CN113194985A - EpCAM抗体、可活化抗体和免疫缀合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本公开总体上涉及特异性地结合人EpCAM的抗体和抗体片段、EpCAM可活化抗体及其免疫缀合物，以及制备和使用所述抗体、抗体片段、可活化抗体和免疫缀合物的方法，所述抗体、抗体片段、可活化抗体和免疫缀合物用于诊断和治疗诸如癌症的疾病。

Description

EpCAM抗体、可活化抗体和免疫缀合物及其用途
背景技术
本公开总体上涉及特异性地结合人EpCAM的抗体和抗体片段、EpCAM可活化抗体及其免疫缀合物，以及制备和使用所述抗体、抗体片段、可活化抗体和免疫缀合物的方法，所述抗体、抗体片段、可活化抗体和免疫缀合物用于诊断和治疗诸如癌症的疾病。
上皮细胞粘附分子(EpCAM)是包含细胞外结构域、跨膜结构域和单个细胞内结构域的I型跨膜糖蛋白。人类中的EpCAM表达是上皮特异性的。除鳞状上皮和一些特定的上皮细胞类型(如表皮角质形成细胞、肝细胞、胃壁细胞和肌上皮细胞)外，大多数上皮细胞表达EpCAM(Balzar等人,J.Mol.Med.77:699-712(1999)；Momburg等人,Cancer Res 47:2883-2891(1987))。
EpCAM在不同起源的人类癌中大量且均匀地表达(Went等人,Br.J.Cancer 94:128-35(2006)；Herlyn等人,Proc Natl.Acad.Sci.USA 76:1438-1442(1979)；Went等人,Hum.Pathol.35:122-128(2004))。EpCAM在包括例如卵巢癌、结肠癌、胃癌、前列腺癌和肺癌在内的绝大多数上皮癌中过表达。此外，EpCAM已经显示在大多数原发性、转移性和播散性NSCLC(非小细胞肺癌细胞)上(Passlick,Int.J.Cancer 87:548-552(2000))、胃和胃-食管交界部腺癌上(Martin,J.Clin.Pathol.52:701-704(1999))以及源自结肠直肠癌、胰腺癌和乳腺癌的细胞系中(Szala,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:3542-3546(1990),Packeisen,Hybridoma 18:37-40(1999))表达。在另一项研究中，对108例继发性肿瘤样品的免疫组织化学分析发现，只有4％缺乏EpCAM表达。EpCAM在从结肠癌、乳腺癌、胰腺癌和前列腺癌分离的癌症起始细胞或癌细胞干细胞中也过表达(O'Brien等人,Nature 445:106-110(2007)；Marhaba等人,Curr.Mol.Med.8:784-804(2008))。
正常细胞在上皮膜的基底外侧表达EpCAM，而癌细胞在顶端表面上大量表达EpCAM。已经设计了基于抗体的治疗剂来利用EpCAM表达的这一特征，因为正常细胞EpCAM不太显著且暴露程度较低，这意味着健康细胞可能不易由治疗性抗EpCAM抗体结合。
临床上已经使用了许多针对EpCAM的抗体，但由于各种原因而失败。所测试的EpCAM抗体采用多种形式，包括裸抗体、免疫毒素以及双或三特异性抗体(Baeuerle,Br.J.Cancer,96:417-423(2007))。例如，阿德木单抗(MT201)(一种裸抗EpCAM抗体)已在结肠直肠癌、前列腺癌和乳腺癌的治疗临床研究中进行了测试。当前基于抗EpCAM抗体的方法所面临的安全问题包括系统性耐受性和急性胰腺炎。因此，尽管已经尝试了开发针对EpCAM的治疗性抗体，但是迫切需要开发克服先前开发的抗体的缺点和局限性的新型治疗性EpCAM抗体。
发明内容
本公开提供了特异性地结合人EpCAM的抗体和抗体片段，以及EpCAM可活化抗体，以及包含所述抗体、抗体片段和可活化抗体的免疫缀合物。还提供了包含编码EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段和可活化抗体的核酸序列的多核苷酸，包含所述多核苷酸的载体，以及包含所述多核苷酸和载体的细胞。本公开还提供了包含EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段和可活化抗体的组合物，如药物组合物。进一步提供了制备和使用所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段、可活化抗体和组合物的方法。此类方法包括使用抗体、抗体片段、可活化抗体、免疫缀合物和其它组合物来抑制肿瘤生长，以及制备和使用所述抗体、抗体片段、可活化抗体、免疫缀合物和组合物的方法，所述抗体、抗体片段、可活化抗体、免疫缀合物和组合物用于诊断和治疗诸如癌症的疾病。
在一些实施方案中，本公开提供：
[1]一种EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)重链CDR1(VH-CDR1)，其包含序列X1YX3X4H，其中X1选自N和S，X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W，并且X4选自I和M(SEQ ID NO:5)；
(b)重链CDR2(VH-CDR2)，其包含序列WX2X3PGX6VYIQYX12X13KFX17G，其中X2选自I和F，X3选自Y和N，X6选自N和D，X12选自N和S，X13选自E和Q，并且X17选自K和Q(SEQ ID NO:7)；
(c)重链CDR3(VH-CDR3)，其包含序列X1GX3X4FAY，其中X1选自D和E，X3选自P、A、S、Y、F、G、T和V，并且X4选自Y和W(SEQ ID NO:8)；
(d)轻链CDR1(VL-CDR1)，其包含序列RSSX4SLLHSX10GX12TYLX16，其中X4选自R和K，X10选自N和D，X12选自F和I，并且X16选自Y和S(SEQ ID NO:10)；
(e)轻链CDR2(VL-CDR2)，其包含序列QTSNLAS(SEQ ID NO:40)；以及
(f)轻链CDR3(VL-CDR3)，其包含序列X1QX3LELPX8T，其中X1选自A、L和Q，X3选自S、G、Y和N，并且X8选自N和W(SEQ ID NO:11)；
[2]如[1]所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)重链CDR1(VH-CDR1)，其包含序列NYX3IH，其中X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W(SEQID NO:6)；
(b)重链CDR2(VH-CDR2)，其包含序列WX2X3PGX6VYIQYX12X13KFX17G，其中X2选自I和F，X3选自Y和N，X6选自N和D，X12选自N和S，X13选自E和Q，并且X17选自K和Q(SEQ ID NO:7)；
(c)重链CDR3(VH-CDR3)，其包含序列DGPX4FAY，其中X4选自Y和W(SEQ ID NO:9)；
(d)轻链CDR1(VL-CDR1)，其包含序列RSSX4SLLHSX10GX12TYLX16，其中X4选自R和K，X10选自N和D，X12选自F和I，并且X16选自Y和S(SEQ ID NO:10)；
(e)轻链CDR2(VL-CDR2)，其包含序列QTSNLAS(SEQ ID NO:40)；以及
(f)轻链CDR3(VL-CDR3)，其包含序列AQX3LELPNT，其中X3选自S、G、Y和N(SEQ IDNO:12)；
[3]如[1]或[2]所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含具有选自下组的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3：
(a)分别SEQ ID NO:13-15、42、40和41；
(b)分别SEQ ID NO:13-15和39-41；
(c)分别SEQ ID NO:13、26、15和39-41；以及
(d)分别SEQ ID NO:13、24、15、42、40和41；
[4]如[1]-[3]中任一项所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段以3.0nM或更小的KD结合至人EpCAM和食蟹猴EpCAM两者；
[5]如[4]所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段特异性地结合至具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的人EpCAM的细胞外结构域内的表位；
[6]如[5]所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)VH-CDR1，其包含序列NYYIH(SEQ ID NO:13)；
(b)VH-CDR2，其包含序列WIYPGNVYIQYNEKFKG(SEQ ID NO:14)；
(c)VH-CDR3，其包含序列DGPWFAY(SEQ ID NO:15)；
(d)VL-CDR1，其包含序列RSSRSLLHSDGFTYLY(SEQ ID NO:42)；
(e)VL-CDR2，其包含序列QTSNLAS(SEQ ID NO:40)；以及
(f)和VL-CDR3，其包含序列AQNLELPNT(SEQ ID NO:41)；
[7]如[4]所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)VH-CDR1，其包含序列NYYIH(SEQ ID NO:13)；
(b)VH-CDR2，其包含序列WIYPGNVYIQYNEKFKG(SEQ ID NO:14)；
(c)VH-CDR3，其包含序列DGPWFAY(SEQ ID NO:15)；
(d)VL-CDR1，其包含序列RSSKSLLHSDGFTYLY(SEQ ID NO:39)；
(e)VL-CDR2，其包含序列QTSNLAS(SEQ ID NO:40)；以及
(f)VL-CDR3，其包含序列AQNLELPNT(SEQ ID NO:41)；
[8]如[3]所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含选自以下的VH和VL：
(a)具有SEQ ID NO:54的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；
(b)具有SEQ ID NO:54的序列的VH和具有SEQ ID NO:87的序列的VL；
(c)具有SEQ ID NO:55的序列的VH和具有SEQ ID NO:87的序列的VL；
(d)具有SEQ ID NO:56的序列的VH和具有SEQ ID NO:88的序列的VL；
(e)具有SEQ ID NO:55的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；以及
(f)具有SEQ ID NO:56的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；
[9]如[8]所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:54的VH和SEQ ID NO:89的VL；
[10]如[8]所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:54的VH和SEQ ID NO:87的VL；
[11]如[8]所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含选自以下的重链和轻链：
(a)具有SEQ ID NO:103的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC；
(b)具有SEQ ID NO:103的序列的HC和具有SEQ ID NO:138的序列的LC；
(c)具有SEQ ID NO:105的序列的HC和具有SEQ ID NO:139的序列的LC；
(d)具有SEQ ID NO:106的序列的HC和具有SEQ ID NO:139的序列的LC；
(e)具有SEQ ID NO:105的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC；以及
(f)具有SEQ ID NO:106的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC；
[12]如[11]所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:103的HC和SEQ ID NO:140的LC；
[13]如[11]所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:103的HC和SEQ ID NO:138的LC；
[14]如[1]或[2]所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含具有选自由以下组成的组的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3：
(a)分别SEQ ID NO:22、14、15、42、40和41；
(b)分别SEQ ID NO:13、14、33、42、40和41；
(c)分别SEQ ID NO:23、14、15、42、40和41；以及
(d)分别SEQ ID NO:25、14、15、42、40和41；
[15]如[14]所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)VH-CDR1，其包含序列NYHIH(SEQ ID NO:22)；
(b)VH-CDR2，其包含序列WIYPGNVYIQYNEKFKG(SEQ ID NO:14)；
(c)VH-CDR3，其包含序列DGPWFAY(SEQ ID NO:15)；
(d)VL-CDR1，其包含序列RSSRSLLHSDGFTYLY(SEQ ID NO:42)；
(e)VL-CDR2，其包含序列QTSNLAS(SEQ ID NO:40)；以及
(f)VL-CDR3，其包含序列AQNLELPNT(SEQ ID NO:41)；
[16]如[14]所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)VH-CDR1，其包含序列NYYIH(SEQ ID NO:13)；
(b)VH-CDR2，其包含序列WIYPGNVYIQYNEKFKG(SEQ ID NO:14)；
(c)VH-CDR3，其包含序列DGYWFAY(SEQ ID NO:33)；
(d)VL-CDR1，其包含序列RSSRSLLHSDGFTYLY(SEQ ID NO:42)；
(e)VL-CDR2，其包含序列QTSNLAS(SEQ ID NO:40)；以及
(f)VL-CDR3，其包含序列AQNLELPNT(SEQ ID NO:41)；
[17]如[14]所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含选自以下的VH和VL：
(a)具有SEQ ID NO:75的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；
(b)具有SEQ ID NO:77的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；
(c)具有SEQ ID NO:76的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；以及
(d)具有SEQ ID NO:84的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；
[18]如[17]所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:75的VH和SEQ ID NO:89的VL；
[19]如[17]所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:77的VH和SEQ ID NO:89的VL；
[20]如[17]所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含选自以下的重链和轻链：
(a)具有SEQ ID NO:125的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC；
(b)具有SEQ ID NO:127的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC；
(c)具有SEQ ID NO:126的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC；以及
(d)具有SEQ ID NO:134的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC；
[21]如[20]所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:125的HC和SEQ ID NO:140的LC；
[22]如[20]所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:127的HC和SEQ ID NO:140的LC；
[23]如[1]-[22]中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段是鼠抗体、非人哺乳动物抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体；
[24]如[1]-[23]中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体是全长抗体。
[25]如[24]所述的全长抗体，其中所述抗体是人IgG1；
[26]如[1]-[23]中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体片段是Fab、Fab'、F(ab’)2、Fd、单链Fv或scFv、二硫键连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、胞内抗体、IgGΔCH2、微型抗体、F(ab’)3、四抗体、三抗体、双抗体、单结构域抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2或scFv-Fc；
[27]一种可活化抗体，所述可活化抗体包含如[1]-[26]中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述可活化抗体还包含
(a)与抗体或抗体片段偶联的可裂解部分，其中所述可裂解部分是充当蛋白酶的底物的多肽；以及
(b)与所述抗体或抗体片段偶联的掩蔽部分，其中当所述可活化抗体处于未裂解状态时，所述掩蔽部分抑制所述抗体或抗体片段与EpCAM的结合，
其中处于所述未裂解状态的可活化抗体从N末端至C末端具有如下结构排列：(掩蔽部分)-(可裂解部分)-(抗体或抗体片段)或(抗体或抗体片段)-(可裂解部分)-(掩蔽部分)；
[28]一种EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含：
(a)EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有选自下组的成员的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3：
(i)分别SEQ ID NO:13-15、42、40和41；
(ii)分别SEQ ID NO:13-15和39-41；
(iii)分别SEQ ID NO:13、26、15和39-41；以及
(iv)分别SEQ ID NO:13、24、15、42、40和41；
(b)与所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段偶联的掩蔽部分，其中当所述可活化抗体处于未裂解状态时，所述掩蔽部分抑制所述抗体或抗体片段与EpCAM的结合；以及
(c)与所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段偶联的可裂解部分，其中所述可裂解部分是充当蛋白酶的底物的多肽；
其中处于所述未裂解状态的可活化抗体从N末端至C末端具有如下结构排列：(掩蔽部分)-(可裂解部分)-(抗体或抗体片段)或(抗体或抗体片段)-(可裂解部分)-(掩蔽部分)；
[29]如[28]所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:13-15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3；
[30]如[29]所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:54的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；
[31]如[30]所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:103的序列的重链和具有SEQ ID NO:140的序列的LC；
[32]如[29]-[31]中任一项所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:151-157的氨基酸序列的掩蔽部分；
[33]如[32]所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含具有SEQ ID NO:155的氨基酸序列的掩蔽部分；
[34]如[29]-[33]中任一项所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含可裂解部分，所述可裂解部分包含SEQ ID NO:168或169的氨基酸序列；
[35]一种EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含：
(a)EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有选自由以下组成的组的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3：
(i)分别SEQ ID NO:22、14、15、42、40和41；
(ii)分别SEQ ID NO:13、14、33、42、40和41；
(iii)分别SEQ ID NO:23、14、15、42、40和41；以及
(iv)分别SEQ ID NO:25、14、15、42、40和41；
(b)与所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段偶联的掩蔽部分，其中当所述可活化抗体处于未裂解状态时，所述掩蔽部分抑制所述抗体或抗体片段与EpCAM的结合；以及
(c)与所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段偶联的可裂解部分，其中所述可裂解部分是充当蛋白酶的底物的多肽；
其中处于所述未裂解状态的可活化抗体从N末端至C末端具有如下结构排列：(掩蔽部分)-(可裂解部分)-(抗体或抗体片段)或(抗体或抗体片段)-(可裂解部分)-(掩蔽部分)；
[36]如[35]所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:22、14、15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3；
[37]如[36]所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:75的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；
[38]如[37]所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:125的序列的重链和具有SEQ ID NO:140的序列的轻链；
[39]如[36]-[38]中任一项所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:151-157和162-167的氨基酸序列的掩蔽部分；
[40]如[39]所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含具有选自SEQ IDNO:162-167的氨基酸序列的掩蔽部分；
[41]如[36]-[40]中任一项所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含可裂解部分，所述可裂解部分包含SEQ ID NO:168或169的氨基酸序列；
[42]如[35]所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:13、14、33、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3；
[43]如[42]所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:77的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；
[44]如[43]所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:127的序列的重链和具有SEQ ID NO:140的序列的轻链；
[45]如[42]-[44]中任一项所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:151-161的氨基酸序列的掩蔽部分；
[46]如[45]所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含具有选自SEQ IDNO:158-161的氨基酸序列的掩蔽部分；
[47]如[42]-[46]中任一项所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含可裂解部分，所述可裂解部分包含SEQ ID NO:168或169的氨基酸序列；
[48]一种细胞，所述细胞产生如[1]-[26]中任一项所述的抗体或EpCAM结合抗体片段或如[27]-[47]中任一项所述的可活化抗体；
[49]一种产生EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体的方法，所述方法包括：
(a)培养如[48]所述的细胞；以及，
(b)从所述细胞或细胞培养物中分离所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体；
[50]如权利要求49所述的方法，其中所述细胞是真核细胞；
[51]如权利要求50所述的方法，其中所述细胞是CHO细胞；
[52]一种诊断试剂，所述诊断试剂包含如[1]-[26]中任一项所述的抗体或抗体片段或如[27]-[47]中任一项所述的EpCAM可活化抗体；
[53]如[52]所述的诊断试剂，其中所述抗体、抗体片段或可活化抗体被标记；
[54]如[53]所述的诊断试剂，其中所述标记选自：放射性标记、荧光团、发色团、显像剂和金属离子；
[55]一种多核苷酸或多核苷酸的组，所述多核苷酸或多核苷酸的组编码如[1]-[26]中任一项所述的抗体或抗体片段或如[27]-[47]中任一项所述的可活化抗体；
[56]一种载体或载体的组，所述载体或载体的组包含如[55]所述的多核苷酸；
[57]一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如[55]所述的多核苷酸或多核苷酸的组或如[56]所述的载体；
[58]一种由下式表示的免疫缀合物：
Figure BDA0003121673050000161
其中：
EpBA是根据[1]-[47]中任一项所述的EpCAM抗体、EpCAM抗体片段或EpCAM可活化抗体，其通过赖氨酸残基共价连接至CyL1；
WL是1至20的整数；并且
CyL1由下式表示：
Figure BDA0003121673050000162
或其药学上可接受的盐，其中：
N与C之间的双线
Figure BDA0003121673050000163
表示单键或双键，条件是当它为双键时，X不存在并且Y是-H或(C1-C4)烷基；并且当它为单键时，X是-H或胺保护部分并且Y是-OH或-SO3H或其药学上可接受的盐；
W’是-NRe’，
Re’是-(CH2-CH2-O)n-Rk；
n是2至6的整数；
Rk是-H或-Me；
Rx3是(C1-C6)烷基；
L’由下式表示：
-NR5-P-C(＝O)-(CRaRb)m-C(＝O)-(B1’)；或
-NR5-P-C(＝O)-(CRaRb)m-S-Zs1-(B2’)；
R5是-H或(C1-C3)烷基；
P是氨基酸残基或含有介于2至20个之间的氨基酸残基的肽；
Ra和Rb在每次出现时各自独立地是-H、(C1-C3)烷基或带电荷的取代基或可电离基团Q；
m是1至6的整数；并且
Zs1选自下式中的任一者：
Figure BDA0003121673050000171
Figure BDA0003121673050000172
以及
Figure BDA0003121673050000173
其中q是1至5的整数；
[59]如[58]所述的免疫缀合物，其中Ra和Rb两者均是H；并且R5是H或Me；
[60]如[58]或[59]所述的免疫缀合物，其中P是含有2至5个氨基酸残基的肽；
[61]如[58]-[60]中任一项所述的免疫缀合物，其中P选自Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp、Cit、Phe-Ala、Phe-N9-甲苯磺酰基-Arg、Phe-N9-硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO:215)、β-Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO:216)、Gly-Phe-Leu-Gly(SEQ ID NO:217)、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala、D-Ala-D-Ala、Ala-Met、Met-Ala、Gln-Val、Asn-Ala、Gln-Phe和Gln-Ala。更具体地，P是Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala或D-Ala-D-Ala；
[62]如[61]所述的免疫缀合物，其中P是Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala或D-Ala-D-Ala；
[63]如[58]-[62]中任一项所述的免疫缀合物，其中Q是-SO3H或其药学上可接受的盐；
[64]如[58]所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050000191
Figure BDA0003121673050000201
Figure BDA0003121673050000211
Figure BDA0003121673050000221
或其药学上可接受的盐，其中
WL是1至10的整数；N与C之间的双线
Figure BDA0003121673050000222
表示单键或双键，条件是当它为双键时，X不存在并且Y是-H；并且当它为单键时，X是-H并且Y是-OH或-SO3H或其药学上可接受的盐；
[65]如[58]-[64]中任一项所述的免疫缀合物，其中N与C之间的双线
Figure BDA0003121673050000231
表示双键，X不存在并且Y是-H；
[66]如[58]-[64]中任一项所述的免疫缀合物，其中N与C之间的双线
Figure BDA0003121673050000232
表示单键，X是-H，并且Y是-SO3H或其药学上可接受的盐；
[67]如[66]所述的免疫缀合物，其中Y是-SO3H、-SO3Na或-SO3K；
[68]如[66]所述的免疫缀合物，其中Y是–SO3Na；
[69]一种由下式表示的免疫缀合物：
Figure BDA0003121673050000233
其中：
EpBA是根据[1]-[47]中任一项所述的EpCAM抗体、EpCAM抗体片段或EpCAM可活化抗体，其通过赖氨酸残基共价连接至CyL2；
WL是1至20的整数；
CyL2由下式表示：
Figure BDA0003121673050000234
m’是1或2；
R1和R2各自独立地是H或(C1-C3)烷基；并且
Zs1选自下式中的任一者：
Figure BDA0003121673050000241
其中q是1至5的整数；
[70]如[69]所述的免疫缀合物，其中m’是1，并且R1和R2两者均是H；
[71]如[69]所述的免疫缀合物，其中m’是2，并且R1和R2两者均是Me；
[72]如[69]所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050000251
或其药学上可接受的盐，其中WL是1至10的整数；
[73]如[69]所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050000261
或其药学上可接受的盐。
[74]一种由下式表示的免疫缀合物：
Figure BDA0003121673050000262
或其药学上可接受的盐，其中：
WL是1至10的整数；
EpBA是EpCAM抗体、EpCAM抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM抗体片段或EpCAM可活化抗体包含分别具有SEQ ID NO:13-15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3；
[75]如[74]所述的免疫缀合物，其中所述分离的抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:89的序列的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)；
[76]如[74]所述的免疫缀合物，其中所述分离的抗体包含分别具有SEQ ID NO:103和SEQ ID NO:140的序列的重链和轻链；
[77]如[74]-[76]中任一项所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物包含可活化抗体，所述可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:151-157的氨基酸序列的掩蔽部分；
[78]如[77]所述的免疫缀合物，其中所述掩蔽部分具有SEQ ID NO:155的氨基酸序列；
[79]如[77]或[78]所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物包含可活化抗体，所述可活化抗体还包含SEQ ID NO:168或SEQ ID NO:169的可裂解部分；
[80]一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包含偶联至由以下结构式表示的美登木素生物碱化合物DM21L(也称为LDL-DM)的EpBA：
Figure BDA0003121673050000271
所述偶联经由γ-马来酰亚胺基丁酸N-琥珀酰亚胺基酯(GMBS)或N-(γ-马来酰亚胺基丁氧基)磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-GMBS或sGMBS)接头，其中EpBA是根据[1]-[47]中任一项所述的EpCAM抗体、EpCAM抗体片段或EpCAM可活化抗体；
[81]如[80]所述的免疫缀合物，其中所述GMBS和磺基-GMBS(或sGMBS)接头由下式表示：
Figure BDA0003121673050000272
[82]如[80]或[81]所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050000281
其中：
EpBA通过Lys胺基团连接至所述美登木素生物碱化合物，其中q是1或10的整数；
[83]如[80]-[82]中任一项所述的免疫缀合物，其中所述EpBA包含分别包含SEQID NO:13-15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3；
[84]如[83]所述的免疫缀合物，其中所述EpBA包含分别具有SEQ ID NO:54和SEQID NO:89的序列的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)；
[85]如[84]所述的免疫缀合物，其中所述EpBA包含分别具有SEQ ID NO:103和SEQID NO:140的序列的重链和轻链；
[86]如[83]-[85]中任一项所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物包含可活化抗体，所述可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:151-157的氨基酸序列的掩蔽部分；
[87]如[86]所述的免疫缀合物，其中所述掩蔽部分具有SEQ ID NO:155的氨基酸序列；
[88]如[86]或[87]所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物包含可活化抗体，所述可活化抗体还包含SEQ ID NO:168或SEQ ID NO:169的可裂解部分；
[89]如[58]-[88]中任一项所述的免疫缀合物，其中所述药学上可接受的盐是钠盐或钾盐；
[90]一种药物组合物，所述药物组合物包含如[1]-[47]中任一项所述的抗体、抗原结合片段或可活化抗体和药学上可接受的载体；
[91]一种药物组合物，所述药物组合物包含如[58]-[88]中任一项所述的免疫缀合物和药学上可接受的载体；
[92]一种杀伤癌细胞的方法，所述方法包括使所述癌细胞与有效量的如[1]-[47]中任一项所述的抗体、抗原结合片段或可活化抗体、如[58]-[88]中任一项所述的免疫缀合物或如[90]或[91]所述的药物组合物接触；
[93]如[92]所述的方法，其中所述癌细胞是上皮癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞、胃癌细胞、结肠直肠癌、前列腺癌细胞、卵巢癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞或癌症干细胞；
[94]如[92]所述的方法，其中所述癌细胞是卵巢癌细胞、子宫癌细胞、胃癌细胞、胰腺癌细胞或结肠直肠癌细胞；
[95]一种治疗表达EpCAM的癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如[1]-[47]中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如[58]-[88]中任一项所述的免疫缀合物或如[90]或[91]所述的药物组合物。
[96]根据[95]所述的治疗方法，其中所述癌症是上皮癌；
[97]根据[95]所述的治疗方法，其中所述癌症是乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠癌、食道癌、气管癌、胃癌膀胱癌、子宫癌、直肠癌、小肠癌或其转移；
[98]根据[95]所述的治疗方法，其中所述癌症是卵巢癌、子宫癌、胃癌、胰腺癌、结肠直肠癌或其转移；
[99]如[97]所述的治疗方法，其中所述癌症是肺癌；
[100]如[99]所述的治疗方法，其中所述肺癌是非小细胞肺癌；
[101]如[100]所述的治疗方法，其中所述非小细胞肺癌是非鳞状非小细胞肺癌；
[102]如[95]所述的治疗方法，其中所述癌症是卵巢癌；
[103]如[95]所述的治疗方法，其中所述癌症是三阴性乳腺癌；
[104]如[95]所述的治疗方法，其中所述癌症是结肠直肠癌；
[105]如[95]所述的治疗方法，其中所述癌症是食道癌；
[106]如[95]所述的治疗方法，其中所述癌症是胃癌；
[107]如[95]所述的治疗方法，其中所述癌症是子宫癌；
[108]如[95]所述的治疗方法，其中所述癌症是胰腺癌；
[109]一种EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或其免疫缀合物，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或其免疫缀合物包含(i)重链，所述重链包含与以PTA-125343保藏于
Figure BDA0003121673050000301
的质粒所编码的重链的氨基酸序列相同的氨基酸序列；和(ii)轻链，所述轻链包含与以PTA-125342保藏于
Figure BDA0003121673050000302
的质粒所编码的轻链可变区的氨基酸序列相同的氨基酸序列；
[110]一种EpCAM可活化抗体、EpCAM结合可活化抗体片段或其免疫缀合物，所述EpCAM可活化抗体、EpCAM结合可活化抗体片段或其免疫缀合物包含(i)重链，所述重链包含与以PTA-125343保藏于
Figure BDA0003121673050000303
的质粒所编码的重链的氨基酸序列相同的氨基酸序列；和(ii)轻链，所述轻链包含与以PTA-125344保藏于
Figure BDA0003121673050000304
的质粒所编码的轻链可变区的氨基酸序列相同的氨基酸序列；和/或
[111]一种EpCAM可活化抗体、EpCAM结合可活化抗体片段或其免疫缀合物，所述EpCAM可活化抗体、EpCAM结合可活化抗体片段或其免疫缀合物包含(i)重链，所述重链包含与以PTA-125343保藏于
Figure BDA0003121673050000311
的质粒所编码的重链的氨基酸序列相同的氨基酸序列；和(ii)轻链，所述轻链包含与以PTA-125345保藏于
Figure BDA0003121673050000312
的质粒所编码的轻链可变区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
附图说明
图1A和1B示出鼠EpCAM抗体mEpCAM23与HSC2细胞(图1A)和食蟹猴肾上皮细胞(图1B)的结合曲线。
图2A和2B示出原始muEpCAM-23轻链和重链序列的可变区之间的序列比对及其最接近的人种系匹配。基于比对结果，被选择作为EpCAM-23抗体的VL和VH结构域的受体框架的人种系序列分别是IGKV2D-29*02(图2A)和IGHV1-3*01(图2B)。
图3A-3F示出mEpCAM23的各种人源化抗体的结合曲线。特别地，图3A示出mEpCAM23与HSC2细胞的结合，图3B示出mEpCAM23与食蟹猴原代肾上皮细胞的结合，图3C示出各种人源化EpCAM23抗体与HSC2细胞的结合，并且图3D示出各种人源化EpCAM23抗体与食蟹猴原代肾上皮细胞的结合。图3E示出位点特异性修饰的抗体huEpCAM23Gv4.2-C442与HSC2细胞的结合，并且图3F示出相同的抗体与食蟹猴原代肾上皮细胞的结合。
图4A和4B示出原始鼠EpCAM-23抗体移植型式Gv2.2和移植型式Gv4.2的可变区的序列比对。特别地，图4A示出抗体轻链的可变区的比对，并且图4B示出抗体重链的可变区的比对。
图5A-5N示出huEpCAM23Gv4.2的各种亲和力变体在HSC2细胞和食蟹猴原代肾上皮细胞上的结合曲线。特别地，图5A示出Gv4a.2、Gv4b.2和Gv4c.2与huEpCAM-mFc的结合；图5B示出Gv4a.2、Gv4b.2和Gv4c.2与cynoEpCAM-mFc的结合；图5C示出Gv4.2a、Gv4.2b、Gv4.2c和Gv4.2d与huEpCAM-mFc的结合；图5D示出Gv4.2a、Gv4.2b、Gv4.2c和Gv4.2d与cynoEpCAM-mFc的结合；图5E示出Gv4a.2a、Gv4b.2a和Gv4c.2a与HSC2细胞的结合；图5F示出Gv4a.2a、Gv4b.2a和Gv4c.2a与食蟹猴原代肾上皮细胞的结合；图5G示出Gv4a.2b、Gv4a.2d、Gv4b.2b、Gv4b.2d、Gv4c.2b和Gv4c.2d与HSC2细胞的结合；并且图5H示出Gv4a.2b、Gv4a.2d、Gv4b.2b、Gv4b.2d、Gv4c.2b和Gv4c.2d与食蟹猴原代肾上皮细胞的结合；图5I示出HSC2细胞上Gv4.2H、Gv4.2K、Gv4.2L、Gv4.2O、Gv4.2P、Gv4.2Q、Gv4.2R和Gv4.2S的结合；图5J示出HSC2细胞上1361-D、1361-H、1361-I和1361-L的结合；并且图5K示出HSC2细胞上1565-A、1565-F、1565-G、1565-S、1565-T、1565-V和1565-Y的结合；图5L示出食蟹猴原代肾上皮细胞上Gv4.2H、Gv4.2K、Gv4.2L、Gv4.2O、Gv4.2P、Gv4.2Q、Gv4.2R和Gv4.2S的结合；图5M示出食蟹猴原代肾上皮细胞上1361-D、1361-H、1361-I和1361-L的结合；并且图5N示出食蟹猴原代肾上皮细胞上1565-A、1565-F、1565-G、1565-S、1565-T、1565-V和1565-Y的结合。
图6A和6B示出在HSC2细胞和食蟹猴原代肾上皮细胞上完整的和uPA活化的huEpCAM23Gv4.2可活化抗体与各种掩蔽物的结合曲线。特别地，图6A示出在HSC2细胞上完整的和uPA活化的huEpCAM23与底物3014以及与掩蔽物Ep01-2、Ep02、Ep03、Ep04、Ep05、Ep07和Ep11的结合；并且图6B示出在食蟹猴原代肾上皮细胞上完整的和uPA活化的huEpCAM23与底物3014以及掩蔽物Ep02、Ep03、Ep04、Ep05和Ep07的结合。
图7A和7B示出在HSC2细胞上huEpCAM23的各种uPA处理的可活化抗体-药物缀合物的结合曲线。特别地，图7A示出在HSC2细胞上uPA处理的huEpCAM23Gv4.2-sSPDB-DM4与底物3014以及与掩蔽物Ep01-2、Ep02、Ep03、Ep04、Ep05、Ep07和Ep11的结合，并且图7B示出在HSC2细胞上uPA活化的huEpCAM23Gv4.2-lys-DGN549与底物3014以及与掩蔽物Ep01-2、Ep02、Ep03、Ep04、Ep05、Ep07和Ep11的结合。
图8A-8D示出在HSC2细胞上各种可活化抗体-药物缀合物与底物2014或3014的结合曲线。特别地，图8A示出在HSC2细胞上完整的和uPA活化的huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-sSPDB-DM4的结合，图8B示出在HSC2细胞上完整的和uPA活化的huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-sSPDB-DM4的结合，图8C示出在HSC2细胞上完整的和uPA活化的huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-lys-DGN549的结合，并且图8D示出在HSC2细胞上完整的和uPA活化的huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-GMBS-DM21L以及完整的和uPA活化的huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-GMBS-DM21L的结合。
图9示出在裂解信号肽之后，人EpCAM(SEQ ID NO:1)和小鼠EpCAM(SEQ ID NO:210)的细胞外结构域的比对。
图10A和10B示出人EpCAM(SEQ ID NO:1)、小鼠EpCAM(SEQ ID NO:210)和各种嵌合EpCAM变体(SEQ ID NO:211-214)的细胞外区域的比对。图10A示出氨基酸残基1-160之间的比对，并且图10B示出氨基酸残基161-243之间的比对。
图11示出huEpCAM23Gv4.2与人EpCAM和小鼠EpCAM的细胞外结构域的结合曲线。
图12A-12K示出huEpCAM23Gv4.2的抗体-药物缀合物(ADC)在各种细胞系中的剂量反应曲线。特别地，图12A-12E示出在H1568细胞(图12A)、H292细胞(图12B)、H2110细胞(图12C)、LoVo细胞(图12D)和Detroit562细胞(图12E)中huEpCAM23Gv4.2-sSPDB-DM4的剂量反应曲线。图12F示出在H2110细胞中huEpCAM23Gv4.2-lys-DGN549和huEpCAM23Gv4.2-C442-DGN549的剂量反应曲线。图12G-12K示出在Calu3细胞(图12G)、Detroit562细胞(图12H)、EBC-1细胞(图12I)、H2110细胞(图12J)和H441细胞(图12K)中huEpCAM23Gv4.2-GMBS-DM21L的剂量反应曲线。
图13A-13D示出在各种细胞系中huEpCAM23Gv4.2-sSPDB-DM 4的完整的和uPA活化的可活化抗体-药物缀合物(AADC)的剂量反应曲线。特别地，完整的和uPA活化的huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-sSPDB-DM4以及完整的和uPA活化的huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-sSPDB-DM4的剂量反应曲线在Calu3细胞(图13A)、OV90细胞(图13B)、EBC-1细胞(图13C)和H2110细胞(图13D)中示出。
