CN113234816A - 乙肝病毒前基因组rna在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医学生物检测技术领域,具体是血清HBV pgRNA在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用。本发明还提供一种利用针对乙肝相关肝癌患者术前血清中HBV pgRNA的定量PCR检测来进行肝癌术后复发及术后生存预测的试剂盒。本发明的标志物临床参考价值和可信度较高,不仅能够预测乙肝相关肝癌患者肝切除术后肝癌复发和术后生存情况,而且还能早期识别术后容易复发的患者,并提前进行干预治疗。本发明的试剂盒和检测方法简便,可靠,周期短,特异性高,易于临床推广。
Description
技术领域
本发明涉及医学生物检测技术领域,具体地说,是血清乙肝病毒前基因组RNA(HBVpregenomic RNA)在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用。
背景技术
原发性肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC,以下简称肝癌)是我国最常见的肝脏恶性肿瘤。由于其高致病率、发展迅速、手术切除率低、易发生肝内转移且易复发等特点,肝癌严重影响了国民的生活质量与身体健康。乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV,以下简称乙肝病毒)感染引起的肝硬化和肝癌在我国比例高达60%和80%。因此,慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB,以下简称慢乙肝)是患者出现肝硬化并最终演变为肝癌的最主要病因。目前针对肝癌的治疗手段主要包括手术切除、放疗、化疗及靶向药物治疗等,但已有的治疗方式对进展期肝癌的疗效非常有限。
在研究乙型病毒性肝炎相关肝癌(HBV-related HCC,以下简称乙肝相关肝癌)的发生及发展过程中,大量的基础及临床研究均发现,乙肝相关肝癌的诊断和治疗分子标志物具有重要的临床意义。乙肝病毒前基因组RNA(HBV pregenomic RNA,以下简称HBVpgRNA)全长约为3.5kb,可作为乙肝病毒的反转录模板以及聚合酶蛋白(polymerase,Pol)和核心抗原(HBV core antigen,HBcAg)的翻译模板,在乙肝病毒的生命周期中发挥了重要作用。近年来国内外的相关研究发现慢乙肝患者的外周循环血中可以稳定的检测到HBVpgRNA;且在长期服用核苷类似物(Nucleoside analogs,NAs)抗病毒治疗,血清HBV DNA水平在临床上为阴性(即未检出)的慢乙肝患者中,其血清HBV pgRNA表达水平可反映慢乙肝患者肝脏的炎症和纤维化程度。此外,血清HBV pgRNA还可以作为一种潜在的生物学标志物,用于评价NAs抗病毒治疗效果,检测NAs治疗中的病毒突变以及指导NAs治疗的安全停药。
目前,尚没有研究报道HBV pgRNA在乙肝相关肝癌的发生及进展过程中发挥了何种功能及其相关的分子机制;此外,血清HBV pgRNA能否作为评价乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测的标志物尚不明确,因此值得进一步探索。
发明内容
本发明的目的在于提供血清HBV pgRNA在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用。
HBV pgRNA(HBV ayw型)全长为3470个碱基,其序列如SEQ ID NO.1所示。本发明经过研究发现,通过实时定量PCR、Sanger测序实验证实了可以在乙肝相关肝癌患者血清中检测到HBV pgRNA(图1)。通过使用实时定量PCR的方法检测乙肝相关肝癌患者术前血清中HBVpgRNA的表达情况,发现术前血清HBV pgRNA高表达与更低的肿瘤分化程度密切相关。此外,术前血清HBV pgRNA高表达患者的术后总生存期(Overall survival,OS,以下简称OS)更短,肝癌的累计复发率(Cumulative recurrence rate,CRR,以下简称CRR)更高。比例风险回归模型的分析结果表明术前血清HBV pgRNA高表达是乙肝相关肝癌患者术后死亡和肝癌复发的独立危险因素。由此提供了其作为判断乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测标志物中的新用途。
本发明的第一方面,提供乙肝相关肝癌患者术前血清HBV pgRNA作为乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测标志物的应用。
发明人通过研究发现,术前血清HBV pgRNA高表达的乙肝相关肝癌患者的肝癌的累计复发率(CRR)明显高于术前血清pgRNA低表达的肝癌患者;此外,术前血清HBV pgRNA高表达的乙肝相关肝癌患者的术后总生存期(OS)明显低于术前血清pgRNA低表达的肝癌患者。因此,乙肝相关肝癌患者术前血清HBV pgRNA的表达量可以预测乙肝相关肝癌患者肝切除术后肝癌复发和术后生存情况。
