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]丙酸
對3-{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}丙酸三級丁酯(製備例147；113 mg，0.186 mmol)於MeOH (4 mL)和THF (2 mL)之溶液加入1M NaOH (7 mL)並令混合物於室溫下經攪拌64小時。令反應混合物經加熱至70℃達8小時。於真空下除去溶劑並令漿泥經1M HCl酸化至pH 3。藉由過濾收集固體並進一步經HPLC (Waters Atlantis dC18；0.05% TFA水溶液/0.05% TFA之MeCN溶液；95/5至5/95)純化以生成標的化合物(10 mg，13%)。LCMS
m/z
=421 [M+H]
+
。
實施例17
3-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮
部分1
對(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(N-羥基甲脒)-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例164；146 mg，0.288 mmol)之1,4-二噁烷(4 mL)溶液加入CDI (93.5 mg，0.576 mmol)。令混合物經加熱至100℃達16小時。令反應物經H
2
O (5 mL)驟冷並經EtOAc (3 x 15 mL)萃取。令結合之有機萃取液經H
2
O (5 mL)和鹽水(5 mL)沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)，經過濾且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成呈褐色油之粗(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(5-側氧基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯，其未經進一步純化而使用。
部分2
令TFA (1 mL)加入至源自於部分1的(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(5-側氧基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯於DCM (2 mL)之褐色溶液並令反應混合物於室溫(24℃)下經攪拌1小時。令該反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態，溶解於MeOH (2.5 mL)和NH
4
OH (0.5 mL)，經過濾且經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；21至41%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(19.4 mg，14%)。LCMS
m/z
=433 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 5.80 (1H, q), 6.52 (2H, br s), 6.66-6.78 (2H, m), 7.07 (1H, dd), 7.16 (1H, dt), 7.39 (1H, dd), 7.68 (1H, d), 7.85 (1H, dd), 7.98 (1H, d), 8.21 (1H, d), 8.41 (1H, d), 8.88 (1H, s)。
實施例18
N-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]甲磺醯胺
部分1
於0℃下令Et
3
N (17.4 mg，0.172 mmol)加入至2-(3-{(1S)-1-[5-胺基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例160；50 mg，0.086 mmol)之無水DCM (3 mL)溶液。於加入甲磺醯氯(19.7 mg，0.172 mmol)之前，令反應混合物於0℃下經攪拌10分鐘。令反應混合物於0℃下經攪拌2小時並隨後於30℃下經攪拌18小時。令反應混合物經冷卻至0℃並先後加入Et
3
N (17.4 mg，0.172 mmol)和MsCl (19.7 mg，0.172 mmol)且令混合物於30℃下經攪拌16小時。令反應混合物經冷卻至0℃並進一步分批加入Et
3
N (17.4 mg，0.172 mmol)和MsCl (19.7 mg，0.172 mmol)且令混合物於30℃下經攪拌2小時。令反應混合物經DCM (20 mL)稀釋，經H
2
O (2 mL)和鹽水(2 mL)沖洗且經乾燥(Na
2
SO
4
)。令有機萃取液於減壓下經蒸發至乾燥狀態以生成N-{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}甲磺醯胺，其未經進一步純化而用於下述之步驟。
部分2
於30℃下對源自於部分1的N-{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}甲磺醯胺之無水MeOH (5 ml)溶液加入NH
2
NH
2 .
H
2
O (2.52 mg，0.0427 mmol)並令混合物於30℃下經攪拌10分鐘。令反應混合物於減壓下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經DCM (10 mL)稀釋。藉由過濾移除所生成之固體並令濾餅經DCM (2 x 5 mL)沖洗。令結合之有機萃取液經H
2
O (2 mL)和鹽水(2 mL)沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令所生成之殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；28至58%)純化以生成白色固體，其係進一步經SFC (Chiralcel OJ；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液；30%)純化。得到呈亮紅色固體之標的化合物(5 mg，27%)。LCMS
m/z
=442 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 2.82-2.88 (3H, m), 5.62 (1H, q), 6.66 (1H, t), 7.02 (1H, s), 7.11-7.17 (2H, m), 7.27-7.32 (1H, m), 7.40 (1H, d), 7.46 (1H, dd), 7.52 (1H, d), 7.90 (1H, d), 8.02 (1H, d)。
實施例19
3-{(1S)-1-[(2-胺基-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
令3-[(1S)-1-({5,8-二氟-2-[(4-甲氧基苄基)胺基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例157；240 mg，0.441 mmol)之TFA (5 mL)溶液於65℃下經攪拌16小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並經與MeOH共蒸發以生成呈黃色膠之3-{(1S)-1-[(2-胺基-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯，令該膠溶解於MeOH (4 mL)，經NaOH水溶液(2M；3.3 mL，6.61 mmol)處理且於30℃下經攪拌1.5小時。令反應混合物經4M HCl中和至pH 6至7且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經製備性SFC層析(Chiralcel OJ；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液；25%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(152 mg，84%)。LCMS
m/z
=411 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.67 (3H, d), 5.86 (1H, q), 6.67 (1H, t), 6.74-6.88 (2H, m), 6.99-7.17 (3H, m), 7.53 (1H, d), 7.89-7.99 (2H, m), 8.19-8.29 (2H, m)。
實施例20
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
於-0.6℃下令對甲苯磺醯氯(18000 mg，94.414 mmol)之二氯甲烷(100 mL)溶液加入至3-{(1S)-1-[(6,8-二氟-1-氧橋喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例159；20000 mg，47.016 mmol)、六氟磷酸銨(31000 mg，190.18 mmol)及DIPEA (37000 mg，290 mmol, 50 mL)於DCM (500 mL)之懸浮液。於該加入期間令混合物之內部溫度維持低於1.5℃並隨後令該混合物於0℃至室溫下經攪拌4小時。隨後令該混合物於室溫下再經攪拌16小時。於室溫下另分別加入六氟磷酸銨(3100 mg，19.0 mmol)和對甲苯磺醯氯(1800 mg，9.4 mmol)之DCM (30 mL)溶液並令混合物於室溫下經攪拌2小時。令反應混合物於真空下經濃縮，令殘餘物分佈於甲苯(400 mL)和2M碳酸鈉(100 mL)且令水層經甲苯(100 mL)萃取。令結合之有機萃取液經10%檸檬酸(100 mL)和鹽水(100 mL)沖洗，經乾燥(MgSO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經Et
2
O (50 mL)碾製並藉由過濾收集所生成之固體。令濾餅經Et
2
O (15 mL)沖洗並於高真空下經乾燥以生成呈淡黃色固體之標的化合物(12257 mg，61%)。LCMS
m/z
=425 [M+H]
+
。
1
H NMR (CDCl
3
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 3.90 (3H, s), 5.52 (2H, br s), 5.98 (1H, q), 6.60 (1H, s), 6.78-6.94 (3H, m), 7.40 (1H, d), 7.80 (1H, s), 7.88 (1H, s), 8.04 (1H, d), 8.30 (1H, s)。
實施例21
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
於室溫下令NaOH水溶液(4400 mg，110 mmol, 55 mL，2.0 M)加入至3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(實施例20；11770 mg，27.733 mmol)之THF (200 mL)溶液並令所生成之混合物於室溫下經攪拌16小時。令反應混合物於真空下經濃縮以除去該有機溶劑並令水層經MTBE (100 mL)萃取。令該水層經2N HCl (42 mL)酸化至pH 3。藉由過濾移除所生成之懸浮液並令固體經H
2
O (100 mL)沖洗。令該固體於氮氣下經過濾並隨後於45℃下經H
2
O (200 mL)漿泥化達16小時。藉由過濾收集固體並於60℃下令濾餅於真空下經乾燥16小時以生成標的化合物(10627 mg，93%)。LCMS
m/z
=411 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 5.78 (1H, q), 6.64-6.92 (5H, m), 7.16 (1H, t), 7.58 (1H, d), 7.90-8.00 (2H, m), 8.24 (1H, s), 8.40 (1H, s), 13.28 (1H, s)。
實施例21a
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸三(羥基甲基)胺基甲烷鹽
部分1
對小瓶加入3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(27.1 mg)和THF (0.500 mL)。令混合物經加熱至60℃，期間該混合物轉呈均質。令三(羥基甲基)胺基甲烷之水溶液(26.76 µL, 1.03當量)加入至該混合物。令該混合物於攪拌下以-0.05℃/分鐘之速度經冷卻至21℃。使用氮氣除去該混合物之溶劑並令殘餘物於真空下經乾燥約10分鐘。令二噁烷(0.400 mL)加入至殘餘物。令混合物經加熱至70℃且隨後於攪拌下以-0.1℃/分鐘之速度經冷卻至21℃。經於二噁烷中經隔夜攪拌後，該混合物呈極濃稠且含有固體。藉由離心過濾收集固體且經乾燥。於打開之平底鍋中，藉由加熱該固體以生成晶種。令產物以10℃/分鐘之速度經加熱至150℃並維持等溫達5分鐘且隨後藉由偏光顯微術進行分析。該結晶狀粒子係呈消光之雙折射並用於下述之部分2。
部分2
令3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(0.50 g，1.22 mmol)、乙腈(9.1 mL)及水(0.32 mL)於小瓶(30 mL)中混合。令混合物於60℃下經加熱約5分鐘以生成灰白色/亮黃色懸浮液。令三(羥基甲基)胺基甲烷(0.15 g，1.26 mmol)溶解於水(0.58 mL)並令所生成之水溶液加入至該3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸之懸浮液。該混合物轉呈澄清。令該混合物於60℃下經加熱約3分鐘並隨後加入源自於部分1之3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸三(羥基甲基)胺基甲烷鹽的晶種(5.3 mg)。令混合物冷卻並於室溫下經攪拌。經16小時後，令該混合物經過濾，令固體經乙腈(3 x 約1 mL)沖洗且隨後於真空下經乾燥以生成呈白色固體之標的化合物(499 mg，77%)。
1
H NMR (D
2
O, 400 MHz) δ：1.69 (3H, d), 3.68 (6H, s), 5.17 (q, 1H), 6.18 (1H, s), 6.53-6.49 (1H, m), 6.62 (1H, t), 6.72 (1H, ddd), 7.36 (1H, d), 7.83 (1H, dd), 7.88-7.86 (2H, m), 8.10 (1H, d)。
實施例22
3-{(1S)-1-[(2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
於10℃下令DIAD (111 mg，0.548 mmol)逐滴加入至3-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例28；45 mg，0.18 mmol)、(3-羥基-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例141；50 mg，0.18 mmol)及PPh
3
(144 mg，0.548 mmol)之無水THF (0.5 mL)溶液。令所生成之混合物於25℃下經攪拌3小時並隨後加入NaOH水溶液(21.9 mg NaOH於0.5 mL H
2
O；0.548 mmol)。令反應混合物於25℃下經攪拌16小時。令該反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物溶解於DCM (0.5 mL)並於25℃下加入TFA (0.5 mL)且令所生成之混合物於25℃下經攪拌2小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；11至31%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(19 mg，27%)。LCMS
m/z
=390 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.65 (3H, d), 2.43 (3H, s), 5.81 (1H, q), 6.68 (1H, s), 6.70-6.74 (1H, m), 7.05 (1H, s), 7.12 (2H, br s), 7.57 (1H, d), 7.93-8.01 (2H, m), 8.26 (1H, d), 8.35-8.43 (2H, m)。
實施例23
5-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
令2M NaOH (0.33 mL，0.66 mmol, 5.0當量)加入至5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例150；75.8 mg，0.132 mmol)於THF (1.5 mL)和MeOH (0.3 mL)之溶液並令溶液於26℃下經攪拌3小時。加入N
2
H
4 .
H
2
O (0.4 mL，8 mmol, 60當量)並令反應混合物於27℃下經攪拌6小時。隨後加入額外之N
2
H
4 .
H
2
O (0.5 mL，10 mmol, 80當量)，並於27℃下經攪拌16小時之前，令反應混合物經加熱至40℃達1.5小時。於真空下除去溶劑並令水溶液經4M HCl酸化至pH 7且隨後經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；20至40%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(20 mg，37%)。LCMS
m/z
=429 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.65 (3H, d), 5.80 (1H, q), 6.64 (1H, s), 6.69-6.73 (1H, m), 6.83 (2H, br s), 6.90 (1H, dd), 7.17 (1H, dt), 7.48 (1H, d), 7.97 (1H, d), 8.11 (1H, d), 8.42 (1H, d)。
實施例24
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(甲基磺醯基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
令DIPEA (87.9 mg，0.12 mL，0.680 mmol)加入至3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(實施例21；42.3 mg，0.103 mmol)、甲磺醯胺(23.4 mg，0.246 mmol)及HATU (46.1 mg，0.121 mmol)之DMF (1 mL)溶液。令反應混合物於室溫下經隔夜攪拌。加入額外之甲磺醯胺(26.5 mg)和HATU (33 mg)並令混合物於室溫下經攪拌24小時。使用激烈之氮氣流除去溶劑並令殘餘物經HPLC (Waters Atlantis dC18；0.05% TFA之H
2
O溶液/0.05% TFA之MeCN溶液；95/5至5/95)純化以生成標的化合物(26.4 mg，52%)。LCMS
m/z
=488 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.66 (3H, d), 3.32 (2H, br s), 3.38 (3H, s), 5.82 (1H, q), 6.64-7.20 (6H, m), 7.60 (1H, d), 7.92 (1H, s), 8.00 (1H, d), 8.30 (1H, s), 8.40 (1H, s)。
實施例25
6-溴-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令6-溴-N-三級丁基-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例186；180.0 mg，0.372 mmol)於苯甲醚(40.2 mg，0.372 mmol, 0.0404 mL)和TFA (2.2 mL)之溶液經加熱至70℃達3小時。令溶液經蒸發以生成油，令該油分佈於H
2
O (5 mL)和DCM (20 mL)且使用50% NaOH水溶液(4 mL)調整pH至10。令水層經DCM (4 x 20 mL)萃取並於真空下經蒸發至乾燥狀態且經層析(使用1至5% MeOH/DCM)純化以生成固體，令該固體進一步經手性SFC (Lux-Amylose-1；0.2% NH
4
OH之MeOH溶液；20%)純化以生成呈固體之標的化合物(60 mg，38%)。LCMS
m/z
=428 [M+H]
+
。
1
H NMR (CDCl
3
, 400 MHz) δ：1.78 (3H, d), 5.51 (2H, s), 5.83-5.94 (1H, m), 6.58 (1H, t), 6.69 (1H, s), 7.39 (2H, s), 7.41 (1H, d), 7.44 (1h, s), 7.67 (1H, d), 7.84-7.89 (1H, m), 8.56 (1H, d)。
實施例26
2-胺基-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-腈
依循實施例25之方法且使用2-(三級丁基胺基)-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-腈(製備例190)，製備呈固體之標的化合物(46 mg，23%)。LCMS
m/z
=375 [M+H]
+
。
1
H NMR (CDCl
3
, 400 MHz) δ：1.79 (3H, d), 5.79 (2H, br s), 5.95 (1H, q), 6.59-6.66 (1H, m), 6.79 (1H, s), 7.43-7.47 (1H, m), 7.49-7.53 (2H, m), 7.65 (1H, s), 7.72 (1H, d), 7.90 (1H, d), 8.56 (1H, d)。
實施例27
2-胺基-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令2-(三級丁基胺基)-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-腈(製備例190；207 mg，0.481 mmol)之DMSO (10 mL)溶液冷卻至0℃，加入K
2
CO
3
(225 mg，1.44 mmol)和H
2
O
2
(81.8 mg，0.721 mmol, 0.0737 mL)且令混合物於0℃下經攪拌4小時。令反應物經飽和Na
2
S
2
O
3
水溶液和飽和NaHCO
3
水溶液驟冷並經DCM (3 x)萃取。令結合之有機萃取液經H
2
O (3 x)沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經濃縮。令苯甲醚(52.0 mg，0.481 mmol，52.0 uL)加入至該粗混合物並溶解於TFA (20 mL)且令混合物於70℃下經隔夜加熱。令該混合物於真空下經濃縮並經H
2
O和飽和NaHCO
3
水溶液驟冷且經DCM (4 x)萃取。令結合之有機萃取液經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經矽膠層析(100%至80% DCM/MeOH)純化以生成白色固體，令該固體進一步經手性SFC (Chiral Tech AS-H；0.2%異丙醇胺之IPA溶液；20%)純化以生成標的化合物(9.4 mg)。LCMS
m/z
=393 [M+H]
+
。
1
H NMR (CDCl
3
, 400 MHz) δ：1.63 (3H, d), 5.39 (2H, br s), 5.74 (1H, q), 6.57 (1H, t), 7.07 (1H, dt), 7.10 (1H, ss), 7.23-7.27 (1H, m), 7.33 (1H, dd), 7.58 (1H, d), 7.70-7.76 (2H, m), 7.84 (1H, d), 7.97 (1H, d)。
實施例28
6-溴-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
藉由6-溴-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例191)之手性SFC分離(Chiralcel AD；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液)，得到呈蒼白色固體之標的化合物(42.2 mg，44.5%)。LCMS
m/z
=410 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeOH-d
4
, 400 MHz) δ：1.79 (3H, d), 5.98 (1H, q), 6.70 (1H, t), 7.11 (1H, s), 7.44 (1H, d), 7.54-7.60 (2H, m), 7.65 (1H, d), 7.94-7.96 (2H, m), 8.11 (1H, d), 8.73 (1H, d)。
實施例29
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
於N
2
下對1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例46；267 mg，1.41 mmol)之無水THF (4 mL)溶液加入2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇(製備例140；150 mg，0.706 mmol)和PPh
3
(428 mg，2.12 mmol)。令混合物於20℃下經攪拌，於N
2
下逐滴加入DIAD (555 mg，2.12 mmol)且隨後於20℃下經攪拌24小時。令溶劑於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經管柱層析(石油醚：EtOAc 100：0至0：100)部分純化以生成黃色固體，其係進一步經製備性HPLC (DuraShell；0.225% HCO
2
H/MeCN水溶液；38至58%)純化以生成固體。令該固體更進一步經手性SFC (Chiralcel-AD；0.1% NH
4
OH之MeOH溶液；50%)純化以生成呈固體之標的化合物(16.5 mg，38%)。LCMS
m/z
=384 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeOH-d
4
, 400 MHz) δ：1.79 (3H, d), 5.88 (1H, q), 6.70 (1H, t), 6.88 (1H, s), 7.20 (1H, d), 7.50 (1H, d), 7.55-7.59 (1H, m), 7.92-7.95 (2H, m), 8.10 (1H, d), 8.72 (1H, q)。
實施例30
2-胺基-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
對2-胺基-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-腈(製備例192；270 mg，0.758 mmol)之DMSO (4 mL)溶液加入碳酸鉀(209.0 mg，1.52 mmol)。令混合物經冷卻至10℃並逐滴加入H
2
O
2
(30% H
2
O溶液；0.380 mL，3.79 mmol)且同時維持該混合物之內部溫度低於40℃。經該加入完成後，令反應混合物於40℃下經攪拌30分鐘。令反應物經飽和Na
2
SO
3
水溶液和H
2
O (50 mL)驟冷。藉由過濾收集固體並令濾餅經H
2
O (2 x 10 mL)沖洗。令固體經矽膠層析(DCM：MeOH=100:0至85:15)純化以生成黃色固體(220.0 mg，77.6%)。令該黃色固體進一步經手性SFC (Chiralcel OD-H；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液；40%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(101.0 mg，46%)。LCMS
m/z
=375 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeOH-d
4
, 400 MHz) δ：1.81 (3H, d), 5.90 (1H, q), 6.72 (1H, t), 6.97 (1H, s), 7.47 (1H, d), 7.52-7.60 (1H, m), 7.81 (1H, d), 7.90-7.97 (3H, m), 8.12 (1H, d)。
實施例31
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令甲磺酸1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯(製備例58；200 mg，0.701 mmol)、2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇(製備例140；149 mg，0.701 mmol)及Cs
2
CO
3
(685 mg，2.10 mmol)之MeCN (10 mL)溶液於70℃下經攪拌16小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經矽膠層析(石油醚：EtOAc=100：0至50：50)純化以生成灰白色固體。令該固體進一步經手性SFC (Chiralpak AD-H；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液；45%)純化以生成呈灰白色固體之標的化合物(23.2 mg，24%)。LCMS
m/z
=402 [M+H]
+
。
1
H NMR (CDCl
3
, 400 MHz) δ：1.81 (3H, d), 5.21 (2H, br s), 5.92 (1H, q), 6.63 (1H, s), 6.73 (1H, s), 7.07 (1H, d), 7.47 (1H, dd), 7.60 (1H, d), 7.91 (1H, s), 8.60 (1H, d)。
實施例32
6-{(1S)-1-[(2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧醯胺
依循實施例31之方法，自甲磺酸1-[6-胺甲醯基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯(製備例60；350 mg，1.13 mmol)和2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇(製備例140；264 mg，1.24 mmol)，使用製備性SFC (Chiralcel AD；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液；40%)，製備呈白色固體之標的化合物(40 mg)。LCMS
m/z
=427 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeOH-d
4
, 400 MHz) δ：1.82 (3H, d), 6.19 (1H, q), 6.69 (1H, t), 6.96 (1H, s), 7.21 (1H, d), 7.49 (1H, d), 7.94 (1H, s), 8.03 (1H, d), 8.12 (1H, d), 8.18 (1H, d)。
實施例33
6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令(6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例167；250 mg，0.535 mmol)之TFA/DCM(3 mL/3 mL)溶液於室溫(約24℃)下經攪拌0.5小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (Agela Durashell C18；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；29至69%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(120 mg，61%)。LCMS
m/z
=368 [M+H]
+
。
1
H NMR (CDCl
3
, 400 MHz) δ：1.80 (3H, d), 4.92-5.29 (2H, m), 5.89 (1H, q), 6.60 (1H, t), 6.71 (1H, s), 6.97 (1H, dd), 7.12 (1H, dt), 7.44 (1H, dd), 7.50 (1H, dd), 7.68 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.58 (1H, d)。
實施例34
2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令2-胺基-7-氟-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸(製備例195；111 mg，0.27 mmol)、HOBt (72.9 mg，0.540 mmol)、EDCI (103 mg，0.540 mmol)及Et
3
N (81.9 mg，0.810 mmol)於DMF (3 mL)之混合物於20℃下經攪拌0.5小時。加入NH
4
Cl (43.3 mg，0.810 mmol)並令混合物於20℃和氮氣下經攪拌15小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成殘餘物並令該殘餘物經HPLC (Agela DuraShell；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；20至50%)純化以生成白色固體(30 mg)。令該固體與依循上述方法且起始自前驅酸(45 mg，0.11 mmol)所獲得之產物(20 mg)結合。令結合之固體經手性SFC純化以生成呈白色固體之標的化合物(17.9 mg，36%)。LCMS
m/z
=411 [M+H]
+
。
1
H NMR (CDCl
3
, 400 MHz) δ：1.79 (3H, d), 5.45 (2H, br s), 5.72 (1H, br s), 5.95 (1H, q), 6.63 (1H, t), 6.75 (1H, br d), 6.84 (1H, s), 7.22 (1H, d), 7.43 (1H, d), 7.71 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.16 (1H, d), 8.56 (1H, d)。
實施例35
2-胺基-8-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
對配備玻璃插入器之Parr反應器(50 mL)載入CaCl
2
(344 mg，3.10 mmol)、2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-8-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例169；860.0 mg，1.55 mmol)及NH
3
之MeOH溶液(3000 mg，200 mmol, 25.0 mL，7.0 M)。令反應混合物於110℃下經攪拌30小時且隨後於室溫下再經攪拌30小時。於110℃下，內部壓力達140 psi。令反應混合物經通過寅氏鹽®墊過濾，經MeOH和50：50 MeOH/DCM沖洗且令結合之有機萃取液於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經層析(RediSep GOLD 120 g；庚烷/DCM/MeOH；25/67.5/7.5)純化以生成灰白色固體。藉由溫和加熱令該固體溶解於MeOH (4 mL)並隨後加入2滴H
2
O且立即沉澱白色晶體。藉由過濾移除晶體以生成呈白色晶體之標的化合物(156 mg)。LCMS
m/z
=411 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.70 (3H, d), 5.90 (1H, q), 6.65-6.90 (4H, m), 7.35 (1H, br s), 7.55 (1H, d), 7.70 (1H, d), 7.90-7.96 (2H, m), 8.10 (1H, dd), 8.35 (1H, d), 8.75 (1H, d)。
實施例36
3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-胺
令甲磺酸(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯(製備例59；71.7 mg，0.251 mmol)、2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-醇三氟乙酸鹽(製備例138；44 mg，0.25 mmol)及Cs
2
CO
3
(175 mg，0.537 mmol)於MeCN (2 mL)之混合物於60℃下經隔夜攪拌。令該混合物經DCM (10 mL)稀釋，藉由過濾移除無機固體且經DCM (10 mL)沖洗。令結合之有機萃取液於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經RediSep GOLD 12 g (0至60% EtOH/EtOAc)純化以生成呈白色固體之標的化合物(31 mg，34%)。LCMS
m/z
=365 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeOH-d
4
, 400 MHz) δ：1.78 (3H, d), 2.55 (3H, s), 5.55 (1H, s), 6.00 (1H, q), 6.65 (1H, s), 6.92 (1H, s), 7.18 (1H, s), 7.82 (1H, d), 7.90 (1H, s), 8.10 (1H, s), 8.43 (1H, s), 8.62 (1H, s)。
實施例37
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸
對6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯(製備例174；120 mg，0.223 mmol)於MeOH (2.0 mL)和THF (1.0 mL)之溶液加入2M NaOH (116 mg，2.0 mL，2.9 mmol)並令反應混合物於25℃下經攪拌36小時。加入N
2
H
4
(2 mL，40 mmol)並令反應溶液於45℃下經攪拌3天。令該反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (DuraShell；0.05% HCl/MeCN水溶液；15至31%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(11 mg，13%)。LCMS
m/z
=394 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.75 (3H, d), 6.18 (1H, q), 6.61 (1H, t), 7.38 (1H, s), 7.40-7.50 (2H, m), 7.68 (1H, dd), 7.82 (1H, d), 8.15 (2H, q), 8.31 (1H, d), 8.56 (2H, br s)。
實施例38
6,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
對2-(6,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例168；120 mg，0.233 mmol)之MeOH (2.0 mL)溶液加入NH
2
NH
2 .
H
2
O (0.4 mL)並令混合物於室溫(25至30℃)下經攪拌1小時。令該混合物經過濾並經製備性HPLC純化以生成呈白色固體之標的化合物(34.5 mg，39%)。LCMS
m/z
=386 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.71 (3H, d), 5.85 (1H, q), 6.52 (2H, br s), 6.63-6.72 (2H, m), 6.95 (1H, dt), 7.17 (1H, dt), 7.92 (1H, d), 8.07 (1H, dd), 8.37 (1H, d), 8.74 (1H, d)。
實施例39
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-3-氟-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸
對6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-3-氟-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯(製備例180；73.00 mg，0.131 mmol)之THF (1.5 mL)溶液加入2M NaOH水溶液(0.329 mL，0.657 mmol, 5.0當量)並令所生成之溶液於室溫下經攪拌3小時。加入NH
2
NH
2 .
H
2
O (0.4 mL，8 mmol, 60當量)並於室溫下經攪拌19小時。令混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (DuraShell C18；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；20至40%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(15.5 mg，29%)。LCMS
m/z
=412 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.75 (3H, d), 5.91-6.02 (1H, m), 6.28 (2H, br s), 6.66-6.77 (2H, m), 7.08-7.21 (2H, m), 7.39 (1H, dd), 7.93 (1H, d), 8.17 (1H, d), 8.39 (1H, d)。
實施例40
{[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙酸
令({6-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}氧基)乙酸三級丁酯(製備例176；110 mg，0.19 mmol)之TFA (1.5 mL)溶液於25℃下經攪拌30分鐘。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell C18；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；22至42%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(27 mg，34%)。LCMS
m/z
=424 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.65 (3H, d), 4.76-5.00 (2H, m), 5.56 (1H, q), 6.13 (2H, br s), 6.59 (1H, d), 6.77 (1H, s), 7.00 (1H, d), 7.08-7.23 (2H, m), 7.38 (1H, dd), 7.77-7.91 (2H, m), 8.13 (1H, d)。
實施例41
2-{[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙醇
令聯胺水合物(0.4 mL，8 mmol)之MeOH (1 mL)溶液逐滴加入至2-({6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}氧基)乙酸乙酯(製備例177；130 mg，0.224 mmol)之THF/MeOH (1 mL/1 mL)溶液並隨後令反應混合物於22℃下經攪拌1.5小時。令反應溶液自小瓶(4 mL)轉移至燒瓶並於真空下經濃縮。加入EtOH (10 mL)，藉由過濾移除固體且令濾液經EtOH沖洗。令結合之濾液於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；35至65%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(45 mg，49%)。LCMS
m/z
=410 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.69 (3H, d), 3.61-3.76 (2H, m), 4.24-4.40 (2H, m), 4.84 (1H, t), 5.53 (1H, q), 6.22 (2H, br s), 6.62 (1H, s), 6.74 (1H, s), 6.88 (1H, d), 7.05-7.20 (2H, m), 7.38 (1H, dd), 7.78 (1H, d), 7.88 (1H, s), 8.19 (1H, d)。
實施例42
2-胺基-3-{(1S)-1-[6-(2-羥基乙氧基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令3-[(1S)-1-{6-[2-(乙醯氧基)乙氧基]-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}乙氧基]-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)喹啉-6-羧酸甲酯(製備例178；220 mg，0.354 mmol)之NH
3
/MeOH (約8 M，20 mL)溶液於鋼管中於80℃下經攪拌72小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；14至44%)純化以生成呈粉紅色固體之標的化合物(13 mg，8.5%)。LCMS
m/z
=435 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.66 (3H, d), 3.57-3.74 (2H, m), 4.22-4.37 (2H, m), 4.83 (1H, t), 5.56 (1H, q), 6.52 (2H, br s), 6.59-6.65 (1H, m), 6.87 (2H, d), 7.22 (1H, br s), 7.36 (1H, d), 7.73-7.81 (2H, m), 7.85-7.90 (3H, m), 8.17 (1H, d)。
實施例43
5,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
於0℃下對5,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉1-氧化物(製備例185；300 mg，0.777 mmol)和NH
4
OH (0.5 mL)之DCM (8 mL)溶液加入TsCl (740 mg，3.88 mmol)之DCM (2 mL)溶液。令所生成之懸浮液於15℃下經攪拌16小時。令該懸浮液經DCM (10 mL)稀釋並令有機萃取液經鹽水(2 mL)沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經全自動快速層析(CombiFlash)(矽膠；20 g；EtOAc/石油醚=20至80%溶析)純化以生成亮黃色固體。經手性SFC (Chiralpak AD-H；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液)純化後，得到呈白色固體之標的化合物(110 mg，37%)。LCMS
m/z
=386 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.72 (3H, d), 5.99 (1H, q), 6.63-6.71 (1H, m), 6.71-7.03 (4H, m), 7.08 (1H, dt), 7.93 (1H, d), 8.08 (1H, dd), 8.30 (1H, d), 8.73 (1H, d)。
實施例44
2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
對2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸(製備例193；360 mg，0.92 mmol)之DMF (4 mL)溶液加入NH
4
Cl (148 mg，2.76 mmol)、DIPEA (713 mg，5.52 mmol)及HATU (525 mg，1.38 mmol)並令所生成之混合物於室溫下經攪拌2小時。令該混合物經H
2
O (5 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 15 mL)萃取。令結合之有機萃取液於真空下經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (XBridge；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；0至35%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(187 mg，52%)。LCMS
m/z
=391 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.69 (3H, d), 5.27 (1H, q), 6.37 (1H, br s), 6.65 (1H, s), 6.73-7.04 (3H, m), 7.26 (1H, br s), 7.39 (1H, d), 7.51 (1H, br s), 7.76-7.84 (1H, m), 7.86-8.01 (3H, m), 8.16 (1H, d), 12.04 (1H, br s)。
實施例45
3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令6-溴-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(實施例25；15.16 g，35.40 mmol)、Zn(CN)
2
(8.31 g，70.8 mmol)、Zn (463 mg，7.08 mmol)、Pd
2
(dba)
3
(3.24 g，3.54 mmol)及tBuXPhos (3.01 g，7.08 mmol)於DMA (177 mL)之混合物於100℃和氮氣下經加熱2.5小時。令該混合物經冷卻至室溫，經EtOAc稀釋，經通過經擠壓之寅氏鹽®過濾，經緩衝水(pH 7)和緩衝鹽水(pH 7)沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)且隨後於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成焦糖色油。令該油溶解於MeOH (259 mL)並經H
2
O
2
(4.01 mL，38.9 mmol)和DMSO (2.21 mL)處理且經攪拌1小時。真空下除去MeOH並令殘餘物於H
2
O (100 mL)中經漿泥化1小時且藉由過濾收集固體。令該固體於30% H
2
O/MeCN (22 mL)中且於50℃下經隔夜漿泥化。令該漿泥冷卻至室溫，經30% H
2
O/MeCN (約10 mL)稀釋，藉由過濾移除固體且經30% H
2
O/MeCN沖洗。令結合之濾液經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經管柱(120 g；DCM/EtOH梯度)純化以生成殘餘物，令該殘餘物進一步經HPLC (Waters Atlantis dC18；0.05% TFA之水溶液/0.05% TFA之MeCN溶液；95/5至5/95)純化以生成標的化合物(43 mg)。LCMS
m/z
=350 [M+H]
+
。
實施例46
6-{(1S)-1-[(2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
於氮氣下對(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例182；90 mg，0.17 mmol)和KOH (28.8 mg，0.514 mmol)之二噁烷/H
2
O (7 mL/3 mL)溶液加入tBuXPhos (7.27 mg，0.0171 mmol)和Pd
2
(dba)
3
(7.84 mg，0.00856 mmol)。令所生成之混合物於90℃下經攪拌約3小時並隨後於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經1N HCl酸化至pH 6，經MeOH稀釋且經製備性HPLC (DuraShell C18；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；8至28%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(10 mg，16%)。LCMS
m/z
=363 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.69 (3H, d), 2.46 (3H, s), 5.29 (1H, q), 6.40 (1H, d), 6.64 (1H, t), 6.83 (1H, s), 7.09 (3H, s), 7.50 (1H, d), 7.90 (1H, d), 8.14 (1H, d), 8.46 (1H, s)。
實施例47
6-{(1S)-1-[(2-胺基-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
依循實施例46之方法，自(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-1,5-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例181；270 mg，0.528 mmol)，使用HPLC (DuraShell C18；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；8至40%)，製備呈黃色固體之標的化合物(58.9 mg，32%)。LCMS
m/z
=349 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.70 (3H, d), 5.38 (1H, d), 6.41 (1H, br s), 6.63 (1H, t), 6.84 (2H, br s), 6.97 (1H, s), 7.34 (1H, dd), 7.54 (1H, d), 7.74 (1H, dd), 7.86 (1H, d), 8.10 (1H, d), 8.42 (1H, dd), 11.96 (1H, br s)。
實施例48
6-{(1S)-1-[(2-胺基-7-氟-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
依循實施例46之方法，自(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-7-氟-1,5-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例184；85 mg，0.16 mmol)，使用HPLC (DuraShell C18；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；7至47%)，製備呈白色固體之標的化合物(7.5 mg，13%)。LCMS
m/z
=367 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.87 (3H, d), 5.57 (1H, q), 6.41 (2H, br s), 6.57-6.71 (2H, m), 7.20 (1H, s), 7.38 (1H, br d), 7.48-7.56 (1H, m), 7.74 (1H, d), 7.86 (1H, d), 8.42 (1H, d)。
實施例49
6-[(1S)-1-{[2-胺基-6-(羥基甲基)喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
於0℃下令BH
3
Me
2
S (0.1 mL，12 M)加入至2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸(製備例193；60 mg，0.15 mmol)於THF (10 mL)之懸浮液。於經MeOH (10 mL)和1N HCl (5 mL)驟冷之前，令所生成之黃色懸浮液於50℃下經攪拌約4小時。令所生成之黃色溶液於25℃下經攪拌10分鐘並於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經製備性HPLC純化以生成呈黃色固體之標的化合物(12 mg，21%)。LCMS
m/z
=378 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.81 (3H, d), 4.68 (2H, s), 5.40 (1H, q), 6.54 (1H, d), 6.67 (1H, t), 7.06 (1H, s), 7.39-7.43 (1H, m), 7.44-7.49 (2H, m), 7.58 (1H, d), 7.90 (1H, d), 7.96 (1H, d)。
實施例50
6-[(1S)-1-{[2-胺基-6-(2-羥基丙-2-基)喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
步驟1
令MeNHOMe
.
HCl (77.1 mg，0.575 mmol)、DIPEA (297 mg，2.3 mmol)及HATU (291 mg，0.767 mmol)加入至2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸(製備例193；150 mg，0.383 mmol)於DMF (3 mL)之褐色溶液。令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令該混合物經H
2
O (5 mL)稀釋並經EtOAc/THF (v/v=3/1；5 x 15 mL)萃取。令結合之有機萃取液經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成黃色膠，令該黃色膠未經純化而用於下述之步驟2。
步驟2
於0℃下對步驟1之化合物的THF (10 mL)溶液加入MeMgBr (4 mL，3M)。令反應混合物於室溫下經攪拌6小時。令懸浮液經1N HCl (3 mL)驟冷且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經H
2
O (15 mL)稀釋並經EtOAc/THF (v/v 2:1；10 x 20 mL)萃取。令結合之有機萃取液經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成黃色膠，令該黃色膠未經進一步純化而用於步驟3。
步驟3
於0℃下對步驟2之化合物於THF (10 mL)的褐色溶液加入MeMgBr (4 mL，3M)。令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令反應物經1N HCl (3 mL)驟冷並於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經H
2
O (30 mL)稀釋並經EtOAc/THF (v/v=2/1；10 x 20 mL)萃取。令結合之有機萃取液經乾燥(Na
2
SO
4
)，於真空下經蒸發至乾燥狀態且令殘餘物經製備性HPLC純化以生成呈黃色固體之標的化合物(15 mg，9.6%)。LCMS
m/z
=406 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeOH-d
4
, 400 MHz) δ：1.59 (6H, s), 1.81 (3H, d), 5.42 (1H, br s), 6.54 (1H, br d), 6.65-6.70 (1H, m), 6.67 (1H, s), 7.05 (1H, s), 7.41-7.46 (1H, m), 7.51-7.61 (7.90 (1H, s), 7.97 (1H, s)。
實施例51和實施例52
6-[(1S)-1-({2-胺基-6-[(1R)-1-羥基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇和
6-[(1S)-1-({2-胺基-6-[(1S)-1-羥基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
重複實施例50之步驟1以生成黃色膠，令該黃色膠未經純化而用於下述之步驟2。
重複實施例50之步驟2以生成黃色膠，令該黃色膠未經進一步純化而用於步驟3。
步驟3
對步驟2之化合物的MeOH (10 mL)溶液加入NaBH
4
(14.5 mg，0.384 mmol)並令所生成之溶液於20℃下經攪拌0.5小時。令反應混合物經1N HCl酸化至pH 6並於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經製備性HPLC (XBridge；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；6至46%)純化並隨後進一步經SFC (YMC Chiral Amylose-C；0.1% NH
4
OH之IPA溶液；40%)純化以生成呈淡黃色固體之6-[(1S)-1-({2-胺基-6-[(1R)-1-羥基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇(13 mg，46%)(LCMS
m/z
=392 [M+H]
+
；
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.35 (3H, d), 1.70 (3H, d), 4.70-4.82 (1H, m), 5.13 (1H, d), 5.26 (1H, q), 6.25-6.60 (3H, m), 6.66 (1H, t), 6.83 (1H, s), 7.25-7.41 (3H, m), 7.51 (1H, br s), 7.91 (1H, s), 8.14 (1H, d), 12.05 (1H, br d))和呈淡黃色固體之6-[(1S)-1-({2-胺基-6-[(1S)-1-羥基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇(13 mg，46%) (LCMS
m/z
=392 [M+H]
+
；
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.35 (3H, d), 1.71 (3H, d), 4.72-4.82 (1H, m), 5.14 (1H, d), 5.28 (1H, br d), 6.39 (1H, br s), 6.66 (3H, s), 6.86 (1H, s), 7.30-7.42 (3H, m), 7.53 (1H, br s), 7.91 (1H, s), 8.15 (1H, d), 12.06 (1H, br s))。
實施例53
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
於氮氣下對2-(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6,8-二氟喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例172；4000 mg，6.94 mmol)和KOH (1170 mg，20.8 mmol)之二噁烷/H
2
O (60 mL/30 mL)溶液加入tBuXPhos (295 mg，0.694 mmol)和Pd
2
(dba)
3
(318 mg，0.347 mmol)。令所生成之溶液於90℃下經加熱16小時且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物溶解於MeOH (30 mL)並加入N
2
H
4 .
H
2
O (30 mL，85%純度)且於35℃下經攪拌16小時。藉由過濾移除懸浮液並令濾餅經H
2
O (30 mL)沖洗。令濾液經12N HCl酸化至pH 10並經DCM (2 x 100 mL)萃取。令結合之萃取液經乾燥(Na
2
SO
4
)並於真空下經蒸發至乾燥狀態且令殘餘物經管柱層析(40 g；MeOH：DCM=0至5%)純化以得到固體，令該固體經MTBE/DCM漿泥化以生成呈白色固體之標的化合物(1 g，37%)。LCMS
m/z
=384 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.70 (3H, d), 5.26 (1H, q), 6.38 (1H, br s), 6.64 (1H, t), 6.75-7.06 (4H, m), 7.16-7.31 (1H, m), 7.51 (1H, br s), 7.91 (1H, s), 8.17 (1H, d), 12.04 (1H, br s)。
實施例54
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-甲基-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
令(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-甲基-1,5-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例183；124.00 mg，0.236 mmol)、Pd
2
(dba)
3
(10.8 mg，0.0012 mmol)、tBuXPhos (10.0 mg，0.0236 mmol)及KOH (39.7 mg，0.708 mmol)於二噁烷/H
2
O (2.0 mL/0.4 mL)之混合物經脫氣和氮氣沖洗3次。令所生成之懸浮液於80℃下經加熱1.5小時。加入額外之Pd
2
(dba)
3
(10.8 mg，0.0012 mmol)、tBuXPhos (10.0 mg，0.0236 mmol)及KOH (26.5 mg，0.472 mmol)並令反應混合物再次經脫氣和氮氣沖洗3次且隨後於80℃下經加熱1.5小時。令該反應混合物經4M HCl (滴液)酸化至pH 6至7並於真空下經蒸發至乾燥狀態。將TFA (1.0 mL)加入至殘餘物之DCM (3 mL)溶液並令所生成之溶液於室溫下經攪拌2小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物溶解於MeOH/H
2
O (2.5 mL/0.5 mL)且經製備性HPLC (Xtimate C18；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；6至46%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(15 mg，18%)。LCMS
m/z
=363 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.67 (3H, d), 2.52 (3H, d), 5.37 (1H, q), 6.41 (1H, br s), 6.55-6.85 (3H, m), 6.93 (1H, s), 7.22 (1H, d), 7.54 (1H, br d), 7.65 (1H, d), 7.85 (1H, d), 8.08 (1H, d), 12.02 (1H, br s)。
實施例55
2-胺基-3-{(1S)-1-[6-(羥基甲基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令2M NaOH (0.1 mL，0.2 mmol)加入至3-{(1S)-1-[6-({[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}甲基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)喹啉-6-腈(製備例173；66 mg，0.1 mmol)之DMSO (0.3 mL)溶液並令混合物於30℃下經攪拌16小時。加入N
2
H
4 .
H
2
O (0.4 mL)，並於50℃下經加熱達48小時之前，於30℃下持續攪拌16小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (Xtimate C18；0.225% HCO
2
H/MeCN水溶液；5至25%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(7 mg，15%)。LCMS
m/z
=427 [M+Na]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.69 (3H, d), 4.53-4.66 (2H, m), 5.55 (1H, br t), 5.69 (1H, q), 6.52 (2H, br s), 6.60-6.69 (1H, m), 6.82 (1H, s), 7.22 (1H, br s), 7.35 (1H, d), 7.58 (1H, d), 7.71-7.79 (1H, m), 7.83-7.94 (4H, m), 8.14 (1H, s), 8.26 (1H, d)。
實施例56
6,8-二氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
於10℃下令N
2
H
4 .
H
2
O (196 mg，3.32 mmol)逐滴加入至2-(6,8-二氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例175；1030 mg，1.7 mmol)於無水MeOH (10 mL)之懸浮液並令反應混合物於30℃下經攪拌30分鐘。令該反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經管柱層析(EtOAc/石油醚=0至40%)純化以生成黃色固體。令該固體(470 mg)經MTBE (3 mL)稀釋並於10℃下經攪拌16小時。藉由過濾收集固體並令濾餅經MTBE (3 x 0.5 mL)沖洗以生成呈黃色固體之標的化合物(395 mg，60%)。LCMS
m/z
=398 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeOH-d
4
, 400 MHz) δ：1.76 (3H, d), 3.93-3.99 (3H, m), 5.65 (1H, q), 6.61 (1H, t), 6.85 (1H, d), 6.94-7.04 (3H, m), 7.69 (1H, d), 7.86 (1H, d), 7.93 (1H, d)。
實施例57
6-氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
依循實施例56之方法，自2-(6-氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例179)，得到呈黃色固體之標的化合物(411.4 mg，48%)。LCMS
m/z
=380 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.70 (3H, d), 3.88 (3H, s), 5.55 (1H, q), 6.23 (2H, br s), 6.62 (1H, d), 6.76 (1H, s), 6.89 (1H, d), 7.07-7.22 (2H, m), 7.38 (1H, dd), 7.78 (1H, d), 7.87 (1H, s), 8.18 (1H, d)。
實施例58
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇(以彼之醯胺互變異構物(S)-6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮之固體型式製備)
於室溫下令TMSCl (10300 mg，94.5 mmol, 12.0 mL)加入至6-氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(實施例57, 18600 mg，49.025 mmol)和NaI (13000 mg，86.730 mmol)於MeCN (300 mL)之微細懸浮液並令混合物於65℃下經攪拌3小時。令反應混合物於冰浴中冷卻，加入飽和硫代硫酸鈉(250 mL)且令混合物於0℃下經攪拌1.5小時並隨後經過濾。令藉由過濾移除之固體加入至H
2
O (pH 7；140 mL)。令懸浮液於40℃下經攪拌並使用1N氫氧化鈉(約34 mL)經2小時持續調整pH至7。一旦該pH穩定於7，令反應混合物經冷卻至室溫並藉由過濾移除固體且於真空乾燥爐中經乾燥以生成呈無色固體之標的化合物(7554 mg，72%)。LCMS
m/z
=366 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.71 (3H, d), 5.25 (1H, q), 6.26-6.62 (3H, m), 6.65 (1H, t), 6.79 (1H, s), 7.10 (1H, dd), 7.20 (1H, dt), 7.41 (1H, dd), 7.51 (1H, br d), 7.91 (1H, d), 8.17 (1H, d), 12.00 (1H, br s)。PXRD數據係與實施例58a之化合物所獲得之PXRD數據一致且證實標的化合物係以彼之醯胺互變異構物之固體型式製備。
實施例58a
(S)-6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮
製備
對含有四氫呋喃(77.4 L，9 L/kg)和2.8M氫氧化鉀水溶液(49.2 kg，6.0當量，120.5 mol)之反應器(200 L)於25℃下經氮氣噴氣19分鐘。載入(3-{(1
S
)-1-[6-溴-3-(1
H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-胺(製備例189；8.60 kg，1.0當量，20.1 mol)並令該反應器壁經四氫呋喃(4.3 L，0.5 L/kg)輕洗。令所生成之二相混合物經46分鐘被加熱至45℃。載入t-BuXPhos (172 g，0.02當量，0.40 mol)並令反應混合物經靜置5分鐘。載入三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(184 g，0.01當量，0.20 mol)並令該反應器壁經四氫呋喃(4.3 L，0.5 L/kg)輕洗。令混合物經18分鐘被加熱至60℃，經靜置4小時且經冷卻至45℃。該混合物之分析顯示反應完全。令該混合物經1小時15分鐘進一步冷卻至5℃並載入6M氫氯酸水溶液(18.6 kg，5.2當量，104.4 mol)以使該鹼性混合物中和且同時維持批次溫度低於15℃。於該載入完成後，令該混合物回溫至25℃。隨後經10分鐘載入1M磷酸鈉水溶性緩衝液(8.6 L，1 L/kg)並令混合物經靜置10分鐘。此時，水層之pH係7.5。令相層分離並於真空下令有機層經蒸餾至約26 L (3 L/kg)。載入新製之四氫呋喃(60.2 L，7 L/kg)並令溶液再經蒸餾至約26 L (3 L/kg)。令該過程重複2次並於最終蒸餾後載入新製之四氫呋喃(17.2 L，2 L/kg)。調節批次溫度至20℃。此時，殘餘之水含量係0.29%。令該混合物於吸濾器中經通過矽藻土(2 kg)墊過濾以除去自該溶液沉澱之鹽和鈀黑。令該反應器和吸濾器經四氫呋喃(17.2 L，2 L/kg)沖洗並令沖洗液與濾液結合。令該反應器和吸濾器再經四氫呋喃(51.6 L，6 L/kg)沖洗並收集沖洗液於3個分開之分級液。令含有所欲之產物的主要濾液和多個分級液結合於該反應器(200 L)並使用四氫呋喃(2 L)輕洗容器且載入該反應器。載入超純Si-Thiol矽膠(2.92 kg，40重量%)。令混合物於25℃和攪動下靜置23小時35分鐘並於吸濾器中經通過矽藻土(2 kg)墊過濾。令該反應器和吸濾器經2:1 v/v四氫呋喃/乙醇混合物沖洗(8 L x 4 + 11 L)並於各別容器中收集每一沖洗液。令含有所欲之產物的主要濾液和多個分級液結合於該反應器。令每個容器經2:1 v/v四氫呋喃/乙醇混合物(2 L)輕洗並令輕洗液載入該反應器。令結合之溶液經蒸餾至約17 L (2 L/kg)並載入乙醇(51.6 L，6 L/kg)。此時，形成韌性漿泥。令該漿泥經蒸餾至約17 L (2 L/kg)並載入乙醇(43.0 L，5 L/kg)。調節批次溫度至25℃。此時，殘餘之四氫呋喃含量係0.406重量/重量%。令混合物經加熱至70℃，經靜置1小時31分鐘，經1小時9分鐘冷卻至25℃且經靜置30分鐘。令該混合物進一步經42分鐘冷卻至0℃且經靜置30分鐘。令漿泥經通過吸濾器過濾並令該反應器和濾餅經冷乙醇(8.6 L，1 L/kg)沖洗。令該濾餅經氮氣吹拂達8小時39分鐘。將該濾餅轉移至盤式乾燥器並於45℃和真空下經乾燥12小時14分鐘以生成呈白色固體之標的化合物(6.266 kg，85.4%)。
藉由相同方法產製另一批次以生成呈白色固體之標的化合物(6.236 kg，85.1%)。
經由Si-Thiol矽膠純化
對自前述步驟得到之6-{(1
S
)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1
H
-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮(12.48 kg，1.0當量，34.2 mol)的四氫呋喃(93.6 L，7.5 L/kg)溶液載入超純Si-Thiol矽膠(4.99 kg，40重量%)。令反應器壁經四氫呋喃(6.2 L，0.5 L/kg)輕洗。令混合物經50分鐘被加熱至50℃，經靜置12小時17分鐘且經43分鐘冷卻至25℃。令漿泥於吸濾器中經通過矽藻土(1 kg)墊過濾。令該反應器和吸濾器經2:1 v/v四氫呋喃/乙醇混合物沖洗(8 L x 4 + 21.6 L)並於各別容器中收集每一沖洗液。令含有所欲之產物的主要濾液和多個分級液結合於該反應器。令每個容器經2:1 v/v四氫呋喃/乙醇混合物(2 L)輕洗並令輕洗液載入該反應器。令結合之溶液經蒸餾至約37 L (3 L/kg)並載入乙醇(87.4 L，7 L/kg)。此時，形成韌性漿泥。令該漿泥經蒸餾至約37 L (3 L/kg)並載入乙醇(87.4 L，7 L/kg)。令該蒸餾/載入過程重複1次。調節批次溫度至25℃。此時，殘餘之四氫呋喃含量係0.081重量/重量%。令混合物經加熱至70℃，經靜置1小時2分鐘，經1小時13分鐘冷卻至25℃且經靜置31分鐘。抽取該漿泥之樣品以進行如下述標題為“PXRD分析”乙節所描述之PXRD固體形式分析。令該混合物進一步經44分鐘冷卻至0℃且經靜置30分鐘。令漿泥經通過吸濾器過濾並令該反應器和濾餅經冷乙醇(25.0 L，2 L/kg)沖洗。令該濾餅經氮氣吹拂達1小時8分鐘。將該濾餅轉移至盤式乾燥器並於50℃和真空下經乾燥40小時7分鐘以生成呈白色固體之標的化合物(11.624 kg，93.1%)。所得之PXRD數據係與該漿泥樣品直接經下述分析所報告之PXRD數據一致。
PXRD分析
使用配備Cu輻射源之Bruker AXS D8 Endeavor繞射儀對前述步驟之經抽取供固體形式分析的標的化合物之樣品進行PXRD分析。設定發散狹縫為11 mm固定光照。藉由LYNXEYE偵測器(其中PSD開口設為2.949°)偵測繞射輻射。X射線管之電壓和電流強度分別設為40 kV和40 mA。藉由θ-θ測角儀，於3.0至40.0° 2θ之Cu波長，使用每步驟大小0.016°和每步驟時間0.3秒，收集數據。
令漿泥樣品經離心並令經分離之濾液置於矽低背景小草皮樣品皿且於數據收集期間經旋轉。使用EVA繞射
+
軟體分析數據。小心地檢查經人工實施之峰選擇以確保業已抓取所有低於30° 2θ之峰並業已精確指定所有峰之位置。對此數據之峰位置的典型誤差係±0.2° 2θ (USP-941)。因為多種不同之因素，與此測定有關之小誤差可能發生，該等因素包括(a)樣品製備(例如樣品高度)、(b)儀器特性、(c)儀器校正、(d)操作員輸入(例如於峰位置之測定)及(e)物質本性(例如較佳之位向和透明效果)。標的化合物之晶形(型1)的PXRD輪廓係示於圖1。對應之峰列係示於表1。
經診斷認為晶形1之PXRD峰係經*標記。
本發明之一實施態樣提供標的化合物之晶形1，其於7.9°±0.2° 2θ、8.7°±0.2° 2θ、17.4°±0.2° 2θ、18.4°±0.2° 2θ及20.4°±0.2° 2θ具有PXRD峰。
本發明之另一實施態樣提供標的化合物之晶形1，其具有1、2、3或4個PXRD峰，該(等) PXRD峰係選自位於7.9°±0.2° 2θ、8.7°±0.2° 2θ、17.4°±0.2° 2θ、18.4°±0.2° 2θ及20.4°±0.2° 2θ之PXRD峰。
本發明之另一實施態樣提供標的化合物之晶形1，其具有位於7.9°±0.2° 2θ和8.7°±0.2° 2θ之PXRD峰。
本發明之另一實施態樣提供標的化合物之晶形1，其具有位於7.9°±0.2° 2θ、8.7°±0.2° 2θ及17.4°±0.2° 2θ之PXRD峰。
本發明之另一實施態樣提供標的化合物之晶形1，其具有位於7.9°±0.2° 2θ、8.7°±0.2° 2θ、17.4°±0.2° 2θ及18.4°±0.2° 2θ之PXRD峰。
本發明之另一實施態樣提供標的化合物之晶形1，其具有位於7.9°±0.2° 2θ、8.7°±0.2° 2θ、17.4°±0.2° 2θ及20.4°±0.2° 2θ之PXRD峰。
實施例58b
(S)-6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮
單晶溶液
依循實施例58a之方法，於降低規模下，分離呈白色結晶狀固體之標的化合物(4.577 g，100質量%，12.53 mmol，91.5%產率，批號711743-532-12)。
於室溫下使用Bruker D8 Venture繞射儀實施單晶數據收集。數據收集係由ω和φ掃瞄組成。使用SHELX套裝軟體，於單斜類型空間基團P21，藉由內部定向解析結構。藉由全方陣最小平方法依序確認結構。使用異向性位移參數發現並確認所有非氫之原子。最終R指數係2.9%。最終差分傅立葉(Fourier)顯示無失蹤或誤置的電子密度。表2含有相關之結構數據。
經由此解析確認標的化合物之絕對構形(S)和互變異構狀態。該解析之分子之一的不對稱性單位之ORTEP圖解係示於圖2。該單晶結構之模擬的PXRD圖案之峰位置列係示於表3。
對於自單晶結構測定所得之標的化合物的型1之模擬的PXRD圖案，表1所示之數據與表3所示之數據的比較顯示良好之峰關連性。與該模擬的圖案相比較，實驗數據(表1和圖1)之某些峰的解析缺失或喪失將被預期且可歸因於先前註記之PXRD實驗數據的固有誤差(即與該等因素(a)至(e)之一或多者有關之誤差)。亦應注意的是：該模擬的圖案之峰列的特徵為於相同峰位置(即22.2和24.5 °2θ)之2個峰的2個實例。此係經註記之峰位置的精確性(至1個小數位置)之結果。
實施例59
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
於5℃下令HCl/MeOH (0.5 mL，4N)加入至6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例196；42 mg，0.089 mmol)之MeOH (2 mL)溶液。於加入額外之HCl/EtOAc (0.5 mL)之前，令反應混合物回溫至室溫並經攪拌1.5小時且於25℃下持續攪拌3小時。加入額外之HCl/EtOAc (0.3 mL)並令反應混合物於25℃下再經攪拌1.5小時。令該反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成亮褐色固體，令該亮褐色固體經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；36至56%)純化以生成白色固體，令該白色固體進一步經手性SFC (Chiralcel AD；0.1% NH
4
OH/EtOH；30%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(峰1)(4.95 mg，14%)。LCMS
m/z
=389 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeCN-d
3
, 400 MHz) δ：1.66 (3H, d), 5.55-5.65 (3H, m), 6.61 (1H, t), 7.05-7.15 (3H, m), 7.45 (1H, dd), 7.81 (2H, s), 7.86 (1H, dd), 8.00 (1H, d), 8.09 (1H, s), 11.32 (1H, br s)。
實施例60
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
依循實施例59之方法，藉由使用HPLC (DuraShell；0.225% HCO
2
H/MeCN水溶液；38至58%)和手性SFC (Chiralpak AD-H；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液；30%)，自7-氯-6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例197；50 mg，0.099 mmol)，得到呈白色固體之標的化合物(6.15 mg)。LCMS
m/z
=423 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeOH-d
4
, 400 MHz) δ：1.66 (3H, d), 4.62 (1H, br s), 5.60 (1H, q), 6.64 (1H, t), 7.17 (1H, s), 7.33 (1H, d), 7.51 (1H, d), 7.79 (1H, s), 7.90 (2H, br s), 8.07 (1H, d), 8.15 (1H, s)。
實施例61
2-胺基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
對2-胺基-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺(製備例217；600 mg，1.21 mmol)於DCM (5 mL)之黃色溶液加入TFA (3 mL)並令所生成之溶液於15℃下經攪拌約2小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態，分佈於NaHCO
3
(10 mL)且經DCM (3 x 20 mL)萃取。令結合之萃取液經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成殘餘物，其係經製備性HPLC (Xtimate C18；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；22至42%)純化。令殘餘物進一步經手性SFC (Chiral Tech IC；0.2%異丙醇胺之IPA溶液；50%)純化以生成呈灰白色固體之標的化合物(36.4 mg)。LCMS
m/z
=414 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeOH-d
4
, 400 MHz) δ：1.64 (3H, d), 5.60 (1H, q), 6.62 (1H, s), 7.20 (1H, s), 7.48 (1H, d), 7.76-8.16 (7H, m)。
實施例62
2-胺基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令2-胺基-3-[(1S)-1-{5-(1H-吡唑-1-基)-1-[(2S)-四氫-2H-哌喃-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}乙氧基]喹啉-6-羧醯胺(製備例221；批號00708245-1609-001；971 mg，1.947 mmol)之TFA (5 mL)溶液於25℃下經攪拌約2小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物分佈於DCM (50 mL)和NaHCO
3
水溶液(20 mL)。令水層經DCM (3 x 20 mL)萃取，經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經全自動快速層析(SiO
2
；MeOH/DCM=0至10%)純化並令所生成之固體自DCM/EtOAc (5 mL/25 mL)再結晶析出。隨後令該固體進一步經SFC (Phenomenex-Amylose-1；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液；40%)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(135 mg，16%)。LCMS
m/z
=415 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.69 (3H, d), 5.56 (1H, q), 6.40-6.79 (3H, m), 6.96 (1H, s), 7.23 (1H, br s), 7.36 (1H, d), 7.75 (1H, dd), 7.82-8.00 (3H, m), 8.24 (1H, s), 8.31 (1H, d), 8.42 (1H, s), 14.00 (1H, s)。
實施例63
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例223；240 mg，0.463 mmol)和TBAF (1.0 M THF溶液；3.0 mL，3.0 mmol)之黃色溶液於55℃下經攪拌1小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成黃色油，其係經製備性TLC (DCM：MeOH=15：1)純化以生成白色固體(72.4 mg)。自SFC分離(Chiralcel OJ；0.1% NH
4
OH之MeOH溶液；25%)得到呈白色固體之標的化合物(峰1)(9.9 mg)。LCMS
m/z
=389 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.69 (3H, d), 5.54 (1H, q), 6.64 (1H, s), 7.05-7.20 (3H, m), 7.42 (1H, q), 7.67 (1H, br s), 7.80-7.90 (2H, m), 8.54 (1H, s), 8.27 (1H, s)。
實施例64
6-氟-3-{(1S)-1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
對6-氟-3-{1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例225；130 mg，0.244 mmol)之二噁烷(5 mL)溶液加入HCl/二噁烷(4 mL，4M)。令所生成之溶液於25℃下經攪拌16小時並於真空下經蒸發至乾燥狀態。藉由加入飽和NaHCO
3
水溶液令殘餘物鹼化，經EtOAc (3 x 15 mL)萃取，經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成白色膠，其係經製備性TLC (DCM/MeOH/NH4OH, 10/1/0.5)純化以生成白色固體。經SFC (Chiralcel AD；0.1% NH
4
OH之MeOH溶液；30%)純化，得到呈白色固體之標的化合物(14.93 mg，20%)。LCMS
m/z
=403 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeOH-d
4
, 400 MHz) δ：1.64 (3H, d), 2.55 (3H, s), 5.49 (1H, q), 6.65 (1H, t), 7.00-7.15 (3H, m), 7.41 (1H, dd), 7.52 (1H, br s), 7.73 (1H, br s), 7.89 (1H, d), 8.03 (1H, d)。
實施例65
2-胺基-7-氟-3-{(1R)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
依循實施例64之方法，藉由使用SFC (Chiralcel OJ；0.1% NH
4
OH之MeOH溶液；35%)，自2-胺基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺(製備例216；50 mg，0.89 mmol)，得到呈白色固體之標的化合物(1.5 mg)。LCMS
m/z
=432 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeOH-d
4
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 5.62 (1H, q), 6.65 (1H, t), 7.16 (1H, d), 7.25 (1H, s), 7.80 (1H, s), 7.85-7.95 (2H, m), 7.99 (1H, d), 8.08 (1H, s), 8.15 (1H, s)。
實施例66
(S)-2-(6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸三級丁酯
令35% NH
2
NH
2 .