图14A-14D示出在各种细胞系中huEpCAM23Gv4.2-GMBS-DM21L的完整的和uPA活化的AADC的剂量反应曲线。特别地，完整的和uPA活化的huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-GMBS-DM21L以及完整的和uPA活化的huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-GMBS-DM21L的剂量反应曲线在Calu3细胞(图14A)、Detroit562细胞(图14B)、EBC-1细胞(图14C)和H2110细胞(图14D)中示出。
图15A-15D示出在各种细胞系中huEpCAM23-lys-DGN549的完整的和uPA活化的AADC的剂量反应曲线。特别地，完整的和uPA活化的huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-lys-DGN549的剂量反应曲线在H2110细胞(图15A)、EBC-1细胞(图15B)、Calu3细胞(图15C)和OV90细胞(图15D)中示出。
图16示出在H2110非小细胞肺癌异种移植物模型中huEpCAM23Gv4.2-lys-DGN549的抗肿瘤活性。
图17A-17F示出在H2110非小细胞肺癌异种移植物模型中huEp CAM23Gv4.2的各种AADC的抗肿瘤活性。特别地，图17A示出具有掩蔽物Ep02、Ep01、Ep11和Ep04的huEpCAM23-lys-DGN549的抗肿瘤活性，图17B示出具有掩蔽物Ep03、Ep05、Ep07和Ep04的huEpCAM23-lys-DGN549的抗肿瘤活性，并且图17C示出与不可裂解的缀合物相比，huEpCAM23-Ep05-3014-lys-DGN549和huEpCAM2 3-Ep07-3014-lys-DGN549的抗肿瘤活性。图17D示出与不可裂解的缀合物和与ADC huEpCAM23Gv4.2-sSPDB-DM4相比，huEpCAM2 3Gv4.2-Ep01-02-2014-sSPDB-DM4的抗肿瘤活性，图17E示出与不可裂解的缀合物相比，huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-sSPDB-DM4和hu EpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-sSPDB-DM4的抗肿瘤活性，并且图17F示出与不可裂解的缀合物相比，huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-lys-DG N549和huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-lys-DGN549的抗肿瘤活性。
图18示出在Calu3非小细胞肺癌异种移植物模型中，huEpCAM23Gv4.2-sSPDB-DM4的各种AADC的抗肿瘤活性。
图19示出在H292非小细胞肺癌异种移植物模型中，huEpCAM23Gv4.2-sSPDB-DM4的各种AADC的抗肿瘤活性。
图20示出在携带Detroit 562HNSCC异种移植物的C.B-17SCID小鼠中，Ep05-3014-DM4、Ep05-2014-DM4、Ep05-3014-DM21和Ep05-2014-DM21的抗肿瘤活性。
图21示出在携带NCI-H441 NSCLC异种移植物的C.B-17SCID小鼠中，Ep05-3014-DM21和Ep05-2014-DM21的抗肿瘤活性。
图22示出在携带OV-90EOC异种移植物的C.B-17SCID小鼠中，Ep05-2014-DM21的抗肿瘤活性。
图23示出在携带Calu-3 NSCLC异种移植物的C.B-17SCID小鼠中，Ep05-2014-DM21的抗肿瘤活性。
图24示出在食蟹猴中靶向EpCAM的ADC(huEpCAM23Gv4.2-sSPDB-DM4(Anti-EpCAM-DM4))以及靶向EpCAM的AADC(huEp CAM23Gv4.2-Ep05-2014-sSPDB-DM4(M05-2014-DM4))和huEpCA M23Gv4.2-Ep05-3014-sSPDB-DM4(M05-3014-DM4))的耐受性。
图25A-25E示出施用靶向EpCAM的ADC(huEpCAM23Gv4.2-sSPDB-DM4)或靶向EpCAM的AADC(huEpCAM23Gv4.2-Ep05-201 4-sSPDB-DM4)的食蟹猴的血清化学。特别地，图25A示出A/G比率，图25B示出尿素氮浓度，图25C示出肌酸酐浓度，图25D示出脂肪酶浓度，并且图25E示出淀粉酶浓度。
图26示出接受8mg/kg的靶向EpCAM的ADC(huEpCAM23G v4.2-sSPDB-DM4(Anti-EpCAM-DM4 ADC))或8mg/kg的靶向EpC AM的AADC(huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-sSPDB-DM4(M05-2014-DM4 AADC))或huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-sSPDB-DM4(M05-3014-DM4 AADC))的食蟹猴的药代动力学概况。
图27示出食蟹猴中huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-DM21L(Ep05-2014-DM21L)和huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-DM21L(Ep05-3014-DM21L)的耐受性。
图28A-28E示出施用了12mg/kg的huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-DM21L(Ep05-2014-DM21L)和huEpCAM 23Gv4.2-Ep05-3014-D M21L(Ep05-3014-DM21L)的食蟹猴的血清化学。特别地，图28A示出A/G比率，图28B示出尿素氮浓度，图28C示出肌酸酐浓度，图28D示出脂肪酶浓度，并且图28E示出淀粉酶浓度。
图29示出接受12mg/kg huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-DM21L(Ep05-2014-DM21)的食蟹猴的药代动力学概况。
图30示出适应症特异性组织微阵列中EpCAM表达的扩展分析。
具体实施方式
本公开提供了特异性地结合人EpCAM的抗体和抗原结合抗体片段，包括可活化抗体(EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段的可活化形式)，以及包含所述抗体、抗体片段和可活化抗体的免疫缀合物。已知EpCAM与上皮细胞中的细胞-细胞粘附相关，并且参与细胞信号传导、分化、增殖和迁移。EpCAM的过表达一直牵涉于疾病和病症(如癌症)的发病机制中。例如，EpCAM在多种癌症类型中高度表达，所述癌症类型例如乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、头颈癌、前列腺癌、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌和肾癌以及上皮起源的大多数癌症(和转移)。EpCAM在肿瘤起始细胞/癌症干细胞中也高度表达。所提供的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段、EpCAM可活化抗体和免疫缀合物具有包括治疗此类疾病和癌症的用途。
定义
为促进理解，以下定义多个术语和短语。
除非另有说明，否则如本文所用的术语“上皮细胞粘附分子”或“EpCAM”是指任何天然人EpCAM。所述术语还涵盖EpCAM的天然存在的变体，例如，剪接变体、等位基因变体和同种型。EpCAM多肽可从多种来源分离，如从人或食蟹猴组织或其它生物样品中分离，或通过已知的重组或合成方法制备。EpCAM也被称为CD326、17-1A抗原、HEA125、MK-1、EGP-2、EGP314、EGP40、GA733-2、KSA、TACSTD1、TROP1、KS1/4、M4S1、DIAR5、MIC18、HNPCC8和ESA。EpCAM序列的实例包括但不限于NCBI参考编号NP_002345.2(氨基酸残基24-314对应于成熟EpCAM，氨基酸24-265对应于成熟EpCAM的细胞外区域(SEQ ID NO:1))。成熟EpCAM的细胞外区域可进一步分为三个结构域：D1(SEQ ID NO:1的氨基酸1-36(SEQ ID NO:2))、D2(SEQ IDNO:1的氨基酸43-112(SEQ ID NO:3))和D3(SEQ ID NO:1的氨基酸113-243(SEQ ID NO:4))。
如本文所用，术语“抗体”和“抗原结合抗体片段”等包括包含免疫球蛋白分子的至少一部分(如但不限于重链或轻链的至少一个互补决定区(CDR)或其抗原结合部分)的任何含蛋白质或肽分子。这种抗体任选地进一步影响至少一种EpCAM活性，如但不限于，其中这样的抗体在体外、原位、体内和/或离体调节、降低、增加、拮抗、激动、部分激动、部分拮抗、减轻、缓解、阻断、抑制、消除和/或干扰中干扰至少一种EpCAM活性或结合。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段影响选自以下的至少一种EpCAM介导的活性或功能：配体结合、受体信号传导、膜缔合、细胞迁移、细胞增殖、受体结合活性、RNA、DNA或蛋白质产生和/或合成。
抗体是由两个相同的轻链(LC)和两个相同的重链(HC)组成的异四聚体糖蛋白。通常，每条轻链通过一个共价二硫键连接至一条重链，而二硫键联的数量在不同免疫球蛋白同种型的重链之间变化。每条重链和轻链还具有间隔的链内二硫桥。每条重链在一端具有可变结构域(VH)，之后跟随多个恒定结构域。每个轻链在一端具有可变区(VL)并且在另一端具有恒定结构域；轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对准，并且轻链可变区与重链的可变区对准。任何脊椎动物物种的抗体轻链可基于其恒定结构域的氨基酸序列指定为两种明显不同类型(即κ和λ)中的一者。取决于重链恒定结构域氨基酸序列，免疫球蛋白可分为五个主要类别，即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。IgA和IgG进一步亚分类为同种型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
术语“抗体”也包括片段、指定部分及其变体，包括抗体模拟物或包含模拟抗体或其指定片段或部分的结构和/或功能的抗体的部分，包括单链抗体和抗原(例如EpCAM)结合抗体片段。功能片段包括单独或与其它抗原组合的结合至哺乳动物抗原如EpCAM的抗原结合片段。举例而言，能够结合至抗原或其部分的抗体片段包括但不限于由本公开涵盖的Fab(例如通过木瓜蛋白酶消化获得)、Fab'(例如通过胃蛋白酶消化和部分还原获得)和F(ab')2(例如通过胃蛋白酶消化获得)、facb(例如通过血纤维蛋白溶酶消化获得)、pFc'(例如通过胃蛋白酶或血纤维蛋白溶酶消化获得)、Fd(例如通过胃蛋白酶消化、部分还原和再聚集获得)、Fv或scFv(例如通过分子生物学技术获得)片段(参见例如，Colligan,Immunology)。
此类片段可通过如本领域中已知和/或如本文公开的酶促裂解、合成或重组技术产生。也可使用其中一个或多个终止密码子已被引入在天然终止位点上游的抗体基因以多种截短形式产生抗体。举例而言，编码F(ab')2重链部分的组合基因可被设计来包含编码重链的CH1结构域和/或铰链区的DNA序列。抗体的各种部分可通过常规技术以化学方式接合在一起，或可使用遗传工程技术制备成邻接蛋白质。
术语“抗体片段”是指完整抗体的一部分，通常完整抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、单链(scFv)和Fv片段、双抗体、线性抗体、单链抗体分子、单Fab臂“单臂”抗体以及由抗体片段形成的多特异性抗体等。
抗体片段包括含有包含免疫球蛋白分子的至少一部分的分子的任何蛋白质或肽，所述至少一部分如但不限于可并入本文提供的EpCAM抗体中的重链或轻链的至少一个互补决定区(CDR)或其配体结合部分、重链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、框架区或其任何部分、或抗原或抗原受体或结合蛋白的至少一部分。
术语“可变”是指抗体中抗体的可变区的某些部分在序列方面差异非常大，并且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性并非在抗体的可变区中均匀地分布。在轻链可变区和重链可变区中，可变性集中在称为互补决定区(CDR)或高变区的三个区段中。可变区的更高度保守的部分被称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变区各自包含四个FR区，主要采用由三个CDR连接的β-折叠构型，所述CDR形成连接β-折叠结构的环，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。每个链中的CDR通过FR区紧密靠近地保持在一起，与来自另一个链的CDR促成了抗体的抗原结合位点的形成。虽然恒定结构域并不直接参与抗体与抗原结合，但表现出各种效应功能，诸如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。存在至少两种用于确定CDR的技术：(1)基于跨物种序列可变性的方法(即，Kabat等人,Sequencesof Proteins of Immunological Interest,(第5版,1991,National Institutes ofHealth,Bethesda Md.))；和(2)基于抗原-抗体复合物的晶体学研究的方法(Al-lazikani等人,J.Molec.Biol.273:927-948(1997))。此外，在本领域中有时使用这两种方法的组合来确定CDR。
当提及可变区中的残基(大约轻链的残基1-107和重链的残基1-113)时，通常使用Kabat编号系统(例如，Kabat等人,Sequences of Immunological Interest.第5版PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。
如Kabat中的氨基酸位置编号是指在Kabat等人,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.(1991)中用于抗体编译的重链可变区或轻链可变区的编号系统。使用这种编号系统，实际线性氨基酸序列可含有对应于可变区的FR或CDR的缩短或插入所述FR或CDR中的几个或另外氨基酸。例如，重链可变结构区可包含在H2的残基52之后的单个氨基酸插入(根据Kabat的残基52a)以及在重链FR残基82之后的插入残基(例如，根据Kabat的残基82a、82b以及82c等)。可通过在抗体序列的同源区处与“标准”Kabat编号序列比对来确定给定抗体的残基的Kabat编号。相反，Chothia是指结构环的位置(Chothia等人,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。当使用Kabat编号惯例编号时，Chothia CDR-H1环的末端根据环的长度而在H32与H34之间变化(这是由于Kabat编号方案将插入放置于H35A和H35B处；如果35A或35B不存在，则环结束于32处；如果仅35A存在，则环结束于33处；如果35A和35B均存在，则环结束于34处)。AbM高变区代表Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷，并且通过Oxford Molecular的AbM抗体建模软件来使用。
术语“EpCAM抗体”、“EpCAM抗体”、“特异性地结合至EpCAM的抗体”、“EpCAM结合抗体片段”、“特异性地结合EpCAM的抗体片段”是指能够以足够的亲和力结合EpCAM，以使得抗体在靶向EpCAM中可用作诊断剂和/或治疗剂的抗体。抗EpCAM抗体与不相关的非EpCAM蛋白的结合程度小于抗体与EpCAM的结合的约10％，如例如通过放射性免疫测定(RIA)所测量的。
表1.
Figure BDA0003121673050000411
术语“表位”是指能够特异性地结合至抗体的抗原决定簇。表位通常由分子的化学活性表面基团(诸如氨基酸或糖侧链)组成，并且通常具有特定三维结构特征，以及特定电荷特征。当所述抗原是多肽时，表位可以由连续氨基酸和通过蛋白质的三级折叠而并置的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位通常在蛋白质变性时保留，而通过三级折叠形成的表位通常在蛋白质变性时丧失。表位通常包括至少3个、并且更通常至少5个或8-10个呈独特空间构象的氨基酸。
“阻断”抗体是抑制或降低其结合的抗原诸如EpCAM的生物活性的抗体。优选的阻断抗体基本上或完全地抑制抗原的生物活性。希望地，生物活性被降低10％、20％、30％、50％、70％、80％、90％、95％、或甚至100％。在一个实施方案中，阻断抗体使EpCAM相关的酪氨酸激酶活性降低10％、20％、30％、50％、70％、80％、90％、95％或甚至100％。
“分离的”抗体是从其天然环境中分离和/或回收的抗体。其天然环境的污染组分是会干扰抗体的诊断或治疗用途的物质，并且可包括酶、激素和其它蛋白质或非蛋白质溶质。在优选的方面中，抗体将被纯化至(1)如通过例如Lowry方法所测定的大于95重量％的抗体，并且最优选大于99重量％，(2)至足以获得通过使用旋转杯测序仪测定的N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或(3)至使用考马斯蓝染色或优选银染色在还原或非还原条件下通过SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)测定的均质。分离的抗体包括重组细胞内的原位EpCAM抗体，因为抗体的天然环境的至少一种组分将不存在。然而，通常，通过至少一个纯化步骤制备分离的抗体。
术语“人抗体”是指由人产生的抗体或具有对应于由人使用本领域中已知的任何技术所产生的抗体的氨基酸序列的抗体。人抗体的此定义包括完整或全长抗体、可活化抗体、抗原(例如，人或食蟹猴EpCAM)结合抗体片段、和/或包含至少一个人重链和/或轻链多肽的抗体，诸如例如包含鼠轻链和人重链多肽的抗体。
如本文所用，术语“嵌合抗体”是指其中免疫球蛋白分子的序列来源于两种或更多种物种的抗体。通常，轻链和重链两者的可变区对应于源自一种哺乳动物物种(例如小鼠、大鼠、兔等)的具有所需特异性、亲和力和能力的抗体的可变区，而恒定区与源自另一物种(通常为人)的抗体中的序列同源，以避免在所述物种中引发免疫应答。
如本文所用，术语“人源化抗体”是指作为含有最少非人(例如，鼠)序列的特异性免疫球蛋白链、嵌合免疫球蛋白或抗原结合抗体片段的非人(例如，鼠)抗体形式。通常，人源化抗体是其中来自互补决定区(CDR)的残基被来自非人物种(例如，小鼠、大鼠、兔、仓鼠)的CDR的具有所需特异性、亲和力和能力的残基置换的人免疫球蛋白(Jones等人,Nature321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-327(1988)；Verhoeyen等人,Science 239:1534-1536(1988))。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被来自非人物种的抗体中的具有所需特异性、亲和力和能力的对应残基置换。人源化抗体可通过取代Fv框架区中和/或置换的非人残基内的额外残基来进一步修饰以便改善并优化抗体特异性、亲和性和/或能力。一般来说，抗体将基本上包含所有的至少一个并且通常两个或三个可变区，所述可变区含有所有或基本上所有对应于非人免疫球蛋白的CDR区，而所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些。抗体还可包含免疫球蛋白恒定区或结构域的至少一部分(Fc)，通常为人免疫球蛋白的一部分。用于产生人源化抗体的方法的实例描述于美国专利号5,225,539中。
抗体“效应子功能”是指可归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物活性，并且随抗体同种型变化。抗体效应子功能的实例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；以及抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)。
“人效应细胞”是表达一种或多种FcR并且执行效应子功能的白细胞。在某些方面中，所述细胞至少表达FcyRIII并执行ADCC或ADCP效应子功能。介导ADCC或ADCP的人白细胞的实例包括外周血单核细胞(PBMC)、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞以及嗜中性粒细胞。可从天然来源，例如，从血液分离所述效应细胞。
如本文所用的术语“Fc区”包括包含抗体的除第一恒定区免疫球蛋白结构域之外的恒定区的多肽。因此，Fc是指IgA、IgD和IgG的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域，和IgE和IgM的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域，以及在这些结构域的N末端的柔性铰链。对于IgA和IgM，Fc可包括J链。对于IgG，Fc包含免疫球蛋白结构域Cγ2和Cγ3(Cγ2和Cγ3)以及Cγ1(Cγ1)与Cγ2(Cγ2)之间的铰链。虽然Fc区的边界可变化，但人IgG重链Fc区通常被定义为包含C226或P230至其羧基末端的残基，其中编号是根据Kabat等人,(1991,NIHPublication 91-3242,National Technical Information Service,Springfield,Va.)中的EU索引。“如Kabat中列出的EU索引”是指如Kabat等人，同上中所述的人IgG1 EU抗体的残基编号。Fc可指处于分离的这个区域或在抗体、抗体片段或Fc融合蛋白的背景中的这个区域。Fc变体蛋白可以是抗体、Fc融合体或包含Fc区的任何蛋白质或蛋白质结构域。特别优选的是包含变体Fc区的蛋白质，其是Fc的非天然存在的变体。已经在许多Fc位置上观察到多态性，包括但不限于Kabat270、272、312、315、356和358，并且因此所呈现的序列与现有技术中的序列之间可能存在细微差异，并且本领域技术人员将基于本教导内容而理解。
如本文所用，术语“缀合物”、“免疫缀合物”、“ADC”或“AADC”是指与细胞结合剂(即，EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)连接的化合物或其衍生物，并由以下通式定义：C-L-A，其中C＝化合物，L＝接头，并且A＝EpCAM结合剂(EpBA)(例如，EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，如本文所公开)。在一些实施方案中，通式：D-L-A，其中D＝药物，L＝接头并且A＝细胞结合剂(例如，EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)也可以相同的方式使用。
“接头”是能够将化合物(通常是药物，如美登木素生物碱或吲哚啉并苯并二氮杂
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化合物)以稳定的、共价的方式连接至细胞结合剂如抗EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段片段的任何化学部分。在化合物或抗体保持活性的条件下，接头可以易感于或大致上抵抗酸诱导的裂解、光诱导的裂解、肽酶诱导的裂解、酯酶诱导的裂解以及二硫键裂解。适合的接头是本领域熟知的并且包括，例如，二硫基、硫醚基、酸不稳定性基团、光不稳定性基团、肽酶不稳定性基团以及酯酶不稳定性基团。接头还包括如本文所公开的和本领域已知的肽接头和带电荷的接头及其亲水形式。
除非另有说明，否则如本文所用，“异常细胞增殖”是指独立于正常调控机制(例如，接触抑制丧失)的细胞生长。这包括例如以下的异常生长：(1)通过表达突变型酪氨酸激酶或受体酪氨酸激酶的过表达而增殖的肿瘤细胞(肿瘤)；(2)发生异常酪氨酸激酶活化的其它增生性疾病的良性和恶性细胞；(3)因受体酪氨酸激酶而增生的任何肿瘤；(4)因异常丝氨酸/苏氨酸激酶活化而增生的任何肿瘤；(5)发生异常丝氨酸/苏氨酸激酶活化的其它增生性疾病的良性和恶性细胞，以及(6)其它增生性疾病的良性和恶性细胞。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物的特征通常在于细胞生长不受调控的生理疾患。“肿瘤”包括一种或更多种癌细胞。癌症的实例包括但不限于癌、母细胞瘤、肉瘤、白血病或淋巴恶性肿瘤。如本文所定义的术语“癌症”或“癌性”包括“癌前”疾患，如果不治疗，其可演变成癌性疾患。在特定实施方案中，癌症是上皮癌。上皮癌的实例包括乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、头颈癌、前列腺癌、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌和肾癌。可用所提供的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段、EpCAM可活化抗体或免疫缀合物诊断或治疗的另外癌症包括食道癌、气管癌、脑癌、癌、胆管细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、胃癌、膀胱癌、子宫癌、睾丸癌、直肠癌、皮肤癌(黑素瘤)、小肠癌、胆囊癌、胆管癌、唾液腺癌。在一些实施方案中，癌症是卵巢癌、子宫癌、胃癌、胰腺癌或结肠直肠癌。
术语“癌细胞”、“肿瘤细胞”以及语法等效物是指来源于肿瘤或癌前病变的总细胞群体，包括非致瘤性细胞(其包括肿瘤细胞群体块)和致瘤性干细胞(癌症干细胞)两者。
如本文所用，术语“细胞毒性剂”是指抑制或预防一种或多种细胞功能和/或引起细胞死亡的物质。
如本文所用，“治疗”是指试图改变所治疗个体或细胞的自然进程的临床干预，并且可为了预防而进行或在临床病理学过程中进行。理想的治疗效果包括：防止疾病的发生或复发、缓解症状、消除疾病的任何直接或间接的病理学后果、防止转移、降低疾病进展的速率、改善或减轻疾病状态以及缓解或改善预后。在一些实施方案中，本文提供的方法和组合物可用于尝试延缓疾病或病症的发展。
术语诸如“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“治疗(to treat)”或“减轻(alleviating)”或“减轻(to alleviate)”是指(1)治愈、减缓、减轻所诊断的病理性疾患或病症的症状和/或阻止其进展的治疗性措施，以及(2)防止和/或减慢所靶向的病理性疾患或病症的发展的预防性或防治性措施两者。因此，需要治疗的受试者包括：已经患有病症的那些受试者；有倾向患病症的那些受试者；以及要预防病症的那些受试者。在某些实施方案中，如果患者显示出一种或多种下列情况，那么所述受试者的癌症被成功地根据本文提供的方法“治疗”：癌细胞的数量减少或完全不存在；肿瘤尺寸减小；抑制或不存在癌细胞浸润到周边器官，包括例如癌症扩散到软组织和骨头中；抑制或不存在肿瘤转移；抑制或不存在肿瘤生长；与特定癌症相关的一种或多种症状减轻；发病率和死亡率降低；生活质量改善；肿瘤的致瘤性、致瘤性发生频率或致瘤能力降低；肿瘤中癌症干细胞的数量或频率降低；致瘤性细胞分化成非致瘤性状态；或这些效果的一些组合。
如本文所公开的抗体的“有效量”是足以执行明确说明的目的的量。“治疗有效量”是指在必要剂量和时段下有效达成所需治疗结果的量。治疗剂(例如，缀合物或免疫缀合物)的“治疗有效量”可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及抗体在个体中引发所需应答的能力的因素而变化。治疗有效量还是其中治疗剂的任何毒性或有害作用被治疗有益作用超过的量。
“治疗剂”涵盖生物学剂，如抗体、肽、蛋白质、酶、化学治疗剂或缀合物或免疫缀合物。
术语“受试者”、“个体”、“动物”、“患者”和“哺乳动物”是指需要诊断、预后或治疗的任何受试者，特别是哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括但不限于人、非人灵长类动物、家养动物、农场动物、啮齿类动物等，它们将成为特定治疗的接受者。
如本文可互换使用的术语“多核苷酸”或“核酸”是指具有任何长度的核苷酸的聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基和/或它们的类似物，或可通过DNA或RNA聚合酶并入到聚合物中的任何底物。多核苷酸可包含经修饰的核苷酸，诸如甲基化的核苷酸和它们的类似物。如果存在，可在聚合物的组装之前或之后赋予对核苷酸结构的修饰。核苷酸的序列可被非核苷酸组分间断。多核苷酸可在聚合之后进行进一步修饰，如通过与标记组分缀合。其它类型的修饰包括，例如，“加帽(cap)”、用类似物取代一种或多种天然存在的核苷酸、核苷酸间修饰，例如像，具有不带电荷的键联(例如，膦酸甲酯、磷酸三酯、磷酰胺酸酯(phosphoamidate)、氨基甲酸酯(carbamate)，等等)和具有带电荷的键联(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯，等等)的那些、含有侧悬部分(例如像，蛋白质(例如，核酸酶、毒素、抗体、信号肽、多聚-L-赖氨酸，等等))的那些、具有嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素)的那些、含有螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼、氧化金属，等等)的那些、含有烷化剂的那些、具有经修饰的键联(例如，α端基异构核酸，等等)的那些、以及一种或多种多核苷酸的未修饰形式。此外，通常存在于糖类中的任何羟基可以被(例如)膦酸酯基、磷酸酯基置换、被标准保护基保护或被活化以提供与另外核苷酸的另外键联，或可以与固体载体缀合。5'和3'末端OH可以被磷酸化或被胺或具有1至20个碳原子的有机封端基团部分而取代。其它羟基也可衍生化成标准保护基。多核苷酸还可含有本领域众所周知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括，例如，2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基、2'-氟-或2'-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α-端基异构糖、差向异构糖(如阿拉伯糖、木糖或来苏糖)、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、无环类似物以及无碱基核苷类似物(如甲基核苷)。一个或多个磷酸二酯键联可被替代连接基团置换。这些替代连接基团包括，但不限于，其中磷酸酯被P(O)S(“硫代酸酯(thioate)”)、P(S)S(“二硫代酸酯(dithioate)”)、(O)NR2(“酰胺化物(amidate)”)、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2(“甲缩醛(formacetal)”)置换的实施方案，其中每个R或R'独立地是H或任选含有醚(--O--)键联的取代的或未取代的烷基(1-20个C)、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基。多核苷酸中并非所有的键联都需要相同。先前的描述适用于本文所提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
术语“载体”意指能够在宿主细胞中递送并任选地表达一种或多种目标基因或序列的构建体。载体的实例包括，但不限于，病毒载体、裸DNA或RNA表达载体、质粒、粘粒或噬菌体载体、与阳离子凝缩剂相关的DNA或RNA表达载体、包封在脂质体中的DNA或RNA表达载体、以及某些真核细胞(如生产细胞)。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换用于指代任何长度的氨基酸聚合物。所述聚合物可以是线性或支化的，它可包含经修饰的氨基酸，并且它可被非氨基酸间断。所述术语还涵盖已经天然地或通过干预修饰的氨基酸聚合物；例如二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操纵或修饰，诸如与标记组分缀合。还包括在定义内的是例如，含有氨基酸(包括例如，非天然氨基酸等)的一种或多种类似物以及本领域中已知的其它修饰的多肽。
如本领域中已知的，术语“同一”或“同一性”百分比是通过比较两个多核苷酸或两个多肽的序列所确定的两种多核苷酸或两种多肽之间的关系的量度。关于序列的同一性或相似性在本文定义为在比对序列并且引入空位(必要时)以实现最大序列同一性百分比之后，候选序列中与EpCAM抗体残基相同(即相同的残基)或相似(即基于共同侧链性质来自相同组的氨基酸残基，参见下文)的氨基酸残基的百分比。N末端、C末端或内部延伸、缺失或插入到可变区外的抗体序列中都不应被认为影响序列同一性或相似性。一般来说，对待比较的两个序列进行比对以给出序列之间的最大相关性。检查两个序列的比对，并且确定给出两个序列之间的精确氨基酸或核苷酸对应性的位置的数量，除以比对的总长度并且乘以100，得到同一性数字％。可在待比较的序列的整个长度上确定这种同一性数字％，其特别适合于具有相同或非常相似长度并且高度同源的序列；或者可在较短的限定长度上，其更适合于长度不相等或同源性水平较低的序列。同样，可基于相同和相似残基两者的存在以类似的方式确定相似性百分比。
可使用序列比较软件或算法或通过目视检查来测量同一性百分比。可用于获得氨基酸或核苷酸序列的比对的不同算法和软件是本领域已知的。序列比对算法的一个这样的非限制性实例是在Karlin等人,Proc.Natl.Acad.Sci.87:2264-2268(1990)中进行描述的、在Karlin等人,Proc.Natl.Acad.Sci.90:5873-5877(1993)中进行修改的并且并入至NBLAST和XBLAST程序(Altschul等人,Nucleic Acids Res.,25:3389-3402(1991))中的算法。在某些实施方案中，可如Altschul等人,Nucleic Acids Res.25:3389-3402(1997)中所述而使用空位BLAST。BLAST-2、WU-BLAST-2(Altschul等人,Meth.Enzym.266:460-480(1996))、ALIGN、ALIGN-2(Genentech,South San Francisco,California)或Megalign
Figure BDA0003121673050000491
是可用于比对序列的另外可公开获得的软件程序。在某些实施方案中，两个核苷酸序列之间的同一性百分比使用GCG软件中的GAP程序来确定(例如，使用NWSgapdna.CMP矩阵和40、50、60、70或90的空位权重以及1、2、3、4、5或6的长度权重)。在某些替代实施方案中，并入Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.(48):444-453(1970))的算法的GCG软件包中的GAP程序可用于确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比(例如，使用Blossum 62矩阵抑或PAM250矩阵和16、14、12、10、8、6或4的空位权重以及1、2、3、4、5的长度权重)。或者，在某些实施方案中，使用Myers和Miller(CABIOS 4:11-17(1989))来确定核苷酸或氨基酸序列之间的同一性百分比。例如，可使用ALIGN程序(2.0版)和使用具有残基表、空位长度罚分12和空位罚分4的PAM120来确定同一性百分比。可由本领域技术人员确定用于通过特定比对软件达到最大比对的适当参数。在某些实施方案中，使用比对软件的默认参数。在某些实施方案中，第一氨基酸序列与第二氨基酸序列的同一性百分比“X”计算为100×(Y/Z)，其中Y是在所述第一序列和第二序列的比对中评分为相同匹配的氨基酸残基的数量(如通过目视检查或特定序列比对程序来比对)，并且Z是所述第二序列中的残基总数。如果第一序列的长度比第二序列长，那么所述第一序列与第二序列的同一性百分比将比所述第二序列与所述第一序列的同一性百分比长。
作为非限制性实例，在某些实施方案中，可使用Bestfit程序(Wisconsin序列分析包,Unix版本8,Genetics Computer Group,University Research Park,575ScienceDrive,Madison,WI 53711)来确定任何特定多核苷酸是否与参考序列具有一定百分比的序列同一性(例如，至少80％同一、至少85％同一、至少90％同一并且在一些实施方案中至少95％、96％、97％、98％或99％同一)。Bestfit使用Smith和Waterman,Advances in AppliedMathematics 2:482-489(1981)的局部同源性算法，以找到两个序列之间具有同源性的最佳区段。当使用Bestfit或任何其它序列比对程序确定特定序列例如是否与如本文所提供的参考序列95％同一时，设定参数以使得在参考核苷酸序列的全长上计算同一性百分比并且允许多达参考序列中的核苷酸总数的5％的同源性空位。
“保守性氨基酸取代”是其中一个氨基酸残基被另一个具有类似侧链的氨基酸残基置换。在本领域中已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族，包括例如碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天门冬氨酸、谷氨酸)，不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)以及芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。例如，用苯丙氨酸取代酪氨酸是保守性取代。在一些实施方案中，本文提供的多肽和抗体的序列中的保守性取代不会消除含有所述氨基酸序列的多肽或抗体与所述多肽或抗体所结合的抗原的结合。鉴定不会消除抗原结合的核苷酸和氨基酸保守性取代的方法是本领域熟知的(参见例如，Brummell等人,Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi等人,Protein Eng.12(10):879-884(1999)；和Burks等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:412-417(1997))。
如本文所用的“烷基”是指一至二十个碳原子的饱和直链或支链单价烃基。烷基的实例包括但不限于，甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-甲基-1-丙基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基、2-甲基-2-丙基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基)、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3二甲基-2-丁基、1-庚基、1-辛基等。优选地，烷基具有1至10个碳原子。更优选地，烷基具有1至4个碳原子。
基团中碳原子的数量在本文中可由前缀“Cx-xx”指定，其中x和xx是整数。例如，“C1-4烷基”是具有1至4个碳原子的烷基。
术语“化合物”或“细胞毒性化合物”或“细胞毒性剂”可互换使用。它们意图包括已在本文中公开了结构或式或其任何衍生物的化合物，或者已经以引用的方式并入的结构或式或其任何衍生物的化合物。所述术语还包括本文公开的所有式的化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂合物、代谢物和盐(例如药学上可接受的盐)。所述术语还包括任何前述的任何溶剂合物、水合物和多晶型物。在某些实施方案中，本文提供的“立体异构体”、“几何异构体”、“互变异构体”、“溶剂合物”、“代谢物”、“盐”、“缀合物”、“缀合物盐”、“溶剂化”、“水合物”或“多晶型物”的具体叙述不应解释为在其它公开的实施方案中对这些形式的预期省略，其中在不列举这些其它形式的情况下使用术语“化合物”。
术语“亚胺反应性试剂”是指能够与亚胺基团反应的试剂。亚胺反应性试剂的实例包括但不限于亚硫酸盐(H2SO3、H2SO2或HSO3-、SO32-或HSO2-与阳离子形成的盐)，偏亚硫酸氢盐(H2S2O5或与S2O52-阳离子形成的盐)，单、二、三和四硫代磷酸酯(PO3SH3、PO2S2H3、POS3H3、PS4H3或PO3S3-、PO2S23-、POS33-或PS43-与阳离子形成的盐)，硫代磷酸酯((RiO)2PS(ORi)、RiSH、RiSOH、RiSO2H、RiSO3H)，各种胺(羟胺(例如NH2OH)，肼(例如，NH2NH2)、NH2O-Ri、Ri'NH-Ri、NH2-Ri)、NH2-CO-NH2、NH2-C(＝S)-NH2、硫代硫酸盐(H2S2O3或与阳离子形成的S2O32-的盐)、连二亚硫酸盐(H2S2O4或与阳离子形成的S2O42-的盐)、二硫代磷酸酯(P(＝S)(ORk)(SH)(OH)或其与阳离子形成的盐)，异羟肟酸(RkC(＝O)NHOH或与阳离子形成的盐)，酰肼(RkCONHNH2)，甲醛次硫酸盐(HOCH2SO2H或HOCH2SO2-与阳离子形成的盐，如HOCH2SO2-Na+)，糖化核苷酸(如GDP-甘露糖)，氟达拉滨或其混合物，其中Ri和Ri’各自独立地是具有1至10个碳原子的直链或支链烷基，并且被选自N(Rj)2、-CO2H、SO3H和PO3H的至少一个取代基取代；Ri和Ri’可进一步任选地被本文公开的烷基的取代基取代；Rj是具有1至6个碳原子的直链或支链烷基；并且Rk是具有1至10个碳原子的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，芳基、杂环基或杂芳基(优选地，Rk是具有1-4个碳原子的直链或支链烷基；更优选地，Rk是甲基、乙基或丙基)。优选地，阳离子是单价阳离子，如Na+或K+。优选地，亚胺反应性试剂选自亚硫酸盐、羟胺、尿素和肼。更优选地，亚胺反应性试剂是NaHSO3或KHSO3。
术语“阳离子”是指具有正电荷的离子。阳离子可以是单价的(例如，Na+，K+，NH4+等)、二价的(例如，Ca2+、Mg2+等)或多价的(例如，Al3+等)。优选地，阳离子是单价的。
如本文所用的短语“药学上可接受的盐”是指本文提供的化合物的药学上可接受的有机盐或无机盐。示例性盐包括但不限于：硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸性柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆根素盐(gentisinate)、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐(methanesulfonate)“甲磺酸盐(mesylate)”、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、扑酸盐(即，1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))盐、碱金属(例如钠和钾)盐、碱土金属(例如镁)盐以及铵盐。药学上可接受的盐可涉及包括另一分子诸如乙酸盐离子、琥珀酸盐离子或其它抗衡离子。抗衡离子可以是使母体化合物上的电荷稳定的任何有机或无机部分。此外，药学上可接受的盐可在其结构中具有多于一个带电原子。其中多个带电原子是药学上可接受的盐的一部分的情况可具有多个抗衡离子。因此，药学上可接受的盐可具有一个或多个带电原子和/或一个或多个抗衡离子。
如果本文所提供的化合物是碱，则所需的药学上可接受的盐可通过本领域中可利用的任何合适方法制备，例如，用以下处理游离碱：无机酸，诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等；或有机酸，诸如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖苷酸(诸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α羟基酸(诸如柠檬酸或酒石酸)、氨基酸(诸如天冬氨酸或谷氨酸)、芳香族酸(诸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(诸如对苯磺酸或乙磺酸)等。
如果本文所提供的化合物是酸，则所需的药学上可接受的盐可通过任何合适的方法制备，例如用诸如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氧化物或碱土金属氧化物等的无机或有机碱处理游离酸。合适盐的说明性实例包括但不限于：有机盐，其衍生自氨基酸(诸如甘氨酸和精氨酸)、氨、伯胺、仲胺和叔胺，和环胺(诸如哌啶、吗啉和哌嗪)；和无机盐，其衍生自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂。
如本文所用，术语“溶剂合物”是指还包括通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量量的溶剂如水、异丙醇、丙酮、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺二氯甲烷、2丙醇等的化合物。通过将至少一摩尔当量的羟基溶剂如甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇或水添加到化合物中以产生亚胺部分的溶剂化或水合，可容易地制备化合物的溶剂合物或水合物。
“代谢物”或“分解代谢物”是通过指定化合物、其衍生物或其缀合物或其盐在体内的代谢或分解代谢而产生的产物。化合物、其衍生物或其缀合物的代谢物可使用本领域已知的常规技术来鉴定，并且其活性可使用诸如本文公开的那些测试来确定。此类产物可例如由所施用化合物的氧化、羟基化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺、酯化、脱酯化、酶促裂解等产生。因此，本公开包括本文公开的所公开的EpCAM组合物的化合物、其衍生物或其缀合物的代谢物，包括通过以下方法产生的化合物、其衍生物或其缀合物，所述方法包括使所公开的EpCAM化合物、其衍生物或其缀合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间段。
短语“药学上可接受的”表示物质或组合物必须在化学上和/或毒理学上与构成制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物是相容的。
术语“保护基团”或“保护部分”是指通常用于阻断或保护特定官能团、同时使化合物、其衍生物或其缀合物上的其它官能团反应的取代基。举例来说，“氨基保护基团”是连接于氨基的阻断或保护化合物中的氨基官能团的取代基。此类基团是本领域众所周知的(参见，例如，P.Wuts和T.Greene,2007,Protective Groups in Organic Synthesis,第7章,J.Wiley&Sons,NJ)，并且由氨基甲酸酯如氨基甲酸甲酯和氨基甲酸乙酯、FMOC、取代的氨基甲酸乙酯、通过1,6-β消除而裂解的氨基甲酸酯(也称为“自我牺牲”)、脲、酰胺、肽、烷基和芳基衍生物例示。合适的氨基保护基团包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(CBZ)和9-芴基亚甲基氧羰基(Fmoc)。对于保护基团及其使用的一般性描述，参见P.G.M.Wuts和T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,2007。
术语“氨基酸”是指天然存在的氨基酸或非天然存在的氨基酸。在一个实施方案中，氨基酸由NH2-C(Raa’Raa)-C(＝O)OH表示，其中Raa和Raa'各自独立地是H，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基、芳基、杂芳基或杂环基，或者Raa和N末端氮原子可一起形成杂环(例如，如脯氨酸中)。术语“氨基酸残基”是指当从胺和/或氨基酸的羧基端除去一个氢原子时的相应残基，如-NH-C(Raa’Raa)-C(＝O)O-。
术语“肽”是指通过肽(酰胺)键连接的氨基酸单体的短链。在一些实施方案中，肽含有2至20个氨基酸残基。在其它实施方案中，肽含有2至10个氨基酸残基。在其它实施方案中，肽含有2至5个氨基酸残基。如本文所用，当肽是由氨基酸的特定序列表示的本文公开的细胞毒性剂或接头的一部分时，所述肽可在两个方向上连接至细胞毒性剂或接头的剩余部分。例如，二肽X1-X2包括X1-X2和X2-X1。类似地，三肽X1-X2-X3包括X1-X2-X3和X3-X2-X1，并且四肽X1-X2-X3-X4包括X1-X2-X3-X4和X4-X2-X3-X1。X1、X2、X3和X4表示氨基酸残基。
术语“反应性酯基团”是指可容易地与胺基团反应以形成酰胺键的酯基团的基团。示例性的反应性酯基团包括但不限于N-羟基琥珀酰亚胺酯、N-羟基邻苯二甲酰亚胺酯、N-羟基磺基琥珀酰亚胺酯、对硝基苯基酯、二硝基苯基酯、五氟苯基酯及其衍生物，其中所述衍生物促进酰胺键形成。在某些实施方案中，反应性酯基团是N-羟基琥珀酰亚胺酯或N-羟基磺基琥珀酰亚胺酯。