本发明的第二方面,提供血清HBV pgRNA在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用。
本发明的第三方面,提供检测血清HBV pgRNA含量的试剂在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用。
进一步的,所述的试剂盒中包含检测血清HBV pgRNA含量的试剂。
进一步的,所述的试剂为检测乙肝相关肝癌患者术前血清HBV pgRNA含量的试剂。
进一步的,所述的试剂,选自:对HBV pgRNA具有检测特异性的PCR引物。
进一步的,所述的对HBV pgRNA具有检测特异性的PCR引物的核苷酸序列如下:
进一步的,所述的试剂包括:血清HBV pgRNA的提取试剂、逆转录试剂、实时定量PCR试剂以及HBV pgRNA的实时定量PCR引物,所述引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
更进一步的,乙肝相关肝癌患者术前血清HBV pgRNA的表达量大于1.95log10copies/mL的患者术后肝癌更易复发;术前血清HBV pgRNA的表达量大于1.92log10copies/mL的患者术后更易死亡,更难生存。
本发明的第四方面,提供一种乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒,所述的试剂盒通过检测乙肝相关肝癌患者术前血清HBV pgRNA含量进行乙肝相关肝癌术后复发及术后生存情况预测。
本发明的第五方面,提供一种利用如上所述的试剂盒进行乙肝相关肝癌患者肝切除术后肝癌复发和术后生存情况预测的方法,如下:
A.抽提血清总RNA;
B.对步骤A中的总RNA进行逆转录,得到cDNA;
C.采用实时定量PCR技术对HBV pgRNA的拷贝数进行定量检测,然后使用HBVpgRNA标准品,计算出标准曲线,最后根据标准曲线计算出样品中HBV pgRNA的绝对表达量。
数据均采用SPSS16.0处理,采用平均值±标准差的方式表示。
本发明优点在于:
1、申请人从合作医院取得了大量的至少使用NAs抗病毒治疗1年的,血清HBV DNA低于临床检测下限(小于50copies/mL)的乙肝相关肝癌病人术前的血清,为本发明的研究提供了有力的保障。
2、就技术而言,HBV pgRNA的检测本质上是一种定量PCR检测,具有操作简便、检测灵敏、特异性好、重复性高等特点,现今已越来越多地被应用于临床检验技术中。我们所采用基本检测方法是定量PCR,这一技术在现代实验诊断学中已被证实是高灵敏度、高准确度的检测方法,试验技术已经十分成熟,并且我们采用的是这一技术中的标准曲线定量法,可以准确地对各种样品中特点核酸分子做精确定量。
3、此外,本发明所涉及的指标HBV pgRNA在乙肝相关肝癌患者术后发生复发及死亡的患者中表达显著高于术后未发生复发及死亡的患者,且差异具有统计学意义(P<0.05),其临床参考价值和可信度较高,不仅能够预测乙肝相关肝癌患者肝切除术后肝癌复发和术后生存情况,而且还能早期识别术后容易复发的患者,并提前进行干预治疗,如进一步抗病毒治疗,预防性介入治疗,靶向药物治疗及免疫治疗等,把乙肝相关肝癌的抗复发治疗做到“关口前移”,从而降低乙肝相关肝癌患者术后的复发率,改善其术后生存率,对于乙肝相关肝癌的临床治疗有着重大的意义。此外只需要采集检测者术前的血液即可获得检测结果,也避免了采用影像学手段进行检查时,患者需根据检测设备的要求提前进行准备的麻烦以及受到仪器辐射危害的风险。
4、本发明提供了一种以定量PCR为基础的乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测的试剂盒,可以通过检测乙肝相关肝癌病人术前外周血中的HBV pgRNA表达丰度来对乙肝相关肝癌患者肝切除术后肝癌复发和术后生存情况做出预测。其检测方法特别简便、周期短、灵敏度高,是现行检测试剂的有效补充。
附图说明
图1为HBV pgRNA的特征验证结果:(A)HBV pgRNA的实时定量PCR的溶解曲线为单峰;(B)Sanger测序实验证实了可以在乙肝相关肝癌患者血清中检测到HBV pgRNA。
图2是采用qPCR检测乙肝相关肝癌术前血清中HBV pgRNA表达情况的结果:HBVpgRNA的标准曲线公式。
图3是HBV pgRNA对肝癌患者预后的预测情况结果图:(A)Kaplan-Meier生存曲线显示乙肝相关肝癌患者血清中的HBV pgRNA表达量与患者肝切除术后总体生存率的关系;(B)Kaplan-Meier生存曲线显示乙肝相关肝癌术前的HBV pgRNA表达量与肝癌患者肝切除术后累计复发率的关系。
图4为HBV pgRNA对乙肝相关肝癌患者肝切除术后肝癌复发和术后生存情况预测的价值:(A)乙肝相关肝癌术前血清中HBV pgRNA表达量预测患者术后肝癌复发的ROC曲线及cutoff值(红圈);(B)乙肝相关肝癌术前血清中HBV pgRNA表达量预测患者术后生存的ROC曲线及cutoff值(红圈)。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