H
2
O (105 mg，1.15 mmol)加入至{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸三級丁酯(製備例207；145 mg，0.229 mmol)於CDCl
3
(0.4 mL)和MeOH (1.6 mL)之溶液並令所生成之濃白色沉澱物於室溫下經隔夜靜置。加入MeOH和EtOAc並藉由過濾移除固體。令濾液經EtOAc稀釋並經NaOH (1 x 5 mL)、H
2
O及鹽水沖洗。令先前經過濾之固體分佈於EtOAc和1N NaOH。令水層進一步經EtOAc萃取並令有機萃取液經結合，經乾燥(MgSO
4
)且經蒸發以生成呈灰白色固體之標的化合物(98 mg，85%)。LCMS
m/z
=503。
實施例67
[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸
令HCl (1 mL，4M二噁烷溶液)加入至(S)-2-(6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸三級丁酯(實施例66；98.3 mg，0.196 mmol)之DCM (1 mL)溶液。生成不溶之半固體，其係藉由加入MeOH (約0.5 mL)溶解。藉由KOH (1N MeOH溶液)調整pH至約12並令所生成之混合物於室溫下經攪拌。藉由1N HCl調整pH至7並令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成固體，令該固體與庚烷(2x)共沸。將該固體置入熱MeCN並經通過寅氏鹽®墊過濾。令濾液經蒸發至乾燥狀態並與庚烷(2x)共沸以生成灰白色固體，令該灰白色固體經HPLC (Waters Atlantis dC18；0.05% TFA之H
2
O溶液/0.05% TFA之MeCN溶液；95/5至5/95)純化。令所生成之固體經Et
2
O碾製，經激烈攪拌且隨後於未攪拌下經隔夜靜置。令該Et
2
O經傾析並令固體溶解於溫熱EtOAc (約3 mL)且隨後經通過耐隆玻料(0.2 μm)過濾。令濾液經緩慢冷卻並經部分蒸發以生成呈棕褐色固體之標的化合物(10 mg，11%)。LCMS
m/z
=447 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeOH-d
4
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 4.10 (1H, q), 5.52 (1H, q), 6.80 (1H, s), 7.02-7.38 (3H, m), 7.40 (1H, dd), 7.78-7.90 (3H, m), 8.00 (1H, s), 8.10 (1H, s)。
實施例68
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
對2-(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例202；288 mg，0.443 mmol)之MeOH (3 mL)溶液加入N
2
H
4 .
H
2
O (1500 mg，1.5 mL，31 mmol)並令混合物於室溫下經攪拌2小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態，經TFA (10 mL)處理且於室溫下經攪拌1小時。令反應混合物經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH
4
OH/MeCN水溶液；23至63%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(63.3 mg，37%)。LCMS
m/z
=390 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 5.51 (1H, q), 6.60 (1H, t), 6.75 (2H, br s), 7.01 (1H, s), 7.07 (1H, d), 7.50 (2H, br d), 7.71 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.23 (1H, s), 8.28 (1H, d), 8.39 (1H, s), 13.98 (1H, s)。
實施例69
[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸
對{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯(製備例198；949 mg，0.94 mmol)於MeOH (10 mL)和THF (5 mL)之溶液加入NaOH水溶液(2N，5 mL)並令所生成之混合物於室溫下經攪拌1.5小時。對該混合物加入N
2
H
4 .
H
2
O (4 mL)並於室溫下持續攪拌37小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物分佈於H
2
O (10 mL)和EtOAc (15 mL)。藉由1N HCl調整水層之pH至5至6並經EtOAc (15 mL x 3)萃取。令結合之有機萃取液於真空下經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH
4
OH水溶液/MeCN；15至35%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(258.5 mg，36%)。LCMS
m/z
=465 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.62 (3H, d), 5.13-5.00 (2H, m), 5.42 (1H, q), 6.61 (1H, t), 6.77 (2H, br s), 6.97 (1H, s), 7.01 (1H, dt), 7.16 (1H, ddd), 7.82 (1H, s), 7.88 (1H, d), 7.99 (1H, s), 8.11 (1H, d), 8.24 (1H, d)。
實施例70
2-[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙醯胺
令{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯(製備例201；295 mg，0.499 mmol)之NH
3
/MeOH (約8M，10 mL)溶液於鋼管中於80℃下經攪拌48小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經HPLC (DuraShell C18；0.05% NH
4
OH水溶液/MeCN；22至62%)純化並隨後經SFC (Chiralcel OD-H；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液；45%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(51 mg，23%)。LCMS
m/z
=446 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.64 (3H, d), 5.08 (2H, d), 5.43 (1H, d), 6.46 (2H, s), 6.63 (1H, t), 6.92 (1H, s), 7.08-7.20 (2H, m), 7.29 (1H, s), 7.38 (1H, br d), 7.61 (1H, s), 7.84 (1H, s), 7.90 (1H, d), 8.03 (1H, s), 8.15 (1H, d), 8.26 (1H, d)。
實施例71
[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基]乙酸
令{6-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸(製備例219；80 mg，0.15 mmol)之DCM/TFA (3 mL/2 mL)溶液於28℃下經攪拌1小時。令反應混合物於真空下經濃縮，加入THF (3 x 10 mL)且令溶液於真空下經蒸發至乾燥狀態以除去痕量之TFA。令殘餘物經製備性HPLC (Phenomenex Gemini-NX；0.05% NH
4
OH水溶液/MeCN；22至42%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(11.6 mg，18%)。LCMS
m/z
=447 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.59 (3H, s), 5.24 (2H, d), 5.43 (1H, q), 6.54 (2H, s), 6.62 (1H, t), 6.94 (1H, s), 7.09-7.18 (2H, m), 7.38 (1H, dd), 7.83 (1H, s), 7.85-7.91 (2H, m), 8.27 (1H, d), 8.47 (1H, s)。
實施例72
2-[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙醇
對{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯(製備例198；328 mg，0.555 mmol)之無水THF/MeOH (3 mL/3 mL)溶液加入NaOH (222 mg，5.55 mmol，2M水溶液)。令所生成之反應混合物於28℃下經攪拌1小時。對該反應混合物加入N
2
H
4 .
H
2
O (0.5 mL)並令所生成之反應混合物於約25℃下經攪拌16小時。加入額外之N
2
H
4 .
H
2
O (0.5 mL)並於40℃下持續攪拌22小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物分佈於H
2
O (10 mL)和EtOAc (15 mL)。令水溶液經1N HCl酸化至pH 4至5並隨後經EtOAc (3 x 15 mL)萃取，經乾燥(Na
2
SO
4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成灰白色固體(143 mg)。於冷卻下加入THF以生成冰冷之THF溶液並對該THF溶液加入BH
3
SMe
2
(0.308 mL，3.08 mmol)。於加入額外之BH
3
SMe
2
(0.5 mL，5 mmol)之前令所生成之反應混合物於室溫下經攪拌約1.5小時，並隨後於室溫下經隔夜(約16小時)持續攪拌。緩慢加入MeOH至該混合物並隨後於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經管柱層析(4 g矽膠管柱；EtOAc/石油醚=50%/100%)部分純化以生成殘餘物，令該殘餘物進一步經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH
4
OH水溶液/MeCN；39至69%)和SFC (Chiralcel-OD；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液；30%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(15 mg，6%)。LCMS
m/z
=451 [M+H]
+
。
1
H NMR (MeOH-d
4
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 3.93 (2H, t), 4.50 (2H, t), 5.56 (1H, q), 6.61 (1H, t), 6.93-7.04 (2H, m), 7.16 (1H, d), 7.83 (1H, s), 7.87 (1H, d), 7.91 (1H, s), 8.01 (1H, d), 8.11 (1H, d)。
實施例73
2-[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙醇
令(6-氟-3-{(1S)-1-[1-(2-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例218；79 mg，0.15 mmol)之DCM/TFA (3 mL/2 mL)溶液於室溫下經攪拌1.5小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態，與THF (3 x 5 mL)共沸且令殘餘物經製備性HPLC (Durashell；0.05% NH
4
OH水溶液/MeCN；35至65%)純化。令所生成之產物與自該胺甲酸三級丁酯(製備例218；155 mg，0.29 mmol)之第2次合成所得之產物組合並經SFC (Chiralcel-OD；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液；30%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(30 mg)。LCMS
m/z
= 433 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.67 (3H, d), 3.80 (2H, br s), 4.06 (1H, br s), 4.41-4.51 (2H, m), 4.86 (1H, br s), 5.46 (1H, q), 6.63 (1H, t), 7.01 (2H, s), 7.16-7.25 (2H, m), 7.44 (br dd), 7.83 (1H, s), 7.90 (1H, d), 8.05 (1H, s), 8.14 (1H, d), 8.25 (1H, d)。
實施例74
2-胺基-3-{(1S)-1-[1-(2-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
於室溫(15℃)下對2-胺基-3-{1-[1-(2-{[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺(製備例215；2400 mg，4.198 mmol)之無水DCM (50 mL)溶液加入TFA (5 mL)並令混合物於室溫下經攪拌5小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並藉由加入飽和NaHCO
3
水溶液使殘餘物經鹼化至pH 9。令所生成之懸浮液經攪拌10分鐘，經DCM/MeOH (50/1，200 mL)稀釋，先後經H
2
O (10 mL)和鹽水(10 mL)沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)且隨後於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經SFC (Chiralcel-OJ；0.1% NH
4
OH之EtOH溶液；40%)純化以生成呈亮黃色固體之標的化合物(峰2；650 mg，33%)。LCMS
m/z
=480 [M+Na]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.63 (3H, d), 3.79 (2H, br s), 4.39-4.50 (2H, m), 4.86 (1H, br s), 5.48 (1H, d), 6.65 (1H, t), 6.81 (2H, br s), 7.02 (1H, s), 7.23 (1H, br s), 7.36 (1H, d), 7.76 (1H, dd), 7.84 (1H, s), 7.88 (2H, br d), 7.92 (1H, d), 8.03 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.25 (1H, d)。
實施例75
7-甲基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-1,6-萘啶-2-胺
令(7-甲基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-1,6-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例205；90 mg，0.15 mmol)之DCM/TFA (1 mL/1 mL)溶液於室溫下經攪拌1小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell C18；0.05% NH
4
OH水溶液/MeCN；10至50%)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(10 mg，18%)。LCMS
m/z
=387 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.71 (3H, d), 2.40-2.47 (3H, m), 5.52-5.63 (1H, m), 6.56-6.64 (1H, m), 6.91 (2H, s), 7.05 (1H, s), 7.88 (1H, d), 8.25 (1H, s), 8.30 (1H, d), 8.40 (1H, s), 8.47 (1H, s), 14.01 (1H, s)。
實施例76
2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
依循實施例75之方法，自2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺(製備例222；95.7 mg，0.17 mmol)，製備呈白色固體之標的化合物(13.49 mg，18%)。LCMS
m/z
=433 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 5.51 (1H, q), 6.60 (1H, t), 6.75 (2H, br s), 7.01 (1H, s), 7.07 (1H, d), 7.50 (2H, br d), 7.71 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.23 (1H, s), 8.28 (1H, d), 8.39 (1H, s), 13.98 (1H, s)。
實施例76a
2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺(製備例222；1800 mg，3.2 mmol)之TFA (5 mL)溶液於室溫下經攪拌1小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經全自動快速層析(矽膠；DCM/MeOH=100/0至20/1)純化以生成呈黃色固體之部分純化產物(1100 mg)。令該固體溶解於二噁烷(40 mL)和NH
4
OH (10 mL)並令黃色溶液於20℃下經攪拌2小時。令該黃色溶液經濃縮並經製備性HPLC (DAICEL Chiralpak AS；0.1% NH
4
OH/EtOH；40%)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(475 mg，34%)。
將該固體置入小瓶(8打蘭)內之EtOH (5 mL)並經加熱至65℃達30分鐘。令混合物經冷卻至室溫並令漿泥經攪拌60小時。令該混合物隨後經過濾，經乙醇(2 mL)沖洗且於真空下經乾燥1小時。收集固體並令該固體進一步於高真空和加熱至55℃下經乾燥16小時且隨後於高真空且未經加熱下靜置3天以生成呈結晶狀固體之標的化合物，其係隨後經PXRD分析。
使用配備Cu輻射源之Bruker AXS D8 Endeavor繞射儀進行PXRD分析。設定發散狹縫為11 mm持續光照。藉由PSD-Lynx Eye偵測器(其中該偵測器PSD開口設為2.949°)偵測繞射輻射。X射線管之電壓和電流強度分別設為40 kV和40 mA。藉由θ-θ測角儀，於3.0至40.0° 2θ之Cu波長(CuKᾱ λ=1.5418 Å)，使用步驟大小0.016°和步驟時間0.3秒，收集數據。使用0.012 mm厚度之鎳Kβ濾器。抗散射螢幕設定為自動模式。藉由置於矽低背景樣品皿以製備樣品且於數據收集期間經旋轉。使用Bruker DIFFRAC
+
軟體收集數據且藉由EVA繞射
+
軟體進行分析。
標的化合物之晶形(型1)的PXRD輪廓係示於圖3。
實施例77
2-[6-{(1S)-1-[(2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙醇
於10℃下令TFA (1 mL)加入至(3-{(1S)-1-[1-(2-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例220；114 mg，0.215 mmol)之DCM (2 mL)溶液並經攪拌1小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH
4
OH水溶液/MeCN；23至43%)純化以生成標的化合物(7.8 mg，43%)。LCMS
m/z
= 431 [M+H]
+
。
1
H NMR (DMSO-d
6
, 400 MHz) δ：1.80 (3H, d), 2.53 (3H, s), 4.02 (2H, dt), 4.64-4.70 (2H, m), 5.82 (1H, q), 6.59 (1H, t), 7.19 (2H, d), 7.86 (1H, d), 8.00 (1H, d), 8.19 (1H, s), 8.53 (1H, s)。
實施例78
(S)-6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-
d 4
)-5-(1
H
-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
於氮氣下對3頸燒瓶(250 mL)載入(3-(1-(6-溴-3-(1
H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙氧基-1,2,2,2-
d 4
)-6-氟喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例227；2.8 g，5.2 mmol)於1,4-二噁烷(50 mL)和水(25 mL)之懸浮液。對此懸浮液加入氫氧化鉀(879 mg，15.7 mmol)、二-三級丁基(2',4',6'-三異丙基-[1,1'-聯苯基]-2-基)磷烷(222 mg，522.0 µmol)及Pd
2
(dba)
3
(239 mg，261.0 µmol)。令混合物於90℃下經隔夜加熱以生成澄清暗紅色溶液。經冷卻後，令該混合物於減壓下經濃縮以生成伴有紅色固體之褐色水懸浮液。對此混合物加入飽和NH
4
Cl
(aq)
(50 mL)以中和該鹼。於真空下除去有機溶劑。令所生成之水層溶解於DCM (300 mL)和EtOH (65 mL)。令有機層經分離並令水層經DCM (100 mL)/EtOH (20 mL)萃取2次。令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經部分濃縮，此時於溶液中生成沉澱物。藉由過濾分離此沉澱物並經EtOH (3 × 5 mL)沖洗。令殘餘物於減壓下經乾燥直至達一定重量以生成呈灰白色固體之6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-
d4
)-5-(1
H
-吡唑-1-基)吡啶-2-醇(1.25 g，64.8%)。LCMS m/z=370.0 [M+H]
+
。
1
H NMR (300 MHz, CDCl
3
) δ：6.50 (d, 1H), 6.60-6.55 (M，1H), 7.20-7.05 (M，3H), 7.30-7.35 (M，3H), 7.42 (d, 1H), 7.45-7.55 (M，1H), 7.65 (s, 1H), 7.82 (s, 1H)。
藉由製備性SFC (手性管柱)分離標的化合物。
實施例79
(S)-3-(1-((2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d
4
)-4-(1
H
-吡唑-1-基)苯甲酸
於20℃下經15分鐘對3-(1-((2-(1,3-二側氧基異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d4)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例229；1.35 g，2.42 mmol)於MeOH (15 mL)和THF (10 mL)的混合溶劑之攪拌溶液逐滴加入NaOH (966.76 mg，24.17 mmol, 10當量)之H
2
O (15 mL)溶液。令混合物之內部溫度升至25℃。經5小時後，加入NH
2
NH
2 .
H
2
O (3.63 g，72.53 mmol, 3.53 mL)並隨後令混合物經加熱至30℃。經16小時後，令該混合物經過濾並令濾液經1N HCl酸化至約pH 6。令沉澱物經過濾並令濾餅經MeOH (2 x 5 mL)輕洗。令該濾餅懸浮於蒸餾水(20 mL)並經冷凍乾燥以生成呈白色固體之3-(1-((2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d
4
)-4-(1
H
-吡唑-1-基)苯甲酸(518 mg，50.5%)。LCMS m/z 414.8 [M+H]
+
。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：6.67 (s, 1H), 6.71 (t, 1H), 6.94-6.82 (M，3H), 7.21-7.13 (M，1H), 7.58 (d, 1H), 8.00-7.95 (M，2H), 8.26 (d, 1H), 8.41 (d, 1H)。
藉由製備性SFC (手性管柱)分離標的化合物。
實施例80
(
S
)-3-(3-(1-((2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-4-(1
H
-吡唑-1-基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮
步驟1
於室溫下對(S)-3-(1-((2-(1,3-二側氧基異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-4-(1
H
-吡唑-1-基)苄腈(製備例230；940 mg，1.80 mmol)於無水MeOH (8 mL)和THF (8 mL)之溶液加入NH
2
OH
.
HCl (188 mg，2.70 mmol)和Et
3
N (547 mg，5.41 mmol)並令反應混合物於80℃下經攪拌16小時。經冷卻至室溫後，令該反應混合物於真空下經濃縮以得到呈黃色固體的所欲之羥基苯甲脒(756 mg)，其未經進一步純化而用於下一個步驟。LCMS
m/z
424.8 [M+1]
+
。
步驟2
對得自步驟1的羥基苯甲脒(756 mg)之1,4-二噁烷(16 mL)溶液加入CDI (322 mg，1.98 mmol)。令混合物經加熱至100℃達16小時。經冷卻至室溫後，令反應混合物於真空下經濃縮。令殘餘物經急速層析(矽膠)(經DCM：MeOH=100：0至75：25梯度溶析)純化2次以生成黃色固體(540 mg)。令該黃色固體進一步經SFC (Daicel Chiralpak AD；250 mm x 30 mm x 10 µm；等強度CO
2
：EtOH (0.1% NH
4
OH), 75：25)純化以生成呈白色固體之標的化合物(240 mg，30%)。LCMS
m/z
450.9 [M+1]
+
。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：1.68 (d, 3H), 5.78 (q, 1H), 6.70 (偽t, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.80 (br s, 2H), 6.97-6.93 (M，1H), 7.21-7.15 (M，1H), 7.64 (d, 1H), 7.85 (dd, 1H), 7.97 (d, 1H), 8.19 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 13.08 (br s, 1H)。
製備例1
1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
對1-(5-溴-2-氟苯基)乙酮(1100 g，5.07 mol)和1H-吡唑(414 g，6.08 mol)之DMF (7000 mL)溶液加入K
2
CO
3
(2099 g，15.21 mol)並令所生成之褐色懸浮液於110℃下經攪拌24小時。令混合物經過濾並令濾液經EtOAc (10 L)和H
2
O (4 L)稀釋。令有機層經分離並經H
2
O (3 x 3 L)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令殘餘物自石油醚：EtOAc (5：1)再結晶析出，令濾餅經石油醚：EtOAc (100 mL，5：1)沖洗且經乾燥以生成呈固體之標的化合物(800 g，59%)。
1
H NMR (400 MHz, MeOD_d
4
) δ：1.98 (s, 3H), 6.56-6.60 (M，1H), 7.49 (d, 1H), 7.71-7.74 (M，2H), 7.79 (dd, 1H), 8.07 (d, 1H)。
製備例2
3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
令1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例1；350 g，1.32 mol)、DPPP (45 g，0.11 mol)、Pd(OAc)
2
(23.7 g，0.11 mol)及Et
3
N (307 g，3.04 mol)於MeOH：DMF (1894 mL：494 mL)之混合物於85℃和CO氛圍(50 psi)下經攪拌20小時。令經冷卻之混合物經過濾並令濾液於真空和減壓下經濃縮。令殘餘物懸浮於EtOAc (5000 mL)，令混合物經過濾且令濾液經H
2
O (2 x 1000 mL)沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)且經過濾。令有機溶液於真空下經濃縮至300 mL並經冷卻至0℃以生成固體。令懸浮液經過濾並令固體於真空下經乾燥以生成標的化合物(260 g，80%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：2.05 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 6.65 (d, 1H), 7.82-7.84 (M，2H), 8.02 (d, 1H), 8.16 (d, 1H), 8.48 (d, 1H)。
製備例3
1-[5-羥基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
先後將H
2
O (10 mL)和1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例1；2000 mg，7.54 mmol)之二噁烷(15 mL)溶液加入至KOH (974 mg，17.4 mmol)、Pd
2
(dba)
3
(345 mg，0.38 mmol)及tBuXPhos (320 mg，0.75 mmol)於鋼管內之混合物。令混合物經抽真空並於80℃和氬氣氛圍下經攪拌16小時。令混合物經冷卻至室溫，經3M HCl沖洗以達到pH 4至5且隨後經EtOAc (3 x 30 mL)萃取，並令結合之有機溶液經鹽水(50 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經蒸發。令所生成之粗產物經管柱層析(經EtOAc：石油醚=0：100至60：40溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(40%)。LCMS m/z=203 [M+H]
+
。
製備例4
[3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基]乙酸三級丁酯
於室溫和氮氣下令溴乙酸三級丁酯(1570 mg，8.04 mmol) 加入至1-[5-羥基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例3；650 mg，3.21 mmol)和Cs
2
CO
3
(3140 mg，9.64 mmol)於MeCN (30 mL)之混合物並令反應混合物經攪拌16小時。令該反應混合物經H
2
O (60 mL)稀釋，經EtOAc (2 x 60 mL)萃取且令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令殘餘物經管柱層析(經EtOAc：石油醚=0：100至30：70溶析)純化以生成呈亮黃色油之標的化合物(700 mg，68.8%)。LCMS m/z=317 [M+H]
+
。
製備例5
2-[3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酸甲酯
令Ir[dF(CF
3
)ppy]
2
(dtbpy)PF
6
(25.4 mg，0.023 mmol)、1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例1；300 mg，1.13 mmol)、單氯乙酸甲酯(184 mg，1.7 mmol)、三(三乙基矽基)矽烷(848 mg，2.26 mmol)及2,6-二甲基吡啶(364 mg，3.39 mmol)之混合物於密封小瓶中經氮氣吹洗並隨後加入DME (1.5 mL)。令NiCl
2
•glyme (12.4 mg，0.057 mmol)和4,4’-二-三級丁基-2,2’-聯吡啶(15.2 mg，0.057 mmol)之DME (1 mL)溶液經氮氣吹洗並隨後加入至該反應小瓶且令混合物於藍Kessil LED燈之照射下經攪拌16小時。令反應物藉由暴露於空氣中驟冷並於真空下經濃縮。令殘餘物分佈於鹽水和EtOAc，令相層分離且令有機相經EtOAc (2 x 50 mL)萃取。令結合之有機層經乾燥(Na
2
SO
4
)，經過濾且經減壓下蒸發。令粗褐色油經急速矽膠層析(經EtOAc：庚烷=0：100至50：50溶析)純化以生成標的化合物(165 mg，56%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：2.00 (s, 3H), 3.74 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 6.51-6.53 (M, 1H), 7.42-7.77 (M, 5H)。
製備例6
3-[3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]丙酸三級丁酯
依循製備例5描述之方法，除了使用三(三甲基矽基)矽烷以替代三(三乙基矽基)矽烷之外，自1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例1)和3-溴丙酸三級丁酯，製備標的化合物(459 mg，77%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.44 (s, 9H), 1.97 (s, 3H), 2.57-2.61 (M, 2H), 2.97-3.01 (M, 2H), 6.49-6.50 (M, 1H), 7.36-7.41 (M, 3H), 7.72-7.73 (M, 2H)。
製備例7
[3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]胺甲酸三級丁酯
對1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例1；1000 mg，3.77 mmol)、胺甲酸三級丁酯(663 mg，5.66 mmol)、Xantphos (437 mg，0.75 mmol)及Cs
2
CO
3
(2460 mg，7.54 mmol)於無水1,4-二噁烷(40 mL)之懸浮液加入Pd(OAc)
2
(84.7 mg，0.38 mmol)，令混合物經脫氣且隨後於100℃和氮氣下經加熱4小時。令結合之反應混合物經H
2
O (20 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 30 mL)萃取。令結合之有機萃取液經鹽水(10 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經減壓下濃縮。令粗產物經矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至25：75溶析)純化以生成呈灰色固體之標的化合物(446 mg，39.2%)。LCMS m/z=302 [M+H]
+
。
製備例8
5-氯-4-氟-2-聯胺基苯甲酸鹽酸鹽
令亞硝酸鈉(57.3 g，831 mmol)之H
2
O (500 mL)溶液逐滴加入至2-胺基-5-氯-4-氟苯甲酸(105 g，554 mmol)於12M HCl (420 mL)和H
2
O (140 mL)中的經冰冷卻之混合物以維持溫度低於5℃並隨後令反應混合物經攪拌30分鐘。逐滴加入氯化錫(II)二水合物(1.79 g，7.91 mmol)之37% HCl水溶液(140 mL)以維持溫度低於5℃並令所生成之懸浮液於室溫下經攪拌20小時。令懸浮液經過濾，令固體經冷H
2
O和Et
2
O沖洗且經乾燥以生成呈黃色固體之標的化合物(98.0 g，86.5%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：7.25 (d, 1H), 8.01 (d, 1H), 9.30 (br s, 1H)。
製備例9
5-溴-4-氟-2-聯胺基苯甲酸鹽酸鹽
依循製備例8描述之方法，自2-胺基-5-溴-4-氟苯甲酸製備呈固體之標的化合物(10.7 g，78%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：7.12 (d, 1H), 7.98-8.13 (M，1H), 9.05-9.53 (M，1H)。
製備例10
5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯
令1,1,3,3-四甲氧基丙烷(118 g，719 mmol)加入至5-氯-4-氟-2-聯胺基苯甲酸鹽酸鹽(製備例8；98.0 g，479 mmol)之EtOH (1000 mL)溶液並令反應混合物於100℃下經攪拌1小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經急速矽膠層析(經石油醚：EtOAc=0：100至80：20溶析)純化2次以生成呈黃色固體之標的化合物(44.0 g，34.2%)。LCMS m/z=269 [M+H]
+
。
製備例11
5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
令LiOH (4.22 g，100 mmol)分批加入至5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯(製備例10；13.5 g，50.25 mmol)之EtOH/THF/H
2
O (39 mL/60 mL/30 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令該混合物於真空下經濃縮以除去該有機溶劑，經於冰浴中冷卻且加入1N HCl以達到pH 3。令所生成之懸浮液經過濾，令固體經H
2
O沖洗，隨後經與甲苯共蒸發且經乾燥以生成呈灰白色固體之標的化合物(11.3 g，93.5%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：6.55 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.96 (d, 1H), 8.23 (s, 1H), 13.24 (br s, 1H)。
製備例12
5-溴-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
令5-溴-4-氟-2-聯胺基苯甲酸鹽酸鹽(製備例9；9.2 g，36.94 mmol)和1,1,3,3-四甲氧基丙烷(8.49 g，51.7 mmol)之AcOH (30 mL)溶液於80℃下經攪拌3小時並隨後於室溫下經攪拌48小時。令反應混合物小心地經飽和NaHCO
3
水溶液(400 x 3 mL)沖洗並令結合之水溶液經DCM (2 x 200 mL)沖洗。令結合之水層隨後經酸化至pH 4並經DCM (3 x 200 mL)萃取。令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥並經減壓下蒸發以生成呈淡黃色固體之標的化合物(8.5 g，80.7%)。LCMS m/z=285, 287 [M+H]
+
。
製備例13
5-氯-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
令DIPEA (7.0 g，72.07 mmol)加入至5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(製備例11；7.0 g，29.09 mmol)、N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(3.41 g，34.9 mmol)及HATU (16.6 g，43.6 mmol)之DMF (80 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令混合物倒入至EtOAc (300 mL)並經鹽水(3 x 160 mL)沖洗，令有機相置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮。令粗產物經急速矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至70：30溶析)純化以生成呈灰色固體之標的化合物(6.4 g，78%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：3.28 (s, 3H), 3.37 (s, 3H), 6.49 (s, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.81 (s, 1H)。
製備例14
5-溴-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
於室溫下對5-溴-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(製備例12；5.71 g，20.03 mmol)於DCM (32 mL)和DMF (32 mL)之溶液加入HOBt (3.03 g，22.4 mmol)、EDC
.
HCI (4.30 g，22.4 mmol)、N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(2.44 g，25.0 mmol)及DIPEA (4.36 mL，25.0 mmol)並令反應混合物經攪拌19小時。令反應混合物於真空下經濃縮，隨後經EtOAc (200 mL)稀釋且經H
2
O (100 mL)沖洗。令有機層經分離並令水相經EtOAc (2 x 80 mL)萃取。令結合之有機萃取液經H
2
O (80 mL)和鹽水(80 mL)沖洗並隨後經減壓下蒸發。令粗產物經矽膠管柱層析(經EtOAc：石油醚=0：100至50：50溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：3.24 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 6.46 (br s, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.79 (s, 1H)。
製備例15
1-[5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
令MeMgBr (3.4M 2-MeTHF溶液；60.9 mL，207 mmol)逐滴加入至5-氯-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺(製備例13；23.5 g，82.8 mmol)於THF (350 mL)的經冰冷卻之溶液，令反應混合物經攪拌10分鐘，隨後回溫至室溫且再經攪拌18小時。於減壓下且於未經加熱下除去THF並令殘餘物分佈於飽和NH
4
Cl溶液和EtOAc。令有機層經水和鹽水沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮至其體積之約1/3。令所生成之固體溶解於DCM並令溶液於真空下經濃縮至其體積之約1/3。令所生成之懸浮液經過濾，令固體經己烷和Et
2
O沖洗且經乾燥以生成標的化合物(13.23 g)。令濾液於減壓下經蒸發並令黃色固體經矽膠層析(Redisep® GOLD管柱；經己烷：EtOAc=100：0至50：50溶析)純化以生成額外之化合物(2.3 g)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：2.04 (s, 3H), 6.58 (s, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.65-7.78 (M，3H)。
製備例16
1-[5-溴-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
於-70℃下令MeMgBr (21.5 mL，64.5 mmol, 3.0M Et
2
O溶液)逐滴加入至5-溴-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺(製備例14；7.05 g，21.48 mmol)之THF (221 mL)溶液並令反應混合物於-70℃下經攪拌30分鐘，隨後回溫至室溫且經攪拌30分鐘。令反應物經冰冷1N HCl溶液(160 mL)驟冷並經EtOAc (300 mL)稀釋。令水層經EtOAc (2 x 100 mL)萃取並令結合之有機萃取液經減壓下蒸發。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至80：20溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(3.38 g，55.6%)。LCMS m/z=283 [M+H]
+
。
製備例17
3-乙醯基-4-溴-N,N-雙(4-甲氧基苄基)苯磺醯胺
於0℃下經10分鐘令雙(4-甲氧基苄基)胺(865 mg，3.36 mmol)加入至3-乙醯基-4-溴苯-1-磺醯氯(500 mg，1.68 mmol)和Et
3
N (340 mg，3.36 mmol)之DCM (5 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令該反應混合物經EtOAc (50 mL)稀釋，經HCl (1M，10 mL)驟冷且令相層分離。令有機相經飽和NaHCO
3(aq)
溶液(26 mL)沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)，經過濾和真空下濃縮以生成白色固體。令該固體經矽膠管柱層析(經EtOAc：庚烷溶析)純化以生成標的化合物(580 mg，67%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：2.52 (s, 3H), 3.74 (s, 6H), 4.20 (s, 4H), 6.72 (d, 4H), 6.94 (d, 4H), 7.54-7.62 (M，3H)。
製備例18
3-乙醯基-N,N-雙(4-甲氧基苄基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯磺醯胺
令3-乙醯基-4-溴-N,N-雙(4-甲氧基苄基)苯磺醯胺(製備例17；450 mg，0.87 mmol)、K
2
CO
3
(360 mg，2.60 mmol)、1H-吡唑(177 mg，2.60 mmol)、CuI (49.6 mg，2.60 mmol)及(R,R)-(-)-N,N’-二甲基-1,2-環己烷二胺(30.9 mg，2.60 mmol)於DMF (3 mL)之混合物於105℃和氮氣下經攪拌16小時。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮並令殘餘物分佈於DCM和NaHCO
3
水溶液且令相層分離。令水相經DCM (3 x 5 mL)萃取，令結合之有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發。令粗產物經矽膠管柱(經EtOAc：庚烷=0：100至50：50溶析)純化以生成標的化合物(305 mg，70%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：2.10 (s, 3H), 3.81 (s, 6H), 4.32 (s, 4H), 6.59 (s, 1H), 6.80 (d, 4H), 7.08 (d, 4H), 7.45 (d, 1H), 7.82-7.95 (M，4H)。
製備例19
1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇
對1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例1；20.0 g，75.44 mmol)於MeOH (200 mL)和THF (200 mL)之冰冷溶液分批加入NaBH
4
(3.43 g，90.5 mmol)。令反應混合物於0℃下經攪拌1小時並隨後於室溫下再經攪拌30分鐘。令混合物經HCl (1N，30 mL)和H
2
O (100 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 100 mL)萃取。令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至60：40溶析)純化以生成呈褐色油狀液體之標的化合物(17.76 g，88%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：1.14 (d, 3H), 4.73-4.84 (M，1H), 5.37 (d, 1H), 6.47-6.54 (M，1H), 7.28 (s, 1H), 7.57 (dd, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.84 (d, 1H), 8.03 (d, 1H)。
製備例20至23
依據製備例19描述之方法，藉由還原適當之乙酮，製備下表所示之醇。
實施例24至26
依據製備例19描述之方法，藉由還原適當之乙酮，製備下表所示之醇並隨後藉由SFC且使用所述之條件進行純化。
製備例27
3-[(1S)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
令3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例2；200 g，0.81 mol)和DCM (0.8 L)經攪拌20分鐘並經N
2
吹洗。於-50℃下經2小時令(-)-DIP-Cl (965 mL，1.64 mol)逐滴加入至反應混合物並隨後令該混合物於15℃下經攪拌。令該反應混合物於減壓下經濃縮並令殘餘物溶解於MTBE (4 L)。加入2,2'-亞胺基二-1-乙醇(350 g，3.30 mol)並令溶液於20℃下經攪拌3小時。令混合物經過濾，令濾液經蒸發且令粗生成物經矽膠管柱(經石油醚：EtOAc=90：10至80：20溶析)純化以生成粗產物。於40℃下令該粗產物溶解於MTBE (1 L)，加入正己烷(1.6 L)，令懸浮液於20℃下經攪拌12小時並隨後經過濾，令固體於30℃和真空下經乾燥以生成標的化合物(191 g，47.6%)。RT=3.274分鐘(AD-3 150 mm x 4.6 mm x 3 µm管柱；CO
2
：0.1% TFA之EtOH溶液=5：95至45：65；經7.5分鐘；2.5 mL/min)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.46 (d, 3H), 3.95 (s, 3H), 4.81 (q, 1H), 5.15 (br s, 1H), 6.53 (s, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.78 (s, 2H), 8.03 (d, 1H), 8.31 (s, 1H)。
其他方法
令3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例2；30 g，120 mmol)於DMSO (200 mL)之混合物經加熱至50℃以生成溶液並隨後經冷卻至室溫。令KRED101 (12 g)、ADH-101 (1 g)及NADP+ (500 mg)溶解於磷酸鉀緩衝液(500 mL；pH 7.5)並於35℃下加入至配備頂部攪拌之反應器(2 L)且經額外之緩衝液(250 mL)沖洗。加入IPA (50 mL)並隨後緩慢加入該酮/DMSO溶液且令反應混合物於35℃下經攪拌7小時。加入額外之ADH-101 (500 mg)和NADP+ (250 mg)之緩衝液(總計10 mL)並令反應混合物經攪拌14小時。再次加入額外之ADH-101 (500 mg)和NADP+ (250 mg)之緩衝液(總計10 mL)並令反應混合物經攪拌8小時。再次加入額外之ADH-101 (250 mg)和NADP+ (125 mg)並令反應混合物再經攪拌14小時。令EtOAc (500 mL)加入至經冷卻之反應混合物並令該混合物經攪拌30分鐘。將該反應器之內容物轉移至瓶(2 L)，加入寅氏鹽®並令混合物再經攪拌30分鐘。令該混合物經通過經水濕潤之寅氏鹽®過濾並經EtOAc (100 mL)沖洗。令MeOH (20 mL)加入至濾液，令相層分離並令有機層經鹽水(400 mL)沖洗且經乾燥(Na
2
SO
4
)。令10% (IPA/iPrOAc)(500 mL)加入至水相並令混合物經激烈攪拌且隨後再經通過經水濕潤之寅氏鹽®過濾。令MeOH (20 mL)加入至濾液，令相層分離並令有機層經鹽水(400 mL)沖洗且經乾燥(Na
2
SO
4
)。令結合之有機層經過濾，令濾液結合並於減壓下經濃縮且與庚烷共沸以生成粗產物(28 g)。令該粗產物與依據相同方法所製備之另一批粗產物(13.14 g)結合並令固體懸浮於MTBE (120 mL)。令懸浮液於回流下經加熱並令該熱混合物經過濾以除去不溶物。令濾液經冷卻至0℃，加入庚烷且令所生成之懸浮液經攪拌1小時並隨後回溫至室溫。令固體經過濾並於真空下經乾燥以生成呈白色固體之標的化合物(35.2 g)。LCMS m/z=269 [M+Na]
+
。
製備例28
3-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
令Pd(OAc)
2
(1870 mg，8.33 mmol)分批加入至1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇(製備例19；44.5 g，166.6 mmol)、Et
3
N (116 mL，833 mmol)及DPPP (6.87 g，16.7 mmol)之MeOH (500 mL)溶液並令反應混合物於80℃和CO (50 psi)下經攪拌48小時。令經冷卻之反應混合物經過濾且經減壓下蒸發。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至60：40溶析)純化以生成亮褐色液體(34.0 g，83%)。令某些產物經SFC (Chiralpak AD-H；250 mm x 30 mm 5µ管柱；經25% (0.1% NH
3
水溶液/EtOH)溶析；流速60 mL/min)純化以生成呈無色油之標的化合物(峰1)(454 mg，47.8%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：1.17 (d, 3H), 3.90 (s, 3H), 4.91-5.01 (M，1H), 5.40 (d, 1H), 6.53-6.58 (M，1H), 7.48 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.94 (dd, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.35 (d, 1H)。
製備例29
2-氟-5-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
依據製備例28描述之方法，自1-[5-溴-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇(製備例21)製備呈白色固體之標的化合物(2.0 g，64%)。令產物進一步經SFC (AY管柱(250 mm x 30 mm 10µ)；經20% (0.1% NH
3
水溶液/EtOH)溶析；流速50 mL/min)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(42.4%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.48 (d, 3H), 3.98 (s, 3H), 4.76-4.85 (M，1H), 5.06 (d, 1H), 6.55-6.59 (M，1H), 7.12 (d, 1H), 7.79-7.81 (M，2H), 8.23 (d, 1H)。
製備例30和31
3-(1-羥基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈和3-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈
令1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇(製備例19；1.8 g，6.7 mmol)、Zn(CN)
2
(2.37 g，20.2 mmol)及Pd(PPh
3
)
4
(779 mg，0.674 mmol)於無水DMF (15 mL)之混合物經N
2(g)
氣泡5分鐘。立即密封該管並經加熱至140℃達7小時。令H
2
O (20 mL)和EtOAc (40 mL)先後加入至經冷卻之混合物。令所生成之懸浮液經過濾，令濾液經EtOAc (3 x 30 mL)萃取並令結合之有機層經H
2
O (20 mL)和鹽水(20 mL)沖洗且隨後置於硫酸鈉上乾燥，經過濾和真空下濃縮以生成褐色油。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至30：70溶析)純化以生成呈無色油之3-(1-羥基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例30；1320 mg，92%)。令粗產物經SFC (Chiralpak AD-H管柱；經30% (0.1% NH
3
水溶液/EtOH)溶析)純化以生成呈無色油之3-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例31；335 mg，48%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：1.17 (d, 3H), 4.97-5.00 (M，1H), 5.47 (d, 1H), 6.58 (s, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.88 (d, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.18 (s, 1H)。
製備例32
2-氟-5-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈
令二噁烷(125 mL)和H
2
O (125 mL)加入至1-[5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇(製備例22；11.11 g，46.2 mmol)、K
4
[Fe(CN)
6
]•3H
2
O (11.7 g，27.7 mmol)、tBuXPhos-Pd Gen-3預觸媒(220 mg，0.28 mmol)及tBuXPhos (118 mg，0.277 mmol)之混合物並令該混合物於氮氣下經脫氣。令反應混合物於100℃下經加熱18小時並隨後加入額外之tBuXPhos-Pd Gen-3預觸媒(110 mg，0.14 mmol)和tBuXPhos (59 mg，0.139 mmol)。令混合物經脫氣並於100℃下再經加熱22小時。加入額外之K
4
[Fe(CN)
6
]•3H
2
O (11.7 g，27.7 mmol)、tBuXPhos-Pd Gen-3預觸媒(220 mg，0.28 mmol)及tBuXPhos (118 mg，0.277 mmol)並令混合物經脫氣且令該反應混合物於100℃下經攪拌24小時。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮，令水溶液經DCM稀釋，令所生成之懸浮液經過濾以移除固體且令相層分離。令有機相經鹽水沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經層析(Redisep GOLD矽膠管柱80 g；經己烷：EtOAc溶析)純化以生成呈亮黃色油之標的化合物(1.07 g)。令該油進一步經SFC (LUX Amylose-1；250 mm x 4.6 mm 5 µm管柱；經CO
2
：0.2% NH
4
+MeOH=5：95至40：60溶析8分鐘；3 mL/min)純化以生成標的化合物(490 mg，4.6%)。RT=3.781分鐘。
製備例33
1-[3-(1H-吡唑-1-基)-2-氰基吡啶
令Cs
2
CO
3
(26.7 g，82 mmol)加入至1H-吡唑(11.2 g，164 mmol)之DMF (250 mL)溶液並令混合物於室溫下經攪拌45分鐘。加入3-溴-2-氰基吡啶(10 g，55 mmol)、CuI (1.04 g，5.46 mmol)及(R,R)-(-)-N,N’-二甲基-1,2-環己烷二胺(0.466 g，3.28 mmol)並令反應混合物於130℃和氮氣下經攪拌12小時。令NH
3
水溶液(300 mL)加入至經冷卻之反應混合物並令該混合物經EtOAc (2 x 250 mL)萃取。令結合之有機層經鹽水(3 x 500 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且經過濾和真空下濃縮。令粗產物經急速矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至50：50溶析)純化以生成呈白色固體之所欲產物(8.6 g，92%)。LCMS m/z=171 [M+H]
+
。
製備例34
1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
令K
2
CO
3
(66.2 g，479 mmol)加入至1-(6-溴-3-氟-4-(三乙基矽基)吡啶-2-基)乙酮(WO 2016071211；103 g，160 mmol)和1H-吡唑(10.9 g，160 mmol)於無水MeCN (1300 mL)之懸浮液並令反應混合物於80℃下經攪拌16小時。令經冷卻之混合物經過濾，經MeCN (3 x 60 mL)沖洗且令結合之濾液經減壓下蒸發。令粗產物經急速矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至20：80溶析)純化以生成呈褐色油之標的化合物(14.8 g，34.8%)。LCMS m/z=268 [M+H]
+
。
製備例35
5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)-2-氰基吡啶
令3,5-二氟-2-氰基吡啶(21.59 g，0.154 mol)、1H-吡唑(10.5 g，0.154 mol)及K
2
CO
3
(53.2 g，0.385 mol)於MeCN (1000 mL)之混合物於20℃下經攪拌16小時。令反應混合物經過濾並令濾液於真空下經濃縮。令殘餘物經急速矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至50：50溶析)純化2次以生成呈白色固體之標的化合物(15.2 g，52.5%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：6.63 (dd, 1H), 7.87 (d, 1H), 8.09 (dd, 1H), 8.46 (d, 1H), 8.53 (d, 1H)。
製備例36
1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
令MeMgBr (3M Et
2
O溶液；49.9 mL，150 mmol)加入至1-[3-(1H-吡唑-1-基)-2-氰基吡啶(製備例33；8.50 g，49.95 mmol)於THF (250 mL)之攪拌溶液並令反應混合物於25℃下經攪拌16小時。令反應物經HCl水溶液驟冷並經EtOAc (2 x 20 mL)萃取。令結合之有機萃取液經飽和NaHCO
3
水溶液(200 mL)和鹽水(3 x 200 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成暗褐色油。令該油經矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至60：40溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(6.15 g，65.8%)。LCMS m/z=188 [M+H]
+
。
製備例37
6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯
於室溫下對1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例34；5.30 g，19.92 mmol)於MeOH (53 mL)之懸浮液加入DPPP (1640 mg，3.99 mmol)、Pd(OAc)
2
(447 mg，1.99 mmol)及Et
3
N (13.9 mL，99.6 mmol)。令混合物經氮氣脫氣並令該反應混合物於80℃和CO (50 psi)下經加熱68小時。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至100：0溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(3.7 g，75.4%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：2.52 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 6.64 (dd, 1H), 7.83 (d, 1H), 8.29 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 8.51 (d, 1H)。
製備例38
6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸
令LiOH (200 mg，8.35 mmol)加入至6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯(製備例37；700 mg，2.85 mmol)之THF/MeOH/H
2
O (6 mL/6 mL/6 mL)溶液並令反應混合物於20℃下經攪拌2小時。令反應混合物經額外之DCM/MeOH/H
2
O (50 mL/5 mL/50 mL)稀釋，藉由使用濃HCl調整pH至4且令相層分離。令水相經DCM/MeOH (5 x 50 mL/5 mL)萃取並令結合之有機相經過濾且經減壓下蒸發以生成呈亮黃色固體之標的化合物(660 mg，100%)。LCMS m/z=232 [M+H]
+
。
製備例39
6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧醯胺
令6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸(製備例38；750 mg，3.24 mmol)、HOBT (877 mg，6.49 mmol)、EDC
.