术语“胺反应性基团”是指可与胺基团反应以形成共价键的基团。示例性的胺反应性基团包括但不限于反应性酯基团、酰基卤、磺酰卤、亚氨酸酯或反应性硫酯基团。在某些实施方案中，胺反应性基团是反应性酯基团。在一个实施方案中，胺反应性基团是N-羟基琥珀酰亚胺酯或N-羟基磺基琥珀酰亚胺酯。
术语“硫醇反应性基团”是指可与硫醇(-SH)基团反应以形成共价键的基团。示例性的硫醇反应性基团包括但不限于马来酰亚胺、卤代乙酰基、卤代乙酰胺、乙烯基砜、乙烯基磺酰胺或乙烯基吡啶。在一个实施方案中，硫醇反应性基团是马来酰亚胺。
如本公开和权利要求书中所使用，除非上下文另外明确指明，否则单数形式“一个/种(a/an)”和“所述(the)”包括复数形式。
当在本文中使用时术语“和/或”应被视为在有或没有另一者的情况下，对两种或更多种指定特征或组分中的每一者的具体公开内容。因此，如本文中诸如“A和/或B”的短语中所用的术语“和/或”意图包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)和“B”(单独)。类似地，在短语中使用的术语“和/或”诸如“A、B和/或C”意图涵盖以下方面中的每一者：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
无论在什么情况下在本文用语言“包含”公开实施方案时，还提供了关于“由……组成”和/或“主要由……组成”描述的其它类似实施方案。
EpCAM抗体和EpCAM结合抗体片段
提供了特异性地结合人EpCAM的蛋白质。在一些实施方案中，所述蛋白质在本文中被称为“EpCAM结合剂”或EpBA。
在另外的实施方案中，EpCAM结合剂是EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体。在一些实施方案中，EpBA是全长EpCAM抗体(即，特异性地结合EpCAM的全长抗体)。在一些实施方案中，EpCAM抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，EpCAM抗体是重组抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)或其EpCAM结合抗体片段。在一些实施方案中，EpCAM抗体特异性地结合人EpCAM。在其它实施方案中，EpCAM抗体特异性地结合人EpCAM和食蟹猴EpCAM。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段是小鼠、其它啮齿类动物、嵌合、人源化或完全人单克隆抗体。
在一些实施方案中，EpCAM抗体是EpCAM结合抗体片段。在另外的实施方案中，EpCAM结合抗体片段是：Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、双抗体或单链抗体分子。在其它方面，EpCAM抗体是EpCAM结合抗体片段，是Fd、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、胞内抗体、IgGΔCH2、微型抗体、F(ab')3、scAb、dAb、四抗体、三抗体、双抗体、单结构域重链抗体、单结构域轻链抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2、scFv-Fc或bis-scFv。
本文提供的EpCAM抗体和EpCAM结合抗体片段任选地以广泛范围的亲和力(KD)结合EpCAM(例如人EpCAM和/或鼠EpCAM)。在一个优选的实施方案中，所述抗体以高亲和力结合人EpCAM。例如，人或人工程化的或人源化的或表面重构的mAb可结合人抗原，其KD等于或小于约10-7M，如但不限于0.1-9.9(或其之间的任何范围或值)x 10-7、10-8、10-9、10-10、10-11或10-12，或其中的任何范围或值，如通过流式细胞仪基础测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、表面等离子体共振(SPR)或
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方法(使用标准操作程序)所确定。在一些实施方案中，EpCAM抗体以约10-9M或更低，更具体地约10-9至10-10M的Kd结合。
抗体或抗体片段对EpCAM的亲和力或亲合力可使用标准操作程序，使用本领域已知的任何合适的方法通过实验方式确定，所述方法例如流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)或放射免疫测定(RIA)或动力学(例如，BIACORETM分析)。可常规采用直接结合测定以及竞争性结合测定形式。(参见例如，Berzofsky等人,"Antibody-AntigenInteractions,"In Fundamental Immunology,Paul,W.E.,编,Raven Press:New York,N.Y.(1984)；Kuby,Janis Immunology,W.H.Freeman and Company:New York,N.Y.(1992)；以及本文所公开的方法。如果在不同条件(例如盐浓度、pH、温度)下测量，则特定抗体-EpCAM相互作用的测量的亲和力可变化。因此，优选使用标准化的抗体和EpCAM的溶液和如本领域中所知的标准化的缓冲液以及诸如本文进一步公开的缓冲液来进行亲和力和其它EpCAM结合参数(例如，KD或Kd、kon、koff)的测量。
在一个实施方案中，使用流式细胞术对在表面上表达EpCAM抗原的细胞进行结合测定。例如，在100μL FACS缓冲液(补充有2％正常山羊血清的RPMI-1640培养基)中，每个样品使用1x105个细胞，将此类EpCAM阳性细胞与不同浓度的EpCAM抗体一起孵育。然后，将细胞沉淀，洗涤并与100μL的FITC缀合的山羊抗小鼠IgG抗体(如可从JacksonImmunoResearch获得)一起在FACS缓冲液中孵育1小时。再次沉淀细胞，用FACS缓冲液洗涤并重悬于200μL含1％甲醛的PBS中。例如，使用带有HTS多孔采样器的FACSCaliburTM流式细胞仪采集样品，并使用
Figure BDA0003121673050000581
Pro(全部来自BD Biosciences,San Diego,US)进行分析。对于每个样品，输出FL1的平均荧光强度(MFI)，并以半对数图相对于抗体浓度作图以生成结合曲线。将S形剂量反应曲线拟合为结合曲线，并使用带有默认参数的程序如GraphPadPrism v4(GraphPad software,San Diego,CA)来计算EC50值。EC50值可用作每种抗体的表观解离常数“Kd”或“KD”的量度。
在某些实施方案中，对EpCAM抗体进行修饰以改变其对EpCAM和/或EpCAM抗原片段的结合亲和力。结合性质可通过多种体外测定方法并采用包括例如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)或动力学(例如BIACORETM分析)在内的本领域已知的标准操作程序来确定。
在一个实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段特异性地结合人或食蟹猴EpCAM和/或EpCAM抗原片段，其解离常数或KD或Kd(koff/kon)小于10-5M、或小于10-6M、或小于10-7M、或小于10-8M、或小于10-9M、或小于10-10M、或小于10-11M、或小于10-12M、或小于10- 13M。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段特异性地结合人或食蟹猴EpCAM和/或EpCAM抗原片段，其KD为1.0x10-9M或更低、2.0x10-9M或更低、3.0x10-9M或更低、4.0x10-9M或更低、5.0x10-9M或更低、6.0x10-9M或更低、7.0x10-9M或更低、8.0x10-9M或更低、或9.0x10-9M或更低。在某些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段以3.0x10-9M或更低的KD结合至人和食蟹猴EpCAM和/或EpCAM抗原片段。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段以约0.4x10-9的KD结合至人EpCAM。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段以约0.8x10-9的KD结合至人EpCAM。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段以约0.8x10-9的KD结合至食蟹猴EpCAM。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段以约2.2x10-9的KD结合至食蟹猴EpCAM。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段以约2.8x10-9的KD结合至食蟹猴EpCAM。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段特异性地结合至人EpCAM的细胞外区域(SEQ ID NO:1)内的表位。人EpCAM的细胞外区域可进一步分为三个不同的结构域：D1(SEQ ID NO:2)、D2(SEQ ID NO:3)和D3(SEQ ID NO:4)。在某些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段特异性地结合至人EpCAM的第一细胞外结构域(D1)内的表位。
在一个实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含：包含X1YX3X4H的VH-CDR1，其中X1选自N和S，X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W，并且X4选自I和M(SEQ ID NO:5)；包含WX2X3PGX6VYIQYX12X13KFX17G的VH-CDR2，其中X2选自I和F，X3选自Y和N，X6选自N和D，X12选自N和S，X13选自E和Q，并且X17选自K和Q(SEQ ID NO:7)；以及包含X1GX3X4FAY的VH-CDR3，其中X1选自D和E，X3选自P、A、S、Y、F、G、T和V，并且X4选自Y和W(SEQ ID NO:8)。
在另外的实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含：包含RSSX4SLLHSX10GX12TYLX16的轻链CDR1(VL-CDR1)，其中X4选自R和K，X10选自N和D，X12选自F和I，并且X16选自Y和S(SEQ ID NO:10)；包含QTSNLAS(SEQ ID NO:40)的轻链VL-CDR2；以及包含X1QX3LELPX8T的VL-CDR3，其中X1选自A、L和Q，X3选自S、G、Y和N，并且X8选自N和W(SEQ ID NO:11)。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含：重链CDR1(VH-CDR1)，其包含SEQ ID NO:13的序列；重链CDR2(VH-CDR2)，其包含SEQ ID NO:14的序列；重链CDR3(VH-CDR3)，其包含SEQ ID NO:15的序列；轻链CDR1(VL-CDR1)，其包含SEQ ID NO:42的序列；轻链CDR2(VL-CDR2)，其包含SEQ ID NO:40的序列；以及轻链CDR3(VL-CDR3)，其包含SEQID NO:41的序列。
在一些实施方案中，VH-CDR1包含序列NYX3IH，其中X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W(SEQ ID NO:6)。在一些实施方案中，VH-CDR3包含序列DGPX4FAY，其中X4选自Y和W(SEQ IDNO:9)。在一些实施方案中，VL-CDR3包含序列AQX3LELPNT，其中X3选自S、G、Y和N(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含：重链CDR1(VH-CDR1)，其包含SEQ ID NO:13的序列；重链CDR2(VH-CDR2)，其包含SEQ ID NO:14的序列；重链CDR3(VH-CDR3)，其包含SEQ ID NO:15的序列；轻链CDR1(VL-CDR1)，其包含SEQ ID NO:42的序列；轻链CDR2(VL-CDR2)，其包含SEQ ID NO:40的序列；以及轻链CDR3(VL-CDR3)，其包含SEQ ID NO:41的序列。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含一组互补决定区(CDR)：重链可变区(VH)-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3，轻链可变区(VL)CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中重链CDR在表2中公开。
表2.EpCAM抗体的示例性重链CDR序列。
Figure BDA0003121673050000611
Figure BDA0003121673050000621
Figure BDA0003121673050000631
在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含表2中单行的重链CDR。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含选自SEQ IDNO:13和16-25的VH-CDR1；选自SEQ ID NO:14和26-29的VH-CDR2；和选自SEQ ID NO:15和30-38的VH-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含SEQ ID NO:13的VH-CDR1、SEQ ID NO:14的VH-CDR2；和SEQ ID NO:15的VH-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含SEQ ID NO:13的VH-CDR1、SEQ ID NO:26的VH-CDR2；和SEQ ID NO:15的VH-CDR3。
在一个实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含：包含NYYIH(SEQ IDNO:13)的VH-CDR1，或其包含1、2、3或4个保守氨基酸取代的变体；包含WIYPGNVYIQYNEKFKG(SEQ ID NO:14)的VH-CDR2，或其包含1、2、3或4个氨基保守酸取代的变体；和包含DGPWFAY(SEQ ID NO:15)的重链CDR3，或其包含1、2、3或4个保守氨基酸取代的变体。
在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含SEQ ID NO:22的VH-CDR1、SEQ ID NO:14的VH-CDR2；和SEQ IDNO:15的VH-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含SEQ ID NO:13的VH-CDR1、SEQ ID NO:14的VH-CDR2；和SEQ ID NO:33的VH-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含SEQ ID NO:23的VH-CDR1、SEQ ID NO:14的VH-CDR2；和SEQ ID NO:15的VH-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含SEQ ID NO:25的VH-CDR1、SEQ IDNO:14的VH-CDR2；和SEQ ID NO:15的VH-CDR3。
在一个实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含：包含NYHIH(SEQ IDNO:22)的VH-CDR1，或其包含1、2、3或4个保守氨基酸取代的变体；包含WIYPGNVYIQYNEKFKG(SEQ ID NO:14)的VH-CDR2，或其包含1、2、3或4个氨基保守酸取代的变体；和包含DGPWFAY(SEQ ID NO:15)的重链CDR3，或其包含1、2、3或4个保守氨基酸取代的变体。在一个实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含：包含NYYIH(SEQ ID NO:13)的VH-CDR1，或其包含1、2、3或4个保守氨基酸取代的变体；包含WIYPGNVYIQYNEKFKG(SEQ ID NO:14)的VH-CDR2，或其包含1、2、3或4个氨基酸保守取代的变体；和包含DGYWFAY(SEQ ID NO:33)的重链CDR3，或其包含1、2、3或4个保守氨基酸取代的变体。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含一组互补决定区(CDR)：重链可变区(VH)-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3，轻链可变区(VL)CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中轻链CDR在表3中公开。
表3.EpCAM抗体的示例性轻链CDR序列。
Figure BDA0003121673050000651
Figure BDA0003121673050000661
在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含表3中的单行的轻链CDR。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含选自SEQ IDNO:39和42-45的VL-CDR1；SEQ ID NO:40的VL-CDR2；和选自SEQ ID NO:41和46-51的VL-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含SEQ ID NO:42的VL-CDR1；SEQ ID NO:40的VL-CDR2；和SEQ IDNO:41的VL-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含SEQ ID NO:39的VL-CDR1；SEQ ID NO:40的VL-CDR2；和SEQ ID NO:41的VL-CDR3。
在一个实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含：包含RSSRSLLHSDGFTYLY(SEQ ID NO:42)的VL-CDR1，或其包含1、2、3或4个保守氨基酸取代的变体；包含QTSNLAS(SEQ ID NO:40)的VL-CDR2，或其包含1、2、3或4个保守氨基酸取代的变体；和包含AQNLELPNT(SEQ ID NO:41)的VL-CDR3，或其包含1、2、3或4个保守氨基酸取代的变体。在一个实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含：包含RSSKSLLHSDGFTYLY(SEQID NO:39)的VL-CDR1，或其包含1、2、3或4个保守氨基酸取代的变体；包含QTSNLAS(SEQ IDNO:40)的VL-CDR2，或其包含1、2、3或4个保守氨基酸取代的变体；和包含AQNLELPNT(SEQ IDNO:41)的VL-CDR3，或其包含1、2、3或4个保守氨基酸取代的变体。
在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含：选自SEQ ID NO:13和16-25的VH-CDR1；选自SEQ ID NO:14和26-29的VH-CDR2；选自SEQ ID NO:15和30-38的VH-CDR3；选自SEQ ID NO:39和42-45的VL-CDR1；SEQ ID NO:40的VL-CDR2；以及选自SEQ ID NO:41和46-51的VL-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:13-15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:13-15和39-41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:13、26、15和39-41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:13、26、15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。
在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:22、14、15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:13、14、33、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:23、14、15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:25、14、15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含表4中公开的重链可变区(VH)序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含与表4中公开的VH序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的VH序列。
表4.EpCAM抗体的示例性重链可变序列。
Figure BDA0003121673050000691
Figure BDA0003121673050000701
Figure BDA0003121673050000711
Figure BDA0003121673050000721
Figure BDA0003121673050000731
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含VH序列，所述VH序列与选自SEQ ID NO:53-84的参考VH序列相比具有总计1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、少于15个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入。在一些实施方案中，插入、取代、缺失和/或插入是在参考序列的一个或多个框架区中。在一些实施方案中，取代是保守的。在其它实施方案中，取代是非保守的。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有选自SEQ ID NO:53-84的序列的VH。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有选自SEQID NO:53-56的序列的VH。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:54的序列的VH。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含与选自SEQ ID NO:53-56的序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的VH序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含与SEQ ID NO:54的序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％同一的VH序列。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有选自SEQ ID NO:75-77和84的序列的VH。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQID NO:75的序列的VH。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQID NO:77的序列的VH。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含与选自SEQID NO:75-77和84的序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的VH序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含与SEQ ID NO:75的序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％同一的VH序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含与SEQ ID NO:77的序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％同一的VH序列。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含表5中公开的轻链可变区(VL)序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含与表5中公开的VL序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的VL序列。
表5.EpCAM抗体的示例性轻链可变序列。
Figure BDA0003121673050000741
Figure BDA0003121673050000751
Figure BDA0003121673050000761
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含VL序列，所述VL序列与选自SEQ ID NO:86-99的参考VH序列相比具有总计1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、少于15个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入。在一些实施方案中，插入、取代、缺失和/或插入是在参考序列的一个或多个框架区中。在一些实施方案中，取代是保守的。在其它实施方案中，取代是非保守的。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有选自SEQ ID NO:86-99的序列的VL。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有选自SEQID NO:86-89的序列的VL。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:89的序列的VL。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:87的序列的VL。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含与选自SEQ ID NO:86-89的序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的VH序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含与SEQ ID NO:89的序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％同一的VL序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含与SEQ ID NO:87的序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％同一的VL序列。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含VH，所述VH包含选自SEQID NO:53-84的序列；以及VL，所述VL包含选自SEQ ID NO:86-89的序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:54的序列；以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:89的序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:54的序列；以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:87的序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:55的序列；以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:87的序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:56的序列；以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:88的序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:55的序列；以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:89的序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:56的序列；以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:89的序列。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含VH，所述VH包含SEQ IDNO:75的序列；以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:89的序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:77的序列；以及VL，所述VL包含SEQ IDNO:89的序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含VH，所述VH包含SEQID NO:76的序列；以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:89的序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:84的序列；以及VL，所述VL包含SEQID NO:89的序列。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段与分别包含表4和表5中公开的VH和VL序列的抗体竞争结合至人EpCAM。
在一个实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段与包含选自以下的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的抗体竞争结合至人EpCAM：
(a)SEQ ID NO:54的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:89的轻链可变区(VL)；
(b)SEQ ID NO:54的VH和SEQ ID NO:87的VL；
(c)SEQ ID NO:75的VH和SEQ ID NO:89的VL；以及
(d)SEQ ID NO:77的VH和SEQ ID NO:89的VL。
如果EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段与人EpCAM结合至其在一定程度上阻断参考分子与人EpCAM的结合的程度，则EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段被说成与参考分子“竞争”结合至EpCAM结合。蛋白质竞争结合至EpCAM并且因此干扰、阻断或“交叉阻断”彼此与EpCAM结合的能力可通过本领域已知的任何标准竞争性结合测定，包括例如竞争ELISA测定、表面等离子体共振(SPR；
Figure BDA0003121673050000781
Biosensor,Piscataway,N.J.)或根据Scatchard等人(Ann.N.Y.Acad.Sci.51:660-672(1949))描述的方法来确定。抗体可被说成将参考EpCAM抗体与人EpCAM的结合竞争性地抑制至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段还包含重链恒定区或其片段。在一些方面，所述抗体或抗体片段包含选自由以下组成的组的重链免疫球蛋白恒定区：(a)人IgA恒定区或其片段；(b)人IgD恒定区或其片段；(c)人IgE恒定结构域或其片段；(d)人IgG1恒定区或其片段；(e)人IgG2恒定区或其片段；(f)人IgG3恒定区或其片段；(g)人IgG4恒定区或其片段；以及(h)人IgM恒定区或其片段。在某些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含重链恒定区或其片段，例如人IgG恒定区或其片段。在其它实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有或已经突变为具有改变的效应子功能和/或半衰期的重链免疫球蛋白恒定结构域。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含表6中公开的重链序列。
表6.EpCAM抗体的示例性重链全长序列。
Figure BDA0003121673050000791
Figure BDA0003121673050000801
Figure BDA0003121673050000811
Figure BDA0003121673050000821
Figure BDA0003121673050000831
Figure BDA0003121673050000841
Figure BDA0003121673050000851
Figure BDA0003121673050000861
Figure BDA0003121673050000871
Figure BDA0003121673050000881
Figure BDA0003121673050000891
Figure BDA0003121673050000901
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含选自SEQ ID NO:102-134的重链(HC)序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含选自SEQ IDNO:102-106的重链(HC)序列。在具体实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含SEQID NO:103的HC序列。在替代实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含选自SEQ IDNO:125-127和134的HC序列。在具体实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含SEQID NO:125的HC序列。在具体实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含SEQ ID NO:127的HC序列。
在另外的方面，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含轻链免疫球蛋白恒定区。在另一方面，所述抗体包含人Igκ恒定区或人Igλ恒定区。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含表7中公开的轻链序列。
表7.EpCAM抗体的示例性轻链全长序列。
Figure BDA0003121673050000911
Figure BDA0003121673050000921
Figure BDA0003121673050000931
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含选自SEQ ID NO:137-150的轻链(LC)序列。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含选自SEQ IDNO:137-140的轻链(LC)序列。在具体实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含SEQID NO:140的LC序列。在另一个实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含SEQ IDNO:138的LC序列。
在另外的实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有选自SEQ ID NO:102-134的序列的HC和具有选自SEQ ID NO:137-150的序列的LC。在另外的实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:103的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC。在另外的实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ IDNO:103的序列的HC和具有SEQ ID NO:138的序列的LC。在另外的实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:105的序列的HC和具有SEQ ID NO:138的序列的LC。在另外的实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:106的序列的HC和具有SEQ ID NO:139的序列的LC。在另外的实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:105的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC。在另外的实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:106的序列的HC和具有SEQID NO:140的序列的LC。在一些实施方案中，EpCAM抗体或结合EpCAM的抗体片段包含具有SEQ ID NO:125的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC。在另外的实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:127的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC。在另外的实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:126的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC。在另外的实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:134的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC。
在一些实施方案中，EpCAM抗体包含改变的(例如，突变的或工程化的)Fc区。例如，在一些方面，已改变Fc区以减少或增强抗体的效应子功能，改变抗体的血清半衰期或其它功能特性。在某些情况下，例如在其作用机制涉及阻断或拮抗作用但不杀伤携带靶抗原的细胞的抗体的情况下，期望减少或消除效应子功能。当针对不希望的细胞，如其中FcγR以低水平表达的肿瘤细胞和外来细胞，例如具有低水平FcγRIIB的肿瘤特异性B细胞(例如非霍奇金淋巴瘤、CLL和伯基特氏淋巴瘤)时，通常希望增加效应子功能。具有这种赋予或改变的效应子功能活性的本发明的免疫缀合物可用于治疗和/或预防需要增强的效应子功能活性功效的疾病、病症或感染。在一些方面，Fc区是选自IgM、IgA、IgG、IgE的同种型或其它同种型。
尽管EpCAM抗体和EpCAM结合抗体片段的Fc区可能具有结合至一种或多种Fc受体(例如FcγR)的能力，但在某些实施方案中，所述抗体或抗体片段包含具有改变的与FcγRIA(CD64)、FcγRIIA(CD32A)、FcγRIIB(CD32B)、FcγRIIIA(CD16a)或FcγRIIIB(CD16b)的结合(相对于野生型Fc区所表现出的结合)，例如将具有增强的与活化受体的结合和/或将具有显著降低的与一种或多种抑制性受体的结合或没有与一种或多种抑制性受体结合的能力。因此，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段的Fc区可包含完整Fc区的一些或全部CH2结构域和/或一些或全部CH3结构域，或者可包含变体CH2和/或变体CH3序列(其可包括例如相对于完整Fc区的CH2或CH3结构域的一个或多个插入和/或一个或多个缺失)。此类Fc区可包含非Fc多肽部分，或者可包含非天然完整Fc区的部分，或者可包含CH2和/或CH3结构域的非天然存在的取向(例如两个CH2结构域或两个CH3结构域，或在N末端至C末端方向上，连接到CH2结构域的CH3结构域等)。
,被鉴定为改变效应子功能的Fc区修饰是本领域已知的，包括增加与活化受体(例如FcγRIIA(CD16A))的结合并减少与抑制性受体(例如FcγRIIB(CD32B))的结合的修饰(参见，例如Stavenhagen,等人,Cancer Res.57(18):8882-8890(2007))。表8列出增加与活化受体的结合和/或减少与抑制性受体的结合的示例性修饰的示例性单、双、三重、四重和五重取代(编号是如Kabat中的EU索引的编号，并且取代是相对于SEQ ID NO:304的氨基酸序列)。
Figure BDA0003121673050000961
与CD32B的结合减少和/或与CD16A的结合增加的人IgG1 Fc区的示例性变体含有F243L、R292P、Y300L、V305I或P396L取代，其中编号是如Kabat中的EU索引的编号。这些氨基酸取代可以任何组合存在于人IgG1 Fc区中。在一个实施方案中，变体人IgG1 Fc区含有F243L、R292P和Y300L取代。在另一个实施方案中，变体人IgG1 Fc区含有F243L、R292P、Y300L、V305I和P396L取代。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区含有降低效应子功能的修饰(参见例如，Idusogie等人,J.Immunol.166:2571-2575(2001)；Sazinsky等人,PNAS USA 105:20167-20172(2008)；Davis等人,J.Rheumatol.34:2204-2210(2007)；Bolt等人,Eur.J.Immunol.23:403-411(1993)；Alegre等人,Transplantation 57:1537-1543(1994)；Xu等人,Cell Immunol.200:16-26(2000)；Cole等人,Transplantation 68:563-571(1999)；Hutchins等人,PNAS USA92:11980-11984(1995)；Reddy等人,J.Immunol.164:1925-1933(2000)；WO97/11971和WO07/106585；美国申请公布2007/0148167A1；McEarchern等人,Blood 109:1185-1192(2007)；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；以及Kumagai等人,J.Clin.Pharmacol.47:1489-1497(2007)，所述文献各自的内容以引用的方式整体并入本文)。
在一些实施方案中，优选的是，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段的Fc区表现出与选自由以下组成的组的效应子受体的结合降低(或基本上不结合)：FcγRIA(CD64)、FcγRIIA(CD32A)(同种异型R131和H131)、FcγRIIB(CD32B)、FcγRIIIA(CD16a)(同种异型V158和F158)和FcγRIIIB(CD16b)(同种异型FcγIIIb-NA1和FcγIIIb-NA2)；相对于野生型IgGFc区(SEQ ID NO:304)所表现出的结合。在一些实施方案中，与包含相应免疫球蛋白的野生型Fc区的相应抗体或抗体结合片段的结合亲和力相比，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段Fc区变体效应子受体结合亲和力已降低至1/10或更小、1/50或更小或1/100或更小。
在一个具体的实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含IgG Fc区，所述IgG Fc区表现出降低的效应子功能(例如，降低的ADCC)并且在选自由以下组成的组的一个或多个位置处包含修饰：233、234、235、236、237、238、239、265、266、267、269、270、271、295、296、297、298、300、324、325、327、328、329、331和332，其中氨基酸位置编号是根据如Kabat中列出的EU索引。在一个实施方案中，EpCAM抗体的CH2-CH3结构域包含以下取代中的任意1、2、3或4个：L234A、L235A、D265A、N297Q、N297A和N297G，其中编号是如Kabat中的EU索引的编号。在另一个实施方案中，CH2-CH3结构域含有N297Q取代、N297A取代或L234A和L235A取代，因为这些突变消除了FcR结合。或者，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含天然存在的Fc区的CH2-CH3结构域，所述结构域固有地表现出与FcγRIIIA(CD16a)的结合降低(或基本上不结合)和/或效应子功能降低(相对于野生型IgG1 Fc区(SEQ ID NO:304)所表现出的结合和效应子功能。在一个具体实施方案中，EpCAM抗体的Fc恒定区包含IgG2 Fc区(SEQ IDNO:305)或IgG4 Fc区(SEQ ID NO:306)。由于N297A、N297G、N297Q、L234A、L235A和D265A取代消除效应子功能，因此在需要效应子功能的情况下，将优选不采用这些取代。
具有减少的或消除的效应子功能的含Fc区的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段的CH2和CH3结构域的优选IgG1序列包含取代L234A/L235A(下划线显示)(SEQ ID NO:307)：
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSRDELTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKS LSLSPG
具有减少的或消除的效应子功能的含Fc区的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段的CH2和CH3结构域的优选IgG1序列包含取代N297A(下划线显示)(SEQ ID NO:308)：
APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQYASTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSRDELTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKS LSLSPG
具有减少的或消除的效应子功能的含Fc区的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段的CH2和CH3结构域的优选IgG1序列包含取代N297Q(下划线显示)(SEQ ID NO:309)：
APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQYQSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSRDELTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKS LSLSPG