本发明所用试剂和原料均市售可得或可按文献方法制备。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件如Sambrook等人《分子克隆:实验室指南》(NewYork:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件,或按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明,否则百分比和份数按体积计算。
实施例1:HBV pgRNA的特征验证
1.1血清中总RNA的抽提
本发明使用TRIzolTMLS Reagent(Thermo Fisher,货号:10296010)提取患者血清中的总RNA。所使用的实验耗材均不含RNA酶。其大致步骤为:取250ul血清,加入750ulTRIzolTMLS Reagent,充分震荡混匀,室温静置5分钟;加入200ul氯仿,剧烈震荡15秒,室温静置10分钟;以12000转每分钟,4摄氏度离心15分钟,将上清液移至新的1.5ml离心管中,加入等体积的异丙醇,室温静置10分钟;以12000转每分钟,4摄氏度离心10分钟(在管底可见白色沉淀);弃液体,留沉淀,加入1ml的75%乙醇,以10000转每分钟,4摄氏度离心5分钟;弃液体,留沉淀,干燥;加适量DEPC水溶解;测浓度,置于负80摄氏度冰箱备用。
使用紫外分光光度计测定RNA在260nm和280nm处的光密度值,当OD260/OD280在1.8-2.0范围内认为RNA的纯度是可靠的。
1.2DNase I处理:
提取后的RNA用DNase I(Thermo Fisher,货号:EN0525)处理,操作步骤如下:
DNase I处理体系(10uL)为:
1.3反转录:
M-MLV反转录体系(20uL)过程如下所示:
1.4引物序列:
HBV pgRNA-forward:TGTCCATGCCCCAAAGC(SEQ ID NO.2);
HBV pgRNA–reverse:TCCTCCCCCAACTCCTCCCA(SEQ ID NO.3);
1.5实时定量PCR的反应体系(20μL):
PCR反应条件如下:94℃,5min预变性;95℃,15s变性;60℃,15s退火;72℃,20s延伸;40个循环。
HBV pgRNA的特异性引物扩增后产物的溶解曲线如图1A所示,单峰提示其产物是单一的,没有其它非特异性产物;收集PCR产物进行纯化及Sanger测序,可以检测到HBVpgRNA的特异性序列,提示该引物可以正确地检测到HBV pgRNA(图1B)。
实施例2:乙肝相关肝癌患者术前血清中HBV pgRNA的表达水平检测
2.1样品收集
收集至少使用NAs抗病毒治疗1年的,血清HBV DNA低于临床检测下限(小于50copies/mL)的乙肝相关肝癌病人术前的血清共136例放置于-80℃冰箱中。全部病例在手术前均未接受过其他治疗,所有患者均签署知情同意书,该实验方案取得本单位伦理委员会同意。纳入及排除标准见表1;一般临床资料见表2。
表1.病例选择的纳入和排除标准
表2.本发明参与者的一般临床资料
注:炎症程度及纤维化程度使用GS评分系统评价,其中G评分为炎症程度,S评分为纤维化程度;HBeAg为乙肝病毒e抗原;HBsAg为乙肝病毒表面抗原。
2.2血清HBV pgRNA的绝对定量
血清RNA的抽提、反转录以及实时定量PCR如实施例1所述。由于血清中,RNA分子的定量没有公认的内参。因此,在本发明中,我们采用绝对定量的方法对血清中的HBV pgRNA进行绝对定量。我们将本发明中需要绝对定量的HBV pgRNA的PCR产物克隆到pUC57质粒并得到相应的重组质粒(pUC57-HBV pgRNA)。在对血清中的HBV pgRNA进行实时定量PCR时,加上相应的稀释不同倍数(3×107copies/μL,3×106copies/μL,3×105copies/μL,3×104copies/μL,3×103copies/μL,3×102copies/μL,3×101copies/μL以及3copies/μL)的重组质粒,得到8个不同拷贝数对应的Ct值。接着,我们用SPSS23.0软件(SPSS,Inc.,Chicago,IL)进行线性回归分析,得到HBV pgRNA的标准曲线公式为y=-3.0525x+38.338(R2=0.9851)(图2)。根据标准曲线公式以及实时定量PCR的Ct值,我们得到血清HBV pgRNA的绝对表达量。
实施例3:血清HBV pgRNA对乙肝相关肝癌患者预后的评价作用
血清总RNA的抽提、逆转录以及实时定量PCR如实施例1所述。我们检测了136例患者术前血清中HBV pgRNA的表达量,发现血清HBV pgRNA低表达的肝癌患者的总体生存率明显高于血清HBV pgRNA高表达的肝癌患者(图3A,Log-rank,P=0.0166),血清HBV pgRNA低表达的肝癌患者的累积复发率也明显低于血清HBV pgRNA高表达的肝癌患者(图3B,Log-rank,P=0.0157);比例风险回归模型单因素及多因素分析的结果显示术前血清HBV pgRNA高表达是乙肝相关肝癌患者术后死亡(表3)和肝癌复发(表4)的独立危险因素。
表3.本发明参与者总体生存率的单因素和多因素分析
注:95%CI为95%可信区间;NS为无统计学差异(p>0.05)。
