CN113261664A - 一种发酵葡萄籽灵芝菌粉的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于发酵菌粉制备技术领域，具体涉及一种发酵葡萄籽灵芝菌粉的制备方法，包括以下步骤：（1）灵芝菌种活化；（2）葡萄籽清洗、去杂；（3）制作葡萄籽培养基；（4）接种：将培养好的所述灵芝液体菌种接种到所述葡萄籽培养基上，并置于23~28℃条件下发酵培养至菌丝满袋，得到发酵葡萄籽灵芝菌体菌袋；（5）烘干；（6）粉碎：用破壁率95%的超微粉碎机将烘干的所述发酵葡萄籽灵芝菌体粉碎，即制成发酵葡萄籽灵芝菌粉。本发明的特点在于，不需要先将葡萄籽内的营养成分提取出来后供灵芝菌种吸收，而是减少了提取步骤，直接利用葡萄籽制成固体培养基，将灵芝菌种直接接种其上进行发酵培养。
Description
技术领域
本发明属于发酵菌粉制备技术领域，具体涉及一种发酵葡萄籽灵芝菌粉的制备方法。
背景技术
灵芝，又称灵芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。具有补气安神、止咳平喘的功效，用于眩晕不眠、心悸气短、虚劳咳喘。中国古代认为灵芝具有功效，视为仙草，是《本草纲目》唯一入五经（肾经、肝经、心经、脾经、肺经）的药物，补益全身五脏之气。现代药理学研究表明,灵芝含有多种生物活性成分，如多糖类、三萜类、多肽类、核苷类等。近年来，对灵芝的药理学及临床应用等多个方面的大量研究证实，灵芝对于增强人体免疫力，调节血糖，控制血压，辅助肿瘤放、化疗，保肝护肝，促进睡眠等均具有显著功效。
葡萄籽是葡萄的种子，是葡萄酒厂的下脚料，经晒干后分离葡萄皮、葡萄梗后所得产物。葡萄籽富含原花青素（OPC），OPC是迄今发现的植物来源的最高效的抗氧化剂之一，体内和体外试验表明，OPC的抗氧化效果，是维生素C和维生素E的30~50倍。超强的抗氧化效率具有清除自由基、提高人体免疫力、美白、祛斑、抗过敏的强力效果。除此之外，葡萄籽提取物还富含100多种有效物质，如氨基酸、维生素及矿物质等，其中不饱和脂肪酸——亚油酸（是一种人体必需但不能合成的）占68-76%，居油料作物之首，它由不饱和到饱和状态要消耗20%的胆固醇，能够有效的降低血脂，具有保健、美容之功效。
由于灵芝和葡萄籽均具有神奇的功效，因此有大量学者投入灵芝和葡萄籽产品加工的开发研究当中，目前，灵芝的精深加工产品主要集中在灵芝子实体粉、孢子粉、孢子油的加工利用，葡萄籽的精深加工主要集中在葡萄籽油、籽提取物等方面。也有灵芝和葡萄籽综合利用方面的研究报道(一种灵芝葡萄籽奶片,专利号：CN103749703A；康宝莱公司生产的葡萄籽灵芝孢子粉胶囊)，现有技术生产的灵芝及葡萄籽深加工产品主要通过萃取，分离，混合等技术手段，成本高，工艺复杂，且营养成分吸收利用率低。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种发酵葡萄籽灵芝菌粉的制备方法，采用菌丝体发酵技术，利用灵芝菌种对葡萄籽进行微生物发酵，在发酵的过程中有效的降解了葡萄籽中的大分子物质，使葡萄籽中的花青素、亚油酸、氨基酸、维生素及矿物质等的含量显著提高，还能使灵芝菌丝利用葡萄籽中的营养不断生长，产生大量的灵芝多糖，三萜类化合物等有效成分。并采用超微粉碎技术，将制备好的葡萄籽灵芝发酵物进行超微粉碎，粉碎后的物质更容易被人体吸收；且通过发酵，中和了灵芝的苦味，增强了产品的口感，操作简单，生产成本低，适合于大规模生产；生产出来的产品可作为食品添加剂，也可加工成胶囊、片剂等直接服用。
为了达到以上目的，本发明采取以下技术方案：
一种发酵葡萄籽灵芝菌粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）灵芝菌种活化：所述灵芝菌种选用菌丝活力旺、长速快的日本赤灵芝，先将所述灵芝菌种用PDA培养期转接活化，然后将活化的灵芝菌种母种转接到摇瓶培养基中，并置于摇床上震荡培养，培养温度为23~28℃，转速160~200rpm，培养时间为96~140h；将所述灵芝菌种母种培养至菌丝体浓度最大，活力最旺；