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含对应于以下的一种或多种修饰：IgG1-C220S、C226S、C229S、P238S；IgG1-C226S、C229S；IgG1-C226S、C229S、E233P、L234V、L235A；IgG1-L234A、L235A；IgG1-L234F、L235E、P331S；IgG1-L234F、L235E、P331S；IgG1-H268Q、A330S、P331S；IgG1-G236R、L328R；IgG1-L235G、G236R、IgG1-N297A；IgG1-N325A、L328R；IgG1-N325L、L328R；IgG1-K326W、E333S；IgG2-V234A、G237A；IgG2-E333S；IgG2H268Q、V309L、A330S、A331S；IgG4-S228P、L236E；IgG4-F234A、L235A；IgG4-F234A、G237A、E318A；IgG4-L235A、G237A、E318A；IgG4-L236E；IgG2-EU序列118-260；以及IgG4-EU序列261-447；其中位置编号是根据如Kabat中的EU索引。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有降低的CDC活性的重链免疫球蛋白恒定结构域。在特定方面，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含IgG1重链恒定区，所述IgG1重链恒定区含有降低CDC活性的突变(参见例如，WO 1997/11971和WO2007/106585；美国申请公布2007/0148167A1；McEarchern等人,Blood 109:1185-1192(2007)；Hayden-Ledbetter等人,Clin.Cancer 15:2739-2746(2009)；Lazar等人,PNAS USA103:4005-4010(2006)；Bruckheimer等人,Neoplasia 11:509-517(2009)；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；以及Sazinsky等人,PNAS USA 105:20167-20172(2008)；所述文献各自的内容以引用的方式整体并入本文)。降低CDC的重链恒定结构域序列修饰的实例包括对应于以下的一种或多种修饰：IgG1-C226S、C229S、E233P、L234V、L235A；IgG1-C226S、P230S；IgG1-L234F、L235E、P331S；IgG1-S239D、A330L、I332E；IgG2 EU序列118-260；IgG4-EU序列261-447；以及根据EU索引的IgG2-H268Q、V309L、A330S、A331S
在一些实施方案中，所提供的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含重链免疫球蛋白恒定结构域，所述重链免疫球蛋白恒定结构域含有一种或多种延长半衰期的氨基酸修饰(例如，取代)。能够增加含Fc区的分子的半衰期的许多突变是本领域已知的，并且被涵盖为本文提供的EpCAM抗体和EpCAM结合抗体片段的组分。参见例如，美国专利号6,277,375；7,083,784；7,217,797和8,088,376；美国公布号2002/0147311；和2007/0148164；和PCT公布号WO 1998/23289；WO 2009/058492；以及WO 2010/033279，所述专利各自的内容以引用的方式整体并入本文。
可通过提高Fc区对FcRn的结合亲和力而延长包含Fc区的蛋白质的血清半衰期。如本文使用的术语“半衰期”意指分子的药代动力学性质，它是分子在它们的施用之后的平均存活时间的量度。半衰期可表示为从受试者(例如，人患者或其它哺乳动物)的身体或其特定区室(例如，如在血清中(即循环半衰期)或在其它组织中测量的)消除五十百分比(50％)已知量的分子所需要的时间。一般来说，半衰期的增加导致循环中所施用分子的平均停留时间(MRT)的增加。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段在选自由以下组成的组的一个或多个位置处包含延长半衰期的氨基酸取代：238、250、252、254、256、257、256、265、272、286、288、303、305、307、308、309、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424、428、433、434、435和436，其中氨基酸位置编号是根据EU索引。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段在位置251-257、285-290、308-314、385-389和428-436处含有氨基酸残基的一个或多个氨基酸取代，其中氨基酸位置编号是根据EU索引。在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含以下中的一个或一个：用Tyr、Phe、Trp或Thr取代Kabat位置252处的氨基酸；用Thr取代Kabat位置254处的氨基酸；用Ser、Arg、Gln、Glu、Asp或Thr取代Kabat位置256处的氨基酸；用Leu取代Kabat位置257处的氨基酸；用Pro取代Kabat位置309处的氨基酸；用Ser取代Kabat位置311处的氨基酸；用Thr、Leu、Phe或Ser取代Kabat位置428处的氨基酸；用Arg、Ser、Iso、Pro或Gln取代Kabat位置433处的氨基酸；或用Trp、Met、Ser、His、Phe或Tyr取代Kabat位置434处的氨基酸。更具体地，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段结构域可含有相对于野生型人IgG恒定结构域的氨基酸取代，包括用Tyr取代Kabat位置252处的氨基酸，用Thr取代Kabat位置254处的氨基酸，以及用Glu取代Kabat位置256处的氨基酸。
在一些实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含选自以下的至少一个取代：T250Q、M252Y、S254T、T256E、K288D、T307Q、V308P、A378V、M428L、N434A、N434S、N434H、N434Y、H435K和Y436I，其中编号是如Kabat中的EU索引的编号。在其它实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含选自以下的取代：(a)M252Y、S254T和T256E；(b)M252Y和S254T；(c)M252Y和T256E；(d)T250Q和M428L；(e)T307Q和N434A；(f)A378V和N434A；(g)N434A和Y436I；(h)V308P和N434A；以及(i)K288D和H435K。
在一个优选的实施方案中，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段含有变体IgG Fc区，所述变体IgG Fc区包含以下取代中的任意1、2或3个：M252Y、S254T和T256E。本公开进一步提供了具有变体Fc区的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含：(a)一种或多种改变效应子功能和/或FcγR的突变；和(b)一种或多种延长血清半衰期的突变。
EpCAM可活化抗体
在另外的实施方案中，本公开提供了EpCAM可活化抗体(例如，可活化EpCAM抗体和可活化EpCAM结合抗体片段)。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含与掩蔽部分(MM)偶联的特异性地结合EpCAM(例如，人EpCAM)的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，以使得所述MM的偶联降低EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段结合EpCAM的能力。在一些实施方案中，所述MM经由包含蛋白酶的底物的序列偶联，所述蛋白酶例如在患病组织中有活性的蛋白酶和/或与EpCAM共定位在受试者的治疗部位的蛋白酶。EpCAM可活化抗体优选在循环中稳定，在治疗和/或诊断的预期部位活化，但在正常例如健康组织或未靶向治疗和/或诊断的其它组织中不稳定，并且在活化时表现出与相应的未修饰抗体至少相当的与EpCAM的结合。还提供了包含EpCAM可活化抗体的免疫缀合物，编码所述EpCAM可活化抗体的核酸或核酸组，以及包含所述核酸的载体和宿主细胞。还提供了包含所述可活化抗体、免疫缀合物、核酸、载体和宿主细胞的药物组合物。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体或抗体片段还包含
(a)与抗体或抗体片段偶联的可裂解部分，其中所述可裂解部分是充当蛋白酶的底物的多肽；以及
(b)与所述抗体或抗体片段偶联的掩蔽部分，其中当所述可活化抗体处于未裂解状态时，所述掩蔽部分抑制所述抗体或抗体片段与EpCAM的结合，
其中处于所述未裂解状态的可活化抗体从N末端至C末端具有如下结构排列：(掩蔽部分)-(可裂解部分)-(抗体或抗体片段)或(抗体或抗体片段)-(可裂解部分)-(掩蔽部分)。
一种EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含：
(a)EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有选自下组的成员的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3：
(i)分别SEQ ID NO:13-15、42、40和41；
(ii)分别SEQ ID NO:13-15和39-41；
(iii)分别SEQ ID NO:13、26、15和39-41；以及
(iv)分别SEQ ID NO:13、24、15、42、40和41；
(b)与所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段偶联的掩蔽部分，其中当所述可活化抗体处于未裂解状态时，所述掩蔽部分抑制所述抗体或抗体片段与EpCAM的结合；以及
(c)与所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段偶联的可裂解部分，其中所述可裂解部分是充当蛋白酶的底物的多肽；
其中处于所述未裂解状态的可活化抗体从N末端至C末端具有如下结构排列：(掩蔽部分)-(可裂解部分)-(抗体或抗体片段)或(抗体或抗体片段)-(可裂解部分)-(掩蔽部分)。
处于活化状态的EpCAM可活化抗体结合人EpCAM，并且包括(i)与人EpCAM特异性结合的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段(Ab)(例如，如本文所公开)；(ii)当EpCAM可活化抗体处于未裂解状态时抑制EpCAM可活化抗体与EpCAM的结合的掩蔽部分(MM)；以及(c)与所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段偶联的可裂解部分(CM)，其中所述CM是充当蛋白酶的底物的多肽。在一些实施方案中，处于未裂解状态的EpCAM可活化抗体从N末端至C末端具有如下结构排列：MM-CM-Ab或Ab-CM-MM。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体在MM与CM之间包含连接肽。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体在CM与Ab之间包含连接肽。
在一些实施方案中，处于未裂解状态的EpCAM可活化抗体以小于或等于1nM、小于或等于5nM、小于或等于10nM、小于或等于15nM、小于或等于20nM、小于或等于25nM、小于或等于50nM、小于或等于100nM、小于或等于150nM、小于或等于250nM、小于或等于500nM、小于或等于750nM、小于或等于1000nM以及122./或小于或等于2000nM的解离常数特异性地结合至哺乳动物EpCAM。
在一些实施方案中，处于未裂解状态的EpCAM可活化抗体以大于或等于1nM、大于或等于5nM、大于或等于10nM、大于或等于15nM、大于或等于20nM、大于或等于25nM、大于或等于50nM、大于或等于100nM、大于或等于150nM、大于或等于250nM、大于或等于500nM、大于或等于750nM、大于或等于1000nM以及122./或大于或等于2000nM的解离常数特异性地结合至哺乳动物EpCAM(例如，人EpCAM或食蟹猴EpCAM)。
在一些实施方案中，处于未裂解状态的EpCAM可活化抗体以在1nM至2000nM、1nM至1000nM、1nM至750nM、1nM至500nM、1nM至250nM、1nM至150nM、1nM至100nM、1nM至50nM、1nM至25nM、1nM至15nM、1nM至10nM、1nM至5nM、5nM至2000nM、5nM至1000nM、5nM至750nM、5nM至500nM、5nM至250nM、5nM至150nM、5nM至100nM、5nM至50nM、5nM至25nM、5nM至15nM、5nM至10nM、10nM至2000nM、10nM至1000nM、10nM至750nM、10nM至500nM、10nM至250nM、10nM至150nM、10nM至100nM、10nM至50nM、10nM至25nM、10nM至15nM、15nM至2000nM、15nM至1000nM、15nM至750nM、15nM至500nM、15nM至250nM、15nM至150nM、15nM至100nM、15nM至50nM、15nM至25nM、25nM至2000nM、25nM至1000nM、25nM至750nM、25nM至500nM、25nM至250nM、25nM至150nM、25nM至100nM、25nM至50nM、50nM至2000nM、50nM至1000nM、50nM至750nM、50nM至500nM、50nM至250nM、50nM至150nM、50nM至100nM、100nM至2000nM、100nM至1000nM、100nM至750nM、100nM至500nM、100nM至250nM、100nM至150nM、150nM至2000nM、150nM至1000nM、150nM至750nM、150nM至500nM、150nM至250nM、250nM至2000nM、250nM至1000nM、250nM至750nM、250nM至500nM、500nM至2000nM、500nM至1000nM、500nM至750nM、500nM至500nM、500nM至250nM、500nM至150nM、500nM至100nM、500nM至50nM、750nM至2000nM、750nM至1000nM或1000nM至2000nM范围内的解离常数特异性地结合至哺乳动物EpCAM(例如，人EpCAM或食蟹猴EpCAM)。
在一些实施方案中，处于活化状态的EpCAM可活化抗体以小于或等于0.01nM、0.05nM、0.1nM、0.5nM、1nM、5nM或10nM的解离常数特异性地结合至哺乳动物EpCAM(例如，人EpCAM或食蟹猴EpCAM)。在一些实施方案中，处于活化状态的EpCAM可活化抗体以大于或等于0.01nM、0.05nM、0.1nM、0.5nM、1nM、5nM或10nM的解离常数特异性地结合至哺乳动物EpCAM。
在一些实施方案中，处于活化状态的EpCAM可活化抗体以在0.01nM至100nM、0.01nM至10nM、0.01nM至5nM、0.01nM至1nM、0.01至0.5nM、0.01nm至0.1nM、0.01nm至0.05nM、0.05nM至100nM、0.05nM至10nM、0.05nM至5nM、0.05nM至1nM、0.05至0.5nM、0.05nm至0.1nM、0.1nM至100nM、0.1nM至10nM、0.1nM至5nM、0.1nM至1nM、0.1至0.5nM、0.5nM至100nM、0.5nM至10nM、0.5nM至5nM、0.5nM至1nM、1nM至100nM、1nM至10nM、1nM至5nM、5nM至100nM、5nM至10nM或10nM至100Nm范围内的解离常数特异性地结合至哺乳动物EpCAM(例如，人EpCAM或食蟹猴EpCAM)。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体以小于1nM的解离常数特异性地结合至人EpCAM。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体以小于1nM的解离常数特异性地结合至食蟹猴EpCAM。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体以小于1nM的解离常数特异性地结合至人EpCAM和食蟹猴EpCAM。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体的血清半衰期长于相应抗体的血清半衰期；例如，所述EpCAM可活化抗体的pK长于相应抗体的pK。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体的血清半衰期类似于相应抗体的血清半衰期。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有表2的一行中列出的序列的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有表3的一行中列出的序列的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含选自SEQ ID NO:13和16-25的VH-CDR1；选自SEQID NO:14和26-29的VH-CDR2；选自SEQ ID NO:15和30-38的VH-CDR3，选自SEQ ID NO:39和42-45的VL-CDR1；SEQ ID NO:40的VL-CDR2；以及选自SEQ ID NO:41和46-51的VL-CDR3。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有选自由以下组成的组的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3：(i)分别SEQ ID NO:13-15、42、40和41；(ii)分别SEQ ID NO:13-15和39-41；(iii)分别SEQ ID NO:13、26、15和39-41；以及(iv)分别SEQID NO:13、26、15、42、40和41。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:13-15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有选自由以下组成的组的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3：(i)分别SEQ ID NO:22、14、15、42、40和41；(ii)分别SEQ ID NO:13、14、33、42、40和41；(iii)分别SEQ ID NO:23、14、15、42、40和41；以及(iv)分别SEQ ID NO:25、14、15、42、40和41。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQID NO:22、14、15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:13、14、33、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含表4中公开的VH。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含表5中公开的VL。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含具有SEQID NO:54的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:75的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:77的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含与选自SEQ ID NO:54、75和77的序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的VH序列。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含与包含SEQ ID NO:89的序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的VL序列。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含表6中公开的HC。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含表7中公开的LC。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含具有SEQID NO:103的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:125的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:127的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的轻链。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段特异性地结合至人EpCAM的细胞外区域(SEQ ID NO:1)内的表位。在某些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段特异性地结合至人EpCAM的第一细胞外结构域(D1)(SEQID NO:2)内的表位。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含：包含X1YX3X4H的VH-CDR1，其中X1选自N和S，X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W，并且X4选自I和M(SEQ ID NO:5)；包含WX2X3PGX6VYIQYX12X13KFX17G的VH-CDR2，其中X2选自I和F，X3选自Y和N，X6选自N和D，X12选自N和S，X13选自E和Q，并且X17选自K和Q(SEQ ID NO:7)；以及包含X1GX3X4FAY的VH-CDR3，其中X1选自D和E，X3选自P、A、S、Y、F、G、T和V，并且X4选自Y和W(SEQ ID NO:8)。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含：包含RSSX4SLLHSX10G X12TYLX16的VL-CDR1，其中X4选自R和K，X10选自N和D，X12选自F和I，并且X16选自Y和S(SEQ ID NO:10)；包含QTSNLAS(SEQ ID NO:40)的轻链VL-CDR2；以及包含X1QX3LELPX8T的VL-CDR3，其中X1选自A、L和Q，X3选自S、G、Y和N，并且X8选自N和W(SEQ ID NO:11)。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含VH-CDR1，所述VH-CDR1包含SEQ ID NO:13的序列；VH-CDR2，所述VH-CDR2包含SEQ ID NO:14的序列；VH-CDR3，所述VH-CDR3包含SEQ ID NO:15的序列；VL-CDR1，所述VL-CDR1包含SEQ ID NO:42的序列；VL-CDR2，所述VL-CDR2包含SEQ ID NO:40的序列；以及VL-CDR3，所述VL-CDR3包含SEQ ID NO:41的序列。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体的VH-CDR1包含序列NYX3IH，其中X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W(SEQ ID NO:6)。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体的VH-CDR3包含序列DGPX4FAY，其中X4选自Y和W(SEQ ID NO:9)。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体的VL-CDR3包含序列AQX3LELPNT，其中X3选自S、G、Y和N(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含VH-CDR1，所述VH-CDR1包含SEQ ID NO:13的序列；VH-CDR2，所述VH-CDR2包含SEQ ID NO:14的序列；VH-CDR3，所述VH-CDR3包含SEQ ID NO:15的序列；VL-CDR1，所述VL-CDR1包含SEQ ID NO:42的序列；VL-CDR2，所述VL-CDR2包含SEQ ID NO:40的序列；以及VL-CDR3，所述VL-CDR3包含SEQ ID NO:41的序列。
所公开的EpCAM可活化抗体的合适组分还包括EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段与包含具有SEQ ID NO:54的序列的VH和具有SEQ IDNO:89的序列的VL的EpCAM抗体交叉竞争结合至人EpCAM和/或食蟹猴EpCAM。另外合适的EpCAM可活化抗体与包含具有SEQ ID NO:75的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL的EpCAM抗体交叉竞争结合至人EpCAM和/或食蟹猴EpCAM。另外合适的EpCAM可活化抗体与包含具有SEQ ID NO:77的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL的EpCAM抗体交叉竞争结合至人EpCAM和/或食蟹猴EpCAM。
本文提供的EpCAM可活化抗体包含掩蔽部分(MM)。在一些实施方案中，掩蔽部分(或“掩蔽物”)是偶联或以其它方式连接至EpCAM抗体并且位于EpCAM可活化抗体构建体内、以使得所述掩蔽部分降低所述EpCAM抗体特异性地结合EpCAM的能力的氨基酸序列。使用多种已知技术中的任一种来鉴定合适的掩蔽部分。例如，使用WO 2009/025846中描述的方法来鉴定肽掩蔽部分，所述专利的内容以引用的方式整体并入本文。
在一些实施方案中，可活化抗体的MM对结合至Ab的解离常数大于Ab与EpCAM的解离常数。在一些实施方案中，MM对结合至Ab的解离常数不大于Ab与EpCAM的解离常数。
在一些实施方案中，MM对结合至Ab的解离常数小于Ab与EpCAM的解离常数。
在一些实施方案中，MM对Ab的解离常数(Kd)比Ab针对所述靶标的解离常数大至多2、3、4、5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍或更多倍，或1-5、5-10、10-100、10-1,000、10-10,000、10-100,000、10-1,000,000、10-10,000,000、100-1,000、100-10,000、100-100,000、100-1,000,000、100-10,000,000、1,000-10,000、1,000-100,000、1,000-1,000,000、1000-10,000,000、10,000-100,000、10,000-1,000,000、10,000-10,000,000、100,000-1,000,000或100,000-10,000,000之间倍或更多倍。
在一些实施方案中，当EpCAM可活化抗体处于裂解状态时，MM不干扰Ab或与Ab竞争结合至EpCAM。在一些实施方案中，MM是长度约2至40个氨基酸的多肽。在一些实施方案中，MM是长度至多约40个氨基酸的多肽。
在一些实施方案中，MM多肽序列与EpCAM的序列不同。在一些实施方案中，MM多肽序列与Ab的任何天然结合配偶体至多50％同一。在一些实施方案中，MM多肽序列与EpCAM的序列不同，并且与Ab的任何天然结合配偶体至多40％、30％、25％、20％、15％或10％同一。
在一些实施方案中，MM与Ab的偶联降低所述Ab结合EpCAM的能力，以使得所述Ab在偶联至所述MM时对EpCAM的解离常数(IQ)比所述Ab未偶联至所述MM时对EpCAM的IQ大至少2、5、10、20、40、100、1,000、10,000倍。
在一些实施方案中，在EpCAM存在下，当使用靶标置换测定，例如像WO 2010/081173(其内容特此以引用的方式整体并入)中描述的测定在体外测定时，与CM裂解时相比，当所述CM未裂解时，MM使Ab结合EpCAM的能力降低至少90％。
与未用MM修饰的Ab与人EpCAM的特异性结合或亲本Ab与人EpCAM的特异性结合相比，当用MM修饰Ab且在人EpCAM存在时，所述Ab与人EpCAM的特异性结合被降低或抑制。
用MM修饰的Ab对人EpCAM的IQ比未用MM修饰的Ab或亲本Ab对人EpCAM的IQ大至少5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍或更多倍，或5-10、10-100、10-1,000、10-10,000、10-100,000、10-1,000,000、10-10,000,000、100-1,000、100-10,000、100-100,000、100-1,000,000、100-10,000,000、1,000-10,000、1,000-100,000、1,000-1,000,000、1000-10,000,000、10,000-100,000、10,000-1,000,000、10,000-10,000,000、100,000-1,000,000或100,000-10,000,000之间倍。相反，用MM修饰的Ab对人EpCAM的结合亲和力比未用MM修饰的Ab或亲本Ab对人EpCAM的结合亲和力低至少2、3、4、5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍或更多倍，或5-10、10-100、10-1,000、10-10,000、10-100,000、10-1,000,000、10-10,000,000、100-1,000、100-10,000、100-100,000、100-1,000,000、100-10,000,000、1,000-10,000、1,000-100,000、1,000-1,000,000、1000-10,000,000、10,000-100,000、10,000-1,000,000、10,000-10,000,000、100,000-1,000,000或100,000-10,000,000之间倍。
在一些实施方案中，MM对Ab的解离常数(Kd)大约等于所述Ab对人EpCAM的Kd。在一些实施方案中，MM对Ab的解离常数(Kd)不大于所述Ab对人EpCAM的解离常数。在一些实施方案中，MM对Ab的解离常数(Kd)小于所述Ab对人EpCAM的解离常数。在一些实施方案中，MM对Ab的解离常数(Kd)大于所述Ab对人EpCAM的解离常数。
在一些实施方案中，MM对结合至Ab的Kd不超过所述Ab与人EpCAM的结合的Kd。
在一些实施方案中，MM对结合至Ab的Kd不小于所述Ab与人EpCAM的结合的Kd。在一些实施方案中，MM对结合至Ab的Kd大约等于所述Ab与人EpCAM的结合的Kd。在一些实施方案中，MM对结合至Ab的Kd小于所述Ab与人EpCAM的结合的Kd。在一些实施方案中，MM对结合至Ab的Kd大于所述Ab与人EpCAM的结合的Kd。在一些实施方案中，MM对结合至Ab的Kd比所述Ab与人EpCAM的结合的Kd大至多2、3、4、5、10、25、50、100、250、500或1,000倍。在一些实施方案中，MM对结合至Ab的Kd比所述Ab与人EpCAM的结合的Kd大1-5、2-5、2-10、5-10、5-20、5-50、5-100、10-100、10-1,000、20-100、20-1000或100-1,000之间倍。
在一些实施方案中，MM对结合至Ab的亲和力小于所述Ab与人EpCAM的结合的亲和力。在一些实施方案中，MM对结合至Ab的亲和力不大于所述Ab与人EpCAM的结合的亲和力。在一些实施方案中，MM对结合至Ab的亲和力大约等于所述Ab与人EpCAM的结合的亲和力。在一些实施方案中，MM对结合至Ab的亲和力不小于所述Ab与人EpCAM的结合的亲和力。在一些实施方案中，MM对结合至Ab的亲和力大于所述Ab与人EpCAM的结合的亲和力。
在一些实施方案中，MM对结合至Ab的亲和力比所述Ab与人EpCAM的结合的亲和力低2、3、4、5、10、25、50、100、250、500或1,000倍。在一些实施方案中，MM对结合至Ab的亲和力比所述Ab与人EpCAM的结合的亲和力低1-5、2-5、2-10、5-10、5-20、5-50、5-100、10-100、10-1,000、20-100、20-1000或100-1,000之间倍。在一些实施方案中，MM对结合至Ab的亲和力比所述Ab与人EpCAM的结合的亲和力低2至20倍。在一些实施方案中，未与Ab共价连接且与EpCAM可活化抗体处于等摩尔浓度的MM不会抑制所述Ab与人EpCAM的结合。
与未用MM修饰的Ab与人EpCAM的特异性结合或亲本Ab与人EpCAM的特异性结合相比，当用MM修饰Ab且在人EpCAM存在时，所述Ab与人EpCAM的特异性结合被降低或抑制。当在体内或在体外测定中测量时，与未用MM修饰的Ab与人EpCAM的结合或亲本Ab与人EpCAM的结合相比，当用MM修饰时所述Ab结合人EpCAM的能力可降低至少50％、60％、70％、80％、90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％以及甚至100％持续至少2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84或96小时，或5、10、15、30、45、60、90、120、150或180天，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或更长时间。
MM抑制Ab与人EpCAM的结合。MM结合Ab的抗原结合结构域并且抑制所述Ab与人EpCAM的结合。MM可在空间上抑制Ab与人EpCAM的结合。MM可别构地抑制Ab与其靶标的结合。在这些实施方案中，当在体内或在体外测定中测量时，与未用MM修饰的Ab、亲本Ab或未偶联至MM的Ab与人EpCAM的结合相比，当Ab用MM修饰或偶联至MM且在靶标存在下时，所述Ab与人EpCAM不结合或基本上不结合，或存在所述Ab与人EpCAM的至多0.001％、0.01％、0.1％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％或50％结合持续至少2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84或96小时，或5、10、15、30、45、60、90、120、150或180天，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或更长时间。
当Ab偶联至MM或通过MM修饰时，所述MM“掩蔽”或降低或以其它方式抑制所述Ab与人EpCAM的特异性结合。当Ab偶联至MM或通过MM修饰时，这种偶联或修饰可引起降低或抑制所述Ab特异性地结合其靶标的能力的结构变化。
偶联至MM或用MM修饰的Ab可由下式表示(按从氨基(N)末端区域至羧基(C)末端区域的顺序：
(MM)-(Ab)
(Ab)-(MM)
(MM)-L-(Ab)
(Ab)-L-(MM)
其中MM是掩蔽部分，Ab是EpCAM抗体、EpCAM结合抗原片段，并且L是接头。在许多实施方案中，可能希望将一个或多个接头，例如柔性接头插入组合物中，以提供柔性。
在某些实施方案中，MM不是Ab的天然结合配偶体。在一些实施方案中，MM不含或基本上不含与Ab的任何天然结合配偶体的同源性。在一些实施方案中，MM与Ab的任何天然结合配偶体至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或80％相似。在一些实施方案中，MM与Ab的任何天然结合配偶体至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或80％同一。在一些实施方案中，MM与Ab的任何天然结合配偶体至多25％同一。在一些实施方案中，MM与Ab的任何天然结合配偶体至多50％同一。在一些实施方案中，MM与Ab的任何天然结合配偶体至多20％同一。在一些实施方案中，MM与Ab的任何天然结合配偶体至多10％同一。
在一些实施方案中，MM包含表9中公开的序列。在一些实施方案中，MM包含选自SEQID NO:151-157的序列。在一些实施方案中，MM包含选自SEQ ID NO:158-161的序列。在一些实施方案中，MM包含选自SEQ ID NO:162-167的序列。在一些实施方案中，MM包含SEQ IDNO:155的序列。
表9.示例性掩蔽部分序列。
Figure BDA0003121673050001151
Figure BDA0003121673050001161
本文提供的EpCAM可活化抗体包含可裂解部分。在一些实施方案中，所述可裂解部分(或“底物”)包含氨基酸序列，所述氨基酸序列是蛋白酶(通常是细胞外蛋白酶)的底物。使用多种已知技术中的任一种来鉴定合适的底物。例如，肽底物是使用美国专利号7,666,817和8,563,269；以及WO 2014/026136中描述的方法鉴定的，所述专利各自的内容以引用的方式整体并入本文(还参见，Boulware等人,Biotechnol Bioeng.106(3):339-346(2010))。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含通过MM修饰的Ab，并且还包含一个或多个可裂解部分(CM)。此类EpCAM可活化抗体表现出与人EpCAM的可活化/可转换结合。EpCAM可活化抗体通常包含通过掩蔽部分(MM)修饰或偶联至掩蔽部分的抗体或抗原结合抗体片段(Ab)以及可修饰或可裂解部分(CM)。在一些实施方案中，CM含有充当至少一种蛋白酶的底物的氨基酸序列。
EpCAM可活化抗体的元件被排列成使得MM和CM被定位成在裂解(或相对活性)状态下以及在人EpCAM存在下，所述EpCAM可活化抗体结合人EpCAM，但是当EpCAM可活化抗体处于未累计额(或相对无活性)状态下在人EpCAM存在下时，EpCAM可活化抗体与人EpCAM的特异性结合被降低或抑制。由于MM抑制或掩蔽EpCAM可活化抗体特异性地结合人EpCAM的能力，因此可降低所述EpCAM可活化抗体与人EpCAM的特异性结合。
用MM和CM修饰的EpCAM可活化抗体对人EpCAM的IQ比未用MM和CM修饰的EpCAM可活化抗体或亲本Ab对人EpCAM的Kj大至少5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍或更多倍，或5-10、10-100、10-1,000、10-10,000、10-100,000、10-1,000,000、10-10,000,000、100-1,000、100-10,000、100100,000、100-1,000,000、100-10,000,000、1,000-10,000、1,000-100,000、1,000-1,000,000、1000-10,000,000、10,000-100,000、10,000-1,000,000、10,000-10,000,000、100,000-1,000,000或100,000-10,000,000之间倍。相反，用MM和CM修饰的Ab对人EpCAM的结合亲和力比未用MM和CM修饰的EpCAM可活化抗体或亲本Ab对人EpCAM的结合亲和力低至少5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍或更多倍，或5-10、10-100、10-1,000、10-10,000、10-100,000、10-1,000,000、10-10,000,000、100-1,000、100-10,000、100-100,000、100-1,000,000、100-10,000,000、1,000-10,000、1,000-100,000、1,000-1,000,000、1000-10,000,000、10,000-100,000、10,000-1,000,000、10,000-10,000,000、100,000-1,000,000或100,000-10,000,000之间倍。
与未用MM和CM修饰的EpCAM可活化抗体或亲本Ab与人EpCAM的特异性结合相比，当用MM和CM修饰EpCAM可活化抗体且在存在人EpCAM但不存在修饰剂(例如至少一种蛋白酶)时，所述EpCAM可活化抗体与人EpCAM的特异性结合被降低或抑制。当在体内或在体外测定中测量时，与亲本Ab与人EpCAM的结合或未用MM和CM修饰的EpCAM可活化抗体与人EpCAM的结合相比，当用MM和CM修饰时所述EpCAM可活化抗体结合人EpCAM的能力可降低至少50％、60％、70％、80％、90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％以及甚至100％持续至少2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84或96小时，或5、10、15、30、45、60、90、120、150或180天，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或更长时间。
如本文所用，术语裂解状态是指在通过至少一种蛋白酶修饰CM后EpCAM可活化抗体的状况。如本文所用，术语未裂解或完整状态是指在不存在蛋白酶对CM的裂解的情况下EpCAM可活化抗体的状况。如上所述，术语“可活化的抗体”或“可活化抗体”在本文中用于指处于其未裂解(天然或完整)状态以及其裂解状态的EpCAM可活化抗体。对于普通技术人员而言显而易见的是，在一些实施方案中，裂解的EpCAM可活化抗体可由于蛋白酶对CM的裂解而缺乏MM，从而导致至少MM的释放(例如，其中所述MM未通过共价键(例如，半胱氨酸残基之间的二硫键)连接至EpCAM可活化抗体)。
可活化的或可转换的是指当EpCAM可活化抗体处于受抑制、掩蔽、完整或未裂解状态(即，第一构象)时，所述EpCAM可活化抗体表现出与靶标的第一结合水平，并且在处于未受抑制、未掩蔽和/或裂解状态(即第二构象)时表现出与人EpCAM的第二结合水平，其中所述第二靶标结合水平大于所述第一结合水平。一般而言，与不存在能够裂解CM的裂解剂(即蛋白酶)的情况相比，在这种裂解剂存在下，人EpCAM对所述EpCAM可活化抗体的Ab的接近更大。因此，当EpCAM可活化抗体处于未裂解状态时，所述Ab被抑制免于结合人EpCAM并且可被掩蔽免于人EpCAM结合(即，第一构象是使得Ab不能结合人EpCAM)，并且在裂解状态下，所述Ab对于靶标结合不受抑制或不被掩蔽。
选择EpCAM可活化抗体的CM和Ab以使得Ab代表给定靶标的结合部分，并且CM代表蛋白酶的底物。在一些实施方案中，蛋白酶与人EpCAM共定位在受试者的治疗部位或诊断部位。如本文所用，共定位是指在相同位置或相对紧密邻近。在一些实施方案中，蛋白酶裂解CM，从而产生结合至位于裂解位点附近的靶标的活化的抗体。本文公开的EpCAM可活化抗体具有特殊用途，其中例如，能够裂解CM中的位点的蛋白酶(即蛋白酶)在治疗部位或诊断部位的含靶标组织中以比非治疗部位的组织中(例如在健康组织中)相对更高的水平存在。在一些实施方案中，本公开的CM还通过一种或多种其它蛋白酶裂解。在一些实施方案中，正是一种或多种其它蛋白酶与人EpCAM共定位并且在体内负责CM的裂解。
在一些实施方案中，如果EpCAM可活化抗体未被掩蔽或以其它方式被抑制免于结合至人EpCAM，则EpCAM可活化抗体提供降低的毒性和/或否则可由EpCAM可活化抗体在非治疗部位的结合引起的不良副作用。
通常，可通过选择目标Ab并构建EpCAM可活化抗体的剩余部分来设计EpCAM可活化抗体，以便在构象受限时，MM可掩蔽EpCAM可活化抗体或减少EpCAM可活化抗体与人EpCAM的结合。可考虑结构设计标准来提供这种功能特征。
提供了在受抑制的构象对比未受抑制的构象中表现出靶标结合的所需动态范围的可转换表型的EpCAM可活化抗体。动态范围通常是指(a)在第一组条件下的参数的最大检测水平与(b)在第二组条件下的所述参数的最小检测值的比率。例如，在EpCAM可活化抗体的情况下，动态范围是指(a)在至少一种能够裂解EpCAM可活化抗体的CM的蛋白酶存在下，靶蛋白与EpCAM可活化抗体的结合的最大检测水平与(b)在所述蛋白酶不存在下靶蛋白与EpCAM可活化抗体的结合的最低检测水平的比率。可将EpCAM可活化抗体的动态范围计算为EpCAM可活化抗体裂解剂(例如酶)处理的解离常数与所述EpCAM可活化抗体裂解剂处理的解离常数的比率。EpCAM可活化抗体的动态范围越大，所述EpCAM可活化抗体的可转换表型越好。
具有相对较高的动态范围值(例如，大于1)的EpCAM可活化抗体表现出更合乎需要的转换表型，以使得在能够裂解所述EpCAM可活化抗体的CM的裂解剂(例如，酶)存在下与不存在裂解剂的情况相比，通过所述EpCAM可活化抗体进行的靶蛋白发生的程度更大(例如，主要发生)。
EpCAM可活化抗体可以多种结构构型提供。以下提供了EpCAM可活化抗体的示例性式。特别考虑的是，在EpCAM可活化抗体内，Ab、MM和CM的N末端至C末端顺序可颠倒。还特别考虑到，CM和MM可在氨基酸序列中重叠，例如使得CM包含在MM内。
例如，EpCAM可活化抗体可由下式表示(按从氨基(N)末端区域至羧基(C)末端区域的顺序：
(MM)-(CM)-(Ab)
(Ab)-(CM)-(MM)
其中MM是掩蔽部分，CM是可裂解部分，并且Ab是EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段。应注意，尽管在上式中MM和CM被指示为不同的组分，但是在本文公开的所有示例性实施方案(包括式)中，考虑MM和CM的氨基酸序列可重叠，例如以使得CM完全或部分包含在MM中。此外，上式提供了可位于EpCAM可活化抗体元件的N-末端或C-末端的额外氨基酸序列。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含可由蛋白酶裂解的CM。在一些实施方案中，裂解CM的蛋白酶在患病组织中具有活性，例如，上调或以其它方式不受调控，并且当EpCAM可活化抗体暴露于所述蛋白酶时，所述蛋白酶裂解所述EpCAM可活化抗体中的CM。
在一些实施方案中，蛋白酶与EpCAM共定位在组织中，并且当EpCAM可活化抗体暴露于蛋白酶时，蛋白酶裂解所述EpCAM可活化抗体中的CM。
在一些实施方案中，CM位于EpCAM可活化抗体中，以使得当EpCAM可活化抗体处于未裂解状态时，EpCAM可活化抗体与EpCAM的结合被减少至以比未修饰的Ab与EpCAM结合的解离常数大至少2、5、10、20、40、50、100或200的解离常数发生，而在裂解状态下(即，当EpCAM可活化抗体处于裂解状态时)，所述Ab结合EpCAM。
在一些实施方案中，CM是长度至多15个氨基酸的多肽。
在一些实施方案中，CM是多肽，所述多肽包含作为至少一种基质金属蛋白酶(MMP)的底物的第一可裂解部分(CMl)和作为至少一种丝氨酸蛋白酶(SP)的底物的第二可裂解部分(CM2)。在一些实施方案中，CM1-CM2底物的CMl底物序列和CM2底物序列中的每一个独立地是长度至多15个氨基酸的多肽。
在一些实施方案中，CM是至少一种蛋白酶的底物，所述至少一种蛋白酶被认为在癌症中上调或以其它方式不受调控。在一些实施方案中，CM是至少一种蛋白酶的底物，所述至少一种蛋白酶被认为在炎症中上调。在一些实施方案中，CM是至少一种蛋白酶的底物，所述至少一种蛋白酶被认为在自身免疫中上调或以其它方式不受调控。
在一些实施方案中，CM是选自以下的至少一种蛋白酶的底物：基质金属蛋白酶(MMP)、凝血酶、嗜中性粒细胞弹性蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、豆荚蛋白和丝氨酸蛋白酶如脱氧核糖核酸蛋白裂解酶酶(MT-SPl)和尿激酶(uPA)。不受理论束缚，据信这些蛋白酶在癌症、炎症和/或自身免疫中的至少一者中被上调或以其它方式不受调控。
示例性底物包括但不限于可被以下酶或蛋白酶中的一者或多者裂解的底物：ADAMS/ADAMTS(例如，ADAM8、ADAM9、ADAM 10、ADAM 12、ADAM 15、ADAM 17/TACE、ADAMDEC1、ADAMTS1、ADAMTS4、ADAMTS5)；天冬氨酸蛋白酶(例如BACE，肾素)；天冬氨酸组织蛋白酶(例如，组织蛋白酶D和组织蛋白酶E)；半胱天冬酶(例如，半胱天冬酶1-10和半胱天冬酶14)；半胱氨酸组织蛋白酶(例如，组织蛋白酶B、组织蛋白酶C、组织蛋白酶K、组织蛋白酶L、组织蛋白酶S、组织蛋白酶V/L2和组织蛋白酶X/Z/P)；半胱氨酸蛋白酶(例如，克鲁兹蛋白酶(Cruzipain)、豆荚蛋白酶和Otubain-2)；KLK(例如，KLK4-8、KLK10、KLK 11、KLK 13和KLK14)；金属蛋白酶(例如，Meprin、脑啡肽酶、PSMA和BMP1)；MMP(例如，MMP1-3、MMP 7-17、MMP 19、MMP 20、MMP 23、MMP 24、MMP 26和MMP 27)；丝氨酸蛋白酶(例如活化蛋白C、组织蛋白酶A、组织蛋白酶C、类糜蛋白酶和凝血因子蛋白酶如FVIIa、FIXa、FXa、FXIa和FXIIa)、弹性蛋白酶(例如，人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶)；颗粒酶B；胍基苯甲酸酯酶(Guanidinobenzoatase)；HtrAl；乳铁蛋白；Marapsin；NS3/4A；PACE4；纤溶酶；PSA，tPA；凝血酶；类胰蛋白酶；uPA；II型跨膜丝氨酸蛋白酶(TTSP)(例如，DESC1、DPP-4、FAP、丝氨酸穿膜蛋白酶(Hepsin)、蛋白裂解酶-2、MT-SPl/蛋白裂解酶和TMPRSS2-4)。