表4.本发明参与者累积复发率的单因素和多因素分析
实施例4:血清HBV pgRNA对肝癌患者术后复发及生存的预测作用
我们用ROC曲线(receiver operating characteristic curve,受试者工作特征曲线,简称ROC曲线)的AUC(Area Under Curve,曲线下面积)来评价血清HBV pgRNA预测乙肝相关肝癌术后复发及生存的价值,并计算了灵敏度(Sensitivity)以及特异度(Specificity),然后进一步确定了血清HBV pgRNA用于预测患者肿瘤复发(cut off=1.95log10copies/mL)及患者死亡(cut off=1.92log10copies/mL)的最佳截断点(cutoff)。我们根据136例患者术前血清中HBV pgRNA的表达量,绘制了血清HBV pgRNA的ROC曲线。发现乙肝相关肝癌患者术前血清HBV pgRNA的表达量预测肝癌术后复发的AUC为0.627(0.532-0.721),灵敏度为68.1%,特异度为59.4%(图4A);乙肝相关肝癌患者术前血清HBVpgRNA的表达量预测肝癌术后死亡的AUC为0.627(0.533-0.721),灵敏度为68.8%,特异度为54.2%(图4B)。结果显示乙肝相关肝癌患者术前血清HBV pgRNA的表达量对患者术后肿瘤复发及死亡均具有较好的预测价值,即术前血清HBV pgRNA的表达量大于1.95log10copies/mL的患者术后肝癌更易复发;术前血清HBV pgRNA的表达量大于1.92log10copies/mL的患者术后更易死亡,更难生存。
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明,但本发明创造并不限于所述实施例,熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换,这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
序列表
<110> 中国人民解放军海军军医大学
<120> 乙肝病毒前基因组RNA在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用
<130> /
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 3470
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 1
ccccgtggtc ggtcggaacg gcagacggag aaggggacga gagagtccca agcgaccccg 60
agaagggtcg tccgcaggat tcagcgccga cgggacgtaa acaaaggacg tcccgcgcag 120
gatccagttg gcagcacagc ctagcagcca tggaaacgat gtatatttgc gggataggac 180
aacagagtta tcagtcccga taatgtttgc tccagacctg ctgcgagcaa aacaagcggc 240
taggagttcc gcagtatgga tcggcagagg agccgaaaag gttccacgca tgcgctgatg 300
gcccatgacc aagccccagc cagtgggggt tgcgtcagca aacacttggc acagacctgg 360
ccgttgccgg gcaacggggt aaaggttcag gtattgttta cacagaaagg ccttgtaagt 420
tggcgagaaa gtgaaagcct gcttagattg aatacatgca tacaaaggca tcaacgcagg 480
ataaccacat tgtgtaaaag gggcagcaaa acccaaaaga cccacaattc gttgacatac 540
tttccaatca ataggcctgt taataggaag ttttctaaaa cattctttga ttttttgtat 600
gatgtgttct tgtggcaagg acccataaca tccaatgaca taacccataa aatttagaga 660
gtaaccccat ctctttgttt tgttagggtt taaatgtata cccaaagaca aaagaaaatt 720
ggtaacagcg gtaaaaaggg actcaagatg ctgtacagac ttggccccca ataccacatc 780
atccatataa ctgaaagcca aacagtgggg gaaagcccta cgaaccactg aacaaatggc 840
actagtaaac tgagccagga gaaacgggct gaggcccact cccataggaa ttttccgaaa 900
gcccaggatg atgggatggg aatacaggtg caatttccgt ccgaaggttt ggtacagcaa 960