HCl (1.24 g，6.49 mmol)及Et
3
N (1.41 mL，9.73 mmol)於DMF (10 mL)之混合物於20℃下經攪拌0.5小時。加入NH
4
Cl (521 mg，9.73 mmol)並令反應混合物於20℃下經攪拌16小時。令反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經急速矽膠層析(經EtOAc：MeOH=30：70溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(470 mg，63%)。LCMS m/z=231 [M+H]
+
。
製備例40
1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
於0℃下令MeMgBr (213 mL，638 mmol, 3M Et
2
O溶液)逐滴加入至5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)-2-氰基吡啶(製備例35；30.0 g，159.4 mmol)於THF (1300 mL)之無色溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌3小時。令反應混合物倒入至冰內的1M HCl水溶液(360 mL)，令混合物經攪拌30分鐘且隨後經5M NaOH處理直至pH約7至8。令所生成之溶液經EtOAc (100 mL x 2)萃取並令結合之有機層經乾燥(Na
2
SO
4
)且經過濾和真空下濃縮。令橙色膠經管柱層析(矽膠；經石油醚：EtOAc=100：0至80：20溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(19.5 g，60%)。LCMS m/z=206 [M+H]
+
。
製備例41
1-[5-氟-1-氧負離子基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
令m-CPBA (66.9 g，330 mmol)加入至1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例40；27.05 g，131.83 mmol)之DCM (400 mL)溶液並令反應混合物於45℃下經攪拌64小時。令反應混合物經通過寅氏鹽®薄墊過濾並經DCM (100 mL)沖洗。令6M KOH水溶液(100 mL)加入至濾液並令溶液經攪拌20分鐘。令有機層經分離，經飽和Na
2
SO
3
水溶液(每次於室溫下經攪拌20分鐘；3 x 200 mL)沖洗且隨後於真空下經濃縮。令粗產物經管柱層析(120 g矽膠；經EtOAc：石油醚=15：85至100：0溶析)純化2次以生成呈黃色固體之標的化合物(14.48 g，50%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：3.14 (s, 3H), 6.51 (dd, 1H), 7.23 (dd, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.81 (d, 1H), 8.08 (dd, 1H)。
製備例42
1-[6-溴-5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
令1-[5-氟-1-氧負離子基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例41；13.1 g，59.23 mmol)之THF (300 mL)溶液於75℃下經加熱15分鐘直至得到溶液。加入分為3份之新製POBr
3
(34.0 g，118 mmol)並令反應混合物於75℃下經攪拌1小時。令經冷卻之混合物倒入至飽和Na
2
CO
3
溶液(500 mL)且經EtOAc (100 mL)稀釋。令相層分離，令水層經EtOAc (100 mL)萃取且令有機相於真空下經濃縮。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至25：75溶析)純化2次以生成呈白色固體之標的化合物(15.4%)。LCMS m/z=284 [M+H]
+
。
製備例43
6-乙醯基-3-氟-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯
令1-[6-溴-5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例42；1000 mg，3.52 mmol)、DIPEA (1.84 mL，10.6 mmol)及Pd(tBu
3
P)
2
(198 mg，0.387 mmol)於MeOH (70.4 mL)之混合物於室溫和CO (45 psi)下經攪拌18小時。令反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至70：30溶析)純化以生成呈紅黃色固體之標的化合物(73%)。LCMS m/z =264 [M+H]
+
。
製備例44
{[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙酸三級丁酯
令1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例34；1.50 g，5.64 mmol)、2-羥基乙酸三級丁酯(1.49 g，11.3 mmol)、Cs
2
CO
3
(9.18 g，28.2 mmol)、tBuXPhos (239 mg，0.56 mmol)及tBuXPhos-Pd Gen-3 (224 mg，0.28 mmol)於二噁烷(15 mL)之混合物經氮氣脫氣5分鐘並於80℃下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物經EtOAc (60 mL)稀釋並經H
2
O (60 mL)沖洗。令有機層置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至50：50溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(990 mg，55%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.48 (s, 9H), 2.54 (s, 3H), 4.85 (s, 2H), 6.46 (dd, 1H), 7.10 (d, 1H), 7.69 (dd, 2H), 7.79 (d, 1H)。
製備例45
2-{[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙酸乙酯
依循製備例44描述之方法，自1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例34)和乙酸2-羥基乙酯得到呈黃色膠之標的化合物(138 mg，13%)。LCMS m/z=290 [M+H]
+
。
製備例46
1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
令NaBH
4
(2450 mg，64.9 mmol)加入至1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例36；6.07 g，32.43 mmol)之MeOH (162 mL)溶液，令溶液經N
2
清洗且令反應混合物於30℃下經攪拌1小時。令反應經丙酮驟冷，令該混合物經過濾且令濾液於真空下經濃縮。令粗產物經管柱層析(急速矽膠層析；經石油醚：EtOAc=100：0至80：20溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(4.1 g，67%)。LCMS m/z=190 [M+H]
+
。
製備例47
6-(1-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧醯胺
令NaBH
4
(154 mg，4.08 mmol)加入至6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧醯胺(製備例39；0.47 g，2.04 mmol)之乾燥EtOH (20 mL)溶液並令反應混合物於20℃下經攪拌1小時。令該反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱矽膠層析(經MeOH：DCM=4：96溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(260 mg，54.8%)。LCMS m/z=233 [M+H]
+
。
製備例48至50
依據製備例47描述之方法，藉由還原適當之乙酮，製備下表所示之醇，並藉由使用所描述之SFC條件，分離鏡像異構物。
製備例51
6-[(1R)-1-羥基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯
對6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯(製備例37；800 mg，3.26 mmol)於THF (8 mL)和MeOH (8 mL)之溶液分批加入NaBH
4
(98.7 mg，2.61 mmol)並令反應混合物於0℃下經攪拌5分鐘。令反應物經NaHCO
3
水溶液(20 mL)驟冷並經EtOAc (3 x 20 mL)萃取。令結合之有機層經鹽水(50 mL)沖洗並置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=10：90至80：20溶析)純化以生成無色油(690 mg，85.5 %)。令該油進一步經SFC (Lux Cellulose-2；經25% (0.1% NH
3
水溶液/IPA)溶析)純化以生成標的化合物(峰2；353 mg，42.7%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.35 (d, 3H), 4.02 (s, 3H), 4.78 (d, 1H), 5.18-5.20 (M，1H), 6.51-6.63 (M，1H), 7.73-7.87 (M，3H), 8.16 (d, 1H)。
製備例52
(1R)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
令1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例34；50.0 g，190 mmol)溶解於溫熱(50℃) DMSO (40 mL)並令所生成之溶液經冷卻至室溫。令D+葡萄糖(40.8 g，225 mmol)於0.1 M pH 7緩衝液(500 mL)之溶液加入至配備pH控制器之反應器(2 L)並經額外之緩衝液(100 mL)輕洗。加入NADP+ (250 mg)、GDH-CDX901 (250 mg)及KRED101 (5.0 g)於緩衝液(200 mL)之溶液，經額外之緩衝液(150 mL)輕洗且令混合物於30℃下經攪拌。加入1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮溶液(約10.0 mL整分)並令反應混合物於30℃下經攪拌。監測該反應混合物之pH並藉由加入2N NaOH調節pH以維持pH 7.0直至無須進一步加入。加入10% IPA/iPrOAc (600 mL)並令混合物經攪拌1小時。令該反應器排乾並經額外之10% IPA/iPrOAc (300 mL)輕洗。加入寅氏鹽®(40 g)，令混合物經激烈攪拌0.5小時且隨後經通過經水濕潤之寅氏鹽®墊過濾並經10% IPA/iPrOAc (100 mL)沖洗。令濾液經分離，令水層經10% IPA/iPrOAc (30 mL)攪拌且再經通過寅氏鹽®過濾。令結合之有機萃取液經鹽水沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)，經過濾且於減壓下經濃縮並與庚烷共沸。令所生成之產物於真空下經乾燥以生成呈固體之標的化合物(47 g)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.39 (d, 3H), 4.98 (q, 1H), 6.57 (s, 1H), 7.28-7.7.82 (M，4H)。RT=4.43分鐘。HPLC分析條件：XBridge C18 4.6 mm x 150 mm x 5µ；MeCN：H
2
O=5：95至100：0；經7 分鐘；1.5 mL/min。
製備例53
(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
令1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例40；100 g，487 mmol)於DMSO (40 mL)中於50℃下溫熱直至得到溶液並隨後令該溶液冷卻。加入葡萄糖(106 g，406 mmol)和pH 7磷酸鉀緩衝液(0.1 M，800 mL)並令混合物於30℃下經攪拌直至得到溶液。調整pH至6.5並加入呈固體之NADP+ (500 mg)、GDH-CDX901 (500 mg)及KRED101 (5.0 g)且經緩衝液(200 mL)沖洗。令混合物經攪拌5分鐘並隨後加入1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮溶液(10 mL劑量)和2M NaOH以維持於pH 6.5。一旦已加入2M NaOH (280 mL)，令反應混合物於室溫下經攪拌18小時。令該混合物經EtOAc (800 mL)稀釋並經攪拌1小時。加入寅氏鹽®(50 g)，令混合物經攪拌230分鐘，隨後經通過經水濕潤之寅氏鹽®墊過濾，經EtOAc沖洗且令濾液經分離。令水相經EtOAc (2 x 400 mL)萃取，令結合之有機萃取液經鹽水沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發以生成呈淡黃色固體之標的化合物(99.6 g)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.36 (d, 3H), 4.47-4.49 (M，1H), 4.98-5.02 (M，1H), 6.55 (s, 1H), 7.48-7.83 (M，3H), 8.56 (s, 1H)。
製備例54
1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
於0℃下對5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)-2-氰基吡啶(製備例35；3.59 g，19.08 mmol)之THF (90.9 mL)溶液加入MeMgBr (3M 2-MeTHF溶液；19.1 mL，57.2 mmol)並令反應混合物回溫至室溫且經攪拌30分鐘。令反應物經6N HCl中和並經EtOAc萃取。令水層經飽和Na
2
CO
3
水溶液驟冷並經EtOAc (3x)萃取。令結合之有機萃取液經鹽水沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發。令殘餘物溶解於MeOH (87.4 mL)，令溶液經冷卻至0℃並加入NaBH
4
(1.08 g，28.6 mmol)且令反應混合物於室溫下經攪拌18小時。令該混合物經1N HCl驟冷，隨後加入飽和Na
2
CO
3
溶液且令混合物經EtOAc (3x)萃取。令結合之有機層經鹽水沖洗並置於硫酸鈉上乾燥。於減壓下經蒸發溶劑以生成呈黃色油之粗化合物(2.55 g，64.5%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.31-1.41 (M，3H), 4.45-4.46 (M，1H), 4.99-5.02 (M，1H), 6.50-6.59 (M，1H), 7.47 (dd, 1H), 7.71-7.83 (M，2H), 8.53 (d, 1H)。
製備例55
(1R)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
對NaH (60%礦物油溶液；2.16 g，54.0 mmol)之MeOH (30 mL)溶液加入(1R)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例52；1.81 g，6.75 mmol)並令溶液於室溫下經攪拌20分鐘且隨後於60℃下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至50：50溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(1.36 g，91%)。LCMS m/z=220 [M+H]
+
。
製備例56
(1R)-1-[6-({[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}甲基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
於室溫下對6-[(1R)-1-羥基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯(製備例51；50.00 mg，0.202 mmol)於MeOH (4.0 mL)之無色溶液加入LiBH
4
(2.0 M THF溶液；0.404 mL，0.81 mmol)並令反應混合物經攪拌3小時。令反應物經10% AcOH/MeOH中和至pH 7至8並於真空下經濃縮以生成黃色膠(44.34 mg)。於室溫下對該膠(40.00 mg，0.182 mmol)和咪唑(14.9 mg，0.22 mmol)於DCM (2.0 mL)之黃色溶液加入TBDMSCl (30.2 mg，0.20 mmol)並令反應混合物經攪拌18小時。令該反應混合物經DCM和H
2
O (6 mL)稀釋，令相層分離，令有機相經分離且令水層經DCM (5 mL)萃取。令結合之有機相於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至40：60溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物(35 mg，58%)。LCMS m/z=334 [M+H]
+
。
製備例57
甲磺酸1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯
於0℃下令MsCl (218.0 mg，1.90 mmol)加入至1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例46；300.0 mg，1.59 mmol)和Et
3
N (321.0 mg，3.17 mmol)之DCM (10 mL)溶液並令反應混合物於0℃下經攪拌30分鐘。令反應物經H
2
O (5 mL)驟冷並經DCM (2 x 10 mL)萃取。令結合之有機層經NaHCO
3
水溶液(2 x 5 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成呈黃色油之標的化合物(420.0 mg，99.1%)。LCMS m/z=268 [M+H]
+
。
製備例58
甲磺酸1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯
依循製備例57描述之方法，自1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例54)得到呈灰白色固體之標的化合物(97%產率)。LCMS m/z=286 [M+H]
+
。
製備例59
甲磺酸(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯
依循製備例57描述之方法，自(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例53)得到呈油之標的化合物(定量產率)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.77 (d, 3H), 2.84 (s, 3H), 6.01 (q, 2H), 7.42-7.45 (M，2H), 7.79-7.81 (M，2H), 8.62 (s, 1H)。
製備例60
甲磺酸1-[6-胺甲醯基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯
令MsCl (0.3 mL，4 mmol)加入至6-(1-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧醯胺(製備例47；260 mg，1.12 mmol)和DIPEA (0.8 mL，4 mmol)於無水DCM (20 mL)的經冰冷卻之溶液並令反應混合物於20℃下經攪拌30分鐘。令反應物經H
2
O (20 mL)驟冷並經DCM (2 x 20 mL)萃取。令有機層經分離，經NaHCO
3
水溶液(20 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發以生成呈黃色油之標的化合物(350 mg)，其未經進一步純化而使用。LCMS m/z=311 [M+H]
+
。
製備例61
5-溴-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-羧酸
對5-溴-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-羧酸甲酯(J. Med. Chem. 57(12)：5129-5140，2014；35 g，100 mmol)於MeOH (250 mL)和THF (100 mL)之溶液加入2N NaOH (258 mL，516 mmol)並令反應混合物於50℃下經攪拌2小時。令黃色溶液於真空下經濃縮以除去MeOH並使用2N HCl小心地調整該溶液之pH至約6。藉由過濾收集所生成之固體並於高真空下經乾燥以生成呈白色固體之標的化合物(32.0 g，95%)。
1
H NMR (400 MHz, MeOD-d
4
) δ：1.68-1.85 (M，3H), 2.06-2.16 (M，2H), 2.45-2.52 (M，1H), 3.80-3.87 (M，1H), 3.98-4.03 (M，1H), 5.87 (dd, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.14 (s, 1H)。
製備例62
5-溴-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-羧酸甲酯
於0℃下對5-溴-1H-吲唑-6-羧酸甲酯(28 g，110 mmol)於THF (500 mL)之懸浮液分批加入NaH (5.71 g，143 mmol, 60%礦物油溶液)並令懸浮液經攪拌30分鐘。加入SEM-Cl (22.0 g，132 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令黃色懸浮液經H
2
O (600 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 600 mL)萃取。令結合之有機萃取液經鹽水(1200 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮以生成呈黃色油之粗產物。令該粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至10：90溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(15.8 g，37%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：-0.04 (s, 9H), 0.88-0.92 (M，2H), 3.53-3.57 (M，2H), 3.98 (s, 3H), 5.77 (s, 2H), 8.02 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.06 (s, 1H)。
製備例63
5-溴-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-羧酸
對5-溴-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-羧酸甲酯(製備例62；11.4 g，29.6 mmol)之MeOH (250 mL)溶液加入2N NaOH (88.8 mL，178 mmol)並令反應混合物於50℃下經攪拌3小時。令經冷卻之溶液於真空下經濃縮並使用1N HCl調整殘餘物之pH至6。令所生成之混合物經過濾並令固體經乾燥以生成呈黃色固體之標的化合物(11.0 g)。
1
H NMR (400 MHz, MeOD-d
4
) δ：0.02 (s, 9H), 0.95 (dd, 2H), 3.68 (dd, 2H), 5.78 (s, 2H), 8.11 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.46 (s, 1H)。
製備例64
1-[5-溴-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮
對5-溴-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-羧酸(製備例61；32.0 g，98.4 mmol)之THF (400 mL)溶液加入HATU (44.9 g，118 mmol)和N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(10.6 g，108 mmol)並令白色懸浮液於室溫下經攪拌20分鐘。加入Et
3
N (29.9 g，295 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令黃色懸浮液經飽和NH
4
Cl水溶液(400 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 400 mL)萃取。令結合之有機萃取液經鹽水(1200 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮以生成黃色膠。令該黃色膠經管柱層析(經EtOAc：石油醚=20：80至70：30溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物(38.0 g)。令該膠溶解於THF (500 mL)，令溶液冷卻至-70℃，逐滴加入MeMgBr (103 mL，310 mmol, 3M Et
2
O溶液)，令懸浮液經攪拌30分鐘，隨後回溫至室溫且經攪拌16小時。逐滴加入H
2
O (400 mL)以使反應驟冷，令混合物經EtOAc (400 mL)稀釋，隨後經通過寅氏鹽®過濾且經分離。令有機相置於硫酸鈉上乾燥並於真空下經濃縮以生成呈黃色膠之粗產物。令該粗產物經管柱層析(經EtOAc：石油醚=0：100至50：50溶析)純化以生成呈無色膠之標的化合物(19.5 g，58%)。
1
H NMR (400 MHz, MeOD-d
4
) δ：1.68-1.86 (M，3H), 2.03-2.16 (M，2H), 2.46-2.55 (M，1H), 2.68 (s, 3H), 3.81-3.84 (M，1H), 3.97-4.03 (M，1H), 5.87-5.89 (M，1H), 7.89 (s, 1H), 8.10 (s, 2H)。
製備例65
1-(5-溴-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基)乙酮
依循製備例64描述之方法，自5-溴-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-羧酸(製備例63)得到呈黃色油之標的化合物(4.5 g，46%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：0.03 (s, 9H), 0.96 (t, 2H), 2.67 (s, 3H), 3.62 (t, 2H), 5.73 (s, 2H), 7.88 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 8.10 (s, 1H)。
製備例66
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮
對1-[5-溴-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例64；19.5 g，60.3 mmol)之DMF (300 mL)溶液加入1H-吡唑(6.16 g，90.49 mmol)、(R,R)-(-)-N,N’-二甲基-1,2-環己烷二胺(858 mg，6.03 mmol)、CuI (1720 mg，9.05 mmol)及K
2
CO
3
(2.5 g，181 mmol)並令懸浮液於130℃下經攪拌16小時。令經冷卻之黑色懸浮液經H
2
O (500 mL)稀釋，經EtOAc (3 x 500 mL)萃取，令結合之有機萃取液經鹽水(1000 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=20：80至60：40溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物(15.5 g，82.8%)。LCMS m/z=311 [M+H]
+
。
製備例67
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙酮
依循製備例66描述之方法，自1-(5-溴-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基)乙酮(製備例65)得到呈黃色固體之標的化合物(3.3 g，76%)。LCMS m/z=357 [M+H]
+
。
製備例68
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮
令1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例66；5.0 g，16.11 mmol)於4M HCl之二噁烷(100 mL)溶液的懸浮液於室溫下經攪拌2小時。令混合物經過濾，令固體經EtOAc沖洗且於真空下經乾燥以生成呈灰白色固體之標的化合物(粗產物)，其未經進一步純化而使用。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：1.91 (s, 3H), 6.55 (dd, 1H), 7.67-7.77 (M，2H), 7.97 (s, 1H), 8.25 (dd, 2H)。
製備例69
[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸甲酯
令Cs
2
CO
3
(29.8 g，91.7 mmol)和溴乙酸甲酯(9.3 g，60.8 mmol)加入至1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例68；6.9 g，30.50 mmol)之DMF (100 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌48小時。加入額外之Cs
2
CO
3
(15 g，46.2 mmol)和溴乙酸甲酯(4.5 g，29.42 mmol)並令反應混合物再經攪拌16小時。令該混合物經過濾並經EtOAc沖洗。加入H
2
O (250 mL)，令相層經分離，令水相經EtOAc (3 x 150 mL)萃取，令結合之有機層經H
2
O (2 x 100 mL)和鹽水(200 mL)沖洗，隨後置於無水硫酸鈉上乾燥且經過濾和真空下濃縮。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至60：40溶析)純化2次以生成呈白色固體之標的化合物(5.2 g，57.2%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.93 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 5.25 (s, 2H), 6.54 (dd, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.73-7.84 (M，3H), 8.16 (d, 1H)。
製備例70
[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸三級丁酯
依循類似於製備例69描述之方法，自1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例68)和溴乙酸三級丁酯得到呈亮黃色固體之標的化合物(632 mg，62.8%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.46 (s, 9H), 1.93 (s, 3H), 5.13 (s, 2H), 6.54 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.76-7.79 (M，2H), 7.81 (s, 1H), 8.16 (s, 1H)。
製備例71
[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基]乙酸甲酯
對1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例68；2.3 g，10.17 mmol)之THF (20 mL)溶液加入N,N-二環己基甲基胺(3.97 g，20.3 mmol)和溴乙酸甲酯(3.11 g，20.3 mmol)並令反應混合物於70℃下經攪拌18小時。令經冷卻之反應混合物經過濾，經EtOAc沖洗，加入H
2
O (20 mL)且令相層分離。令水相經EtOAc (2 x 35 mL)萃取，令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至70：30溶析)純化以生成2個產物。令第一溶析產物經MeOH和MTBE碾製以生成呈灰白色固體之標的化合物(929 mg，24.3%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：2.09 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 5.28 (s, 2H), 6.49 (dd, 1H), 7.72-7.74 (M，3H), 7.98 (s, 1H), 8.13 (d, 1H)。
製備例72
5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶7-氧化物
於室溫下經30分鐘對5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(95 g，480 mmol)於無水EtOAc (1920 mL)之懸浮液加入m-CPBA (166 g，816 mmol)並隨後令反應混合物於45至50℃下經攪拌5小時。令經冷卻之反應混合物經過濾，令固體經EtOAc (2 x 50 mL)沖洗且於真空下經乾燥以生成呈亮褐色固體之標的化合物(93.6 g，91%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：8.14 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 14.69 (br s, 1H)。
製備例73
5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-腈
對5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶7-氧化物(製備例72；46.6 g，210 mmol)於MeCN (1050 mL)之懸浮液加入Et
3
N (58.3 mL，420 mmol)和TMSCN (52.5 mL，420 mmol)並令反應混合物於80℃下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物懸浮於MTBE達60小時。令所生成之固體經過濾，經MTBE (2 x 30 mL)沖洗且於真空下經乾燥以生成呈紅色固體之標的化合物(89.9%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：8.31 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 14.34 (br s, 1H)。
製備例74
1-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)乙酮
於0℃下經40分鐘對5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-腈(製備例73；25.0 g，100 mmol)之THF (500 mL)溶液加入MeMgBr (3.0 M Et
2
O溶液, 101 mL，303 mmol)。令反應混合物回溫至20℃並經攪拌3小時。令該反應混合物倒入至於冰水(300 mL)中之6M HCl水溶液(120 mL)並令所生成之黑色溶液經攪拌50分鐘。藉由使用10M NaOH水溶液使溶液中和並令相層分離。令水層經EtOAc (3 x 250 mL)萃取，令結合之有機相置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成呈紅色固體之標的化合物(84.9%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：2.67 (s, 3H), 8.24 (s, 1H), 8.68-8.74 (M，1H), 14.15 (br s, 1H)。
製備例75
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮
令1-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)乙酮(製備例74；29.6 g，110 mmol)、1H-吡唑(18.1 g，266 mmol)、Cs
2
CO
3
(72.3 g，222 mmol)及(R,R)-(-)-N,N’-二甲基-1,2-環己烷二胺(12.6 g，88.8 mmol)於DMF (185 mL)之懸浮液經氮氣清洗。加入CuI (4.23 g，22.2 mmol)並於130℃下令混合物於密封容器中經激烈攪拌4小時。令經冷卻之反應混合物經H
2
O (600 mL)稀釋，令混合物經過濾且令濾液經分離。令水層經EtOAc (5 x 150 mL)萃取，令結合之有機層經水(50 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發。令所生成之黑色油經急速管柱矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至100：0溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(4.6 g)和額外粗產物(約8.1 g)。令該額外粗產物於MTBE (10 mL)中經攪拌15分鐘，令固體經過濾，經MTBE沖洗且經乾燥以生成額外之呈白色固體之標的化合物(5.1 g)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：2.60 (s, 3H), 6.52 (dd, 1H), 7.72-7.79 (M，2H), 8.21-8.23 (M，2H), 11.80 (br s, 1H)。
製備例76
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮
於0℃下經10分鐘對1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮(製備例75；19.35 g，85.16 mmol)和N,N-二環己基甲基胺(29.2 mL，136 mmol)之無水DMF (426 mL)溶液加入SEM-Cl (21.1 mL，119 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌40小時。令該混合物經H
2
O (1500 mL)稀釋並經EtOAc (5 x 300 mL)萃取。令結合之有機層經水(50 mL)和鹽水(50 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經管柱層析(矽膠管柱；經EtOAc：石油醚=0：100至50：50溶析)純化2次以生成呈橙色油之標的化合物(19.85 g)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：-0.01- -0.04 (M，9H), 0.94-1.01 (M，2H), 2.70 (s, 3H), 3.70-3.75 (M，2H), 5.95 (s, 2H), 6.52 (d, 1H), 7.74 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.21 (s, 1H)。
製備例77
[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酸甲酯
對1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮(製備例75；400 mg，1.6 mmol)之無水THF (5 mL)溶液加入N,N-二環己基甲基胺(0.68 mL，3.17 mmol)和溴乙酸甲酯(0.3 mL，3.17 mmol)並令反應混合物於70℃下經攪拌18小時。令經冷卻之反應混合物經過濾，經EtOAc (10 mL)沖洗，加入H
2
O (10 mL)且令相層分離。令水層經EtOAc (2 x 30 mL)萃取，令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至70：30溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(峰1；120 mg，25%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：2.64 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 5.40 (s, 2H), 6.52 (dd, 1H), 7.75 (dd, 2H), 8.21 (d, 2H)。
製備例78
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮
對1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮(製備例75；2.69 g，11.8 mmol)之THF (60 mL)溶液先後加入2,3-二氫哌喃(5.00 g，59.4 mmol)和pTsOH (299.7 mg，1.74 mmol)並令反應混合物於50℃下經攪拌3小時。令該反應混合物於真空下經濃縮以除去大部分溶劑並令殘餘物置入鹽水(30 mL)且經EtOAc (3 x 30 mL)萃取。令結合之有機層經乾燥(MgSO
4
)，經過濾且經減壓下蒸發以生成淺黑色油。令該淺黑色油經急速管柱矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至49：51溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(2.39 g，64.8%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.65-1.70 (M，1H), 1.82-1.88 (M，2H), 2.02-2.05 (M，1H), 2.19-2.20 (M，1H), 2.64-2.66 (M，4H), 3.82-3.86 (M，1H), 4.14-4.18 (M，1H), 6.20 (dd, 1H), 6.50 (s, 1H), 7.74 (d, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.20 (s, 1H)。
製備例79
4-溴-2-硝基-5-(1H-吡唑-1-基)苯胺
對4-溴-5-氟-2-硝基苯胺(10.0 g，4.55 mmol)和1H-吡唑(5.79 g，85.1 mmol)於DMF (200 mL)之懸浮液加入K
2
CO
3
(17.6 g，128 mmol)並令反應混合物於100℃下經攪拌4小時。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮，令殘餘物經DCM (250 mL)稀釋且經飽和NaHCO
3
水溶液(2 x 80 mL)沖洗。令有機相置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經自EtOAc/石油醚再結晶純化以生成呈黃色固體之標的產物(8.0 g，66%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：6.38 (br s, 2H), 7.32 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 8.08 (s, 1H)。
製備例80
1-[4-胺基-5-硝基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
步驟1
4-溴-5-氯-2-硝基苯胺
令5-氯-2-硝基苯胺(23.40 g，135.6 mmol)和
N
-溴琥珀醯亞胺(24.10 g，136.0 mmol)於乙酸(400 mL)之混合物於130℃下經攪拌1小時。令反應混合物倒入至水(400 mL)中。藉由過濾收集沉澱物並經石油醚(5 x 50 mL)沖洗。隨後令濾餅於真空下經乾燥3小時以生成呈亮褐色固體之標的化合物(29 g，85%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：8.24 (s, 1 H), 7.63 (br s, 2 H), 7.29 (s, 1 H)。
步驟2
N-(4-溴-5-氯-2-硝基苯基)乙醯胺
令4-溴-5-氯-2-硝基苯胺(11.0 g，43.7 mmol)之乙酸(200 mL)溶液於120℃下經加熱。隨後逐滴加入乙酸酐(8.93 g，87.5 mmol)。令褐色溶液於120℃下經攪拌10小時。令反應混合物於減壓下經濃縮以除去大部分乙酸並隨後加入飽和碳酸氫鈉水溶液以調整pH至約7。令混合物隨後經乙酸乙酯(2 x 100 mL)萃取。令結合之有機層經水(50 mL)和鹽水(50 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經濃縮以生成含有標的化合物之黃色固體(14 g)，其未經進一步純化而用於進行下一個步驟。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：2.09 (s, 3H), 7.97 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 10.38 (br s, 1H)。
步驟3
N-(5-氯-4-(1-乙氧基乙烯基)-2-硝基苯基)乙醯胺
於氮氣氛圍下對
N
-(4-溴-5-氯-2-硝基苯基)乙醯胺(14 g)和Pd(PPh
3
)
4
(2.52 g，2.18 mmol)之1,4-二噁烷(200 mL)溶液加入三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫烷(15.80 g，43.6 mmol)。令反應混合物經N
2
(x 3)抽真空並隨後於100℃下經攪拌16小時。令反應混合物經冷卻至室溫並於減壓下經濃縮。令所生成之黑色油倒入至水(50 mL)中並經乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。令結合之有機層經置於無水Na
2
SO
4
上乾燥，經過濾和濃縮以生成呈黑色油之標的化合物，其未經額外之純化而用於進行下一個步驟。LCMS
m/z
284.9 [M+H]
+
。
步驟4
N-(4-乙醯基-5-氯-2-硝基苯基)乙醯胺
對
N
-(5-氯-4-(1-乙氧基乙烯基)-2-硝基苯基)乙醯胺之乙酸乙酯(60 mL)溶液加入4N HCl
(aq)
(120 mmol, 30 mL)。令混合物於室溫下經攪拌1小時。隨後令反應混合物經乙酸乙酯(3 x 80 mL)萃取。令結合之有機層經飽和NaHCO
3
水溶液(25 mL)、水(50 mL)和鹽水(50 mL)沖洗，置於無水硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經濃縮以生成黑色油。令該黑色油隨後經急速層析(矽膠；先後經石油醚：乙酸乙酯=100：0至40：60梯度和0：100溶析)純化以產生黑色油(11 g)。隨後令該油再經急速層析(矽膠；經石油醚：乙酸乙酯=100：0至70：30梯度溶析)純化以生成黑色固體，其係經MTBE (2 x 15 mL)碾製以生成褐色固體(6.5 g)。隨後令該褐色固體經急速層析(矽膠；經石油醚：乙酸乙酯=100：0至60：40溶析)純化以生成固體。令該固體經MTBE (3 x 15 mL和隨後3 x 5 mL)碾製以生成呈黃色固體之標的化合物(4.88 g，44%；經3步驟)。LCMS
m/z=
257 [M+H]
+
。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：2.12 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 7.93 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 10.53 (s, 1H)。
步驟5
1-[4-胺基-5-硝基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
對N-(4-乙醯基-5-氯-2-硝基苯基)乙醯胺(4.63 g，18.04 mmol)、1H-吡唑(1.60 g，23.5 mmol)、t-BuOK (4.05 g，36.1 mmol)、CuI (687 mg，3.61 mmol)及1,10-啡啉(650 mg，3.61 mmol)之混合物加入DMF (100 mL)。令N
2
氣泡通過懸浮液達10分鐘並令反應混合物於110℃下經攪拌16小時。令經冷卻之懸浮液經過濾並令濾液經EtOAc (150 mL)和水(300 mL)稀釋。令水相經EtOAc (2 x 150 mL)萃取，令結合之有機層經鹽水(2 x 150 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經管柱矽膠層析(經EtOAc：石油醚=100：0至50：50溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(1.85 g，41.6%)。LCMS m/z=247 [M+H]
+
。
製備例81
4-溴-5-(1H-吡唑-1-基)苯-1,2-二胺
對4-溴-2-硝基-5-(1H-吡唑-1-基)苯胺(製備例79；8.0 g，28.0 mmol)於THF (150.0 mL)、EtOH (150.0 mL)及H
2
O (50.0 mL)之溶液加入鐵粉末(9.47 g，10.0 mmol)和NH
4
Cl (3.02 g，56.5 mmol)並令反應混合物於95℃下經加熱2小時。令經冷卻之混合物經EtOH稀釋，經通過寅氏鹽®過濾直至再無顏色通過濾器且於真空下經濃縮。令殘餘物溶解於EtOAc (250 mL)，經H
2
O (80 mL)和鹽水(80 mL)沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)且經過濾和濃縮以生成呈褐色油之標的化合物(7 g，98%)。
1
H NMR (400 MHz, MeOD-d
4
) δ：6.45 (dd, 1H), 6.76 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.73 (d, 1H)。
製備例82
1-[4,5-二胺基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
對1-[4-胺基-5-硝基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例80；1.85 g，7.51 mmol)於MeOH (80 mL)之黃色懸浮液加入濕Pd/C (50% H
2
O溶液, 900 mg)並令黑色懸浮液於室溫下經攪拌5小時。令混合物經過濾並令濾液經減壓下蒸發以生成呈褐色膠之標的產物(1600 mg，98.5%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.82 (s, 3H), 3.47-3.50 (M，2H), 3.8-3.86 (M，2H), 6.45 (d, 1H), 6.72 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.71 (s, 1H)。
製備例83
6-溴-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑
令HCl (5 mL)加入至4-溴-5-(1H-吡唑-1-基)苯-1,2-二胺(製備例81；7.0 g，27.66 mmol)之甲酸(50 mL)溶液並令反應混合物於70℃下經攪拌2小時。令經冷卻之反應混合物經減壓下蒸發以生成呈褐色固體之標的化合物。令該固體(7.0 g，96%)未經進一步純化而用於下一個步驟。
1
H NMR (400 MHz, MeOD-d
4
) δ：6.63 (dd, 1H), 7.84 (d, 1H), 8.05 (d, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 9.58 (s, 1H)。
製備例84
1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙酮
對1-[4,5-二胺基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例82；1.6 g，7.40 mmol)和原乙酸三乙酯(3.60 g，22.2 mmol)之THF (60 mL)溶液加入TsOH (63.7 mg，0.37 mmol)並令反應混合物於60℃下經攪拌16小時。令經冷卻之溶液於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至20：80溶析)純化以生成黃色膠(2.0 g)。令該黃色膠溶解於EtOH (35 mL)，加入TsOH (100 mg，0.58 mmol)且令反應混合物於85℃下經攪拌2小時。令經冷卻之溶液於真空下經濃縮，令所生成之固體溶解於DCM (20 mL)，加入NaHCO
3
固體且令混合物經攪拌10分鐘並隨後經過濾。令濾液經減壓下蒸發以生成呈褐色固體之標的化合物(1.39 g，78.2%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.90 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 6.55 (d, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.70-7.80 (M，3H)。
製備例85
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙醇
對1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例66；1.00 g，3.22 mmol)之無水EtOH (15.0 mL)溶液加入NaBH
4
(244 mg，6.44 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌12小時。令該混合物經H
2
O (500 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 500 mL)萃取。令結合之有機層經水(2 x 300 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成粗產物。令該粗產物經急速矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至0：100溶析)純化2次以生成呈黃色油之標的化合物(900 mg，89.4%)。LCMS m/z=335 [M+Na]
+
。
製備例86
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙醇
依循製備例85描述之方法，自1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例67)得到呈亮黃色膠之標的化合物(99%產率)。
1
H NMR (400 MHz, MeOD-d
4
) δ：0.01 (s, 9H), 0.95 (t, 2H), 1.28 (d, 3H), 3.68 (dt, 2H), 4.73-4.78 (M，1H), 2.07 (s, 2H), 6.56 (dd, 1H), 7.76-7.77 (M，2H), 7.91 (d, 1H), 8.01 (s, 1H), 8.51 (s, 1H)。
製備例87
{6-[(1R)-1-羥基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯
令NaBH
4
(63.4 mg，1.68 mmol)分批加入至於0℃下[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸甲酯(製備例69；1000 mg，3.35 mmol)之MeOH (40 mL)溶液並令反應混合物於此溫度下經攪拌2小時。藉由加入1N HCl至pH 5使反應驟冷並令溶液於真空下經濃縮以生成黃色固體。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至80：20溶析)純化以生成消旋性產物。令該產物進一步經SFC (AD 250 mm x 30 mm 5µ管柱；經40% (0.1% NH
3(aq)
之IPA溶液)溶析；50 mL/min)純化以生成呈白色固體之標的化合物(42.5%)。RT=4.816分鐘[5：95至40：60 (0.05% DEA之IPA溶液)：CO
2
；經5分鐘；流速2.5 mL/min]。LCMS m/z=301 [M+H]
+
。
製備例88至91
依據製備例87描述之方法，藉由還原適當之乙酮，製備下表所示之醇並隨後藉由SFC且使用所述之條件進行純化。
製備例92
1-[1-(2-{[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙醇
對0℃下[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸甲酯(製備例69；5.10 g，17.1 mmol)之MeOH (100 mL)溶液分批加入NaBH
4
(1290 mg，34.2 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌5小時。藉由加入3M HCl水溶液至pH 5使反應驟冷，令溶液於真空下經濃縮且令殘餘物分佈於EtOAc/H
2
O (100 mL/10 mL)。令相層分離並令水層經EtOAc (3 x 10 mL)萃取。令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發以生成黃色膠。令該膠溶解於無水DCM (100 mL)，令溶液冷卻至0℃，隨後加入咪唑(2.33 g，34.2 mmol)和TBDMSCl (2.58 g，17.1 mmol)且令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令該反應混合物經H
2
O (20 mL)稀釋，經DCM (2 x 30 mL)萃取，令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=10：90至40：60溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(5.20 g，78.8%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：-0.16 (d, 6H), 0.74 (s, 9H), 1.44 (d, 3H), 4.02-4.12 (M，2H), 4.55 (t, 2H), 4.72 (br d, 1H), 4.99 (br s, 1H), 6.50 (t, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 8.03 (s, 1H)。
製備例93
[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]甲醇
於0℃下令SEM-Cl (5.65 mL，31.90 mmol)逐滴加入至6-溴-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑(製備例83；7.0 g，26.61 mmol)和DIPEA (14.7 mL，79.80 mmol)之THF (100 mL)溶液並令反應混合物於10℃下經攪拌2小時。令該混合物經EtOAc (250 mL)稀釋並經飽和NaHCO
3
水溶液(2 x 60 mL)沖洗。令有機相置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成油。令該油經急速矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至30：70溶析)純化以生成黃色油(8 g，76.4%；異構物之混合物)。令MeOH (100 mL)加入至該黃色油(8 g，20.34 mmol)、Et
3
N (8.82 mL，61.0 mmol)及Pd(dppf)Cl
2
(1.49 g，2.03 mmol)於DMF (100 mL)之懸浮液且令反應混合物於80℃和CO氛圍(50 psi)下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令粗產物經急速矽膠層析(經EtOAc：石油醚=80：20溶析)純化以生成黃色油(7.0 g，92.4%)。於0℃下令LiAlH
4
(1.1 g，28.98 mmol)加入至該油(7 g，18.79 mmol)之THF (100 mL)溶液並令反應混合物經2小時回溫至室溫。逐滴加入H
2
O (1 mL)，令混合物置於硫酸鈉上乾燥且於室溫下經攪拌1小時。令該混合物經過濾和真空下濃縮。令粗產物經急速矽膠層析(經EtOAc：MeOH=100：0至95：5溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(5.0 g，77.2%)。LCMS m/z=345 [M+H]
+
。
製備例94
5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-甲醛
對[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]甲醇(製備例93；2.5 g，7.26 mmol)之DCM (20 mL)溶液加入二氧化錳(IV)(6.31 g，72.3 mmol)並令混合物於50℃下經攪拌2小時。令不溶物經通過寅氏鹽®過濾並令濾液經減壓下蒸發以生成呈亮黃色固體之標的化合物(1.5 g，60.4%)。LCMS m/z=343 [M+H]
+
。
製備例95
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙醇
於-30℃和Ar
(g)
下令MeMgBr (2.92 mL，8.76 mmol，3M Et
2
O溶液)逐滴加入至5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-甲醛(製備例94；1.5 g，4.38 mmol)之THF (20 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令該混合物經冷卻至0℃，經藉由加入飽和NH
4
Cl水溶液(100 mL)驟冷且經EtOAc萃取。令有機層經飽和NaHCO
3
水溶液(2 x 100 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經急速矽膠層析(經EtOAc：石油醚=90：10溶析)純化以生成呈亮黃色油之標的化合物(1.3 g，82.9%)。LCMS m/z=359 [M+H]
+
。
製備例96
(1R)-1-{5-(1H-吡唑-1-基)-1-[(2S)-四氫-2H-哌喃-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}乙醇
於0℃下令NaBH
4
(441.5 mg，11.67 mmol)加入至1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮(製備例78；2.39 g，7.68 mmol)之MeOH (50 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌4小時。令反應物經藉由加入飽和NH
4
Cl水溶液(25 mL)驟冷並令混合物於真空下經濃縮至體積約30 mL。令懸浮液經EtOAc (3 x 20 mL)萃取，令結合之有機層經乾燥(MgSO
4
)，經過濾且經減壓下蒸發以生成淡黃色油。令該粗產物經管柱矽膠層析純化以生成淡黃色膠(2.10 g，87.3%)。令該膠進一步經SFC (Chiralpak AY管柱；經30% (0.1% NH
3(aq)
/EtOH)溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(峰3；620.0 mg，24.8%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.32 (d, 3H), 1.64-1.70 (M，1H), 1.77-1.91 (M，2H), 2.0-2.07 (M，1H), 2.14-2.24 (M，1H), 2.63-2.74 (M，1H), 3.83 (dt, 1H), 4.12-4.18 (M，1H), 4.72 (br d, 1H), 5.00 (q, 1H), 6.18 (dd, 1H), 6.53-6.55 (M，1H), 7.68 (d, 1H), 7.79 (d, 1H) 8.02 (s, 1H), 8.14 (s, 1H)。
製備例97
乙酸6-氟喹啉-3-基酯
於冰冷卻下令乙醯氯(13.7 mL，192 mmol)逐滴加入至6-氟-喹啉-3-醇(28.0 g，172 mmol)和吡啶(77.7 mL，961.1 mmol)於DCM (250 mL)之混合物並令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令該混合物經DCM (150 mL)稀釋並先後經H
2
O (100 mL)和1N HCl (100 mL)沖洗。令經分離之有機相經乾燥(Na
2
SO
4
)，經過濾且於減壓下經濃縮以生成殘餘物。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至100：0溶析)純化以生成呈灰白色固體之標的化合物(21.3 g，61%)。
1
H NMR (CDCl
3
, 400 MHz) δ：2.46 (s, 3H), 7.48-7.52 (M，2H), 7.07 (s, 1H), 8.20-8.23 (M，1H), 8.72 (s, 1H)。
製備例98
乙酸6-溴喹啉-3-基酯
依循製備例97描述之方法，自6-溴-喹啉-3-醇得到呈亮黃色固體之標的化合物(36 g，56.1%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：2.38-2.47 (M，3H), 7.76-7.83 (M，1H), 7.89 (d, 1H), 7.96-8.03 (M，2H), 8.73 (d, 1H)。
製備例99
乙酸5,8-二氟喹啉-3-基酯
令AcCl (2.80 g，35.6 mmol)逐滴加入至5,8-二氟喹啉-3-醇(5.38 g，29.70 mmol)和吡啶(4.7 g，59.4 mmol)於無水DCM (50 mL)之冰冷懸浮液，且經完成加入後，令反應混合物於室溫下經攪拌2小時。令反應混合物倒入至H
2
O (50 mL)中並經DCM (2 x 50 mL)萃取。令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發以生成粗產物。令該粗產物再溶解於EtOAc (100 mL)，依序經檸檬酸水溶液(10 mL)、H
2
O (10 mL)及鹽水(10 mL)沖洗，隨後置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發以生成呈亮黃色固體之標的化合物(6.63 g)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：2.45 (s, 3H), 7.21-7.25 (M，1H), 7.32-7.36 (M，1H), 8.21 (d, 1H), 8.82 (d, 1H)。
製備例100
乙酸6-溴-1-氧橋喹啉-3-基酯
令m-CPBA (18.7 g，108 mmol)分批加入至乙酸6-溴喹啉-3-基酯(製備例98；16 g，60.13 mmol)於DCM (300 mL)的經冰冷卻之溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌15小時。令所生成之懸浮液經過濾並令濾液經DCM (500 mL)稀釋，經飽和Na
2
S
2
O
3
溶液(800 mL)、飽和Na
2
CO
3
溶液(400 mL)及鹽水(100 mL)沖洗，隨後置於無水硫酸鈉上乾燥，經過濾且經減壓下蒸發以生成呈亮黃色固體之標的化合物(16 g，94%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：2.38 (s, 3H), 7.49 (d, 1H), 7.79 (dd, 1H), 8.00 (d, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.56 (d, 1H)。
製備例101
乙酸6-氟-1-氧橋喹啉-3-基酯
於0℃和攪拌下對乙酸6-氟喹啉-3-基酯(製備例97；41.0 g，200 mmol)之DCM (400 mL)溶液分批加入m-CPBA (48.7 g，240 mmol)，且經完成加入後，令溶液於室溫下經攪拌16小時。令懸浮液經過濾並令濾液經減壓下蒸發。令粗產物經管柱層析(經EtOAc：石油醚：MeOH：DCM=70：30：0：0至0：0：10：90溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(41 g，90%)。LCMS m/z=180 [M+H]
+
。
製備例102
乙酸5,8-二氟-1-氧橋喹啉-3-基酯
於0℃和攪拌下對乙酸5,8-二氟喹啉-3-基酯(製備例99；2.5 g，11.2 mmol)之無水DCM (100 mL)溶液分批加入m-CPBA (4.83 g，27.99 mmol)，且經完成加入後，令溶液於室溫下經攪拌60小時。令亮黃色溶液倒入至Na
2
CO
3
水溶液(1.5 g於50 mL H
2
O)並經DCM (2 x 50 mL)萃取。令結合之有機層經飽和Na
2
S
2
O
3
水溶液(2 x 10 mL)和鹽水(10 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且經蒸發溶劑以生成呈褐色固體之粗產物(3 g)。令該粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至100：0溶析)純化以生成呈亮黃色固體之標的化合物(600 mg)。LCMS m/z=240 [M+H]
+
。
製備例103
6-溴喹啉-3-醇1-氧化物
令K
2
CO
3
(4.09 mg，296 mmol)一次加入至乙酸6-溴-1-氧橋喹啉-3-基酯(製備例100；25.17 g，89.23 mmol)於無水MeOH (472 mL)之懸浮液並令所生成之懸浮液於80℃下經攪拌16小時。令經冷卻之懸浮液經減壓下蒸發並令殘餘物經H
2
O (400 mL)稀釋且隨後經1N HCl (約350 mL)中和。藉由過濾收集所生成之沉澱物，經H
2
O (50 mL)輕洗且於真空下經乾燥以生成呈亮黃色固體之標的化合物(86%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：7.15 (d, 1H), 7.60 (dd, 1H), 8.17 (d, 1H), 8.24-8.31 (M，2H)。
製備例104
5,8-二氟喹啉-3-醇1-氧化物
依循製備例103描述之方法，自乙酸5,8-二氟-1-氧橋喹啉-3-基酯(製備例102)得到呈灰褐色固體之標的化合物(450 mg，91%)。LCMS m/z=198 [M+H]
+
。
製備例105
(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯
經20分鐘對乙酸6-氟-1-氧橋喹啉-3-基酯(製備例101；35.0 g，158 mmol)、N-(二乙氧基磷醯基)胺甲酸三級丁酯(52.1 g，206 mmol)及DIPEA (61.6 g，475 mmol)於DCM (600 mL)的經冰冷卻之溶液加入TsCl (45.3 g，237 mmol)之DCM (200 mL)溶液並令反應混合物於此溫度下經攪拌1.5小時。令該反應混合物於室溫下再經攪拌17小時，經DCM (700 mL)稀釋且經飽和檸檬酸水溶液(500 mL)沖洗。令有機相於真空下經濃縮且經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=5：95至80：20溶析)純化以生成黃色膠(72 g，99%)。令K
2
CO
3
(43.6 g，316 mmol)加入至乙酸2-[(三級丁氧羰基)(二乙氧基磷醯基)胺基]-6-氟喹啉-3-基酯(製備例105；72.0 g，160 mmol)於MeOH (720 mL)之混合物並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令黃色懸浮液於真空下經濃縮，經H
2
O (500 mL)稀釋且隨後於0℃下經1N HCl水溶液中和至pH 7。藉由過濾收集所生成之沉澱物並令殘餘物經MTBE (200 mL)碾製且經攪拌10分鐘。令懸浮液經過濾並經MTBE (2 x 50 mL)沖洗。令固體於真空下經乾燥以生成呈灰白色固體之標的化合物(30 g，68%)。LCMS m/z=279 [M+H]
+
。
製備例106
6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
對2-胺基-5-氟苯甲醛(2 g，14.38 mmol)和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231；2.8 g，15.8 mmol)之DMSO (20 mL)溶液緩慢加入t-BuOK (2.42 g，21.6 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌3小時。令該反應重複18批次。令結合之反應混合物經H
2
O (800 mL)稀釋並經EtOAc (2 x 800 mL)萃取。令結合之有機層經H
2
O (2 x 1.5 L)和鹽水(1.5 L)沖洗，隨後經乾燥(Na
2
SO
4
)且經過濾和真空下濃縮。令殘餘物自EtOAc：DCM：石油醚(2：1：10，200 mL)再結晶以生成呈黃色固體之標的化合物(24 g，29.5%)。令濾液於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱矽膠層析(經EtOAc：DCM=0：100至20：80溶析)純化且隨後自EtOAc：DCM：石油醚(2：1：10，100 mL)再結晶以生成額外之產物(6.2 g，7.6%)。LCMS m/z=299 [M+H]
+
。
製備例107
6-溴-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
依循製備例106描述之方法，自2-胺基-5-溴苯甲醛和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231)得到呈黃色固體之標的化合物(49 g，42%)。LCMS m/z=359 [M+H]
+
。
製備例108
7-氯-6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
令t-BuOK (4.85 g，43.2 mmol)加入至2-胺基-4-氯-5-氟苯甲醛(5 g，28.81 mmol)和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231；6.13 g，34.6 mmol)之DMSO (50 mL)溶液並令反應混合物於50℃下經攪拌4小時。令混合物經EtOAC (200 mL)稀釋並經鹽水(3 x 100 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且令濾液經減壓下蒸發。令殘餘物經EtOAc (10 mL)處理，令所生成之固體經過濾且經乾燥以生成呈黃色固體之標的化合物(1.98 g，20.7%)。LCMS m/z=333 [M+H]
+
。
製備例109至112
依循製備例108描述之方法，自2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231)和適當之苯甲醛製備下表之化合物。
製備例113
6-溴-7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
令2-胺基-5-溴-4-氟苯甲醛(5.0 g，22.93 mmol)、2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231；4.88 g，27.5 mmol)及tBuOK (27.5 mL，1M，27.5 mmol)於無水DMSO (40 mL)之混合物於50℃下經攪拌1.5小時。令該混合物經鹽水(100 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 200 mL)萃取，令結合之有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥並於真空下經濃縮。令殘餘物經矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至50：50溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(1.4 g，16%)。LCMS m/z=377 [M+H]
+
。
製備例114
6-溴-8-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
依循製備例113描述之方法，自2-胺基-5-溴-3-氟苯甲醛和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231)得到呈黃色固體之標的化合物(4.1 g，18%)。LCMS m/z=377 [M+H]
+
。
製備例115
3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-1,5-萘啶-2-胺
依循製備例113描述之方法，自3-胺基吡啶甲醛和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231)得到呈黑色油之標的化合物(3.6 g，52%)。LCMS m/z=282 [M+H]
+
。
製備例116
2-胺基-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-羧酸甲酯
對6-溴-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例107；24.5 g，68.2 mmol)、Et
3
N (47.5 mL，341 mmol)及Pd(dppf)Cl
2
(4.99 g，6.82 mmol)之DMF (250 mL)溶液加入MeOH (700 mL)並令反應混合物於80℃和CO氛圍(50 psi)下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物經過濾並令濾液於真空下經濃縮。令殘餘物懸浮於H
2
O (500 mL)，令固體經過濾，經H
2
O (2 x 50 mL)沖洗且於真空下經乾燥以生成呈褐色固體之標的化合物(91%)。LCMS m/z=339 [M+H]
+
。
製備例117
2-胺基-7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-羧酸甲酯
令MeOH (10 mL)加入至6-溴-7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例113；1.47 g，4.00 mmol)、Et
3
N (789 mg，7.79 mmol)、Pd(OAc)
2
(87.5 mg，0.390 mmol)及DPPP (161 mg，0.39 mmol)於DMF (10 mL)之混合物並令反應混合物於80℃和CO氛圍(50 psi)下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物經過濾並令濾液經減壓下蒸發以生成呈褐色固體之標的化合物(900 mg，65%)。LCMS m/z=357 [M+H]
+
。
製備例118
2-胺基-8-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-羧酸甲酯
令MeOH (50 mL)加入至6-溴-8-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例114；1500 mg，3.98 mmol)、Et
3
N (805 mg，7.95 mmol)、Pd(OAc)
2
(89.3 mg，0.40 mmol)及DPPP (164 mg，0.40 mmol)於DMF (50 mL)之混合物並令反應混合物於80℃和CO氛圍(50 psi)下經攪拌16小時。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮，令殘餘物懸浮於EtOAc (20 mL)且令所生成之固體經過濾。令該固體再次懸浮於EtOAc (20 mL)，令懸浮液經過濾且令固體於真空下經乾燥以生成呈紅色固體之標的化合物(900 mg，63.5%)。LCMS m/z=357 [M+H]
+
。
製備例119
2-{6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-基}-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮
於20℃下對6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例106；2.4 g，80.45 mmol)、Et
3
N (32.60 g，322 mmol)及DMAP (9.83 g，80.5 mmol)於無水二噁烷(600 mL)之混合物逐滴加入鄰苯二甲醯氯(24.5 g，121 mmol)並令反應混合物於90℃下經攪拌15小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物分佈於H
2
O (1000 mL)和DCM (2 x 1100 mL)。令結合之有機層經水(2 x 1000 mL)沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)，經過濾和真空下濃縮以生成褐色固體。令固體懸浮於DCM (約200 mL)，經攪拌30分鐘並隨後經過濾，經H
2
O (100 mL)沖洗且於真空下經乾燥以生成呈淡黃色固體之標的化合物(11 g，32%)。令濾液於真空下經濃縮並經管柱層析(經(EtOAc：DCM：THF=40：40：1)：石油醚=0：100至30：70溶析)純化以生成褐色油，其係自石油醚：DCM=10：1再結晶以生成呈黃色固體之額外產物(6.2 g，18%)。LCMS m/z=429 [M+H]
+
。
製備例120至125
依循製備例119描述之方法，自適當之胺和酞醯氯製備下表之酞醯亞胺。
製備例126
2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-腈
令Pd
2
(dba)
3
(880 mg，0.96 mmol)和BINAP (1.2 g，1.92 mmol)加入至2-{6-溴-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-基}-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例123；4.7 g，9.61 mmol)和Zn(CN)
2
(2.4 g，20.44 mmol)於DMF (60 mL)之懸浮液，令混合物經N
2
脫氣且令反應混合物於100℃下經攪拌18小時。令經冷卻之懸浮液經DCM (100 mL)稀釋，經H
2
O (2 x 100 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於真空下經乾燥。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：DCM=10：90至100：0溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(1.2 g，28.7%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：3.70 (s, 3H), 5.26 (s, 2H), 6.86 (d, 2H), 7.29 (d, 2H), 7.95-8.10 (M，5H), 8.17 (d, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.64 (d, 1H)。
製備例127
2-(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮
於15℃下對2-{6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-基}-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例119；17.20 g，40.15 mmol)之DCM (18 mL)溶液加入TFA (18 mL)並令反應混合物經攪拌17小時。加入H
2
O (50 mL)並令混合物經攪拌15分鐘。所生成之沉澱物經過濾，經H
2
O (20 mL)和DCM (2 x 20 mL)沖洗且隨後於真空下經乾燥以生成呈淡黃色固體之標的化合物(11.3 g，91%)。LCMS m/z=309 [M+H]
+
。
製備例128至133
依循製備例127描述之方法，自適當之喹啉製備下表之化合物。
製備例134
2-胺基-6-氟喹啉-3-醇
令Pd(OH)
2
(47.1 mg，0.067 mmol)加入至6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例106；200 mg，0.67 mmol)之MeOH (10 mL)溶液並令反應混合物於室溫和氫氣氛圍下經攪拌18小時。令反應混合物經過濾並令濾液於真空下經濃縮以生成呈褐色固體之標的化合物。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：6.32 (br s, 2H), 7.12-7.24 (M，2H), 7.55 (dd, 1H), 7.70-7.80 (M，1H)。
製備例135
2-胺基-6-溴喹啉-3-醇
令6-溴-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例107；97 mg，0.27 mmol)於DCM (2 mL)和TFA (2 mL)之溶液於室溫下經攪拌2小時。令反應混合物經減壓下蒸發並令殘餘物懸浮於EtOAc (5 mL)且經NaHCO
3
水溶液中和。令相層分離，令有機相經乾燥且經減壓下蒸發以生成呈黃色固體之標的化合物(583 mg，88%)。LCMS m/z=240 [M+H]
+
。
製備例136
6-溴-2-(三級丁基胺基)喹啉-3-醇
於0℃下對乙酸6-溴-1-氧橋喹啉-3-基酯(製備例100；2.53 g，8.94 mmol)和三級丁胺(0.92 mL，8.74 mmol)之DCM (100 mL)溶液分批加入Ts
2
O (8.75 g，26.8 mmol)以維持反應混合物之溫度低於5℃且令該反應混合物經攪拌20分鐘。加入額外之三級丁胺(1.0當量)和Ts
2
O (0.5當量)並令反應混合物經攪拌30分鐘。令反應混合物經1N NaOH (10 mL)和H
2
O (10 mL)沖洗，隨後置於硫酸鎂上乾燥且經過濾和真空下濃縮。令產物溶解於MeOH (60 mL)，加入K
2
CO
3
(2.79 g，17.9 mmol)且令反應混合物於室溫下經攪拌18小時。令該混合物於真空下經濃縮，令殘餘物懸浮於DCM且經過濾。令濾液倒入至冷H
2
O，加入飽和NH
4
Cl且令混合物經DCM (4 x 50 mL)萃取。令結合之有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經ISCO® (經9：1 DCM/MeOH溶析)純化以生成黃色泡沫(1.0 g，37.9%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.53-1.65 (M，9H), 6.93 (s, 1H), 7.34-7.41 (M，1H), 7.46 (d, 1H), 7.51 (d, 1H)。
製備例137
2-胺基-7-氟-1,5-萘啶-3-醇三氟乙酸酯
令7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-1,5-萘啶-2-胺(製備例111；155 mg，0.518 mmol)之TFA (4 mL)溶液於室溫下經攪拌16小時。令褐色溶液於真空下經濃縮，與EtOAc共沸且令產物於真空下經乾燥以生成呈褐色固體之標的化合物(92.8 mg，100%)。LCMS m/z=180 [M+H]
+
。
製備例138
2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-醇三氟乙酸鹽
依循製備例137描述之方法，自3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-7-甲基-1,6-萘啶-2-胺(製備例110)得到標的化合物(990 mg，88%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：2.60 (s, 3H), 7.32 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.75 (br s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 11.61 (br s, 1H)。
製備例139
2-胺基-1,5-萘啶-3-醇三氟乙酸鹽
依循製備例137描述之方法，自3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-1,5-萘啶-2-胺(製備例115)得到標的化合物(3.5 g，92%)。LCMS m/z=276 [M+H]
+
。
製備例140
2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇
令7-氯-6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例108；1 g，3.01 mmol)於DCM (4 mL)和TFA (4 mL)之溶液於室溫下經攪拌1小時。令混合物於真空下經濃縮，令殘餘物經NaHCO
3
水溶液沖洗並令所生成之固體經過濾且經乾燥以生成呈灰色固體之標的化合物(600 mg，94%)。LCMS m/z=213 [M+H]
+
。
製備例141
(3-羥基-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯
對2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-醇三氟乙酸鹽(製備例138；970 mg，3.35 mmol)於THF (10 mL)和H
2
O (3 mL)之溶液加入NaOH (537 mg，13.4 mmol)、DMAP (82 mg，0.671 mmol)及Boc
2
O (952 mg，4.36 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令反應物經1N HCl中和至pH 6並令混合物經EtOAc (2 x 20 mL)萃取。令結合之有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥並於真空下經濃縮。令殘餘物經管柱層析(矽膠管柱；經MeOH：DCM=0：100至6：94溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(500 mg，54%)。LCMS m/z=276 [M+H]
+
。
製備例142
(3-羥基-1,5-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯
依循製備例141描述之方法，自2-胺基-1,5-萘啶-3-醇三氟乙酸鹽(製備例139)得到呈褐色固體之標的化合物(710 mg，21.4%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：1.48 (s, 9H), 7.47-7.50 (M，2H), 8.10 (d, 1H), 8.70 (br s, 1H), 8.86 (s, 1H), 11.00-11.46 (M，1H)。
製備例143
(7-氟-3-羥基-1,5-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯
對2-胺基-7-氟-1,5-萘啶-3-醇三氟乙酸酯(製備例137；92.8 mg，0.518 mmol)於THF (5 mL)和H
2
O (1 mL)之溶液加入NaOH
(aq)
以調整pH至9，隨後加入DMAP (12.7 mg，0.104 mmol)和Boc
2
O (147 mg，0.67 mmol)且令反應混合物於20℃下經攪拌4小時。令該反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經MeOH：DCM=0：100至5：95溶析)純化以生成呈亮黃色固體之標的化合物(65 mg，45%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：1.49 (s, 9H), 6.76 (br s, 1H), 7.54 (s, 1H), 8.79 (d, 1H), 8.98-8.90 (M，1H), 11.29 (br s, 1H)。
製備例144
(3-羥基-6-甲基-1,5-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯
於室溫下對3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-6-甲基-1,5-萘啶-2-胺(製備例112；1.64 g，5.55 mmol)於DCM (7.0 mL)之懸浮液加入TFA (7.0 mL，94 mmol)並令反應混合物於25℃下經攪拌7小時。令褐色溶液於真空下經濃縮並經與MeOH (20 mL)和EtOAc (20 mL)共蒸發以生成黃色固體(1.61 g)。令該固體溶解於THF (14 mL)和H
2
O (3 mL)，加入NaOH (666 mg，16.7 mmol)、DMAP (136 mg，1.11 mmol)及Boc
2
O (970 mg，4.44 mmol)且令所生成之褐色溶液於25℃下經攪拌4小時。加入額外之NaOH (222 mg，5.55 mmol)之H
2
O (3 mL)溶液和Boc
2
O (606 mg，2.78 mmol)並令反應混合物於25℃下經攪拌16小時。令反應物經1N HCl中和並隨後經EtOAc (3 x 50 mL)萃取。令結合之有機層經乾燥(Na
2
SO
4
)並於真空下經濃縮且令粗產物經管柱層析(矽膠；經MeOH：DCM=0：100至5：95溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(400 mg，26.2%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：1.47 (s, 9H), 2.60 (s, 3H), 7.24-7.55 (M，2H), 7.98 (d, 1H), 8.84 (s, 1H), 11.04 (br s, 1H)。
製備例145至153
於0℃下對適當之醇(1當量)、喹啉酚(1當量)及PPh
3
(3當量)之無水THF (10至12.5 mL/mmol)溶液逐滴加入DIAD (3當量)並令反應混合物於25℃下經攪拌15小時。令該反應混合物於真空下經濃縮以生成粗產物，其係經矽膠層析(經適當梯度之石油醚：EtOAc溶析)純化以生成標的化合物。
製備例154
{3-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基}乙酸三級丁酯
依循製備例145至153描述之方法，自{3-[(2R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基}乙酸三級丁酯(製備例24)和(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例105)製備呈黃色液體之標的化合物(93 mg)。LCMS m/z=579 [M+H]
+
。
製備例155
(3-{(1S)-1-[5-氰基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯
依循製備例145至153描述之方法，自(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例105)和3-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例31)製備呈褐色油之標的化合物(170 mg，95.2%)。LCMS m/z=496 [M+Na]
+
。
製備例156
3-(1-{[6-溴-2-(三級丁基胺基)喹啉-3-基]氧基}乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈
依循類似於製備例145至153描述之方法，除了反應使用1.2當量DIAD和PPh
3
之外，自3-(1-羥基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例30)和6-溴-2-(三級丁基胺基)喹啉-3-醇(製備例136)製備呈灰色固體之標的化合物(100 mg，21.7%)。LCMS m/z=492 [M+H]
+
。
製備例157
3-{(1S)-1-[(5,8-二氟-1-氧橋喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
於室溫下對5,8-二氟喹啉-3-醇1-氧化物(製備例104；300 mg，1.52 mmol)、3-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例28；330 mg，1.34 mmol)及Ph
3
P樹脂(1390 mg，4.18 mmol)於無水THF (14 mL)和DMF (2.4 mL)之黃色混合物逐滴加入DIAD (846 mg，4.18 mmol)。令混合物經N
2
清洗，於室溫下經攪拌30分鐘且隨後於50℃下經加熱16小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至60：40溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物(47.5%)。LCMS m/z=426 [M+H]
+
。
製備例158
3-{(1S)-1-[(6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
令氯化烯丙基鈀二聚體(674 mg，1.84 mmol)和(
S
)-1-[(
R P
)-2-(二環己基膦基)二茂鐵基]乙基二(三級丁基)膦(2.66 g，4.80 mmol)於甲苯(250 mL)之混合物經攪拌20分鐘。加入3-溴-6,8-二氟喹啉(18.04 g，73.9 mmol)和3-[(1S)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例27；20.04 g，81.4 mmol)並令反應混合物經攪拌直至得到溶液。加入Cs
2
CO
3
(49.9 g，153 mmol)並令反應混合物於105℃(內部溫度)下經攪拌22小時。隨後令該反應混合物經冷卻至室溫。令殘餘物分佈於EtOAc (200 mL)和H
2
O (200 mL)並令相層分離。令水相經EtOAc (2 x 200 mL)萃取並令結合之有機萃取液經鹽水沖洗(50 mL)，經乾燥(MgSO
4
)，經通過寅氏鹽®過濾且令濾液於減壓下經濃縮。令粗產物經管柱層析(金黃矽膠管柱；經庚烷：EtOAc= 100：0至70：30溶析)純化以生成呈玻璃樣固體之標的化合物(23.1 g，76.3%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.71 (d, 3H), 3.96 (s, 3H), 5.98-6.02 (M，1H), 6.64 (s, 1H), 7.00-7.45 (M，4H), 7.83 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 8.17 (d, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.70 (s, 1H)。
製備例159
3-{(1S)-1-[(6,8-二氟-1-氧橋喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
令m-CPBA (72.47 g，290 mmol)加入至3-{(1S)-1-[(6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例158；30.5 g，74.5 mmol)之DCM (700 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令該混合物經冷卻至-1.9℃並以1 mL/分鐘之速率加入飽和Na
2
SO
3
溶液(25 mL)。加入2M Na
2
CO
3
溶液(400 mL)，令混合物經攪拌15分鐘並令相層分離。令水相經DCM (200 mL)萃取，令結合之有機萃取液經鹽水(250 mL)沖洗，隨後置於硫酸鎂上乾燥且經過濾和真空下濃縮。令粗產物經急速管柱矽膠層析(經EtOAc：庚烷=30：70至75：25溶析)純化以生成呈淡橙色泡沫之標的化合物(17.33 g，55%)。LCMS m/z=426 [M+H]
+
。
製備例160
2-(3-{(1S)-1-[5-胺基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮
令TFA (1 mL)加入至{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}胺甲酸三級丁酯(製備例148；70 mg，0.1 mmol)之DCM (2 mL)溶液並令反應混合物於25℃下經攪拌1小時。令該反應混合物經減壓下蒸發並令粗產物懸浮於EtOAc (20 mL)且經H
2
O (5 mL)和鹽水(5 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發以生成呈黃色液體之標的化合物(50 mg，98%)。LCMS m/z=572 [M+H]
+
。
製備例161
5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基)-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
令K
2
CO
3
(213 mg，1.54 mmol)加入至5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基)-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例151；230 mg，0.441 mmol)之DMSO (7.5 mL)溶液並令混合物經攪拌10分鐘。加入H
2
O
2
(1.5 mL)並令反應混合物經攪拌1小時。加入水(100 mL)並令水溶性混合物經DCM (3 x 90 mL)萃取。令結合之有機萃取液經鹽水(100 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成呈黃色油之標的化合物(182 mg，76.5%)。LCMS m/z=548 [M+H
2
O]
+
。
製備例162
5-[(1S)-1-{[7-氯-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
依循製備例161描述之方法，自5-[(1S)-1-{[7-氯-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例152)得到呈黃色油之標的化合物(160 mg，97%)。LCMS m/z=592 [M+H]
+
。
製備例163
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯並醯肼
對3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例145；300 mg，0.56 mmol)之MeOH (15 mL)溶液加入聯胺水合物(1.5 mL，15 mmol)並令反應混合物於15℃下經攪拌60小時。令該反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經HPLC (Agela Durashell C18管柱；經0.05% NH
4
OH水溶液：MeCN=30：70至60：40溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(96 mg，42%)。LCMS m/z=407 [M+H]
+
。
製備例164
(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(N-羥基甲脒)-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯
於室溫下對(3-{(1S)-1-[5-氰基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例155；170 mg，0.36 mmol)於無水MeOH (2 mL)和THF (2 mL)之溶液加入NH
2
OH
.