在一些实施方案中，选择CM与特定蛋白酶一起使用，例如已知与EpCAM可活化抗体的靶标共定位的蛋白酶。
在一些实施方案中，CM是至少一种MMP的底物。MMP的实例包括MMP1-3、MMP 7-17、MMP19、MMP20、MMP23、MMP24、MMP26和MMP27。在一些实施方案中，CM是选自MMP 9、MMP 14、MMP1、MMP3、MMP13、MMP 17、MMP11和MMP19的蛋白酶的底物。在一些实施方案中，CM是MMP9的底物。在一些实施方案中，CM是MMP14的底物。
可常规地并入所提供的可活化抗体中的合适的CM是本领域已知的。参见例如WO2016/179285，例如第40-47页，所述专利的内容以引用的方式整体并入本文。
在一些实施方案中，CM是嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的底物。在一些实施方案中，CM是丝氨酸蛋白酶的底物。在一些实施方案中，CM是豆荚蛋白的底物。在一些实施方案中，CM是蛋白裂解酶的底物。在一些实施方案中，CM是半胱氨酸蛋白酶的底物。在一些实施方案中，CM是半胱氨酸蛋白酶如组织蛋白酶的底物。在其它实施方案中，CM是uPA的底物。
在特定实施方案中，CM是uPA的底物。在一些实施方案中，CM包含表10中公开的序列。
表10.示例性CM序列。
<u>底物名称</u> <u>序列</u>
3014 AVGLLAPPGGLSGRSDNI(SEQ ID NO:168)
2014 ISSGLLSGRSDNI(SEQ ID NO:169)
在一些实施方案中，CM包含序列AVGLLAPPGGLSGRSDNI(SEQ ID NO:168)。
在一些实施方案中，CM包含序列ISSGLLSGRSDNI(SEQ ID NO:169)。
在一些实施方案中，CM是至少两种蛋白酶的底物。在一些实施方案中，每种蛋白酶选自：ADAMS/ADAMTS，(例如，ADAM8、ADAM9、ADAM 10、ADAM 12、ADAM 15、ADAM 17/TACE、ADAMDEC1、ADAMTS1、ADAMTS4、ADAMTS5)；天冬氨酸蛋白酶(例如BACE，肾素)；天冬氨酸组织蛋白酶(例如，组织蛋白酶D和组织蛋白酶E)；半胱天冬酶(例如，半胱天冬酶1-10和半胱天冬酶14)；半胱氨酸组织蛋白酶(例如，组织蛋白酶B、组织蛋白酶C、组织蛋白酶K、组织蛋白酶L、组织蛋白酶S、组织蛋白酶V/L2和组织蛋白酶X/Z/P)；半胱氨酸蛋白酶(例如，克鲁兹蛋白酶(Cruzipain)、豆荚蛋白酶和Otubain-2)；KLK(例如，KLK4-8、KLK10、KLK 11、KLK 13和KLK14)；金属蛋白酶(例如，Meprin、脑啡肽酶、PSMA和BMP1)；MMP(例如，MMP1-3、MMP 7-17、MMP 19、MMP 20、MMP 23、MMP 24、MMP 26和MMP 27)；丝氨酸蛋白酶(例如活化蛋白C、组织蛋白酶A、组织蛋白酶C、类糜蛋白酶和凝血因子蛋白酶如FVIIa、FIXa、FXa、FXIa和FXIIa)、弹性蛋白酶(例如，人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶)；颗粒酶B；胍基苯甲酸酯酶；HtrAl；乳铁蛋白；Marapsin；NS3/4A；PACE4；纤溶酶；PSA，tPA；凝血酶；类胰蛋白酶；uPA；II型跨膜丝氨酸蛋白酶(TTSP)(例如，DESC1、DPP-4、FAP、丝氨酸穿膜蛋白酶(Hepsin)、蛋白裂解酶-2、MT-SPl/蛋白裂解酶和TMPRSS2-4。在一些实施方案中，CM是至少两种蛋白酶的底物，其中蛋白酶之一选自：MMP、凝血酶、嗜中性粒细胞弹性蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、uPA、豆荚蛋白酶和蛋白裂解酶，并且另一种蛋白酶选自以上所列的那些蛋白酶。在一些实施方案中，CM是选自以下组的至少两种蛋白酶的底物：MMP、凝血酶、嗜中性弹性蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、uPA、豆荚蛋白酶和蛋白裂解酶。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包括至少第一CM和第二CM。在一些实施方案中，第一CM和第二CM各自是不超过15个氨基酸长的多肽。在一些实施方案中，处于未裂解状态的EpCAM可活化抗体中的第一CM和第二CM从N末端到C末端具有如下结构排列：MM-CM1-CM2-Ab或Ab-CM2-CM1-MM。在一些实施方案中，第一CM和第二CM中的至少一者是多肽，所述多肽充当选自以下的蛋白酶的底物：MMP、凝血酶、嗜中性粒细胞弹性蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、uPA、豆荚蛋白酶和蛋白裂解酶。在一些实施方案中，第一CM被靶组织中选自MMP、凝血酶、嗜中性弹性蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、uPA、豆蔻蛋白酶和蛋白裂解酶的第一裂解剂裂解，并且第二CM被靶组织中的第二裂解剂裂解。在一些实施方案中，另一种蛋白酶选自前一段落中提出的列表。在一些实施方案中，第一裂解剂和第二裂解剂是选自MMP、凝血酶、嗜中性粒细胞弹性蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、uPA、豆荚蛋白酶和蛋白裂解酶的相同蛋白酶，并且第一CM和第二CM是酶的不同底物。在一些实施方案中，第一裂解剂和第二裂解剂是选自前一段落中的列表的相同蛋白酶。在一些实施方案中，第一裂解剂和第二裂解剂是不同的蛋白酶。在一些实施方案中，第一裂解剂和第二裂解剂在靶组织中共定位。在一些实施方案中，第一CM和第二CM被靶组织中的至少一种裂解剂裂解。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体还包含信号肽。在一些实施方案中，信号肽经由间隔区缀合至EpCAM可活化抗体。在一些实施方案中，间隔区在不存在信号肽的情况下缀合至EpCAM可活化抗体。在一些实施方案中，间隔区直接连接至EpCAM可活化抗体的MM。在一些实施方案中，间隔区在间隔区-MM-CM-Ab的N末端至C末端的结构排列中直接连接至EpCAM可活化抗体的MM。
合适的间隔区和间隔区技术是本领域已知的，并且在所提供的可活化抗体的一些实施方案中可常规地用于并入间隔区。参见例如WO 2016/179285(例如，在第52-53页)，其内容以引用的方式整体并入本文。
在许多实施方案中，可能需要将一个或多个接头(例如柔性接头)插入EpCAM可活化抗体构建体中，以便在MM-CM接点、CM-Ab接点或两者处提供柔性。例如，Ab、MM和/或CM可能不含足够数量的残基(例如，Gly、Ser、Asp、Asn，特别是Gly和Ser，特别是Gly)来提供所需的柔性。如此，此类EpCAM可活化抗体构建体的可转换表型可受益于一种或多种氨基酸的引入以提供柔性接头。此外，如下文所述，当EpCAM可活化抗体以构象受限的构建体提供时，可以可操作地插入柔性接头以促进未裂解的EpCAM可活化抗体中的环状结构的形成和维持。
例如，在某些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含以下式之一(其中下式表示在N末端至C末端方向或C末端至N末端方向上的氨基酸序列)：
(MM)-L1-(CM)-(Ab)
(MM)-(CM)-L2-(Ab)
(MM)-L1-(CM)-L2-(Ab)
其中MM、CM和Ab如上文所定义；其中LI和L2各自独立且任选地存在或不存在，是包含至少1种柔性氨基酸(例如，Gly)的相同或不同的柔性接头。此外，上式提供了可位于EpCAM可活化抗体元件的N-末端或C-末端的额外氨基酸序列。实例包括但不限于靶向部分(例如，靶组织中存在的细胞受体的配体)和延长血清半衰期的部分(例如，结合血清蛋白的多肽，如免疫球蛋白(例如，IgG)或血清白蛋白(例如，人血清白蛋白(HSA))。
在一些实施方案中，使EpCAM可活化抗体暴露于蛋白酶并被所述蛋白酶裂解，以使得在活化或裂解状态下，活化的抗体包含轻链序列，所述轻链序列在所述蛋白酶已经裂解CM后包含LP2和/或CM序列的至少一部分。
CM通过至少一种蛋白酶以约0.001-1500x104M-1S-1或至少0.001、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1、2.5、5、7.5、10、15、20、25、50、75、100、125、150、200、250、500、750、1000、1250或1500x104M-1S-1的速率特异性地裂解。在一些实施方案中，CM以约100,000M-1S-1的速率特异性地裂解。在一些实施方案中，CM以约lxl02至约1x106M-1S-1(即，约lx102至约lxl06M-1S-1)的速率特异性地裂解。
为了通过酶特异性裂解，在酶与CM之间进行接触。当包含与MM和CM偶联的Ab(例如，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段)的EpCAM可活化抗体在EpCAM和足够酶活性存在下时，CM可被裂解。足够的酶活性可指所述酶与CM接触并实现裂解的能力。可容易地预见到，酶可能在CM附近，但是由于其它细胞因子或酶的蛋白质修饰而不能裂解。
适用于EpCAM可活化抗体的接头、本文公开的组合物通常是提供经修饰的Ab(例如，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段)或EpCAM可活化抗体的柔性，以有助于抑制EpCAM可活化抗体与人EpCAM的结合。此类接头通常被称为柔性接头。适合的接头可容易地选择并且可具有任何适合的不同长度，诸如1个氨基酸(例如，Gly)至20个氨基酸、2个氨基酸至15个氨基酸、3个氨基酸至12个氨基酸，包括4个氨基酸至10个氨基酸、5个氨基酸至9个氨基酸、6个氨基酸至8个氨基酸、或7个氨基酸至8个氨基酸，并且长度可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸。
用于本文提供的可活化抗体、抗体和抗体片段的柔性接头的实例包括甘氨酸聚合物(G)n、甘氨酸-丝氨酸聚合物(包括例如(GS)n)。合适的接头和接头技术是本领域已知的，并且在所提供的可活化抗体的一些实施方案中可常规地用于并入间隔区。参见例如WO2016/179285(例如，在第26、113-116页)，其内容以引用的方式整体并入本文。普通技术人员将认识到，EpCAM可活化抗体的设计可包括全部或部分柔性的接头，以使得接头可包括柔性接头以及赋予较少柔性结构以提供所需的EpCAM可活化抗体结构的一个或多个部分。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含第一连接肽(LP1)和第二连接肽(LP2)，并且其中处于未裂解状态的EpCAM可活化抗体从N末端至C末端具有如下的结构排列：MM-LP1-CM-LP2-Ab或Ab-LP2-CM-LP1-MM。在一些实施方案中，两个连接肽不需要彼此相同。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含第一连接肽(LP1)和第二连接肽(LP2)，并且其中处于未裂解状态的EpCAM可活化抗体从N末端至C末端具有如下的结构排列：MM-LP1-CM-LP2-Ab或Ab-LP2-CM-LP1-MM。在一些实施方案中，两个连接肽不需要彼此相同。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体的LP1或LP2中的至少一者包含柔性接头。合适的接头和接头技术是本领域已知的，并且在所提供的可活化抗体的一些实施方案中可常规地用于并入间隔区。参见例如WO 2016/179285(例如，在第26、113-116页)，其内容以引用的方式整体并入本文。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含具有表11中公开的序列的轻链。在一些实施方案中，可活化抗体还包含具有SEQ ID NO:174的序列的轻链。在一些实施方案中，可活化抗体包含具有SEQ ID NO:179的序列的轻链。
表11.示例性轻链可活化抗体序列。
Figure BDA0003121673050001281
Figure BDA0003121673050001291
Figure BDA0003121673050001301
Figure BDA0003121673050001311
Figure BDA0003121673050001321
Figure BDA0003121673050001331
Figure BDA0003121673050001341
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:170-180的序列的轻链和具有选自SEQ ID NO:103、125和127的序列的重链。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:170-180的序列的轻链和具有SEQ ID NO:103的序列的重链。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:174的序列的轻链和具有SEQ IDNO:103的序列的重链。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:179的序列的轻链和具有SEQ ID NO:103的序列的重链。
在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:181-188的序列的轻链和具有SEQ ID NO:127的序列的重链。在一些实施方案中，EpCAM可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:189-200的序列的轻链和具有SEQ ID NO:125的序列的重链。
在某些实施方案中，huEpCAM23抗体由通过在2018年10月4日根据布达佩斯条约(Budapest Treaty)保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(位于10801UniversityBoulevard,Manassas,Va 20110)并具有ATCC保藏号PTA-125343和PTA-125344或PTA-125345的质粒编码。本文提供了EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段和EpCAM可活化抗体、免疫缀合物的实例。
多核苷酸、载体、宿主细胞和重组方法
本公开进一步提供了包含编码本文公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段和EpCAM可活化抗体的核苷酸序列的多核苷酸。
可使用本领域中已知的方法获得多核苷酸，并且确定多核苷酸的核苷酸序列。例如，如果抗体的核苷酸序列是已知的，那么编码所述抗体的多核苷酸可从化学合成的寡核苷酸来组装(例如，如Kutmeier等人,BioTechniques 17:242(1994)中所描述)，简言之，其涉及合成含有编码所述抗体的序列的部分的重叠寡核苷酸，退火并且连接那些寡核苷酸，然后通过PCR来扩增所连接的寡核苷酸。
在一些实施方案中，本公开的多核苷酸包含表12中列出的序列。
表12.示例性核酸序列。
Figure BDA0003121673050001351
Figure BDA0003121673050001361
Figure BDA0003121673050001371
Figure BDA0003121673050001381
Figure BDA0003121673050001391
在一个实施方案中，本公开的EpBA包含SEQ ID NO:201的重链核酸序列和SEQ IDNO:202的轻链核酸序列。在一个实施方案中，本公开的EpBA包含SEQ ID NO:203的重链核酸序列和SEQ ID NO:204的轻链核酸序列。在一个实施方案中，本公开的EpBA包含SEQ ID NO:205的重链核酸序列和SEQ ID NO:204的轻链核酸序列。在一个实施方案中，本公开的EpBA包含SEQ ID NO:206的重链核酸序列和SEQ ID NO:204的轻链核酸序列。在一个实施方案中，本公开的EpBA包含SEQ ID NO:207的重链核酸序列和SEQ ID NO:204的轻链核酸序列。
在一个实施方案中，本公开的EpBA包含SEQ ID NO:203的重链核酸序列和SEQ IDNO:208的轻链核酸序列。在一个实施方案中，本公开的EpBA包含SEQ ID NO:203的重链核酸序列和SEQ ID NO:209的轻链核酸序列。
在一些实施方案中，本公开的EpBA包含(i)重链可变区，所述重链可变区包含与以PTA-125343保藏于美国典型培养物保藏中心
Figure BDA0003121673050001401
的质粒所编码的重链可变区的氨基酸序列相同的氨基酸序列；和(ii)轻链可变区，所述轻链可变区包含与以PTA-125342保藏于
Figure BDA0003121673050001402
的质粒所编码的轻链可变区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。本公开还涵盖制备和使用包含所述EpBA的EpCAM抗体和EpCAM结合抗体片段的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM抗体，所述EpCAM抗体包含(i)重链，所述重链包含与以PTA-125343保藏于
Figure BDA0003121673050001403
的质粒所编码的重链的氨基酸序列相同的氨基酸序列；和(ii)轻链，所述轻链包含与以PTA-125342保藏于
Figure BDA0003121673050001404
的质粒所编码的轻链可变区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。本公开还涵盖制备和使用EpCAM抗体的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了EpCAM可活化抗体或EpCAM结合可活化抗体片段，所述EpCAM可活化抗体或EpCAM结合可活化抗体片段包含(i)重链可变区，所述重链可变区包含与以PTA-125343保藏于
Figure BDA0003121673050001411
的质粒所编码的重链可变区的氨基酸序列相同的氨基酸序列；和(ii)轻链可变区，所述轻链可变区包含与以PTA-125344保藏于
Figure BDA0003121673050001412
的质粒所编码的轻链可变区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。本公开还涵盖制备和使用EpCAM可活化抗体或EpCAM结合可活化抗体片段的方法。
在其它实施方案中，本公开提供了EpCAM可活化抗体或EpCAM结合可活化抗体片段，所述EpCAM可活化抗体或EpCAM结合可活化抗体片段包含(i)重链可变区，所述重链可变区包含与以PTA-125343保藏于
Figure BDA0003121673050001413
的质粒所编码的重链可变区的氨基酸序列相同的氨基酸序列；和(ii)轻链可变区，所述轻链可变区包含与以PTA-125345保藏于
Figure BDA0003121673050001414
的质粒所编码的轻链可变区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。本公开还涵盖制备和使用EpCAM可活化抗体或EpCAM结合可活化抗体片段的方法。
用于构建含有抗体编码序列和适当的转录和翻译控制信号的重组载体的方法是本领域众所周知的。一旦重组表达了抗体，所述抗体就可通过本领域已知的用于纯化免疫球蛋白分子的任何方法进行纯化，例如通过色谱法(例如，离子交换色谱法、亲和色谱法，特别是通过蛋白A后对特定抗原的亲和力，和尺寸分级柱色谱法)、离心、差异溶解度或通过用于纯化蛋白质的任何其它标准技术。在这方面，在本公开中已经参考了美国专利号7,538,195，所述专利的内容特此以引用的方式整体并入。
本公开还提供了通过在产生抗体和/或EpCAM可活化抗体表达的条件下培养细胞来产生本文公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体的方法，其中所述细胞包含编码所述抗体、抗体片段或可活化抗体的核酸分子。
本公开还提供了一种通过以下方式制造在活化状态下结合EpCAM的EpCAM可活化抗体的方法：(a)在产生EpCAM可活化抗体的表达的条件下培养包含编码所述EpCAM可活化抗体的核酸构建体的细胞，其中所述EpCAM可活化抗体包含掩蔽部分(MM)、可裂解部分(CM)和Ab(例如，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段)，(i)其中所述CM是充当蛋白酶的底物的多肽；并且(ii)其中所述CM位于所述EpCAM可活化抗体中，以使得当所述EpCAM可活化抗体处于未裂解状态时，所述MM干扰所述Ab与EpCAM的特异性结合，并且在处于裂解状态时，所述MM不干扰或竞争所述Ab与EpCAM的特异性结合；以及(b)回收所述EpCAM可活化抗体。适合的Ab、MM和/或CM包括本文公开的任何Ab、MM和/或CM。
免疫缀合物
在一个实施方案中，本公开提供了免疫缀合物，所述免疫缀合物包含与细胞毒性剂缀合或共价连接的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体(例如，如本文所公开)。细胞毒性剂包括对细胞有害的任何剂，例如假单胞菌外毒素、白喉毒素、肉毒杆菌毒素A至F、蓖麻毒素、相思豆毒素皂草素和此类剂的细胞毒性片段。细胞毒性剂还包括具有治疗作用以预防性地或治疗性地治疗疾病的任何剂。此类治疗剂可以是化学治疗剂、蛋白质或多肽治疗剂，并且包括具有所需生物活性和/或改变给定生物应答的治疗剂。治疗剂的实例包括但不限于烷化剂、血管生成抑制剂、抗有丝分裂剂、激素治疗剂和可用于治疗细胞增殖性病症的抗体。在某些实施方案中，治疗剂是美登木素生物碱化合物，如美国专利号5,208,020和7,276,497中描述的那些，其所述专利各自的内容以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，治疗剂是苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001421
化合物，如吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001422
(PBD)(如在WO2010/043880、WO 2011/130616、WO 2009/016516、WO 2013/177481和WO 2012/112708中描述的那些)和吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001423
(IGN)化合物(如WO 2010/091150、WO 2012/128868和US 20170014522中所述的化合物，所述专利各自的内容以引用的方式整体并入本文。
如本文所用，“吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001431
”(PBD)化合物是具有吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001432
核心结构的化合物。吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001433
可被取代或未被取代。“吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001434
”化合物还可包括具有通过接头连接的两个吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001435
核心的化合物。作为吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001436
核心的一部分的亚胺官能团(-C＝N-)可被还原。
在某些实施方案中，吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001437
化合物包含由
Figure BDA0003121673050001438
表示的核心结构，其可任选地被取代。
在某些实施方案中，吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001439
化合物包含由4e3
Figure BDA00031216730500014310
表示的核心结构，其可任选地被取代。
如本文所用，“吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014311
”(IGN)化合物是具有吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014312
核心结构的化合物。吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014313
可被取代或未被取代。“吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014314
”(IGN)化合物还可包括具有两个通过接头连接的吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014315
核心的化合物。作为吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014316
核心的一部分的亚胺官能团(-C＝N-)可被还原。
在某些实施方案中，吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014317
化合物包含由
Figure BDA00031216730500014318
表示的核心结构，其可任选地被取代。
在一些实施方案中，吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014319
化合物包含由
Figure BDA00031216730500014320
表示的核心结构，其可被进一步取代。
可使用本领域已知的技术直接或通过接头间接地将细胞毒性剂偶联或缀合至EpCAM结合剂(例如，本文公开的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)以产生“免疫缀合物”、“缀合物”、“ADC”或“AADC”。
接头分子
本领域已知的任何合适的接头可用于制备所公开的免疫缀合物。在某些实施方案中，接头是双功能接头。如本文所用，术语“双功能接头”是指具有两个反应性基团的改性剂；其中一个能够与细胞结合剂反应，而另一个与细胞毒性化合物反应以将两个部分连接在一起。此类双官能交联剂是本领域众所周知的(参见例如，Isalm和Dent于Bioconjugation第5章,p218-363,Groves Dictionaries Inc.New York,1999中)。例如，能够经由硫醚键连接的双官能交联剂包括N-琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-甲酸酯(SMCC)以引入马来酰亚胺基，或N-琥珀酰亚胺基-4-(碘乙酰基)-氨基苯甲酸酯(SICBA)以引入碘乙酰基。将马来酰亚胺基或卤代乙酰基引入到细胞结合剂上的其它双官能交联剂是本领域众所周知的(参见例如，US 2008/0050310和US 20050169933，可从Pierce Biotechnology Inc.P.O.Box 117,Rockland,IL 61105,USA获得)，并且包括但不限于双-马来酰亚胺基聚乙二醇(BMPEO)、BM(PEO)2、BM(PEO)3、N-(β-马来酰亚胺基-丙氧基)琥珀酰亚胺酯(BMPS)、γ-马来酰亚胺基丁酸N-琥珀酰亚胺酯(GMBS)、6-马来酰亚胺基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(EMCS)、5-马来酰亚胺基戊酸NHS、HBVS、N-琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-羧基-(6-酰胺基己酸酯)(其是SMCC的“长链”类似物(LC-SMCC))、间-马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)、4-(4-N-马来酰亚胺基-苯基)-丁酸肼或HCl盐的(MPBH)、3-(溴乙酰胺基)丙酸N-琥珀酰亚胺酯(SBAP)、碘乙酸N-琥珀酰亚胺酯(SIA)、κ-马来酰亚胺二癸酸N-琥珀酰亚胺基酯(KMUA)、4-(对-马来酰亚胺基苯基)-丁酸N-琥珀酰亚胺酯(SMPB)、琥珀酰亚胺基-6-(β-马来酰亚胺基丙酰胺基)己酸酯(SMPH)、琥珀酰亚胺基-(4-乙烯基磺酰基)苯甲酸酯(SVSB)、二硫代双-马来酰亚胺基乙烷(DTME)、1,4-双-马来酰亚胺基丁烷(BMB)、1,4双马来酰亚胺基-2,3-二羟基丁烷(BMDB)、双-马来酰亚胺基己烷(BMH)、双-马来酰亚胺基乙烷(BMOE)、4-(N-马来酰亚胺基-甲基)环己烷-1-甲酸磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-SMCC)、(4-碘-乙酰基)氨基苯甲酸磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-SICBA)、间-马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-MBS)、N-(γ-马来酰亚胺基丁酰氧基)磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-GMBS)、N-(ε-马来酰亚胺基己酰氧基)磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-EMCS)、N-(κ-马来酰亚胺基-癸酰)磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-KMUS)和4-(对-马来酰亚胺基苯基)丁酸磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-SMPB)。
杂双官能交联剂是具有两个不同反应性基团的双官能交联剂。含有胺反应性N-羟基琥珀酰亚胺基团(NHS基团)和羰基反应性肼基团的异双官能交联剂也可用于将本文公开的细胞毒性化合物与细胞结合剂(例如，EpCAM抗体、EpCAM-结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)连接。这种可商购获得的杂双官能交联剂的实例包括琥珀酰亚胺基6-肼基烟酰胺酰胺丙酮腙(SANH)、琥珀酰亚胺基4-肼基对苯二酸酯盐酸盐(SHTH)和琥珀酰亚胺基肼烟酸酯盐酸盐(SHNH)。带有酸不稳定键联的缀合物也可使用本公开的带有肼的苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001451
衍生物来制备。可使用的双官能交联剂的实例包括琥珀酰亚胺基-对-甲酰基苯甲酸酯(SFB)和琥珀酰亚胺基-对-甲酰基苯氧基乙酸酯(SFPA)。
使细胞结合剂经由二硫键与细胞毒性化合物连接的双官能交联剂是本领域已知的，并且包括N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基二硫代)戊酸酯(SPP)、N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯(SPDB)、N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基二硫代)2-磺基丁酸酯(磺基SPDB)以引入二硫代吡啶基。可用于引入二硫化物基团的其它双官能交联剂是本领域已知的，并且公开于美国专利6,913,748、6,716,821，以及US 20090274713和20100129314中，所述专利各自的内容以引用的方式整体并入本文。或者，也可使用引入硫醇基团的交联剂，如2-亚氨基硫杂环戊烷、高半胱氨酸硫内酯或S-乙酰基琥珀酸酐。
在某些实施方案中，双官能接头由下述式(a1L)至(a10L)中的任一个表示。
细胞毒性剂
A.美登木素生物碱
在某些实施方案中，细胞毒性剂是美登木素生物碱化合物，如美国专利号5,208,020和7,276,497中描述的那些，其所述专利各自的内容以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，美登木素生物碱化合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001461
其中变量如上文在以上第一实施方案的第13至第15具体实施方案中的任一个和本文描述的任何更具体实施方案中所述。
在更具体的实施方案中，美登木素生物碱化合物是DM4：
Figure BDA0003121673050001462
在另一个实施方案中，美登木素生物碱化合物是DM1：
Figure BDA0003121673050001463
B.苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001464
在某些实施方案中，细胞毒性剂是苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001472
化合物，如吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001473
(PBD)(如在WO 2010/043880、WO 2011/130616、WO 2009/016516、WO 2013/177481和WO2012/112708中描述的那些)和吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001474
(IGN)化合物(如WO 2010/091150、WO2012/128868和US20170014522中所述的化合物。这些专利、专利公布和申请中的每一个的全部教导内容都以引用的方式整体并入本文。
如本文所用，“苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001475
”化合物是具有苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001476
核心结构的化合物。苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001477
核心可被取代或未被取代，和/或与一个或多个环结构稠合。它还包括具有两个通过接头连接的苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001478
核心的化合物。作为苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001479
核心的一部分的亚胺官能度(-C＝N-)可被还原。
如本文所用，“吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014710
”(PBD)化合物是具有吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014711
核心结构的化合物。吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014712
可被取代或未被取代。它还包括具有两个通过接头连接的吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014713
核心的化合物。作为吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014714
核心的一部分的亚胺官能团(-C＝N-)可被还原。
在某些实施方案中，细胞毒性剂是由下式表示的吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA00031216730500014715
化合物：
Figure BDA0003121673050001471
Figure BDA0003121673050001481
或其药学上可接受的盐，其中：
Lc’由下式表示：
-NR5-P-C(＝O)-(CRaRb)m-C(＝O)E(B1)；或
-NR5-P-C(＝O)-(CRaRb)m-S-Zs(B2)
C(＝O)E是反应性酯基团，如N-羟基琥珀酰亚胺酯、N-羟基磺基琥珀酰亚胺酯、硝基苯基(例如，2或4-硝基苯基)酯、二硝基苯基(例如，2,4-二硝基苯基)酯、磺基-四氟苯基(例如，4-磺基-2,3,5,6-四氟苯基)酯或五氟苯基酯，优选N-羟基琥珀酰亚胺酯；
Zs由下式表示：
Figure BDA0003121673050001491
或其药学上可接受的盐，其中：
q是1至5的整数；并且
U是–H或SO3H；并且
其余变量如在上文所述的第一实施方案的第1至第12和第17具体实施方案中的任一个或其中描述的任何更具体实施方案中所述。
在某些实施方案中，细胞毒性剂是由下式表示的吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001502
化合物：
Figure BDA0003121673050001501
或其药学上可接受的盐，其中：
式(C1a’)、(C1a’1)、(C1b’)和(C1b’1)的–LC c由下式表示：
Figure BDA0003121673050001511
其中变量如上文在第二实施方案的第1至第9和第23具体实施方案中的任一个或其中所述的任何更具体实施方案中所描述；并且
式(C2a”)、(C2a”1)、(C2b”)和(C2b”1)的Lcc’由下式表示：
Figure BDA0003121673050001512
其中变量如上文在第二实施方案的第10至第16和第23具体实施方案中的任一个或其中所述的任何更具体实施方案中所描述。
在某些实施方案中，细胞毒性剂是以下中任一项的吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050001514
化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003121673050001513
Figure BDA0003121673050001521
Figure BDA0003121673050001531
Figure BDA0003121673050001541
以上所示的化合物D1、sD1、D2、sD2、DGN462、sDGN462、D3和sD3可根据本领域已知的方法来制备，例如，如美国专利号9,381,256、8,765,740、8,426,402和9,353,127以及US2016/0082114中所描述，所述专利各自的内容以引用的方式整体并入本文。
在某些实施方案中，以上所示的化合物(例如，sD1、sD2、sD4、sDGN462、sD3、sD4、sD5、sD5’、sD6或sD7)的药学上可接受的盐是钠盐或钾盐。在特定实施方案中，药学上可接受的盐是钠盐。
在具体实施方案中，细胞毒性剂由下式表示：
Figure BDA0003121673050001542
或其药学上可接受的盐。在具体实施方案中，药学上可接受的盐是钠盐或钾盐。
在另一个具体的实施方案中，细胞毒性剂由下式表示：
Figure BDA0003121673050001551
示例性免疫缀合物
在第一实施方案中，免疫缀合物包含通过位于EpBA上的一个或多个赖氨酸残基的ε-氨基共价连接至本文公开的细胞毒性剂的EpCAM结合剂(EpBA，例如，本文公开的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)。
在第一实施方案的第1具体实施方案中，免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001552
其中：
EpBA(例如，本文公开的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)通过赖氨酸残基共价连接至CyL1；
WL是1至20的整数；并且
CyL1是由下式表示的细胞毒性化合物：
Figure BDA0003121673050001553
Figure BDA0003121673050001561
或其药学上可接受的盐，其中：
N与C之间的双线
Figure BDA0003121673050001562
表示单键或双键，条件是当它为双键时，X不存在并且Y是-H或(C1-C4)烷基；并且当它为单键时，X是-H或胺保护部分并且Y是-OH或-SO3H或其药学上可接受的盐；
W’是-NRe’，
Re’是-(CH2-CH2-O)n-Rk；
n是2至6的整数；
Rk是-H或-Me；
Rx3是(C1-C6)烷基；
L’由下式表示：
-NR5-P-C(＝O)-(CRaRb)m-C(＝O)-(B1’)；或
-NR5-P-C(＝O)-(CRaRb)m-S-Zs1-(B2’)；
R5是-H或(C1-C3)烷基；
P是氨基酸残基或含有介于2至20个之间的氨基酸残基的肽；
Ra和Rb在每次出现时各自独立地是-H、(C1-C3)烷基或带电荷的取代基或可电离基团Q；
m是1至6的整数；并且
Zs1选自下式中的任一者：
Figure BDA0003121673050001571
其中q是1至5的整数。
在第2具体实施方案中，对于式(L1)的缀合物，CyL1由式(L1a)或(L1a1)表示；其余变量如上文在第1具体实施方案中所描述。
在第3具体实施方案中，对于式(L1)的缀合物，CyL1由式(L1b)或(L1b1)表示；其余变量如上文在第1具体实施方案中所描述。更具体地，Rx3是(C2-C4)烷基。
在第4具体实施方案中，对于式(L1)的缀合物，CyL1由式(L1a)表示；Ra和Rb两者均是H；R5是H或Me，并且其余变量如上文在第1具体实施方案中所描述。
在第5具体实施方案中，P是含有2至5个氨基酸残基的肽；并且其余变量在上文第1、第2或第4具体实施方案中进行了描述。在更具体的实施方案中，P选自：Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp、Cit、Phe-Ala、Phe-N9-甲苯磺酰基-Arg、Phe-N9-硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu(SEQID NO:215)、β-Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO:216)、Gly-Phe-Leu-Gly(SEQ ID NO:217)、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala、D-Ala-D-Ala、Ala-Met、Met-Ala、Gln-Val、Asn-Ala、Gln-Phe和Gln-Ala。更具体地，P是Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala或D-Ala-D-Ala。
在第6具体实施方案中，Q是-SO3H或其药学上可接受的盐；并且其余变量如上文在第1、第2、第4或第5具体实施方案或其中描述的任何其它实施方案中所描述。
在第7具体实施方案中，第一实施方案的免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001581
Figure BDA0003121673050001591
Figure BDA0003121673050001601
Figure BDA0003121673050001611
Figure BDA0003121673050001621
Figure BDA0003121673050001631
Figure BDA0003121673050001641
Figure BDA0003121673050001651
或其药学上可接受的盐，其中WL是1至10的整数；N与C之间的双线
Figure BDA0003121673050001652
表示单键或双键，条件是当它为双键时，X不存在并且Y是-H；并且当它为单键时，X是-H并且Y是-OH或-SO3H或其药学上可接受的盐。在更具体的实施方案中，N与C之间的双线
Figure BDA0003121673050001653
表示双键，X不存在并且Y是-H。在另一个更具体的实施方案中，N与C之间的双线
Figure BDA0003121673050001654
表示单键，X是-H并且Y是–SO3H或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，第1-7具体实施方案的EpBA包含本文公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体。在一些实施方案中，第1-7具体实施方案的EpBA包含：包含X1YX3X4H的VH-CDR1，其中X1选自N和S，X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W，并且X4选自I和M(SEQID NO:5)；包含WX2X3PGX6VYIQYX12X13KFX17G的VH-CDR2，其中X2选自I和F，X3选自Y和N，X6选自N和D，X12选自N和S，X13选自E和Q，并且X17选自K和Q(SEQ ID NO:7)；以及包含X1GX3X4FAY的VH-CDR3，其中X1选自D和E，X3选自P、A、S、Y、F、G、T和V，并且X4选自Y和W(SEQ ID NO:8)。在一些实施方案中，第1-7具体实施方案的EpBA包含：包含RSSX4SLLHSX10G X12TYLX16的VL-CDR1，其中X4选自R和K，X10选自N和D，X12选自F和I，并且X16选自Y和S(SEQ ID NO:10)；包含QTSNLAS(SEQ ID NO:40)的轻链VL-CDR2；以及包含X1QX3LELPX8T的VL-CDR3，其中X1选自A、L和Q，X3选自S、G、Y和N，并且X8选自N和W(SEQ ID NO:11)。
在一些实施方案中，EpBA的VH-CDR1包含序列NYX3IH，其中X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W(SEQ ID NO:6)。在一些实施方案中，EpBA的VH-CDR3包含序列DGPX4FAY，其中X4选自Y和W(SEQ ID NO:9)。在一些实施方案中，EpBA的VL-CDR3包含序列AQX3LELPNT，其中X3选自S、G、Y和N(SEQ ID NO:12)。
在一些实施方案中，第1-7具体实施方案的EpBA包含EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含分别具有SEQ ID NO:13-15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方案中，第1-7具体实施方案的EpBA包含EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:54的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL。在一些实施方案中，第1-7具体实施方案的EpBA包含EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:103的序列的HC和具有SEQID NO:140的序列的LC。
在一些实施方案中，第1-7具体实施方案的EpBA包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含SEQ ID NO:155的MM。在一些实施方案中，第1-7具体实施方案的EpBA还包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含SEQ ID NO:168的CM。在替代实施方案中，第1-7具体实施方案的EpBA包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含SEQ ID NO:169的CM。在一个实施方案中，第1-7具体实施方案的EpBA包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:103的序列的重链和具有SEQ ID NO:174的序列的轻链。在一个实施方案中，第1-7具体实施方案的EpBA包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:103的序列的重链和具有SEQ ID NO:179的序列的轻链。
在第8具体实施方案中，第一实施方案的免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001671
其中：
EpBA是通过Lys残基共价连接至CyL2的本文公开的EpCAM结合剂(例如，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)；
WL是1至20的整数；并且
CyL2由下式表示：
Figure BDA0003121673050001672
在第9具体实施方案中，第一实施方案的免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001673
其中：
EpBA是通过Lys残基共价连接至CyL2的本文公开的EpCAM结合剂(例如，EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)；