caggagggat acatagaggt tccttgagca gtagtcatgc aggtccggca tggtcccgtg 1020
ctggttgttg aggatcctgg aattagagga caaacgggca acataccttg atagtccaga 1080
agaaccaaca agaagatgag gcatagcagc aggatgaaga ggaagatgat aaaacgccgc 1140
agacacatcc agcgataacc aggacaagtt ggaggacaag aggttggtga gtgattggag 1200
gttggggact gcgaattttg gccaagacac acggtagttc cccctagaaa attgagagaa 1260
gtccaccacg agtctagact ctgcggtatt gtgaggattc ttgtcaacaa gaaaaacccc 1320
gcctgtaaca cgagaagggg tcctaggaat cctgatgtga tgttctccat gttcagcgca 1380
gggtccccaa tcctcgagaa gattgacgat aagggagagg cagtagtcag aacagggttt 1440
actgttcctg aactggagcc accagcaggg aaatacaggc ctctcactct gggatcttgc 1500
agagtttggt ggaaggttgt ggaattccac tgcatggcct gaggatgagt gtttctcaaa 1560
ggtggagaca gcggggtagg ctgccttcct gactggcgat tggtggaggc aggaggcgga 1620
tttgctggca aagtttgtag tatgccctga gcctgagggc tccaccccaa aaggcctccg 1680
tgcggtgggg tgaaacccag cccgaatgct ccagctccta ccttgttggc gtctggccag 1740
gtgtccttgt tgggattgaa gtcccaatct ggatttgcgg tgtttgctct gaaggctgga 1800
tccaactggt ggtcgggaaa gaatcccaga ggattgctgg tggaaagatt ctgccccatg 1860
ctgtagatct tgttcccaag aatatggtga cccacaaaat gaggcgctat gtgttgtttc 1920
tctcttatat aatatacccg ccttccatag agtgtgtaaa tagtgtctag tttggaagta 1980
atgattaact agatgttctg gataataagg tttaataccc ttatccaatg gtaaatattt 2040
ggtaaccttt ggataaaacc tggcaggcat aatcaattgc aatcttcttt tctcattaac 2100
tgtgagtggg cctacaaact gttcacattt tttgataatg tcttggtgta aatgtatatt 2160
aggaaaagat ggtgttttcc aatgaggatt aaagacaggt acagtagaag aataaagccc 2220
agtaaagttc cccaccttat gagtccaagg aatactaaca ttgagattcc cgagattgag 2280
atcttctgcg acgcggcgat tgagaccttc gtctgcgagg cgagggagtt cttcttctag 2340
gggacctgcc tcgtcgtcta acaacagtag tctccggaag tgttgatagg ataggggcat 2400
ttggtggtct ataagctgga ggagtgcgaa tccacactcc gaaagacacc aaatactcta 2460
taactgtttc tcttccaaaa gtgagacaag aaatgtgaaa ccacaagagt tgcctgaact 2520
ttaggcccat attagtgttg acataactga ctactaggtc tctagacgct ggatcttcca 2580
aattaacacc cacccaggta gctagagtca ttagttcccc ccagcaaaga attgcttgcc 2640
tgagtgcagt atggtgaggt gaacaatgct caggagactc taaggcttcc cgatacagag 2700
ctgaggcggt atctagaaga tctcgtactg aaggaaagaa gtcagaaggc aaaaacgaga 2760
gtaactccac agtagctcca aattctttat aagggtcgat gtccatgccc caaagccacc 2820
caaggcacag cttggaggct tgaacagtag gacatgaaca agagatgatt aggcagaggt 2880