HCl (37.4 mg，0.54 mmol)和Et
3
N (109 mg，1.08 mmol)並令反應混合物於80℃下經攪拌20小時。令經冷卻之反應混合物經H
2
O (10 mL)驟冷並經EtOAc (3 x 20 mL)萃取。令結合之有機層經鹽水(10 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且經過濾和真空下濃縮以生成粗產物。令該粗產物經管柱層析(矽膠；經MeOH：DCM=0：100至5：95溶析)純化以生成呈無色油之標的化合物(156 mg，85.8%)。LCMS m/z=507 [M+H]
+
。
製備例165
3-{(1S)-1-[(2-氯-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
令TsCl (194 mg，1.02 mmol)之DCM (2 mL)溶液加入至3-{(1S)-1-[(5,8-二氟-1-氧橋喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例157；360 mg，0.846 mmol)和DIPEA (219 mg，1.69 mmol)於DCM (6 mL)的經冰冷卻之溶液並令溶液於室溫下經攪拌18小時。令反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至20：80溶析)純化以生成標的化合物(70.1%)。LCMS m/z=444 [M+H]
+
。
製備例166
3-[(1S)-1-({5,8-二氟-2-[(4-甲氧基苄基)胺基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
對3-{(1S)-1-[(2-氯-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例165；300 mg，0.68 mmol)之THF (8 mL)溶液加入PMB-NH
2
(464 mg，3.38 mmol)和DIPEA (0.353 mL，2.03 mmol)並令反應混合物於70℃下經加熱40小時。令經冷卻之反應混合物於減壓下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至20：80溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物(240 mg，65.2%)。LCMS m/z=567 [M+Na]
+
。
製備例167至180
於0℃下對適當之醇(1當量)、喹啉酚(1當量)及PPh
3
(3當量)之無水THF (10至12.5 mL/mmol)溶液逐滴加入DIAD (3當量)並令反應混合物於25℃下經攪拌15小時。令該反應混合物於真空下經濃縮以生成粗產物，其係經矽膠層析(經適當梯度之石油醚：EtOAc溶析)純化以生成標的化合物。
製備例181至184
於0℃下對(1R)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例52；1當量)及適當之喹啉酚(1當量)和PPh
3
(3當量)之無水THF (10至12.5 mL/mmol)溶液逐滴加入DIAD (3當量)並令反應混合物於25℃下經攪拌15小時。令該反應混合物於真空下經濃縮以生成粗產物，其係經矽膠層析(經適當梯度之石油醚：EtOAc溶析)純化以生成標的化合物。
製備例185
5,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉1-氧化物
令DIAD (903 mg，4.46 mmol)逐滴加入至5,8-二氟喹啉-3-醇1-氧化物(製備例104；400.0 mg，2.03 mmol)、(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例53；420 mg，2.03 mmol)及Ph
3
P樹脂(1490 mg，4.46 mmol)於無水THF (10 mL)/DMF (1.0 mL)之懸浮液，令混合物經N
2
清洗並令反應混合物於室溫下經攪拌5分鐘且隨後於50℃下經攪拌18小時。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經MeOH：DCM=0：100至95：5溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物(650 mg，83%)。LCMS m/z=387 [M+H]
+
。
製備例186
6-溴-N-三級丁基-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令PPh
3
(709 mg，2.70 mmol)和DIAD (546 mg，2.70 mmol)之THF (10.7 mL)溶液經冷卻至0℃並隨後加入1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例54；400 mg，1.93 mmol)和6-溴-2-(三級丁基胺基)喹啉-3-醇(製備例136；627 mg，2.12 mmol)之THF (10.7 mL)溶液。令反應混合物於0℃下經攪拌5分鐘且於室溫下經攪拌18小時，隨後經過濾且令濾液於真空下經濃縮。令粗產物經ISCO管柱矽膠層析(經己烷：EtOAc=15：85至50：50溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(830 mg，89%)。
1
H NMR (CDCl
3
, 400 MHz) δ：1.54 (s, 9H), 1.79 (d, 3H), 5.45 (s, 1H), 5.79 (q, 1H), 6.52-6.56 (M，1H), 6.58 (t, 1H), 7.34-7.41 (M，2H), 7.41-7.48 (M，2H), 7.63 (d, 1H), 7.84-7.89 (M，1H), 8.59 (d, 1H)。
製備例187
2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-7-氟-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯
對2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-3-羥基-7-氟喹啉-6-羧酸甲酯(製備例129；120 mg，0.328 mmol)之無水THF (2 mL)溶液加入1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例54；81.5 mg，0.39 mmol)和PPh
3
(172 mg，0.66 mmol)。令反應混合物於0℃下經攪拌，逐滴加入DIAD (132 mg，0.655 mmol)且令反應混合物於20℃下經攪拌16小時。令該反應混合物經EtOAc (10 mL)稀釋，經鹽水(3 x 5 mL)沖洗，令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥且經過濾和真空下濃縮。令粗殘餘物經矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至30：70溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(150 mg，82.4%)。LCMS m/z=578 [M+Na]
+
。
製備例188
(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯
對(1R)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例52；12.0 g，43.12 mmol)和PPh
3
(13.80 g，52.6 mmol)於THF (120 mL)的經冷卻(-6℃)之懸浮液逐滴加入DIAD (9.34 mL，47.4 mmol)以維持內部溫度低於3℃。令反應混合物於-6℃下經攪拌10分鐘並隨後經15分鐘逐滴加入(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例105；11.60 g，43.1 mmol)之THF (40 mL)溶液。令反應混合物緩慢回溫至室溫並經攪拌17小時。令該反應混合物分佈於MTBE (120 mL)和1N NaOH (80 mL)，令相層分離且令水相經MTBE (120 mL)萃取。令結合之有機相先後經1N NaOH (80 mL)和鹽水(80 mL)沖洗並置於硫酸鎂上乾燥。令混合物經通過寅氏鹽®墊過濾，經MTBE (120 mL)沖洗且令濾液於減壓下經濃縮。令殘餘物經與Et
2
O共沸並隨後經全自動快速層析Rf (金黃矽膠管柱；經EtOAc：DCM=0：100至20：80溶析)純化以生成標的化合物。LCMS m/z=528 [M+H]
+
。
製備例189
3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-胺
令TFA (10 mL，187 mmol)逐滴加入至(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例188；9.9 g，18.74 mmol)之DCM (50 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌17小時。加入額外之TFA (2 mL)並令反應混合物再經攪拌24小時。令溶液於減壓下經濃縮並令殘餘物與DCM (20 mL)和庚烷(200 mL)共沸。令粗產物分佈於1N NaOH (150 mL)和DCM (100 mL)並令相層分離。令水相經DCM (100 mL)萃取，令結合之有機層置於硫酸鎂上乾燥，經過濾且於減壓下經濃縮。令產物自熱EtOAc/庚烷再結晶以生成呈白色固體之標的化合物(6.71 g)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：1.84 (d, 3H), 5.16 (br s, 2H), 5.82-5.87 (M，1H), 6.60 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.98-7.00 (M，1H), 7.12-7.18 (M，2H), 7.52-7.58 (M，2H), 7.62 (s, 1H), 7.88 (s, 1H)。
製備例190
2-(三級丁基胺基)-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-腈
對6-溴-N-三級丁基-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例186；600 mg，1.24 mmol)於t-BuOH (6 mL)和H
2
O (6 mL)之溶液加入K
3
Fe(CN)
6
(209 mg，0.495 mmol)、與聚合物鍵結之Pd(PPh
3
)
4
(71.6 mg，0.062 mmol)及Polycat® 5觸媒(1M，0.31 mL，0.31 mmol)，令系統經N
2
清洗2分鐘且隨後於85℃下經攪拌18小時。令經冷卻之反應混合物經通過寅氏鹽®過濾並經EtOAc沖洗。令濾液經鹽水和H
2
O沖洗並置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮。令粗產物經矽膠筒(經庚烷：EtOAc=50：50溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物。LCMS m/z=431 [M+H]
+
。
製備例191
6-溴-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令甲磺酸1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯(製備例57；376.0 mg，1.41 mmol)、2-胺基-6-溴喹啉-3-醇(製備例135；280.0 mg，1.17 mmol)及Cs
2
CO
3
(763.0 mg，2.34 mmol)於MeCN (15 mL)之懸浮液於60℃下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令所生成之黃色固體經急速矽膠層析(經DCM：MeOH=100：0至85：15溶析)純化以生成呈黃色固體之標的產物(360.0 mg，74.9%)。LCMS m/z=411 [M+H]
+
。
製備例192
2-胺基-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-腈
令氮氣冒泡通過6-溴-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例191；360 mg，0.88 mmol)、Pd
2
(dba)
3
(121.0 mg，0.132 mmol)、tBuXPhos (123.0 mg，0.26 mmol)、Zn(CN)
2
(155.0 mg，1.32 mmol)及TMEDA (20.4 mg，0.175 mmol)於無水DMF (10 mL)之混合物，令反應管經密封且令反應混合物於微波照射1.5小時下經加熱至160℃。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經DCM：MeOH=100：0至92：8溶析)純化以生成呈黃色固體之標的產物(270.0 mg，86.3%)。LCMS m/z=357 [M+H]
+
。
製備例193
2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸
於氮氣下對3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)喹啉-6-羧酸甲酯(製備例171；670 mg，1.12 mmol)和KOH (188 mg，3.36 mmol)之1,4-二噁烷/H
2
O (40 mL/20 mL)溶液加入tBuXPhos (47.5 mg，0.112 mmol)和Pd
2
(dba)
3
(51.3 mg，0.056 mmol)。令混合物經N
2
脫氣並令反應混合物於90℃下經攪拌3小時。令該混合物於真空下經濃縮以除去有機溶劑並經1N HCl調整pH至6。令混合物經DCM (3 x 20 mL)萃取並經H
2
O (5 mL)和鹽水(5 mL)沖洗。令混合物經過濾並令濾餅經MTBE (2 x 10 mL)沖洗且隨後於真空下經乾燥以生成呈褐色固體之標的化合物(438 mg)。LCMS m/z=392 [M+H]
+
。
製備例194
1-(2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-基)乙酮
對2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸(製備例193；150 mg，0.38 mmol)之DMF (3 mL)溶液加入MeNHOMe HCl (77.1 mg，0.58 mmol)、DIPEA (297 mg，2.3 mmol)及HATU (291 mg，0.767 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令混合物經H
2
O (5 mL)驟冷並經EtOAc：THF (v：v=3：1；5 x 15 mL)萃取。令結合之有機相置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成黃色膠。令該膠溶解於THF (10 mL)，令溶液經冷卻至0℃，加入MeMgBr (4 mL，3M Et
2
O溶液)且令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令懸浮液經1N HCl (3 mL)驟冷並於真空下經濃縮。令殘餘物分佈於H
2
O (15 mL)和EtOAc/THF (v/v=2/1, 40 mL)，令相層分離且令有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發以生成呈黃色膠之標的化合物(150 mg)。LCMS m/z=390 [M+H]
+
。
製備例195
2-胺基-7-氟-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸
對2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-7-氟-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例187；150 mg，0.270 mmol)之THF/MeOH/H
2
O (2 mL/2 mL/2 mL)溶液加入NaOH (54.0 mg，1.35 mmol)並令反應混合物於20℃下經攪拌12小時。藉由使用HCl水溶液調整反應混合物之pH至6，令混合物經減壓下蒸發且令產物經冷凍乾燥以生成白色固體(111 mg)，其未經進一步純化而使用。LCMS m/z=412 [M+H]
+
。
製備例196
6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令MsCl (0.023 mL，0.298 mmol)逐滴加入至1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙醇(製備例85；62 mg，0.20 mmol)和Et
3
N (60.3 mg，0.60 mmol)於無水DCM (4 mL)之0℃溶液並令溶液回溫至室溫且經攪拌1.5小時。令反應混合物經DCM (5 mL)稀釋，經鹽水(5 mL)驟冷且令相層分離。令有機相經NaHCO
3
(5 mL)和鹽水(5 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮以生成亮黃色油。令該油、2-胺基-6-氟喹啉-3-醇(製備例134；40 mg，0.23 mmol)及Cs
2
CO
3
(200 mg，0.615 mmol)於MeCN (5 mL)之懸浮液於80℃下經攪拌16小時。令反應混合物經過濾並令濾液於真空下經濃縮。令殘餘物經急速矽膠管柱(經石油醚：EtOAc=100：0至0：100溶析)純化以生成呈亮褐色油之標的化合物(42 mg，43%)。LCMS m/z=473 [M+H]
+
。
製備例197
7-氯-6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
依循製備例196描述之方法，自1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙醇(製備例85)和2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇(製備例140)得到標的化合物(50 mg，35%)。LCMS m/z=507 [M+H]
+
。
製備例198至206
於0℃下對適當之醇(1當量)、喹啉酚或萘啶醇(1當量)及PPh
3
(3當量)之無水THF (10至12.5 mL/mmol)溶液逐滴加入DIAD (3當量)並令反應混合物於25℃下經攪拌15小時。令該反應混合物於真空下經濃縮以生成粗產物，其係經矽膠層析(經適當梯度之石油醚：EtOAc溶析)純化以生成標的化合物。
製備例207
{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸三級丁酯
令DIAD (86.3 mg，0.427 mmol)之THF (0.5 mL)溶液逐滴加入至於冰/丙酮浴中的PPh
3
(112 mg，0.43 mmol)之THF (2 mL)溶液並令溶液於0℃下經攪拌5分鐘。先後加入2-(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例127；101 mg，0.328 mmol)於THF (0.7 mL)之懸浮液和{6-[(1R)-1-羥基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸甲酯(製備例90；112 mg，0.328 mmol)之THF (0.3 mL)溶液並令反應混合物回溫至室溫且經攪拌16小時。令該混合物經EtOAc稀釋，經H
2
O (10 mL)、1N NaOH (10 mL)及鹽水(10 mL)沖洗並隨後置於硫酸鎂上乾燥且經過濾和真空下濃縮。令粗產物經矽膠層析(經EtOAc：庚烷=0：100至50：50溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(147.9 mg)。LCMS m/z=633 [M+H]
+
。
製備例208至210
於0℃下對適當之醇(1當量)、喹啉酚或萘啶醇(1當量)及PPh
3
(3當量)之無水THF (10至12.5 mL/mmol)溶液逐滴加入DIAD (3當量)並令反應混合物於25℃下經攪拌15小時。令該反應混合物於真空下經濃縮以生成粗產物，其係經矽膠層析(經適當梯度之石油醚：EtOAc溶析)純化以生成標的化合物。
製備例211
2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯
對1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙醇(製備例86；800 mg，2.23 mmol)和2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-3-羥基-7-氟喹啉-6-羧酸甲酯(製備例129；899 mg，2.45 mmol)之THF (15 mL)溶液加入PPh
3
(878 mg，3.35 mmol)和DIAD (677 mg，3.35 mmol)並令反應混合物於30℃和氮氣下經攪拌16小時。令黃色溶液經H
2
O (15 mL)稀釋，經EtOAc (3 x 15 mL)萃取並令結合之有機萃取液經鹽水沖洗(40 mL)，置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮。令黃色膠經管柱層析(經EtOAc：石油醚=5：95至50：50溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(1000 mg，63.4%)。LCMS m/z=707 [M+H]
+
。
製備例212
2-胺基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯
對2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例211；1000 mg，1.42 mmol)於EtOH (40 mL)之懸浮液加入聯胺水合物(8 mL)並令黃色懸浮液於85℃下經攪拌40分鐘。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物懸浮於MeOH (15 mL)，經過濾且令濾液於真空下經濃縮以生成粗產物。令該粗產物經管柱層析(矽膠；經MeOH：DCM=0：100至20：80溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(430 mg，52.7%)。LCMS m/z=577 [M+H]
+
。
製備例213
2-胺基-3-{1-[1-(2-{[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯
於-60℃下令NH
3
氣冒泡通過3-{1-[1-(2-{[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)喹啉-6-羧酸甲酯(製備例209；9.5 g，13.25 mmol)之THF (150 mL)溶液並令反應混合物於密封瓶中於室溫下經攪拌16小時。令溶液經減壓下蒸發以生成呈亮黃色固體之標的化合物。LCMS m/z=587 [M+H]
+
。
製備例214
2-胺基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸
對2-胺基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例212；380 mg，0.66 mmol)之MeOH (3 mL)溶液加入2N NaOH (3 mL，6 mmol)並令黃色溶液於15℃下經攪拌80小時。加入額外之2N NaOH (0.5 mL，1 mmol)並令反應混合物於30℃下經攪拌4.5小時。令混合物經1N HCl中和並令所生成之懸浮液經EtOAc (3 x 5 mL)萃取。令結合之有機萃取液經鹽水(10 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發以生成呈黃色固體之標的化合物(320 mg，86.3%)。LCMS m/z=563 [M+H]
+
。
製備例215
2-胺基-3-{1-[1-(2-{[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
於-60℃下令NH
3
氣冒泡通過2-胺基-3-{1-[1-(2-{[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例213；7.78 g，0.86 mmol)之MeOH (70 mL)溶液達10分鐘，隨後令反應混合物於高壓釜中經密封且於80℃下經攪拌90小時。令經冷卻之溶液於真空下經濃縮並令殘餘物於真空下經乾燥以生成粗產物。令該粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=30：70至100：0溶析)純化以生成呈亮黃色固體之標的化合物(2.2 g，29%)。LCMS m/z=572 [M+H]
+
。
製備例216
2-胺基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
對2-胺基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸(製備例214；310 mg，0.55 mmol)於THF (3 mL)之黃色溶液加入HATU (209 mg，0.55 mmol)和NH
4
Cl (29.5 mg，0.55 mmol)並令混合物於15℃下經攪拌20分鐘。加入Et
3
N (167 mg，1.65 mmol)並令反應混合物經攪拌36小時。令黃色懸浮液經H
2
O (8 mL)稀釋，經EtOAc (3 x 8 mL)萃取，令結合之有機萃取液經鹽水(20 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮。令粗產物經製備性TLC (經EtOAc溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(60 mg，19%)。LCMS m/z=562 [M+H]
+
。
製備例217
2-胺基-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令氯化鈣(518 mg，4.67 mmol)加入至2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例208；1.0 g，1.56 mmol)之甲醇性NH
3
(30 mL，7.0 M)溶液並令反應混合物於密封管中於80℃下經攪拌18小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮，加入H
2
O (10 mL)且令溶液經DCM (3 x 20 mL)萃取。令結合之有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發以生成呈黃色膠之標的化合物(600 mg，77.5%)。LCMS m/z=498 [M+H]
+
。
製備例218
(6-氟-3-{(1S)-1-[1-(2-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯
於室溫下對{6-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯(製備例200；103 mg，0.184 mmol)之MeOH/THF (1 mL/3 mL)溶液分批加入NaBH
4
(34.8 mg，0.92 mmol)。令反應混合物於室溫下經攪拌3小時，隨後加入額外之NaBH
4
(34.8 mg，0.92 mmol)且令反應混合物再經攪拌3小時。令混合物倒入至飽和NaHCO
3
水溶液並於真空下經濃縮以除去有機溶劑且隨後經EtOAc (2 x 15 mL)萃取。令結合之有機層經乾燥(Na
2
SO
4
)並經過濾和真空下濃縮。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至80：20溶析)純化以生成呈亮黃色膠之標的化合物(79 mg，81%)。LCMS m/z=533 [M+H]
+
。
製備例219
{6-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸
對{6-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸甲酯(製備例199；190 mg，0.34 mmol)之無水THF/MeOH (3 mL/3 mL)溶液加入2M NaOH (1.1 mL，2.2 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令該反應混合物經EtOAc (3 x 10 mL)萃取，令結合之有機萃取液經H
2
O (2 x 5 mL)沖洗，令水層結合且經1N HCl酸化至pH 3至5。令該水溶液經EtOAc (3 x 10 mL)萃取，令結合之有機層置於無水硫酸鈉上乾燥，經過濾和真空下濃縮以生成呈亮黃色膠之標的化合物(80 mg，43%)。LCMS m/z=547 [M+H]
+
。
製備例220
(3-{(1S)-1-[1-(2-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯
於0℃下對{6-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-7-甲基-1,6-萘啶-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基}乙酸甲酯(製備例204；120 mg，0.215 mmol)之無水THF (2 mL)溶液加入LiAlH
4
(16.3 mg，0.43 mmol)並令反應混合物經攪拌1小時。藉由先後加入H
2
O (16.3 mL)和15% NaOH水溶液(16.3 mL)使該反應混合物驟冷並令混合物於室溫下經攪拌15分鐘。令所生成之固體經過濾並令濾液經減壓下蒸發以生成呈褐色固體之標的化合物。LCMS m/z=531 [M+H]
+
。
製備例221
2-胺基-3-[(1S)-1-{5-(1H-吡唑-1-基)-1-[(2S)-四氫-2H-哌喃-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}乙氧基]喹啉-6-羧醯胺
令2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-3-[(1S)-1-{5-(1H-吡唑-1-基)-1-[(2S)-四氫-2H-哌喃-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}乙氧基]喹啉-6-羧酸甲酯(製備例203；1.25 g，1.95 mmol)之甲醇性NH
3
(25 mL，7M)溶液於密封管中於80℃下經攪拌18小時。令經冷卻之溶液經減壓下蒸發以生成黃色膠。令該膠溶解於新配製之甲醇性NH
3
(25 mL，7M)並令反應混合物於密封管中於80℃下經攪拌66小時。令經冷卻之溶液經減壓下蒸發以生成呈紅色膠之標的化合物。LCMS m/z=499 [M+H]
+
。
製備例222
2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例206；120 mg，0.17 mmol)之甲醇性NH
3
(約8M，10 mL)溶液於密封管中於80℃下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物經減壓下蒸發以生成標的化合物，其係直接用於下一個步驟。LCMS m/z=585 [M+Na]
+
。
製備例223
6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令2-(6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例210；421 mg，0.65 mmol)和N
2
H
4 .
H
2
O (3 mL)於EtOH (20 mL)之黃色溶液於85℃下經攪拌1小時。令該黃色溶液於真空下經濃縮，加入MeOH (20 mL)且令黃色固體經過濾。令濾液於真空下經濃縮並令黃色油經製備性TLC (DCM：MeOH=20：1)純化以生成呈黃色油之標的化合物(241 mg，71.6%)。LCMS m/z=519 [M+H]
+
。
製備例224
2-(6-氟-3-{1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮
對1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙酮(製備例84；50 mg，0.21 mmol)於DMF (2 mL)之黃色溶液加入NaH (13.3 mg，0.333 mmol)並令懸浮液於15℃下經攪拌0.5小時。令該懸浮液經冷卻至0℃，加入SEMCl (55.5 mg，0.333 mmol)且令反應混合物於室溫下經攪拌1.5小時。令懸浮液經H
2
O (5 mL)驟冷並經EtOAc (20 mL)和H
2
O (15 mL)稀釋。令經分離之水相經EtOAc (2 x 15 mL)萃取，令結合之有機萃取液經鹽水(2 x 20 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經製備性TLC (DCM：MeOH=12：1)純化以生成淡黃色油(50 mg，65%)。重複該反應以得到產物(150 mg)。對該黃色油(150 mg，0.405 mmol)之MeOH (10 mL)溶液加入NaBH
4
(58.2 mg，1.54 mmol)並令溶液於室溫下經攪拌2小時。令反應混合物於真空下經濃縮以生成白色殘餘物，令該殘餘物分佈於DCM (20 mL)和H
2
O (15 mL)，令相層分離且令水相經DCM (2 x 15 mL)萃取。令結合之有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成呈無色膠之所欲產物(145 mg，96.1%)。重複該反應以得到產物(195 mg)。於0℃下對該膠(195 mg，0.523 mmol)、2-(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例127；194 mg，0.628 mmol)及PPh
3
(206 mg，0.785 mmol)之THF (11 mL)溶液加入DIAD (159 mg，0.785 mmol)之THF (1 mL)溶液並隨後令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令溶液於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱矽膠層析(經MeOH (NH
4
OH)：DCM=0至1.3%)純化以生成呈淡黃色膠之標的化合物(230 mg，66.3%)。LCMS m/z=663 [M+H]
+
。
製備例225
6-氟-3-{1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
對2-(6-氟-3-{1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例224；230 mg，0.347 mmol)於EtOH (5 mL)之黃色溶液加入N
2
H
4 .
H
2
O (3 mL)並令黃色溶液於85℃下經攪拌1小時。令溶液於真空下經濃縮，令膠懸浮於MeOH (5 mL)且令白色固體經過濾。令濾液於真空下經濃縮並令產物經製備性TLC (經DCM：MeOH：NH
3
=20：1：0.5溶析)純化以生成呈淡黃色膠之所欲產物(110 mg，59.5%)。LCMS m/z=533 [M+H]
+
。
製備例226
1-(6-溴-3-(1
H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙-1,2,2,2-d
4
-1-醇
步驟1
於20℃下對1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例34；2.1 g 7.9 mmol)於THF (10 mL)之黃色溶液加入LiOD之D
2
O (3M，10.5 mL)溶液。經48小時後，令紅色溶液經DCM (3 x 20 mL)萃取，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成呈紅色固體之1-(6-溴-3-(1
H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙-1-酮-2,2,2-d
3
(2.09 g，98.4%)。
步驟2
於25℃下對1-(6-溴-3-(1
H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙-1-酮-2,2,2-d
3
(2.09 g 7.8 mmol)於CD
3
OD (10.0 mL)之黃色溶液加入NaBD
4
(260 mg，6.21 mmol)。經1小時後，令反應混合物經丙酮(5 mL)驟冷並於真空下除去溶劑。令殘餘物經管柱層析(20 g矽膠；EtOAc/PE=0：25%至35%)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(1.96 g，92.7%)。LCMS m/z=272/274 [M+H]
+
。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ：5.33 - 5.26 (M，1H), 6.59 (t, 1H), 7.76 - 7.71 (M，1H), 7.83 (dd, 2H), 8.20 (d, 1H)。
製備例227
(3-(1-(6-溴-3-(1
H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙氧基-1,2,2,2-
d 4
)-6-氟喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯
依循製備例167至180描述之方法，自(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例105)和1-(6-溴-3-(1
H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙-1,2,2,2-d
4
-1-醇(製備例226)得到呈亮黃色固體之標的化合物(2.8 g，73%)。LCMS m/z=530.3/532.3 [M-H]
-
。
1
H NMR (300 MHz, CDCl
3
) δ：1.60 (s, 6H), 1.65 (s, 3H), 6.57 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 7.04 (dd, 1H), 7.16-7.24 (M，1H), 7.45-7.60 (M，3H), 7.86 (s, 1H), 7.90-7.95 (M，2H)。
製備例228
3-(1-羥基乙基-1,2,2,2-d
4
)-4-(1
H
-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
步驟1
於室溫下對3-[(1S)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例27；1.20 g，4.92 mmol)於D
2
O (24 mL)之懸浮液加入NaOD (40重量% D
2
O溶液，1 mL，14.75 mmol)和THF (6 mL)。於室溫下經隔夜攪拌後，LCMS分析顯示生成所欲之中間體。隨後於室溫下一次加入NaBD
4
(210 mg，4.92 mmol)。經攪拌1小時後，令反應混合物經冰浴冷卻，經2M HCl酸化且經乙酸乙酯(3x)萃取。令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經蒸發以生成呈白色固體之3-(1-羥基乙基-1,2,2,2-d
4
)-4-(1
H
-吡唑-1-基)苯甲酸(1.4 g，定量產率)。
步驟2
於室溫下對3-(1-羥基乙基-1,2,2,2-d
4
)-4-(1
H
-吡唑-1-基)苯甲酸(1.40 g，4.92 mmol)之甲醇(25 mL)溶液加入95%濃硫酸(5至6滴)。令所生成之溶液於回流下經加熱10小時，經冷卻至室溫且經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物溶解於乙酸乙酯，經飽和NaHCO
3
沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經蒸發。隨後令粗產物經矽膠(4 g；經0至20%乙酸乙酯之庚烷溶液溶析)純化以生成呈無色油之標的化合物(1.1 g，89%)。LCMS m/z=251.2 [M+H]
+
。
1
H NMR (300 MHz, CDCl
3
) δ：3.95 (s, 3H), 6.53 (t, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.78 (d, 2H), 8.05 (d, 1H), 8.30 (d, 1H)。
製備例229
3-(1-((2-(1,3-二側氧基異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d
4
)-4-(1
H
-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
依循製備例145至153描述之方法，自2-(6,8-二氟-3-羥基喹啉-2-基)-1
H
-異吲哚-1,3(2
H
)-二酮(製備例133)和3-(1-羥基乙基-1,2,2,2-d
4
)-4-(1
H
-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例228)得到呈亮黃色固體之標的化合物(1.35 g，74%)。LCMS m/z=580.8 [M+Na]
+
。
製備例230
(S)-3-(1-((2-(1,3-二側氧基異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈
依循製備例145至153描述之方法，自2-(6,8-二氟-3-羥基喹啉-2-基)-1
H
-異吲哚-1,3(2
H
)-二酮(製備例133)和3-[(1
R
)-1-羥基乙基]-4-(1
H
-吡唑-1-基)苄腈(製備例31)得到呈黃色膠之標的化合物(940 mg，96%)。LCMS
m/z
522.2 [M+1]
+
。
製備例231
2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈
於0℃下令(4-甲氧基苯基)甲醇(75 g，540 mmol)之無水THF (100 mL)溶液逐滴加入至氫化鈉(16.9 g，706 mmol)於無水THF (500 mL)之懸浮液。令所生成之混合物於0℃下經攪拌2小時並隨後經2-溴乙腈(78.1 g，651 mmol)之無水THF (154 mL)溶液逐滴處理1小時。令所生成之反應混合物於室溫下經攪拌16小時。隨後小心地加入飽和氯化銨水溶液(200 mL)。經加入完成後，令混合物經過濾。加入EtOAc (250 mL)並令相層分離。隨後令水層經EtOAc (2 x 250 mL)萃取。令結合之有機層經鹽水(50 mL)沖洗，經乾燥(Na
2
SO
4
)，經過濾且於減壓下經濃縮。隨後令粗產物經急速層析(矽膠；經石油醚：乙酸乙酯=100：0至80：20梯度溶析)純化以生成呈亮黃色液體之標的化合物(60.8 g，63%)。LCMS
m/z
=200.1 [M+Na]
+
。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ：3.81 (s, 3H), 4.19 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 6.90 (d, 2H), 7.28 (d, 2H)。
生物性分析
活體外研究
結合親和性Kd (uM)
使用表面電漿共振(SPR)測定化合物對經純化之鐮刀型紅血球血紅素(HbS)之結合親和性。依據機構審查委員會規約，自波士頓兒童醫院(Boston Children’s Hospital)得到病患之鐮刀型紅血球血液。自同型合子S/S病患之血液得到HbS並藉由使用文獻Antonini and Brunori, Hemoglobin and Myoglobin in their Reactions with Ligands. Amsterdam, London, North-Holland Publishing Company, 1971描述之方法進行純化。藉由離心使全血分離成紅血球和血漿成分，隨後令該血漿經傾析並被丟棄。令堆疊之紅血球經生理食鹽水(0.9% NaCl)沖洗並隨後經2：1冷去離子水稀釋進行裂解。令溶血產物經離心以除去細胞碎片並進一步藉由加入Drabkin氏緩衝液(2.8M磷酸鉀)且經寅氏鹽®離心純化。經由Sephadex® G-25凝膠過濾除去有機磷酸鹽(2,3-BPG)。藉由陽離子交換層析(使用二乙基胺基乙基(DEAE)-Sepharose®快速流並經pH 8.5至pH 7.5之pH梯度溶析)分離HbS、野生型血紅素及血紅素A (HbA)。藉由原態凝膠電泳測定所生成之HbS和HbA的純度並進一步使用HbS級分。
為安定血紅素之四聚體結構，使用雙(3,5-二溴水楊基)反丁烯二酸鹽經β次單位(Lys82-Lys82)使HbS交聯(如描述於文獻Shibayama N.
et al
., J Am Chem Soc 2014, 136, 13, 5097-5105和Shibayama N.
et al
., Biochemistry 1991, 39, 33, 8158-8165)。隨後令經交聯之HbS經生物素化並經訂製之抗生物素鏈菌素感測器捕獲以達到表面上4000至5000共振單位(RU)之蛋白密度。於Sierra感測器MASS-1儀器測試使用SPR與HbS結合之化合物。流洗緩衝液含有100 mM磷酸鉀(pH 7.5)、0.005% Tween-20、1 mM乙二胺四乙酸(EDTA) 及0.1 mg/mL牛血清白蛋白(含有1% DMSO)。化合物樣品係以流速30 µL/分鐘注入達2分鐘連結時間和至少5分鐘解離時間。對每個化合物測試含有至少4種濃度之2或3倍稀釋系列。基於該等化合物於生化檢測之活性(當可取得時)選擇劑量範圍。於每個化合物系列之前和之後進行流洗緩衝液之多重空白注射以使化合物數據於分析軟體中經空白減去。於每個實驗進行陽性對照組以監測並維持表面上HbS之活性。於開始每個數據組時進行DMSO曲線以於分析期間對該數據進行排除體積校正。使用Sierra感測器和Scrubber 2.0軟體進行數據處理和分析。藉由擬合傳感圖至1：1結合模式計算結合親和性(離解常數Kd)。本發明之化合物的Kd值(uM)係示於下述表4。
‘R’-‘T’檢測(遲延HbS之氧合和因此之聚合) IC
50
(uM)
於化合物之存在下進行自氧合(R；鬆弛態) HbS至去氧(T；緊張態) HbS之轉化以測定化合物於去氧條件下安定氧合(R)態之能力。該檢測之進行類似於文獻Oksenberg
et al
., Br J Haematology, 2016, 175, 141–153描述之‘氧解離檢測’。
首先自30 mM化合物之100% DMSO起始儲存液的主系列稀釋盤製備方便檢測之化合物盤。使用聲頻分配自該主系列稀釋盤對方便檢測盤輸送所欲之化合物濃度(167 nL)。令該等盤經冷凍於-20℃下直至需要使用。令經純化之HbS-O
2
(即氧合HbS)經100 mM磷酸鉀緩衝液(pH 7.4)稀釋至3 uM。對該方便檢測盤之每個孔槽加入3 uM儲存溶液(50 uL)並經機械混合8次。經混合後，令該等盤經覆蓋並於室溫和適度搖晃下經培育1小時。經培育後，令該等盤置於去氧環境(＜1% O
2
)下達2小時並監測轉化為去氧HbS與時間之函數。使用索瑞特(Soret)峰於415 nm和430 nm之吸光度分別偵測血紅素之氧合和去氧型式並於0、90及120分鐘讀取吸光度測量值(光學密度(OD))。於700 nm下收集用於校正之背景吸光度。
首先藉由對每個時間點之415 nm和430 nm數據減去700 nm下之基礎吸光度以分析數據並隨後計算415 nm/430 nm數據之比值(比值=[(OD
415
-OD
700
)/(OD
430
-OD
700
)]。使用由上述計算之於時間為0和每個關注時間點的該等比值計算於每個時間點之功效(功效
時間 x=
比值
時間 x
/比值
時間 0
)。藉由僅比較化合物對HbS之功效與藉由陽性對照組化合物妥卡雷索(tucaresol)觀察到之功效計算功效%(功效%=[(功效
時間 x
化合物-功效
時間 x
HbS)/(功效
時間 x
妥卡雷索-功效
時間 x
HbS)]x100)。單點之數據係以功效%報導。對測定該HbS ‘R’-‘T’轉化之達50%抑制作用的化合物濃度(IC
50
(uM))之計算係基於不同化合物濃度之功效%。本發明之化合物的IC
50
值(uM)係示於下述表4。
與HbA共結晶
透過共結晶實驗進一步研究實施例58之化合物與血紅素(Hb)之結合。基於HbS與HbA之結構和功能相似性和結構研究所需之大量材料，使用經純化之HbA以進行該等研究。
依據公開之方法(參閱文獻Lee
et al
., "Crowning proteins: modulating the protein surface properties using crown ethers”, Angew Chem Int Ed Engl 2014; 53(48):13054-13058)使HbA與實施例58之化合物結晶。簡言之，令20 mg/mL HbA之20 mM Tris-HCl (pH 8.0)溶液與等體積之50 mM 18-冠醚-6溶液混合並於20℃下經培育20分鐘。隨後加入實施例58之化合物至最終濃度1.5 mM並進一步再經培育1小時。於20℃下經使用懸滴蒸氣擴散法，藉由混合等體積之蛋白和含有0.1 M Tris-HCl (pH 8.0)、0.2 M Li
2
SO
4
及30至32% PEG 3350之儲存溶液以進行結晶。於約2天內晶體成長至最大尺寸並令該晶體進一步與實施例58之化合物(10 mM)經隔夜浸泡。於阿貢國家實驗室先進光子源(Argonne National Laboratory Advanced Photon Source)使用束線17-ID收集繞射數據。使用autoPROC (Global Phasing Limited)處理數據並使用3WHM (PDB碼)作為起始模式以解析結構。使用COOT (參閱文獻Emsley P., Cowtan K., “Coot: model-building tools for molecular graphics”, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 2004; 60 (Pt 12 Pt 1): 2126-32)和BUSTER (Global Phasing Limited)實施模型建構和細部化。結構之最終解析係1.85埃(Å)。
實施例58之化合物與人HbA錯合的高解析(1.85Å)共晶體結構表示實施例58之化合物與Hb之氧合(R態)構形結合且以雙配位形式結合，該化合物與Hb四聚體之化學計量為2：1。該等結構研究係與上述表4所示之數據(關於本發明之化合物的結合交互作用和所提出之作用機制(即HbS之氧合(R態)的安定化和因此聚合之遲延))相符合。
HbS聚合檢測
此檢測係用於測定本發明之化合物於HbS佔據之變化情況下對HbS聚合之抑制程度。用於此檢測之方法係改編自He和Russell描述之方法(參閱文獻He, Z. and J. E. Russell, "A high-Throughput Microplate Method for Assessing Aggregation of Deoxygenated Hemoglobin S Heterotetramers
in Vitro
", Anal Biochem 306(2): 349-352 (2002))。
令經純化之HbS載入1.25 M磷酸鉀(pH 7.4)並經濃縮至1.1 mM。令血紅素濃度固定於0.15 mM並使用1.25 M磷酸鉀(pH 7.4)令HbS經稀釋至適當之濃度。令本發明之化合物於下述之濃度下加入至0.15 mM HbS：0.03 mM (10%)、0.075 mM (25%)及0.15 mM (50%)。因該等化合物係雙配位結合劑，該濃度係經加倍以計算覆蓋率%(即0.15*0.5= 0.075*2=0.15)。DMSO濃度係與所有化合物濃度、無化合物之對照組及HbA相匹配。經培育後，將HbS溶液(33.5 µL)加入至Costar 96孔槽半區域盤之每個孔槽。為導入去氧，令於1.25 M磷酸鉀製備之1M二硫亞磺酸鈉(16.5 µL)加入至每個孔槽以達最終檢測濃度330 mM並經充分混合。令礦物油(50 µL)覆蓋每個孔槽之溶液以防止再氧化且令該盤置於4℃下5分鐘。經冷培育後，令該等盤置於業已於37℃下經平衡之分光光度計以起始聚合過程(溫度躍變)。於700 nm下監測該反應40分鐘並每經30秒收集數據點。對每個條件使用4個孔槽並令每個分析點之數據平均。使用Graph Pad Prism分析數據並令數據擬合Boltzman S形方程式，其中V50 (t
1/2
)作為遲延時間。使用該DMSO作為起始遲延時間以計算變化%。當擬合該Boltzman S形方程式時，使用所產生之V50誤差附加變化%之誤差。
對10%、25%及50% HbS佔據(n=3)因遲延時間(DT)之增加，藉由增加之遲延時間與HbS佔據% (% HbS Occ)的函數所測量之HbS聚合之遲延係示於下述表5。
HbS聚合之高濃度依賴性說明於較高HbS佔據情況下作用呈現非線性。
全血氧親和性檢測
氧親和性係Hb結合並釋出溶液中之氧的能力之標記。於給定之氧濃度下，藉由測量存在之氧合Hb和去氧Hb的百分比，可測定全血中氧親和性。氧親和性係以p50 (氧分壓，其中溶液中50% Hb已與氧結合)或p20 (氧分壓，其中溶液中20% Hb已與氧結合)表示。藉由p20和p50值向較低之氧分壓移動，證實全血中氧合態Hb之安定性。
為測定本發明之化合物對氧親和性之作用，使用Hemeox分析儀(TCS Scientific)測量人、狗及小鼠之全血的p50和p20。令本發明之化合物加入至血液至濃度1 mM並於25℃和固定旋轉下經培育1小時。選擇化合物濃度1 mM至於全血中約20%血紅素佔據。以相同方式且於相同時間培育含有相同濃度之DMSO但不含有化合物之對照組。經培育後，使用該Hemeox分析儀立即檢測樣品之氧親和性。令血液樣品(50 µL)經Hemox緩衝液(5 mL；TCS Scientific)稀釋，其中該Hemox緩衝液業已經預先培育至37℃。經稀釋後，令樣品載入至分析室並使用壓縮空氣使該樣品完全氧合。一旦樣品達到pO
2
＞150托(torr)，藉由轉移至N
2
以起始測定並記錄為分壓之函數的氧合血紅素%。自儀器讀數記錄每個樣品之p20和p50。依據下式計算報導呈相對於DMSO之變化%的數據：
如下表6所示(以至少n為2收集樣品)，本發明之化合物降低人、狗及小鼠之全血的p20和p50。
活體內研究
小鼠模式
於單一劑量研究中，使用雄性鐮刀型Townes小鼠評估本發明之化合物的功效。依據下表7、8及9所示之量藉由口服餵食管施予本發明之化合物。對照組小鼠接受載體。於0.5小時、1小時、4小時、7小時、10小時及24小時抽取血液(50 µL)。為測定於全血之暴露，使用20 µL樣品。亦評估於0.5小時抽取之血液的細胞鐮刀型化。
於24孔槽盤中使用Hemeox溶液(300 µL)以稀釋得自經處理之動物的紅血球(RBC)至約10
7
細胞/mL並於低氧室(含有5% CO
2
和3% O
2
)內經培育4小時。隨後於室溫下且於鐮刀型化固定溶液中令細胞固定30分鐘並於室溫下經與抗體共軛之TER119 alexa 488 (BioLegend)染色30分鐘，經Hemox緩衝液(200 µL；TCS Scientific)沖洗且以50,000細胞/孔槽塗佈。使用GraphPad Prism (第5版)目視數據。結果係以平均值±該平均值之標準誤差(SEM)表示。使用無母數單因子變異數分析(ANOVA)和隨後之Dunnett氏多重比較以進行統計分析。當p＜0.01時，接受顯著性。
對慢性劑量研究，對6至8隻小鼠(Townes SCD小鼠)每天2次(BID)施予如下表7、8及9所示之量的載體或於載體內的本發明之化合物。經15天給藥後，自所有動物收集血液樣品以載入該Hemeox分析儀以產生氧親和性曲線，使用Idexx血液分析儀進行完整血液分析且如前所述評估細胞鐮刀型化。自R&D系統藉由酶聯免疫吸附測定(ELISA)評估可溶性血管細胞黏附分子1 (sVCAM1)之濃度。結果係示於下表7、8及9。
或彼之互變異構物或該調節劑或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中X、Y、R2
及R3
係如發明內容所定義者。
HbS調節劑能潛在地用於治療多種不同之病症，其包括鐮刀型紅血球疾病(SCD)。
或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中
X係經胺基取代之萘啶或喹啉，其係選自：
；
其中該萘啶之右側環係可選擇地經R1
取代，且其中該喹啉之右側環係可選擇地獨立經1或2個R1
取代；
Y係CH或N；
各R1
獨立地為鹵素；CN；可選擇地經OH取代之(C1
-C4
)烷基；或CONR4
R5
；
R2
和R3
與彼等連接之碳原子一起形成含有1或2個N之5員雜芳基，該5員雜芳基係可選擇地經R6
取代；或
R2
係H；OH；可選擇地經OH或CO2
R4
取代之(C1
-C4
)烷基；可選擇地經OH或CO2
R4
取代之(C1
-C4
)烷氧基；CO2
R4
；CONR4
R5
；SO2
NR4
R4
；NR4
SO2
(C1
‑C4
)烷基；或噁二唑酮；
R3
係H或鹵素；
各R4
獨立地為H或(C1
-C4
)烷基；
各R5
獨立地為H；可選擇地經OH、O(C1
-C4
)烷基或CO2
R4
取代之(C1
-C4
)烷基；SO2
(C1
-C4
)烷基；或可選擇地經OH取代之(C3
-C6
)環烷基；且
R6
係可選擇地經OH、CO2
R4
或CONR4
R5
取代之(C1
-C4
)烷基。
下述係本發明之第一方面的許多實施態樣(E)，其中方便地E1係與該第一方面相同。
E1 一種式(I)化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其係如上述定義者。
E2 如實施態樣E1之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中X係經胺基取代之喹啉，其係選自：
。
E3 如實施態樣E2之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中X係經胺基取代之喹啉，其係選自：
。
E4 如實施態樣E3之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中X係經胺基取代之喹啉：
。
E5 如實施態樣E3之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中X係經胺基取代之喹啉，其係選自：
。
E6 如實施態樣E5之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中X係經胺基取代之喹啉：
。
E7 如實施態樣E1之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中X係經胺基取代之萘啶，其係選自：
。
E8 如實施態樣E7之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中X係經胺基取代之萘啶：
。
E9 如實施態樣E1至E8中任一者之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中各R1
獨立地為F、Cl、Br、CN、CH3
或CONH2
。
E10 如實施態樣E9之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中各R1
獨立地為F、Cl或CONH2
。
E11 如實施態樣E10之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中各R1
係F。
E12 如實施態樣E1至E11中任一者之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中Y係CH。
E13 如實施態樣E1至E11中任一者之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中Y係N。
E14 如實施態樣E12或E13之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R2
和R3
與彼等連接之碳原子一起形成5員雜芳基，該5員雜芳基係選自：
。
E15 如實施態樣E14之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R2
和R3
與彼等連接之碳原子一起形成吡唑基，該吡唑基係選自：
。
E16 如實施態樣E14或E15之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R6
係經OH、CO2
H或CONH2
取代之(C1
-C4
)烷基。
E17 如實施態樣E16之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R6
係經OH、CO2
H或CONH2
取代之(C1
-C2
)烷基。
E18 如實施態樣E12之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R2
係經CO2
R4
取代之(C1
-C4
)烷基；經CO2
R4
取代之(C1
-C4
)烷氧基；CO2
R4
；CONR4
R5
；SO2
NR4
R4
；或噁二唑酮。
E19 如實施態樣E18之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R2
係經CO2
R4
取代之(C1
-C2
)烷基；經CO2
R4
取代之(C1
-C2
)烷氧基；CO2
R4
；CONR4
R5
；SO2
NR4
R4
；
。
E20 如實施態樣E13之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R2
係H；OH；經OH取代之(C1
-C4
)烷基；(C1
-C4
)烷氧基；經OH或CO2
R4
取代之(C1
-C4
)烷氧基；CO2
R4
；或CONR4
R5
。
E21 如實施態樣E20之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R2
係H；OH；經OH取代之(C1
-C2
)烷基；(C1
-C2
)烷氧基；經OH或CO2
R4
取代之(C1
-C2
)烷氧基；CO2
R4
；或CONR4
R5
。
E22 如實施態樣E21之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R2
係H；OH；(C1
-C2
)烷氧基；經OH或CO2
R4
取代之(C1
-C2
)烷氧基；CO2
R4
；或CONR4
R5
。
E23 如實施態樣E1至E22中任一者之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R3
係H或F。
E24 如實施態樣E23之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R3
係H。
E25 如實施態樣E1至E24中任一者之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R4
係H或甲基。
E26 如實施態樣E25之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R4
係H。
E27 如實施態樣E1至E26中任一者之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R5
係H或甲基。
E28 如實施態樣E27之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其中R5
係H。
E29 如實施態樣E1之化合物或彼之互變異構物或該化合物或彼之互變異構物的醫藥上可接受之鹽，其係選自：
5-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺；
5-{(1S)-1-[(2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-溴喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸鉀；
5-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]-1,3,4-噁二唑-2(3H)-酮；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯磺醯胺；
[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酸；
5-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸；
N-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯基]甘胺酸；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(2-甲氧基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(2-羥基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(3-羥基丙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(反式-3-羥基環丁基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺；
[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基]乙酸；
3-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]丙酸；
3-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮；
N-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]甲磺醯胺；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸；
5-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸；
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(甲基磺醯基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺；
6-溴-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
2-胺基-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-腈；
2-胺基-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺；
6-溴-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
2-胺基-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺；
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
6-{(1S)-1-[(2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧醯胺；
6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺；
2-胺基-8-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺；
3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-胺；
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸；
6,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-3-氟-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸；
{[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙酸；
2-{[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙醇；
2-胺基-3-{(1S)-1-[6-(2-羥基乙氧基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺；
5,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺；
3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
6-{(1S)-1-[(2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-{(1S)-1-[(2-胺基-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-{(1S)-1-[(2-胺基-7-氟-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-[(1S)-1-{[2-胺基-6-(羥基甲基)喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-[(1S)-1-{[2-胺基-6-(2-羥基丙-2-基)喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-[(1S)-1-({2-胺基-6-[(1R)-1-羥基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-[(1S)-1-({2-胺基-6-[(1S)-1-羥基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-甲基-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
2-胺基-3-{(1S)-1-[6-(羥基甲基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺；
6,8-二氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
6-氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇；
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
2-胺基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺；
2-胺基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺；
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
6-氟-3-{(1S)-1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
2-胺基-7-氟-3-{(1R)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺；
(S)-2-(6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸三級丁酯；
[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸；
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺；
[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸；
2-[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙醯胺；
[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基]乙酸；
2-[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙醇；
2-[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙醇；
2-胺基-3-{(1S)-1-[1-(2-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺；
7-甲基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-1,6-萘啶-2-胺；
2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺；及
2-[6-{(1S)-1-[(2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙醇。
E30 如實施態樣E1至E29中任一者之化合物或彼之醫藥上可接受之鹽。
E31 如實施態樣E29之化合物，其係3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸或彼之互變異構物。
E32 如實施態樣E31之化合物，其係3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸三(羥基甲基)胺基甲烷鹽或彼之互變異構物。
E33 如實施態樣E29之化合物，其係6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇或彼之互變異構物。
E34 如實施態樣E29之化合物，其係(S)-6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮或彼之互變異構物。
E35 如實施態樣E29之化合物，其係2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺或彼之互變異構物。
E36 如實施態樣E31至E35中任一者之化合物。
。
反應圖1
於光延(Mitsunobu)反應條件下(即於過量之偶氮二羧酸酯和三烷基膦或三芳基膦之存在下且於極性非質子溶劑(諸如THF或DMF)中)，自式(II)和(III)之醇可製備式(I)化合物或彼之互變異構物。較佳之條件包含於0℃至50℃下，於THF中且於過量之DIAD和PPh3
或P(nBu)3
之存在下並可選擇地使用DMF為共溶劑，令式(II)和(III)之醇反應。
依據第二方法，如示於反應圖2，自式(III)、(IV)及(V)之化合物可製備式(I)化合物或彼之互變異構物：
。
反應圖2
如示於前揭反應圖1，於光延反應條件下，自式(III)和(IV)之醇可製備式(V)化合物。
使用熟習此技術之人士習知之方法，諸如SFC、HPLC或再結晶，藉由手性純化式(V)化合物可製備式(I)化合物或彼之互變異構物。
依據第三方法，如示於反應圖3，自式(II)、(VI)、(VII)、(VIII)及(IX)之化合物可製備式(I)化合物或彼之互變異構物：
。
反應圖3
如示於前揭反應圖1，於光延反應條件下，自式(II)和(VI)之醇可製備式(VII)化合物。
於室溫下，於溶劑(諸如DCM)中且於有機鹼(諸如DIPEA)之存在下，藉由令式(VII)化合物與氯化劑(諸如TsCl)反應，可製備式(VIII)之氯化物。
於升溫(諸如70℃)下，於極性非質子溶劑(諸如THF)中且於有機鹼(諸如DIPEA或Et3
N)之存在下，藉由令式(VIII)之氯化物與PGNH2
(諸如PMB-NH2
)反應，可製備式(IX)化合物。
於熟習此技術之人士習知之條件下，諸如於室溫下且於TFA之存在下與苯甲醚反應，藉由使式(IX)化合物去保護，可製備式(I)化合物或彼之互變異構物。熟習此技術之人士當能瞭解：對於除去適當之胺基保護基，有許多可替代之方法。
依據第四方法，如示於反應圖4，自式(X)、(XI)、(XII)及(XIII)之化合物可製備式(I)化合物或彼之互變異構物，其中R2
係OH；可選擇地經OH或CO2
R4
取代之(C1
-C4
)烷氧基；或CO2
R4
：
。
反應圖4
如示於前揭反應圖1，於光延反應條件下，自式(X)和(XI)之醇可製備式(XII)化合物。
於熟習此技術之人士習知之條件下，藉由使式(XII)化合物去保護，可製備式(XIII)化合物。例如，當PG係Boc時，一般條件包含於0℃至室溫下且於適當之溶劑(諸如DCM)中與強酸(諸如HCl或較佳地TFA)反應。當PG係酞醯亞胺基時，一般條件包含於升溫(諸如85℃)下與於EtOH中之聯胺反應或於-60℃至室溫下與於THF中之NH3
反應。
於熟習此技術之人士習知之轉化芳基溴化物的條件下，自式(XII)或(XIII)之化合物可製備式(I)化合物或彼之互變異構物。例如，當R2
係OH時，於室溫至80℃下，於溶劑(諸如二噁烷/H2
O)中，於鹼(諸如KOH)之存在下且於Pd觸媒(諸如Pd2
dba3
)和配體(諸如tBuXPhos)之存在下，可達成芳基溴化物之經過渡金屬催化之羥基化(如有需要隨後可進行去保護步驟)。
可替代地，於未分離式(XIII)化合物之情況下，自式(XII)化合物經1步驟可製備式(I)化合物或彼之互變異構物。
依據第五方法，如示於反應圖5，自式(VI)和(X)之化合物亦可製備式(XIII)化合物：
。
反應圖5
如示於前揭反應圖1，於光延反應條件下，自式(X)和(VI)之醇可製備式(XIV)化合物。
藉由於溶劑(諸如DCM)中與活化劑(諸如TsCl)、有機鹼(諸如DIPEA)及胺源(諸如NH4
PF6
)反應或藉由類似於文獻Couturier et al.,Org. Lett.
2006,8
, (9), 1929-1932或Ferrell et al.,Org. Lett
. 2013,15
(1), 168-171描述之方法，自式(XIV)化合物可製備式(XIII)化合物。一般條件包含於-5℃至室溫下且於NH4
PF6
、DIPEA及DCM之存在下令式(XIII)化合物與過量之TsCl反應。
依據第六方法，如示於反應圖6，自式(XV)、(XVI)及(XVII)之化合物亦可製備式(VII)化合物：
。
反應圖6
於室溫至105℃之溫度下，於溶劑(諸如甲苯)中且於鹼(諸如Cs2
CO3
或K2
CO3
)之存在下，藉由使用鈀偶聯反應劑(諸如氯化烯丙基鈀二聚體(S
)-1-[(R P
)-2-(二環己基膦基)二茂鐵基]乙基二(三級丁基)膦)，自式(XV)和(XVI)之化合物可製備式(XVII)化合物。熟習此技術之人士當能瞭解可使用可替代之有機金屬偶合方法，其涉及可替代之偶合配體、金屬及溶劑的組合。
於室溫下，於溶劑(諸如DCM)中且於適當氧化劑(諸如MCPBA)之存在下，藉由氧化可自式(XVII)化合物製備式(VII)化合物。
依據第七方法，如示於反應圖7，自式(XVIII)和(III)之化合物可製備式(V)化合物：
。
反應圖7
於0℃至100℃下，於溶劑中且於無機鹼之存在下，藉由令式(III)之醇與式(XVIII)化合物反應可製備式(V)化合物。較佳之條件包含於60℃下，於MeCN中且於Cs2
CO3
之存在下，藉由令式(XVIII)與式(III)之化合物反應。
依據第八方法，如示於反應圖8，自式(XV)、(XIX)、(XX)、(XXI)、(XXII)及(XXIII)之化合物可製備式(I)化合物或彼之互變異構物：
。
反應圖8
於升溫(諸如60℃)下，於極性非質子溶劑(諸如THF)中且於強鹼(諸如NaH)之存在下，藉由令式(XV)化合物與式(XXII)之鹵烷基酯反應可製備式(XIX)之酯。
於升溫(諸如90℃)下，於密封容器中且可選擇地於醇溶劑(諸如EtOH或較佳地MeOH)之存在下，藉由與NH3
水溶液反應使式(XIX)之酯醯胺化，可製備式(XX)之醯胺。
於0℃至室溫下，於溶劑(諸如吡啶)中且於有機鹼(諸如Et3
N)之存在下，藉由使用脫水劑(諸如TFAA)使式(XX)之醯胺脫水，可製備式(XXI)之腈。
於室溫下，於極性非質子溶劑(諸如DMSO)中且於強鹼(諸如KOtBu)之存在下，藉由使式(XXIII)之醛與式(XXI)之腈縮合，可製備式(I)化合物或彼之互變異構物。
依據第九方法，如示於反應圖9，自式(X)和(XI)之化合物可製備式(IX)化合物：
。
反應圖9
如示於前揭反應圖1，於光延反應條件下，自式(X)和(XI)之醇可製備式(IX)化合物。
依據第十方法，如示於反應圖10，自式(XXIV)化合物可製備式(II)和(XV)之化合物：
。反應圖10
於0℃至室溫下且於極性溶劑中，藉由使用還原劑使式(XXIV)之酮還原，可製備式(XV)和(II)之醇。較佳之條件包含(i)於0℃至室溫下並於EtOH或MeOH中且可選擇地使用THF為共溶劑，與NaBH4
反應，隨後於上述反應圖2描述之條件下使鏡像異構物分離(熟習此技術之人士當能瞭解式(IV)表示式(II)和(XV)之鏡像異構物的混合物，諸如消旋性混合物)；或(ii)於室溫下且於磷酸鹽緩衝液(pH 7)中，藉由使用(+)葡萄糖、NADP+、GDH-CDX901及適當之酮還原酶以進行生物催化性還原反應。
藉由熟習此技術之人士所習知之官能基相互轉換，式(I)化合物或彼之互變異構物可被轉換為另一式(I)化合物或彼之互變異構物。例如，藉由酸或鹼催化之水解(較佳地於THF或MeOH中使用NaOH水溶液)，可將CO2
(C1
-C4
)烷基酯轉化為彼之對應的羧酸；藉由於DMSO中與K2
CO3
和H2
O2
反應，可將苄腈化合物水解成苯甲醯胺；於室溫下，於THF中且於有機鹼(諸如Et3
N)之存在下，藉由與NH4
Cl和偶合劑(諸如HATU)反應，可將羧酸轉化為羧醯胺；於80℃下且於密封容器中，藉由與NH3
之甲醇溶液反應，可將CO2
(C1
-C4
)烷基酯轉化為醯胺；藉由使用NaBH4
之MeOH/THF溶液或LiAlH4
之THF溶液，可使CO2
(C1
-C4
)烷基酯還原；且，於熟習此技術之人士習知之噁二唑酮生成的條件下，分別經由生成醯肼或N-羥基甲脒，可將CO2
(C1
-C4
)烷基酯或腈轉化為噁二唑酮。
同樣地，如上所述，式(III)、(V)、(IX)、(XI)、(XII)、(XIII)及(XVII)之化合物亦可經相互轉化為另一式(III)、(V)、(IX)、(XI)、(XII)、(XIII)及(XVII)之化合物以促進其他式(I)化合物或彼之互變異構物的製備。實例包括下述之轉換：如示於製備例2和116，Br轉換為CO2
(C1
-C4
) 烷基酯；如示於製備例3，Br轉換為OH；如示於製備例5，Br轉換為烷基，該烷基係可選擇地經CO2
(C1
-C4
)烷基酯取代；如示於製備例7，Br轉換為可選擇地經保護之胺基；如示於製備例30和33，Br轉換為CN；如示於製備例32，Cl轉換為CN；如示於製備例55，Br轉換為烷基醚；及，如示於實施例3，CN轉換為羧醯胺。
可替代地，藉由類似於文獻(諸如Buchwald-Hartwig amination (Name Reactions for Functional Group Transformations (2007), 564-609)；Palladium-Catalyzed carbonylation Reactions-A Reaction coming of Age (Organometallics, vol 27, issue 21, 5402)；及，Levin et al., ACS Cent. Sci 2016, 2, 5, 293)所描述之方法，可完成該等相互轉換。
由商業來源獲得、由類似於文獻(諸如M. G. A. Shvekhgeimer, Chemistry of Heterocyclic Compounds, Vol. 40, No. 3, 2004, 257或S. A. Yamashkin and E. A. Oreshkina, Chemistry of Heterocyclic Compounds, Vol. 42, No. 6, 2006, 701)所描述之方法製備、或由下述之實驗部份所描述之方法或熟習此技術之人士所習知之該等方法的變體製備，可得到式(III)、(VI)、(X)、(XI)、(XVI)、(XVIII)、(XXII)及(XXIV)之化合物。
製備式(I)化合物或彼之互變異構物的所有新穎製程和該等製程使用之對應新穎中間體形成本發明之其他方面。
欲用於醫藥用途的本發明之化合物可以呈結晶狀或無定形之產物施予或可以介於完全無定形至完全結晶狀之連續固體狀態存在。藉由諸如沉澱、結晶、冷凍乾燥、噴霧乾燥或蒸發乾燥之方法，可得到呈例如固態栓、粉末或膜的本發明之化合物。為達到此目的，可使用微波乾燥或射頻乾燥。
本發明之化合物可經單獨施予或可與一或多種本發明之其他化合物組合施予或可與一或多種其他藥物(或彼等之任何組合)組合施予。通常，將以本發明之化合物與一或多種醫藥上可接受之賦形劑組合的調製劑施予本發明之化合物。本文使用之‘賦形劑’描述非為本發明之化合物的任何成分。賦形劑之選擇於大程度上將取決於多種因素，諸如特定之投藥模式、該賦形劑於溶解度和安定性上之功效及劑型之本性。
於另一方面，本發明提供一種醫藥組成物，其包含本發明之化合物和醫藥上可接受之賦形劑。
熟習此技術之人士當能瞭解適合投遞本發明之化合物的醫藥組成物和製備該醫藥組成物之方法。該等醫藥組成物和製備該等醫藥組成物之方法可見於文獻，例如“Remington’s Pharmaceutical Sciences”，第19版，Mack Publishing Company, 1995。
藉由諸如固體或液體劑型，本發明之化合物可經口服施予。口服施予可能涉及吞嚥，使得該化合物進入胃腸道，或經頰或舌下施予(諸如可藉由口含錠達成)，使得該化合物由口直接進入血流。
口服施予本發明之化合物的固體劑型包括例如藥片、硬或軟膠囊、口含錠、顆粒或粉末，彼等皆含有至少一種本發明之化合物。於該等固體劑型中，本發明之化合物通常係與一或多種醫藥上可接受之賦形劑組合。可以腸溶衣製備用於口服施予之固體劑型，諸如藥片和膠囊。
用於口服施予之液體劑型包括例如醫藥上可接受之乳化液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑，彼等含有此技術慣用之惰性稀釋劑(例如水)。該等組成物亦可包含賦形劑，諸如潤濕劑、乳化劑、懸浮劑、調味劑(例如甜味劑)及/或芳香劑。
本發明之化合物可經腸道外施予，即直接進入血流、肌肉或內部器官。
靜脈內施予表示一種施予本發明之化合物的方便方式。用於腸道外施予之其他適當方式包括動脈內、腹膜內、鞘內、腦室內、尿道內、胸骨內、顱內、肌內及皮下施予。
用於腸道外施予之適當裝置包括針(其包括微針)注射器、無針注射器及輸注技術。
腸道外調製劑通常係可含有賦形劑(諸如鹽類)、碳水化合物及緩衝劑(較佳地具有pH 3至9)之水溶液，但於某些應用上，腸道外調製劑可較適當地經調製成無菌非水溶性溶液或將與適當載體(諸如無菌且無熱原之水)併用之乾燥型式。
使用熟習此技術之人士所習知之標準藥劑技術，於無菌條件下，藉由例如冷凍乾燥，可方便地完成腸道外調製劑之製備。
藉由使用適當之調製技術(諸如倂入溶解增進劑)，可增加用於製備腸道外溶液之式(I)化合物和彼之互變異構物的溶解度。
用於口服和腸道外施予之調製劑可經調製呈立即釋出及/或修改釋出。方便地，本發明之化合物經調製呈立即釋出。
修改釋出型調製劑包括呈遲延釋出、維持釋出、脈衝釋出、控制釋出、標靶釋出及程式化釋出。因此，本發明之化合物可經調製呈固體、半固體或觸變性液體以利植入式貯藏器投藥以提供修改釋出之活性化合物。該等調製劑之實例包括經塗覆藥物之支架和聚(dl-乳酸-乙醇酸)(PGLA)微球體。
其他施予模式包括局部、吸入/鼻內、直腸/陰道內及經眼/耳施予。適合該等施予模式之調製劑包括立即釋出及/或修改釋出。修改釋出型調製劑包括呈遲延釋出、維持釋出、脈衝釋出、控制釋出、標靶釋出及程式化釋出。
於使用任何上述施予模式時，本發明之化合物可與可溶性大分子實體(諸如環糊精和彼之適當衍生物或含有聚乙二醇之聚合物)組合以改善本發明之化合物的溶解性、溶解速率、掩味性、生物可利用性及/或安定性。
例如，發現藥物-環糊精複合物通常可用於大多數之劑型和投藥途徑。可使用包容複合物和非包容複合物二者。作為與藥物直接複合之替代者，可使用環糊精作為輔助添加劑，即作為載劑、稀釋劑或助溶劑。為此等目的，最常使用的是α、β及γ環糊精，其包括羥丙基β環糊精和磺丁基醚β環糊精鈉鹽，彼等之實例可見於國際專利申請案號WO 91/11172、WO 94/02518及WO 98/55148。
對施予人病患，當然取決於投藥途徑和功效，本發明之化合物的每日總劑量一般係介於1 mg至10 g，諸如60 mg至6 g，例如100 mg至1.5 g或100 mg至1.0 g。例如，投藥可要求每日總劑量介於250 mg至1 g，諸如400 mg至800 mg。可以單一或分開劑量施予每日總劑量，且基於醫師之自由裁量，該每日總劑量可落於本文描述之一般範圍以外。該等劑量係基於具有體重約60至70 kg之平均人個體。醫師將能輕易地決定體重位於該範圍以外之個體(諸如嬰兒和老年人)的劑量。
如上所述，因為於動物體內能顯現藥理活性(即HbS調節作用)，本發明之化合物係有用的。更特定地，本發明之化合物可用於治療HbS調節劑適應之病症。該動物較佳地係哺乳動物且更佳地係人。
於本發明之另一方面，本發明之化合物係作為藥物。
於本發明之另一方面，本發明之化合物係用於治療HbS調節劑適應之病症。
本發明之另一方面提供本發明之化合物於製備藥物之用途，該藥物係用於治療HbS調節劑適應之病症。
本發明之另一方面提供一種治療動物(較佳地哺乳動物且更佳地人)之HbS調節劑適應的病症之方法，其包含對該動物施予治療有效量的本發明之化合物。
HbS調節劑適應之病症或徵狀包括：
・與組織之氧缺乏有關且遲延或減少Hb去氧將會有益的病症或徵狀，諸如SCD和彼之變化型及因為低細胞氧濃度對放射治療及/或化學治療呈現抗性之癌症；和
・將受益於增加之組織氧化且增加Hb對氧之親和性將有助於當Hb通過肺時較大之Hb的氧飽和(藉以允許增加氧輸送至身體組織)的病症或徵狀，諸如高原反應和相關病症(例如高山肺水腫(HAPE)和高山腦水腫(HACE))、肺功能不全和相關病症(例如慢性阻塞性肺病(COPD)、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)及氣喘)、創傷癒合(例如潰瘍和壓瘡)及中風(例如無症狀性梗塞)。
特別關注之病症係SCD。
存有多種不同之Hb基因型，該等Hb基因型產生多種SCD變異(Lancet 2010, 376, 2018-2031)。常見之SCD變異包括鐮刀型紅血球貧血症(HbS/S)、鐮刀型血紅素C疾病(HbS/C)、鐮刀型β+
地中海型貧血(HbS/β+
)及鐮刀型β0
地中海型貧血(HbS/β0
)。相對罕見至極罕見之SCD變異包括HbS/O Arab、HbS/CHarlem及HbC/S Antilles。所有該等SCD變異皆屬於本發明之範圍。
於一實施態樣中，該SCD變異係HbS/S。於另一實施態樣中，該SCD變異係HbS/C。
HbS調節劑可與另一藥理活性化合物或2或多種其他藥理活性化合物組合。該等組合能提供可能之顯著優點，其包括病患順從性、投藥容易性及協同活性。
於該等組合中，本發明之化合物可與該(等)其他治療劑同時(例如於單一劑型，諸如膠囊或藥片)、依序或分開施予。
該一或多種其他治療劑可選自下述之劑或下述類型之劑中任一者：
1)增加紅血球(RBC)內有益之血紅素(例如胎兒血紅素、血紅素A等)的量之藥劑，諸如羥基脲、丁酸鹽衍生物(例如丁酸鈉)、地西他濱(decitabine)、沙利多邁(thalidomide)衍生物(例如泊馬度胺(pomalidomide)或來那度胺(lenalidomide))及藍替國濱(lentiglobin)(一種藉由自體造血幹細胞移植投遞之活體外基因療法)；
2)破壞與鐮刀型紅血球疾病變化型有關之不利的細胞黏著交互作用之藥劑，諸如選擇素抑制劑(其包括泛選擇素抑制劑(例如利非泮索(rivipansel))、E選擇素抑制劑或P選擇素抑制劑(例如克南利茲單抗(crizanlizumab)))、泊洛沙姆(poloxamer)(例如泊洛沙姆188)及Nix-0999 (Nicosan®)；
3)改善鐮刀型RBC水合之藥劑，諸如加爾多(gardos)通道阻斷劑(例如塞尼卡泊(senicapoc)或克氯黴唑)和鎂補充劑(例如吡酮酸鎂)；
4)有助於血管舒張之藥劑，諸如吸入性一氧化氮、精胺酸、麩胺酸及PDE5抑制劑(例如昔多芬(sildenafil)或他達拉非(tadalafil))；
5)抗發炎劑，諸如磷脂酶A2抑制劑(例如伐瑞拉迪(varespladib))、皮質類固醇(例如甲基去氫皮質醇)及靜脈內免疫球蛋白；及
6)增加cGMP量而導致異型血球聚積之形成減少和降低之發炎狀態的藥劑，諸如PDE9抑制劑(例如1,5-二氫-6-[(3S,4S)-4-甲基-1-(2-嘧啶基甲基)-3-吡咯啶基]-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮)。
屬於本發明之範圍的是：2或多種醫藥組成物可方便地組合成適合共同施予該等醫藥組成物之套組型式，其中該等醫藥組成物中至少一者含有本發明之化合物。因此，本發明之套組包含2或多種個別之醫藥組成物和用於分別維持該等醫藥組成物之工具，其中該等醫藥組成物中至少一者含有本發明之化合物且該工具係諸如容器、分開之瓶或分開之鋁箔包。該套組之實例係用於包裝藥片、膠囊及類似物之熟悉的氣泡包裝。本發明之套組係特別適用於施予不同之劑型，例如於不同劑量間隔施予該等個別之醫藥組成物或該等個別之醫藥組成物彼此相互滴定的口服和腸道外劑型。為有助於順從性，該套組一般包含給藥指引且可提供所謂之記憶輔助。
本發明之另一方面提供一種醫藥產物(諸如呈套組型式)，其包含供同時、各別或依序使用之呈組合製劑的本發明之化合物和一或多種額外之治療活性劑，該組合製劑係用於治療HbS調節劑適應之病症。
應瞭解的是：本文記載之治療包括治癒性、緩和性及預防性治療。
於說明本發明且位於實施方式之後的非限制性實施例和製備例中且於上述反應圖中，記載之簡稱、定義及分析方法係說明如下：
°2θ係2θ度；
AcCl係乙醯氯；
AcOH係乙酸；
ADH-101係醇去氫酶101；
APCI係大氣壓力化學游離；
aq係水溶性；
BH3
Me2
S係(二甲硫)硼烷；
BINAP係(1,1’-聯萘-2,2’-二基)雙(二苯基膦)；
Bn係苄基；
Boc係三級丁氧羰基；
Boc2
O係二碳酸二(三級丁酯)；
br係寬；
tBu係三級丁基；
tBuOH係三級丁醇；
tBuOK係三級丁氧化鉀；
tBuXPhos係2-二-三級丁基膦基-2’,4’,6’-三異丙基聯苯；
tBuXPhos-Pd Gen-3係甲磺酸[(2-二-三級丁基膦基-2’,4’,6’-三異丙基-1,1’-聯苯)-2-(2’-胺基-1,1’-聯苯)]鈀(II)；
℃係攝氏；
CDCl3
係氘-氯仿；
CDI係1,1’-羰基二咪唑；
δ係化學位移；
d係雙重線；
dd係雙重雙重線；
ddd係三重雙重線；
dt係雙重三重線；
DCE係1,2-二氯乙烷；
DCM係二氯甲烷；
DIAD係偶氮二羧酸二異丙酯；
(-)-DIP-氯化物™係(-)-B-二異松蒎基氯硼烷；
DIPEA係N-乙基二異丙胺(亦稱為N,N-二異丙基乙胺)；
DMA係N,N-二甲基乙醯胺；
DME係1,2-二甲氧基乙烷；
DMAP係4-二甲基胺基吡啶；
DMF係N,N-二甲基甲醯胺；
DMSO係二甲亞碸；
DMSO-d6
係氘-二甲亞碸；
DPPP係1,3-雙(二苯基膦基)丙烷；
EDC係N-(3-二甲基胺基丙基)-N’-乙基碳二亞胺；
EDC.