（2）葡萄籽清洗、去杂：所述葡萄籽为赤霞珠葡萄生产完葡萄酒后，经反复冲洗，然后分离葡萄皮和葡萄梗后所得产物；
（3）制作葡萄籽培养基：先将所述葡萄籽浸泡至含水量达到50%~60%，然后使用聚丙烯塑料袋进行装袋并封口，最后，对其进行高压蒸汽灭菌后，得到葡萄籽培养基；
（4）接种：将培养好的所述灵芝液体菌种接种到所述葡萄籽培养基上，并置于23~28℃条件下发酵培养至菌丝满袋，得到发酵葡萄籽灵芝菌体菌袋；
（5）烘干：剥离菌袋，将所述发酵葡萄籽灵芝菌体掰碎，置于烘箱中，先将其80℃高温烘制3~4h，然后再60℃低温烘制6~10h，使其烘干至含水率为20%~30%；
（6）粉碎：用破壁率95% 的超微粉碎机将烘干的所述发酵葡萄籽灵芝菌体粉碎，即制成发酵葡萄籽灵芝菌粉。
进一步地，步骤（3）中，所述葡萄籽浸泡至含水量达到55%~60%。
进一步地，步骤（1）中，摇瓶培养基配方为：麸皮10%，土豆10%，硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.2%，蛋白胨0.2%，葡萄糖1%，红糖1%，VB10.1%，余量为水，另添加消泡剂 1滴/瓶。
进一步地，步骤（4）中，所述聚丙烯塑料袋的规格为15×33cm，接种量为30~50mL/袋。
进一步地，步骤（5）中，先高温使菌丝表面水分迅速蒸发，待水分降低到25%~35%时，降低烘箱温度，此时进入干燥期，慢慢烘制，使得含水量烘制至20%。
进一步地，步骤（3）中，将装袋并封口的葡萄籽置于121~130℃的高温中，持续灭菌130~150min。
有益效果：本发明的特点在于，不需要先将葡萄籽内的营养成分提取出来后供灵芝菌种吸收，而是减少了提取步骤，直接利用葡萄籽制成固体培养基，将灵芝菌种直接接种其上进行发酵培养，和葡萄籽培养基一起形成发酵葡萄籽灵芝菌体培养物，将葡萄籽培养基粉碎的同时即粉碎了发酵葡萄籽灵芝菌体，形成葡萄籽灵芝菌粉。
用葡萄籽制成培养基，然后接种培养至最佳菌龄的灵芝液体菌种，经菌丝体发酵培养，在发酵的过程中有效的降解了葡萄籽中的大分子物质，使葡萄籽中的花青素、亚油酸、氨基酸、维生素及矿物质等的含量显著提高，还能使灵芝菌丝利用葡萄籽中的营养不断生长，产生大量的灵芝多糖，三萜类化合物等有效成分。
采用先高温后低温的烘制方法烘制菌丝块的方法，可以使菌丝块水分均匀，达到彻底干燥的目的，防止菌丝块被烘黑，蒸熟，影响菌丝粉色泽和口感。
烘干后的发酵菌丝粉采用破壁率95% 的超微粉碎机粉碎，粒度小，易被人体吸收。
本发明与现有技术相比缩短了灵芝菌丝体的培养时间，且用葡萄籽做培养基发酵培养灵芝菌丝体，口感佳，营养丰富，易吸收，成产成本低，适合大规模工厂化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例一
一种发酵葡萄籽灵芝菌粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）灵芝菌种活化：将保藏于4℃冰箱的灵芝母种提前24h置于室温活化，然后转接到新的母种培养基上，于25℃条件下培养至菌丝满管备用；所述灵芝菌种选用菌丝活力旺、长速快的日本赤灵芝，先将所述灵芝菌种用PDA培养期转接活化，然后将活化的灵芝菌种母种转接到摇瓶培养基中，制作摇瓶液体培养基，培养基配方为：麸皮5%，土豆20%，硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.2%，蛋白胨0.2%，葡萄糖1%，红糖1.5%，VB110mg/L，消泡剂 1滴/瓶，余量为水，将活化的母种转接到摇瓶液体培养基中，置于摇床上震荡培养，温度23℃，转速200rpm，培养时间140h；将所述灵芝菌种母种培养至菌丝体浓度最大，活力最旺；