WL是1至20的整数；
CyL2由下式表示：
Figure BDA0003121673050001681
m’是1或2；
R1和R2各自独立地是H或(C1-C3)烷基；并且
Zs1选自下式中的任一者：
Figure BDA0003121673050001682
其中q是1至5的整数。
在第10具体实施方案中，对于式(L2)的免疫缀合物，m’是1，并且R1和R2两者均是H；并且其余变量如上文在第13具体实施方案中所描述。
在第11具体实施方案中，对于式(L2)的免疫缀合物，m’是2，并且R1和R2两者均是Me；并且其余变量如上文在第13具体实施方案中所描述。
在第12具体实施方案中，第一实施方案的免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001691
Figure BDA0003121673050001701
或其药学上可接受的盐，其中WL是1至10的整数。
在第12具体实施方案中，对于第一个实施方案的免疫缀合物，Y是-SO3H、–SO3Na或–SO3K；并且其余变量如上文在第1至第16具体实施方案中的任一个或其中所述的任何更具体实施方案中所描述。在一个实施方案中，Y是–SO3Na。
在一些实施方案中，第8-12具体实施方案的EpBA包含本文公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体。在一些实施方案中，第8-12具体实施方案的EpBA包含：包含X1YX3X4H的VH-CDR1，其中X1选自N和S，X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W，并且X4选自I和M(SEQ ID NO:5)；包含WX2X3PGX6VYIQYX12X13KFX17G的VH-CDR2，其中X2选自I和F，X3选自Y和N，X6选自N和D，X12选自N和S，X13选自E和Q，并且X17选自K和Q(SEQ ID NO:7)；以及包含X1GX3X4FAY的VH-CDR3，其中X1选自D和E，X3选自P、A、S、Y、F、G、T和V，并且X4选自Y和W(SEQ IDNO:8)。在一些实施方案中，第8-12具体实施方案的EpBA包含：包含RSSX4SLLHSX10GX12TYLX16的轻链CDR1(VL-CDR1)，其中X4选自R和K，X10选自N和D，X12选自F和I，并且X16选自Y和S(SEQID NO:10)；包含QTSNLAS(SEQ ID NO:40)的轻链VL-CDR2；以及包含X1QX3LELPX8T的VL-CDR3，其中X1选自A、L和Q，X3选自S、G、Y和N，并且X8选自N和W(SEQ ID NO:11)。
在一些实施方案中，EpBA的VH-CDR1包含序列NYX3IH，其中X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W(SEQ ID NO:6)。在一些实施方案中，EpBA的VH-CDR3包含序列DGPX4FAY，其中X4选自Y和W(SEQ ID NO:9)。在一些实施方案中，EpBA的VL-CDR3包含序列AQX3LELPNT，其中X3选自S、G、Y和N(SEQ ID NO:12)。
在一些实施方案中，第8-12具体实施方案的EpBA包含EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含分别具有SEQ ID NO:13-15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方案中，第8-12具体实施方案的EpBA包含EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:54的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL。在一些实施方案中，第8-12具体实施方案的EpBA包含EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:103的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC。
在一些实施方案中，第8-12具体实施方案的EpBA包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含SEQ ID NO:155的MM。在一些实施方案中，第8-12具体实施方案的EpBA还包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含SEQ ID NO:168的CM。在替代实施方案中，第8-12具体实施方案的EpBA包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含SEQID NO:169的CM。在一个实施方案中，第8-12具体实施方案的EpBA包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:103的序列的重链和具有SEQ ID NO:174的序列的轻链。在一个实施方案中，第8-12具体实施方案的EpBA包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:103的序列的重链和具有SEQ ID NO:179的序列的轻链。
在某些实施方案中，对于包含第一实施方案或第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11或第12具体实施方案的免疫缀合物的组合物(例如，药物组合物)，所述组合物每个抗体分子的细胞毒性剂的平均数量(即wL的平均值)，也称为药物-抗体比率(DAR)，在1.0至8.0的范围内。在一些实施方案中，DAR在1.0至5.0、1.0至4.0、1.0至3.4、1.0至3.0、1.5至2.5、2.0至2.5或1.8至2.2的范围内。在一些实施方案中，DAR小于4.0、小于3.8、小于3.6、小于3.5、小于3.0或小于2.5。
在第二实施方案中，免疫缀合物包含通过位于EpBA上的一个或多个半胱氨酸残基的硫醇基团(-SH)共价连接至本文公开的细胞毒性剂的EpBA。
在第1具体实施方案中，第二实施方案的免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001721
其中：
EpBA是通过半胱氨酸残基共价连接至CyC1的本文公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体；
WC是1或2；
CyC1由下式表示：
Figure BDA0003121673050001722
Figure BDA0003121673050001731
或其药学上可接受的盐，其中：
N与C之间的双线
Figure BDA0003121673050001732
表示单键或双键，条件是当它为双键时，X不存在并且Y是-H或(C1-C4)烷基；并且当它为单键时，X是-H或胺保护部分，Y是-OH或-SO3H或其药学上可接受的盐；
R5是-H或(C1-C3)烷基；
P是氨基酸残基或含有2至20个氨基酸残基的肽；
Ra和Rb在每次出现时独立地是-H、(C1-C3)烷基或带电荷的取代基或可电离基团Q；
m是1至6的整数；
W’是-NRe’，
Re’是-(CH2-CH2-O)n-Rk；
n是2至6的整数；
Rk是-H或-Me；
Rx3是(C1-C6)烷基；并且，
LC由以下表示：
Figure BDA0003121673050001741
其中s1是与EpBA共价连接的位点，并且s2是与CyC1上的-C(＝O)-基团共价连接的位点；其中：
R19和R20在每次出现时独立地是-H或(C1-C3)烷基；
m”是介于1与10之间的整数；并且
Rh是-H或(C1-C3)烷基。
在第2具体实施方案中，对于式(C1)的免疫缀合物，CyC1由式(C1a)或(C1a1)表示；并且其余变量如上文在第二实施方案的第1具体实施方案中所描述。
在第3具体实施方案中，对于式(C1)的免疫缀合物，CyC1由式(C1b)或(C1b1)表示；并且其余变量如上文在第二实施方案的第1具体实施方案中所描述。
在第4具体实施方案中，对于式(C1)的免疫缀合物，CyC1由式(C1a)或(C1a1)表示；Ra和Rb两者均是H；并且R5是H或Me；并且其余变量如上文在第二实施方案的第1或第2具体实施方案中所描述。
在第5具体实施方案中，对于式(C1)的免疫缀合物，P是含有2至5个氨基酸残基的肽；并且其余变量是如上文在第二实施方案的第1、第2或第4具体实施方案中所描述。在更具体的实施方案中，P选自Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp、Cit、Phe-Ala、Phe-N9-甲苯磺酰基-Arg、Phe-N9-硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO:215)、β-Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ IDNO:216)、Gly-Phe-Leu-Gly(SEQ ID NO:217)、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala、D-Ala-D-Ala、Ala-Met、Met-Ala、Gln-Val、Asn-Ala、Gln-Phe和Gln-Ala。在另一个更具体的实施方案中，P是Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala或D-Ala-D-Ala。
在第6具体实施方案中，对于式(C1)的免疫缀合物，Q是-SO3H或其药学上可接受的盐；并且其余变量是如上文在第二实施方案的第1、第2、第4或第5具体实施方案或其中描述的任何更具体实施方案中所描述。
在第7具体实施方案中，对于式(C1)的免疫缀合物，R19和R20均是H；并且m”是1至6的整数；并且其余变量是如上文在第二实施方案的第1、第2、第3、第4、第5或第6具体实施方案或其中描述的任何更具体实施方案中所描述。
在第8具体实施方案中，对于式(C1)的免疫缀合物，-L-LC-由下式表示：
Figure BDA0003121673050001751
并且其余变量如上文在第二实施方案的第1、第2、第3、第4、第5、第6或第7具体实施方案或其中所述的任何更具体实施方案中所描述。
在第9具体实施方案中，第二实施方案的免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001761
Figure BDA0003121673050001771
或其药学上可接受的盐，其中N与C之间的双线
Figure BDA0003121673050001772
表示单键或双键，条件是当它为双键时，X不存在并且Y是-H；并且当它为单键时，X是-H并且Y是-OH或-SO3H或其药学上可接受的盐。在更具体的实施方案中，N与C之间的双线
Figure BDA0003121673050001773
表示双键，X不存在并且Y是–H。在另一个更具体的实施方案中，N与C之间的双线
Figure BDA0003121673050001774
表示单键，X是–H并且Y是-SO3H或其药学上可接受的盐。
在第3实施方案中，本发明的免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001775
Figure BDA0003121673050001781
或其药学上可接受的盐，其中：
Figure BDA0003121673050001782
是通过Lys胺基团连接至L2基团的EpBA；
Figure BDA0003121673050001783
是通过Cys硫醇基团连接至L2基团的EpBA；
R3和R4各自独立地是H或Me；
m1、m3、n1、r1、s1和t1各自独立地是1至6的整数；
m2、n2、r2、s2和t2各自独立地是1至7的整数；
t3是1至12的整数；
D1由下式表示：
Figure BDA0003121673050001784
并且
q是1至20的整数。在更具体的实施方案中，D1由下式表示：
Figure BDA0003121673050001791
在第3实施方案的第1具体实施方案中，本发明的免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001792
其中：
m1和m3各自独立地是2至4的整数；
m2是2至5的整数；
r1是2至6的整数；
r2是2至5的整数；并且
其余变量如第3实施方案中所描述。
在第2具体实施方案中，对于在第3实施方案和第1具体实施方案中所述的免疫缀合物，A是Ala-Ala-Ala、Ala-D-Ala-Ala、Ala-Ala、D-Ala-Ala、Val-Ala、D-Val-Ala、D-Ala-Pro或D-Ala-tBu-Gly。在更具体的实施方案中，对于在第3实施方案和第1具体实施方案中所述的免疫缀合物，A是L-Ala-D-Ala-L-Ala。
在第3具体实施方案中，本发明的免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001801
Figure BDA0003121673050001811
Figure BDA0003121673050001821
Figure BDA0003121673050001831
Figure BDA0003121673050001841
Figure BDA0003121673050001851
Figure BDA0003121673050001861
Figure BDA0003121673050001871
或其药学上可接受的盐，其中：
A是Ala-Ala-Ala、Ala-D-Ala-Ala、Ala-Ala、D-Ala-Ala、Val-Ala、D-Val-Ala、D-Ala-Pro或D-Ala-tBu-Gly，并且
D1由下式表示：
Figure BDA0003121673050001872
并且其余变量是如第3实施方案及其第1和第2具体实施方案中所描述。在更具体的实施方案中，A是L-Ala-D-Ala-L-Ala。在更具体的实施方案中，D1由下式表示：
Figure BDA0003121673050001881
在第4具体实施方案中，本发明的免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001882
Figure BDA0003121673050001891
其中D1由下式表示：
Figure BDA0003121673050001892
在第5具体实施方案中，本发明的免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001893
Figure BDA0003121673050001901
其中：
CBA是EpBA；
q是1或2；
D1由下式表示：
Figure BDA0003121673050001902
在第6具体实施方案中，本发明的免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001903
其中：
CBA是EpBA；
q是1至10的整数；
D1由下式表示：
Figure BDA0003121673050001911
在另一个具体实施方案中，本公开提供了EpBA免疫缀合物，所述EpBA免疫缀合物包含与由下式表示的美登木素生物碱化合物DM21L(也称为LDL-DM)偶联的EpBA(例如，EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)：
Figure BDA0003121673050001912
所述偶联经由γ-马来酰亚胺基丁酸N-琥珀酰亚胺酯(GMBS)或N-(γ-马来酰亚胺基丁酰氧基)磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-GMBS或sGMBS)接头。
GMBS和磺基-GMBS(或sGMBS)接头是本领域已知的，并且可由以下结构式表示：
Figure BDA0003121673050001913
在一个实施方案中，免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001921
其中：
EpBA是通过Lys胺基团连接至美登木素生物碱化合物的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，其中q是1或10的整数。
在一些实施方案中，EpBA-DM21L缀合物的EpBA包含本文公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体。在一些实施方案中，EpBA-DM21L缀合物的EpBA包含：包含X1YX3X4H的VH-CDR1，其中X1选自N和S，X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W，并且X4选自I和M(SEQID NO:5)；包含WX2X3PGX6VYIQYX12X13KFX17G的VH-CDR2，其中X2选自I和F，X3选自Y和N，X6选自N和D，X12选自N和S，X13选自E和Q，并且X17选自K和Q(SEQ ID NO:7)；以及包含X1GX3X4FAY的VH-CDR3，其中X1选自D和E，X3选自P、A、S、Y、F、G、T和V，并且X4选自Y和W(SEQ ID NO:8)。在一些实施方案中，EpBA-DM21L缀合物的EpBA包含：包含RSSX4SLLHSX10GX12TYLX16的轻链CDR1(VL-CDR1)，其中X4选自R和K，X10选自N和D，X12选自F和I，并且X16选自Y和S(SEQ ID NO:10)；包含QTSNLAS(SEQ ID NO:40)的轻链VL-CDR2；以及包含X1QX3LELPX8T的VL-CDR3，其中X1选自A、L和Q，X3选自S、G、Y和N，并且X8选自N和W(SEQ ID NO:11)。
在一些实施方案中，EpBA的VH-CDR1包含序列NYX3IH，其中X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W(SEQ ID NO:6)。在一些实施方案中，EpBA的VH-CDR3包含序列DGPX4FAY，其中X4选自Y和W(SEQ ID NO:9)。在一些实施方案中，EpBA的VL-CDR3包含序列AQX3LELPNT，其中X3选自S、G、Y和N(SEQ ID NO:12)。
在一些实施方案中，EpBA-DM21L缀合物的EpBA包含EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含分别具有SEQ ID NO:13-15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方案中，EpBA-DM21L缀合物的EpBA包含EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:54的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL。在一些实施方案中，EpBA-DM21L缀合物的EpBA包含EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:103的序列的HC和具有SEQID NO:140的序列的LC。
在一些实施方案中，EpBA-DM21L缀合物的EpBA包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含SEQ ID NO:155的MM。在一些实施方案中，EpBA-DM21L缀合物的EpBA还包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含SEQ ID NO:168的CM。在替代实施方案中，EpBA-DM21L缀合物的EpBA包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含SEQ ID NO:169的CM。在一个实施方案中，EpBA-DM21L缀合物的EpBA包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:103的序列的重链和具有SEQ ID NO:174的序列的轻链。在一个实施方案中，EpBA-DM21L缀合物的EpBA包含EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含具有SEQ ID NO:103的序列的重链和具有SEQ ID NO:179的序列的轻链。
在某些实施方案中，对于包含EpBA-LDL-DM免疫缀合物的组合物(例如，药物组合物)，每个抗体分子的细胞毒性剂的平均数量(即，q的平均值)，也称为药物-抗体比率(DAR)，DAR在3.0至4.0、3.2至3.8或3.4至3.7的范围内。在一些实施方案中，DAR是3.2、3.3、3.4、3.5、3.5、3.7或3.8。
制备免疫缀合物的方法
如上文第一实施方案或其中所述的任何具体实施方案所述的包含通过位于EpBA上的一个或多个赖氨酸残基的ε-氨基共价连接至细胞毒性剂的EpCAM结合剂(EpBA，例如，EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)的免疫缀合物可根据本领域已知的任何方法制备，参见例如WO 2012/128868和WO 2012/112687，其各自的全部内容以引用的方式整体并入本文。
在某些实施方案中，通过第一方法制备第一实施方案的免疫缀合物，所述第一方法包括使EpBA(例如，本文公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)与具有胺反应性基团的细胞毒性剂反应的步骤。
在一个实施方案中，对于上述第一方法，反应在亚胺反应性试剂如NaHSO3存在下进行。
在一个实施方案中，对于上述第一方法，具有胺反应性基团的细胞毒性剂由下式表示：
Figure BDA0003121673050001941
Figure BDA0003121673050001951
或其药学上可接受的盐，其中变量的定义如上文针对(L1a’)、(L1a’1)、(L1b’)和(L1b’1)所描述。
在某些实施方案中，通过第二方法制备第一实施方案的免疫缀合物，所述第二方法包括以下步骤：
(a)使细胞毒性剂与具有胺反应性基团和硫醇反应性基团的接头化合物反应，以形成具有与其结合的胺反应性基团的细胞毒性剂-接头化合物；以及
(b)使所述EpBA与细胞毒性剂-接头化合物反应。
在一个实施方案中，步骤(a)中的反应在亚胺反应性试剂(例如，NaHSO3)存在下进行。在一个实施方案中，使细胞毒性剂-接头化合物与EpBA反应而无需纯化。或者，在与EpBA反应之前，首先纯化细胞毒性剂-接头化合物。
在某些实施方案中，第一实施方案的免疫缀合物通过第三方法制备，所述第三方法包括以下步骤：
(a)使所述EpBA与具有胺反应性基团和硫醇反应性基团的接头化合物反应，以形成具有与其结合的硫醇反应性基团的经修饰的EpBA；以及
(b)使所述经修饰的EpBA与细胞毒性剂反应。
在一个实施方案中，步骤(b)中的反应在亚胺反应性试剂(例如，NaHSO3)存在下进行。
在某些实施方案中，通过第四方法制备第一实施方案的免疫缀合物，所述第四方法包括使EpBA、细胞毒性化合物和具有胺反应性基团和硫醇反应性基团的接头化合物反应的步骤。
在一个实施方案中，反应在亚胺反应剂(例如，NaHSO3)存在下进行。
在某些实施方案中，对于上述第二、第三或第四方法，具有胺反应性基团和硫醇反应性基团的接头化合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001961
其中X是卤素；JD–SH、–SSRd或–SC(＝O)Rg；Rd是苯基、硝基苯基、二硝基苯基、羧基硝基苯基、吡啶基或硝基吡啶基；Rg是烷基；并且其余变量如上文针对式(a1)–(a10)所描述；并且细胞毒性剂由下式表示：
Figure BDA0003121673050001971
或其药学上可接受的盐，其中变量如上文针对式(L1a')、(L1a'1)、(L1b')、(L1b'1)、(L2a')、(L2a'1)、(L2b')和(L2b'1)所描述。
在某些实施方案中，对于上述第二、第三或第四方法，具有胺反应性基团和硫醇反应性基团的接头化合物由式(a1L)至(a10L)中的任一个表示，并且细胞毒性剂由下式表示：
Figure BDA0003121673050001972
其中变量如上文在上述第一实施方案的第13至第15具体实施方案中的任一个和本文描述的任何更具体实施方案中所述。
在具体实施方案中，对于上述的第二、第三或第四方法，接头是磺基-SPDB，细胞毒性剂是DM4，并且免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050001981
或
其药学上可接受的盐，其中WL是1至10的整数。
可通过使具有一种或多种游离半胱氨酸的EpBA与本文公开的具有硫醇反应性基团的细胞毒性剂反应来制备免疫缀合物，所述免疫缀合物包含如以上第二实施方案中所述通过位于EpCAM结合剂上的一个或多个半胱氨酸残基的硫醇基团(-SH)共价连接至细胞毒性剂的EpCAM结合剂(例如，第1至第23具体实施方案中的任一个或其中描述的任何更具体实施方案的免疫缀合物)。
在一个实施方案中，具有硫醇反应性基团的细胞毒性剂由下式表示：
Figure BDA0003121673050001982
Figure BDA0003121673050001991
或其药学上可接受的盐，其中–LC c由下式表示：
Figure BDA0003121673050001992
其中变量如上文在第二实施方案的第1至第9和第23具体实施方案中的任一个或其中所述的任何更具体实施方案中所描述。
在另一个实施方案中，具有硫醇反应性基团的细胞毒性剂由下式表示：
Figure BDA0003121673050001993
Figure BDA0003121673050002001
或其药学上可接受的盐，其中Lcc'由下式表示：
Figure BDA0003121673050002002
其中变量如上文在第二实施方案的第10至第16和第23具体实施方案中的任一个或其中所述的任何更具体实施方案中所描述。
在另一个实施方案中，具有硫醇反应性基团的细胞毒性剂由下式表示：
Figure BDA0003121673050002003
或其药学上可接受的盐，其中LCc’如上所述，并且其余变量如上文在第二实施方案的第17至第23具体实施方案中的任一个或其中所述的任何更具体实施方案中所描述。
在某些实施方案中，在EpBA和细胞毒性剂的反应中使用有机溶剂以使细胞毒性剂增溶。示例性有机溶剂包括但不限于二甲基乙酰胺(DMA)、丙二醇等。在一个实施方案中，EpBA与细胞毒性剂的反应在DMA和丙二醇存在下进行。
在具体实施方案中，细胞毒性剂由下式表示：
Figure BDA0003121673050002011
或其药学上可接受的盐，与EpBA(例如，本文所公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)反应以形成由下式表示的免疫缀合物：
Figure BDA0003121673050002012
或其药学上可接受的盐，其中：
N与C之间的双线表示单键或双键，条件是当它为双键时，X不存在并且Y是-H；并且当它为单键时，X是-H并且Y是-SO3H或其药学上可接受的盐；并且WC是1或2。在更具体的实施方案中，N与C之间的双线表示双键，X不存在并且Y是-H。在另一个更具体的实施方案中，N与C之间的双线表示单键，X是–H并且Y是–SO3H或其药学上可接受的盐。甚至更具体地，药学上可接受的盐是钠盐或钾盐。
在某些实施方案中，当Y是-SO3H或其药学上可接受的盐时，通过(a)使具有上述硫醇反应性基团的含亚胺的细胞毒性剂(即，式(C1a’)、(C1a’1)、(C1b’)、(C1b’1)、(C2a”)、(C2a”1)、(C2b”)或(C2b”1)，其中N与C之间的双线表示双键，X不存在，并且Y是–H)中的亚胺部分与二氧化硫、亚硫酸氢盐或偏亚硫酸氢盐在pH为1.9至5.0的水溶液中反应以形成经修饰的细胞毒性剂，所述经修饰的细胞毒性剂包含由下式表示的经修饰的亚胺部分：
Figure BDA0003121673050002021
或其药学上可接受的盐；以及(b)使所述经修饰的细胞毒性剂与本文公开的EpCAM结合剂(例如，本文公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)反应以形成免疫缀合物。
在第1方面，对于上述方法，步骤(a)的反应在1.9至5.0的pH下进行。更具体地，pH是2.5至4.9、1.9至4.8、2.0至4.8、2.5至4.5、2.9至4.5、2.9至4.0、2.9至3.7、3.1至3.5或3.2至3.4。在另一个具体实施方案中，步骤(a)的反应在pH 1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9或5.0下进行。在另一个具体实施方案中，步骤(a)的反应在pH 3.3下进行。如本文所用，具体pH值是指具体值±0.05。
在一些实施方案中，步骤(a)的反应在缓冲溶液存在下进行。在所提供的方法中可使用本领域已知的任何合适的缓冲溶液。合适的缓冲溶液包括例如但不限于柠檬酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、含甘氨酸的缓冲液(例如甘氨酸-HCl缓冲液)、邻苯二甲酸盐缓冲液(例如，包含邻苯二甲酸氢钠或邻苯二甲酸氢钾的缓冲溶液)以及它们的组合。在一些实施方案中，缓冲溶液是琥珀酸盐缓冲液。在一些实施方案中，缓冲溶液是磷酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述缓冲液是柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液。在一些实施方案中，缓冲液是包含柠檬酸和Na2HPO4的柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液。在其它实施方案中，缓冲液是包含柠檬酸和K2HPO4的柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液。在一些实施方案中，上述缓冲溶液的浓度可在10至250mM、10至200mM、10至150mM、10至100mM、25至100mM、25至75mM、10至50mM或20至50mM的范围内。
在第2方面，反应步骤(a)在不存在缓冲溶液(例如，在第1方面中描述的缓冲液)的情况下进行。在一些实施方案中，本发明的方法包括以下步骤：(a)使具有上述硫醇反应性基团的含亚胺的细胞毒性剂(即，式(C1a’)、(C1a’1)、(C1b’)、(C1b’1)、(C2a”)、(C2a”1)、(C2b”)或(C2b”1)，其中N与C之间的双线表示双键，X不存在，并且Y是–H)中的亚胺部分与二氧化硫、亚硫酸氢盐或偏亚硫酸氢盐在水溶液中反应以形成经修饰的细胞毒性剂，所述经修饰的细胞毒性剂包含由下式表示的经修饰的亚胺部分：
Figure BDA0003121673050002031
或其药学上可接受的盐，其中所述水溶液不包含缓冲剂；以及(b)使所述经修饰的细胞毒性剂与本文公开的EpCAM结合剂(例如，本文公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体)反应以形成免疫缀合物。在一些实施方案中，步骤(a)的反应在有机溶剂与水的混合物中进行。更具体地，步骤(a)的反应在二甲基乙酰胺(DMA)与水的混合物中进行。在一些实施方案中，DMA与水的混合物包含按体积计少于60％的DMA。甚至更具体地，DMA与水的体积比是1:1。
在第3方面中，对于上文或第1方面或第2方面中所述的方法，在步骤(a)的反应中，对于每1当量的含亚胺的细胞毒性剂，使用0.5至5.0当量的亚硫酸氢盐或0.25或2.5当量的偏亚硫酸氢盐。在一些实施方案中，对于每1当量的含亚胺的细胞毒性剂，使用0.5至4.5、0.5至4.0、0.5至3.5、0.5至4.0、0.5至3.5、0.5至3.0、0.5至2.5、0.8至2.0、0.9至1.8、1.0至1.7、1.1至1.6或1.2至1.5当量的亚硫酸氢盐或0.25至2.25、0.25至2.0、0.25至1.75、0.25至2.0、0.25至1.75、0.25至1.5、0.25至1.25、0.4至1.0、0.45至0.9、0.5至0.85、0.55至0.8或0.6至0.75当量的偏亚硫酸氢盐。在其它实施方案中，对于每1当量的含亚胺的细胞毒性剂，使用0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3 1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、4.0、4.5或5.0当量的亚硫酸氢盐或0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5、0.55、0.6、0.65 0.7、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95、1.0、1.05、1.1、1.15、1.2、1.25、1.3、1.35、1.4、1.45、1.5、1.55、1.6、1.65、1.7、1.75、2.0、2.25或2.5当量的偏亚硫酸氢盐。在其它实施方案中，对于每1当量的含亚胺的细胞毒性剂使用1.4当量的亚硫酸氢盐或0.7当量的偏亚硫酸氢盐。在其它实施方案中，对于每1当量的含亚胺的细胞毒性剂使用1.2当量的亚硫酸氢盐或0.6当量的偏亚硫酸氢盐。如本文所用，具体当量是指具体值±0.05。
在第4方面，对于上述方法，步骤(a)的反应在2.9至3.7的pH下进行，并且使1.0至1.8当量的亚硫酸氢盐或0.5至0.9当量的偏亚硫酸氢盐与1当量的含亚胺的细胞毒性剂反应。在一些实施方案中，步骤(a)的反应在3.1至3.5的pH下进行，并且使1.1至1.6当量的亚硫酸氢盐或0.55至0.8当量的偏亚硫酸氢盐与1当量的含亚胺的细胞毒性剂反应。在其它实施方案中，步骤(a)的反应在3.2至3.4的pH下进行，并且使1.3至1.5当量的亚硫酸氢盐或0.65至0.75当量的偏亚硫酸氢盐与1当量的含亚胺的细胞毒性剂反应。在其它实施方案中，步骤(a)的反应在3.3的pH下进行，并且使1.4当量的亚硫酸氢盐或0.7当量的偏亚硫酸氢盐与1当量的含亚胺的细胞毒性剂反应。在其它实施方案中，步骤(a)的反应在3.3的pH下进行，并且使1.4当量的亚硫酸氢钠与1当量的含亚胺的细胞毒性剂反应。
在第5方面中，对于上文或第1、第2、第3或第4方面中描述的方法，步骤(a)的反应在有机溶剂与水的混合物中进行。可使用任何合适的有机溶剂。示例性有机溶剂包括但不限于醇(例如，甲醇、乙醇、丙醇等)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、乙腈、丙酮、二氯甲烷等。在一些实施方案中，有机溶剂可与水混溶。在其它实施方案中，有机溶剂与水不混溶，即步骤(a)的反应在两相溶液中进行。在一些实施方案中，有机溶剂是二甲基乙酰胺(DMA)。有机溶剂(例如，DMA)可按水和有机溶剂总体积计，以1％-99％、1％-95％、10％-80％、20％-70％、30％-70％、1％-60％、5％-60％、10％-60％、20％-60％、30％-60％、40％-60％、45％-55％、10％-50％或20％-40％的量存在。在一些实施方案中，步骤(a)的反应在DMA与水的混合物中进行，其中DMA与水的体积比是1:1。
在第6方面，对于上文或第1、第2、第3、第4或第5方面中描述的方法，步骤(a)的反应可在任何合适的温度下进行。在一些实施方案中，反应在0℃至50℃、10℃至50℃、10℃至40℃或10℃至30℃的温度下进行。在其它实施方案中，反应在15℃至30℃、20℃至30℃、15℃至25℃、16℃至24℃、17℃℃至23℃、18℃至22℃或19℃至21℃下进行。在其它实施方案中，反应可在15℃、16℃、17℃、18℃、19℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃或25℃下进行。在一些实施方案中，反应可在0℃至15℃、0℃至10℃、1℃至10℃、5℃至15℃或5℃至10℃下进行。
在第7方面，对于上文或第1、第2、第3、第4、第5或第6方面中描述的方法，步骤(a)的反应进行1分钟至48小时、5分钟至36小时、10分钟至24小时、30分钟至24小时、30分钟至20小时、1小时至20小时、1小时至15小时、1小时至10小时、2小时至10小时、3小时至9小时、3小时至8小时、4小时至6小时或1小时至4小时。在一些实施方案中，使反应进行4至6小时。在其它实施方案中，使反应进行10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时等。在其它实施方案中，使反应进行4小时。在其它实施方案中，使反应进行2小时。
在第8方面，对于上文或第1、第2、第3、第4、第5、第6或第7方面中描述的方法，步骤(b)的反应在4至9的pH下进行。在一些实施方案中，步骤(b)的反应在4.5至8.5、5至8.5、5至8、5至7.5、5至7、5至6.5或5.5至6.5的pH下进行。在其它实施方案中，步骤(b)的反应在pH5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0下进行。
在一些实施方案中，对于上文或第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7或第8方面中描述的方法，步骤(b)的反应在包含水与有机溶剂的混合物的水溶液中进行。可使用上述任何合适的有机溶剂。更具体地，有机溶剂是DMA。在一些实施方案中，水溶液包含按体积计少于50％、少于40％、少于30％、少于25％、少于20％、少于15％、少于10％、少于5％、少于3％、少于2％或少于1％的有机溶剂(例如，DMA)。
在一些实施方案中，对于上文或第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7或第8方面中描述的方法，亚硫酸氢盐是亚硫酸氢钠或亚硫酸氢钾，并且偏亚硫酸氢盐是偏亚硫酸氢钠或钾。在具体实施方案中，亚硫酸氢盐是亚硫酸氢钠，并且偏亚硫酸氢盐是偏亚硫酸氢钠。
在一些实施方案中，对于本文或第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7或第8方面中公开的方法，经修饰的细胞毒性剂在步骤(b)中与细胞结合剂反应之前没有纯化。或者，经修饰的细胞毒性剂在步骤(b)中与细胞结合剂反应之前纯化。本文公开的任何合适的方法可用于纯化经修饰的细胞毒性剂。
在一些实施方案中，对于上述方法，步骤(a)的反应未导致马来酰亚胺基团的实质性磺化。在一些实施方案中，少于50％、40％、30％、20％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的马来酰亚胺基团被磺化。马来酰亚胺磺化的百分比等于马来酰亚胺磺化的细胞毒性剂(仅在马来酰亚胺上具有磺化的细胞毒性剂)和二磺化细胞毒性剂(在马来酰亚胺和亚胺部分上均具有磺化的细胞毒性剂)的总量除以含亚胺的细胞毒性剂在与亚硫酸氢盐或偏亚硫酸氢盐反应之前的起始量。
在一些实施方案中，将通过上述任何方法制备的免疫缀合物进行纯化步骤。在这方面，可使用切向流过滤(TFF)、非吸附色谱法、吸附色谱法、吸附过滤、选择性沉淀或任何其它合适的纯化方法以及它们的组合从混合物的其它组分中纯化免疫缀合物。
在一些实施方案中，使用单个纯化步骤(例如，TFF)来纯化免疫缀合物。优选地，使用单个纯化步骤(例如，TFF)将缀合物纯化并交换到合适的制剂中。在其它实施方案中，使用两个连续纯化步骤来纯化免疫缀合物。例如，免疫缀合物可首先通过选择性沉淀、吸附过滤、吸收色谱法或非吸收色谱法纯化，然后用TFF纯化。本领域普通技术人员将理解，免疫缀合物的纯化使得能够分离包含化学偶联至细胞毒性剂的细胞结合剂的稳定缀合物。
任何合适的TFF系统可用于纯化，包括Pellicon型系统(Millipore,Billerica,Mass.)、Sartocon Cassette系统(Sartorius AG,Edgewood,N.Y.)和Centrasette型系统(Pall Corp.,East Hills,N.Y.)
任何合适的吸附色谱树脂均可用于纯化。优选的吸附色谱树脂包括羟基磷灰石色谱法、疏水电荷诱导色谱法(HCIC)、疏水相互作用色谱法(HIC)、离子交换色谱法、混合模式离子交换色谱法、固定化金属亲和色谱法(IMAC)、染料配体色谱法、亲和色谱法、反相色谱法以及它们的组合。合适的羟基磷灰石树脂的实例包括陶瓷羟基磷灰石(CHT I型和II型，Bio-Rad Laboratories,Hercules,Calif.)、HA Ultrogel羟基磷灰石(Pall Corp.,EastHills,N.Y.)和陶瓷氟磷灰石(CFT I型和II型，Bio-Rad Laboratories,Hercules,Calif.)。合适的HCIC树脂的实例是MEP Hypercel树脂(Pall Corp.,East Hills,N.Y.)。合适的HIC树脂的实例包括丁基-琼脂糖、己基-琼脂糖、苯基-琼脂糖和辛基琼脂糖树脂(均来自GE Healthcare,Piscataway,N.J.)以及Macro-prep甲基和Macro-Prep叔丁基树脂(Biorad Laboratories,Hercules,Calif.)。合适的离子交换树脂的实例包括SP-琼脂糖、CM-琼脂糖和Q-琼脂糖树脂(均来自GE Healthcare,Piscataway,N.J.)和Unosphere S树脂(Bio-Rad Laboratories,Hercules,Calif.)。合适的混合模式离子交换剂的实例包括Bakerbond CBAx树脂(JT Baker,Phillipsburg N.J.)。合适的IMAC树脂的实例包括螯合琼脂糖树脂(GE Healthcare,Piscataway,N.J.)和Profinity IMAC树脂(Bio-RadLaboratories,Hercules,Calif.)。合适的染料配体树脂的实例包括蓝色琼脂糖树脂(GEHealthcare,Piscataway,N.J.)和Affi-凝胶蓝色树脂(Bio-Rad Laboratories,Hercules,Calif.)。合适的亲和树脂的实例包括蛋白A琼脂糖树脂(例如，MabSelect,GE Healthcare,Piscataway,N.J.)，其中细胞结合剂为抗体；和凝集素亲和树脂，例如，Lentil凝集素琼脂糖树脂(GE Healthcare,Piscataway,N.J.)，其中细胞结合剂带有适当的凝集素结合位点。或者，可使用对细胞结合剂具有特异性的抗体。这样的抗体可固定至例如琼脂糖4快速流动树脂(GE Healthcare,Piscataway,N.J.)。合适的反相树脂的实例包括C4、C8和C18树脂(Grace Vydac,Hesperia,Calif.)。
任何合适的非吸附色谱树脂均可用于纯化。合适的非吸附色谱树脂的实例包括但不限于SEPHADEXTMG-25、G-50、G-100、SEPHACRYLTM树脂(例如S-200和S-300)、SUPERDEXTM树脂(例如，SUPERDEXTM75和SUPERDEXTM200)、
Figure BDA0003121673050002081
树脂(例如，P-6、P-10、P-30、P-60和P-100)以及本领域技术人员已知的其它树脂。
可根据本领域已知的任何合适的方法来制备包含与本文第3实施方案中所述的美登木素生物碱化合物共价连接的EpBA的免疫缀合物。
在某些实施方案中，可通过第一方法制备免疫缀合物，所述第一方法包括使EpBA与式(II)的美登木素生物碱化合物反应的步骤：
L2′-A-NH-CR1R2-S-L1-D (I1)。
在某些实施方案中，可通过第二方法制备免疫缀合物，所述第二方法包括以下步骤：
(a)使式(III)或(IV)的美登木素生物碱化合物与本文所述的接头化合物反应，以形成具有可与EpBA共价连接的具有与其结合的胺反应性基团或硫醇反应性基团的细胞毒性剂-美登木素生物碱化合物，其中式(III)和(IV)由下式表示：
A′-NH-CR1R2-S-L1-D (III)
Figure BDA0003121673050002091
以及
(b)使EpBA与美登木素生物碱-接头化合物反应以形成免疫缀合物。
在某些实施方案中，可通过第三方法制备免疫缀合物，所述第三方法包括以下步骤：
(a)使EpBA与本文所述的接头化合物反应以形成可与式(III)或(IV)的美登木素生物碱化合物共价连接的具有与其结合的胺反应性基团或硫醇反应性基团的经修饰的抗EpBA(例如，式(II)的化合物)；以及
(b)使经修饰的EpBA与式(III)或(IV)的美登木素生物碱化合物反应以形成免疫缀合物。
在某些实施方案中，可通过第三方法制备免疫缀合物，所述第三方法包括使EpBA、接头化合物和式(III)或(IV)的美登木素生物碱化合物反应以形成免疫缀合物。在一个实施方案中，首先混合EpBA和式(III)或(IV)的美登木素生物碱化合物，然后添加接头化合物。
在某些实施方案中，对于上述第二、第三或第四方法，接头化合物由式(a1L)–(a10L)中的任一个表示：
Figure BDA0003121673050002092
Figure BDA0003121673050002101
Figure BDA0003121673050002102
以及
Figure BDA0003121673050002103
其中X是卤素；JD–SH或–SSRd；Rd是苯基、硝基苯基、二硝基苯基、羧基硝基苯基、吡啶基或硝基吡啶基；Rg是烷基；并且U是–H或SO3H或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，接头化合物是由式(a9L)表示的GMBS或磺基-GMBS，其中U是–H或SO3H或其药学上可接受的盐。
在具体实施方案中，本发明的免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050002111
并且免疫缀合物可通过上述第二、第三或第四方法制备，其中接头化合物是由式(a9L)表示的GMBS或磺基-GMBS，其中U是–H或SO3H或其药学上可接受的盐；并且美登木素生物碱化合物由式(D-1)表示：
Figure BDA0003121673050002113
其中D1由下式表示：
Figure BDA0003121673050002114
在更具体的实施方案中，通过使式(D-1)的美登木素生物碱化合物与接头化合物GMBS或磺基-GMBS反应以形成美登木素生物碱-接头化合物、然后使EpBA与美登木素生物碱-接头化合物反应来制备式(I-1)的免疫缀合物。在甚至更具体的实施方案中，美登木素生物碱接头化合物在与EpBA反应之前不进行纯化。
在另一个具体实施方案中，免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050002115
并且免疫缀合物可通过上述第二、第三或第四方法制备，其中接头化合物是由式(a9L)表示的GMBS或磺基-GMBS，其中U是–H或SO3H或其药学上可接受的盐；并且美登木素生物碱化合物由上述式(D-2)表示。在更具体的实施方案中，通过使式(D-2)的美登木素生物碱化合物与接头化合物GMBS或磺基-GMBS反应以形成美登木素生物碱-接头化合物、然后使EpBA与美登木素生物碱-接头化合物反应来制备式(I-2)的免疫缀合物。在甚至更具体的实施方案中，美登木素生物碱接头化合物在与EpBA反应之前不进行纯化。
在另一个具体实施方案中，免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050002122
并且根据上述第一方法通过使EpBA与式(D-3)的美登木素生物碱化合物反应来制备免疫缀合物：
Figure BDA0003121673050002124
在另一个具体实施方案中，免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050002125
并且根据上述第一方法通过使EpBA与式(D-4)的美登木素生物碱化合物反应来制备免疫缀合物：
Figure BDA0003121673050002127
在另一个具体实施方案中，免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050002131
并且根据上述第一方法通过使EpBA与式(D-5)的美登木素生物碱化合物反应来制备免疫缀合物：
Figure BDA0003121673050002133
在另一个具体实施方案中，免疫缀合物由下式表示：
Figure BDA0003121673050002134
并且根据上述第一方法通过使EpBA与式(D-6)的美登木素生物碱化合物反应来制备免疫缀合物：
Figure BDA0003121673050002136
在一些实施方案中，将通过上述任何方法制备的免疫缀合物进行纯化步骤。在这方面，可使用切向流过滤(TFF)、非吸附色谱法、吸附色谱法、吸附过滤、选择性沉淀或任何其它合适的纯化方法以及它们的组合从混合物的其它组分中纯化免疫缀合物。
在一些实施方案中，使用单个纯化步骤(例如，TFF)来纯化免疫缀合物。优选地，使用单个纯化步骤(例如，TFF)将缀合物纯化并交换到合适的制剂中。在本发明的其它实施方案中，使用两个连续纯化步骤来纯化免疫缀合物。例如，免疫缀合物可首先通过选择性沉淀、吸附过滤、吸收色谱法或非吸收色谱法纯化，然后用TFF纯化。本领域普通技术人员将理解，免疫缀合物的纯化使得能够分离包含化学偶联至细胞毒性剂的细胞结合剂的稳定缀合物。
任何合适的TFF系统可用于纯化，包括Pellicon型系统(Millipore,Billerica,Mass.)、Sartocon Cassette系统(Sartorius AG,Edgewood,N.Y.)和Centrasette型系统(Pall Corp.,East Hills,N.Y.)