HCl係N-(3-二甲基胺基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；
ESI係電噴灑游離；
Et2
O係乙醚；
EtOAc係乙酸乙酯；
EtOH係乙醇；
Et3
N係三乙胺；
g係克；
HATU係六氟磷酸1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物；
HPLC係高壓液相層析；
HOBt係1-羥基苯并三唑水合物；
hr(s)係小時；
IPA係異丙醇；
iPrOAc係乙酸異丙酯；
Ir[dF(CF3
)ppy]2
(dtbpy)PF6
係六氟磷酸[4,4’-雙(1,1-二甲基乙基)-2,2’-聯吡啶-N
1,N
1’]雙[3,5-二氟-2-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基-N
]苯基-C]銥(III)；
KRED101係酮還原酶101；
L係升；
LCMS係液相層析質譜；
m係多重線；
M係莫耳；
m-CPBA係3-氯過苯甲酸；
MeCN係乙腈；
MeMgBr係甲基溴化鎂；
MeNHOMe HCl係N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽；
MeOD_d4
係氘化甲醇；
MeOH係甲醇；
2-MeTHF係2-甲基四氫呋喃；
mg係毫克；
MHz係兆赫；
min(s)係分鐘；
mL係毫升；
mmol係毫莫耳；
mol係莫耳；
MS (m/z)係質譜峰；
MsCl係甲磺醯氯；
MTBE係三級丁基甲醚；
NADP+係菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸；
NiCl2
•glyme係氯化鎳(II)乙二醇二甲醚錯合物；
NMR係核磁共振；
ODS係十八烷基二氧化矽；
ORTEP係“Oak Ridge Thermal Ellipsoid Plot”解析軟體；
Pd(tBu3
P)2
係雙(三-三級丁基膦)鈀(0)；
Pd/C係碳上鈀；
Pd2
(dba)3
係三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)；
Pd(dppf)Cl2
係[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)；
Pd(PPh3
)4
係四(三苯基膦)鈀(0)；
石油醚係由脂肪烴所構成且沸點介於35至60℃之石油餾分；
PMB係對甲氧基苄基；
PMB-NH2
係對甲氧基苄胺；
Polycat 5 ®係雙(2-二甲基胺基乙基)(甲基)胺；
PPh3
係三苯基膦；
pH係氫離子濃度；
ppm係百萬分點；
PSD係位置感測器；
psi係磅/平方吋；
PXRD係粉末X射線繞射；
q係四重線；
rt係室溫；
RT係滯留時間；
s係單線；
SEM-Cl係2-(三甲基矽基)乙氧基甲基氯；
SFC係超臨界流體層析；
t係三重線；
T3
P係丙基膦酸酐；
TBAF係氟化三級丁基銨；
TBDMSCl係三級丁基二甲基氯矽烷；
TFA係三氟乙酸；
THF係四氫呋喃；
TLC係薄層層析；
TMEDA係N,N,N’N’
-四甲基乙二胺；
TMSCl係三甲基氯矽烷；
TMSCN係三甲基氰基矽烷；
TMSCHN2
係(重氮甲基)三甲基矽烷；
TsCl係對甲苯磺醯氯；
Ts2
O係對甲苯磺酸酐；
µL係微升；
µmol係微莫耳；且
Xantphos係4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃。
於所有情況下，1
H核NMR光譜係與所提出之結構相符。對指定之主要峰使用慣用之簡稱，自四甲基矽烷之百萬分點低磁場(針對1
H-NMR)記載δ特性。適當地，NMR數據可記錄互變異構物且可能不會看到某些可交換之質子。
使用ESI或APCI記錄質譜。當相關且除非另有說明，對同位素19
F、35
Cl、79
Br及127
I提供m/z數據。
當使用製備性TLC或矽膠層析時，熟習此技術之人士當能瞭解可使用任何適當之溶劑或溶劑組合以純化所欲之化合物。
實施例1
5-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
於20℃下對5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基)-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺(製備例161；222 mg，0.411 mmol)之MeOH (10 mL)溶液加入N2
H4 .
H2
O (2.5 mL)。於70℃下令所生成之反應混合物於密封小瓶中經攪拌3小時且隨後分佈於DCM (80 mL)和H2
O (100 mL)且經DCM (3 x 80 mL)萃取。令有機萃取液經H2
O (2 x 60 mL)沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)，經過濾且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成殘餘物，該殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.225% HCO2
H/MeCN水溶液；10至55%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(78.5 mg，46.6%)。LCMSm/z
=410 [M+H]+
。1
HNMR (MeOH-d4,
400 MHz) δ：1.73 (3H, d), 5.96 (1H, q), 6.71 (1H, t), 7.00 (1H, s), 7.05-7.20 (2H, m), 7.41 (1H, d), 7.44 (1H, dd), 7.97 (1H, s), 8.15-8.20 (2H, m), 8.29 (1H, br s)。
實施例2
5-{(1S)-1-[(2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
於20℃下令N2
H4 .
H2
O (2.5 mL)加入至5-[(1S)-1-{[7-氯-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺(製備例162；160 mg，0.279 mmol)之MeOH (10 mL)溶液。令樣品小瓶經密封並於70℃下經攪拌3小時。令反應混合物分佈於DCM (80 mL)和H2
O (100 mL)且進一步經DCM (3 x 80 mL)萃取。令有機萃取液經沖洗(H2
O，2 x 60 mL)，經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液)純化以生成呈白色固體之標的化合物(30.2 mg，產率24.4%)。LCMSm/z
=444 [M+H]+
。1
HNMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.66 (3H, d), 5.76 (1H, q), 6.64 (1H, s), 6.70-6.80 (3H, m), 7.27 (1H, d), 7.49 (1H, d), 7.53 (1H, d), 7.80 (2H, br s), 7.98 (1H, d), 8.01 (1H, d), 8.41 (1H, d)。
實施例3
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-溴喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
部分1
令K2
CO3
(197 mg，1.43 mmol)加入至3-(1-{[6-溴-2-(三級丁基胺基)喹啉-3-基]氧基}乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例156；100.0 mg，0.204 mmol)之DMSO (6.0 mL)溶液並經攪拌10分鐘。對此混合物加入H2
O2
(1.00 mL)並令反應混合物經攪拌1小時。令反應物經EtOAc (20 mL)萃取，經鹽水沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經矽膠層析(石油醚：EtOAc=1:0至0:1)純化以生成白色固體，其未經進一步純化而用於隨後之步驟。
部分2
對(上述)部分1之化合物的DCE (2 mL)溶液加入TFA (0.5 mL)並令反應混合物於70℃下經攪拌16小時。令反應混合物經DCM (20 mL)稀釋並經NaHCO3
水溶液(10 mL)驟冷。令結合之有機萃取液經沖洗(鹽水, 20 mL)，經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經矽膠層析純化以生成黃色固體，其係進一步經SFC (Chiralpak AS-H；0.1% NH4
OH之EtOH溶液；40%)純化以生成呈淡黃色固體之標的化合物(峰2；20.7 mg，17%)。LCMSm/z
= 410 [M+H]+
。1
HNMR (CDCl3
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 5.25 (2H, br s), 6.24 (1H, t), 6.90 (1H, s), 7.37-7.50 (4H, m), 7.7507.85 (2H, m), 7.89 (1H, s), 8.06 (1H, d)。
實施例4
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
令2M NaOH (53.3 mL，107 mmol)加入至3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例145；4400 mg，8.201 mmol)於MeOH (100 mL)和THF (50 mL)之溶液並令混合物於25℃下經攪拌20小時。加入N2
H2 .
H2
O (20.0 mL)並令混合物於40℃下經攪拌60小時。令反應混合物經真空下蒸發並令所生成之水溶性混合物經3N HCl酸化(pH=5至6)。藉由過濾收集所生成之沉澱物並令濾餅經MeOH (2 x 20 mL)沖洗且於真空下經乾燥以生成固體(2.6 g)，令該固體藉由進一步沉澱純化。令該固體於15℃下於MeOH/DCM/H2
O (60 mL，1:1:1)之混合物中經攪拌3小時。藉由過濾移除固體並於真空下經乾燥以生成淡黃色固體(2.3 g)，令該固體溶解於溫熱DMSO (20 mL)以生成澄清溶液。加入MeOH (30 mL)並令混合物於15℃下經攪拌2小時。藉由過濾移除所生成之固體並令濾餅經乾燥以生成呈白色固體之標的化合物(1870 mg，58%)。LCMSm/z
=393 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.67 (3H, d), 5.76 (1H, q), 6.49-6.65 (3H, m), 6.67-6.75 (1H, m), 7.02 (1H, dd), 7.15 (1H, dt), 7.37 (1H, dd), 7.58 (1H, d), 7.92-8.02 (2H, m), 8.25 (1H, d), 8.42 (1H, d)。
實施例4a
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸鉀
令1M NaOH溶液(2.3 mL，2.3 mmol)加入至3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例145；120 mg，0.224 mmol)之MeOH (3 mL)溶液並令反應物於70℃下經攪拌40小時。令經冷卻之反應物於真空下經濃縮並令殘餘物經MeCN (2 mL)稀釋且經1N HCl酸化至pH 3至4。藉由過濾收集所生成之沉澱物，經50% MeCN/H2
O (6 mL)和MeOH (2 mL)輕洗且於真空乾燥爐中經乾燥以生成白色固體(96 mg)。令該固體與依據上述方法所製備之另一批產物結合(總計194 mg，0.49 mmol)並懸浮於IPA (5 mL)，加入1M KOH (0.5 mL，0.5 mmol)且令混合物經攪拌4小時。令該混合物於真空下經濃縮，經與庚烷(3 x 30 mL)共沸且令所生成之固體經乾燥以生成呈白色固體之標的化合物(207 mg)。LCMSm/z
=393 [M+H]+
。
實施例5
5-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]-1,3,4-噁二唑-2(3H)-酮
令CDI (108 mg，0.664 mmol)加入至3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯並醯肼(製備例163；90 mg，0.22 mmol)和Et3
N (0.5 mL，4 mmol)之THF (3 mL)溶液並於室溫下經攪拌1小時。令反應混合物經蒸發至乾燥狀態並經管柱層析(12 g矽膠；MeOH：DCM=0至5%)純化以生成殘餘物，令該殘餘物經製備性HPLC (Boston Green ODS；0.05% HCl/MeCN水溶液；5至95%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(62 mg，65%)。LCMSm/z
=433 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.72 (3H, d), 5.90 (1H, q), 6.66-6.74 (1H, m), 7.12 (1H, s), 7.35 (1H, dd), 7.44 (1H, dt), 7.59-7.72 (2H, m), 7.87 (1H, dd), 7.99 (1H, d), 8.15 (1H, d), 8.41 (1H, d), 8.74 (2H, br s), 12.76 (1H, s)。
實施例6
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
於15℃下令TMSCHN2
(2.04 mL，2M己烷溶液)逐滴加入至3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(實施例4；400 mg，1.02 mmol)之DMSO (10 mL)溶液並隨後於15℃下經攪拌90分鐘。令反應物經H2
O (20 mL)驟冷並經EtOAc (2 x 20 mL)萃取。令結合之有機萃取液經H2
O (30 mL)和鹽水(30 mL)沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經管柱層析(12 g矽膠；EtOAc：石油醚=10至100%)純化以生成殘餘物，其係進一步經製備性HPLC (Agela Durashell C18；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；53至73%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(35 mg，8.4%)。LCMSm/z
=407 [M+H]+
。1
H NMR (CHCl3
-d1
, 400 MHz) δ：1.72 (3H, br d), 3.92 (3H, s), 5.17 (2H, br s), 5.97 (1H, q), 6.63 (1H, br s), 6.82 (1H, s), 6.89-7.03 (1H, m), 7.06-7.17 (1H, m), 7.42 (1H, d), 7.51 (1H, br dd), 7.74-7.94 (2H, m), 8.05 (1H, br d), 8.30 (1H, s)。
實施例7
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯磺醯胺
令3-[1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-N,N-雙(4-甲氧基苄基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯磺醯胺(製備例153；53 mg，0.066 mmol)、苯甲醚(25.1 mg，0.232)及TFA (1 mL)之混合物於室溫下經攪拌18小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並於室溫下於7M NH3
之MeOH (15 mL)溶液中經攪拌18小時。令反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(10% MeOH之DCM溶液)純化。令殘餘物進一步經手性SFC (Chiral Technologies OD-H；0.2% NH4
OH之MeOH溶液；17%)純化以生成標的化合物。LCMSm/z
=428 [M+H]+
。
實施例8
[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酸
令2M NaOH (53.3 mL，107 mmol)加入至{3-[1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}乙酸甲酯(製備例146；186.0 mg，0.338 mmol)於MeOH和THF之溶液。令反應混合物於44℃下經攪拌20小時且隨後經加熱至70℃達2天。令該混合物於真空下經濃縮並令殘餘物溶解於H2
O/MeOH (3 mL)且經1M HCl酸化至pH 3。藉由過濾收集所生成之白色固體並令濾餅經1：1 MeCN：H2
O和H2
O (各1 mL)沖洗。令固體進一步經SFC層析(Lux Amylose；0.2% NH4
OH之MeOH溶液；20%)純化以生成呈玻璃之標的化合物(峰1；22.6 mg，16.5%)。LCMSm/z
=407 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.65 (3H, d), 3.65 (2H, s), 5.55 (1H, q), 6.60-6.85 (4H, m), 7.20-7.48 (5H, m), 7.55-7.78 (3H, m), 7.90 (1H, s), 8.30 (1H, s)。
實施例9
5-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
令2M NaOH (2.48 mL，4.97 mmol)加入至5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例149；551 mg，0.994 mmol)於MeOH (2 mL)和THF (6 mL)之溶液並於27℃下經攪拌16小時。加入聯胺水合物(2.90 mL，59.6 mmol)並令溶液於40℃下經加熱5小時。加入額外之聯胺水合物(2.0 mL，41 mmol)並再持續加熱18小時。令反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經4M HCl酸化至約pH 6以生成沉澱物，令該沉澱物溶解於DMSO (0.5 mL；含有1至2滴NH4
OH水溶液)且經HPLC (DuraShell；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；19%至39%)純化。得到呈白色固體之標的化合物(240 mg，59%)。LCMSm/z
=411 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.66 (3H, d), 5.82 (1H, q), 6.57 (3H, d), 6.71-6.74 (1H, m), 7.02 (1H, dd), 7.15 (1H, dt), 7.38 (1H, dd), 7.53 (1H, d), 7.99 (1H, d), 8.15 (1H, d), 8.45 (1H, d)。
實施例10
N-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯基]甘胺酸
令T3
P (53 mg，0.084 mmol, 0.050 mL)加入至3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸鉀(實施例4a；30 mg，0.070 mmol)、甘胺酸甲酯.
HCl (11 mg，0.088 mmol)及DIPEA (36.0 mg，0.279 mmol)於DMF (0.5 mL)之混合物並令混合物於室溫下經隔夜攪拌。加入額外之甘胺酸甲酯.
HCl (6 mg，0.044 mmol)和DIPEA (18.0 mg，0.14 mmol)並持續攪拌18小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物再溶解於MeOH (1 mL)和NaOH水溶液(10 mg，0.4 mmol, 0.350 mL，1M)並令所生成之溶液於室溫下經攪拌。令反應混合物經酸化至pH 2至3並於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成殘餘物，令該殘餘物經HPLC (Waters Atlantis dC18；0.05% TFA水溶液/0.05% TFA之MeCN溶液；95/5至5/95)純化以生成呈TFA鹽之標的化合物(26 mg，76%)。LCMSm/z
=450 [M+H]+
。
實施例11
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(2-甲氧基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
令T3
P (53.2 mg，0.0836 mmol)加入至3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸鉀(實施例4a；20 mg，0.046 mmol)、2-甲氧基乙胺(6.98 mg，0.0929 mmol)及DIPEA (36.0 mg，0.279 mmol)於DMF (0.5 mL)之混合物並令混合物於室溫下經攪拌18小時。令反應混合物經飽和NaHCO3
水溶液(3 mL)和DCM (10 mL)稀釋並於室溫下經攪拌10分鐘。收集有機萃取液並於真空下經蒸發至乾燥狀態且令殘餘物經HPLC (Waters Atlantis dC18；0.05% TFA水溶液/0.05% TFA之MeCN溶液；95/5至5/95)純化以生成呈TFA鹽之標的化合物(13.8 mg，66%)。LCMSm/z
=450 [M+H]+
。
實施例12至14
依據上述實施例11描述之方法，藉由使用適當之胺，製備下表之實施例12至14。
實施例15
[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基]乙酸
令{3-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基}乙酸三級丁酯(製備例154；260 mg，0.394 mmol)之TFA (2 mL)溶液於20℃下經攪拌1小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態，並令殘餘物溶解於MeCN (3 mL)，經NH4
OH (約1 mL)沖洗且經製備性HPLC (Agela Durashell C18；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；11至51%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(71 mg，43%)。LCMSm/z
=423 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.62 (3H, d), 4.66 (2H, s), 5.42 (1H, q), 6.52 (2H, s), 6.63 (1H, t), 6.78 (1H, s), 6.92 (1H, dd), 7.09 (1H, dd), 7.16 (1H, dt), 7.27 (1H, d), 7.33 (1H, d), 7.39 (1H, dd), 7.89 (1H, d), 8.21 (1H, d)。
實施例16
3-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]丙酸
對3-{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}丙酸三級丁酯(製備例147；113 mg，0.186 mmol)於MeOH (4 mL)和THF (2 mL)之溶液加入1M NaOH (7 mL)並令混合物於室溫下經攪拌64小時。令反應混合物經加熱至70℃達8小時。於真空下除去溶劑並令漿泥經1M HCl酸化至pH 3。藉由過濾收集固體並進一步經HPLC (Waters Atlantis dC18；0.05% TFA水溶液/0.05% TFA之MeCN溶液；95/5至5/95)純化以生成標的化合物(10 mg，13%)。LCMSm/z
=421 [M+H]+
。
實施例17
3-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮
部分1
對(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(N-羥基甲脒)-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例164；146 mg，0.288 mmol)之1,4-二噁烷(4 mL)溶液加入CDI (93.5 mg，0.576 mmol)。令混合物經加熱至100℃達16小時。令反應物經H2
O (5 mL)驟冷並經EtOAc (3 x 15 mL)萃取。令結合之有機萃取液經H2
O (5 mL)和鹽水(5 mL)沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)，經過濾且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成呈褐色油之粗(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(5-側氧基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯，其未經進一步純化而使用。
部分2
令TFA (1 mL)加入至源自於部分1的(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(5-側氧基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯於DCM (2 mL)之褐色溶液並令反應混合物於室溫(24℃)下經攪拌1小時。令該反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態，溶解於MeOH (2.5 mL)和NH4
OH (0.5 mL)，經過濾且經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；21至41%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(19.4 mg，14%)。LCMSm/z
=433 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 5.80 (1H, q), 6.52 (2H, br s), 6.66-6.78 (2H, m), 7.07 (1H, dd), 7.16 (1H, dt), 7.39 (1H, dd), 7.68 (1H, d), 7.85 (1H, dd), 7.98 (1H, d), 8.21 (1H, d), 8.41 (1H, d), 8.88 (1H, s)。
實施例18
N-[3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]甲磺醯胺
部分1
於0℃下令Et3
N (17.4 mg，0.172 mmol)加入至2-(3-{(1S)-1-[5-胺基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例160；50 mg，0.086 mmol)之無水DCM (3 mL)溶液。於加入甲磺醯氯(19.7 mg，0.172 mmol)之前，令反應混合物於0℃下經攪拌10分鐘。令反應混合物於0℃下經攪拌2小時並隨後於30℃下經攪拌18小時。令反應混合物經冷卻至0℃並先後加入Et3
N (17.4 mg，0.172 mmol)和MsCl (19.7 mg，0.172 mmol)且令混合物於30℃下經攪拌16小時。令反應混合物經冷卻至0℃並進一步分批加入Et3
N (17.4 mg，0.172 mmol)和MsCl (19.7 mg，0.172 mmol)且令混合物於30℃下經攪拌2小時。令反應混合物經DCM (20 mL)稀釋，經H2
O (2 mL)和鹽水(2 mL)沖洗且經乾燥(Na2
SO4
)。令有機萃取液於減壓下經蒸發至乾燥狀態以生成N-{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}甲磺醯胺，其未經進一步純化而用於下述之步驟。
部分2
於30℃下對源自於部分1的N-{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}甲磺醯胺之無水MeOH (5 ml)溶液加入NH2
NH2 .
H2
O (2.52 mg，0.0427 mmol)並令混合物於30℃下經攪拌10分鐘。令反應混合物於減壓下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經DCM (10 mL)稀釋。藉由過濾移除所生成之固體並令濾餅經DCM (2 x 5 mL)沖洗。令結合之有機萃取液經H2
O (2 mL)和鹽水(2 mL)沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令所生成之殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；28至58%)純化以生成白色固體，其係進一步經SFC (Chiralcel OJ；0.1% NH4
OH之EtOH溶液；30%)純化。得到呈亮紅色固體之標的化合物(5 mg，27%)。LCMSm/z
=442 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 2.82-2.88 (3H, m), 5.62 (1H, q), 6.66 (1H, t), 7.02 (1H, s), 7.11-7.17 (2H, m), 7.27-7.32 (1H, m), 7.40 (1H, d), 7.46 (1H, dd), 7.52 (1H, d), 7.90 (1H, d), 8.02 (1H, d)。
實施例19
3-{(1S)-1-[(2-胺基-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
令3-[(1S)-1-({5,8-二氟-2-[(4-甲氧基苄基)胺基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例157；240 mg，0.441 mmol)之TFA (5 mL)溶液於65℃下經攪拌16小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並經與MeOH共蒸發以生成呈黃色膠之3-{(1S)-1-[(2-胺基-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯，令該膠溶解於MeOH (4 mL)，經NaOH水溶液(2M；3.3 mL，6.61 mmol)處理且於30℃下經攪拌1.5小時。令反應混合物經4M HCl中和至pH 6至7且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經製備性SFC層析(Chiralcel OJ；0.1% NH4
OH之EtOH溶液；25%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(152 mg，84%)。LCMSm/z
=411 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.67 (3H, d), 5.86 (1H, q), 6.67 (1H, t), 6.74-6.88 (2H, m), 6.99-7.17 (3H, m), 7.53 (1H, d), 7.89-7.99 (2H, m), 8.19-8.29 (2H, m)。
實施例20
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
於-0.6℃下令對甲苯磺醯氯(18000 mg，94.414 mmol)之二氯甲烷(100 mL)溶液加入至3-{(1S)-1-[(6,8-二氟-1-氧橋喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例159；20000 mg，47.016 mmol)、六氟磷酸銨(31000 mg，190.18 mmol)及DIPEA (37000 mg，290 mmol, 50 mL)於DCM (500 mL)之懸浮液。於該加入期間令混合物之內部溫度維持低於1.5℃並隨後令該混合物於0℃至室溫下經攪拌4小時。隨後令該混合物於室溫下再經攪拌16小時。於室溫下另分別加入六氟磷酸銨(3100 mg，19.0 mmol)和對甲苯磺醯氯(1800 mg，9.4 mmol)之DCM (30 mL)溶液並令混合物於室溫下經攪拌2小時。令反應混合物於真空下經濃縮，令殘餘物分佈於甲苯(400 mL)和2M碳酸鈉(100 mL)且令水層經甲苯(100 mL)萃取。令結合之有機萃取液經10%檸檬酸(100 mL)和鹽水(100 mL)沖洗，經乾燥(MgSO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經Et2
O (50 mL)碾製並藉由過濾收集所生成之固體。令濾餅經Et2
O (15 mL)沖洗並於高真空下經乾燥以生成呈淡黃色固體之標的化合物(12257 mg，61%)。LCMSm/z
=425 [M+H]+
。1
H NMR (CDCl3
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 3.90 (3H, s), 5.52 (2H, br s), 5.98 (1H, q), 6.60 (1H, s), 6.78-6.94 (3H, m), 7.40 (1H, d), 7.80 (1H, s), 7.88 (1H, s), 8.04 (1H, d), 8.30 (1H, s)。
實施例21
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
於室溫下令NaOH水溶液(4400 mg，110 mmol, 55 mL，2.0 M)加入至3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(實施例20；11770 mg，27.733 mmol)之THF (200 mL)溶液並令所生成之混合物於室溫下經攪拌16小時。令反應混合物於真空下經濃縮以除去該有機溶劑並令水層經MTBE (100 mL)萃取。令該水層經2N HCl (42 mL)酸化至pH 3。藉由過濾移除所生成之懸浮液並令固體經H2
O (100 mL)沖洗。令該固體於氮氣下經過濾並隨後於45℃下經H2
O (200 mL)漿泥化達16小時。藉由過濾收集固體並於60℃下令濾餅於真空下經乾燥16小時以生成標的化合物(10627 mg，93%)。LCMSm/z
=411 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 5.78 (1H, q), 6.64-6.92 (5H, m), 7.16 (1H, t), 7.58 (1H, d), 7.90-8.00 (2H, m), 8.24 (1H, s), 8.40 (1H, s), 13.28 (1H, s)。
實施例21a
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸三(羥基甲基)胺基甲烷鹽
於10℃下令DIAD (111 mg，0.548 mmol)逐滴加入至3-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例28；45 mg，0.18 mmol)、(3-羥基-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例141；50 mg，0.18 mmol)及PPh3
(144 mg，0.548 mmol)之無水THF (0.5 mL)溶液。令所生成之混合物於25℃下經攪拌3小時並隨後加入NaOH水溶液(21.9 mg NaOH於0.5 mL H2
O；0.548 mmol)。令反應混合物於25℃下經攪拌16小時。令該反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物溶解於DCM (0.5 mL)並於25℃下加入TFA (0.5 mL)且令所生成之混合物於25℃下經攪拌2小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；11至31%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(19 mg，27%)。LCMSm/z
=390 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.65 (3H, d), 2.43 (3H, s), 5.81 (1H, q), 6.68 (1H, s), 6.70-6.74 (1H, m), 7.05 (1H, s), 7.12 (2H, br s), 7.57 (1H, d), 7.93-8.01 (2H, m), 8.26 (1H, d), 8.35-8.43 (2H, m)。
實施例23
5-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
令2M NaOH (0.33 mL，0.66 mmol, 5.0當量)加入至5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例150；75.8 mg，0.132 mmol)於THF (1.5 mL)和MeOH (0.3 mL)之溶液並令溶液於26℃下經攪拌3小時。加入N2
H4 .
H2
O (0.4 mL，8 mmol, 60當量)並令反應混合物於27℃下經攪拌6小時。隨後加入額外之N2
H4 .
H2
O (0.5 mL，10 mmol, 80當量)，並於27℃下經攪拌16小時之前，令反應混合物經加熱至40℃達1.5小時。於真空下除去溶劑並令水溶液經4M HCl酸化至pH 7且隨後經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；20至40%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(20 mg，37%)。LCMSm/z
=429 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.65 (3H, d), 5.80 (1H, q), 6.64 (1H, s), 6.69-6.73 (1H, m), 6.83 (2H, br s), 6.90 (1H, dd), 7.17 (1H, dt), 7.48 (1H, d), 7.97 (1H, d), 8.11 (1H, d), 8.42 (1H, d)。
實施例24
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-N-(甲基磺醯基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
令DIPEA (87.9 mg，0.12 mL，0.680 mmol)加入至3-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(實施例21；42.3 mg，0.103 mmol)、甲磺醯胺(23.4 mg，0.246 mmol)及HATU (46.1 mg，0.121 mmol)之DMF (1 mL)溶液。令反應混合物於室溫下經隔夜攪拌。加入額外之甲磺醯胺(26.5 mg)和HATU (33 mg)並令混合物於室溫下經攪拌24小時。使用激烈之氮氣流除去溶劑並令殘餘物經HPLC (Waters Atlantis dC18；0.05% TFA之H2
O溶液/0.05% TFA之MeCN溶液；95/5至5/95)純化以生成標的化合物(26.4 mg，52%)。LCMSm/z
=488 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.66 (3H, d), 3.32 (2H, br s), 3.38 (3H, s), 5.82 (1H, q), 6.64-7.20 (6H, m), 7.60 (1H, d), 7.92 (1H, s), 8.00 (1H, d), 8.30 (1H, s), 8.40 (1H, s)。
實施例25
6-溴-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令6-溴-N-三級丁基-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例186；180.0 mg，0.372 mmol)於苯甲醚(40.2 mg，0.372 mmol, 0.0404 mL)和TFA (2.2 mL)之溶液經加熱至70℃達3小時。令溶液經蒸發以生成油，令該油分佈於H2
O (5 mL)和DCM (20 mL)且使用50% NaOH水溶液(4 mL)調整pH至10。令水層經DCM (4 x 20 mL)萃取並於真空下經蒸發至乾燥狀態且經層析(使用1至5% MeOH/DCM)純化以生成固體，令該固體進一步經手性SFC (Lux-Amylose-1；0.2% NH4
OH之MeOH溶液；20%)純化以生成呈固體之標的化合物(60 mg，38%)。LCMSm/z
=428 [M+H]+
。1
H NMR (CDCl3
, 400 MHz) δ：1.78 (3H, d), 5.51 (2H, s), 5.83-5.94 (1H, m), 6.58 (1H, t), 6.69 (1H, s), 7.39 (2H, s), 7.41 (1H, d), 7.44 (1h, s), 7.67 (1H, d), 7.84-7.89 (1H, m), 8.56 (1H, d)。
實施例26
2-胺基-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-腈
依循實施例25之方法且使用2-(三級丁基胺基)-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-腈(製備例190)，製備呈固體之標的化合物(46 mg，23%)。LCMSm/z
=375 [M+H]+
。1
H NMR (CDCl3
, 400 MHz) δ：1.79 (3H, d), 5.79 (2H, br s), 5.95 (1H, q), 6.59-6.66 (1H, m), 6.79 (1H, s), 7.43-7.47 (1H, m), 7.49-7.53 (2H, m), 7.65 (1H, s), 7.72 (1H, d), 7.90 (1H, d), 8.56 (1H, d)。
實施例27
2-胺基-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令2-(三級丁基胺基)-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-腈(製備例190；207 mg，0.481 mmol)之DMSO (10 mL)溶液冷卻至0℃，加入K2
CO3
(225 mg，1.44 mmol)和H2
O2
(81.8 mg，0.721 mmol, 0.0737 mL)且令混合物於0℃下經攪拌4小時。令反應物經飽和Na2
S2
O3
水溶液和飽和NaHCO3
水溶液驟冷並經DCM (3 x)萃取。令結合之有機萃取液經H2
O (3 x)沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經濃縮。令苯甲醚(52.0 mg，0.481 mmol，52.0 uL)加入至該粗混合物並溶解於TFA (20 mL)且令混合物於70℃下經隔夜加熱。令該混合物於真空下經濃縮並經H2
O和飽和NaHCO3
水溶液驟冷且經DCM (4 x)萃取。令結合之有機萃取液經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經矽膠層析(100%至80% DCM/MeOH)純化以生成白色固體，令該固體進一步經手性SFC (Chiral Tech AS-H；0.2%異丙醇胺之IPA溶液；20%)純化以生成標的化合物(9.4 mg)。LCMSm/z
=393 [M+H]+
。1
H NMR (CDCl3
, 400 MHz) δ：1.63 (3H, d), 5.39 (2H, br s), 5.74 (1H, q), 6.57 (1H, t), 7.07 (1H, dt), 7.10 (1H, ss), 7.23-7.27 (1H, m), 7.33 (1H, dd), 7.58 (1H, d), 7.70-7.76 (2H, m), 7.84 (1H, d), 7.97 (1H, d)。
實施例28
6-溴-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
藉由6-溴-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例191)之手性SFC分離(Chiralcel AD；0.1% NH4
OH之EtOH溶液)，得到呈蒼白色固體之標的化合物(42.2 mg，44.5%)。LCMSm/z
=410 [M+H]+
。1
H NMR (MeOH-d4
, 400 MHz) δ：1.79 (3H, d), 5.98 (1H, q), 6.70 (1H, t), 7.11 (1H, s), 7.44 (1H, d), 7.54-7.60 (2H, m), 7.65 (1H, d), 7.94-7.96 (2H, m), 8.11 (1H, d), 8.73 (1H, d)。
實施例29
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
於N2
下對1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例46；267 mg，1.41 mmol)之無水THF (4 mL)溶液加入2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇(製備例140；150 mg，0.706 mmol)和PPh3
(428 mg，2.12 mmol)。令混合物於20℃下經攪拌，於N2
下逐滴加入DIAD (555 mg，2.12 mmol)且隨後於20℃下經攪拌24小時。令溶劑於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經管柱層析(石油醚：EtOAc 100：0至0：100)部分純化以生成黃色固體，其係進一步經製備性HPLC (DuraShell；0.225% HCO2
H/MeCN水溶液；38至58%)純化以生成固體。令該固體更進一步經手性SFC (Chiralcel-AD；0.1% NH4
OH之MeOH溶液；50%)純化以生成呈固體之標的化合物(16.5 mg，38%)。LCMSm/z
=384 [M+H]+
。1
H NMR (MeOH-d4
, 400 MHz) δ：1.79 (3H, d), 5.88 (1H, q), 6.70 (1H, t), 6.88 (1H, s), 7.20 (1H, d), 7.50 (1H, d), 7.55-7.59 (1H, m), 7.92-7.95 (2H, m), 8.10 (1H, d), 8.72 (1H, q)。
實施例30
2-胺基-3-{(1S)-1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
對2-胺基-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-腈(製備例192；270 mg，0.758 mmol)之DMSO (4 mL)溶液加入碳酸鉀(209.0 mg，1.52 mmol)。令混合物經冷卻至10℃並逐滴加入H2
O2
(30% H2
O溶液；0.380 mL，3.79 mmol)且同時維持該混合物之內部溫度低於40℃。經該加入完成後，令反應混合物於40℃下經攪拌30分鐘。令反應物經飽和Na2
SO3
水溶液和H2
O (50 mL)驟冷。藉由過濾收集固體並令濾餅經H2
O (2 x 10 mL)沖洗。令固體經矽膠層析(DCM：MeOH=100:0至85:15)純化以生成黃色固體(220.0 mg，77.6%)。令該黃色固體進一步經手性SFC (Chiralcel OD-H；0.1% NH4
OH之EtOH溶液；40%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(101.0 mg，46%)。LCMSm/z
=375 [M+H]+
。1
H NMR (MeOH-d4
, 400 MHz) δ：1.81 (3H, d), 5.90 (1H, q), 6.72 (1H, t), 6.97 (1H, s), 7.47 (1H, d), 7.52-7.60 (1H, m), 7.81 (1H, d), 7.90-7.97 (3H, m), 8.12 (1H, d)。
實施例31
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令甲磺酸1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯(製備例58；200 mg，0.701 mmol)、2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇(製備例140；149 mg，0.701 mmol)及Cs2
CO3
(685 mg，2.10 mmol)之MeCN (10 mL)溶液於70℃下經攪拌16小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經矽膠層析(石油醚：EtOAc=100：0至50：50)純化以生成灰白色固體。令該固體進一步經手性SFC (Chiralpak AD-H；0.1% NH4
OH之EtOH溶液；45%)純化以生成呈灰白色固體之標的化合物(23.2 mg，24%)。LCMSm/z
=402 [M+H]+
。1
H NMR (CDCl3
, 400 MHz) δ：1.81 (3H, d), 5.21 (2H, br s), 5.92 (1H, q), 6.63 (1H, s), 6.73 (1H, s), 7.07 (1H, d), 7.47 (1H, dd), 7.60 (1H, d), 7.91 (1H, s), 8.60 (1H, d)。
實施例32
6-{(1S)-1-[(2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧醯胺
依循實施例31之方法，自甲磺酸1-[6-胺甲醯基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯(製備例60；350 mg，1.13 mmol)和2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇(製備例140；264 mg，1.24 mmol)，使用製備性SFC (Chiralcel AD；0.1% NH4
OH之EtOH溶液；40%)，製備呈白色固體之標的化合物(40 mg)。LCMSm/z
=427 [M+H]+
。1
H NMR (MeOH-d4
, 400 MHz) δ：1.82 (3H, d), 6.19 (1H, q), 6.69 (1H, t), 6.96 (1H, s), 7.21 (1H, d), 7.49 (1H, d), 7.94 (1H, s), 8.03 (1H, d), 8.12 (1H, d), 8.18 (1H, d)。
實施例33
6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令(6-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例167；250 mg，0.535 mmol)之TFA/DCM(3 mL/3 mL)溶液於室溫(約24℃)下經攪拌0.5小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (Agela Durashell C18；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；29至69%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(120 mg，61%)。LCMSm/z
=368 [M+H]+
。1
H NMR (CDCl3
, 400 MHz) δ：1.80 (3H, d), 4.92-5.29 (2H, m), 5.89 (1H, q), 6.60 (1H, t), 6.71 (1H, s), 6.97 (1H, dd), 7.12 (1H, dt), 7.44 (1H, dd), 7.50 (1H, dd), 7.68 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.58 (1H, d)。
實施例34
2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令2-胺基-7-氟-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸(製備例195；111 mg，0.27 mmol)、HOBt (72.9 mg，0.540 mmol)、EDCI (103 mg，0.540 mmol)及Et3
N (81.9 mg，0.810 mmol)於DMF (3 mL)之混合物於20℃下經攪拌0.5小時。加入NH4
Cl (43.3 mg，0.810 mmol)並令混合物於20℃和氮氣下經攪拌15小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成殘餘物並令該殘餘物經HPLC (Agela DuraShell；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；20至50%)純化以生成白色固體(30 mg)。令該固體與依循上述方法且起始自前驅酸(45 mg，0.11 mmol)所獲得之產物(20 mg)結合。令結合之固體經手性SFC純化以生成呈白色固體之標的化合物(17.9 mg，36%)。LCMSm/z
=411 [M+H]+
。1
H NMR (CDCl3
, 400 MHz) δ：1.79 (3H, d), 5.45 (2H, br s), 5.72 (1H, br s), 5.95 (1H, q), 6.63 (1H, t), 6.75 (1H, br d), 6.84 (1H, s), 7.22 (1H, d), 7.43 (1H, d), 7.71 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.16 (1H, d), 8.56 (1H, d)。
實施例35
2-胺基-8-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
對配備玻璃插入器之Parr反應器(50 mL)載入CaCl2
(344 mg，3.10 mmol)、2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-8-氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例169；860.0 mg，1.55 mmol)及NH3
之MeOH溶液(3000 mg，200 mmol, 25.0 mL，7.0 M)。令反應混合物於110℃下經攪拌30小時且隨後於室溫下再經攪拌30小時。於110℃下，內部壓力達140 psi。令反應混合物經通過寅氏鹽®墊過濾，經MeOH和50：50 MeOH/DCM沖洗且令結合之有機萃取液於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經層析(RediSep GOLD 120 g；庚烷/DCM/MeOH；25/67.5/7.5)純化以生成灰白色固體。藉由溫和加熱令該固體溶解於MeOH (4 mL)並隨後加入2滴H2
O且立即沉澱白色晶體。藉由過濾移除晶體以生成呈白色晶體之標的化合物(156 mg)。LCMSm/z
=411 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.70 (3H, d), 5.90 (1H, q), 6.65-6.90 (4H, m), 7.35 (1H, br s), 7.55 (1H, d), 7.70 (1H, d), 7.90-7.96 (2H, m), 8.10 (1H, dd), 8.35 (1H, d), 8.75 (1H, d)。
實施例36
3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-胺
令甲磺酸(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯(製備例59；71.7 mg，0.251 mmol)、2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-醇三氟乙酸鹽(製備例138；44 mg，0.25 mmol)及Cs2
CO3
(175 mg，0.537 mmol)於MeCN (2 mL)之混合物於60℃下經隔夜攪拌。令該混合物經DCM (10 mL)稀釋，藉由過濾移除無機固體且經DCM (10 mL)沖洗。令結合之有機萃取液於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經RediSep GOLD 12 g (0至60% EtOH/EtOAc)純化以生成呈白色固體之標的化合物(31 mg，34%)。LCMSm/z
=365 [M+H]+
。1
H NMR (MeOH-d4
, 400 MHz) δ：1.78 (3H, d), 2.55 (3H, s), 5.55 (1H, s), 6.00 (1H, q), 6.65 (1H, s), 6.92 (1H, s), 7.18 (1H, s), 7.82 (1H, d), 7.90 (1H, s), 8.10 (1H, s), 8.43 (1H, s), 8.62 (1H, s)。
實施例37
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸
對6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯(製備例174；120 mg，0.223 mmol)於MeOH (2.0 mL)和THF (1.0 mL)之溶液加入2M NaOH (116 mg，2.0 mL，2.9 mmol)並令反應混合物於25℃下經攪拌36小時。加入N2
H4
(2 mL，40 mmol)並令反應溶液於45℃下經攪拌3天。令該反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (DuraShell；0.05% HCl/MeCN水溶液；15至31%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(11 mg，13%)。LCMSm/z
=394 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.75 (3H, d), 6.18 (1H, q), 6.61 (1H, t), 7.38 (1H, s), 7.40-7.50 (2H, m), 7.68 (1H, dd), 7.82 (1H, d), 8.15 (2H, q), 8.31 (1H, d), 8.56 (2H, br s)。
實施例38
6,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
對2-(6,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例168；120 mg，0.233 mmol)之MeOH (2.0 mL)溶液加入NH2
NH2 .
H2
O (0.4 mL)並令混合物於室溫(25至30℃)下經攪拌1小時。令該混合物經過濾並經製備性HPLC純化以生成呈白色固體之標的化合物(34.5 mg，39%)。LCMSm/z
=386 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.71 (3H, d), 5.85 (1H, q), 6.52 (2H, br s), 6.63-6.72 (2H, m), 6.95 (1H, dt), 7.17 (1H, dt), 7.92 (1H, d), 8.07 (1H, dd), 8.37 (1H, d), 8.74 (1H, d)。
實施例39
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-3-氟-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸
對6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-3-氟-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯(製備例180；73.00 mg，0.131 mmol)之THF (1.5 mL)溶液加入2M NaOH水溶液(0.329 mL，0.657 mmol, 5.0當量)並令所生成之溶液於室溫下經攪拌3小時。加入NH2
NH2 .
H2
O (0.4 mL，8 mmol, 60當量)並於室溫下經攪拌19小時。令混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (DuraShell C18；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；20至40%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(15.5 mg，29%)。LCMSm/z
=412 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.75 (3H, d), 5.91-6.02 (1H, m), 6.28 (2H, br s), 6.66-6.77 (2H, m), 7.08-7.21 (2H, m), 7.39 (1H, dd), 7.93 (1H, d), 8.17 (1H, d), 8.39 (1H, d)。
實施例40
{[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙酸
令({6-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}氧基)乙酸三級丁酯(製備例176；110 mg，0.19 mmol)之TFA (1.5 mL)溶液於25℃下經攪拌30分鐘。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell C18；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；22至42%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(27 mg，34%)。LCMSm/z
=424 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.65 (3H, d), 4.76-5.00 (2H, m), 5.56 (1H, q), 6.13 (2H, br s), 6.59 (1H, d), 6.77 (1H, s), 7.00 (1H, d), 7.08-7.23 (2H, m), 7.38 (1H, dd), 7.77-7.91 (2H, m), 8.13 (1H, d)。
實施例41
2-{[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙醇
令聯胺水合物(0.4 mL，8 mmol)之MeOH (1 mL)溶液逐滴加入至2-({6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}氧基)乙酸乙酯(製備例177；130 mg，0.224 mmol)之THF/MeOH (1 mL/1 mL)溶液並隨後令反應混合物於22℃下經攪拌1.5小時。令反應溶液自小瓶(4 mL)轉移至燒瓶並於真空下經濃縮。加入EtOH (10 mL)，藉由過濾移除固體且令濾液經EtOH沖洗。令結合之濾液於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；35至65%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(45 mg，49%)。LCMSm/z
=410 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.69 (3H, d), 3.61-3.76 (2H, m), 4.24-4.40 (2H, m), 4.84 (1H, t), 5.53 (1H, q), 6.22 (2H, br s), 6.62 (1H, s), 6.74 (1H, s), 6.88 (1H, d), 7.05-7.20 (2H, m), 7.38 (1H, dd), 7.78 (1H, d), 7.88 (1H, s), 8.19 (1H, d)。
實施例42
2-胺基-3-{(1S)-1-[6-(2-羥基乙氧基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令3-[(1S)-1-{6-[2-(乙醯氧基)乙氧基]-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基}乙氧基]-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)喹啉-6-羧酸甲酯(製備例178；220 mg，0.354 mmol)之NH3
/MeOH (約8 M，20 mL)溶液於鋼管中於80℃下經攪拌72小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；14至44%)純化以生成呈粉紅色固體之標的化合物(13 mg，8.5%)。LCMSm/z
=435 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.66 (3H, d), 3.57-3.74 (2H, m), 4.22-4.37 (2H, m), 4.83 (1H, t), 5.56 (1H, q), 6.52 (2H, br s), 6.59-6.65 (1H, m), 6.87 (2H, d), 7.22 (1H, br s), 7.36 (1H, d), 7.73-7.81 (2H, m), 7.85-7.90 (3H, m), 8.17 (1H, d)。
實施例43
5,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
於0℃下對5,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉1-氧化物(製備例185；300 mg，0.777 mmol)和NH4
OH (0.5 mL)之DCM (8 mL)溶液加入TsCl (740 mg，3.88 mmol)之DCM (2 mL)溶液。令所生成之懸浮液於15℃下經攪拌16小時。令該懸浮液經DCM (10 mL)稀釋並令有機萃取液經鹽水(2 mL)沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經全自動快速層析(CombiFlash)(矽膠；20 g；EtOAc/石油醚=20至80%溶析)純化以生成亮黃色固體。經手性SFC (Chiralpak AD-H；0.1% NH4
OH之EtOH溶液)純化後，得到呈白色固體之標的化合物(110 mg，37%)。LCMSm/z
=386 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.72 (3H, d), 5.99 (1H, q), 6.63-6.71 (1H, m), 6.71-7.03 (4H, m), 7.08 (1H, dt), 7.93 (1H, d), 8.08 (1H, dd), 8.30 (1H, d), 8.73 (1H, d)。
實施例44
2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
對2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸(製備例193；360 mg，0.92 mmol)之DMF (4 mL)溶液加入NH4
Cl (148 mg，2.76 mmol)、DIPEA (713 mg，5.52 mmol)及HATU (525 mg，1.38 mmol)並令所生成之混合物於室溫下經攪拌2小時。令該混合物經H2
O (5 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 15 mL)萃取。令結合之有機萃取液於真空下經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (XBridge；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；0至35%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(187 mg，52%)。LCMSm/z
=391 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.69 (3H, d), 5.27 (1H, q), 6.37 (1H, br s), 6.65 (1H, s), 6.73-7.04 (3H, m), 7.26 (1H, br s), 7.39 (1H, d), 7.51 (1H, br s), 7.76-7.84 (1H, m), 7.86-8.01 (3H, m), 8.16 (1H, d), 12.04 (1H, br s)。
實施例45
3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令6-溴-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(實施例25；15.16 g，35.40 mmol)、Zn(CN)2
(8.31 g，70.8 mmol)、Zn (463 mg，7.08 mmol)、Pd2
(dba)3
(3.24 g，3.54 mmol)及tBuXPhos (3.01 g，7.08 mmol)於DMA (177 mL)之混合物於100℃和氮氣下經加熱2.5小時。令該混合物經冷卻至室溫，經EtOAc稀釋，經通過經擠壓之寅氏鹽®過濾，經緩衝水(pH 7)和緩衝鹽水(pH 7)沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)且隨後於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成焦糖色油。令該油溶解於MeOH (259 mL)並經H2
O2
(4.01 mL，38.9 mmol)和DMSO (2.21 mL)處理且經攪拌1小時。真空下除去MeOH並令殘餘物於H2
O (100 mL)中經漿泥化1小時且藉由過濾收集固體。令該固體於30% H2
O/MeCN (22 mL)中且於50℃下經隔夜漿泥化。令該漿泥冷卻至室溫，經30% H2
O/MeCN (約10 mL)稀釋，藉由過濾移除固體且經30% H2
O/MeCN沖洗。令結合之濾液經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經管柱(120 g；DCM/EtOH梯度)純化以生成殘餘物，令該殘餘物進一步經HPLC (Waters Atlantis dC18；0.05% TFA之水溶液/0.05% TFA之MeCN溶液；95/5至5/95)純化以生成標的化合物(43 mg)。LCMSm/z
=350 [M+H]+
。
實施例46
6-{(1S)-1-[(2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
於氮氣下對(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例182；90 mg，0.17 mmol)和KOH (28.8 mg，0.514 mmol)之二噁烷/H2
O (7 mL/3 mL)溶液加入tBuXPhos (7.27 mg，0.0171 mmol)和Pd2
(dba)3
(7.84 mg，0.00856 mmol)。令所生成之混合物於90℃下經攪拌約3小時並隨後於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經1N HCl酸化至pH 6，經MeOH稀釋且經製備性HPLC (DuraShell C18；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；8至28%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(10 mg，16%)。LCMSm/z
=363 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.69 (3H, d), 2.46 (3H, s), 5.29 (1H, q), 6.40 (1H, d), 6.64 (1H, t), 6.83 (1H, s), 7.09 (3H, s), 7.50 (1H, d), 7.90 (1H, d), 8.14 (1H, d), 8.46 (1H, s)。
實施例47
6-{(1S)-1-[(2-胺基-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
依循實施例46之方法，自(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-1,5-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例181；270 mg，0.528 mmol)，使用HPLC (DuraShell C18；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；8至40%)，製備呈黃色固體之標的化合物(58.9 mg，32%)。LCMSm/z
=349 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.70 (3H, d), 5.38 (1H, d), 6.41 (1H, br s), 6.63 (1H, t), 6.84 (2H, br s), 6.97 (1H, s), 7.34 (1H, dd), 7.54 (1H, d), 7.74 (1H, dd), 7.86 (1H, d), 8.10 (1H, d), 8.42 (1H, dd), 11.96 (1H, br s)。
實施例48
6-{(1S)-1-[(2-胺基-7-氟-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
依循實施例46之方法，自(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-7-氟-1,5-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例184；85 mg，0.16 mmol)，使用HPLC (DuraShell C18；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；7至47%)，製備呈白色固體之標的化合物(7.5 mg，13%)。LCMSm/z
=367 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.87 (3H, d), 5.57 (1H, q), 6.41 (2H, br s), 6.57-6.71 (2H, m), 7.20 (1H, s), 7.38 (1H, br d), 7.48-7.56 (1H, m), 7.74 (1H, d), 7.86 (1H, d), 8.42 (1H, d)。
實施例49
6-[(1S)-1-{[2-胺基-6-(羥基甲基)喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
於0℃下令BH3
Me2
S (0.1 mL，12 M)加入至2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸(製備例193；60 mg，0.15 mmol)於THF (10 mL)之懸浮液。於經MeOH (10 mL)和1N HCl (5 mL)驟冷之前，令所生成之黃色懸浮液於50℃下經攪拌約4小時。令所生成之黃色溶液於25℃下經攪拌10分鐘並於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經製備性HPLC純化以生成呈黃色固體之標的化合物(12 mg，21%)。LCMSm/z
=378 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.81 (3H, d), 4.68 (2H, s), 5.40 (1H, q), 6.54 (1H, d), 6.67 (1H, t), 7.06 (1H, s), 7.39-7.43 (1H, m), 7.44-7.49 (2H, m), 7.58 (1H, d), 7.90 (1H, d), 7.96 (1H, d)。
實施例50
6-[(1S)-1-{[2-胺基-6-(2-羥基丙-2-基)喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
步驟1
令MeNHOMe.
HCl (77.1 mg，0.575 mmol)、DIPEA (297 mg，2.3 mmol)及HATU (291 mg，0.767 mmol)加入至2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸(製備例193；150 mg，0.383 mmol)於DMF (3 mL)之褐色溶液。令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令該混合物經H2
O (5 mL)稀釋並經EtOAc/THF (v/v=3/1；5 x 15 mL)萃取。令結合之有機萃取液經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成黃色膠，令該黃色膠未經純化而用於下述之步驟2。
步驟2
於0℃下對步驟1之化合物的THF (10 mL)溶液加入MeMgBr (4 mL，3M)。令反應混合物於室溫下經攪拌6小時。令懸浮液經1N HCl (3 mL)驟冷且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經H2
O (15 mL)稀釋並經EtOAc/THF (v/v 2:1；10 x 20 mL)萃取。令結合之有機萃取液經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成黃色膠，令該黃色膠未經進一步純化而用於步驟3。
步驟3
於0℃下對步驟2之化合物於THF (10 mL)的褐色溶液加入MeMgBr (4 mL，3M)。令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令反應物經1N HCl (3 mL)驟冷並於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經H2
O (30 mL)稀釋並經EtOAc/THF (v/v=2/1；10 x 20 mL)萃取。令結合之有機萃取液經乾燥(Na2
SO4
)，於真空下經蒸發至乾燥狀態且令殘餘物經製備性HPLC純化以生成呈黃色固體之標的化合物(15 mg，9.6%)。LCMSm/z
=406 [M+H]+
。1
H NMR (MeOH-d4
, 400 MHz) δ：1.59 (6H, s), 1.81 (3H, d), 5.42 (1H, br s), 6.54 (1H, br d), 6.65-6.70 (1H, m), 6.67 (1H, s), 7.05 (1H, s), 7.41-7.46 (1H, m), 7.51-7.61 (7.90 (1H, s), 7.97 (1H, s)。
實施例51和實施例52
6-[(1S)-1-({2-胺基-6-[(1R)-1-羥基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇和
6-[(1S)-1-({2-胺基-6-[(1S)-1-羥基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
重複實施例50之步驟1以生成黃色膠，令該黃色膠未經純化而用於下述之步驟2。
重複實施例50之步驟2以生成黃色膠，令該黃色膠未經進一步純化而用於步驟3。
步驟3
對步驟2之化合物的MeOH (10 mL)溶液加入NaBH4
(14.5 mg，0.384 mmol)並令所生成之溶液於20℃下經攪拌0.5小時。令反應混合物經1N HCl酸化至pH 6並於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經製備性HPLC (XBridge；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；6至46%)純化並隨後進一步經SFC (YMC Chiral Amylose-C；0.1% NH4
OH之IPA溶液；40%)純化以生成呈淡黃色固體之6-[(1S)-1-({2-胺基-6-[(1R)-1-羥基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇(13 mg，46%)(LCMSm/z
=392 [M+H]+
；1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.35 (3H, d), 1.70 (3H, d), 4.70-4.82 (1H, m), 5.13 (1H, d), 5.26 (1H, q), 6.25-6.60 (3H, m), 6.66 (1H, t), 6.83 (1H, s), 7.25-7.41 (3H, m), 7.51 (1H, br s), 7.91 (1H, s), 8.14 (1H, d), 12.05 (1H, br d))和呈淡黃色固體之6-[(1S)-1-({2-胺基-6-[(1S)-1-羥基乙基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇(13 mg，46%) (LCMSm/z
=392 [M+H]+
；1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.35 (3H, d), 1.71 (3H, d), 4.72-4.82 (1H, m), 5.14 (1H, d), 5.28 (1H, br d), 6.39 (1H, br s), 6.66 (3H, s), 6.86 (1H, s), 7.30-7.42 (3H, m), 7.53 (1H, br s), 7.91 (1H, s), 8.15 (1H, d), 12.06 (1H, br s))。
實施例53
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
於氮氣下對2-(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6,8-二氟喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例172；4000 mg，6.94 mmol)和KOH (1170 mg，20.8 mmol)之二噁烷/H2
O (60 mL/30 mL)溶液加入tBuXPhos (295 mg，0.694 mmol)和Pd2
(dba)3
(318 mg，0.347 mmol)。令所生成之溶液於90℃下經加熱16小時且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物溶解於MeOH (30 mL)並加入N2
H4 .