（2）葡萄籽清洗、去杂：所用葡萄籽为赤霞珠葡萄生产完葡萄酒后，经反复冲洗，然后分离葡萄皮和葡萄梗后所得产物；研究发现，由于赤霞珠颗粒较小，葡萄籽与葡萄肉之比较高(约为1/12)，有利于本发明中做培养基；
（3）制作葡萄籽培养基：先将所述葡萄籽浸泡至含水量达到60%，然后使用规格为15×33cm的聚丙烯塑料袋进行装袋并封口，最后，对其进行高压蒸汽灭菌（101kPa ，121℃，140min）后，得到葡萄籽培养基；，因为葡萄籽和其他常规的培养基不同，壳体比较硬，水分比较小，不易穿透，因此，在高压蒸汽灭菌时需要更长时间；
（4）接种：将培养好的所述灵芝液体菌种接种到所述葡萄籽培养基上发酵，接种量为40mL/袋，并置于23~28℃条件下发酵培养至菌丝满袋，得到发酵葡萄籽灵芝菌体菌袋；待菌丝满袋后将发酵培养基掰成玉米粒大小；
（5）烘干：剥离菌袋，将掰成玉米粒大小的菌丝体置于烘箱中，先在80℃条件下烘制4h，然后降温至60℃烘制6h，烘至含水量为20%；
（6）粉碎：用破壁率95% 的超微粉碎机将烘干的所述发酵葡萄籽灵芝菌体粉碎，即制成发酵葡萄籽灵芝菌粉。
本发明的特点在于，不需要先将葡萄籽内的营养成分提取出来后供灵芝菌种吸收，而是减少了提取步骤，直接利用葡萄籽制成固体培养基，将灵芝菌种直接接种其上进行发酵培养，和葡萄籽培养基一起形成发酵葡萄籽灵芝菌体培养物，将葡萄籽培养基粉碎的同时即粉碎了发酵葡萄籽灵芝菌体，形成葡萄籽灵芝菌粉。
实施例二
（1）将保藏于4℃冰箱的灵芝母种提前24h置于室温活化，然后转接到新的母种培养基上，于28℃条件下培养至菌丝满管备用；
（2）将活化的母种转接到摇瓶液体培养基中，置于摇床上震荡培养，温度23℃，转速160rpm，培养时间120h；
（3）选用新鲜无霉变的赤霞珠葡萄籽，经反复冲洗，分离葡萄皮、葡萄梗后，浸泡48h，使其含水量达到50%，然后装入规格为15×33cm的聚丙烯塑料袋中，封口，高压蒸汽灭菌（103kPa ，123℃，130min），制成葡萄籽培养基；
（4）将培养好的液体菌种接种于葡萄籽培养基上发酵，接种量为50mL/袋，待菌丝满袋后将发酵培养基掰成玉米粒大小；
（5）将掰成玉米粒大小的菌丝体置于烘箱中，先在80℃条件下烘制3h，先高温使菌丝表面水分迅速蒸发，待水分降低到25%~35%时，降低烘箱温度，此时进入干燥期，60℃慢慢烘制10h，使得含水量烘制至20%；
（6）采用破壁率95%的超微粉碎机将烘干的发酵培养基粉碎，即得发酵葡萄籽灵芝菌粉。
本发明用葡萄籽制成培养基，然后接种培养至最佳菌龄的灵芝液体菌种，经菌丝体发酵培养，在发酵的过程中有效的降解了葡萄籽中的大分子物质，使葡萄籽中的花青素、亚油酸、氨基酸、维生素及矿物质等的含量显著提高，还能使灵芝菌丝利用葡萄籽中的营养不断生长，产生大量的灵芝多糖，三萜类化合物等有效成分。
本发明采用先高温后低温的烘制方法烘制菌丝块的方法，可以使菌丝块水分均匀，达到彻底干燥的目的，防止菌丝块被烘黑，蒸熟，影响菌丝粉色泽和口感。
本发明烘干后的发酵菌丝粉采用破壁率95% 的超微粉碎机粉碎，粒度小，易被人体吸收。
实施例三
（1）将保藏于4℃冰箱的灵芝母种提前18h置于室温活化，然后转接到新的母种培养基上，于23℃条件下培养至菌丝满管备用；
（2）制作摇瓶液体培养基，培养基配方为：麸皮5%，土豆20%，硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.2%，蛋白胨0.2%，葡萄糖1%，红糖1.5%，VB1 10mg/L，消泡剂 1滴/瓶，将活化的母种转接到摇瓶液体培养基中，置于摇床上震荡培养，温度25℃，转速180rpm，培养时间130h；
（3）选用新鲜无霉变的赤霞珠葡萄籽，经反复冲洗，分离葡萄皮、葡萄梗后，浸泡42h，使其含水量达到53%，然后装入15×33cm的聚丙烯塑料袋中，封口，高压蒸汽灭菌（101kPa，130℃，150min），制成葡萄籽培养基；
（4）将培养好的液体菌种接种于葡萄籽培养基上发酵，接种量（50mL/袋），待菌丝满袋后将发酵培养基掰成玉米粒大小；在此过程中发现，葡萄籽培养基在葡萄籽含水量为55%时进行高压蒸汽灭菌，菌丝生长更好；