gaaaaagttg catggtgctg gtgcgcagac caatttatgc ctacagcctc ctagtacaaa 2940
gacctttaac ctaatctcct cccccaactc ctcccagtct ttaaacaaac agtctttgaa 3000
gtatgcctca aggtcggtcg ttgacattgc tgagagtcca agagtcctct tatgtaagac 3060
cttgggcaat atttggtggg cgttcacggt ggtctccatg cgacgtgcag aggtgaagcg 3120
aagtgcacac ggtccggcag atgagaaggc acagacgggg agtccgcgta aagagaggtg 3180
cgccccgtgg tcggtcggaa cggcagacgg agaaggggac gagagagtcc caagcgaccc 3240
cgagaagggt cgtccgcagg attcagcgcc gacgggacgt aaacaaagga cgtcccgcgc 3300
aggatccagt tggcagcaca gcctagcagc catggaaacg atgtatattt gcgggatagg 3360
acaacagagt tatcagtccc gataatgttt gctccagacc tgctgcgagc aaaacaagcg 3420
gctaggagtt ccgcagtatg gatcggcaga ggagccgaaa aggttccacg 3470
<210> 2
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 2
tgtccatgcc ccaaagc 17
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 3
tcctccccca actcctccca 20
Claims (9)
1.血清HBV pgRNA在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用。
2.根据权利要求1所述的血清HBV pgRNA在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用,其特征在于,所述的试剂盒中包含检测血清HBV pgRNA含量的试剂。
3.根据权利要求2所述的血清HBV pgRNA在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用,其特征在于,所述的试剂为检测乙肝相关肝癌患者术前血清HBV pgRNA含量的试剂。
4.根据权利要求3所述的血清HBV pgRNA在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用,其特征在于,所述的试剂,选自:对HBV pgRNA具有检测特异性的PCR引物。
5.根据权利要求4所述的血清HBV pgRNA在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用,其特征在于,所述的对HBV pgRNA具有检测特异性的PCR引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
6.根据权利要求2所述的血清HBV pgRNA在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用,其特征在于,所述的试剂包括:血清HBV pgRNA的提取试剂、逆转录试剂、实时定量PCR试剂以及HBV pgRNA的实时定量PCR引物,所述引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
7.根据权利要求3所述的血清HBV pgRNA在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用,其特征在于,术前血清HBV pgRNA的表达量大于1.95log10 copies/mL的乙肝相关肝癌患者术后肝癌更易复发;术前血清HBV pgRNA的表达量大于1.92log10copies/mL的乙肝相关肝癌患者术后更易死亡,更难生存。
8.检测血清HBV pgRNA含量的试剂在制备乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒中的应用。
9.一种乙肝相关肝癌术后复发及术后生存预测试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒通过检测乙肝相关肝癌患者术前血清HBV pgRNA含量进行乙肝相关肝癌术后复发及术后生存情况预测。
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丁文斌: "乙肝病毒前基因组 RNA 在肝细胞癌发生和进展中的作用及机制研究", 《中国优秀博士学位论文全文数据库 医药卫生科技缉》 * |
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