H2
O (30 mL，85%純度)且於35℃下經攪拌16小時。藉由過濾移除懸浮液並令濾餅經H2
O (30 mL)沖洗。令濾液經12N HCl酸化至pH 10並經DCM (2 x 100 mL)萃取。令結合之萃取液經乾燥(Na2
SO4
)並於真空下經蒸發至乾燥狀態且令殘餘物經管柱層析(40 g；MeOH：DCM=0至5%)純化以得到固體，令該固體經MTBE/DCM漿泥化以生成呈白色固體之標的化合物(1 g，37%)。LCMSm/z
=384 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.70 (3H, d), 5.26 (1H, q), 6.38 (1H, br s), 6.64 (1H, t), 6.75-7.06 (4H, m), 7.16-7.31 (1H, m), 7.51 (1H, br s), 7.91 (1H, s), 8.17 (1H, d), 12.04 (1H, br s)。
實施例54
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-甲基-1,5-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
令(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-甲基-1,5-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例183；124.00 mg，0.236 mmol)、Pd2
(dba)3
(10.8 mg，0.0012 mmol)、tBuXPhos (10.0 mg，0.0236 mmol)及KOH (39.7 mg，0.708 mmol)於二噁烷/H2
O (2.0 mL/0.4 mL)之混合物經脫氣和氮氣沖洗3次。令所生成之懸浮液於80℃下經加熱1.5小時。加入額外之Pd2
(dba)3
(10.8 mg，0.0012 mmol)、tBuXPhos (10.0 mg，0.0236 mmol)及KOH (26.5 mg，0.472 mmol)並令反應混合物再次經脫氣和氮氣沖洗3次且隨後於80℃下經加熱1.5小時。令該反應混合物經4M HCl (滴液)酸化至pH 6至7並於真空下經蒸發至乾燥狀態。將TFA (1.0 mL)加入至殘餘物之DCM (3 mL)溶液並令所生成之溶液於室溫下經攪拌2小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物溶解於MeOH/H2
O (2.5 mL/0.5 mL)且經製備性HPLC (Xtimate C18；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；6至46%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(15 mg，18%)。LCMSm/z
=363 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.67 (3H, d), 2.52 (3H, d), 5.37 (1H, q), 6.41 (1H, br s), 6.55-6.85 (3H, m), 6.93 (1H, s), 7.22 (1H, d), 7.54 (1H, br d), 7.65 (1H, d), 7.85 (1H, d), 8.08 (1H, d), 12.02 (1H, br s)。
實施例55
2-胺基-3-{(1S)-1-[6-(羥基甲基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令2M NaOH (0.1 mL，0.2 mmol)加入至3-{(1S)-1-[6-({[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}甲基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)喹啉-6-腈(製備例173；66 mg，0.1 mmol)之DMSO (0.3 mL)溶液並令混合物於30℃下經攪拌16小時。加入N2
H4 .
H2
O (0.4 mL)，並於50℃下經加熱達48小時之前，於30℃下持續攪拌16小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (Xtimate C18；0.225% HCO2
H/MeCN水溶液；5至25%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(7 mg，15%)。LCMSm/z
=427 [M+Na]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.69 (3H, d), 4.53-4.66 (2H, m), 5.55 (1H, br t), 5.69 (1H, q), 6.52 (2H, br s), 6.60-6.69 (1H, m), 6.82 (1H, s), 7.22 (1H, br s), 7.35 (1H, d), 7.58 (1H, d), 7.71-7.79 (1H, m), 7.83-7.94 (4H, m), 8.14 (1H, s), 8.26 (1H, d)。
實施例56
6,8-二氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
於10℃下令N2
H4 .
H2
O (196 mg，3.32 mmol)逐滴加入至2-(6,8-二氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例175；1030 mg，1.7 mmol)於無水MeOH (10 mL)之懸浮液並令反應混合物於30℃下經攪拌30分鐘。令該反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經管柱層析(EtOAc/石油醚=0至40%)純化以生成黃色固體。令該固體(470 mg)經MTBE (3 mL)稀釋並於10℃下經攪拌16小時。藉由過濾收集固體並令濾餅經MTBE (3 x 0.5 mL)沖洗以生成呈黃色固體之標的化合物(395 mg，60%)。LCMSm/z
=398 [M+H]+
。1
H NMR (MeOH-d4
, 400 MHz) δ：1.76 (3H, d), 3.93-3.99 (3H, m), 5.65 (1H, q), 6.61 (1H, t), 6.85 (1H, d), 6.94-7.04 (3H, m), 7.69 (1H, d), 7.86 (1H, d), 7.93 (1H, d)。
實施例57
6-氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
依循實施例56之方法，自2-(6-氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例179)，得到呈黃色固體之標的化合物(411.4 mg，48%)。LCMSm/z
=380 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.70 (3H, d), 3.88 (3H, s), 5.55 (1H, q), 6.23 (2H, br s), 6.62 (1H, d), 6.76 (1H, s), 6.89 (1H, d), 7.07-7.22 (2H, m), 7.38 (1H, dd), 7.78 (1H, d), 7.87 (1H, s), 8.18 (1H, d)。
實施例58
6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-醇(以彼之醯胺互變異構物(S)-6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮之固體型式製備)
於室溫下令TMSCl (10300 mg，94.5 mmol, 12.0 mL)加入至6-氟-3-{(1S)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(實施例57, 18600 mg，49.025 mmol)和NaI (13000 mg，86.730 mmol)於MeCN (300 mL)之微細懸浮液並令混合物於65℃下經攪拌3小時。令反應混合物於冰浴中冷卻，加入飽和硫代硫酸鈉(250 mL)且令混合物於0℃下經攪拌1.5小時並隨後經過濾。令藉由過濾移除之固體加入至H2
O (pH 7；140 mL)。令懸浮液於40℃下經攪拌並使用1N氫氧化鈉(約34 mL)經2小時持續調整pH至7。一旦該pH穩定於7，令反應混合物經冷卻至室溫並藉由過濾移除固體且於真空乾燥爐中經乾燥以生成呈無色固體之標的化合物(7554 mg，72%)。LCMSm/z
=366 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.71 (3H, d), 5.25 (1H, q), 6.26-6.62 (3H, m), 6.65 (1H, t), 6.79 (1H, s), 7.10 (1H, dd), 7.20 (1H, dt), 7.41 (1H, dd), 7.51 (1H, br d), 7.91 (1H, d), 8.17 (1H, d), 12.00 (1H, br s)。PXRD數據係與實施例58a之化合物所獲得之PXRD數據一致且證實標的化合物係以彼之醯胺互變異構物之固體型式製備。
實施例58a
(S)-6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮
製備
對含有四氫呋喃(77.4 L，9 L/kg)和2.8M氫氧化鉀水溶液(49.2 kg，6.0當量，120.5 mol)之反應器(200 L)於25℃下經氮氣噴氣19分鐘。載入(3-{(1S
)-1-[6-溴-3-(1H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-胺(製備例189；8.60 kg，1.0當量，20.1 mol)並令該反應器壁經四氫呋喃(4.3 L，0.5 L/kg)輕洗。令所生成之二相混合物經46分鐘被加熱至45℃。載入t-BuXPhos (172 g，0.02當量，0.40 mol)並令反應混合物經靜置5分鐘。載入三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(184 g，0.01當量，0.20 mol)並令該反應器壁經四氫呋喃(4.3 L，0.5 L/kg)輕洗。令混合物經18分鐘被加熱至60℃，經靜置4小時且經冷卻至45℃。該混合物之分析顯示反應完全。令該混合物經1小時15分鐘進一步冷卻至5℃並載入6M氫氯酸水溶液(18.6 kg，5.2當量，104.4 mol)以使該鹼性混合物中和且同時維持批次溫度低於15℃。於該載入完成後，令該混合物回溫至25℃。隨後經10分鐘載入1M磷酸鈉水溶性緩衝液(8.6 L，1 L/kg)並令混合物經靜置10分鐘。此時，水層之pH係7.5。令相層分離並於真空下令有機層經蒸餾至約26 L (3 L/kg)。載入新製之四氫呋喃(60.2 L，7 L/kg)並令溶液再經蒸餾至約26 L (3 L/kg)。令該過程重複2次並於最終蒸餾後載入新製之四氫呋喃(17.2 L，2 L/kg)。調節批次溫度至20℃。此時，殘餘之水含量係0.29%。令該混合物於吸濾器中經通過矽藻土(2 kg)墊過濾以除去自該溶液沉澱之鹽和鈀黑。令該反應器和吸濾器經四氫呋喃(17.2 L，2 L/kg)沖洗並令沖洗液與濾液結合。令該反應器和吸濾器再經四氫呋喃(51.6 L，6 L/kg)沖洗並收集沖洗液於3個分開之分級液。令含有所欲之產物的主要濾液和多個分級液結合於該反應器(200 L)並使用四氫呋喃(2 L)輕洗容器且載入該反應器。載入超純Si-Thiol矽膠(2.92 kg，40重量%)。令混合物於25℃和攪動下靜置23小時35分鐘並於吸濾器中經通過矽藻土(2 kg)墊過濾。令該反應器和吸濾器經2:1 v/v四氫呋喃/乙醇混合物沖洗(8 L x 4 + 11 L)並於各別容器中收集每一沖洗液。令含有所欲之產物的主要濾液和多個分級液結合於該反應器。令每個容器經2:1 v/v四氫呋喃/乙醇混合物(2 L)輕洗並令輕洗液載入該反應器。令結合之溶液經蒸餾至約17 L (2 L/kg)並載入乙醇(51.6 L，6 L/kg)。此時，形成韌性漿泥。令該漿泥經蒸餾至約17 L (2 L/kg)並載入乙醇(43.0 L，5 L/kg)。調節批次溫度至25℃。此時，殘餘之四氫呋喃含量係0.406重量/重量%。令混合物經加熱至70℃，經靜置1小時31分鐘，經1小時9分鐘冷卻至25℃且經靜置30分鐘。令該混合物進一步經42分鐘冷卻至0℃且經靜置30分鐘。令漿泥經通過吸濾器過濾並令該反應器和濾餅經冷乙醇(8.6 L，1 L/kg)沖洗。令該濾餅經氮氣吹拂達8小時39分鐘。將該濾餅轉移至盤式乾燥器並於45℃和真空下經乾燥12小時14分鐘以生成呈白色固體之標的化合物(6.266 kg，85.4%)。
藉由相同方法產製另一批次以生成呈白色固體之標的化合物(6.236 kg，85.1%)。
經由Si-Thiol矽膠純化
對自前述步驟得到之6-{(1S
)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H
-吡唑-1-基)吡啶-2(1H)-酮(12.48 kg，1.0當量，34.2 mol)的四氫呋喃(93.6 L，7.5 L/kg)溶液載入超純Si-Thiol矽膠(4.99 kg，40重量%)。令反應器壁經四氫呋喃(6.2 L，0.5 L/kg)輕洗。令混合物經50分鐘被加熱至50℃，經靜置12小時17分鐘且經43分鐘冷卻至25℃。令漿泥於吸濾器中經通過矽藻土(1 kg)墊過濾。令該反應器和吸濾器經2:1 v/v四氫呋喃/乙醇混合物沖洗(8 L x 4 + 21.6 L)並於各別容器中收集每一沖洗液。令含有所欲之產物的主要濾液和多個分級液結合於該反應器。令每個容器經2:1 v/v四氫呋喃/乙醇混合物(2 L)輕洗並令輕洗液載入該反應器。令結合之溶液經蒸餾至約37 L (3 L/kg)並載入乙醇(87.4 L，7 L/kg)。此時，形成韌性漿泥。令該漿泥經蒸餾至約37 L (3 L/kg)並載入乙醇(87.4 L，7 L/kg)。令該蒸餾/載入過程重複1次。調節批次溫度至25℃。此時，殘餘之四氫呋喃含量係0.081重量/重量%。令混合物經加熱至70℃，經靜置1小時2分鐘，經1小時13分鐘冷卻至25℃且經靜置31分鐘。抽取該漿泥之樣品以進行如下述標題為“PXRD分析”乙節所描述之PXRD固體形式分析。令該混合物進一步經44分鐘冷卻至0℃且經靜置30分鐘。令漿泥經通過吸濾器過濾並令該反應器和濾餅經冷乙醇(25.0 L，2 L/kg)沖洗。令該濾餅經氮氣吹拂達1小時8分鐘。將該濾餅轉移至盤式乾燥器並於50℃和真空下經乾燥40小時7分鐘以生成呈白色固體之標的化合物(11.624 kg，93.1%)。所得之PXRD數據係與該漿泥樣品直接經下述分析所報告之PXRD數據一致。
PXRD分析
使用配備Cu輻射源之Bruker AXS D8 Endeavor繞射儀對前述步驟之經抽取供固體形式分析的標的化合物之樣品進行PXRD分析。設定發散狹縫為11 mm固定光照。藉由LYNXEYE偵測器(其中PSD開口設為2.949°)偵測繞射輻射。X射線管之電壓和電流強度分別設為40 kV和40 mA。藉由θ-θ測角儀，於3.0至40.0° 2θ之Cu波長，使用每步驟大小0.016°和每步驟時間0.3秒，收集數據。
令漿泥樣品經離心並令經分離之濾液置於矽低背景小草皮樣品皿且於數據收集期間經旋轉。使用EVA繞射+
軟體分析數據。小心地檢查經人工實施之峰選擇以確保業已抓取所有低於30° 2θ之峰並業已精確指定所有峰之位置。對此數據之峰位置的典型誤差係±0.2° 2θ (USP-941)。因為多種不同之因素，與此測定有關之小誤差可能發生，該等因素包括(a)樣品製備(例如樣品高度)、(b)儀器特性、(c)儀器校正、(d)操作員輸入(例如於峰位置之測定)及(e)物質本性(例如較佳之位向和透明效果)。標的化合物之晶形(型1)的PXRD輪廓係示於圖1。對應之峰列係示於表1。
經由此解析確認標的化合物之絕對構形(S)和互變異構狀態。該解析之分子之一的不對稱性單位之ORTEP圖解係示於圖2。該單晶結構之模擬的PXRD圖案之峰位置列係示於表3。
對於自單晶結構測定所得之標的化合物的型1之模擬的PXRD圖案，表1所示之數據與表3所示之數據的比較顯示良好之峰關連性。與該模擬的圖案相比較，實驗數據(表1和圖1)之某些峰的解析缺失或喪失將被預期且可歸因於先前註記之PXRD實驗數據的固有誤差(即與該等因素(a)至(e)之一或多者有關之誤差)。亦應注意的是：該模擬的圖案之峰列的特徵為於相同峰位置(即22.2和24.5 °2θ)之2個峰的2個實例。此係經註記之峰位置的精確性(至1個小數位置)之結果。
實施例59
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
於5℃下令HCl/MeOH (0.5 mL，4N)加入至6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例196；42 mg，0.089 mmol)之MeOH (2 mL)溶液。於加入額外之HCl/EtOAc (0.5 mL)之前，令反應混合物回溫至室溫並經攪拌1.5小時且於25℃下持續攪拌3小時。加入額外之HCl/EtOAc (0.3 mL)並令反應混合物於25℃下再經攪拌1.5小時。令該反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成亮褐色固體，令該亮褐色固體經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；36至56%)純化以生成白色固體，令該白色固體進一步經手性SFC (Chiralcel AD；0.1% NH4
OH/EtOH；30%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(峰1)(4.95 mg，14%)。LCMSm/z
=389 [M+H]+
。1
H NMR (MeCN-d3
, 400 MHz) δ：1.66 (3H, d), 5.55-5.65 (3H, m), 6.61 (1H, t), 7.05-7.15 (3H, m), 7.45 (1H, dd), 7.81 (2H, s), 7.86 (1H, dd), 8.00 (1H, d), 8.09 (1H, s), 11.32 (1H, br s)。
實施例60
7-氯-6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
依循實施例59之方法，藉由使用HPLC (DuraShell；0.225% HCO2
H/MeCN水溶液；38至58%)和手性SFC (Chiralpak AD-H；0.1% NH4
OH之EtOH溶液；30%)，自7-氯-6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例197；50 mg，0.099 mmol)，得到呈白色固體之標的化合物(6.15 mg)。LCMSm/z
=423 [M+H]+
。1
H NMR (MeOH-d4
, 400 MHz) δ：1.66 (3H, d), 4.62 (1H, br s), 5.60 (1H, q), 6.64 (1H, t), 7.17 (1H, s), 7.33 (1H, d), 7.51 (1H, d), 7.79 (1H, s), 7.90 (2H, br s), 8.07 (1H, d), 8.15 (1H, s)。
實施例61
2-胺基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
對2-胺基-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺(製備例217；600 mg，1.21 mmol)於DCM (5 mL)之黃色溶液加入TFA (3 mL)並令所生成之溶液於15℃下經攪拌約2小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態，分佈於NaHCO3
(10 mL)且經DCM (3 x 20 mL)萃取。令結合之萃取液經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成殘餘物，其係經製備性HPLC (Xtimate C18；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；22至42%)純化。令殘餘物進一步經手性SFC (Chiral Tech IC；0.2%異丙醇胺之IPA溶液；50%)純化以生成呈灰白色固體之標的化合物(36.4 mg)。LCMSm/z
=414 [M+H]+
。1
H NMR (MeOH-d4
, 400 MHz) δ：1.64 (3H, d), 5.60 (1H, q), 6.62 (1H, s), 7.20 (1H, s), 7.48 (1H, d), 7.76-8.16 (7H, m)。
實施例62
2-胺基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令2-胺基-3-[(1S)-1-{5-(1H-吡唑-1-基)-1-[(2S)-四氫-2H-哌喃-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}乙氧基]喹啉-6-羧醯胺(製備例221；批號00708245-1609-001；971 mg，1.947 mmol)之TFA (5 mL)溶液於25℃下經攪拌約2小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物分佈於DCM (50 mL)和NaHCO3
水溶液(20 mL)。令水層經DCM (3 x 20 mL)萃取，經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經全自動快速層析(SiO2
；MeOH/DCM=0至10%)純化並令所生成之固體自DCM/EtOAc (5 mL/25 mL)再結晶析出。隨後令該固體進一步經SFC (Phenomenex-Amylose-1；0.1% NH4
OH之EtOH溶液；40%)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(135 mg，16%)。LCMSm/z
=415 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.69 (3H, d), 5.56 (1H, q), 6.40-6.79 (3H, m), 6.96 (1H, s), 7.23 (1H, br s), 7.36 (1H, d), 7.75 (1H, dd), 7.82-8.00 (3H, m), 8.24 (1H, s), 8.31 (1H, d), 8.42 (1H, s), 14.00 (1H, s)。
實施例63
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例223；240 mg，0.463 mmol)和TBAF (1.0 M THF溶液；3.0 mL，3.0 mmol)之黃色溶液於55℃下經攪拌1小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成黃色油，其係經製備性TLC (DCM：MeOH=15：1)純化以生成白色固體(72.4 mg)。自SFC分離(Chiralcel OJ；0.1% NH4
OH之MeOH溶液；25%)得到呈白色固體之標的化合物(峰1)(9.9 mg)。LCMSm/z
=389 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.69 (3H, d), 5.54 (1H, q), 6.64 (1H, s), 7.05-7.20 (3H, m), 7.42 (1H, q), 7.67 (1H, br s), 7.80-7.90 (2H, m), 8.54 (1H, s), 8.27 (1H, s)。
實施例64
6-氟-3-{(1S)-1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
對6-氟-3-{1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例225；130 mg，0.244 mmol)之二噁烷(5 mL)溶液加入HCl/二噁烷(4 mL，4M)。令所生成之溶液於25℃下經攪拌16小時並於真空下經蒸發至乾燥狀態。藉由加入飽和NaHCO3
水溶液令殘餘物鹼化，經EtOAc (3 x 15 mL)萃取，經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成白色膠，其係經製備性TLC (DCM/MeOH/NH4OH, 10/1/0.5)純化以生成白色固體。經SFC (Chiralcel AD；0.1% NH4
OH之MeOH溶液；30%)純化，得到呈白色固體之標的化合物(14.93 mg，20%)。LCMSm/z
=403 [M+H]+
。1
H NMR (MeOH-d4
, 400 MHz) δ：1.64 (3H, d), 2.55 (3H, s), 5.49 (1H, q), 6.65 (1H, t), 7.00-7.15 (3H, m), 7.41 (1H, dd), 7.52 (1H, br s), 7.73 (1H, br s), 7.89 (1H, d), 8.03 (1H, d)。
實施例65
2-胺基-7-氟-3-{(1R)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
依循實施例64之方法，藉由使用SFC (Chiralcel OJ；0.1% NH4
OH之MeOH溶液；35%)，自2-胺基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺(製備例216；50 mg，0.89 mmol)，得到呈白色固體之標的化合物(1.5 mg)。LCMSm/z
=432 [M+H]+
。1
H NMR (MeOH-d4
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 5.62 (1H, q), 6.65 (1H, t), 7.16 (1H, d), 7.25 (1H, s), 7.80 (1H, s), 7.85-7.95 (2H, m), 7.99 (1H, d), 8.08 (1H, s), 8.15 (1H, s)。
實施例66
(S)-2-(6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸三級丁酯
令35% NH2
NH2 .
H2
O (105 mg，1.15 mmol)加入至{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸三級丁酯(製備例207；145 mg，0.229 mmol)於CDCl3
(0.4 mL)和MeOH (1.6 mL)之溶液並令所生成之濃白色沉澱物於室溫下經隔夜靜置。加入MeOH和EtOAc並藉由過濾移除固體。令濾液經EtOAc稀釋並經NaOH (1 x 5 mL)、H2
O及鹽水沖洗。令先前經過濾之固體分佈於EtOAc和1N NaOH。令水層進一步經EtOAc萃取並令有機萃取液經結合，經乾燥(MgSO4
)且經蒸發以生成呈灰白色固體之標的化合物(98 mg，85%)。LCMSm/z
=503。
實施例67
[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸
令HCl (1 mL，4M二噁烷溶液)加入至(S)-2-(6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸三級丁酯(實施例66；98.3 mg，0.196 mmol)之DCM (1 mL)溶液。生成不溶之半固體，其係藉由加入MeOH (約0.5 mL)溶解。藉由KOH (1N MeOH溶液)調整pH至約12並令所生成之混合物於室溫下經攪拌。藉由1N HCl調整pH至7並令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成固體，令該固體與庚烷(2x)共沸。將該固體置入熱MeCN並經通過寅氏鹽®墊過濾。令濾液經蒸發至乾燥狀態並與庚烷(2x)共沸以生成灰白色固體，令該灰白色固體經HPLC (Waters Atlantis dC18；0.05% TFA之H2
O溶液/0.05% TFA之MeCN溶液；95/5至5/95)純化。令所生成之固體經Et2
O碾製，經激烈攪拌且隨後於未攪拌下經隔夜靜置。令該Et2
O經傾析並令固體溶解於溫熱EtOAc (約3 mL)且隨後經通過耐隆玻料(0.2 μm)過濾。令濾液經緩慢冷卻並經部分蒸發以生成呈棕褐色固體之標的化合物(10 mg，11%)。LCMSm/z
=447 [M+H]+
。1
H NMR (MeOH-d4
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 4.10 (1H, q), 5.52 (1H, q), 6.80 (1H, s), 7.02-7.38 (3H, m), 7.40 (1H, dd), 7.78-7.90 (3H, m), 8.00 (1H, s), 8.10 (1H, s)。
實施例68
6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
對2-(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例202；288 mg，0.443 mmol)之MeOH (3 mL)溶液加入N2
H4 .
H2
O (1500 mg，1.5 mL，31 mmol)並令混合物於室溫下經攪拌2小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態，經TFA (10 mL)處理且於室溫下經攪拌1小時。令反應混合物經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH4
OH/MeCN水溶液；23至63%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(63.3 mg，37%)。LCMSm/z
=390 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 5.51 (1H, q), 6.60 (1H, t), 6.75 (2H, br s), 7.01 (1H, s), 7.07 (1H, d), 7.50 (2H, br d), 7.71 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.23 (1H, s), 8.28 (1H, d), 8.39 (1H, s), 13.98 (1H, s)。
實施例69
[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸
對{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯(製備例198；949 mg，0.94 mmol)於MeOH (10 mL)和THF (5 mL)之溶液加入NaOH水溶液(2N，5 mL)並令所生成之混合物於室溫下經攪拌1.5小時。對該混合物加入N2
H4 .
H2
O (4 mL)並於室溫下持續攪拌37小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物分佈於H2
O (10 mL)和EtOAc (15 mL)。藉由1N HCl調整水層之pH至5至6並經EtOAc (15 mL x 3)萃取。令結合之有機萃取液於真空下經蒸發至乾燥狀態並經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH4
OH水溶液/MeCN；15至35%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(258.5 mg，36%)。LCMSm/z
=465 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.62 (3H, d), 5.13-5.00 (2H, m), 5.42 (1H, q), 6.61 (1H, t), 6.77 (2H, br s), 6.97 (1H, s), 7.01 (1H, dt), 7.16 (1H, ddd), 7.82 (1H, s), 7.88 (1H, d), 7.99 (1H, s), 8.11 (1H, d), 8.24 (1H, d)。
實施例70
2-[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙醯胺
令{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯(製備例201；295 mg，0.499 mmol)之NH3
/MeOH (約8M，10 mL)溶液於鋼管中於80℃下經攪拌48小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經HPLC (DuraShell C18；0.05% NH4
OH水溶液/MeCN；22至62%)純化並隨後經SFC (Chiralcel OD-H；0.1% NH4
OH之EtOH溶液；45%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(51 mg，23%)。LCMSm/z
=446 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.64 (3H, d), 5.08 (2H, d), 5.43 (1H, d), 6.46 (2H, s), 6.63 (1H, t), 6.92 (1H, s), 7.08-7.20 (2H, m), 7.29 (1H, s), 7.38 (1H, br d), 7.61 (1H, s), 7.84 (1H, s), 7.90 (1H, d), 8.03 (1H, s), 8.15 (1H, d), 8.26 (1H, d)。
實施例71
[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基]乙酸
令{6-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸(製備例219；80 mg，0.15 mmol)之DCM/TFA (3 mL/2 mL)溶液於28℃下經攪拌1小時。令反應混合物於真空下經濃縮，加入THF (3 x 10 mL)且令溶液於真空下經蒸發至乾燥狀態以除去痕量之TFA。令殘餘物經製備性HPLC (Phenomenex Gemini-NX；0.05% NH4
OH水溶液/MeCN；22至42%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(11.6 mg，18%)。LCMSm/z
=447 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.59 (3H, s), 5.24 (2H, d), 5.43 (1H, q), 6.54 (2H, s), 6.62 (1H, t), 6.94 (1H, s), 7.09-7.18 (2H, m), 7.38 (1H, dd), 7.83 (1H, s), 7.85-7.91 (2H, m), 8.27 (1H, d), 8.47 (1H, s)。
實施例72
2-[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙醇
對{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯(製備例198；328 mg，0.555 mmol)之無水THF/MeOH (3 mL/3 mL)溶液加入NaOH (222 mg，5.55 mmol，2M水溶液)。令所生成之反應混合物於28℃下經攪拌1小時。對該反應混合物加入N2
H4 .
H2
O (0.5 mL)並令所生成之反應混合物於約25℃下經攪拌16小時。加入額外之N2
H4 .
H2
O (0.5 mL)並於40℃下持續攪拌22小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物分佈於H2
O (10 mL)和EtOAc (15 mL)。令水溶液經1N HCl酸化至pH 4至5並隨後經EtOAc (3 x 15 mL)萃取，經乾燥(Na2
SO4
)且於真空下經蒸發至乾燥狀態以生成灰白色固體(143 mg)。於冷卻下加入THF以生成冰冷之THF溶液並對該THF溶液加入BH3
SMe2
(0.308 mL，3.08 mmol)。於加入額外之BH3
SMe2
(0.5 mL，5 mmol)之前令所生成之反應混合物於室溫下經攪拌約1.5小時，並隨後於室溫下經隔夜(約16小時)持續攪拌。緩慢加入MeOH至該混合物並隨後於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經管柱層析(4 g矽膠管柱；EtOAc/石油醚=50%/100%)部分純化以生成殘餘物，令該殘餘物進一步經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH4
OH水溶液/MeCN；39至69%)和SFC (Chiralcel-OD；0.1% NH4
OH之EtOH溶液；30%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(15 mg，6%)。LCMSm/z
=451 [M+H]+
。1
H NMR (MeOH-d4
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 3.93 (2H, t), 4.50 (2H, t), 5.56 (1H, q), 6.61 (1H, t), 6.93-7.04 (2H, m), 7.16 (1H, d), 7.83 (1H, s), 7.87 (1H, d), 7.91 (1H, s), 8.01 (1H, d), 8.11 (1H, d)。
實施例73
2-[6-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙醇
令(6-氟-3-{(1S)-1-[1-(2-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例218；79 mg，0.15 mmol)之DCM/TFA (3 mL/2 mL)溶液於室溫下經攪拌1.5小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態，與THF (3 x 5 mL)共沸且令殘餘物經製備性HPLC (Durashell；0.05% NH4
OH水溶液/MeCN；35至65%)純化。令所生成之產物與自該胺甲酸三級丁酯(製備例218；155 mg，0.29 mmol)之第2次合成所得之產物組合並經SFC (Chiralcel-OD；0.1% NH4
OH之EtOH溶液；30%)純化以生成呈白色固體之標的化合物(30 mg)。LCMSm/z
= 433 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.67 (3H, d), 3.80 (2H, br s), 4.06 (1H, br s), 4.41-4.51 (2H, m), 4.86 (1H, br s), 5.46 (1H, q), 6.63 (1H, t), 7.01 (2H, s), 7.16-7.25 (2H, m), 7.44 (br dd), 7.83 (1H, s), 7.90 (1H, d), 8.05 (1H, s), 8.14 (1H, d), 8.25 (1H, d)。
實施例74
2-胺基-3-{(1S)-1-[1-(2-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
於室溫(15℃)下對2-胺基-3-{1-[1-(2-{[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺(製備例215；2400 mg，4.198 mmol)之無水DCM (50 mL)溶液加入TFA (5 mL)並令混合物於室溫下經攪拌5小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並藉由加入飽和NaHCO3
水溶液使殘餘物經鹼化至pH 9。令所生成之懸浮液經攪拌10分鐘，經DCM/MeOH (50/1，200 mL)稀釋，先後經H2
O (10 mL)和鹽水(10 mL)沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)且隨後於真空下經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物經SFC (Chiralcel-OJ；0.1% NH4
OH之EtOH溶液；40%)純化以生成呈亮黃色固體之標的化合物(峰2；650 mg，33%)。LCMSm/z
=480 [M+Na]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.63 (3H, d), 3.79 (2H, br s), 4.39-4.50 (2H, m), 4.86 (1H, br s), 5.48 (1H, d), 6.65 (1H, t), 6.81 (2H, br s), 7.02 (1H, s), 7.23 (1H, br s), 7.36 (1H, d), 7.76 (1H, dd), 7.84 (1H, s), 7.88 (2H, br d), 7.92 (1H, d), 8.03 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.25 (1H, d)。
實施例75
7-甲基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-1,6-萘啶-2-胺
令(7-甲基-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-1,6-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例205；90 mg，0.15 mmol)之DCM/TFA (1 mL/1 mL)溶液於室溫下經攪拌1小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell C18；0.05% NH4
OH水溶液/MeCN；10至50%)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(10 mg，18%)。LCMSm/z
=387 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.71 (3H, d), 2.40-2.47 (3H, m), 5.52-5.63 (1H, m), 6.56-6.64 (1H, m), 6.91 (2H, s), 7.05 (1H, s), 7.88 (1H, d), 8.25 (1H, s), 8.30 (1H, d), 8.40 (1H, s), 8.47 (1H, s), 14.01 (1H, s)。
實施例76
2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
依循實施例75之方法，自2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺(製備例222；95.7 mg，0.17 mmol)，製備呈白色固體之標的化合物(13.49 mg，18%)。LCMSm/z
=433 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.68 (3H, d), 5.51 (1H, q), 6.60 (1H, t), 6.75 (2H, br s), 7.01 (1H, s), 7.07 (1H, d), 7.50 (2H, br d), 7.71 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.23 (1H, s), 8.28 (1H, d), 8.39 (1H, s), 13.98 (1H, s)。
實施例76a
2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺(製備例222；1800 mg，3.2 mmol)之TFA (5 mL)溶液於室溫下經攪拌1小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經全自動快速層析(矽膠；DCM/MeOH=100/0至20/1)純化以生成呈黃色固體之部分純化產物(1100 mg)。令該固體溶解於二噁烷(40 mL)和NH4
OH (10 mL)並令黃色溶液於20℃下經攪拌2小時。令該黃色溶液經濃縮並經製備性HPLC (DAICEL Chiralpak AS；0.1% NH4
OH/EtOH；40%)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(475 mg，34%)。
將該固體置入小瓶(8打蘭)內之EtOH (5 mL)並經加熱至65℃達30分鐘。令混合物經冷卻至室溫並令漿泥經攪拌60小時。令該混合物隨後經過濾，經乙醇(2 mL)沖洗且於真空下經乾燥1小時。收集固體並令該固體進一步於高真空和加熱至55℃下經乾燥16小時且隨後於高真空且未經加熱下靜置3天以生成呈結晶狀固體之標的化合物，其係隨後經PXRD分析。
使用配備Cu輻射源之Bruker AXS D8 Endeavor繞射儀進行PXRD分析。設定發散狹縫為11 mm持續光照。藉由PSD-Lynx Eye偵測器(其中該偵測器PSD開口設為2.949°)偵測繞射輻射。X射線管之電壓和電流強度分別設為40 kV和40 mA。藉由θ-θ測角儀，於3.0至40.0° 2θ之Cu波長(CuKᾱ λ=1.5418 Å)，使用步驟大小0.016°和步驟時間0.3秒，收集數據。使用0.012 mm厚度之鎳Kβ濾器。抗散射螢幕設定為自動模式。藉由置於矽低背景樣品皿以製備樣品且於數據收集期間經旋轉。使用Bruker DIFFRAC+
軟體收集數據且藉由EVA繞射+
軟體進行分析。
標的化合物之晶形(型1)的PXRD輪廓係示於圖3。
實施例77
2-[6-{(1S)-1-[(2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-基)氧基]乙基}-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙醇
於10℃下令TFA (1 mL)加入至(3-{(1S)-1-[1-(2-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例220；114 mg，0.215 mmol)之DCM (2 mL)溶液並經攪拌1小時。令反應混合物於真空下經蒸發至乾燥狀態並令殘餘物經製備性HPLC (DuraShell；0.05% NH4
OH水溶液/MeCN；23至43%)純化以生成標的化合物(7.8 mg，43%)。LCMSm/z
= 431 [M+H]+
。1
H NMR (DMSO-d6
, 400 MHz) δ：1.80 (3H, d), 2.53 (3H, s), 4.02 (2H, dt), 4.64-4.70 (2H, m), 5.82 (1H, q), 6.59 (1H, t), 7.19 (2H, d), 7.86 (1H, d), 8.00 (1H, d), 8.19 (1H, s), 8.53 (1H, s)。
實施例78
(S)-6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d 4
)-5-(1H
-吡唑-1-基)吡啶-2-醇
於氮氣下對3頸燒瓶(250 mL)載入(3-(1-(6-溴-3-(1H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙氧基-1,2,2,2-d 4
)-6-氟喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例227；2.8 g，5.2 mmol)於1,4-二噁烷(50 mL)和水(25 mL)之懸浮液。對此懸浮液加入氫氧化鉀(879 mg，15.7 mmol)、二-三級丁基(2',4',6'-三異丙基-[1,1'-聯苯基]-2-基)磷烷(222 mg，522.0 µmol)及Pd2
(dba)3
(239 mg，261.0 µmol)。令混合物於90℃下經隔夜加熱以生成澄清暗紅色溶液。經冷卻後，令該混合物於減壓下經濃縮以生成伴有紅色固體之褐色水懸浮液。對此混合物加入飽和NH4
Cl(aq)
(50 mL)以中和該鹼。於真空下除去有機溶劑。令所生成之水層溶解於DCM (300 mL)和EtOH (65 mL)。令有機層經分離並令水層經DCM (100 mL)/EtOH (20 mL)萃取2次。令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經部分濃縮，此時於溶液中生成沉澱物。藉由過濾分離此沉澱物並經EtOH (3 × 5 mL)沖洗。令殘餘物於減壓下經乾燥直至達一定重量以生成呈灰白色固體之6-(1-((2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d4
)-5-(1H
-吡唑-1-基)吡啶-2-醇(1.25 g，64.8%)。LCMS m/z=370.0 [M+H]+
。1
H NMR (300 MHz, CDCl3
) δ：6.50 (d, 1H), 6.60-6.55 (M，1H), 7.20-7.05 (M，3H), 7.30-7.35 (M，3H), 7.42 (d, 1H), 7.45-7.55 (M，1H), 7.65 (s, 1H), 7.82 (s, 1H)。
藉由製備性SFC (手性管柱)分離標的化合物。
實施例79
(S)-3-(1-((2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d4
)-4-(1H
-吡唑-1-基)苯甲酸
於20℃下經15分鐘對3-(1-((2-(1,3-二側氧基異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d4)-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例229；1.35 g，2.42 mmol)於MeOH (15 mL)和THF (10 mL)的混合溶劑之攪拌溶液逐滴加入NaOH (966.76 mg，24.17 mmol, 10當量)之H2
O (15 mL)溶液。令混合物之內部溫度升至25℃。經5小時後，加入NH2
NH2 .
H2
O (3.63 g，72.53 mmol, 3.53 mL)並隨後令混合物經加熱至30℃。經16小時後，令該混合物經過濾並令濾液經1N HCl酸化至約pH 6。令沉澱物經過濾並令濾餅經MeOH (2 x 5 mL)輕洗。令該濾餅懸浮於蒸餾水(20 mL)並經冷凍乾燥以生成呈白色固體之3-(1-((2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d4
)-4-(1H
-吡唑-1-基)苯甲酸(518 mg，50.5%)。LCMS m/z 414.8 [M+H]+
。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：6.67 (s, 1H), 6.71 (t, 1H), 6.94-6.82 (M，3H), 7.21-7.13 (M，1H), 7.58 (d, 1H), 8.00-7.95 (M，2H), 8.26 (d, 1H), 8.41 (d, 1H)。
藉由製備性SFC (手性管柱)分離標的化合物。
實施例80
(S
)-3-(3-(1-((2-胺基-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-4-(1H
-吡唑-1-基)苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮
步驟1
於室溫下對(S)-3-(1-((2-(1,3-二側氧基異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-4-(1H
-吡唑-1-基)苄腈(製備例230；940 mg，1.80 mmol)於無水MeOH (8 mL)和THF (8 mL)之溶液加入NH2
OH.
HCl (188 mg，2.70 mmol)和Et3
N (547 mg，5.41 mmol)並令反應混合物於80℃下經攪拌16小時。經冷卻至室溫後，令該反應混合物於真空下經濃縮以得到呈黃色固體的所欲之羥基苯甲脒(756 mg)，其未經進一步純化而用於下一個步驟。LCMSm/z
424.8 [M+1]+
。
步驟2
對得自步驟1的羥基苯甲脒(756 mg)之1,4-二噁烷(16 mL)溶液加入CDI (322 mg，1.98 mmol)。令混合物經加熱至100℃達16小時。經冷卻至室溫後，令反應混合物於真空下經濃縮。令殘餘物經急速層析(矽膠)(經DCM：MeOH=100：0至75：25梯度溶析)純化2次以生成黃色固體(540 mg)。令該黃色固體進一步經SFC (Daicel Chiralpak AD；250 mm x 30 mm x 10 µm；等強度CO2
：EtOH (0.1% NH4
OH), 75：25)純化以生成呈白色固體之標的化合物(240 mg，30%)。LCMSm/z
450.9 [M+1]+
。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：1.68 (d, 3H), 5.78 (q, 1H), 6.70 (偽t, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.80 (br s, 2H), 6.97-6.93 (M，1H), 7.21-7.15 (M，1H), 7.64 (d, 1H), 7.85 (dd, 1H), 7.97 (d, 1H), 8.19 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 13.08 (br s, 1H)。
製備例1
1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
對1-(5-溴-2-氟苯基)乙酮(1100 g，5.07 mol)和1H-吡唑(414 g，6.08 mol)之DMF (7000 mL)溶液加入K2
CO3
(2099 g，15.21 mol)並令所生成之褐色懸浮液於110℃下經攪拌24小時。令混合物經過濾並令濾液經EtOAc (10 L)和H2
O (4 L)稀釋。令有機層經分離並經H2
O (3 x 3 L)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令殘餘物自石油醚：EtOAc (5：1)再結晶析出，令濾餅經石油醚：EtOAc (100 mL，5：1)沖洗且經乾燥以生成呈固體之標的化合物(800 g，59%)。1
H NMR (400 MHz, MeOD_d4
) δ：1.98 (s, 3H), 6.56-6.60 (M，1H), 7.49 (d, 1H), 7.71-7.74 (M，2H), 7.79 (dd, 1H), 8.07 (d, 1H)。
製備例2
3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
令1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例1；350 g，1.32 mol)、DPPP (45 g，0.11 mol)、Pd(OAc)2
(23.7 g，0.11 mol)及Et3
N (307 g，3.04 mol)於MeOH：DMF (1894 mL：494 mL)之混合物於85℃和CO氛圍(50 psi)下經攪拌20小時。令經冷卻之混合物經過濾並令濾液於真空和減壓下經濃縮。令殘餘物懸浮於EtOAc (5000 mL)，令混合物經過濾且令濾液經H2
O (2 x 1000 mL)沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)且經過濾。令有機溶液於真空下經濃縮至300 mL並經冷卻至0℃以生成固體。令懸浮液經過濾並令固體於真空下經乾燥以生成標的化合物(260 g，80%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：2.05 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 6.65 (d, 1H), 7.82-7.84 (M，2H), 8.02 (d, 1H), 8.16 (d, 1H), 8.48 (d, 1H)。
製備例3
1-[5-羥基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
先後將H2
O (10 mL)和1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例1；2000 mg，7.54 mmol)之二噁烷(15 mL)溶液加入至KOH (974 mg，17.4 mmol)、Pd2
(dba)3
(345 mg，0.38 mmol)及tBuXPhos (320 mg，0.75 mmol)於鋼管內之混合物。令混合物經抽真空並於80℃和氬氣氛圍下經攪拌16小時。令混合物經冷卻至室溫，經3M HCl沖洗以達到pH 4至5且隨後經EtOAc (3 x 30 mL)萃取，並令結合之有機溶液經鹽水(50 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經蒸發。令所生成之粗產物經管柱層析(經EtOAc：石油醚=0：100至60：40溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(40%)。LCMS m/z=203 [M+H]+
。
製備例4
[3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基]乙酸三級丁酯
於室溫和氮氣下令溴乙酸三級丁酯(1570 mg，8.04 mmol) 加入至1-[5-羥基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例3；650 mg，3.21 mmol)和Cs2
CO3
(3140 mg，9.64 mmol)於MeCN (30 mL)之混合物並令反應混合物經攪拌16小時。令該反應混合物經H2
O (60 mL)稀釋，經EtOAc (2 x 60 mL)萃取且令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令殘餘物經管柱層析(經EtOAc：石油醚=0：100至30：70溶析)純化以生成呈亮黃色油之標的化合物(700 mg，68.8%)。LCMS m/z=317 [M+H]+
。
製備例5
2-[3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酸甲酯
令Ir[dF(CF3
)ppy]2
(dtbpy)PF6
(25.4 mg，0.023 mmol)、1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例1；300 mg，1.13 mmol)、單氯乙酸甲酯(184 mg，1.7 mmol)、三(三乙基矽基)矽烷(848 mg，2.26 mmol)及2,6-二甲基吡啶(364 mg，3.39 mmol)之混合物於密封小瓶中經氮氣吹洗並隨後加入DME (1.5 mL)。令NiCl2
•glyme (12.4 mg，0.057 mmol)和4,4’-二-三級丁基-2,2’-聯吡啶(15.2 mg，0.057 mmol)之DME (1 mL)溶液經氮氣吹洗並隨後加入至該反應小瓶且令混合物於藍Kessil LED燈之照射下經攪拌16小時。令反應物藉由暴露於空氣中驟冷並於真空下經濃縮。令殘餘物分佈於鹽水和EtOAc，令相層分離且令有機相經EtOAc (2 x 50 mL)萃取。令結合之有機層經乾燥(Na2
SO4
)，經過濾且經減壓下蒸發。令粗褐色油經急速矽膠層析(經EtOAc：庚烷=0：100至50：50溶析)純化以生成標的化合物(165 mg，56%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：2.00 (s, 3H), 3.74 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 6.51-6.53 (M, 1H), 7.42-7.77 (M, 5H)。
製備例6
3-[3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]丙酸三級丁酯
依循製備例5描述之方法，除了使用三(三甲基矽基)矽烷以替代三(三乙基矽基)矽烷之外，自1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例1)和3-溴丙酸三級丁酯，製備標的化合物(459 mg，77%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.44 (s, 9H), 1.97 (s, 3H), 2.57-2.61 (M, 2H), 2.97-3.01 (M, 2H), 6.49-6.50 (M, 1H), 7.36-7.41 (M, 3H), 7.72-7.73 (M, 2H)。
製備例7
[3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯基]胺甲酸三級丁酯
對1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例1；1000 mg，3.77 mmol)、胺甲酸三級丁酯(663 mg，5.66 mmol)、Xantphos (437 mg，0.75 mmol)及Cs2
CO3
(2460 mg，7.54 mmol)於無水1,4-二噁烷(40 mL)之懸浮液加入Pd(OAc)2
(84.7 mg，0.38 mmol)，令混合物經脫氣且隨後於100℃和氮氣下經加熱4小時。令結合之反應混合物經H2
O (20 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 30 mL)萃取。令結合之有機萃取液經鹽水(10 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經減壓下濃縮。令粗產物經矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至25：75溶析)純化以生成呈灰色固體之標的化合物(446 mg，39.2%)。LCMS m/z=302 [M+H]+
。
製備例8
5-氯-4-氟-2-聯胺基苯甲酸鹽酸鹽
令亞硝酸鈉(57.3 g，831 mmol)之H2
O (500 mL)溶液逐滴加入至2-胺基-5-氯-4-氟苯甲酸(105 g，554 mmol)於12M HCl (420 mL)和H2
O (140 mL)中的經冰冷卻之混合物以維持溫度低於5℃並隨後令反應混合物經攪拌30分鐘。逐滴加入氯化錫(II)二水合物(1.79 g，7.91 mmol)之37% HCl水溶液(140 mL)以維持溫度低於5℃並令所生成之懸浮液於室溫下經攪拌20小時。令懸浮液經過濾，令固體經冷H2
O和Et2
O沖洗且經乾燥以生成呈黃色固體之標的化合物(98.0 g，86.5%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：7.25 (d, 1H), 8.01 (d, 1H), 9.30 (br s, 1H)。
製備例9
5-溴-4-氟-2-聯胺基苯甲酸鹽酸鹽
依循製備例8描述之方法，自2-胺基-5-溴-4-氟苯甲酸製備呈固體之標的化合物(10.7 g，78%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：7.12 (d, 1H), 7.98-8.13 (M，1H), 9.05-9.53 (M，1H)。
製備例10
5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯
令1,1,3,3-四甲氧基丙烷(118 g，719 mmol)加入至5-氯-4-氟-2-聯胺基苯甲酸鹽酸鹽(製備例8；98.0 g，479 mmol)之EtOH (1000 mL)溶液並令反應混合物於100℃下經攪拌1小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經急速矽膠層析(經石油醚：EtOAc=0：100至80：20溶析)純化2次以生成呈黃色固體之標的化合物(44.0 g，34.2%)。LCMS m/z=269 [M+H]+
。
製備例11
5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
令LiOH (4.22 g，100 mmol)分批加入至5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯(製備例10；13.5 g，50.25 mmol)之EtOH/THF/H2
O (39 mL/60 mL/30 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令該混合物於真空下經濃縮以除去該有機溶劑，經於冰浴中冷卻且加入1N HCl以達到pH 3。令所生成之懸浮液經過濾，令固體經H2
O沖洗，隨後經與甲苯共蒸發且經乾燥以生成呈灰白色固體之標的化合物(11.3 g，93.5%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：6.55 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.96 (d, 1H), 8.23 (s, 1H), 13.24 (br s, 1H)。
製備例12
5-溴-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸
令5-溴-4-氟-2-聯胺基苯甲酸鹽酸鹽(製備例9；9.2 g，36.94 mmol)和1,1,3,3-四甲氧基丙烷(8.49 g，51.7 mmol)之AcOH (30 mL)溶液於80℃下經攪拌3小時並隨後於室溫下經攪拌48小時。令反應混合物小心地經飽和NaHCO3
水溶液(400 x 3 mL)沖洗並令結合之水溶液經DCM (2 x 200 mL)沖洗。令結合之水層隨後經酸化至pH 4並經DCM (3 x 200 mL)萃取。令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥並經減壓下蒸發以生成呈淡黃色固體之標的化合物(8.5 g，80.7%)。LCMS m/z=285, 287 [M+H]+
。
製備例13
5-氯-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
令DIPEA (7.0 g，72.07 mmol)加入至5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(製備例11；7.0 g，29.09 mmol)、N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(3.41 g，34.9 mmol)及HATU (16.6 g，43.6 mmol)之DMF (80 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令混合物倒入至EtOAc (300 mL)並經鹽水(3 x 160 mL)沖洗，令有機相置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮。令粗產物經急速矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至70：30溶析)純化以生成呈灰色固體之標的化合物(6.4 g，78%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：3.28 (s, 3H), 3.37 (s, 3H), 6.49 (s, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.81 (s, 1H)。
製備例14
5-溴-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
於室溫下對5-溴-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸(製備例12；5.71 g，20.03 mmol)於DCM (32 mL)和DMF (32 mL)之溶液加入HOBt (3.03 g，22.4 mmol)、EDC.
HCI (4.30 g，22.4 mmol)、N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(2.44 g，25.0 mmol)及DIPEA (4.36 mL，25.0 mmol)並令反應混合物經攪拌19小時。令反應混合物於真空下經濃縮，隨後經EtOAc (200 mL)稀釋且經H2
O (100 mL)沖洗。令有機層經分離並令水相經EtOAc (2 x 80 mL)萃取。令結合之有機萃取液經H2
O (80 mL)和鹽水(80 mL)沖洗並隨後經減壓下蒸發。令粗產物經矽膠管柱層析(經EtOAc：石油醚=0：100至50：50溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：3.24 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 6.46 (br s, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.79 (s, 1H)。
製備例15
1-[5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
令MeMgBr (3.4M 2-MeTHF溶液；60.9 mL，207 mmol)逐滴加入至5-氯-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺(製備例13；23.5 g，82.8 mmol)於THF (350 mL)的經冰冷卻之溶液，令反應混合物經攪拌10分鐘，隨後回溫至室溫且再經攪拌18小時。於減壓下且於未經加熱下除去THF並令殘餘物分佈於飽和NH4
Cl溶液和EtOAc。令有機層經水和鹽水沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮至其體積之約1/3。令所生成之固體溶解於DCM並令溶液於真空下經濃縮至其體積之約1/3。令所生成之懸浮液經過濾，令固體經己烷和Et2
O沖洗且經乾燥以生成標的化合物(13.23 g)。令濾液於減壓下經蒸發並令黃色固體經矽膠層析(Redisep® GOLD管柱；經己烷：EtOAc=100：0至50：50溶析)純化以生成額外之化合物(2.3 g)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：2.04 (s, 3H), 6.58 (s, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.65-7.78 (M，3H)。
製備例16
1-[5-溴-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
於-70℃下令MeMgBr (21.5 mL，64.5 mmol, 3.0M Et2
O溶液)逐滴加入至5-溴-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-2-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺(製備例14；7.05 g，21.48 mmol)之THF (221 mL)溶液並令反應混合物於-70℃下經攪拌30分鐘，隨後回溫至室溫且經攪拌30分鐘。令反應物經冰冷1N HCl溶液(160 mL)驟冷並經EtOAc (300 mL)稀釋。令水層經EtOAc (2 x 100 mL)萃取並令結合之有機萃取液經減壓下蒸發。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至80：20溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(3.38 g，55.6%)。LCMS m/z=283 [M+H]+
。
製備例17
3-乙醯基-4-溴-N,N-雙(4-甲氧基苄基)苯磺醯胺
於0℃下經10分鐘令雙(4-甲氧基苄基)胺(865 mg，3.36 mmol)加入至3-乙醯基-4-溴苯-1-磺醯氯(500 mg，1.68 mmol)和Et3
N (340 mg，3.36 mmol)之DCM (5 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令該反應混合物經EtOAc (50 mL)稀釋，經HCl (1M，10 mL)驟冷且令相層分離。令有機相經飽和NaHCO3(aq)
溶液(26 mL)沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)，經過濾和真空下濃縮以生成白色固體。令該固體經矽膠管柱層析(經EtOAc：庚烷溶析)純化以生成標的化合物(580 mg，67%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：2.52 (s, 3H), 3.74 (s, 6H), 4.20 (s, 4H), 6.72 (d, 4H), 6.94 (d, 4H), 7.54-7.62 (M，3H)。
製備例18
3-乙醯基-N,N-雙(4-甲氧基苄基)-4-(1H-吡唑-1-基)苯磺醯胺
令3-乙醯基-4-溴-N,N-雙(4-甲氧基苄基)苯磺醯胺(製備例17；450 mg，0.87 mmol)、K2
CO3
(360 mg，2.60 mmol)、1H-吡唑(177 mg，2.60 mmol)、CuI (49.6 mg，2.60 mmol)及(R,R)-(-)-N,N’-二甲基-1,2-環己烷二胺(30.9 mg，2.60 mmol)於DMF (3 mL)之混合物於105℃和氮氣下經攪拌16小時。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮並令殘餘物分佈於DCM和NaHCO3
水溶液且令相層分離。令水相經DCM (3 x 5 mL)萃取，令結合之有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發。令粗產物經矽膠管柱(經EtOAc：庚烷=0：100至50：50溶析)純化以生成標的化合物(305 mg，70%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：2.10 (s, 3H), 3.81 (s, 6H), 4.32 (s, 4H), 6.59 (s, 1H), 6.80 (d, 4H), 7.08 (d, 4H), 7.45 (d, 1H), 7.82-7.95 (M，4H)。
製備例19
1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇
對1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例1；20.0 g，75.44 mmol)於MeOH (200 mL)和THF (200 mL)之冰冷溶液分批加入NaBH4
(3.43 g，90.5 mmol)。令反應混合物於0℃下經攪拌1小時並隨後於室溫下再經攪拌30分鐘。令混合物經HCl (1N，30 mL)和H2
O (100 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 100 mL)萃取。令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至60：40溶析)純化以生成呈褐色油狀液體之標的化合物(17.76 g，88%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：1.14 (d, 3H), 4.73-4.84 (M，1H), 5.37 (d, 1H), 6.47-6.54 (M，1H), 7.28 (s, 1H), 7.57 (dd, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.84 (d, 1H), 8.03 (d, 1H)。
製備例20至23
依據製備例19描述之方法，藉由還原適當之乙酮，製備下表所示之醇。
實施例24至26
依據製備例19描述之方法，藉由還原適當之乙酮，製備下表所示之醇並隨後藉由SFC且使用所述之條件進行純化。
製備例27
3-[(1S)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
令3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例2；200 g，0.81 mol)和DCM (0.8 L)經攪拌20分鐘並經N2
吹洗。於-50℃下經2小時令(-)-DIP-Cl (965 mL，1.64 mol)逐滴加入至反應混合物並隨後令該混合物於15℃下經攪拌。令該反應混合物於減壓下經濃縮並令殘餘物溶解於MTBE (4 L)。加入2,2'-亞胺基二-1-乙醇(350 g，3.30 mol)並令溶液於20℃下經攪拌3小時。令混合物經過濾，令濾液經蒸發且令粗生成物經矽膠管柱(經石油醚：EtOAc=90：10至80：20溶析)純化以生成粗產物。於40℃下令該粗產物溶解於MTBE (1 L)，加入正己烷(1.6 L)，令懸浮液於20℃下經攪拌12小時並隨後經過濾，令固體於30℃和真空下經乾燥以生成標的化合物(191 g，47.6%)。RT=3.274分鐘(AD-3 150 mm x 4.6 mm x 3 µm管柱；CO2
：0.1% TFA之EtOH溶液=5：95至45：65；經7.5分鐘；2.5 mL/min)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.46 (d, 3H), 3.95 (s, 3H), 4.81 (q, 1H), 5.15 (br s, 1H), 6.53 (s, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.78 (s, 2H), 8.03 (d, 1H), 8.31 (s, 1H)。
其他方法
令3-乙醯基-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例2；30 g，120 mmol)於DMSO (200 mL)之混合物經加熱至50℃以生成溶液並隨後經冷卻至室溫。令KRED101 (12 g)、ADH-101 (1 g)及NADP+ (500 mg)溶解於磷酸鉀緩衝液(500 mL；pH 7.5)並於35℃下加入至配備頂部攪拌之反應器(2 L)且經額外之緩衝液(250 mL)沖洗。加入IPA (50 mL)並隨後緩慢加入該酮/DMSO溶液且令反應混合物於35℃下經攪拌7小時。加入額外之ADH-101 (500 mg)和NADP+ (250 mg)之緩衝液(總計10 mL)並令反應混合物經攪拌14小時。再次加入額外之ADH-101 (500 mg)和NADP+ (250 mg)之緩衝液(總計10 mL)並令反應混合物經攪拌8小時。再次加入額外之ADH-101 (250 mg)和NADP+ (125 mg)並令反應混合物再經攪拌14小時。令EtOAc (500 mL)加入至經冷卻之反應混合物並令該混合物經攪拌30分鐘。將該反應器之內容物轉移至瓶(2 L)，加入寅氏鹽®並令混合物再經攪拌30分鐘。令該混合物經通過經水濕潤之寅氏鹽®過濾並經EtOAc (100 mL)沖洗。令MeOH (20 mL)加入至濾液，令相層分離並令有機層經鹽水(400 mL)沖洗且經乾燥(Na2
SO4
)。令10% (IPA/iPrOAc)(500 mL)加入至水相並令混合物經激烈攪拌且隨後再經通過經水濕潤之寅氏鹽®過濾。令MeOH (20 mL)加入至濾液，令相層分離並令有機層經鹽水(400 mL)沖洗且經乾燥(Na2
SO4
)。令結合之有機層經過濾，令濾液結合並於減壓下經濃縮且與庚烷共沸以生成粗產物(28 g)。令該粗產物與依據相同方法所製備之另一批粗產物(13.14 g)結合並令固體懸浮於MTBE (120 mL)。令懸浮液於回流下經加熱並令該熱混合物經過濾以除去不溶物。令濾液經冷卻至0℃，加入庚烷且令所生成之懸浮液經攪拌1小時並隨後回溫至室溫。令固體經過濾並於真空下經乾燥以生成呈白色固體之標的化合物(35.2 g)。LCMS m/z=269 [M+Na]+
。
製備例28
3-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
令Pd(OAc)2
(1870 mg，8.33 mmol)分批加入至1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇(製備例19；44.5 g，166.6 mmol)、Et3
N (116 mL，833 mmol)及DPPP (6.87 g，16.7 mmol)之MeOH (500 mL)溶液並令反應混合物於80℃和CO (50 psi)下經攪拌48小時。令經冷卻之反應混合物經過濾且經減壓下蒸發。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至60：40溶析)純化以生成亮褐色液體(34.0 g，83%)。令某些產物經SFC (Chiralpak AD-H；250 mm x 30 mm 5µ管柱；經25% (0.1% NH3
水溶液/EtOH)溶析；流速60 mL/min)純化以生成呈無色油之標的化合物(峰1)(454 mg，47.8%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：1.17 (d, 3H), 3.90 (s, 3H), 4.91-5.01 (M，1H), 5.40 (d, 1H), 6.53-6.58 (M，1H), 7.48 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.94 (dd, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.35 (d, 1H)。
製備例29
2-氟-5-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
依據製備例28描述之方法，自1-[5-溴-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇(製備例21)製備呈白色固體之標的化合物(2.0 g，64%)。令產物進一步經SFC (AY管柱(250 mm x 30 mm 10µ)；經20% (0.1% NH3
水溶液/EtOH)溶析；流速50 mL/min)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(42.4%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.48 (d, 3H), 3.98 (s, 3H), 4.76-4.85 (M，1H), 5.06 (d, 1H), 6.55-6.59 (M，1H), 7.12 (d, 1H), 7.79-7.81 (M，2H), 8.23 (d, 1H)。
製備例30和31
3-(1-羥基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈和3-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈
令1-[5-溴-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇(製備例19；1.8 g，6.7 mmol)、Zn(CN)2
(2.37 g，20.2 mmol)及Pd(PPh3
)4
(779 mg，0.674 mmol)於無水DMF (15 mL)之混合物經N2(g)
氣泡5分鐘。立即密封該管並經加熱至140℃達7小時。令H2
O (20 mL)和EtOAc (40 mL)先後加入至經冷卻之混合物。令所生成之懸浮液經過濾，令濾液經EtOAc (3 x 30 mL)萃取並令結合之有機層經H2
O (20 mL)和鹽水(20 mL)沖洗且隨後置於硫酸鈉上乾燥，經過濾和真空下濃縮以生成褐色油。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至30：70溶析)純化以生成呈無色油之3-(1-羥基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例30；1320 mg，92%)。令粗產物經SFC (Chiralpak AD-H管柱；經30% (0.1% NH3
水溶液/EtOH)溶析)純化以生成呈無色油之3-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例31；335 mg，48%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：1.17 (d, 3H), 4.97-5.00 (M，1H), 5.47 (d, 1H), 6.58 (s, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.88 (d, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.18 (s, 1H)。
製備例32
2-氟-5-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈
令二噁烷(125 mL)和H2
O (125 mL)加入至1-[5-氯-4-氟-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙醇(製備例22；11.11 g，46.2 mmol)、K4
[Fe(CN)6
]•3H2
O (11.7 g，27.7 mmol)、tBuXPhos-Pd Gen-3預觸媒(220 mg，0.28 mmol)及tBuXPhos (118 mg，0.277 mmol)之混合物並令該混合物於氮氣下經脫氣。令反應混合物於100℃下經加熱18小時並隨後加入額外之tBuXPhos-Pd Gen-3預觸媒(110 mg，0.14 mmol)和tBuXPhos (59 mg，0.139 mmol)。令混合物經脫氣並於100℃下再經加熱22小時。加入額外之K4
[Fe(CN)6
]•3H2
O (11.7 g，27.7 mmol)、tBuXPhos-Pd Gen-3預觸媒(220 mg，0.28 mmol)及tBuXPhos (118 mg，0.277 mmol)並令混合物經脫氣且令該反應混合物於100℃下經攪拌24小時。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮，令水溶液經DCM稀釋，令所生成之懸浮液經過濾以移除固體且令相層分離。令有機相經鹽水沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經層析(Redisep GOLD矽膠管柱80 g；經己烷：EtOAc溶析)純化以生成呈亮黃色油之標的化合物(1.07 g)。令該油進一步經SFC (LUX Amylose-1；250 mm x 4.6 mm 5 µm管柱；經CO2
：0.2% NH4
+MeOH=5：95至40：60溶析8分鐘；3 mL/min)純化以生成標的化合物(490 mg，4.6%)。RT=3.781分鐘。
製備例33
1-[3-(1H-吡唑-1-基)-2-氰基吡啶
令Cs2
CO3
(26.7 g，82 mmol)加入至1H-吡唑(11.2 g，164 mmol)之DMF (250 mL)溶液並令混合物於室溫下經攪拌45分鐘。加入3-溴-2-氰基吡啶(10 g，55 mmol)、CuI (1.04 g，5.46 mmol)及(R,R)-(-)-N,N’-二甲基-1,2-環己烷二胺(0.466 g，3.28 mmol)並令反應混合物於130℃和氮氣下經攪拌12小時。令NH3
水溶液(300 mL)加入至經冷卻之反應混合物並令該混合物經EtOAc (2 x 250 mL)萃取。令結合之有機層經鹽水(3 x 500 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且經過濾和真空下濃縮。令粗產物經急速矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至50：50溶析)純化以生成呈白色固體之所欲產物(8.6 g，92%)。LCMS m/z=171 [M+H]+
。
製備例34
1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
令K2
CO3
(66.2 g，479 mmol)加入至1-(6-溴-3-氟-4-(三乙基矽基)吡啶-2-基)乙酮(WO 2016071211；103 g，160 mmol)和1H-吡唑(10.9 g，160 mmol)於無水MeCN (1300 mL)之懸浮液並令反應混合物於80℃下經攪拌16小時。令經冷卻之混合物經過濾，經MeCN (3 x 60 mL)沖洗且令結合之濾液經減壓下蒸發。令粗產物經急速矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至20：80溶析)純化以生成呈褐色油之標的化合物(14.8 g，34.8%)。LCMS m/z=268 [M+H]+
。
製備例35
5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)-2-氰基吡啶
令3,5-二氟-2-氰基吡啶(21.59 g，0.154 mol)、1H-吡唑(10.5 g，0.154 mol)及K2
CO3
(53.2 g，0.385 mol)於MeCN (1000 mL)之混合物於20℃下經攪拌16小時。令反應混合物經過濾並令濾液於真空下經濃縮。令殘餘物經急速矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至50：50溶析)純化2次以生成呈白色固體之標的化合物(15.2 g，52.5%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：6.63 (dd, 1H), 7.87 (d, 1H), 8.09 (dd, 1H), 8.46 (d, 1H), 8.53 (d, 1H)。
製備例36
1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
令MeMgBr (3M Et2
O溶液；49.9 mL，150 mmol)加入至1-[3-(1H-吡唑-1-基)-2-氰基吡啶(製備例33；8.50 g，49.95 mmol)於THF (250 mL)之攪拌溶液並令反應混合物於25℃下經攪拌16小時。令反應物經HCl水溶液驟冷並經EtOAc (2 x 20 mL)萃取。令結合之有機萃取液經飽和NaHCO3
水溶液(200 mL)和鹽水(3 x 200 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成暗褐色油。令該油經矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至60：40溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(6.15 g，65.8%)。LCMS m/z=188 [M+H]+
。
製備例37
6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯
於室溫下對1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例34；5.30 g，19.92 mmol)於MeOH (53 mL)之懸浮液加入DPPP (1640 mg，3.99 mmol)、Pd(OAc)2
(447 mg，1.99 mmol)及Et3
N (13.9 mL，99.6 mmol)。令混合物經氮氣脫氣並令該反應混合物於80℃和CO (50 psi)下經加熱68小時。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至100：0溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(3.7 g，75.4%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：2.52 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 6.64 (dd, 1H), 7.83 (d, 1H), 8.29 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 8.51 (d, 1H)。
製備例38
6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸
令LiOH (200 mg，8.35 mmol)加入至6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯(製備例37；700 mg，2.85 mmol)之THF/MeOH/H2
O (6 mL/6 mL/6 mL)溶液並令反應混合物於20℃下經攪拌2小時。令反應混合物經額外之DCM/MeOH/H2
O (50 mL/5 mL/50 mL)稀釋，藉由使用濃HCl調整pH至4且令相層分離。令水相經DCM/MeOH (5 x 50 mL/5 mL)萃取並令結合之有機相經過濾且經減壓下蒸發以生成呈亮黃色固體之標的化合物(660 mg，100%)。LCMS m/z=232 [M+H]+
。
製備例39
6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧醯胺
令6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸(製備例38；750 mg，3.24 mmol)、HOBT (877 mg，6.49 mmol)、EDC.