（5）将掰成玉米粒大小的菌丝体置于烘箱中，先在80℃条件下烘制3.5h，然后降温至60℃烘制8h，烘至含水量为20%；
（6）采用破壁率95%的超微粉碎机将烘干的发酵培养基粉碎，即得发酵葡萄籽灵芝菌粉。
由于本发明的灵芝菌种为液体菌种，与现有技术中固体的灵芝菌种培养相比缩短了灵芝菌种的培养时间，且用葡萄籽做培养基发酵培养灵芝菌体，口感佳，营养丰富，易吸收，成产成本低，适合大规模工厂化生产。
本发明中，所用灵芝菌种需提前从冰箱中取出置于室温活化，然后转接到新的母种培养基上，于适宜温度条件下培养至菌丝快满管时备用，此时菌丝活力最为旺盛。
本发明所用摇瓶培养基营养丰富，在适宜的培养条件下可快速培养出菌球浓度高，菌丝活力旺的灵芝液体菌种。
综上所述，本发明显而易见的有益效果为：采用菌丝体发酵技术，利用灵芝菌种对葡萄籽进行微生物发酵，在发酵的过程中有效的降解了葡萄籽中的大分子物质，使葡萄籽中的花青素、亚油酸、氨基酸、维生素及矿物质等的含量显著提高，还能使灵芝菌丝利用葡萄籽中的营养不断生长，产生大量的灵芝多糖，三萜类化合物等有效成分。并采用超微粉碎技术，将制备好的葡萄籽灵芝发酵物进行超微粉碎，粉碎后的物质更容易被人体吸收；且通过发酵，中和了灵芝的苦味，增强了产品的口感，操作简单，生产成本低，适合于大规模生产；生产出来的产品可作为食品添加剂，也可加工成胶囊、片剂等直接服用。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (5)
1.一种发酵葡萄籽灵芝菌粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）灵芝菌种活化：所述灵芝菌种选用菌丝活力旺、长速快的日本赤灵芝，先将所述灵芝菌种用PDA培养期转接活化，然后将活化的灵芝菌种母种转接到摇瓶培养基中，并置于摇床上震荡培养，培养温度为23~28℃，转速160~200rpm，培养时间为96~140h；将所述灵芝菌种母种培养至菌丝体浓度最大，活力最旺；
（2）葡萄籽清洗、去杂：所述葡萄籽为赤霞珠葡萄生产完葡萄酒后，经反复冲洗，然后分离葡萄皮和葡萄梗后所得产物；
（3）制作葡萄籽培养基：先将所述葡萄籽浸泡至含水量达到50%~60%，然后使用聚丙烯塑料袋进行装袋并封口，最后，对其进行高压蒸汽灭菌后，得到葡萄籽培养基；
（4）接种：将培养好的所述灵芝液体菌种接种到所述葡萄籽培养基上，并置于23~28℃条件下发酵培养至菌丝满袋，得到发酵葡萄籽灵芝菌体菌袋；
（5）烘干：剥离菌袋，将所述发酵葡萄籽灵芝菌体掰碎，置于烘箱中，先将其80℃高温烘制3~4h，然后再60℃低温烘制6~10h，使其烘干至含水率为20%~30%；
（6）粉碎：用破壁率95% 的超微粉碎机将烘干的所述发酵葡萄籽灵芝菌体粉碎，即制成发酵葡萄籽灵芝菌粉。
2.如权利要求1所述发酵葡萄籽灵芝菌粉的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述葡萄籽浸泡至含水量达到55%~60%。
3.如权利要求1所述发酵葡萄籽灵芝菌粉的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述聚丙烯塑料袋的规格为15×33cm，接种量为30~50mL/袋。
4.如权利要求1所述发酵葡萄籽灵芝菌粉的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，先高温使水分降低到25%~35%，再降低烘箱温度，使得含水量慢慢烘制至20%。
5.如权利要求1所述发酵葡萄籽灵芝菌粉的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，将装袋并封口的葡萄籽置于121~130℃的高温中，持续灭菌150min。
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