任何合适的吸附色谱树脂均可用于纯化。优选的吸附色谱树脂包括羟基磷灰石色谱法、疏水电荷诱导色谱法(HCIC)、疏水相互作用色谱法(HIC)、离子交换色谱法、混合模式离子交换色谱法、固定化金属亲和色谱法(IMAC)、染料配体色谱法、亲和色谱法、反相色谱法以及它们的组合。合适的羟基磷灰石树脂的实例包括陶瓷羟基磷灰石(CHT I型和II型，Bio-Rad Laboratories,Hercules,Calif.)、HA Ultrogel羟基磷灰石(Pall Corp.,EastHills,N.Y.)和陶瓷氟磷灰石(CFT I型和II型，Bio-Rad Laboratories,Hercules,Calif.)。合适的HCIC树脂的实例是MEP Hypercel树脂(Pall Corp.,East Hills,N.Y.)。合适的HIC树脂的实例包括丁基-琼脂糖、己基-琼脂糖、苯基-琼脂糖和辛基琼脂糖树脂(均来自GE Healthcare,Piscataway,N.J.)以及Macro-prep甲基和Macro-Prep叔丁基树脂(Biorad Laboratories,Hercules,Calif.)。合适的离子交换树脂的实例包括SP-琼脂糖、CM-琼脂糖和Q-琼脂糖树脂(均来自GE Healthcare,Piscataway,N.J.)和Unosphere S树脂(Bio-Rad Laboratories,Hercules,Calif.)。合适的混合模式离子交换剂的实例包括Bakerbond ABx树脂(JT Baker,Phillipsburg N.J.)。合适的IMAC树脂的实例包括螯合琼脂糖树脂(GE Healthcare,Piscataway,N.J.)和Profinity IMAC树脂(Bio-RadLaboratories,Hercules,Calif.)。合适的染料配体树脂的实例包括蓝色琼脂糖树脂(GEHealthcare,Piscataway,N.J.)和Affi-凝胶蓝色树脂(Bio-Rad Laboratories,Hercules,Calif.)。合适的亲和树脂的实例包括蛋白A琼脂糖树脂(例如，MabSelect,GE Healthcare,Piscataway,N.J.)，其中细胞结合剂为抗体；和凝集素亲和树脂，例如，Lentil凝集素琼脂糖树脂(GE Healthcare,Piscataway,N.J.)，其中细胞结合剂带有适当的凝集素结合位点。或者，可使用对细胞结合剂具有特异性的抗体。这样的抗体可固定至例如琼脂糖4快速流动树脂(GE Healthcare,Piscataway,N.J.)。合适的反相树脂的实例包括C4、C8和C18树脂(Grace Vydac,Hesperia,Calif.)。
任何合适的非吸附色谱树脂均可用于纯化。合适的非吸附色谱树脂的实例包括但不限于SEPHADEXTM G-25、G-50、G-100、SEPHACRYLTM树脂(例如S-200和S-300)、SUPERDEXTM树脂(例如，SUPERDEXTM 75和SUPERDEXTM 200)、
Figure BDA0003121673050002151
树脂(例如，P-6、P-10、P-30、P-60和P-100)以及本领域普通技术人员已知的其它树脂。
诊断和研究应用
除了本文讨论的抗体的治疗用途外，本文提供的抗体片段和可活化抗体可用于许多已知的诊断和研究应用中。所提供的EpCAM抗体和/或EpCAM结合抗体片段可用于例如体外和体内诊断方法中包括的EpCAM的纯化、检测和靶向中。例如，抗体和/或片段可用于免疫测定中，以定性且定量地测量由生物样品中的细胞表达的EpCAM(例如人EpCAM或食蟹猴EpCAM)的水平。参见例如，Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual(Cold SpringHarbor Laboratory Press,第2版，1988)，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。
所提供的EpCAM抗体和/或EpCAM结合抗体片段可用于例如竞争性结合测定、直接和间接夹心测定以及免疫沉淀测定(Zola,Monoclonal Antibodies:A Manual ofTechniques,第147-158页(CRC Press,Inc.,1987))中。
可通过与用于酶免疫测定(EIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA)的酶连接来完成可检测地标记EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段和/或EpCAM可活化抗体。所连接的酶与暴露的底物反应以产生化学部分，所述化学部分可例如通过分光光度法、荧光法或通过视觉手段来检测。可用于可检测地标记例如所公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段和EpCAM可活化抗体的酶包括但不限于苹果酸脱氢酶、葡萄球菌核酸酶、δ-5-类固醇异构酶、酵母醇脱氢酶、α-甘油磷酸脱氢酶、丙糖磷酸异构酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、天冬酰胺酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、核糖核酸酶、脲酶、过氧化氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、葡糖淀粉酶和乙酰胆碱酯酶。
通过放射性标记EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段和EpCAM可活化抗体，有可能通过使用放射免疫测定(RIA)来检测EpCAM(参见例如，Work,等人,Laboratory Techniques andBiochemistry in Molecular Biology,North Holland Publishing Company,N.Y.(1978))。可通过如使用γ计数器或闪烁计数器这样的方式或通过放射自显影术来检测放射性同位素。对于本公开的目的特别有用的同位素是：3H、125I、131I、35S、14C，并且优选125I。
也可用荧光化合物标记EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段和EpCAM可活化抗体。当荧光标记的抗体、抗体片段或可活化抗体暴露于适当波长的光下时，由于荧光的原因，然后可检测到它的存在。最常用的荧光标记化合物是异硫氰酸荧光素、罗丹明、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二甲醛和荧光胺。
也可使用发射荧光的金属(如125Eu或镧系元素的其它金属)来可检测地标记EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段和EpCAM可活化抗体。这些金属可使用诸如二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)的金属螯合基团附接于EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段和EpCAM可活化抗体。
在另外的实施方案中，通过与化学发光化合物偶联来可检测地标记EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段和EpCAM可活化抗体。然后通过检测化学反应过程中产生的发光的存在来确定化学发光标记的抗体或抗体片段的存在。特别有用的化学发光标记化合物的实例包括鲁米诺、异鲁米诺、芳族吖啶鎓酯、咪唑、吖啶鎓盐和草酸酯。同样，生物发光化合物可用于标记EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段、EpCAM可活化抗体或其衍生物。生物发光是一类在生物系统中发现的化学发光，其中催化蛋白增加化学发光反应的效率。通过检测发光的存在来确定生物发光蛋白的存在。用于标记目的的重要生物发光化合物是荧光素、荧光素酶和水母发光蛋白。
EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段和EpCAM可活化抗体可用于体内成像，其中将用可检测部分如不透射线的剂或放射性同位素标记的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体施用至受试者，优选施用至血流，并且测定宿主中标记的抗体或抗体片段的存在和位置。这种成像技术可用于恶性肿瘤的分期和治疗中。EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体可用在宿主中可通过核磁共振、放射学或本领域已知的其它检测手段检测的任何部分标记。
根据所公开的方法使用的标记可以是能够直接或间接产生可检测信号的任何可检测部分。例如，标记可以是生物素标记、酶标记(例如，荧光素酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和辣根过氧化物酶)、放射性标记(例如，3H、14C、32P、35S和125I)、荧光团如荧光或化学发光化合物(例如，异硫氰酸荧光素、罗丹明)、显像剂(例如，Tc-m99和铟(111In))以及金属离子(例如，镓和铕)。
可采用本领域已知的用于将EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体缀合至标记的任何方法，包括由Hunter等人,Nature 144:945(1962)；David等人,Biochemistry 13:1014(1974)；Pain等人,J.Immunol。Meth.40:219(1981)；Nygren,Histochem.and Cytochem.30:407(1982)描述的那些示例性方法。
治疗应用
还包括用于抑制表达EpCAM(例如，人EpCAM或食蟹猴EpCAM)的细胞的生长的方法。如本文所提供的，所公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段、EpCAM可活化抗体和/或其缀合物具有结合存在于细胞(例如人细胞或食蟹猴细胞)表面上的EpCAM并介导细胞杀伤的能力。在特定实施方案中，免疫缀合物包含细胞毒性有效负载(例如，吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050002181
DNA-烷基化剂)，并且通过细胞毒性有效负载(例如，苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050002182
例如吲哚啉并苯并二氮杂
Figure BDA0003121673050002183
DNA-烷基化剂)的活性被内在化并介导细胞杀伤。可通过免疫缀合物诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)来增强这种细胞杀伤活性。
如本文所用，术语“抑制”和“抑制”包括对细胞生长的任何抑制作用，包括细胞死亡。抑制作用包括暂时的作用、持续的作用和永久的作用。
本文提供的治疗应用包括治疗患有疾病的受试者的方法。用所提供的方法治疗的疾病是以表达(例如，EpCAM过表达)为特征的那些疾病。此类疾病包括例如乳腺癌、肺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、结肠癌、食道癌、气管癌、胃癌、膀胱癌、子宫癌、直肠癌或小癌肠、胰腺癌或其它上皮癌或与其相关的转移。本领域技术人员将理解，本公开的方法还可用于治疗尚未描述但以EpCAM的表达为特征的其它疾病。
在其它特定实施方案中，所公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段、EpCAM可活化抗体和/或其缀合物可用于治疗表达EpCAM的癌症。在一些实施方案中，癌症是任何上皮或鳞状癌。在一些实施方案中，癌症是乳腺癌、肺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、结肠癌、食道癌、气管癌、胃癌、膀胱癌、子宫癌、直肠癌、胰腺癌或小肠癌。
本文提供的治疗应用也可在体外和离体实践。
本公开还提供了所公开的EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段、EpCAM可活化抗体和/或其缀合物的治疗应用，其中将抗体、抗体片段、可活化抗体或缀合物以药学可接受的剂型施用于受试者。它们可作为推注静脉内或通过在一段时间内连续输注、通过肌肉内、皮下、肠胃外、关节内、滑膜内、鞘内、口服、局部或吸入途径施用。它们也可通过肿瘤内、肿瘤周围、病灶内或病灶周围途径施用，以发挥局部以及全身性治疗作用。
还提供了使用结合EpCAM的EpCAM可活化抗体，特别是结合并中和或以其它方式抑制EpCAM的至少一种生物活性EpCAM和/或EpCAM介导的信号传导的EpCAM可活化抗体来治疗、预防受试者中与EpCAM的异常表达和/或活性相关的症状和/或延迟所述症状的发作或进展或减轻所述症状的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了使用结合EpCAM的EpCAM可活化抗体，特别是结合、靶向、中和、杀伤或以其它方式抑制正在表达或正在异常表达EpCAM的细胞的至少一种生物活性的EpCAM可活化抗体来治疗、预防受试者中与正在表达EpCAM或正在异常表达EpCAM的细胞的存在、生长、增殖、转移和/或活性相关的症状和/或延迟所述症状的发作或进展或减轻所述症状的方法。本公开还提供了使用结合EpCAM的EpCAM可活化抗体，特别是结合、靶向、中和、杀伤或以其它方式抑制正在表达EpCAM的细胞的至少一种生物活性的EpCAM可活化抗体治疗、预防受试者中与正在表达EpCAM的细胞的存在、生长、增殖、转移和/或活性相关的症状和/或延迟所述症状的发作或进展或减轻所述症状的方法。
本公开还提供了使用结合EpCAM的EpCAM可活化抗体，特别是结合、靶向、中和、杀伤或以其它方式抑制正在异常表达EpCAM的细胞的至少一种生物活性的EpCAM可活化抗体治疗、预防受试者中与正在异常表达EpCAM的细胞的存在、生长、增殖、转移和/或活性相关的症状和/或延迟所述症状的发作或进展或减轻所述症状的方法。
本公开提供了通过向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所公开的EpCAM抗体、缀合的EpCAM抗体、EpCAM可活化抗体和/或缀合的EpCAM可活化抗体来预防受试者中EpCAM介导的疾病、延迟所述疾病的进展、治疗所述疾病、减轻所述疾病的症状或以其它方式改善所述疾病的方法。
本公开还提供了通过向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所公开的EpCAM抗体、缀合的EpCAM抗体、EpCAM可活化抗体和/或缀合的EpCAM可活化抗体来预防受试者的癌症(例如上皮癌及其转移)、延迟癌症的进展、治疗癌症、减轻癌症的症状或以其它方式改善癌症的方法。已知EpCAM可在多种癌症中表达，包括大多数上皮起源的癌症(和转移)。
在一些实施方案中，癌症是任何上皮或鳞状癌。
在一些实施方案中，癌症是乳腺癌、肺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、结肠癌、食道癌、气管癌、胃癌、膀胱癌、子宫癌、直肠癌、胰腺癌或小肠癌。
在一些实施方案中，癌症是乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠直肠癌、结肠癌、直肠癌、小肠癌、卵巢癌、胃癌或食道癌。
在一些实施方案中，癌症是卵巢癌、子宫癌、胃癌、胰腺癌或结肠直肠癌。
在一些实施方案中，癌症是卵巢癌。
在一些实施方案中，癌症是子宫癌。
在一些实施方案中，癌症是胃癌。
在一些实施方案中，癌症是胰腺癌。
在一些实施方案中，癌症是结肠直肠癌。
在一些实施方案中，癌症是乳腺癌。在某些实施方案中，癌症是三阴性乳腺癌。
在一些实施方案中，癌症是肺癌。在一些实施方案中，肺癌是非小细胞肺癌。在一些实施方案中，非小细胞肺癌是非鳞状非小细胞肺癌。
在这些方法和用途的任何实施方案中使用的EpCAM抗体、缀合的EpCAM抗体、EpCAM可活化抗体和/或缀合的EpCAM可活化抗体可在疾病的任何阶段施用。例如，可将这种EpCAM抗体、缀合的EpCAM抗体、EpCAM可活化抗体和/或缀合的EpCAM可活化抗体施用至患有从早期至转移性的任何阶段的癌症的受试者。术语“受试者”和“患者”可在本文中互换使用。
在一些实施方案中，受试者是哺乳动物，如人、非人灵长类动物、伴侣动物(例如猫、狗、马)、农场动物、工作动物或动物园动物。在一些实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，受试者是伴侣动物。在一些实施方案中，受试者是在兽医护理中的动物。
将EpCAM抗体、缀合的EpCAM抗体、EpCAM可活化抗体和/或缀合的EpCAM可活化抗体及其治疗制剂施用于患有或易患与异常EpCAM表达和/或活性相关的疾病或病症(如癌症)的受试者。使用本领域中已知的多种方法中的任一种来鉴定患有或易患与异常EpCAM表达和/或活性相关的疾病或病症的受试者。例如，使用多种临床和/或实验室测试(例如体格检查以及血液、尿液和/或粪便分析以评估健康状况)中的任一种来鉴定患有癌症或其它赘生性疾患的受试者。例如，使用多种临床和/或实验室测试(如体格检查和/或体液分析，例如血液、尿液和/或粪便分析以评估健康状况)中的任一种来鉴定患有炎症和/或炎性病症的受试者。
如果实现了各种实验室或临床目标中的任一个，则认为将EpCAM抗体、缀合的EpCAM抗体、EpCAM可活化抗体和/或缀合的EpCAM可活化抗体施用至患有与异常EpCAM表达和/或活性相关的疾病或病症(例如，癌症，诸如癌)的受试者是成功的。例如，如果与异常EpCAM表达和/或活性相关的疾病或病症的一种或多种症状得以缓解、减轻、抑制或未进展至另一(即，更差的)状态，则认为将EpCAM抗体、缀合的EpCAM抗体、EpCAM可活化抗体和/或缀合的EpCAM可活化抗体施用至患有所述疾病或病症的受试者是成功的。如果与异常EpCAM表达和/或活性相关的疾病或病症进入缓解期或未进展至另一(即，更差的)状态，则认为将EpCAM抗体、缀合的抗EpCAM抗体、EpCAM可活化抗体和/或缀合的EpCAM可活化抗体施用至患有所述疾病或病症的受试者是成功的。
在一些实施方案中，将EpCAM抗体、缀合的EpCAM抗体、EpCAM可活化抗体和/或缀合的EpCAM可活化抗体及其治疗性制剂施用至患有或易患疾病或病症的受试者，如患有癌症或其它赘生性疾患的受试者，其中受试者的患病细胞正在表达EpCAM。在一些实施方案中，患病细胞与异常EpCAM表达和/或活性相关。在一些实施方案中，患病细胞与正常EpCAM表达和/或活性相关。使用本领域中已知的多种方法中的任一种来鉴定患有或易患其中受试者的患病细胞表达EpCAM的疾病或病症的受试者。例如，使用多种临床和/或实验室测试(例如体格检查以及血液、尿液和/或粪便分析以评估健康状况)中的任一种来鉴定患有癌症或其它赘生性疾患的受试者。例如，使用多种临床和/或实验室测试(如体格检查和/或体液分析，例如血液、尿液和/或粪便分析以评估健康状况)中的任一种来鉴定患有炎症和/或炎性病症的受试者。
在一些实施方案中，将EpCAM抗体、缀合的EpCAM抗体、EpCAM可活化抗体和/或缀合的EpCAM可活化抗体及其治疗性制剂施用至患有或易患与表达EpCAM的细胞或此类细胞的存在、生长、增殖、转移和/或活性相关的疾病或病症的受试者，如患有癌症或其它赘生性疾患的受试者。在一些实施方案中，细胞与异常EpCAM表达和/或活性相关。在一些实施方案中，细胞与正常EpCAM表达和/或活性相关。使用本领域中已知的多种方法中的任一种来鉴定与表达EpCAM的细胞相关的疾病或病症的受试者。例如，使用多种临床和/或实验室测试(例如体格检查以及血液、尿液和/或粪便分析以评估健康状况)中的任一种来鉴定患有癌症或其它赘生性疾患的受试者。例如，使用多种临床和/或实验室测试(如体格检查和/或体液分析，例如血液、尿液和/或粪便分析以评估健康状况)中的任一种来鉴定患有炎症和/或炎性病症的受试者。
如果实现了各种实验室或临床目标中的任一个，则认为将EpCAM抗体、缀合的EpCAM抗体、EpCAM可活化抗体和/或缀合的EpCAM可活化抗体施用至患有与表达EpCAM的细胞相关的疾病或病症(例如，癌症，诸如癌)的受试者是成功的。例如，如果与表达EpCAM的细胞相关的疾病或病症的一种或多种症状得以缓解、减轻、抑制或未进展至另一(即，更差的)状态，则认为将EpCAM抗体、缀合的EpCAM抗体、EpCAM可活化抗体和/或缀合的EpCAM可活化抗体施用至患有所述疾病或病症的受试者是成功的。如果与表达EpCAM的细胞相关的疾病或病症进入缓解期或未进展至另一(即，更差的)状态，则认为将EpCAM抗体、缀合的EpCAM抗体、EpCAM可活化抗体和/或缀合的EpCAM可活化抗体施用至患有所述疾病或病症的受试者是成功的。
本公开提供了特异性地结合人EpCAM的抗体和抗体片段、EpCAM可活化抗体和缀合的EpCAM抗体、抗体片段或可活化抗体，其可用于治疗、预防与异常EpCAM表达和/或活性相关的疾病或病症、延迟所述疾病或病症的进展、改善和/或减轻所述疾病或病症的症状的方法中。例如，EpCAM可活化抗体用于治疗、预防癌症或其它赘生性疾患、延缓癌症或其它赘生性疾患的进展、改善和/或减轻癌症或其它赘生性疾患的症状的方法中。
本公开提供了特异性地结合人EpCAM的抗体和抗体片段、EpCAM可活化抗体和缀合的EpCAM抗体、抗体片段或可活化抗体，其可用于治疗、预防与表达EpCAM的细胞相关的疾病或病症、延迟所述疾病或病症的进展、改善和/或减轻所述疾病或病症的症状的方法中。在一些实施方案中，细胞与异常EpCAM表达和/或活性相关。在一些实施方案中，细胞与正常EpCAM表达和/或活性相关。例如，EpCAM可活化抗体可用于治疗、预防癌症或其它赘生性疾患、延缓癌症或其它赘生性疾患的进展、改善和/或减轻癌症或其它赘生性疾患的症状的方法中。
本公开提供了特异性地结合人EpCAM的抗体和抗体片段、EpCAM可活化抗体、缀合的EpCAM抗体和抗体片段和/或缀合的EpCAM可活化抗体，其可用于治疗、预防其中患病细胞表达EpCAM的疾病或病症、延迟所述疾病或病症的进展、改善和/或减轻所述疾病或病症的症状的方法中。在一些实施方案中，患病细胞与异常EpCAM表达和/或活性相关。在一些实施方案中，患病细胞与正常EpCAM表达和/或活性相关。例如，EpCAM可活化抗体用于治疗、预防癌症或其它赘生性疾患、延缓癌症或其它赘生性疾患的进展、改善和/或减轻癌症或其它赘生性疾患的症状的方法中。
药物组合物
所提供的组合物包括可用于制造药物组合物的原料药物组合物(例如，不纯或非无菌组合物)和可以单位剂型的制剂形式使用的药物组合物(即，适合施用于受试者或患者的组合物)。此类组合物包含预防或治疗有效量的所提供的免疫缀合物和药学上可接受的载体。
优选地，所提供的组合物包含预防或治疗有效量的所公开的免疫缀合物和药学上可接受的载体。
在具体实施方案中，术语“药学上可接受的”是指由联邦政府或州政府的监管机构批准的或在美国药典或其它普遍认可的药典中列出的，用于在动物体内并且更特别地在人体内使用。术语“载体”是指与治疗剂一起施用的稀释剂、佐剂(例如，弗氏佐剂(完全和不完全)、赋形剂或媒介物。一般来说，本文提供的组合物的成分是单独或混合在一起以单位剂型(例如以干燥冻干粉末或无水浓缩物形式)提供于指示活性剂的量的密闭容器(如安瓿或药囊)中。当组合物欲通过输注施用时，所述组合物可用含有无菌药用级水或盐水的输注瓶来分配。在组合物通过注射施用时，可提供无菌注射用水或盐水的安瓿以使得成分可在施用之前混合。
本公开还提供了包含一个或多个容器的药物包装或药盒，所述容器填充有单独或与这种药学上可接受的载体一起的本文提供的免疫缀合物。本公开还提供了包含一个或多个容器的药物包装或药盒，所述容器填充有本文提供的药物组合物的一种或多种成分。任选地，与这样一个或多个容器相关联的可以是由管理药物或生物制品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的公告，所述公告反映所述机构针对人施用，对制造、使用或销售的许可。
本公开提供了可以在以上方法中使用的试剂盒。药盒可包含本文公开的任何免疫缀合物。
施用方法
通过向受试者施用治疗有效量的本文提供的免疫缀合物，所公开的组合物可提供与疾病、病症相关的一种或多种症状的治疗、预防和改善。在一个优选的方面，此类组合物是基本上纯化的(即，基本上不含限制其作用或产生不希望的副作用的物质)。在具体实施方案中，受试者是动物，优选哺乳动物，如非灵长类动物(例如，牛、马、猫、犬、啮齿动物等)或灵长类动物(例如，猴如食蟹猴，人等等)。在优选实施方案中，受试者是“人”。
本文提供的施用免疫缀合物的方法包括但不限于胃肠外施用(例如，皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内和皮下)、硬膜外和粘膜(例如鼻内和经口途径)施用。在具体实施方案中，肌肉内、静脉内或皮下施用本文提供的免疫缀合物。可通过任何方便的途径，例如通过输注或推注注射来施用组合物，并且可将组合物与其它生物活性剂一起施用。施用可以是全身性的或局部的。
本公开还提供了将所公开的免疫缀合物的制剂包装在气密容器，如指明分子的量的安瓿或小药囊中。在一个实施方案中，此类分子可作为处于气密密封容器中的干燥无菌冻干粉末或无水浓缩物来提供，并且可例如用水或盐水重构至用于向受试者施用的适当浓度。优选地，将免疫缀合物作为干燥的无菌冻干粉末提供在气密密封容器中。
本文提供的免疫缀合物的冻干制剂应在2℃与8℃之间储存于它们的原始容器中，并且所述分子应在重构后12小时内，优选6小时内、5小时内、3小时内或1小时内施用。在替代实施方案中，此类分子以液体形式提供在指明所述分子、融合蛋白或缀合分子的量和浓度的气密密封容器中。优选地，当以液体形式提供时，此类免疫缀合物提供于气密密封容器中。
如本文所用，药物组合物的“治疗有效量”是足以产生有益或所需结果的量，包括但不限于临床结果，如减少癌症的症状(例如，癌细胞的增殖、肿瘤存在、肿瘤转移等)，从而提高罹患所述疾病的患者的生活质量、减少治疗所述疾病所需的其它药物的剂量、增强另一种药物的作用(如通过靶向和/或内化)、延迟所述疾病的进展和/或延长个体的存活期。
治疗有效量可在一次或多次施用中施用。出于本公开的目的，药物、化合物或药物组合物的治疗有效量是足以减少病毒存在的增殖(或作用)和/或减少和/或延迟病毒性疾病的发展(直接或间接)的量。
实施例
实施例1：针对人和食蟹猴EpCAM(CD326)抗原的小鼠单克隆抗体的产生
为了产生针对人和食蟹猴(cyno)EpCAM的单克隆抗体，使用了三种不同的免疫方案。在第一免疫方案中，将野生型BALB/c雌性小鼠三次皮下注射表达食蟹猴-EpCAM的300-19细胞系(其是BALB/c来源的前-B细胞)，然后注射两次表达人EpCAM的300-19细胞系。在第二免疫方案中，向野生型BALB/c雌性小鼠四次皮下注射NSCLC细胞系H1568，然后四次注射食蟹猴原代肾上皮细胞。在第三免疫方案中，向FcγR2b ko/ko BALB/c雌性小鼠(模型#579，Taconic)皮下注射表达人EpCAM的300-19细胞3次，然后注射表达食蟹猴-EpCAM的300-19细胞2次。在所有三个方案中，细胞均在PBS中制备并以5X 106个细胞/小鼠/注射的剂量注射到小鼠中，注射之间间隔两周。为了加强免疫应答，在第一次免疫后一周注射抗GITRAb(克隆DTA-1)。在处死以用于杂交瘤产生之前三天，免疫的小鼠接受腹膜内注射另一剂量的表达人EpCAM的300-19细胞。根据标准动物方案收集小鼠脾脏，并将其在两个无菌、磨砂显微镜载玻片之间研磨，以获得RPMI-1640培养基中的单细胞悬浮液。在用ACK裂解缓冲液使红细胞裂解后，然后将脾细胞与鼠骨髓瘤P363Ag8.653细胞(P3细胞)以1个P3细胞:3个脾细胞的比率混合。洗涤脾细胞和P3细胞的混合物，并在融合培养基(0.3M甘露醇/D-山梨醇、0.1mM CaCl2、0.5mM MgCl2和1mg/mL BSA)中在室温下用链霉蛋白酶处理3分钟。通过添加胎牛血清(FBS)终止反应，然后洗涤细胞，将其重悬于2mL冷融合培养基中，并使用BTX ECM2001电融合机进行融合。将融合的细胞轻轻添加至含有次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸苷(HAT)的RPMI-1640选择培养基中，在37℃下孵育20分钟，然后以200μL/孔接种到十个平底96孔板中。然后将板在5％CO2孵育箱中在37℃下孵育，直到杂交瘤克隆准备用于抗体筛选。也可使用其它免疫和杂交瘤产生技术，包括在J.Langone和H.Vunakis(编辑,Methods inEnzymology,第121卷,Immunochemical Techniques,第I部分,Academic Press,Florida)；以及E.Harlow和D.Lane(Antibodies:A Laboratory Manual,1988,Cold Spring HarborLaboratory Press,New York,NY)中描述的那些。
杂交瘤筛选和亚克隆
使用流式细胞术结合测定用表达人EpCAM的300-19细胞和野生型300-19细胞进行杂交瘤细胞筛选。简言之，首先用CELLTRACETM远红DDAO-SE标记野生型300-19细胞，并以1:1的比率与未处理的细胞混合，然后在冰上与杂交瘤上清液一起孵育2小时。然后洗涤细胞，与PE标记的抗小鼠IgG一起孵育，洗涤，用福尔马林固定并使用FACS阵列进行分析。扩增与人EpCAM抗原具有特异性反应性的杂交瘤细胞，并使用三种独立细胞系通过流式细胞术结合测定重新筛选上清液：表达人EpCAM的300-19细胞、表达食蟹猴-EpCAM的300-19细胞和野生型300-19细胞。将与人和食蟹猴EpCAM抗原具有阳性结合、但在野生型300-19细胞上呈阴性的杂交瘤通过有限稀释进一步亚克隆。从每种杂交瘤中选择与显示出与人和食蟹猴EpCAM抗原的特异性结合的一个亚克隆用于后续分析。
在这一调查过程中共进行了20次融合。产生了63种对人和食蟹猴EpCAM抗原具有特异性的杂交瘤，并且对29种杂交瘤进行了亚克隆。培养稳定的亚克隆，并使用市售小鼠IgG同种型分型试剂鉴定单克隆抗体的同种型。
鼠抗体纯化
使用基本上由两个色谱步骤组成的方案纯化来自杂交瘤亚克隆的过滤上清液：蛋白A亲和和陶瓷羟基磷灰石(CHT)。简言之，通过添加1:10体积的1M Tris/HCl缓冲液(pH8.0)来中和过滤的上清液。将中和的上清液负载到已用1PBS(pH 7.3±0.1)预先平衡的蛋白A柱(HiTrap蛋白A HP，1mL)上。用1X PBS(pH 7.3±0.1)洗涤柱以减少非特异性宿主细胞蛋白。然后使用含有50mM氯化钠的25mM乙酸(pH 3.2)洗脱结合的抗体，并立即用1M Tris-碱中和至pH 7.0±0.2。将中和的池在CHT结合缓冲液(15mM磷酸钠，pH 7.0±0.1)中1:10稀释，并负载到用CHT结合缓冲液预先平衡的II型CHT柱(40μm粒度)上。然后使用线性梯度(10倍柱体积的15mM至160mM磷酸钠)洗脱结合的蛋白质，并且合并目标级分(通过体积排阻色谱法SEC获得的高百分比单体)，用1X PBS(pH 7.3±0.1)透析，并过滤灭菌。通过测量在280nm处的吸光度和1.44mL mg-1cm-1的消光系数来确定最终抗体浓度。
所有纯化实验均在配备有线内UV、电导率和pH探针的AKTA纯化系统上进行。使用Agilent HPVL 1100系统通过在TSKgel G3000SWXL色谱柱(7.8x 300mm)上注射40μg样品进行SEC分析，所述色谱柱还具有线内保护柱(6.0x 40mm)以延长柱寿命。流动相含有50mm磷酸钠缓冲液和400mm高氯酸钠，流速是1.0mL/min，并且洗脱等度。
实施例2：鼠EpCAM抗体的结合亲和力
通过使用纯化的抗体mEpCAM23(使用实施例1中所述的第三免疫方案获得)并用HSC2细胞(图1A)或食蟹猴原代肾上皮细胞(图1B)进行的流式细胞术结合测定来测定结合亲和力。在结合测定中，将每个样品2×104个细胞与不同浓度的mEpCAM23在200μL FACS缓冲液(补充2％正常山羊血清的RPMI 1640培养基)中在冰上孵育2小时。然后将细胞沉淀，洗涤两次并与100μL的与ALexa Fluor Plus 488缀合的山羊抗小鼠IgG抗体一起孵育30分钟。再次沉淀细胞，用FACS缓冲液洗涤，然后重悬于200μL含1％甲醛的PBS中。使用FACSCaliburTM流式细胞仪与HTS多孔采样器采集样品，并使用CellQuestTMPro进行分析。对于每个样品，计算FL1的几何平均荧光强度，并以半对数图相对于抗体浓度作图。通过非线性回归生成剂量反应曲线，并使用GraphPad Prism v4计算每条曲线的EC50值(其对应于每种抗体的表观解离常数(Kd))。
如图1A和1B所示，mEpCAM23抗体的表观Kd在3.8x10-10至7.9x10-10的范围内。鉴定了mEpCAM23的序列，并选择了mEpCAM23克隆进行嵌合、人源化和进一步评估。
实施例3：EpCAM抗体的VL和VH的克隆和测序
VL和VH区的克隆
根据制造商的方案，使用
Figure BDA0003121673050002301
微型制备试剂盒从5×106个EpCAM杂交瘤细胞制备总细胞RNA。随后根据制造商的说明书，使用SuperScript
Figure BDA0003121673050002302
cDNA合成试剂盒从总RNA合成cDNA。
用于扩增源自杂交瘤细胞的抗体可变区cDNA的PCR程序是基于Wang等人(J.Immunol.Methods 233:167-177(2000))和Co等人(J.Immunol.148:1149-54(1992))中所描述的方法。简言之，VL和VH序列分别在5'端通过简并引物扩增，并且在3'端通过鼠κ或IgG1恒定区特异性引物扩增。将纯化的扩增子送到Genewiz进行Sanger测序。
由于用于克隆VL和VH cDNA序列的简并引物可改变5'端，因此需要额外的测序工作来验证完整的cDNA序列。将初步序列输入到NCBI IgBlast站点的搜索查询中，以鉴定抗体序列所来源于的鼠种系序列。然后将PCR引物设计为与鼠抗体的种系连接的前导序列退火，以使得新的PCR反应将产生完整的可变区cDNA序列，未因PCR引物而改变。
序列确认的质量确定
将针对每种EpCAM抗体获得的可变区cDNA序列与种系恒定区序列组合，以获得全长抗体cDNA序列。为了证实这些测序结果，将全长重链和轻链cDNA序列的分子量与通过纯化的鼠EpCAM抗体的LC/MS分析获得的分子量进行比较。
嵌合抗体表达和纯化
通过GenScript(New Jersey)，对鼠EpCAM抗体的可变区氨基酸序列进行密码子优化，合成并与人IgG1恒定区框内克隆，以构建EpCAM抗体的嵌合形式。简言之，将轻链可变区克隆到内部pAbKZeo质粒的EcoRI和BsiWI位点中，并将重链可变区克隆到内部pAbG1Neo质粒的HindIII和Apa1位点中。使用PEI作为摇瓶中的转染试剂，在悬浮液适应的HEK-293T细胞中瞬时产生这些表达构建体。如先前所述进行PEI瞬时转染(参见Durocher等人,NucleicAcids Res.30(2):E9(2002))，除了HEK-293T细胞在Freestyle 293(Invitrogen)中培养并且培养体积在添加PEI-DNA复合物后未稀释。将转染孵育一周，收获，然后使用蛋白A和CHT色谱法的组合使用实施例1中所述的程序纯化过滤的上清液。
实施例4：抗体人源化
基本上如Jones等人,Nature 321:604-608(1986)；Verhoeyen等人,Science 239:1534-1536(1988)；美国专利号5,225,539和5,585,089中所述，使用互补决定区(CDR)移植程序进行抗体人源化。CDR移植通常包括用人抗体Fv框架区置换小鼠抗体的Fv框架区(FR)，同时保留对于亲本抗体的特异性抗原结合性质至关重要的小鼠CDR残基。遵循Kabat CDR定义的鼠EpCAM-23抗体的示例性CDR在以下表13中指示。
表13.