HCl (1.24 g，6.49 mmol)及Et3
N (1.41 mL，9.73 mmol)於DMF (10 mL)之混合物於20℃下經攪拌0.5小時。加入NH4
Cl (521 mg，9.73 mmol)並令反應混合物於20℃下經攪拌16小時。令反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經急速矽膠層析(經EtOAc：MeOH=30：70溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(470 mg，63%)。LCMS m/z=231 [M+H]+
。
製備例40
1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
於0℃下令MeMgBr (213 mL，638 mmol, 3M Et2
O溶液)逐滴加入至5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)-2-氰基吡啶(製備例35；30.0 g，159.4 mmol)於THF (1300 mL)之無色溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌3小時。令反應混合物倒入至冰內的1M HCl水溶液(360 mL)，令混合物經攪拌30分鐘且隨後經5M NaOH處理直至pH約7至8。令所生成之溶液經EtOAc (100 mL x 2)萃取並令結合之有機層經乾燥(Na2
SO4
)且經過濾和真空下濃縮。令橙色膠經管柱層析(矽膠；經石油醚：EtOAc=100：0至80：20溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(19.5 g，60%)。LCMS m/z=206 [M+H]+
。
製備例41
1-[5-氟-1-氧負離子基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
令m-CPBA (66.9 g，330 mmol)加入至1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例40；27.05 g，131.83 mmol)之DCM (400 mL)溶液並令反應混合物於45℃下經攪拌64小時。令反應混合物經通過寅氏鹽®薄墊過濾並經DCM (100 mL)沖洗。令6M KOH水溶液(100 mL)加入至濾液並令溶液經攪拌20分鐘。令有機層經分離，經飽和Na2
SO3
水溶液(每次於室溫下經攪拌20分鐘；3 x 200 mL)沖洗且隨後於真空下經濃縮。令粗產物經管柱層析(120 g矽膠；經EtOAc：石油醚=15：85至100：0溶析)純化2次以生成呈黃色固體之標的化合物(14.48 g，50%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：3.14 (s, 3H), 6.51 (dd, 1H), 7.23 (dd, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.81 (d, 1H), 8.08 (dd, 1H)。
製備例42
1-[6-溴-5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮
令1-[5-氟-1-氧負離子基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例41；13.1 g，59.23 mmol)之THF (300 mL)溶液於75℃下經加熱15分鐘直至得到溶液。加入分為3份之新製POBr3
(34.0 g，118 mmol)並令反應混合物於75℃下經攪拌1小時。令經冷卻之混合物倒入至飽和Na2
CO3
溶液(500 mL)且經EtOAc (100 mL)稀釋。令相層分離，令水層經EtOAc (100 mL)萃取且令有機相於真空下經濃縮。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至25：75溶析)純化2次以生成呈白色固體之標的化合物(15.4%)。LCMS m/z=284 [M+H]+
。
製備例43
6-乙醯基-3-氟-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯
令1-[6-溴-5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例42；1000 mg，3.52 mmol)、DIPEA (1.84 mL，10.6 mmol)及Pd(tBu3
P)2
(198 mg，0.387 mmol)於MeOH (70.4 mL)之混合物於室溫和CO (45 psi)下經攪拌18小時。令反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至70：30溶析)純化以生成呈紅黃色固體之標的化合物(73%)。LCMS m/z =264 [M+H]+
。
製備例44
{[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙酸三級丁酯
令1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例34；1.50 g，5.64 mmol)、2-羥基乙酸三級丁酯(1.49 g，11.3 mmol)、Cs2
CO3
(9.18 g，28.2 mmol)、tBuXPhos (239 mg，0.56 mmol)及tBuXPhos-Pd Gen-3 (224 mg，0.28 mmol)於二噁烷(15 mL)之混合物經氮氣脫氣5分鐘並於80℃下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物經EtOAc (60 mL)稀釋並經H2
O (60 mL)沖洗。令有機層置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至50：50溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(990 mg，55%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.48 (s, 9H), 2.54 (s, 3H), 4.85 (s, 2H), 6.46 (dd, 1H), 7.10 (d, 1H), 7.69 (dd, 2H), 7.79 (d, 1H)。
製備例45
2-{[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]氧基}乙酸乙酯
依循製備例44描述之方法，自1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例34)和乙酸2-羥基乙酯得到呈黃色膠之標的化合物(138 mg，13%)。LCMS m/z=290 [M+H]+
。
製備例46
1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
令NaBH4
(2450 mg，64.9 mmol)加入至1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例36；6.07 g，32.43 mmol)之MeOH (162 mL)溶液，令溶液經N2
清洗且令反應混合物於30℃下經攪拌1小時。令反應經丙酮驟冷，令該混合物經過濾且令濾液於真空下經濃縮。令粗產物經管柱層析(急速矽膠層析；經石油醚：EtOAc=100：0至80：20溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(4.1 g，67%)。LCMS m/z=190 [M+H]+
。
製備例47
6-(1-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧醯胺
令NaBH4
(154 mg，4.08 mmol)加入至6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧醯胺(製備例39；0.47 g，2.04 mmol)之乾燥EtOH (20 mL)溶液並令反應混合物於20℃下經攪拌1小時。令該反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱矽膠層析(經MeOH：DCM=4：96溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(260 mg，54.8%)。LCMS m/z=233 [M+H]+
。
製備例48至50
依據製備例47描述之方法，藉由還原適當之乙酮，製備下表所示之醇，並藉由使用所描述之SFC條件，分離鏡像異構物。
製備例51
6-[(1R)-1-羥基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯
對6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯(製備例37；800 mg，3.26 mmol)於THF (8 mL)和MeOH (8 mL)之溶液分批加入NaBH4
(98.7 mg，2.61 mmol)並令反應混合物於0℃下經攪拌5分鐘。令反應物經NaHCO3
水溶液(20 mL)驟冷並經EtOAc (3 x 20 mL)萃取。令結合之有機層經鹽水(50 mL)沖洗並置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=10：90至80：20溶析)純化以生成無色油(690 mg，85.5 %)。令該油進一步經SFC (Lux Cellulose-2；經25% (0.1% NH3
水溶液/IPA)溶析)純化以生成標的化合物(峰2；353 mg，42.7%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.35 (d, 3H), 4.02 (s, 3H), 4.78 (d, 1H), 5.18-5.20 (M，1H), 6.51-6.63 (M，1H), 7.73-7.87 (M，3H), 8.16 (d, 1H)。
製備例52
(1R)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
令1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例34；50.0 g，190 mmol)溶解於溫熱(50℃) DMSO (40 mL)並令所生成之溶液經冷卻至室溫。令D+葡萄糖(40.8 g，225 mmol)於0.1 M pH 7緩衝液(500 mL)之溶液加入至配備pH控制器之反應器(2 L)並經額外之緩衝液(100 mL)輕洗。加入NADP+ (250 mg)、GDH-CDX901 (250 mg)及KRED101 (5.0 g)於緩衝液(200 mL)之溶液，經額外之緩衝液(150 mL)輕洗且令混合物於30℃下經攪拌。加入1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮溶液(約10.0 mL整分)並令反應混合物於30℃下經攪拌。監測該反應混合物之pH並藉由加入2N NaOH調節pH以維持pH 7.0直至無須進一步加入。加入10% IPA/iPrOAc (600 mL)並令混合物經攪拌1小時。令該反應器排乾並經額外之10% IPA/iPrOAc (300 mL)輕洗。加入寅氏鹽®(40 g)，令混合物經激烈攪拌0.5小時且隨後經通過經水濕潤之寅氏鹽®墊過濾並經10% IPA/iPrOAc (100 mL)沖洗。令濾液經分離，令水層經10% IPA/iPrOAc (30 mL)攪拌且再經通過寅氏鹽®過濾。令結合之有機萃取液經鹽水沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)，經過濾且於減壓下經濃縮並與庚烷共沸。令所生成之產物於真空下經乾燥以生成呈固體之標的化合物(47 g)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.39 (d, 3H), 4.98 (q, 1H), 6.57 (s, 1H), 7.28-7.7.82 (M，4H)。RT=4.43分鐘。HPLC分析條件：XBridge C18 4.6 mm x 150 mm x 5µ；MeCN：H2
O=5：95至100：0；經7 分鐘；1.5 mL/min。
製備例53
(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
令1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例40；100 g，487 mmol)於DMSO (40 mL)中於50℃下溫熱直至得到溶液並隨後令該溶液冷卻。加入葡萄糖(106 g，406 mmol)和pH 7磷酸鉀緩衝液(0.1 M，800 mL)並令混合物於30℃下經攪拌直至得到溶液。調整pH至6.5並加入呈固體之NADP+ (500 mg)、GDH-CDX901 (500 mg)及KRED101 (5.0 g)且經緩衝液(200 mL)沖洗。令混合物經攪拌5分鐘並隨後加入1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮溶液(10 mL劑量)和2M NaOH以維持於pH 6.5。一旦已加入2M NaOH (280 mL)，令反應混合物於室溫下經攪拌18小時。令該混合物經EtOAc (800 mL)稀釋並經攪拌1小時。加入寅氏鹽®(50 g)，令混合物經攪拌230分鐘，隨後經通過經水濕潤之寅氏鹽®墊過濾，經EtOAc沖洗且令濾液經分離。令水相經EtOAc (2 x 400 mL)萃取，令結合之有機萃取液經鹽水沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發以生成呈淡黃色固體之標的化合物(99.6 g)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.36 (d, 3H), 4.47-4.49 (M，1H), 4.98-5.02 (M，1H), 6.55 (s, 1H), 7.48-7.83 (M，3H), 8.56 (s, 1H)。
製備例54
1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
於0℃下對5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)-2-氰基吡啶(製備例35；3.59 g，19.08 mmol)之THF (90.9 mL)溶液加入MeMgBr (3M 2-MeTHF溶液；19.1 mL，57.2 mmol)並令反應混合物回溫至室溫且經攪拌30分鐘。令反應物經6N HCl中和並經EtOAc萃取。令水層經飽和Na2
CO3
水溶液驟冷並經EtOAc (3x)萃取。令結合之有機萃取液經鹽水沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發。令殘餘物溶解於MeOH (87.4 mL)，令溶液經冷卻至0℃並加入NaBH4
(1.08 g，28.6 mmol)且令反應混合物於室溫下經攪拌18小時。令該混合物經1N HCl驟冷，隨後加入飽和Na2
CO3
溶液且令混合物經EtOAc (3x)萃取。令結合之有機層經鹽水沖洗並置於硫酸鈉上乾燥。於減壓下經蒸發溶劑以生成呈黃色油之粗化合物(2.55 g，64.5%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.31-1.41 (M，3H), 4.45-4.46 (M，1H), 4.99-5.02 (M，1H), 6.50-6.59 (M，1H), 7.47 (dd, 1H), 7.71-7.83 (M，2H), 8.53 (d, 1H)。
製備例55
(1R)-1-[6-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
對NaH (60%礦物油溶液；2.16 g，54.0 mmol)之MeOH (30 mL)溶液加入(1R)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例52；1.81 g，6.75 mmol)並令溶液於室溫下經攪拌20分鐘且隨後於60℃下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至50：50溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(1.36 g，91%)。LCMS m/z=220 [M+H]+
。
製備例56
(1R)-1-[6-({[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}甲基)-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇
於室溫下對6-[(1R)-1-羥基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧酸甲酯(製備例51；50.00 mg，0.202 mmol)於MeOH (4.0 mL)之無色溶液加入LiBH4
(2.0 M THF溶液；0.404 mL，0.81 mmol)並令反應混合物經攪拌3小時。令反應物經10% AcOH/MeOH中和至pH 7至8並於真空下經濃縮以生成黃色膠(44.34 mg)。於室溫下對該膠(40.00 mg，0.182 mmol)和咪唑(14.9 mg，0.22 mmol)於DCM (2.0 mL)之黃色溶液加入TBDMSCl (30.2 mg，0.20 mmol)並令反應混合物經攪拌18小時。令該反應混合物經DCM和H2
O (6 mL)稀釋，令相層分離，令有機相經分離且令水層經DCM (5 mL)萃取。令結合之有機相於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至40：60溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物(35 mg，58%)。LCMS m/z=334 [M+H]+
。
製備例57
甲磺酸1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯
於0℃下令MsCl (218.0 mg，1.90 mmol)加入至1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例46；300.0 mg，1.59 mmol)和Et3
N (321.0 mg，3.17 mmol)之DCM (10 mL)溶液並令反應混合物於0℃下經攪拌30分鐘。令反應物經H2
O (5 mL)驟冷並經DCM (2 x 10 mL)萃取。令結合之有機層經NaHCO3
水溶液(2 x 5 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成呈黃色油之標的化合物(420.0 mg，99.1%)。LCMS m/z=268 [M+H]+
。
製備例58
甲磺酸1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯
依循製備例57描述之方法，自1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例54)得到呈灰白色固體之標的化合物(97%產率)。LCMS m/z=286 [M+H]+
。
製備例59
甲磺酸(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯
依循製備例57描述之方法，自(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例53)得到呈油之標的化合物(定量產率)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.77 (d, 3H), 2.84 (s, 3H), 6.01 (q, 2H), 7.42-7.45 (M，2H), 7.79-7.81 (M，2H), 8.62 (s, 1H)。
製備例60
甲磺酸1-[6-胺甲醯基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯
令MsCl (0.3 mL，4 mmol)加入至6-(1-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-羧醯胺(製備例47；260 mg，1.12 mmol)和DIPEA (0.8 mL，4 mmol)於無水DCM (20 mL)的經冰冷卻之溶液並令反應混合物於20℃下經攪拌30分鐘。令反應物經H2
O (20 mL)驟冷並經DCM (2 x 20 mL)萃取。令有機層經分離，經NaHCO3
水溶液(20 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發以生成呈黃色油之標的化合物(350 mg)，其未經進一步純化而使用。LCMS m/z=311 [M+H]+
。
製備例61
5-溴-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-羧酸
對5-溴-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-羧酸甲酯(J. Med. Chem. 57(12)：5129-5140，2014；35 g，100 mmol)於MeOH (250 mL)和THF (100 mL)之溶液加入2N NaOH (258 mL，516 mmol)並令反應混合物於50℃下經攪拌2小時。令黃色溶液於真空下經濃縮以除去MeOH並使用2N HCl小心地調整該溶液之pH至約6。藉由過濾收集所生成之固體並於高真空下經乾燥以生成呈白色固體之標的化合物(32.0 g，95%)。1
H NMR (400 MHz, MeOD-d4
) δ：1.68-1.85 (M，3H), 2.06-2.16 (M，2H), 2.45-2.52 (M，1H), 3.80-3.87 (M，1H), 3.98-4.03 (M，1H), 5.87 (dd, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.14 (s, 1H)。
製備例62
5-溴-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-羧酸甲酯
於0℃下對5-溴-1H-吲唑-6-羧酸甲酯(28 g，110 mmol)於THF (500 mL)之懸浮液分批加入NaH (5.71 g，143 mmol, 60%礦物油溶液)並令懸浮液經攪拌30分鐘。加入SEM-Cl (22.0 g，132 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令黃色懸浮液經H2
O (600 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 600 mL)萃取。令結合之有機萃取液經鹽水(1200 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮以生成呈黃色油之粗產物。令該粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至10：90溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(15.8 g，37%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：-0.04 (s, 9H), 0.88-0.92 (M，2H), 3.53-3.57 (M，2H), 3.98 (s, 3H), 5.77 (s, 2H), 8.02 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.06 (s, 1H)。
製備例63
5-溴-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-羧酸
對5-溴-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-羧酸甲酯(製備例62；11.4 g，29.6 mmol)之MeOH (250 mL)溶液加入2N NaOH (88.8 mL，178 mmol)並令反應混合物於50℃下經攪拌3小時。令經冷卻之溶液於真空下經濃縮並使用1N HCl調整殘餘物之pH至6。令所生成之混合物經過濾並令固體經乾燥以生成呈黃色固體之標的化合物(11.0 g)。1
H NMR (400 MHz, MeOD-d4
) δ：0.02 (s, 9H), 0.95 (dd, 2H), 3.68 (dd, 2H), 5.78 (s, 2H), 8.11 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.46 (s, 1H)。
製備例64
1-[5-溴-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮
對5-溴-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-羧酸(製備例61；32.0 g，98.4 mmol)之THF (400 mL)溶液加入HATU (44.9 g，118 mmol)和N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(10.6 g，108 mmol)並令白色懸浮液於室溫下經攪拌20分鐘。加入Et3
N (29.9 g，295 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令黃色懸浮液經飽和NH4
Cl水溶液(400 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 400 mL)萃取。令結合之有機萃取液經鹽水(1200 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮以生成黃色膠。令該黃色膠經管柱層析(經EtOAc：石油醚=20：80至70：30溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物(38.0 g)。令該膠溶解於THF (500 mL)，令溶液冷卻至-70℃，逐滴加入MeMgBr (103 mL，310 mmol, 3M Et2
O溶液)，令懸浮液經攪拌30分鐘，隨後回溫至室溫且經攪拌16小時。逐滴加入H2
O (400 mL)以使反應驟冷，令混合物經EtOAc (400 mL)稀釋，隨後經通過寅氏鹽®過濾且經分離。令有機相置於硫酸鈉上乾燥並於真空下經濃縮以生成呈黃色膠之粗產物。令該粗產物經管柱層析(經EtOAc：石油醚=0：100至50：50溶析)純化以生成呈無色膠之標的化合物(19.5 g，58%)。1
H NMR (400 MHz, MeOD-d4
) δ：1.68-1.86 (M，3H), 2.03-2.16 (M，2H), 2.46-2.55 (M，1H), 2.68 (s, 3H), 3.81-3.84 (M，1H), 3.97-4.03 (M，1H), 5.87-5.89 (M，1H), 7.89 (s, 1H), 8.10 (s, 2H)。
製備例65
1-(5-溴-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基)乙酮
依循製備例64描述之方法，自5-溴-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-羧酸(製備例63)得到呈黃色油之標的化合物(4.5 g，46%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：0.03 (s, 9H), 0.96 (t, 2H), 2.67 (s, 3H), 3.62 (t, 2H), 5.73 (s, 2H), 7.88 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 8.10 (s, 1H)。
製備例66
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮
對1-[5-溴-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例64；19.5 g，60.3 mmol)之DMF (300 mL)溶液加入1H-吡唑(6.16 g，90.49 mmol)、(R,R)-(-)-N,N’-二甲基-1,2-環己烷二胺(858 mg，6.03 mmol)、CuI (1720 mg，9.05 mmol)及K2
CO3
(2.5 g，181 mmol)並令懸浮液於130℃下經攪拌16小時。令經冷卻之黑色懸浮液經H2
O (500 mL)稀釋，經EtOAc (3 x 500 mL)萃取，令結合之有機萃取液經鹽水(1000 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=20：80至60：40溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物(15.5 g，82.8%)。LCMS m/z=311 [M+H]+
。
製備例67
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙酮
依循製備例66描述之方法，自1-(5-溴-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基)乙酮(製備例65)得到呈黃色固體之標的化合物(3.3 g，76%)。LCMS m/z=357 [M+H]+
。
製備例68
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮
令1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例66；5.0 g，16.11 mmol)於4M HCl之二噁烷(100 mL)溶液的懸浮液於室溫下經攪拌2小時。令混合物經過濾，令固體經EtOAc沖洗且於真空下經乾燥以生成呈灰白色固體之標的化合物(粗產物)，其未經進一步純化而使用。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：1.91 (s, 3H), 6.55 (dd, 1H), 7.67-7.77 (M，2H), 7.97 (s, 1H), 8.25 (dd, 2H)。
製備例69
[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸甲酯
令Cs2
CO3
(29.8 g，91.7 mmol)和溴乙酸甲酯(9.3 g，60.8 mmol)加入至1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例68；6.9 g，30.50 mmol)之DMF (100 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌48小時。加入額外之Cs2
CO3
(15 g，46.2 mmol)和溴乙酸甲酯(4.5 g，29.42 mmol)並令反應混合物再經攪拌16小時。令該混合物經過濾並經EtOAc沖洗。加入H2
O (250 mL)，令相層經分離，令水相經EtOAc (3 x 150 mL)萃取，令結合之有機層經H2
O (2 x 100 mL)和鹽水(200 mL)沖洗，隨後置於無水硫酸鈉上乾燥且經過濾和真空下濃縮。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至60：40溶析)純化2次以生成呈白色固體之標的化合物(5.2 g，57.2%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.93 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 5.25 (s, 2H), 6.54 (dd, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.73-7.84 (M，3H), 8.16 (d, 1H)。
製備例70
[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸三級丁酯
依循類似於製備例69描述之方法，自1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例68)和溴乙酸三級丁酯得到呈亮黃色固體之標的化合物(632 mg，62.8%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.46 (s, 9H), 1.93 (s, 3H), 5.13 (s, 2H), 6.54 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.76-7.79 (M，2H), 7.81 (s, 1H), 8.16 (s, 1H)。
製備例71
[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基]乙酸甲酯
對1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例68；2.3 g，10.17 mmol)之THF (20 mL)溶液加入N,N-二環己基甲基胺(3.97 g，20.3 mmol)和溴乙酸甲酯(3.11 g，20.3 mmol)並令反應混合物於70℃下經攪拌18小時。令經冷卻之反應混合物經過濾，經EtOAc沖洗，加入H2
O (20 mL)且令相層分離。令水相經EtOAc (2 x 35 mL)萃取，令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至70：30溶析)純化以生成2個產物。令第一溶析產物經MeOH和MTBE碾製以生成呈灰白色固體之標的化合物(929 mg，24.3%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：2.09 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 5.28 (s, 2H), 6.49 (dd, 1H), 7.72-7.74 (M，3H), 7.98 (s, 1H), 8.13 (d, 1H)。
製備例72
5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶7-氧化物
於室溫下經30分鐘對5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(95 g，480 mmol)於無水EtOAc (1920 mL)之懸浮液加入m-CPBA (166 g，816 mmol)並隨後令反應混合物於45至50℃下經攪拌5小時。令經冷卻之反應混合物經過濾，令固體經EtOAc (2 x 50 mL)沖洗且於真空下經乾燥以生成呈亮褐色固體之標的化合物(93.6 g，91%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：8.14 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 14.69 (br s, 1H)。
製備例73
5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-腈
對5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶7-氧化物(製備例72；46.6 g，210 mmol)於MeCN (1050 mL)之懸浮液加入Et3
N (58.3 mL，420 mmol)和TMSCN (52.5 mL，420 mmol)並令反應混合物於80℃下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物懸浮於MTBE達60小時。令所生成之固體經過濾，經MTBE (2 x 30 mL)沖洗且於真空下經乾燥以生成呈紅色固體之標的化合物(89.9%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：8.31 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 14.34 (br s, 1H)。
製備例74
1-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)乙酮
於0℃下經40分鐘對5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-腈(製備例73；25.0 g，100 mmol)之THF (500 mL)溶液加入MeMgBr (3.0 M Et2
O溶液, 101 mL，303 mmol)。令反應混合物回溫至20℃並經攪拌3小時。令該反應混合物倒入至於冰水(300 mL)中之6M HCl水溶液(120 mL)並令所生成之黑色溶液經攪拌50分鐘。藉由使用10M NaOH水溶液使溶液中和並令相層分離。令水層經EtOAc (3 x 250 mL)萃取，令結合之有機相置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成呈紅色固體之標的化合物(84.9%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：2.67 (s, 3H), 8.24 (s, 1H), 8.68-8.74 (M，1H), 14.15 (br s, 1H)。
製備例75
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮
令1-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)乙酮(製備例74；29.6 g，110 mmol)、1H-吡唑(18.1 g，266 mmol)、Cs2
CO3
(72.3 g，222 mmol)及(R,R)-(-)-N,N’-二甲基-1,2-環己烷二胺(12.6 g，88.8 mmol)於DMF (185 mL)之懸浮液經氮氣清洗。加入CuI (4.23 g，22.2 mmol)並於130℃下令混合物於密封容器中經激烈攪拌4小時。令經冷卻之反應混合物經H2
O (600 mL)稀釋，令混合物經過濾且令濾液經分離。令水層經EtOAc (5 x 150 mL)萃取，令結合之有機層經水(50 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發。令所生成之黑色油經急速管柱矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至100：0溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(4.6 g)和額外粗產物(約8.1 g)。令該額外粗產物於MTBE (10 mL)中經攪拌15分鐘，令固體經過濾，經MTBE沖洗且經乾燥以生成額外之呈白色固體之標的化合物(5.1 g)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：2.60 (s, 3H), 6.52 (dd, 1H), 7.72-7.79 (M，2H), 8.21-8.23 (M，2H), 11.80 (br s, 1H)。
製備例76
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮
於0℃下經10分鐘對1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮(製備例75；19.35 g，85.16 mmol)和N,N-二環己基甲基胺(29.2 mL，136 mmol)之無水DMF (426 mL)溶液加入SEM-Cl (21.1 mL，119 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌40小時。令該混合物經H2
O (1500 mL)稀釋並經EtOAc (5 x 300 mL)萃取。令結合之有機層經水(50 mL)和鹽水(50 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經管柱層析(矽膠管柱；經EtOAc：石油醚=0：100至50：50溶析)純化2次以生成呈橙色油之標的化合物(19.85 g)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：-0.01- -0.04 (M，9H), 0.94-1.01 (M，2H), 2.70 (s, 3H), 3.70-3.75 (M，2H), 5.95 (s, 2H), 6.52 (d, 1H), 7.74 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.21 (s, 1H)。
製備例77
[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酸甲酯
對1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮(製備例75；400 mg，1.6 mmol)之無水THF (5 mL)溶液加入N,N-二環己基甲基胺(0.68 mL，3.17 mmol)和溴乙酸甲酯(0.3 mL，3.17 mmol)並令反應混合物於70℃下經攪拌18小時。令經冷卻之反應混合物經過濾，經EtOAc (10 mL)沖洗，加入H2
O (10 mL)且令相層分離。令水層經EtOAc (2 x 30 mL)萃取，令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至70：30溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(峰1；120 mg，25%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：2.64 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 5.40 (s, 2H), 6.52 (dd, 1H), 7.75 (dd, 2H), 8.21 (d, 2H)。
製備例78
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮
對1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮(製備例75；2.69 g，11.8 mmol)之THF (60 mL)溶液先後加入2,3-二氫哌喃(5.00 g，59.4 mmol)和pTsOH (299.7 mg，1.74 mmol)並令反應混合物於50℃下經攪拌3小時。令該反應混合物於真空下經濃縮以除去大部分溶劑並令殘餘物置入鹽水(30 mL)且經EtOAc (3 x 30 mL)萃取。令結合之有機層經乾燥(MgSO4
)，經過濾且經減壓下蒸發以生成淺黑色油。令該淺黑色油經急速管柱矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至49：51溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(2.39 g，64.8%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.65-1.70 (M，1H), 1.82-1.88 (M，2H), 2.02-2.05 (M，1H), 2.19-2.20 (M，1H), 2.64-2.66 (M，4H), 3.82-3.86 (M，1H), 4.14-4.18 (M，1H), 6.20 (dd, 1H), 6.50 (s, 1H), 7.74 (d, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.20 (s, 1H)。
製備例79
4-溴-2-硝基-5-(1H-吡唑-1-基)苯胺
對4-溴-5-氟-2-硝基苯胺(10.0 g，4.55 mmol)和1H-吡唑(5.79 g，85.1 mmol)於DMF (200 mL)之懸浮液加入K2
CO3
(17.6 g，128 mmol)並令反應混合物於100℃下經攪拌4小時。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮，令殘餘物經DCM (250 mL)稀釋且經飽和NaHCO3
水溶液(2 x 80 mL)沖洗。令有機相置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經自EtOAc/石油醚再結晶純化以生成呈黃色固體之標的產物(8.0 g，66%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：6.38 (br s, 2H), 7.32 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 8.08 (s, 1H)。
製備例80
1-[4-胺基-5-硝基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
步驟1
4-溴-5-氯-2-硝基苯胺
令5-氯-2-硝基苯胺(23.40 g，135.6 mmol)和N
-溴琥珀醯亞胺(24.10 g，136.0 mmol)於乙酸(400 mL)之混合物於130℃下經攪拌1小時。令反應混合物倒入至水(400 mL)中。藉由過濾收集沉澱物並經石油醚(5 x 50 mL)沖洗。隨後令濾餅於真空下經乾燥3小時以生成呈亮褐色固體之標的化合物(29 g，85%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：8.24 (s, 1 H), 7.63 (br s, 2 H), 7.29 (s, 1 H)。
步驟2
N-(4-溴-5-氯-2-硝基苯基)乙醯胺
令4-溴-5-氯-2-硝基苯胺(11.0 g，43.7 mmol)之乙酸(200 mL)溶液於120℃下經加熱。隨後逐滴加入乙酸酐(8.93 g，87.5 mmol)。令褐色溶液於120℃下經攪拌10小時。令反應混合物於減壓下經濃縮以除去大部分乙酸並隨後加入飽和碳酸氫鈉水溶液以調整pH至約7。令混合物隨後經乙酸乙酯(2 x 100 mL)萃取。令結合之有機層經水(50 mL)和鹽水(50 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經濃縮以生成含有標的化合物之黃色固體(14 g)，其未經進一步純化而用於進行下一個步驟。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：2.09 (s, 3H), 7.97 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 10.38 (br s, 1H)。
步驟3
N-(5-氯-4-(1-乙氧基乙烯基)-2-硝基苯基)乙醯胺
於氮氣氛圍下對N
-(4-溴-5-氯-2-硝基苯基)乙醯胺(14 g)和Pd(PPh3
)4
(2.52 g，2.18 mmol)之1,4-二噁烷(200 mL)溶液加入三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫烷(15.80 g，43.6 mmol)。令反應混合物經N2
(x 3)抽真空並隨後於100℃下經攪拌16小時。令反應混合物經冷卻至室溫並於減壓下經濃縮。令所生成之黑色油倒入至水(50 mL)中並經乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。令結合之有機層經置於無水Na2
SO4
上乾燥，經過濾和濃縮以生成呈黑色油之標的化合物，其未經額外之純化而用於進行下一個步驟。LCMSm/z
284.9 [M+H]+
。
步驟4
N-(4-乙醯基-5-氯-2-硝基苯基)乙醯胺
對N
-(5-氯-4-(1-乙氧基乙烯基)-2-硝基苯基)乙醯胺之乙酸乙酯(60 mL)溶液加入4N HCl(aq)
(120 mmol, 30 mL)。令混合物於室溫下經攪拌1小時。隨後令反應混合物經乙酸乙酯(3 x 80 mL)萃取。令結合之有機層經飽和NaHCO3
水溶液(25 mL)、水(50 mL)和鹽水(50 mL)沖洗，置於無水硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經濃縮以生成黑色油。令該黑色油隨後經急速層析(矽膠；先後經石油醚：乙酸乙酯=100：0至40：60梯度和0：100溶析)純化以產生黑色油(11 g)。隨後令該油再經急速層析(矽膠；經石油醚：乙酸乙酯=100：0至70：30梯度溶析)純化以生成黑色固體，其係經MTBE (2 x 15 mL)碾製以生成褐色固體(6.5 g)。隨後令該褐色固體經急速層析(矽膠；經石油醚：乙酸乙酯=100：0至60：40溶析)純化以生成固體。令該固體經MTBE (3 x 15 mL和隨後3 x 5 mL)碾製以生成呈黃色固體之標的化合物(4.88 g，44%；經3步驟)。LCMSm/z=
257 [M+H]+
。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：2.12 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 7.93 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 10.53 (s, 1H)。
步驟5
1-[4-胺基-5-硝基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
對N-(4-乙醯基-5-氯-2-硝基苯基)乙醯胺(4.63 g，18.04 mmol)、1H-吡唑(1.60 g，23.5 mmol)、t-BuOK (4.05 g，36.1 mmol)、CuI (687 mg，3.61 mmol)及1,10-啡啉(650 mg，3.61 mmol)之混合物加入DMF (100 mL)。令N2
氣泡通過懸浮液達10分鐘並令反應混合物於110℃下經攪拌16小時。令經冷卻之懸浮液經過濾並令濾液經EtOAc (150 mL)和水(300 mL)稀釋。令水相經EtOAc (2 x 150 mL)萃取，令結合之有機層經鹽水(2 x 150 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經管柱矽膠層析(經EtOAc：石油醚=100：0至50：50溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(1.85 g，41.6%)。LCMS m/z=247 [M+H]+
。
製備例81
4-溴-5-(1H-吡唑-1-基)苯-1,2-二胺
對4-溴-2-硝基-5-(1H-吡唑-1-基)苯胺(製備例79；8.0 g，28.0 mmol)於THF (150.0 mL)、EtOH (150.0 mL)及H2
O (50.0 mL)之溶液加入鐵粉末(9.47 g，10.0 mmol)和NH4
Cl (3.02 g，56.5 mmol)並令反應混合物於95℃下經加熱2小時。令經冷卻之混合物經EtOH稀釋，經通過寅氏鹽®過濾直至再無顏色通過濾器且於真空下經濃縮。令殘餘物溶解於EtOAc (250 mL)，經H2
O (80 mL)和鹽水(80 mL)沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)且經過濾和濃縮以生成呈褐色油之標的化合物(7 g，98%)。1
H NMR (400 MHz, MeOD-d4
) δ：6.45 (dd, 1H), 6.76 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.73 (d, 1H)。
製備例82
1-[4,5-二胺基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮
對1-[4-胺基-5-硝基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例80；1.85 g，7.51 mmol)於MeOH (80 mL)之黃色懸浮液加入濕Pd/C (50% H2
O溶液, 900 mg)並令黑色懸浮液於室溫下經攪拌5小時。令混合物經過濾並令濾液經減壓下蒸發以生成呈褐色膠之標的產物(1600 mg，98.5%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.82 (s, 3H), 3.47-3.50 (M，2H), 3.8-3.86 (M，2H), 6.45 (d, 1H), 6.72 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.71 (s, 1H)。
製備例83
6-溴-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑
令HCl (5 mL)加入至4-溴-5-(1H-吡唑-1-基)苯-1,2-二胺(製備例81；7.0 g，27.66 mmol)之甲酸(50 mL)溶液並令反應混合物於70℃下經攪拌2小時。令經冷卻之反應混合物經減壓下蒸發以生成呈褐色固體之標的化合物。令該固體(7.0 g，96%)未經進一步純化而用於下一個步驟。1
H NMR (400 MHz, MeOD-d4
) δ：6.63 (dd, 1H), 7.84 (d, 1H), 8.05 (d, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 9.58 (s, 1H)。
製備例84
1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙酮
對1-[4,5-二胺基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙酮(製備例82；1.6 g，7.40 mmol)和原乙酸三乙酯(3.60 g，22.2 mmol)之THF (60 mL)溶液加入TsOH (63.7 mg，0.37 mmol)並令反應混合物於60℃下經攪拌16小時。令經冷卻之溶液於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至20：80溶析)純化以生成黃色膠(2.0 g)。令該黃色膠溶解於EtOH (35 mL)，加入TsOH (100 mg，0.58 mmol)且令反應混合物於85℃下經攪拌2小時。令經冷卻之溶液於真空下經濃縮，令所生成之固體溶解於DCM (20 mL)，加入NaHCO3
固體且令混合物經攪拌10分鐘並隨後經過濾。令濾液經減壓下蒸發以生成呈褐色固體之標的化合物(1.39 g，78.2%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.90 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 6.55 (d, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.70-7.80 (M，3H)。
製備例85
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙醇
對1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例66；1.00 g，3.22 mmol)之無水EtOH (15.0 mL)溶液加入NaBH4
(244 mg，6.44 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌12小時。令該混合物經H2
O (500 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 500 mL)萃取。令結合之有機層經水(2 x 300 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成粗產物。令該粗產物經急速矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至0：100溶析)純化2次以生成呈黃色油之標的化合物(900 mg，89.4%)。LCMS m/z=335 [M+Na]+
。
製備例86
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙醇
依循製備例85描述之方法，自1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙酮(製備例67)得到呈亮黃色膠之標的化合物(99%產率)。1
H NMR (400 MHz, MeOD-d4
) δ：0.01 (s, 9H), 0.95 (t, 2H), 1.28 (d, 3H), 3.68 (dt, 2H), 4.73-4.78 (M，1H), 2.07 (s, 2H), 6.56 (dd, 1H), 7.76-7.77 (M，2H), 7.91 (d, 1H), 8.01 (s, 1H), 8.51 (s, 1H)。
製備例87
{6-[(1R)-1-羥基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯
令NaBH4
(63.4 mg，1.68 mmol)分批加入至於0℃下[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸甲酯(製備例69；1000 mg，3.35 mmol)之MeOH (40 mL)溶液並令反應混合物於此溫度下經攪拌2小時。藉由加入1N HCl至pH 5使反應驟冷並令溶液於真空下經濃縮以生成黃色固體。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至80：20溶析)純化以生成消旋性產物。令該產物進一步經SFC (AD 250 mm x 30 mm 5µ管柱；經40% (0.1% NH3(aq)
之IPA溶液)溶析；50 mL/min)純化以生成呈白色固體之標的化合物(42.5%)。RT=4.816分鐘[5：95至40：60 (0.05% DEA之IPA溶液)：CO2
；經5分鐘；流速2.5 mL/min]。LCMS m/z=301 [M+H]+
。
製備例88至91
依據製備例87描述之方法，藉由還原適當之乙酮，製備下表所示之醇並隨後藉由SFC且使用所述之條件進行純化。
製備例92
1-[1-(2-{[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙醇
對0℃下[6-乙醯基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸甲酯(製備例69；5.10 g，17.1 mmol)之MeOH (100 mL)溶液分批加入NaBH4
(1290 mg，34.2 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌5小時。藉由加入3M HCl水溶液至pH 5使反應驟冷，令溶液於真空下經濃縮且令殘餘物分佈於EtOAc/H2
O (100 mL/10 mL)。令相層分離並令水層經EtOAc (3 x 10 mL)萃取。令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發以生成黃色膠。令該膠溶解於無水DCM (100 mL)，令溶液冷卻至0℃，隨後加入咪唑(2.33 g，34.2 mmol)和TBDMSCl (2.58 g，17.1 mmol)且令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令該反應混合物經H2
O (20 mL)稀釋，經DCM (2 x 30 mL)萃取，令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=10：90至40：60溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(5.20 g，78.8%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：-0.16 (d, 6H), 0.74 (s, 9H), 1.44 (d, 3H), 4.02-4.12 (M，2H), 4.55 (t, 2H), 4.72 (br d, 1H), 4.99 (br s, 1H), 6.50 (t, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 8.03 (s, 1H)。
製備例93
[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]甲醇
於0℃下令SEM-Cl (5.65 mL，31.90 mmol)逐滴加入至6-溴-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑(製備例83；7.0 g，26.61 mmol)和DIPEA (14.7 mL，79.80 mmol)之THF (100 mL)溶液並令反應混合物於10℃下經攪拌2小時。令該混合物經EtOAc (250 mL)稀釋並經飽和NaHCO3
水溶液(2 x 60 mL)沖洗。令有機相置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成油。令該油經急速矽膠層析(經EtOAc：石油醚=0：100至30：70溶析)純化以生成黃色油(8 g，76.4%；異構物之混合物)。令MeOH (100 mL)加入至該黃色油(8 g，20.34 mmol)、Et3
N (8.82 mL，61.0 mmol)及Pd(dppf)Cl2
(1.49 g，2.03 mmol)於DMF (100 mL)之懸浮液且令反應混合物於80℃和CO氛圍(50 psi)下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令粗產物經急速矽膠層析(經EtOAc：石油醚=80：20溶析)純化以生成黃色油(7.0 g，92.4%)。於0℃下令LiAlH4
(1.1 g，28.98 mmol)加入至該油(7 g，18.79 mmol)之THF (100 mL)溶液並令反應混合物經2小時回溫至室溫。逐滴加入H2
O (1 mL)，令混合物置於硫酸鈉上乾燥且於室溫下經攪拌1小時。令該混合物經過濾和真空下濃縮。令粗產物經急速矽膠層析(經EtOAc：MeOH=100：0至95：5溶析)純化以生成呈黃色油之標的化合物(5.0 g，77.2%)。LCMS m/z=345 [M+H]+
。
製備例94
5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-甲醛
對[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]甲醇(製備例93；2.5 g，7.26 mmol)之DCM (20 mL)溶液加入二氧化錳(IV)(6.31 g，72.3 mmol)並令混合物於50℃下經攪拌2小時。令不溶物經通過寅氏鹽®過濾並令濾液經減壓下蒸發以生成呈亮黃色固體之標的化合物(1.5 g，60.4%)。LCMS m/z=343 [M+H]+
。
製備例95
1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙醇
於-30℃和Ar(g)
下令MeMgBr (2.92 mL，8.76 mmol，3M Et2
O溶液)逐滴加入至5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-甲醛(製備例94；1.5 g，4.38 mmol)之THF (20 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令該混合物經冷卻至0℃，經藉由加入飽和NH4
Cl水溶液(100 mL)驟冷且經EtOAc萃取。令有機層經飽和NaHCO3
水溶液(2 x 100 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經急速矽膠層析(經EtOAc：石油醚=90：10溶析)純化以生成呈亮黃色油之標的化合物(1.3 g，82.9%)。LCMS m/z=359 [M+H]+
。
製備例96
(1R)-1-{5-(1H-吡唑-1-基)-1-[(2S)-四氫-2H-哌喃-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}乙醇
於0℃下令NaBH4
(441.5 mg，11.67 mmol)加入至1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙酮(製備例78；2.39 g，7.68 mmol)之MeOH (50 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌4小時。令反應物經藉由加入飽和NH4
Cl水溶液(25 mL)驟冷並令混合物於真空下經濃縮至體積約30 mL。令懸浮液經EtOAc (3 x 20 mL)萃取，令結合之有機層經乾燥(MgSO4
)，經過濾且經減壓下蒸發以生成淡黃色油。令該粗產物經管柱矽膠層析純化以生成淡黃色膠(2.10 g，87.3%)。令該膠進一步經SFC (Chiralpak AY管柱；經30% (0.1% NH3(aq)
/EtOH)溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(峰3；620.0 mg，24.8%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.32 (d, 3H), 1.64-1.70 (M，1H), 1.77-1.91 (M，2H), 2.0-2.07 (M，1H), 2.14-2.24 (M，1H), 2.63-2.74 (M，1H), 3.83 (dt, 1H), 4.12-4.18 (M，1H), 4.72 (br d, 1H), 5.00 (q, 1H), 6.18 (dd, 1H), 6.53-6.55 (M，1H), 7.68 (d, 1H), 7.79 (d, 1H) 8.02 (s, 1H), 8.14 (s, 1H)。
製備例97
乙酸6-氟喹啉-3-基酯
於冰冷卻下令乙醯氯(13.7 mL，192 mmol)逐滴加入至6-氟-喹啉-3-醇(28.0 g，172 mmol)和吡啶(77.7 mL，961.1 mmol)於DCM (250 mL)之混合物並令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令該混合物經DCM (150 mL)稀釋並先後經H2
O (100 mL)和1N HCl (100 mL)沖洗。令經分離之有機相經乾燥(Na2
SO4
)，經過濾且於減壓下經濃縮以生成殘餘物。令粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至100：0溶析)純化以生成呈灰白色固體之標的化合物(21.3 g，61%)。1
H NMR (CDCl3
, 400 MHz) δ：2.46 (s, 3H), 7.48-7.52 (M，2H), 7.07 (s, 1H), 8.20-8.23 (M，1H), 8.72 (s, 1H)。
製備例98
乙酸6-溴喹啉-3-基酯
依循製備例97描述之方法，自6-溴-喹啉-3-醇得到呈亮黃色固體之標的化合物(36 g，56.1%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：2.38-2.47 (M，3H), 7.76-7.83 (M，1H), 7.89 (d, 1H), 7.96-8.03 (M，2H), 8.73 (d, 1H)。
製備例99
乙酸5,8-二氟喹啉-3-基酯
令AcCl (2.80 g，35.6 mmol)逐滴加入至5,8-二氟喹啉-3-醇(5.38 g，29.70 mmol)和吡啶(4.7 g，59.4 mmol)於無水DCM (50 mL)之冰冷懸浮液，且經完成加入後，令反應混合物於室溫下經攪拌2小時。令反應混合物倒入至H2
O (50 mL)中並經DCM (2 x 50 mL)萃取。令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發以生成粗產物。令該粗產物再溶解於EtOAc (100 mL)，依序經檸檬酸水溶液(10 mL)、H2
O (10 mL)及鹽水(10 mL)沖洗，隨後置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發以生成呈亮黃色固體之標的化合物(6.63 g)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：2.45 (s, 3H), 7.21-7.25 (M，1H), 7.32-7.36 (M，1H), 8.21 (d, 1H), 8.82 (d, 1H)。
製備例100
乙酸6-溴-1-氧橋喹啉-3-基酯
令m-CPBA (18.7 g，108 mmol)分批加入至乙酸6-溴喹啉-3-基酯(製備例98；16 g，60.13 mmol)於DCM (300 mL)的經冰冷卻之溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌15小時。令所生成之懸浮液經過濾並令濾液經DCM (500 mL)稀釋，經飽和Na2
S2
O3
溶液(800 mL)、飽和Na2
CO3
溶液(400 mL)及鹽水(100 mL)沖洗，隨後置於無水硫酸鈉上乾燥，經過濾且經減壓下蒸發以生成呈亮黃色固體之標的化合物(16 g，94%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：2.38 (s, 3H), 7.49 (d, 1H), 7.79 (dd, 1H), 8.00 (d, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.56 (d, 1H)。
製備例101
乙酸6-氟-1-氧橋喹啉-3-基酯
於0℃和攪拌下對乙酸6-氟喹啉-3-基酯(製備例97；41.0 g，200 mmol)之DCM (400 mL)溶液分批加入m-CPBA (48.7 g，240 mmol)，且經完成加入後，令溶液於室溫下經攪拌16小時。令懸浮液經過濾並令濾液經減壓下蒸發。令粗產物經管柱層析(經EtOAc：石油醚：MeOH：DCM=70：30：0：0至0：0：10：90溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(41 g，90%)。LCMS m/z=180 [M+H]+
。
製備例102
乙酸5,8-二氟-1-氧橋喹啉-3-基酯
於0℃和攪拌下對乙酸5,8-二氟喹啉-3-基酯(製備例99；2.5 g，11.2 mmol)之無水DCM (100 mL)溶液分批加入m-CPBA (4.83 g，27.99 mmol)，且經完成加入後，令溶液於室溫下經攪拌60小時。令亮黃色溶液倒入至Na2
CO3
水溶液(1.5 g於50 mL H2
O)並經DCM (2 x 50 mL)萃取。令結合之有機層經飽和Na2
S2
O3
水溶液(2 x 10 mL)和鹽水(10 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且經蒸發溶劑以生成呈褐色固體之粗產物(3 g)。令該粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至100：0溶析)純化以生成呈亮黃色固體之標的化合物(600 mg)。LCMS m/z=240 [M+H]+
。
製備例103
6-溴喹啉-3-醇1-氧化物
令K2
CO3
(4.09 mg，296 mmol)一次加入至乙酸6-溴-1-氧橋喹啉-3-基酯(製備例100；25.17 g，89.23 mmol)於無水MeOH (472 mL)之懸浮液並令所生成之懸浮液於80℃下經攪拌16小時。令經冷卻之懸浮液經減壓下蒸發並令殘餘物經H2
O (400 mL)稀釋且隨後經1N HCl (約350 mL)中和。藉由過濾收集所生成之沉澱物，經H2
O (50 mL)輕洗且於真空下經乾燥以生成呈亮黃色固體之標的化合物(86%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：7.15 (d, 1H), 7.60 (dd, 1H), 8.17 (d, 1H), 8.24-8.31 (M，2H)。
製備例104
5,8-二氟喹啉-3-醇1-氧化物
依循製備例103描述之方法，自乙酸5,8-二氟-1-氧橋喹啉-3-基酯(製備例102)得到呈灰褐色固體之標的化合物(450 mg，91%)。LCMS m/z=198 [M+H]+
。
製備例105
(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯
經20分鐘對乙酸6-氟-1-氧橋喹啉-3-基酯(製備例101；35.0 g，158 mmol)、N-(二乙氧基磷醯基)胺甲酸三級丁酯(52.1 g，206 mmol)及DIPEA (61.6 g，475 mmol)於DCM (600 mL)的經冰冷卻之溶液加入TsCl (45.3 g，237 mmol)之DCM (200 mL)溶液並令反應混合物於此溫度下經攪拌1.5小時。令該反應混合物於室溫下再經攪拌17小時，經DCM (700 mL)稀釋且經飽和檸檬酸水溶液(500 mL)沖洗。令有機相於真空下經濃縮且經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=5：95至80：20溶析)純化以生成黃色膠(72 g，99%)。令K2
CO3
(43.6 g，316 mmol)加入至乙酸2-[(三級丁氧羰基)(二乙氧基磷醯基)胺基]-6-氟喹啉-3-基酯(製備例105；72.0 g，160 mmol)於MeOH (720 mL)之混合物並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令黃色懸浮液於真空下經濃縮，經H2
O (500 mL)稀釋且隨後於0℃下經1N HCl水溶液中和至pH 7。藉由過濾收集所生成之沉澱物並令殘餘物經MTBE (200 mL)碾製且經攪拌10分鐘。令懸浮液經過濾並經MTBE (2 x 50 mL)沖洗。令固體於真空下經乾燥以生成呈灰白色固體之標的化合物(30 g，68%)。LCMS m/z=279 [M+H]+
。
製備例106
6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
對2-胺基-5-氟苯甲醛(2 g，14.38 mmol)和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231；2.8 g，15.8 mmol)之DMSO (20 mL)溶液緩慢加入t-BuOK (2.42 g，21.6 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌3小時。令該反應重複18批次。令結合之反應混合物經H2
O (800 mL)稀釋並經EtOAc (2 x 800 mL)萃取。令結合之有機層經H2
O (2 x 1.5 L)和鹽水(1.5 L)沖洗，隨後經乾燥(Na2
SO4
)且經過濾和真空下濃縮。令殘餘物自EtOAc：DCM：石油醚(2：1：10，200 mL)再結晶以生成呈黃色固體之標的化合物(24 g，29.5%)。令濾液於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱矽膠層析(經EtOAc：DCM=0：100至20：80溶析)純化且隨後自EtOAc：DCM：石油醚(2：1：10，100 mL)再結晶以生成額外之產物(6.2 g，7.6%)。LCMS m/z=299 [M+H]+
。
製備例107
6-溴-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
依循製備例106描述之方法，自2-胺基-5-溴苯甲醛和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231)得到呈黃色固體之標的化合物(49 g，42%)。LCMS m/z=359 [M+H]+
。
製備例108
7-氯-6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
令t-BuOK (4.85 g，43.2 mmol)加入至2-胺基-4-氯-5-氟苯甲醛(5 g，28.81 mmol)和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231；6.13 g，34.6 mmol)之DMSO (50 mL)溶液並令反應混合物於50℃下經攪拌4小時。令混合物經EtOAC (200 mL)稀釋並經鹽水(3 x 100 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且令濾液經減壓下蒸發。令殘餘物經EtOAc (10 mL)處理，令所生成之固體經過濾且經乾燥以生成呈黃色固體之標的化合物(1.98 g，20.7%)。LCMS m/z=333 [M+H]+
。
製備例109至112
依循製備例108描述之方法，自2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231)和適當之苯甲醛製備下表之化合物。
製備例113
6-溴-7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
令2-胺基-5-溴-4-氟苯甲醛(5.0 g，22.93 mmol)、2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231；4.88 g，27.5 mmol)及tBuOK (27.5 mL，1M，27.5 mmol)於無水DMSO (40 mL)之混合物於50℃下經攪拌1.5小時。令該混合物經鹽水(100 mL)稀釋並經EtOAc (3 x 200 mL)萃取，令結合之有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥並於真空下經濃縮。令殘餘物經矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至50：50溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(1.4 g，16%)。LCMS m/z=377 [M+H]+
。
製備例114
6-溴-8-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺
依循製備例113描述之方法，自2-胺基-5-溴-3-氟苯甲醛和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231)得到呈黃色固體之標的化合物(4.1 g，18%)。LCMS m/z=377 [M+H]+
。
製備例115
3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-1,5-萘啶-2-胺
依循製備例113描述之方法，自3-胺基吡啶甲醛和2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈(製備例231)得到呈黑色油之標的化合物(3.6 g，52%)。LCMS m/z=282 [M+H]+
。
製備例116
2-胺基-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-羧酸甲酯
對6-溴-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例107；24.5 g，68.2 mmol)、Et3
N (47.5 mL，341 mmol)及Pd(dppf)Cl2
(4.99 g，6.82 mmol)之DMF (250 mL)溶液加入MeOH (700 mL)並令反應混合物於80℃和CO氛圍(50 psi)下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物經過濾並令濾液於真空下經濃縮。令殘餘物懸浮於H2
O (500 mL)，令固體經過濾，經H2
O (2 x 50 mL)沖洗且於真空下經乾燥以生成呈褐色固體之標的化合物(91%)。LCMS m/z=339 [M+H]+
。
製備例117
2-胺基-7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-羧酸甲酯
令MeOH (10 mL)加入至6-溴-7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例113；1.47 g，4.00 mmol)、Et3
N (789 mg，7.79 mmol)、Pd(OAc)2
(87.5 mg，0.390 mmol)及DPPP (161 mg，0.39 mmol)於DMF (10 mL)之混合物並令反應混合物於80℃和CO氛圍(50 psi)下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物經過濾並令濾液經減壓下蒸發以生成呈褐色固體之標的化合物(900 mg，65%)。LCMS m/z=357 [M+H]+
。
製備例118
2-胺基-8-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-羧酸甲酯
令MeOH (50 mL)加入至6-溴-8-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例114；1500 mg，3.98 mmol)、Et3
N (805 mg，7.95 mmol)、Pd(OAc)2
(89.3 mg，0.40 mmol)及DPPP (164 mg，0.40 mmol)於DMF (50 mL)之混合物並令反應混合物於80℃和CO氛圍(50 psi)下經攪拌16小時。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮，令殘餘物懸浮於EtOAc (20 mL)且令所生成之固體經過濾。令該固體再次懸浮於EtOAc (20 mL)，令懸浮液經過濾且令固體於真空下經乾燥以生成呈紅色固體之標的化合物(900 mg，63.5%)。LCMS m/z=357 [M+H]+
。
製備例119
2-{6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-基}-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮
於20℃下對6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例106；2.4 g，80.45 mmol)、Et3
N (32.60 g，322 mmol)及DMAP (9.83 g，80.5 mmol)於無水二噁烷(600 mL)之混合物逐滴加入鄰苯二甲醯氯(24.5 g，121 mmol)並令反應混合物於90℃下經攪拌15小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物分佈於H2
O (1000 mL)和DCM (2 x 1100 mL)。令結合之有機層經水(2 x 1000 mL)沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)，經過濾和真空下濃縮以生成褐色固體。令固體懸浮於DCM (約200 mL)，經攪拌30分鐘並隨後經過濾，經H2
O (100 mL)沖洗且於真空下經乾燥以生成呈淡黃色固體之標的化合物(11 g，32%)。令濾液於真空下經濃縮並經管柱層析(經(EtOAc：DCM：THF=40：40：1)：石油醚=0：100至30：70溶析)純化以生成褐色油，其係自石油醚：DCM=10：1再結晶以生成呈黃色固體之額外產物(6.2 g，18%)。LCMS m/z=429 [M+H]+
。
製備例120至125
依循製備例119描述之方法，自適當之胺和酞醯氯製備下表之酞醯亞胺。
製備例126
2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-6-腈
令Pd2
(dba)3
(880 mg，0.96 mmol)和BINAP (1.2 g，1.92 mmol)加入至2-{6-溴-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-基}-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例123；4.7 g，9.61 mmol)和Zn(CN)2
(2.4 g，20.44 mmol)於DMF (60 mL)之懸浮液，令混合物經N2
脫氣且令反應混合物於100℃下經攪拌18小時。令經冷卻之懸浮液經DCM (100 mL)稀釋，經H2
O (2 x 100 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於真空下經乾燥。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：DCM=10：90至100：0溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(1.2 g，28.7%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：3.70 (s, 3H), 5.26 (s, 2H), 6.86 (d, 2H), 7.29 (d, 2H), 7.95-8.10 (M，5H), 8.17 (d, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.64 (d, 1H)。
製備例127
2-(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮
於15℃下對2-{6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-基}-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例119；17.20 g，40.15 mmol)之DCM (18 mL)溶液加入TFA (18 mL)並令反應混合物經攪拌17小時。加入H2
O (50 mL)並令混合物經攪拌15分鐘。所生成之沉澱物經過濾，經H2
O (20 mL)和DCM (2 x 20 mL)沖洗且隨後於真空下經乾燥以生成呈淡黃色固體之標的化合物(11.3 g，91%)。LCMS m/z=309 [M+H]+
。
製備例128至133
依循製備例127描述之方法，自適當之喹啉製備下表之化合物。
製備例134
2-胺基-6-氟喹啉-3-醇
令Pd(OH)2
(47.1 mg，0.067 mmol)加入至6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例106；200 mg，0.67 mmol)之MeOH (10 mL)溶液並令反應混合物於室溫和氫氣氛圍下經攪拌18小時。令反應混合物經過濾並令濾液於真空下經濃縮以生成呈褐色固體之標的化合物。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：6.32 (br s, 2H), 7.12-7.24 (M，2H), 7.55 (dd, 1H), 7.70-7.80 (M，1H)。
製備例135
2-胺基-6-溴喹啉-3-醇
令6-溴-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例107；97 mg，0.27 mmol)於DCM (2 mL)和TFA (2 mL)之溶液於室溫下經攪拌2小時。令反應混合物經減壓下蒸發並令殘餘物懸浮於EtOAc (5 mL)且經NaHCO3
水溶液中和。令相層分離，令有機相經乾燥且經減壓下蒸發以生成呈黃色固體之標的化合物(583 mg，88%)。LCMS m/z=240 [M+H]+
。
製備例136
6-溴-2-(三級丁基胺基)喹啉-3-醇
於0℃下對乙酸6-溴-1-氧橋喹啉-3-基酯(製備例100；2.53 g，8.94 mmol)和三級丁胺(0.92 mL，8.74 mmol)之DCM (100 mL)溶液分批加入Ts2
O (8.75 g，26.8 mmol)以維持反應混合物之溫度低於5℃且令該反應混合物經攪拌20分鐘。加入額外之三級丁胺(1.0當量)和Ts2
O (0.5當量)並令反應混合物經攪拌30分鐘。令反應混合物經1N NaOH (10 mL)和H2
O (10 mL)沖洗，隨後置於硫酸鎂上乾燥且經過濾和真空下濃縮。令產物溶解於MeOH (60 mL)，加入K2
CO3
(2.79 g，17.9 mmol)且令反應混合物於室溫下經攪拌18小時。令該混合物於真空下經濃縮，令殘餘物懸浮於DCM且經過濾。令濾液倒入至冷H2
O，加入飽和NH4
Cl且令混合物經DCM (4 x 50 mL)萃取。令結合之有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經ISCO® (經9：1 DCM/MeOH溶析)純化以生成黃色泡沫(1.0 g，37.9%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.53-1.65 (M，9H), 6.93 (s, 1H), 7.34-7.41 (M，1H), 7.46 (d, 1H), 7.51 (d, 1H)。
製備例137
2-胺基-7-氟-1,5-萘啶-3-醇三氟乙酸酯
令7-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-1,5-萘啶-2-胺(製備例111；155 mg，0.518 mmol)之TFA (4 mL)溶液於室溫下經攪拌16小時。令褐色溶液於真空下經濃縮，與EtOAc共沸且令產物於真空下經乾燥以生成呈褐色固體之標的化合物(92.8 mg，100%)。LCMS m/z=180 [M+H]+
。
製備例138
2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-醇三氟乙酸鹽
依循製備例137描述之方法，自3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-7-甲基-1,6-萘啶-2-胺(製備例110)得到標的化合物(990 mg，88%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：2.60 (s, 3H), 7.32 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.75 (br s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 11.61 (br s, 1H)。
製備例139
2-胺基-1,5-萘啶-3-醇三氟乙酸鹽
依循製備例137描述之方法，自3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-1,5-萘啶-2-胺(製備例115)得到標的化合物(3.5 g，92%)。LCMS m/z=276 [M+H]+
。
製備例140
2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇
令7-氯-6-氟-3-[(4-甲氧基苄基)氧基]喹啉-2-胺(製備例108；1 g，3.01 mmol)於DCM (4 mL)和TFA (4 mL)之溶液於室溫下經攪拌1小時。令混合物於真空下經濃縮，令殘餘物經NaHCO3
水溶液沖洗並令所生成之固體經過濾且經乾燥以生成呈灰色固體之標的化合物(600 mg，94%)。LCMS m/z=213 [M+H]+
。
製備例141
(3-羥基-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯
對2-胺基-7-甲基-1,6-萘啶-3-醇三氟乙酸鹽(製備例138；970 mg，3.35 mmol)於THF (10 mL)和H2
O (3 mL)之溶液加入NaOH (537 mg，13.4 mmol)、DMAP (82 mg，0.671 mmol)及Boc2
O (952 mg，4.36 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令反應物經1N HCl中和至pH 6並令混合物經EtOAc (2 x 20 mL)萃取。令結合之有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥並於真空下經濃縮。令殘餘物經管柱層析(矽膠管柱；經MeOH：DCM=0：100至6：94溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(500 mg，54%)。LCMS m/z=276 [M+H]+
。
製備例142
(3-羥基-1,5-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯
依循製備例141描述之方法，自2-胺基-1,5-萘啶-3-醇三氟乙酸鹽(製備例139)得到呈褐色固體之標的化合物(710 mg，21.4%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：1.48 (s, 9H), 7.47-7.50 (M，2H), 8.10 (d, 1H), 8.70 (br s, 1H), 8.86 (s, 1H), 11.00-11.46 (M，1H)。
製備例143
(7-氟-3-羥基-1,5-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯
對2-胺基-7-氟-1,5-萘啶-3-醇三氟乙酸酯(製備例137；92.8 mg，0.518 mmol)於THF (5 mL)和H2
O (1 mL)之溶液加入NaOH(aq)
以調整pH至9，隨後加入DMAP (12.7 mg，0.104 mmol)和Boc2
O (147 mg，0.67 mmol)且令反應混合物於20℃下經攪拌4小時。令該反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經MeOH：DCM=0：100至5：95溶析)純化以生成呈亮黃色固體之標的化合物(65 mg，45%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：1.49 (s, 9H), 6.76 (br s, 1H), 7.54 (s, 1H), 8.79 (d, 1H), 8.98-8.90 (M，1H), 11.29 (br s, 1H)。
製備例144
(3-羥基-6-甲基-1,5-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯
於室溫下對3-[(4-甲氧基苄基)氧基]-6-甲基-1,5-萘啶-2-胺(製備例112；1.64 g，5.55 mmol)於DCM (7.0 mL)之懸浮液加入TFA (7.0 mL，94 mmol)並令反應混合物於25℃下經攪拌7小時。令褐色溶液於真空下經濃縮並經與MeOH (20 mL)和EtOAc (20 mL)共蒸發以生成黃色固體(1.61 g)。令該固體溶解於THF (14 mL)和H2
O (3 mL)，加入NaOH (666 mg，16.7 mmol)、DMAP (136 mg，1.11 mmol)及Boc2
O (970 mg，4.44 mmol)且令所生成之褐色溶液於25℃下經攪拌4小時。加入額外之NaOH (222 mg，5.55 mmol)之H2
O (3 mL)溶液和Boc2
O (606 mg，2.78 mmol)並令反應混合物於25℃下經攪拌16小時。令反應物經1N HCl中和並隨後經EtOAc (3 x 50 mL)萃取。令結合之有機層經乾燥(Na2
SO4
)並於真空下經濃縮且令粗產物經管柱層析(矽膠；經MeOH：DCM=0：100至5：95溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(400 mg，26.2%)。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：1.47 (s, 9H), 2.60 (s, 3H), 7.24-7.55 (M，2H), 7.98 (d, 1H), 8.84 (s, 1H), 11.04 (br s, 1H)。
製備例145至153
於0℃下對適當之醇(1當量)、喹啉酚(1當量)及PPh3
(3當量)之無水THF (10至12.5 mL/mmol)溶液逐滴加入DIAD (3當量)並令反應混合物於25℃下經攪拌15小時。令該反應混合物於真空下經濃縮以生成粗產物，其係經矽膠層析(經適當梯度之石油醚：EtOAc溶析)純化以生成標的化合物。
製備例154
{3-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基}乙酸三級丁酯
依循製備例145至153描述之方法，自{3-[(2R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基}乙酸三級丁酯(製備例24)和(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例105)製備呈黃色液體之標的化合物(93 mg)。LCMS m/z=579 [M+H]+
。
製備例155
(3-{(1S)-1-[5-氰基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯
依循製備例145至153描述之方法，自(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例105)和3-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例31)製備呈褐色油之標的化合物(170 mg，95.2%)。LCMS m/z=496 [M+Na]+
。
製備例156
3-(1-{[6-溴-2-(三級丁基胺基)喹啉-3-基]氧基}乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈
依循類似於製備例145至153描述之方法，除了反應使用1.2當量DIAD和PPh3
之外，自3-(1-羥基乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例30)和6-溴-2-(三級丁基胺基)喹啉-3-醇(製備例136)製備呈灰色固體之標的化合物(100 mg，21.7%)。LCMS m/z=492 [M+H]+
。
製備例157
3-{(1S)-1-[(5,8-二氟-1-氧橋喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
於室溫下對5,8-二氟喹啉-3-醇1-氧化物(製備例104；300 mg，1.52 mmol)、3-[(1R)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例28；330 mg，1.34 mmol)及Ph3
P樹脂(1390 mg，4.18 mmol)於無水THF (14 mL)和DMF (2.4 mL)之黃色混合物逐滴加入DIAD (846 mg，4.18 mmol)。令混合物經N2
清洗，於室溫下經攪拌30分鐘且隨後於50℃下經加熱16小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至60：40溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物(47.5%)。LCMS m/z=426 [M+H]+
。
製備例158
3-{(1S)-1-[(6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
令氯化烯丙基鈀二聚體(674 mg，1.84 mmol)和(S
)-1-[(R P
)-2-(二環己基膦基)二茂鐵基]乙基二(三級丁基)膦(2.66 g，4.80 mmol)於甲苯(250 mL)之混合物經攪拌20分鐘。加入3-溴-6,8-二氟喹啉(18.04 g，73.9 mmol)和3-[(1S)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例27；20.04 g，81.4 mmol)並令反應混合物經攪拌直至得到溶液。加入Cs2
CO3
(49.9 g，153 mmol)並令反應混合物於105℃(內部溫度)下經攪拌22小時。隨後令該反應混合物經冷卻至室溫。令殘餘物分佈於EtOAc (200 mL)和H2
O (200 mL)並令相層分離。令水相經EtOAc (2 x 200 mL)萃取並令結合之有機萃取液經鹽水沖洗(50 mL)，經乾燥(MgSO4
)，經通過寅氏鹽®過濾且令濾液於減壓下經濃縮。令粗產物經管柱層析(金黃矽膠管柱；經庚烷：EtOAc= 100：0至70：30溶析)純化以生成呈玻璃樣固體之標的化合物(23.1 g，76.3%)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.71 (d, 3H), 3.96 (s, 3H), 5.98-6.02 (M，1H), 6.64 (s, 1H), 7.00-7.45 (M，4H), 7.83 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 8.17 (d, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.70 (s, 1H)。
製備例159
3-{(1S)-1-[(6,8-二氟-1-氧橋喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
令m-CPBA (72.47 g，290 mmol)加入至3-{(1S)-1-[(6,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例158；30.5 g，74.5 mmol)之DCM (700 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令該混合物經冷卻至-1.9℃並以1 mL/分鐘之速率加入飽和Na2
SO3
溶液(25 mL)。加入2M Na2
CO3
溶液(400 mL)，令混合物經攪拌15分鐘並令相層分離。令水相經DCM (200 mL)萃取，令結合之有機萃取液經鹽水(250 mL)沖洗，隨後置於硫酸鎂上乾燥且經過濾和真空下濃縮。令粗產物經急速管柱矽膠層析(經EtOAc：庚烷=30：70至75：25溶析)純化以生成呈淡橙色泡沫之標的化合物(17.33 g，55%)。LCMS m/z=426 [M+H]+
。
製備例160
2-(3-{(1S)-1-[5-胺基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮
令TFA (1 mL)加入至{3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯基}胺甲酸三級丁酯(製備例148；70 mg，0.1 mmol)之DCM (2 mL)溶液並令反應混合物於25℃下經攪拌1小時。令該反應混合物經減壓下蒸發並令粗產物懸浮於EtOAc (20 mL)且經H2
O (5 mL)和鹽水(5 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發以生成呈黃色液體之標的化合物(50 mg，98%)。LCMS m/z=572 [M+H]+
。
製備例161
5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基)-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
令K2
CO3
(213 mg，1.54 mmol)加入至5-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基)-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例151；230 mg，0.441 mmol)之DMSO (7.5 mL)溶液並令混合物經攪拌10分鐘。加入H2
O2
(1.5 mL)並令反應混合物經攪拌1小時。加入水(100 mL)並令水溶性混合物經DCM (3 x 90 mL)萃取。令結合之有機萃取液經鹽水(100 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成呈黃色油之標的化合物(182 mg，76.5%)。LCMS m/z=548 [M+H2
O]+
。
製備例162
5-[(1S)-1-{[7-氯-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醯胺
依循製備例161描述之方法，自5-[(1S)-1-{[7-氯-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈(製備例152)得到呈黃色油之標的化合物(160 mg，97%)。LCMS m/z=592 [M+H]+
。
製備例163
3-{(1S)-1-[(2-胺基-6-氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯並醯肼
對3-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例145；300 mg，0.56 mmol)之MeOH (15 mL)溶液加入聯胺水合物(1.5 mL，15 mmol)並令反應混合物於15℃下經攪拌60小時。令該反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經HPLC (Agela Durashell C18管柱；經0.05% NH4
OH水溶液：MeCN=30：70至60：40溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(96 mg，42%)。LCMS m/z=407 [M+H]+
。
製備例164
(6-氟-3-{(1S)-1-[5-(N-羥基甲脒)-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯
於室溫下對(3-{(1S)-1-[5-氰基-2-(1H-吡唑-1-基)苯基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例155；170 mg，0.36 mmol)於無水MeOH (2 mL)和THF (2 mL)之溶液加入NH2
OH.
HCl (37.4 mg，0.54 mmol)和Et3
N (109 mg，1.08 mmol)並令反應混合物於80℃下經攪拌20小時。令經冷卻之反應混合物經H2
O (10 mL)驟冷並經EtOAc (3 x 20 mL)萃取。令結合之有機層經鹽水(10 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且經過濾和真空下濃縮以生成粗產物。令該粗產物經管柱層析(矽膠；經MeOH：DCM=0：100至5：95溶析)純化以生成呈無色油之標的化合物(156 mg，85.8%)。LCMS m/z=507 [M+H]+
。
製備例165
3-{(1S)-1-[(2-氯-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
令TsCl (194 mg，1.02 mmol)之DCM (2 mL)溶液加入至3-{(1S)-1-[(5,8-二氟-1-氧橋喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例157；360 mg，0.846 mmol)和DIPEA (219 mg，1.69 mmol)於DCM (6 mL)的經冰冷卻之溶液並令溶液於室溫下經攪拌18小時。令反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至20：80溶析)純化以生成標的化合物(70.1%)。LCMS m/z=444 [M+H]+
。
製備例166
3-[(1S)-1-({5,8-二氟-2-[(4-甲氧基苄基)胺基]喹啉-3-基}氧基)乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
對3-{(1S)-1-[(2-氯-5,8-二氟喹啉-3-基)氧基]乙基}-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例165；300 mg，0.68 mmol)之THF (8 mL)溶液加入PMB-NH2
(464 mg，3.38 mmol)和DIPEA (0.353 mL，2.03 mmol)並令反應混合物於70℃下經加熱40小時。令經冷卻之反應混合物於減壓下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至20：80溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物(240 mg，65.2%)。LCMS m/z=567 [M+Na]+
。
製備例167至180
於0℃下對適當之醇(1當量)、喹啉酚(1當量)及PPh3
(3當量)之無水THF (10至12.5 mL/mmol)溶液逐滴加入DIAD (3當量)並令反應混合物於25℃下經攪拌15小時。令該反應混合物於真空下經濃縮以生成粗產物，其係經矽膠層析(經適當梯度之石油醚：EtOAc溶析)純化以生成標的化合物。
製備例181至184
於0℃下對(1R)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例52；1當量)及適當之喹啉酚(1當量)和PPh3
(3當量)之無水THF (10至12.5 mL/mmol)溶液逐滴加入DIAD (3當量)並令反應混合物於25℃下經攪拌15小時。令該反應混合物於真空下經濃縮以生成粗產物，其係經矽膠層析(經適當梯度之石油醚：EtOAc溶析)純化以生成標的化合物。
製備例185
5,8-二氟-3-{(1S)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉1-氧化物
令DIAD (903 mg，4.46 mmol)逐滴加入至5,8-二氟喹啉-3-醇1-氧化物(製備例104；400.0 mg，2.03 mmol)、(1R)-1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例53；420 mg，2.03 mmol)及Ph3
P樹脂(1490 mg，4.46 mmol)於無水THF (10 mL)/DMF (1.0 mL)之懸浮液，令混合物經N2
清洗並令反應混合物於室溫下經攪拌5分鐘且隨後於50℃下經攪拌18小時。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經MeOH：DCM=0：100至95：5溶析)純化以生成呈黃色膠之標的化合物(650 mg，83%)。LCMS m/z=387 [M+H]+
。
製備例186
6-溴-N-三級丁基-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令PPh3
(709 mg，2.70 mmol)和DIAD (546 mg，2.70 mmol)之THF (10.7 mL)溶液經冷卻至0℃並隨後加入1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例54；400 mg，1.93 mmol)和6-溴-2-(三級丁基胺基)喹啉-3-醇(製備例136；627 mg，2.12 mmol)之THF (10.7 mL)溶液。令反應混合物於0℃下經攪拌5分鐘且於室溫下經攪拌18小時，隨後經過濾且令濾液於真空下經濃縮。令粗產物經ISCO管柱矽膠層析(經己烷：EtOAc=15：85至50：50溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(830 mg，89%)。1
H NMR (CDCl3
, 400 MHz) δ：1.54 (s, 9H), 1.79 (d, 3H), 5.45 (s, 1H), 5.79 (q, 1H), 6.52-6.56 (M，1H), 6.58 (t, 1H), 7.34-7.41 (M，2H), 7.41-7.48 (M，2H), 7.63 (d, 1H), 7.84-7.89 (M，1H), 8.59 (d, 1H)。
製備例187
2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-7-氟-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯
對2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-3-羥基-7-氟喹啉-6-羧酸甲酯(製備例129；120 mg，0.328 mmol)之無水THF (2 mL)溶液加入1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例54；81.5 mg，0.39 mmol)和PPh3
(172 mg，0.66 mmol)。令反應混合物於0℃下經攪拌，逐滴加入DIAD (132 mg，0.655 mmol)且令反應混合物於20℃下經攪拌16小時。令該反應混合物經EtOAc (10 mL)稀釋，經鹽水(3 x 5 mL)沖洗，令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥且經過濾和真空下濃縮。令粗殘餘物經矽膠層析(經石油醚：EtOAc=100：0至30：70溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(150 mg，82.4%)。LCMS m/z=578 [M+Na]+
。
製備例188
(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯
對(1R)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙醇(製備例52；12.0 g，43.12 mmol)和PPh3
(13.80 g，52.6 mmol)於THF (120 mL)的經冷卻(-6℃)之懸浮液逐滴加入DIAD (9.34 mL，47.4 mmol)以維持內部溫度低於3℃。令反應混合物於-6℃下經攪拌10分鐘並隨後經15分鐘逐滴加入(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例105；11.60 g，43.1 mmol)之THF (40 mL)溶液。令反應混合物緩慢回溫至室溫並經攪拌17小時。令該反應混合物分佈於MTBE (120 mL)和1N NaOH (80 mL)，令相層分離且令水相經MTBE (120 mL)萃取。令結合之有機相先後經1N NaOH (80 mL)和鹽水(80 mL)沖洗並置於硫酸鎂上乾燥。令混合物經通過寅氏鹽®墊過濾，經MTBE (120 mL)沖洗且令濾液於減壓下經濃縮。令殘餘物經與Et2
O共沸並隨後經全自動快速層析Rf (金黃矽膠管柱；經EtOAc：DCM=0：100至20：80溶析)純化以生成標的化合物。LCMS m/z=528 [M+H]+
。
製備例189
3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-胺
令TFA (10 mL，187 mmol)逐滴加入至(3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-6-氟喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例188；9.9 g，18.74 mmol)之DCM (50 mL)溶液並令反應混合物於室溫下經攪拌17小時。加入額外之TFA (2 mL)並令反應混合物再經攪拌24小時。令溶液於減壓下經濃縮並令殘餘物與DCM (20 mL)和庚烷(200 mL)共沸。令粗產物分佈於1N NaOH (150 mL)和DCM (100 mL)並令相層分離。令水相經DCM (100 mL)萃取，令結合之有機層置於硫酸鎂上乾燥，經過濾且於減壓下經濃縮。令產物自熱EtOAc/庚烷再結晶以生成呈白色固體之標的化合物(6.71 g)。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：1.84 (d, 3H), 5.16 (br s, 2H), 5.82-5.87 (M，1H), 6.60 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.98-7.00 (M，1H), 7.12-7.18 (M，2H), 7.52-7.58 (M，2H), 7.62 (s, 1H), 7.88 (s, 1H)。
製備例190
2-(三級丁基胺基)-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-腈
對6-溴-N-三級丁基-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例186；600 mg，1.24 mmol)於t-BuOH (6 mL)和H2
O (6 mL)之溶液加入K3
Fe(CN)6
(209 mg，0.495 mmol)、與聚合物鍵結之Pd(PPh3
)4
(71.6 mg，0.062 mmol)及Polycat® 5觸媒(1M，0.31 mL，0.31 mmol)，令系統經N2
清洗2分鐘且隨後於85℃下經攪拌18小時。令經冷卻之反應混合物經通過寅氏鹽®過濾並經EtOAc沖洗。令濾液經鹽水和H2
O沖洗並置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮。令粗產物經矽膠筒(經庚烷：EtOAc=50：50溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物。LCMS m/z=431 [M+H]+
。
製備例191
6-溴-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令甲磺酸1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酯(製備例57；376.0 mg，1.41 mmol)、2-胺基-6-溴喹啉-3-醇(製備例135；280.0 mg，1.17 mmol)及Cs2
CO3
(763.0 mg，2.34 mmol)於MeCN (15 mL)之懸浮液於60℃下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令所生成之黃色固體經急速矽膠層析(經DCM：MeOH=100：0至85：15溶析)純化以生成呈黃色固體之標的產物(360.0 mg，74.9%)。LCMS m/z=411 [M+H]+
。
製備例192
2-胺基-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-腈
令氮氣冒泡通過6-溴-3-{1-[3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-2-胺(製備例191；360 mg，0.88 mmol)、Pd2
(dba)3
(121.0 mg，0.132 mmol)、tBuXPhos (123.0 mg，0.26 mmol)、Zn(CN)2
(155.0 mg，1.32 mmol)及TMEDA (20.4 mg，0.175 mmol)於無水DMF (10 mL)之混合物，令反應管經密封且令反應混合物於微波照射1.5小時下經加熱至160℃。令經冷卻之混合物於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱層析(矽膠；經DCM：MeOH=100：0至92：8溶析)純化以生成呈黃色固體之標的產物(270.0 mg，86.3%)。LCMS m/z=357 [M+H]+
。
製備例193
2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸
於氮氣下對3-{(1S)-1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)喹啉-6-羧酸甲酯(製備例171；670 mg，1.12 mmol)和KOH (188 mg，3.36 mmol)之1,4-二噁烷/H2
O (40 mL/20 mL)溶液加入tBuXPhos (47.5 mg，0.112 mmol)和Pd2
(dba)3
(51.3 mg，0.056 mmol)。令混合物經N2
脫氣並令反應混合物於90℃下經攪拌3小時。令該混合物於真空下經濃縮以除去有機溶劑並經1N HCl調整pH至6。令混合物經DCM (3 x 20 mL)萃取並經H2
O (5 mL)和鹽水(5 mL)沖洗。令混合物經過濾並令濾餅經MTBE (2 x 10 mL)沖洗且隨後於真空下經乾燥以生成呈褐色固體之標的化合物(438 mg)。LCMS m/z=392 [M+H]+
。
製備例194
1-(2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-基)乙酮
對2-胺基-3-{(1S)-1-[6-羥基-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸(製備例193；150 mg，0.38 mmol)之DMF (3 mL)溶液加入MeNHOMe HCl (77.1 mg，0.58 mmol)、DIPEA (297 mg，2.3 mmol)及HATU (291 mg，0.767 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令混合物經H2
O (5 mL)驟冷並經EtOAc：THF (v：v=3：1；5 x 15 mL)萃取。令結合之有機相置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成黃色膠。令該膠溶解於THF (10 mL)，令溶液經冷卻至0℃，加入MeMgBr (4 mL，3M Et2
O溶液)且令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令懸浮液經1N HCl (3 mL)驟冷並於真空下經濃縮。令殘餘物分佈於H2
O (15 mL)和EtOAc/THF (v/v=2/1, 40 mL)，令相層分離且令有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發以生成呈黃色膠之標的化合物(150 mg)。LCMS m/z=390 [M+H]+
。
製備例195
2-胺基-7-氟-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸
對2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-7-氟-3-{1-[5-氟-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例187；150 mg，0.270 mmol)之THF/MeOH/H2
O (2 mL/2 mL/2 mL)溶液加入NaOH (54.0 mg，1.35 mmol)並令反應混合物於20℃下經攪拌12小時。藉由使用HCl水溶液調整反應混合物之pH至6，令混合物經減壓下蒸發且令產物經冷凍乾燥以生成白色固體(111 mg)，其未經進一步純化而使用。LCMS m/z=412 [M+H]+
。
製備例196
6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令MsCl (0.023 mL，0.298 mmol)逐滴加入至1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙醇(製備例85；62 mg，0.20 mmol)和Et3
N (60.3 mg，0.60 mmol)於無水DCM (4 mL)之0℃溶液並令溶液回溫至室溫且經攪拌1.5小時。令反應混合物經DCM (5 mL)稀釋，經鹽水(5 mL)驟冷且令相層分離。令有機相經NaHCO3
(5 mL)和鹽水(5 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮以生成亮黃色油。令該油、2-胺基-6-氟喹啉-3-醇(製備例134；40 mg，0.23 mmol)及Cs2
CO3
(200 mg，0.615 mmol)於MeCN (5 mL)之懸浮液於80℃下經攪拌16小時。令反應混合物經過濾並令濾液於真空下經濃縮。令殘餘物經急速矽膠管柱(經石油醚：EtOAc=100：0至0：100溶析)純化以生成呈亮褐色油之標的化合物(42 mg，43%)。LCMS m/z=473 [M+H]+
。
製備例197
7-氯-6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
依循製備例196描述之方法，自1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙醇(製備例85)和2-胺基-7-氯-6-氟喹啉-3-醇(製備例140)得到標的化合物(50 mg，35%)。LCMS m/z=507 [M+H]+
。
製備例198至206
於0℃下對適當之醇(1當量)、喹啉酚或萘啶醇(1當量)及PPh3
(3當量)之無水THF (10至12.5 mL/mmol)溶液逐滴加入DIAD (3當量)並令反應混合物於25℃下經攪拌15小時。令該反應混合物於真空下經濃縮以生成粗產物，其係經矽膠層析(經適當梯度之石油醚：EtOAc溶析)純化以生成標的化合物。
製備例207
{6-[(1S)-1-{[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-6-氟喹啉-3-基]氧基}乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸三級丁酯
令DIAD (86.3 mg，0.427 mmol)之THF (0.5 mL)溶液逐滴加入至於冰/丙酮浴中的PPh3
(112 mg，0.43 mmol)之THF (2 mL)溶液並令溶液於0℃下經攪拌5分鐘。先後加入2-(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例127；101 mg，0.328 mmol)於THF (0.7 mL)之懸浮液和{6-[(1R)-1-羥基乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸甲酯(製備例90；112 mg，0.328 mmol)之THF (0.3 mL)溶液並令反應混合物回溫至室溫且經攪拌16小時。令該混合物經EtOAc稀釋，經H2
O (10 mL)、1N NaOH (10 mL)及鹽水(10 mL)沖洗並隨後置於硫酸鎂上乾燥且經過濾和真空下濃縮。令粗產物經矽膠層析(經EtOAc：庚烷=0：100至50：50溶析)純化以生成呈白色固體之標的化合物(147.9 mg)。LCMS m/z=633 [M+H]+
。
製備例208至210
於0℃下對適當之醇(1當量)、喹啉酚或萘啶醇(1當量)及PPh3
(3當量)之無水THF (10至12.5 mL/mmol)溶液逐滴加入DIAD (3當量)並令反應混合物於25℃下經攪拌15小時。令該反應混合物於真空下經濃縮以生成粗產物，其係經矽膠層析(經適當梯度之石油醚：EtOAc溶析)純化以生成標的化合物。
製備例211
2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯
對1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙醇(製備例86；800 mg，2.23 mmol)和2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-3-羥基-7-氟喹啉-6-羧酸甲酯(製備例129；899 mg，2.45 mmol)之THF (15 mL)溶液加入PPh3
(878 mg，3.35 mmol)和DIAD (677 mg，3.35 mmol)並令反應混合物於30℃和氮氣下經攪拌16小時。令黃色溶液經H2
O (15 mL)稀釋，經EtOAc (3 x 15 mL)萃取並令結合之有機萃取液經鹽水沖洗(40 mL)，置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮。令黃色膠經管柱層析(經EtOAc：石油醚=5：95至50：50溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(1000 mg，63.4%)。LCMS m/z=707 [M+H]+
。
製備例212
2-胺基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯
對2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例211；1000 mg，1.42 mmol)於EtOH (40 mL)之懸浮液加入聯胺水合物(8 mL)並令黃色懸浮液於85℃下經攪拌40分鐘。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮並令殘餘物懸浮於MeOH (15 mL)，經過濾且令濾液於真空下經濃縮以生成粗產物。令該粗產物經管柱層析(矽膠；經MeOH：DCM=0：100至20：80溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(430 mg，52.7%)。LCMS m/z=577 [M+H]+
。
製備例213
2-胺基-3-{1-[1-(2-{[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯
於-60℃下令NH3
氣冒泡通過3-{1-[1-(2-{[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}-2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)喹啉-6-羧酸甲酯(製備例209；9.5 g，13.25 mmol)之THF (150 mL)溶液並令反應混合物於密封瓶中於室溫下經攪拌16小時。令溶液經減壓下蒸發以生成呈亮黃色固體之標的化合物。LCMS m/z=587 [M+H]+
。
製備例214
2-胺基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸
對2-胺基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例212；380 mg，0.66 mmol)之MeOH (3 mL)溶液加入2N NaOH (3 mL，6 mmol)並令黃色溶液於15℃下經攪拌80小時。加入額外之2N NaOH (0.5 mL，1 mmol)並令反應混合物於30℃下經攪拌4.5小時。令混合物經1N HCl中和並令所生成之懸浮液經EtOAc (3 x 5 mL)萃取。令結合之有機萃取液經鹽水(10 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且經減壓下蒸發以生成呈黃色固體之標的化合物(320 mg，86.3%)。LCMS m/z=563 [M+H]+
。
製備例215
2-胺基-3-{1-[1-(2-{[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
於-60℃下令NH3
氣冒泡通過2-胺基-3-{1-[1-(2-{[三級丁基(二甲基)矽基]氧基}乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例213；7.78 g，0.86 mmol)之MeOH (70 mL)溶液達10分鐘，隨後令反應混合物於高壓釜中經密封且於80℃下經攪拌90小時。令經冷卻之溶液於真空下經濃縮並令殘餘物於真空下經乾燥以生成粗產物。令該粗產物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=30：70至100：0溶析)純化以生成呈亮黃色固體之標的化合物(2.2 g，29%)。LCMS m/z=572 [M+H]+
。
製備例216
2-胺基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
對2-胺基-7-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸(製備例214；310 mg，0.55 mmol)於THF (3 mL)之黃色溶液加入HATU (209 mg，0.55 mmol)和NH4
Cl (29.5 mg，0.55 mmol)並令混合物於15℃下經攪拌20分鐘。加入Et3
N (167 mg，1.65 mmol)並令反應混合物經攪拌36小時。令黃色懸浮液經H2
O (8 mL)稀釋，經EtOAc (3 x 8 mL)萃取，令結合之有機萃取液經鹽水(20 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥且於真空下經濃縮。令粗產物經製備性TLC (經EtOAc溶析)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(60 mg，19%)。LCMS m/z=562 [M+H]+
。
製備例217
2-胺基-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令氯化鈣(518 mg，4.67 mmol)加入至2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例208；1.0 g，1.56 mmol)之甲醇性NH3
(30 mL，7.0 M)溶液並令反應混合物於密封管中於80℃下經攪拌18小時。令經冷卻之反應混合物於真空下經濃縮，加入H2
O (10 mL)且令溶液經DCM (3 x 20 mL)萃取。令結合之有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且於減壓下經蒸發以生成呈黃色膠之標的化合物(600 mg，77.5%)。LCMS m/z=498 [M+H]+
。
製備例218
(6-氟-3-{(1S)-1-[1-(2-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯
於室溫下對{6-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吲唑-1-基}乙酸甲酯(製備例200；103 mg，0.184 mmol)之MeOH/THF (1 mL/3 mL)溶液分批加入NaBH4
(34.8 mg，0.92 mmol)。令反應混合物於室溫下經攪拌3小時，隨後加入額外之NaBH4
(34.8 mg，0.92 mmol)且令反應混合物再經攪拌3小時。令混合物倒入至飽和NaHCO3
水溶液並於真空下經濃縮以除去有機溶劑且隨後經EtOAc (2 x 15 mL)萃取。令結合之有機層經乾燥(Na2
SO4
)並經過濾和真空下濃縮。令殘餘物經管柱層析(矽膠；經EtOAc：石油醚=0：100至80：20溶析)純化以生成呈亮黃色膠之標的化合物(79 mg，81%)。LCMS m/z=533 [M+H]+
。
製備例219
{6-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸
對{6-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-6-氟喹啉-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吲唑-2-基}乙酸甲酯(製備例199；190 mg，0.34 mmol)之無水THF/MeOH (3 mL/3 mL)溶液加入2M NaOH (1.1 mL，2.2 mmol)並令反應混合物於室溫下經攪拌1小時。令該反應混合物經EtOAc (3 x 10 mL)萃取，令結合之有機萃取液經H2
O (2 x 5 mL)沖洗，令水層結合且經1N HCl酸化至pH 3至5。令該水溶液經EtOAc (3 x 10 mL)萃取，令結合之有機層置於無水硫酸鈉上乾燥，經過濾和真空下濃縮以生成呈亮黃色膠之標的化合物(80 mg，43%)。LCMS m/z=547 [M+H]+
。
製備例220
(3-{(1S)-1-[1-(2-羥基乙基)-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}-7-甲基-1,6-萘啶-2-基)胺甲酸三級丁酯
於0℃下對{6-[(1S)-1-({2-[(三級丁氧羰基)胺基]-7-甲基-1,6-萘啶-3-基}氧基)乙基]-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基}乙酸甲酯(製備例204；120 mg，0.215 mmol)之無水THF (2 mL)溶液加入LiAlH4
(16.3 mg，0.43 mmol)並令反應混合物經攪拌1小時。藉由先後加入H2
O (16.3 mL)和15% NaOH水溶液(16.3 mL)使該反應混合物驟冷並令混合物於室溫下經攪拌15分鐘。令所生成之固體經過濾並令濾液經減壓下蒸發以生成呈褐色固體之標的化合物。LCMS m/z=531 [M+H]+
。
製備例221
2-胺基-3-[(1S)-1-{5-(1H-吡唑-1-基)-1-[(2S)-四氫-2H-哌喃-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}乙氧基]喹啉-6-羧醯胺
令2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-3-[(1S)-1-{5-(1H-吡唑-1-基)-1-[(2S)-四氫-2H-哌喃-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}乙氧基]喹啉-6-羧酸甲酯(製備例203；1.25 g，1.95 mmol)之甲醇性NH3
(25 mL，7M)溶液於密封管中於80℃下經攪拌18小時。令經冷卻之溶液經減壓下蒸發以生成黃色膠。令該膠溶解於新配製之甲醇性NH3
(25 mL，7M)並令反應混合物於密封管中於80℃下經攪拌66小時。令經冷卻之溶液經減壓下蒸發以生成呈紅色膠之標的化合物。LCMS m/z=499 [M+H]+
。
製備例222
2-胺基-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧醯胺
令2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-7-氟-3-{(1S)-1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]乙氧基}喹啉-6-羧酸甲酯(製備例206；120 mg，0.17 mmol)之甲醇性NH3
(約8M，10 mL)溶液於密封管中於80℃下經攪拌16小時。令經冷卻之反應混合物經減壓下蒸發以生成標的化合物，其係直接用於下一個步驟。LCMS m/z=585 [M+Na]+
。
製備例223
6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
令2-(6-氟-3-{1-[5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例210；421 mg，0.65 mmol)和N2
H4 .
H2
O (3 mL)於EtOH (20 mL)之黃色溶液於85℃下經攪拌1小時。令該黃色溶液於真空下經濃縮，加入MeOH (20 mL)且令黃色固體經過濾。令濾液於真空下經濃縮並令黃色油經製備性TLC (DCM：MeOH=20：1)純化以生成呈黃色油之標的化合物(241 mg，71.6%)。LCMS m/z=519 [M+H]+
。
製備例224
2-(6-氟-3-{1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮
對1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1H-苯并咪唑-6-基]乙酮(製備例84；50 mg，0.21 mmol)於DMF (2 mL)之黃色溶液加入NaH (13.3 mg，0.333 mmol)並令懸浮液於15℃下經攪拌0.5小時。令該懸浮液經冷卻至0℃，加入SEMCl (55.5 mg，0.333 mmol)且令反應混合物於室溫下經攪拌1.5小時。令懸浮液經H2
O (5 mL)驟冷並經EtOAc (20 mL)和H2
O (15 mL)稀釋。令經分離之水相經EtOAc (2 x 15 mL)萃取，令結合之有機萃取液經鹽水(2 x 20 mL)沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮。令粗產物經製備性TLC (DCM：MeOH=12：1)純化以生成淡黃色油(50 mg，65%)。重複該反應以得到產物(150 mg)。對該黃色油(150 mg，0.405 mmol)之MeOH (10 mL)溶液加入NaBH4
(58.2 mg，1.54 mmol)並令溶液於室溫下經攪拌2小時。令反應混合物於真空下經濃縮以生成白色殘餘物，令該殘餘物分佈於DCM (20 mL)和H2
O (15 mL)，令相層分離且令水相經DCM (2 x 15 mL)萃取。令結合之有機萃取液置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成呈無色膠之所欲產物(145 mg，96.1%)。重複該反應以得到產物(195 mg)。於0℃下對該膠(195 mg，0.523 mmol)、2-(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例127；194 mg，0.628 mmol)及PPh3
(206 mg，0.785 mmol)之THF (11 mL)溶液加入DIAD (159 mg，0.785 mmol)之THF (1 mL)溶液並隨後令反應混合物於室溫下經攪拌16小時。令溶液於真空下經濃縮並令殘餘物經管柱矽膠層析(經MeOH (NH4
OH)：DCM=0至1.3%)純化以生成呈淡黃色膠之標的化合物(230 mg，66.3%)。LCMS m/z=663 [M+H]+
。
製備例225
6-氟-3-{1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-胺
對2-(6-氟-3-{1-[2-甲基-5-(1H-吡唑-1-基)-1-{[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基}-1H-苯并咪唑-6-基]乙氧基}喹啉-2-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(製備例224；230 mg，0.347 mmol)於EtOH (5 mL)之黃色溶液加入N2
H4 .
H2
O (3 mL)並令黃色溶液於85℃下經攪拌1小時。令溶液於真空下經濃縮，令膠懸浮於MeOH (5 mL)且令白色固體經過濾。令濾液於真空下經濃縮並令產物經製備性TLC (經DCM：MeOH：NH3
=20：1：0.5溶析)純化以生成呈淡黃色膠之所欲產物(110 mg，59.5%)。LCMS m/z=533 [M+H]+
。
製備例226
1-(6-溴-3-(1H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙-1,2,2,2-d4
-1-醇
步驟1
於20℃下對1-[6-溴-3-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基]乙酮(製備例34；2.1 g 7.9 mmol)於THF (10 mL)之黃色溶液加入LiOD之D2
O (3M，10.5 mL)溶液。經48小時後，令紅色溶液經DCM (3 x 20 mL)萃取，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經真空下濃縮以生成呈紅色固體之1-(6-溴-3-(1H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙-1-酮-2,2,2-d3
(2.09 g，98.4%)。
步驟2
於25℃下對1-(6-溴-3-(1H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙-1-酮-2,2,2-d3
(2.09 g 7.8 mmol)於CD3
OD (10.0 mL)之黃色溶液加入NaBD4
(260 mg，6.21 mmol)。經1小時後，令反應混合物經丙酮(5 mL)驟冷並於真空下除去溶劑。令殘餘物經管柱層析(20 g矽膠；EtOAc/PE=0：25%至35%)純化以生成呈黃色固體之標的化合物(1.96 g，92.7%)。LCMS m/z=272/274 [M+H]+
。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ：5.33 - 5.26 (M，1H), 6.59 (t, 1H), 7.76 - 7.71 (M，1H), 7.83 (dd, 2H), 8.20 (d, 1H)。
製備例227
(3-(1-(6-溴-3-(1H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙氧基-1,2,2,2-d 4
)-6-氟喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯
依循製備例167至180描述之方法，自(6-氟-3-羥基喹啉-2-基)胺甲酸三級丁酯(製備例105)和1-(6-溴-3-(1H
-吡唑-1-基)吡啶-2-基)乙-1,2,2,2-d4
-1-醇(製備例226)得到呈亮黃色固體之標的化合物(2.8 g，73%)。LCMS m/z=530.3/532.3 [M-H]-
。1
H NMR (300 MHz, CDCl3
) δ：1.60 (s, 6H), 1.65 (s, 3H), 6.57 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 7.04 (dd, 1H), 7.16-7.24 (M，1H), 7.45-7.60 (M，3H), 7.86 (s, 1H), 7.90-7.95 (M，2H)。
製備例228
3-(1-羥基乙基-1,2,2,2-d4
)-4-(1H
-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
步驟1
於室溫下對3-[(1S)-1-羥基乙基]-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例27；1.20 g，4.92 mmol)於D2
O (24 mL)之懸浮液加入NaOD (40重量% D2
O溶液，1 mL，14.75 mmol)和THF (6 mL)。於室溫下經隔夜攪拌後，LCMS分析顯示生成所欲之中間體。隨後於室溫下一次加入NaBD4
(210 mg，4.92 mmol)。經攪拌1小時後，令反應混合物經冰浴冷卻，經2M HCl酸化且經乙酸乙酯(3x)萃取。令結合之有機層置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經蒸發以生成呈白色固體之3-(1-羥基乙基-1,2,2,2-d4
)-4-(1H
-吡唑-1-基)苯甲酸(1.4 g，定量產率)。
步驟2
於室溫下對3-(1-羥基乙基-1,2,2,2-d4
)-4-(1H
-吡唑-1-基)苯甲酸(1.40 g，4.92 mmol)之甲醇(25 mL)溶液加入95%濃硫酸(5至6滴)。令所生成之溶液於回流下經加熱10小時，經冷卻至室溫且經蒸發至乾燥狀態。令殘餘物溶解於乙酸乙酯，經飽和NaHCO3
沖洗，置於硫酸鈉上乾燥，經過濾且經蒸發。隨後令粗產物經矽膠(4 g；經0至20%乙酸乙酯之庚烷溶液溶析)純化以生成呈無色油之標的化合物(1.1 g，89%)。LCMS m/z=251.2 [M+H]+
。1
H NMR (300 MHz, CDCl3
) δ：3.95 (s, 3H), 6.53 (t, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.78 (d, 2H), 8.05 (d, 1H), 8.30 (d, 1H)。
製備例229
3-(1-((2-(1,3-二側氧基異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基-1,2,2,2-d4
)-4-(1H
-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯
依循製備例145至153描述之方法，自2-(6,8-二氟-3-羥基喹啉-2-基)-1H
-異吲哚-1,3(2H
)-二酮(製備例133)和3-(1-羥基乙基-1,2,2,2-d4
)-4-(1H
-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(製備例228)得到呈亮黃色固體之標的化合物(1.35 g，74%)。LCMS m/z=580.8 [M+Na]+
。
製備例230
(S)-3-(1-((2-(1,3-二側氧基異吲哚-2-基)-6,8-二氟喹啉-3-基)氧基)乙基)-4-(1H-吡唑-1-基)苄腈
依循製備例145至153描述之方法，自2-(6,8-二氟-3-羥基喹啉-2-基)-1H
-異吲哚-1,3(2H
)-二酮(製備例133)和3-[(1R
)-1-羥基乙基]-4-(1H
-吡唑-1-基)苄腈(製備例31)得到呈黃色膠之標的化合物(940 mg，96%)。LCMSm/z
522.2 [M+1]+
。
製備例231
2-[(4-甲氧基苄基)氧基]乙腈
於0℃下令(4-甲氧基苯基)甲醇(75 g，540 mmol)之無水THF (100 mL)溶液逐滴加入至氫化鈉(16.9 g，706 mmol)於無水THF (500 mL)之懸浮液。令所生成之混合物於0℃下經攪拌2小時並隨後經2-溴乙腈(78.1 g，651 mmol)之無水THF (154 mL)溶液逐滴處理1小時。令所生成之反應混合物於室溫下經攪拌16小時。隨後小心地加入飽和氯化銨水溶液(200 mL)。經加入完成後，令混合物經過濾。加入EtOAc (250 mL)並令相層分離。隨後令水層經EtOAc (2 x 250 mL)萃取。令結合之有機層經鹽水(50 mL)沖洗，經乾燥(Na2
SO4
)，經過濾且於減壓下經濃縮。隨後令粗產物經急速層析(矽膠；經石油醚：乙酸乙酯=100：0至80：20梯度溶析)純化以生成呈亮黃色液體之標的化合物(60.8 g，63%)。LCMSm/z
=200.1 [M+Na]+
。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ：3.81 (s, 3H), 4.19 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 6.90 (d, 2H), 7.28 (d, 2H)。
生物性分析
活體外研究
結合親和性Kd (uM)
使用表面電漿共振(SPR)測定化合物對經純化之鐮刀型紅血球血紅素(HbS)之結合親和性。依據機構審查委員會規約，自波士頓兒童醫院(Boston Children’s Hospital)得到病患之鐮刀型紅血球血液。自同型合子S/S病患之血液得到HbS並藉由使用文獻Antonini and Brunori, Hemoglobin and Myoglobin in their Reactions with Ligands. Amsterdam, London, North-Holland Publishing Company, 1971描述之方法進行純化。藉由離心使全血分離成紅血球和血漿成分，隨後令該血漿經傾析並被丟棄。令堆疊之紅血球經生理食鹽水(0.9% NaCl)沖洗並隨後經2：1冷去離子水稀釋進行裂解。令溶血產物經離心以除去細胞碎片並進一步藉由加入Drabkin氏緩衝液(2.8M磷酸鉀)且經寅氏鹽®離心純化。經由Sephadex® G-25凝膠過濾除去有機磷酸鹽(2,3-BPG)。藉由陽離子交換層析(使用二乙基胺基乙基(DEAE)-Sepharose®快速流並經pH 8.5至pH 7.5之pH梯度溶析)分離HbS、野生型血紅素及血紅素A (HbA)。藉由原態凝膠電泳測定所生成之HbS和HbA的純度並進一步使用HbS級分。
為安定血紅素之四聚體結構，使用雙(3,5-二溴水楊基)反丁烯二酸鹽經β次單位(Lys82-Lys82)使HbS交聯(如描述於文獻Shibayama N.et al
., J Am Chem Soc 2014, 136, 13, 5097-5105和Shibayama N.et al
., Biochemistry 1991, 39, 33, 8158-8165)。隨後令經交聯之HbS經生物素化並經訂製之抗生物素鏈菌素感測器捕獲以達到表面上4000至5000共振單位(RU)之蛋白密度。於Sierra感測器MASS-1儀器測試使用SPR與HbS結合之化合物。流洗緩衝液含有100 mM磷酸鉀(pH 7.5)、0.005% Tween-20、1 mM乙二胺四乙酸(EDTA) 及0.1 mg/mL牛血清白蛋白(含有1% DMSO)。化合物樣品係以流速30 µL/分鐘注入達2分鐘連結時間和至少5分鐘解離時間。對每個化合物測試含有至少4種濃度之2或3倍稀釋系列。基於該等化合物於生化檢測之活性(當可取得時)選擇劑量範圍。於每個化合物系列之前和之後進行流洗緩衝液之多重空白注射以使化合物數據於分析軟體中經空白減去。於每個實驗進行陽性對照組以監測並維持表面上HbS之活性。於開始每個數據組時進行DMSO曲線以於分析期間對該數據進行排除體積校正。使用Sierra感測器和Scrubber 2.0軟體進行數據處理和分析。藉由擬合傳感圖至1：1結合模式計算結合親和性(離解常數Kd)。本發明之化合物的Kd值(uM)係示於下述表4。
‘R’-‘T’檢測(遲延HbS之氧合和因此之聚合) IC50
(uM)
於化合物之存在下進行自氧合(R；鬆弛態) HbS至去氧(T；緊張態) HbS之轉化以測定化合物於去氧條件下安定氧合(R)態之能力。該檢測之進行類似於文獻Oksenberget al
., Br J Haematology, 2016, 175, 141–153描述之‘氧解離檢測’。
首先自30 mM化合物之100% DMSO起始儲存液的主系列稀釋盤製備方便檢測之化合物盤。使用聲頻分配自該主系列稀釋盤對方便檢測盤輸送所欲之化合物濃度(167 nL)。令該等盤經冷凍於-20℃下直至需要使用。令經純化之HbS-O2
(即氧合HbS)經100 mM磷酸鉀緩衝液(pH 7.4)稀釋至3 uM。對該方便檢測盤之每個孔槽加入3 uM儲存溶液(50 uL)並經機械混合8次。經混合後，令該等盤經覆蓋並於室溫和適度搖晃下經培育1小時。經培育後，令該等盤置於去氧環境(＜1% O2
)下達2小時並監測轉化為去氧HbS與時間之函數。使用索瑞特(Soret)峰於415 nm和430 nm之吸光度分別偵測血紅素之氧合和去氧型式並於0、90及120分鐘讀取吸光度測量值(光學密度(OD))。於700 nm下收集用於校正之背景吸光度。
首先藉由對每個時間點之415 nm和430 nm數據減去700 nm下之基礎吸光度以分析數據並隨後計算415 nm/430 nm數據之比值(比值=[(OD415
-OD700
)/(OD430
-OD700
)]。使用由上述計算之於時間為0和每個關注時間點的該等比值計算於每個時間點之功效(功效時間 x=
比值時間 x
/比值時間 0
)。藉由僅比較化合物對HbS之功效與藉由陽性對照組化合物妥卡雷索(tucaresol)觀察到之功效計算功效%(功效%=[(功效時間 x
化合物-功效時間 x
HbS)/(功效時間 x
妥卡雷索-功效時間 x
HbS)]x100)。單點之數據係以功效%報導。對測定該HbS ‘R’-‘T’轉化之達50%抑制作用的化合物濃度(IC50
(uM))之計算係基於不同化合物濃度之功效%。本發明之化合物的IC50
值(uM)係示於下述表4。
與HbA共結晶
透過共結晶實驗進一步研究實施例58之化合物與血紅素(Hb)之結合。基於HbS與HbA之結構和功能相似性和結構研究所需之大量材料，使用經純化之HbA以進行該等研究。
依據公開之方法(參閱文獻Leeet al
., "Crowning proteins: modulating the protein surface properties using crown ethers”, Angew Chem Int Ed Engl 2014; 53(48):13054-13058)使HbA與實施例58之化合物結晶。簡言之，令20 mg/mL HbA之20 mM Tris-HCl (pH 8.0)溶液與等體積之50 mM 18-冠醚-6溶液混合並於20℃下經培育20分鐘。隨後加入實施例58之化合物至最終濃度1.5 mM並進一步再經培育1小時。於20℃下經使用懸滴蒸氣擴散法，藉由混合等體積之蛋白和含有0.1 M Tris-HCl (pH 8.0)、0.2 M Li2
SO4
及30至32% PEG 3350之儲存溶液以進行結晶。於約2天內晶體成長至最大尺寸並令該晶體進一步與實施例58之化合物(10 mM)經隔夜浸泡。於阿貢國家實驗室先進光子源(Argonne National Laboratory Advanced Photon Source)使用束線17-ID收集繞射數據。使用autoPROC (Global Phasing Limited)處理數據並使用3WHM (PDB碼)作為起始模式以解析結構。使用COOT (參閱文獻Emsley P., Cowtan K., “Coot: model-building tools for molecular graphics”, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 2004; 60 (Pt 12 Pt 1): 2126-32)和BUSTER (Global Phasing Limited)實施模型建構和細部化。結構之最終解析係1.85埃(Å)。
實施例58之化合物與人HbA錯合的高解析(1.85Å)共晶體結構表示實施例58之化合物與Hb之氧合(R態)構形結合且以雙配位形式結合，該化合物與Hb四聚體之化學計量為2：1。該等結構研究係與上述表4所示之數據(關於本發明之化合物的結合交互作用和所提出之作用機制(即HbS之氧合(R態)的安定化和因此聚合之遲延))相符合。
HbS聚合檢測
此檢測係用於測定本發明之化合物於HbS佔據之變化情況下對HbS聚合之抑制程度。用於此檢測之方法係改編自He和Russell描述之方法(參閱文獻He, Z. and J. E. Russell, "A high-Throughput Microplate Method for Assessing Aggregation of Deoxygenated Hemoglobin S Heterotetramersin Vitro
", Anal Biochem 306(2): 349-352 (2002))。
令經純化之HbS載入1.25 M磷酸鉀(pH 7.4)並經濃縮至1.1 mM。令血紅素濃度固定於0.15 mM並使用1.25 M磷酸鉀(pH 7.4)令HbS經稀釋至適當之濃度。令本發明之化合物於下述之濃度下加入至0.15 mM HbS：0.03 mM (10%)、0.075 mM (25%)及0.15 mM (50%)。因該等化合物係雙配位結合劑，該濃度係經加倍以計算覆蓋率%(即0.15*0.5= 0.075*2=0.15)。DMSO濃度係與所有化合物濃度、無化合物之對照組及HbA相匹配。經培育後，將HbS溶液(33.5 µL)加入至Costar 96孔槽半區域盤之每個孔槽。為導入去氧，令於1.25 M磷酸鉀製備之1M二硫亞磺酸鈉(16.5 µL)加入至每個孔槽以達最終檢測濃度330 mM並經充分混合。令礦物油(50 µL)覆蓋每個孔槽之溶液以防止再氧化且令該盤置於4℃下5分鐘。經冷培育後，令該等盤置於業已於37℃下經平衡之分光光度計以起始聚合過程(溫度躍變)。於700 nm下監測該反應40分鐘並每經30秒收集數據點。對每個條件使用4個孔槽並令每個分析點之數據平均。使用Graph Pad Prism分析數據並令數據擬合Boltzman S形方程式，其中V50 (t1/2
)作為遲延時間。使用該DMSO作為起始遲延時間以計算變化%。當擬合該Boltzman S形方程式時，使用所產生之V50誤差附加變化%之誤差。
對10%、25%及50% HbS佔據(n=3)因遲延時間(DT)之增加，藉由增加之遲延時間與HbS佔據% (% HbS Occ)的函數所測量之HbS聚合之遲延係示於下述表5。
HbS聚合之高濃度依賴性說明於較高HbS佔據情況下作用呈現非線性。
全血氧親和性檢測
氧親和性係Hb結合並釋出溶液中之氧的能力之標記。於給定之氧濃度下，藉由測量存在之氧合Hb和去氧Hb的百分比，可測定全血中氧親和性。氧親和性係以p50 (氧分壓，其中溶液中50% Hb已與氧結合)或p20 (氧分壓，其中溶液中20% Hb已與氧結合)表示。藉由p20和p50值向較低之氧分壓移動，證實全血中氧合態Hb之安定性。
為測定本發明之化合物對氧親和性之作用，使用Hemeox分析儀(TCS Scientific)測量人、狗及小鼠之全血的p50和p20。令本發明之化合物加入至血液至濃度1 mM並於25℃和固定旋轉下經培育1小時。選擇化合物濃度1 mM至於全血中約20%血紅素佔據。以相同方式且於相同時間培育含有相同濃度之DMSO但不含有化合物之對照組。經培育後，使用該Hemeox分析儀立即檢測樣品之氧親和性。令血液樣品(50 µL)經Hemox緩衝液(5 mL；TCS Scientific)稀釋，其中該Hemox緩衝液業已經預先培育至37℃。經稀釋後，令樣品載入至分析室並使用壓縮空氣使該樣品完全氧合。一旦樣品達到pO2
＞150托(torr)，藉由轉移至N2
以起始測定並記錄為分壓之函數的氧合血紅素%。自儀器讀數記錄每個樣品之p20和p50。依據下式計算報導呈相對於DMSO之變化%的數據：
如下表6所示(以至少n為2收集樣品)，本發明之化合物降低人、狗及小鼠之全血的p20和p50。
活體內研究
小鼠模式
於單一劑量研究中，使用雄性鐮刀型Townes小鼠評估本發明之化合物的功效。依據下表7、8及9所示之量藉由口服餵食管施予本發明之化合物。對照組小鼠接受載體。於0.5小時、1小時、4小時、7小時、10小時及24小時抽取血液(50 µL)。為測定於全血之暴露，使用20 µL樣品。亦評估於0.5小時抽取之血液的細胞鐮刀型化。
於24孔槽盤中使用Hemeox溶液(300 µL)以稀釋得自經處理之動物的紅血球(RBC)至約107
細胞/mL並於低氧室(含有5% CO2
和3% O2
)內經培育4小時。隨後於室溫下且於鐮刀型化固定溶液中令細胞固定30分鐘並於室溫下經與抗體共軛之TER119 alexa 488 (BioLegend)染色30分鐘，經Hemox緩衝液(200 µL；TCS Scientific)沖洗且以50,000細胞/孔槽塗佈。使用GraphPad Prism (第5版)目視數據。結果係以平均值±該平均值之標準誤差(SEM)表示。使用無母數單因子變異數分析(ANOVA)和隨後之Dunnett氏多重比較以進行統計分析。當p＜0.01時，接受顯著性。
對慢性劑量研究，對6至8隻小鼠(Townes SCD小鼠)每天2次(BID)施予如下表7、8及9所示之量的載體或於載體內的本發明之化合物。經15天給藥後，自所有動物收集血液樣品以載入該Hemeox分析儀以產生氧親和性曲線，使用Idexx血液分析儀進行完整血液分析且如前所述評估細胞鐮刀型化。自R&D系統藉由酶聯免疫吸附測定(ELISA)評估可溶性血管細胞黏附分子1 (sVCAM1)之濃度。結果係示於下表7、8及9。