Figure BDA0003121673050002311
CDR移植过程始于选择合适的人受体框架，通常是源自与亲本鼠抗体具有最高序列同源性的人抗体基因的框架。如Ehrenmann等人,Nucleic Acids Res.38:D301-307(2010)中所述，通常使用国际ImMunoGeneTics
Figure BDA0003121673050002321
(IMGT(http://imgt.cines.fr/))的交互式工具DomainGapAlign来鉴定这些受体框架。在选择与鼠序列具有最高序列同一性的VL和VH人种系序列之后，通过将鼠CDR移植到人种系序列中来产生抗体的人源化型式。由于鼠CDR与人框架之间的不相容性，常常观察到CDR移植后抗原结合亲和力降低或消除，Foote和Winter,J.Mol.Biol.224:487-499(1992)；然而，直接位于CDR下方的残基(称为游标区残基)的平台可能有助于保留指导抗体特异性和亲和力的CDR环构象。因此，经常需要这些游标区残基至鼠残基的回复突变来恢复结合亲和力。
图2A和2B示出原始muEpCAM-23轻链和重链序列的可变区之间的序列比对及其最接近的人种系匹配。基于比对结果，被选择作为EpCAM-23抗体的VL和VH结构域的受体框架的人种系序列分别是IGKV2D-29*02(图2A)和IGHV1-3*01(图2B)。
muEpCAM-23的初始CDR移植通过将VL的Kabat位置24-34(CDR-L1)、50-56(CDR-L2)和89-97(CDR-L2)以及VH的Kabat位置31-35(CDR-H1)、50-65(CDR-H2)和95-102(CDR-H3)移植到相应的人种系IGKV2D-29*01和IGHV1-3*01框架中来产生。初始CDR移植型式在VL中含有12个框架残基取代，并且在VH中含有27个框架残基变化。另外，还制备了含有游标区残基的一个或多个回复突变的变体，并且随后评估EpCAM结合。所测试的游标区残基回复突变包括VL中的3个残基(FW-L1中的位置4，以及FW-L2中的位置36、64)和VH中的6个残基(FW-H2中的位置47、48，FW-H3中的位置67、69、71和73)。此外，为了使缀合落入CDR中的赖氨酸残基的潜在影响最小化，在一些型式的CDR区域中，将赖氨酸残基用精氨酸置换。此外，在一些移植型式中，某些CDRH2残基被更改为IGHV1-3*01种系残基，以提高人性化程度。表14和表15分别列出各种人源化VL和VH型式之间的所有残基变化。合成、表达人源化的DNA构建体，并且基本上使用实施例2中所述的程序纯化重组抗体，用于随后的人EpCAM和食蟹猴EpCAM结合分析。
表14.EpCAM-23抗体VL的CDR移植
Figure BDA0003121673050002331
表15.EpCAM-23抗体VH的CDR移植
Figure BDA0003121673050002332
Figure BDA0003121673050002341
嵌合/人源化EpCAM抗体的结合亲和力
如实施例2中所述使用第二Alexa Fluor Plus 488缀合的山羊抗人抗体(Invitrogen)进行流式细胞术结合测定并进行分析。
测定嵌合抗体chEpCAM23与HSC2细胞(图3A)和食蟹猴原代肾上皮细胞(图3B)的结合亲和力。
EpCAM23的几种人源化型式保留了与人HSC2细胞的结合(图3C)。然而，仅Gv2.2型式(VL Gv2和VH Gv2)和Gv4.2型式(VL Gv4和VH Gv2)也保留了与食蟹猴原代肾上皮细胞的结合(图3D)。另外，制备并评估了具有半胱氨酸特异性缀合位点的Gv4.2的另一种形式huEpCAM23Gv4.2-C442。如图3E和3F所示，此抗体以与huEpCAM23Gv4.2相似的Kd结合至HSC2和食蟹猴原代肾上皮细胞。图4A和4B示出原始鼠EpCAM-23抗体、移植型式Gv 2.2和移植型式Gv 4.2的可变区的序列比对。通常使用赖氨酸或半胱氨酸残基将有效负载缀合至抗体，并且移植型式Gv4.2与型式Gv2.2的区别仅在于单个氨基酸(位置23中的赖氨酸至精氨酸)。因此，为了易于缀合，选择了Gv4.2进行进一步评估。
实施例5：huEpCAM-23Gv4.2抗体的亲和力调节
为了持久的肿瘤保留，单克隆抗体必须以高亲和力结合至抗原。然而，已经假设如果抗体与肿瘤抗原之间的相互作用太高，则单克隆抗体的有效肿瘤渗透可能会受到损害，从而导致体内功效降低。最佳亲和力可能是许多变量的函数，如抗原表达和异质性；肿瘤大小；受体内化和再循环的速率；脉管系统；旁观者杀伤活性；以及药物与抗体比率(DAR)(Vasalou等人,PLoS ONE 10(3):e0118977(2015)doi:10.1371/journal.pone.0118977)。因此，为了更好地理解所有这些变量的相互作用，创建了人源化抗体Gv4.2的亲和力变体。通过诱变溶剂暴露的CDR残基或VH/VL框架残基来创建变体，所述残基很少出现在小鼠/人天然组库中(频率<5％)。使用商业软件MOE(Chemical computing group)的抗体建模特征，通过创建Gv4.2抗体的同源性模型来鉴定溶剂暴露的位置。表16列出所探究的所有位置，并且表17示出各种变体与人HSC2细胞和食蟹猴原代肾上皮细胞的结合KD。基本上使用实施例2和4中所述的程序表达、纯化所有变体并且表征FACS结合。
表16.Gv4.2抗体的溶剂暴露位置。
Figure BDA0003121673050002361
Figure BDA0003121673050002371
表17.选择亲和力变体与人HSC2细胞和食蟹猴原代肾上皮细胞的结合。
Figure BDA0003121673050002372
Figure BDA0003121673050002381
Figure BDA0003121673050002391
Figure BDA0003121673050002401
Figure BDA0003121673050002411
*NS＝不饱和
实施例6：人源化抗EpCAM23Gv4.2抗体的亲和力变体的结合亲和力
使用mFc标记的huEpCAM或cynoEpCAM蛋白，在酶联免疫吸附测定(ELISA)中测试了一组初始的人源化抗EpCAM23Gv4.2亲和力变体。简言之，将每个mFc标记的EpCAM蛋白在pH9.6的50mM碳酸氢钠缓冲液中稀释至0.5ug/mL，并向每个孔中添加100μL。在4℃下孵育16小时后，将板用含0.1％Tween-20(TBST)的Tris缓冲盐水洗涤，然后用200μL封闭缓冲液(含1％BSA的TBS)封闭。接下来，将100μL的第一抗体(在封闭缓冲液中连续稀释的亲和力变体)一式两份添加至ELISA孔中，并在室温下孵育1小时。然后将板用TBST洗涤3次，然后向每个孔中添加100μL的抗人IgG(H+L)-HRP。将板在室温下再次孵育1小时，然后用TBST洗涤3次。最后，将100μL的TMB单组分HRP微孔底物添加至每个孔中，并孵育5分钟。通过添加100μL终止溶液终止反应，并在多孔板读数器中读取450nm处的吸光度。在半对数图中将OD450相对于抗体浓度作图。通过非线性回归生成剂量反应曲线，并使用GraphPad Prism v6计算每条曲线的EC50值。
来自ELISA测定的结果示于图5A和5B(对于在轻链中包含突变的变体)以及图5C和5D(对于在重链中包含突变的变体)中。在图5A-5D中示出的七种变体表现出不同的结合谱，其中轻链变体Gv4c.2和重链变体Gv4.2c表现出特别不同的结合。变体Gv4c.2显示在三种轻链突变变体中与cynoEpCAM-mFc蛋白的结合最弱，亲和力比其亲本抗体弱约3倍(图5B)。然而，变体Gv4c.2显示出与亲本抗体相似的与huEpCAM-mFc的KD(图5A)。在四种重链突变变体中，变体Gv4.2c显示出与cynoEpCAM-mFc的结合显著降低(图5D)，但是显示出与亲本抗体相比，与huEpCAM-mFc的类似结合(图5C)。使用这些重链和轻链变体的不同组合，除了上述单一突变变体之外，还制备了双重突变变体。
将另外的人源化抗EpCAM23Gv4.2亲和力变体与HSC2细胞和食蟹猴原代肾上皮细胞的结合亲和力与亲本抗体的结合亲和力进行了比较。如实施例2和4中所述进行流式细胞术结合测定并进行分析，并且评估了总计60种变体。图5E-5H示出双重突变体变体的结合曲线，并且图5I-5K示出在huEpCAM23Gv4.2重链中含有单一突变的某些亲和力变体的结合曲线。如图5E-5K中所示，产生了具有多种结合谱的变体。特别地，双重突变变体Gv4a.2a、Gv4b.2a和Gv4c.2a表现出非常高的荧光强度，并且未能使两种细胞类型饱和：HSC2(图5E)和食蟹猴原代肾上皮细胞(图5F)。另外，变体Gv4a.2b和Gv4b.2b表现出与食蟹猴原代肾上皮细胞上的亲本抗体相比，亲和力降低约4倍(图5H)，但在HSC2细胞上显示出相似的结合(图5G)。双重突变变体Gv4b.2d、Gv4c.2b和Gv4c.2d在食蟹猴原代肾上皮细胞上具有非常差的结合，但相对于亲本抗体在HSC2细胞上具有相似的结合。如图5I-5K所示，单一突变亲和力变体的表观解离常数(Kd)在0.8nM至约6nM的范围内，其代表与HSC2细胞上的亲本抗体huEpCAM23Gv4.2(Kd 0.4nM)相比的2至15倍增加。还用食蟹猴原代肾上皮细胞测试了这些单一突变变体，数据在图5L-5N中示出。
特别地，huEpCAM23Gv4.2Q在HSC2细胞和食蟹猴原代肾细胞上均表现出高荧光强度，而huEpCAM23Gv4.2R仅在HSC2细胞上表现出高荧光强度(图5I和5L)。huEpCAM23Gv4.2H和huEpCAM23Gv4.2L表现出相似的Kd值，但与食蟹猴原代肾上皮细胞上的非常差的结合相关。图5I和5L中所示的其它克隆在两种细胞类型上均饱和，并与各种Kd值相关。
图5J和5M示出在CDR1的相同位置中含有特定氨基酸取代的亲和力变体的结合特征(即，将位置33位处的原始Y残基用另一种氨基酸取代)。与亲本抗体相比，图5J和5M中所示的所有变体在HSC2细胞上都具有降低的Kd值，并且在食蟹猴原代肾上皮细胞上表现出非常差的结合(huEpCAM23Gv4.2-1361-I除外)。图5K和5N示出在CDR3的相同位置中含有特定氨基酸取代的亲和力变体的结合特征(即，将位置97位处的原始P残基用另一种氨基酸取代)。huEpCAM23Gv4.2-1565-Y变体使HSC2细胞和食蟹猴原代上皮细胞两者饱和，与亲本抗体相比Kd值降低，而其余变体仅在HSC2细胞上饱和，并且在食蟹猴原代肾上皮细胞上不饱和。
总之，这些数据表明产生了具有各种几何平均荧光结合强度和一系列Kd的亲和力变体。基于这些结果，选择了两种亲和力变体huEpCAM23Gv4.2-1361-H和huEpCAM23Gv4.2-1565-Y进行进一步评估。特别地，选择这些变体是因为它们相对于亲本抗体在HSC2细胞上稍微较低的结合亲和力(即，与HSC2细胞上的亲本抗体相比，Kd降低约3倍)和它们的不同突变位点。
实施例7：掩蔽物发现
本文提供的研究旨在鉴定和表征用于可活化抗EpCAM抗体(“可活化抗体”)中的掩蔽部分(MM或“掩蔽物”)。
使用与2010年7月15日公布的PCT国际公布号WO 2010/081173中描述的方法类似的方法，与人和食蟹猴EpCAM发生交叉反应的人源化抗人EpCAM单克隆抗体(EpCAM23Gv4.2)用于筛选随机X15肽文库，其中X是任何氨基酸。筛选包括一轮MACS和三轮FACS分选。使用具有抗EpCAM抗体的蛋白A Dynabeads(Invitrogen)进行初始MACS分选。对于MACS，将抗EpCAM抗体与DyLight-488(ThermoFisher)缀合，确认EpCAM结合活性，并且将抗EpCAM-488用作所有FACS轮次的荧光探针。通过来自每个FACS轮次的序列分析鉴定单独肽克隆。
产生了人源化抗人EpCAM单克隆抗体的两种重链变体(EpCAM23(1361-H)和EpCAM23(1565-Y))，并使用与2010年7月15日公布的PCT国际公布号WO 2010/081173中描述的方法类似的方法筛选随机X15肽库其中X是任何氨基酸。使用EpCAM23(1565-Y)重链变体鉴定了掩蔽物EP101至EP 104。使用EpCAM23(1361-H)重链变体鉴定了掩蔽物EP105至EP 110。还产生了Ep107掩蔽部分中赖氨酸残基的突变
表18列出了选定抗EpCAM掩蔽部分的序列。
表18.EpCAM可活化抗体的掩蔽部分。
Figure BDA0003121673050002441
Figure BDA0003121673050002451
这些掩蔽肽用于产生本公开的抗EpCAM可活化抗体。某些这些抗EpCAM可活化抗体的氨基酸序列在以下表19中示出。在一些实施方案中，本公开的这些抗EpCAM可活化抗体包括ISSGLLSGRSDNH(SEQ ID NO:242)、AVGLLAPPGGLSGRSDNH(SEQ ID NO:243)、ISSGLLSGRSDIH(SEQ ID NO:244)、ISSGLLSGRSDQH(SEQ ID NO:245)、ISSGLLSGRSDNP(SEQID NO:246)、ISSGLLSGRSANP(SEQ ID NO:247)、ISSGLLSGRSANI(SEQ ID NO:248)、ISSGLLSGRSDNI(SEQ ID NO:169)、AVGLLAPPGGLSGRSDIH(SEQ ID NO:249)、AVGLLAPPGGLSGRSDQH(SEQ ID NO:250)、AVGLLAPPGGLSGRSDNP(SEQ ID NO:251)、AVGLLAPPGGLSGRSANP(SEQ ID NO:252)、AVGLLAPPGGLSGRSANI(SEQ ID NO:253)或AVGLLAPPGGLSGRSDNI(SEQ ID NO:168)。在一些实施方案中，本公开的某些抗EpCAM可活化抗体包括不可裂解的部分“NSUB”，其预期不会被裂解。
虽然以下所示的本公开的可活化抗体的某些轻链序列包含QGQSGQG(SEQ ID NO:254)的N末端间隔区序列，但是本领域普通技术人员应理解，本公开的可活化抗EpCAM抗体可包含任何合适的间隔区序列，例如选自由以下组成的组的间隔区序列：QGQSGQ(SEQ IDNO:255)、QGQSG(SEQ ID NO:256)、QGQS(SEQ ID NO:257)、QGQ、QG、GQSGQG(SEQ ID NO:258)、QSGQG(SEQ ID NO:259)、SGQG(SEQ ID NO:260)、GQG、G或Q。在一些实施方案中，本公开的可活化抗EpCAM抗体的轻链可不具有连接至N末端的间隔区序列。
表19.本公开的可活化抗体的可变轻链氨基酸序列。
Figure BDA0003121673050002461
Figure BDA0003121673050002471
Figure BDA0003121673050002481
Figure BDA0003121673050002491
Figure BDA0003121673050002501
Figure BDA0003121673050002511
Figure BDA0003121673050002521
具有以下重链和轻链的示例性抗EpCAM可活化抗体在以下表20中示出。
表20.抗EpCAM可活化抗体。
Figure BDA0003121673050002522
Figure BDA0003121673050002531
Figure BDA0003121673050002541
Figure BDA0003121673050002551
使用固相结合测定来证明本公开的抗人EpCAM抗体的结合。简言之，将重组人EpCAM-mFC蛋白(Immunogen)包被在ELISA板上(50μL的1μg/mL)，然后与连续稀释的抗EpCAM抗体(起始于62.5nM)或可活化抗EpCAM抗体(起始于1μM)一起孵育，其中可活化抗体以其未裂解形式进行测定。使用与辣根过氧化物酶(Sigma)缀合的抗人IgG(抗Fab)与Ultra TMB-ELISA试剂(Thermo Fisher Scientific)检测结合的抗体的量，并在450nM下测量OD。测量每种抗体和可活化抗体的KD，并计算每种可活化抗体相对于未掩蔽抗体的ELISA掩蔽效率(ME)，示例性结果在表21和22中示出。总体而言，这些数据表明，与本公开的亲本抗EpCAM抗体相比，本公开的抗人EpCAM可活化抗体展示与重组EpCAM蛋白的结合亲和力改变。
表21.抗EpCAM可活化抗体掩蔽效率。
Figure BDA0003121673050002552
Figure BDA0003121673050002561
表22.抗EpCAM可活化抗体掩蔽效率。
Figure BDA0003121673050002562
Figure BDA0003121673050002571
如表21和表22所示，这些示例性结果证明，相对于未掩蔽的抗EpCAM抗体，抗人EpCAM可活化抗体显示出一系列掩蔽效率。
实施例8：抗EpCAM23Gv4.2可活化抗体、抗体-药物缀合物和可活化抗体-药物缀合物的结合亲和力
通过流式细胞术评估了包含huEpCAM23Gv4.2和7种不同掩蔽物之一的可活化抗体和可活化抗体-药物缀合物(“AADC”)的结合亲和力。特别地，使用抗体huEpCAM23Gv4.2、酶敏感性底物3014和选自Ep1-2、Ep-2、Ep03、Ep04、Ep05、Ep07和Ep11的掩蔽物产生了可活化抗体和可活化抗体药物缀合物。还产生了包含通过不可裂解的肽部分(“NSUB”或“非底物”)连接至抗体的掩蔽物的可活化抗体以用作阴性对照。NSUB不是蛋白酶的底物，并且不能从包含NSUB的可活化抗体中除去掩蔽物。因此，预期即使在用uPA处理后，包含NSUB的可活化抗体仍保持无活性。
体外EpCAM可活化抗体/AADC活化
为了在体外激活底物化的EpCAM可活化抗体，在PBS中以1mg/ml制备所需量的可活化抗体，然后将uPA添加至溶液中至终浓度为1μM(基于蛋白质浓度)。然后将所述溶液在37℃下在加湿5％CO2孵育箱中孵育过夜。
EpCAM可活化抗体结合亲和力
将EpCAM可活化抗体与HSC2细胞的结合亲和力与亲本抗体huEpCAM23Gv4.2的结合亲和力以及呈活化和未活化形式的可活化抗体之间的结合亲和力进行了比较。可活化抗体如上所述被活化。如实施例2中所述使用第二Alexa Flour plus 488缀合的山羊抗人抗体进行流式细胞术结合测定并进行分析。如图6A中所示，未活化的可活化抗体与细胞的结合非常差，表观Kd>1X10-7M，而活化的可活化抗体保留与亲本抗体相似水平的结合亲和力。使用食蟹猴原代肾细胞对5种可活化抗体进行了进一步测试，并且观察到相似的结果(参见图6B)。在HSC2和食蟹猴原代肾上皮细胞中，活化的对比未活化的可活化抗体的表观Kd值相差超过10倍。
与抗huEpCAM23Gv4.2抗体和抗huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014可活化抗体缀合的 sSPDB-DM4和DGN549的结合亲和力
使用HSC2细胞测定了huEpCAM23Gv4.2的sSPDB-DM4和DGN549 ADC缀合物以及用3014/NSUB和各种掩蔽物底物化的huEpCAM23Gv4.2的活化AADC的结合亲和力。可活化抗体如上所述被活化。如实施例2中所述使用第二Alexa Flour plus 488缀合的山羊抗人抗体进行流式细胞术结合测定并进行分析。特别地，将用3014底物化的活化DGN549 AADC与DGN549 ADC的结合亲和力进行了比较，并且将用3014底物化的活化sSPDB-DM4 AADC与sSPDB-DM4 ADC以及它们的NSUB形式对应物进行了比较。sSPDB-DM4缀合物的结合曲线提供于图7A中，并且DGN549缀合物的结合曲线提供于图7B中。如图7A和7B所示，活化的AADC与HSC2细胞具有与相应的ADC相似的结合。相比之下，NSUB AADC表现出与细胞的结合较弱。这些数据证明，可活化抗体与细胞的结合能力可通过用uPA处理得以恢复，所述uPA可通过3014底物而不是通过NSUB底物从可活化抗体中除去掩蔽物。
实施例9：与huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014和huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014缀合的sSPDB-DM4、DM21和DGN549的结合亲和力
包含huEpCAM23Gv4.2与Ep05掩蔽物的另外可活化抗体是用另一种底物(2014)制备的。通过将sSPDB-DM4、DM21L和DGN549与huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014缀合，以及通过将sSPDB-DM4和DM21L与huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014缀合，产生了AADC用于进一步评估。以活化和非活化形式测定缀合物与HSC2细胞的结合亲和力，并将AADC的亲和力与相应的可活化抗体和野生型抗体两者进行比较。如实施例2中所述使用PE缀合的山羊抗人抗体进行流式细胞术结合测定并进行分析。如实施例8中所述活化可活化抗体和AADC。huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-sSPDB-DM4、huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-sSPDB-DM4和huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-DGN549的结合亲和力分别在图8A、8B和8C中示出。huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-DM21L和huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-DM21L的结合亲和力示于图8D中。活化的可活化抗体和AADC对HSC2细胞具有与野生型抗体相似的结合亲和力，而失活的形式不与细胞良好结合。这些结果与实施例4-6和8中所述的结果一致。
实施例10：表位作图
人CD326抗原EpCAM(上皮细胞粘附分子)由314个氨基酸组成，含有265个氨基酸的细胞外结构域、23个氨基酸的跨膜结构域和26个氨基酸的细胞质尾。细胞外结构域可进一步分为三个结构域(D1、D2和D3)。细胞外结构域含有两个富含半胱氨酸的表皮生长因子样(EGF样)重复序列，所述重复序列包含第一结构域，所述第一结构域包含从成熟蛋白(即信号肽裂解之前)的位置24的谷氨酰胺至位置59的半胱氨酸的区域(参见SEQ ID NO:2)；以及第二结构域，所述第二结构域包含从位置66的半胱氨酸至位置135的半胱氨酸的区域(参见SEQ ID NO:3)。然后，与前两个结构域串联，还存在不含半胱氨酸的第三结构域(D3)，其包含氨基酸残基136-243(参见SEQ ID NO:4)。
Figure BDA0003121673050002601
利用人和小鼠EpCAM的细胞外结构域的组合，通过对嵌合蛋白进行工程化来对人源化EpCAM抗体Gv4.2的表位作图。因为人和小鼠的EpCAM具有超过82％的氨基酸序列同一性和85％的相似性(参见图9)，所以嵌合蛋白的拓扑结构应保持完整。
EpCAM嵌合变体克隆和表达
利用Genscript处的HindIII和BamHI限制位点，对人EpCAM的细胞外区域(残基1-265)进行密码子优化，合成并且框内克隆到含有小鼠IgG2a Fc区的载体(pGSmuFc2ANL)中。类似地，通过置换对应于人EpCAM结构域D1(24-59)、结构域D2(66-135)、结构域D3(136-265)或其与相应的小鼠残基的组合合成了含有人/小鼠EpCAM细胞外结构域的各种嵌合变体的其它表达载体。图10A和10B示出各种嵌合变体的细胞外区域的比对。使用PEI作为摇瓶中的转染试剂，在悬浮液适应的HEK-293T细胞中瞬时产生这些表达构建体。将转染孵育一周，收获，并使用蛋白A和CHT色谱法的组合，基本上使用实施例1中所述的程序纯化滤过的上清液。
抗体与各种EpCAM构建体的结合
以酶联免疫吸附测定(ELISA)格式测试人源化EpCAM抗体huEpCAM23Gv4.2与上述EpCAM蛋白的结合。简言之，基本上如实施例1所述，使用蛋白A和CHT色谱法的组合纯化每种mFc标记的EpCAM蛋白。将每种mFc标记的EpCAM蛋白在50mM碳酸氢钠缓冲液(pH 9.6)中稀释至0.5ug/mL，并且将100μL添加至每个孔。在4℃下孵育16小时后，将板用含0.1％Tween-20(TBST)的Tris缓冲盐水洗涤，然后用200μL封闭缓冲液(含1％BSA的TBS)封闭。接下来，将100μL的第一抗体(在封闭缓冲液中连续稀释的huEpCAM23Gv4.2)一式两份添加至ELISA孔中，并在室温下孵育1小时。然后将板用TBST洗涤3次，然后向每个孔中添加100μL的抗人IgG(H+L)-HRP。将板在室温下再次孵育1小时，然后用TBST洗涤3次。最后，将100μL的TMB单组分HRP微孔底物添加至每个孔中，并孵育5分钟。通过添加100μL终止溶液终止反应，并在多孔板读数器中读取450nm处的吸光度。在半对数图中将OD450相对于抗体浓度作图。通过非线性回归生成剂量反应曲线，并使用GraphPad Prism v6计算每条曲线的EC50值。
与野生型EpCAM相比，评估了huEpCAM23Gv4.2抗体与嵌合EpCAM蛋白的结合。图11证明huEpCAM23Gv4.2抗体以与野生型EpCAM相似的亲和力结合至EpCAM-D2(66-135)和EpCAM-D3(136-265)两者。相反，huEpCAM23Gv4.2抗体不结合至EpCAM-D1和D1/D2构建体，并且对于嵌合蛋白EpCAM-D1(24-59)构建体结合几乎消除。这些结果表明，huEpCAM23Gv4.2抗体的表位主要位于EpCAM的D1(24-59)结构域内。
实施例11：EpCAM抗体药物缀合物和可活化抗体药物缀合物的制备
huEpCAM23Gv4.2-磺基-SPDB-DM4缀合物的制备
分别使用280、343和412nm处的UV/Vis吸光度值和消光系数，根据比尔定律计算huEpCAM23Gv4.2、磺基-SPDB和DM4的摩尔浓度。通过使接头与50mM DTT在50mM磷酸钾缓冲液(pH 7.5)中反应并测量343nm处的硫代吡啶释放来确定接头浓度。通过使DM4与10mMDTNB[5,5-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)]在pH 7.5的50mM磷酸钾缓冲液中反应并测量412nm处的吸光度来确定药物浓度。
在抗体缀合之前，通过在20℃下使5.0mM磺基-SPDB与6.3mM DM4在30％水溶液[50mM EPPS pH 8.0(4-(2-羟乙基)-哌嗪丙磺酸)]和70％有机物[(N-N-二甲基乙酰胺，DMA，SAFC)]中反应90分钟来制备磺基SPDB-DM4原位混合物。在缀合反应过程中，使8-10mg/mL抗体的溶液与含8％DMA(v/v)的50mM EPPS(pH 8.0)中相对于抗体5至6倍摩尔过量的磺基-SPDB-DM4在25℃下反应15-20小时。使用NAP脱盐柱将反应物纯化到10mM组氨酸、250mM甘氨酸、1％蔗糖和0.01％Tween-20(pH 5.0)配制缓冲液中，并通过具有0.22μm PVDF膜的注射器过滤器过滤。
如下所述确定缀合至抗体的DM4的摩尔比(DAR)和未缀合的美登木素生物碱物质的百分比。通过UV-Vis发现纯化的缀合物具有3.7mol的DM4/mol抗体，通过SEC发现纯化的缀合物具有95％的单体，并且通过HPLC Hisep柱分析发现纯化的缀合物具有低于1％的游离药物。
通过测量252和280nm处的UV/Vis吸光度并使用考虑了每种组分的贡献的二项式方程计算[Ab]和[DM4]来确定DAR。最终huEpCAM23Gv4.2-磺基-SPDB-DM4缀合物中存在的未结合的美登木素生物碱的量是根据通过HISEP柱分析的样品中观察到的所得峰面积(25cmx 4.6mm，5μm)计算的。使用以下等式计算缀合物样品中存在的游离美登木素生物碱百分比(FM％)：游离美登木素生物碱％＝(由于DM4引起的反相PA 252)/(由于DM4引起的反相PA252+由于DM4引起的流过PA 252)x 100％。
huEpCAM23Gv4.2 Ep05-3014-磺基-SPDB-DM4 AADC缀合物的制备
在抗体缀合之前，通过在20℃下使5.0mM磺基-SPDB与6.3mM DM4在30％水溶液[50mM EPPS pH 8.0(4-(2-羟乙基)-哌嗪丙磺酸)]和70％有机物[(N-N-二甲基乙酰胺，DMA，SAFC)]中反应90分钟来制备磺基SPDB-DM4原位混合物。在缀合反应过程中，使8-10mg/mL抗体的溶液与含8％DMA(v/v)的50mM EPPS(pH 8.0)中相对于抗体5至6倍摩尔过量的磺基-SPDB-DM4在25℃下反应4-5小时。使用NAP脱盐柱将反应物纯化到10mM组氨酸、250mM甘氨酸、1％蔗糖和0.01％Tween-20(pH 5.0)配制缓冲液中，并通过具有0.22μm PVDF膜的注射器过滤器过滤。通过UV-Vis发现纯化的缀合物具有3.6mol的DM4/mol可活化抗体，通过SEC发现纯化的缀合物具有98％的单体，并且通过HPLC Hisep柱分析发现纯化的缀合物具有低于1％的游离药物。
huEpCAM23Gv4.2 Ep05-2014-磺基-SPDB-DM4 AADC缀合物的制备
在抗体缀合之前，通过在20℃下使5.0mM磺基-SPDB与6.3mM DM4在30％水溶液[50mM EPPS pH 8.0(4-(2-羟乙基)-哌嗪丙磺酸)]和70％有机物[(N-N-二甲基乙酰胺，DMA，SAFC)]中反应90分钟来制备磺基SPDB-DM4原位混合物。在缀合反应过程中，使8-10mg/mL抗体的溶液与含8％DMA(v/v)的50mM EPPS(pH 8.0)中相对于抗体5至6倍摩尔过量的磺基-SPDB-DM4在25℃下反应4-5小时。使用NAP脱盐柱将反应物纯化到10mM组氨酸、250mM甘氨酸、1％蔗糖和0.01％Tween-20(pH 5.0)配制缓冲液中，并通过具有0.22μm PVDF膜的注射器过滤器过滤。通过UV-Vis发现纯化的缀合物具有3.6mol的DM4/mol可活化抗体，通过SEC发现纯化的缀合物具有98％的单体，并且通过HPLC Hisep柱分析发现纯化的缀合物具有低于1％的游离药物。
huEpCAM23Gv4.2 Ep05-NSUB-磺基-SPDB-DM4 AADC缀合物的制备
在抗体缀合之前，通过在20℃下使5.0mM磺基-SPDB与6.3mM DM4在30％水溶液[50mM EPPS pH 8.0(4-(2-羟乙基)-哌嗪丙磺酸)]和70％有机物[(N-N-二甲基乙酰胺，DMA，SAFC)]中反应90分钟来制备磺基SPDB-DM4原位混合物。在缀合反应过程中，使8-10mg/mL抗体的溶液与含8％DMA(v/v)的50mM EPPS(pH 8.0)中相对于抗体5至6倍摩尔过量的磺基-SPDB-DM4在25℃下反应4-5小时。使用NAP脱盐柱将反应物纯化到10mM组氨酸、250mM甘氨酸、1％蔗糖和0.01％Tween-20(pH 5.0)配制缓冲液中，并通过具有0.22μm PVDF膜的注射器过滤器过滤。通过UV-Vis发现纯化的缀合物具有3.8mol的DM4/mol可活化抗体，通过SEC发现纯化的缀合物具有99％的单体，并且通过HPLC Hisep柱分析发现纯化的缀合物具有低于1％的游离药物。
huEpCAM23Gv4.2-GMBS-DM21L缀合物的制备
分别使用280、343和412nm处的UV/Vis吸光度值和消光系数，根据比尔定律计算huEpCAM23Gv4.2、磺基-GMBS和DM21的摩尔浓度。通过使接头与50mM DTT在50mM磷酸钾缓冲液(pH 7.5)中反应并测量343nm处的硫代吡啶释放来确定接头浓度。通过使DM21与10mMDTNB[5,5-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)]在pH 7.5的50mM磷酸钾缓冲液中反应并测量412nm处的吸光度来确定药物浓度。
在缀合之前，通过使3mM磺基-GMBS与3.9mM DM21分别在60/40(v/v)DMA和pH 5.0的琥珀酸盐缓冲液中反应来制备磺基-GMBS-DM21原位混合物。在含15％DMA(v/v)的60mM4-(2-羟乙基)-1-哌嗪丙磺酸(EPPS)(pH 8.5)中，用相对于5mg/mL的抗体6-7个接头过量的磺基-GMBS-DM21进行缀合。在25℃下孵育4-5小时后，使用NAP脱盐柱将反应物纯化到10mM组氨酸、250mM甘氨酸、1％蔗糖和0.01％Tween-20(pH 5.0)中，并通过0.22μm PVDF膜过滤器过滤。
如下所述确定缀合至抗体的DM21的摩尔比(DAR)和未缀合的美登木素生物碱物质的百分比。通过UV-Vis发现纯化的缀合物具有3.7mol的DM21/mol抗体，通过SEC发现纯化的缀合物具有95％的单体，并且通过HPLC Hisep柱分析发现纯化的缀合物具有低于1％的游离药物。
通过测量252和280nm处的UV/Vis吸光度并使用考虑了每种组分的贡献的二项式方程计算[Ab]和[DM21]来确定缀合至抗体的DM21的摩尔比(DAR)。最终huEpCAM23Gv4.2-GMBS-DM21缀合物中存在的未结合的美登木素生物碱的量是根据通过HISEP柱分析的样品中观察到的所得峰面积(25cm x 4.6mm，5μm)计算的。使用以下等式计算缀合物样品中存在的游离美登木素生物碱百分比(FM％)：游离美登木素生物碱％＝(由于DM21引起的反相PA252)/(由于DM21引起的反相PA 252+由于DM21引起的通过PA 252的流量)x 100％。
huEpCAM23Gv4.2Ep05-3014-GMBS-DM21L缀合物的制备
在缀合之前，通过使3mM磺基-GMBS与3.9mM DM21分别在60/40(v/v)DMA和pH 5.0的琥珀酸盐缓冲液中反应来制备磺基-GMBS-DM21原位混合物。在含15％DMA(v/v)的60mM4-(2-羟乙基)-1-哌嗪丙磺酸(EPPS)(pH 8.5)中，用相对于5mg/mL的可活化抗体6-7个接头过量的磺基-GMBS-DM21进行缀合。在25℃下孵育4-5小时后，使用NAP脱盐柱将反应物纯化到10mM组氨酸、250mM甘氨酸、1％蔗糖和0.01％Tween-20(pH 5.0)中，并通过0.22μm PVDF膜过滤器过滤。通过UV-Vis发现纯化的缀合物具有3.6mol的DM21/mol可活化抗体，通过SEC发现纯化的缀合物具有99％的单体，并且通过HPLC Hisep柱分析发现纯化的缀合物具有低于1％的游离药物。
huEpCAM23Gv4.2Ep05-2014-GMBS-DM21L缀合物的制备
在缀合之前，通过使3mM磺基-GMBS与3.9mM DM21分别在60/40(v/v)DMA和pH 5.0的琥珀酸盐缓冲液中反应来制备磺基-GMBS-DM21原位混合物。在含15％DMA(v/v)的60mM4-(2-羟乙基)-1-哌嗪丙磺酸(EPPS)(pH 8.5)中，用相对于5mg/mL的可活化抗体6-7个接头过量的磺基-GMBS-DM21进行缀合。在25℃下孵育4-5小时后，使用NAP脱盐柱将反应物纯化到10mM组氨酸、250mM甘氨酸、1％蔗糖和0.01％Tween-20(pH 5.0)中，并通过0.22μm PVDF膜过滤器过滤。通过UV-Vis发现纯化的缀合物具有3.6mol的DM21/mol可活化抗体，通过SEC发现纯化的缀合物具有99％的单体，并且通过HPLC Hisep柱分析发现纯化的缀合物具有低于1％的游离药物。
huEpCAM23Gv4.2-DGN549缀合物(赖氨酸连接的)的制备
分别使用280和330nm处的UV/Vis吸光度值和它们的消光系数，根据比尔定律计算huEpCAM23Gv4.2和SO3-DGN549-NHS的摩尔浓度。DGN549-NHS药物储备液是在DMA中制备的，并在乙醇中稀释以测量330nm吸光度。在室温下通过在90％DMA和10％50mM琥珀酸(pH 5.0)中添加相对于DGN549-NHS 5-10摩尔过量的NaHSO3进行DGN549-NHS磺化反应持续3-4小时。
通过在50mM EPPS(pH 8.0)、15％DMA(v/v)中使相对于2mg/mL的抗体4-5摩尔过量的磺化DGN549-NHS试剂(D2)反应来制备huEpCAM23Gv4.2-DGN549缀合物。反应在25℃下进行3-5小时。将反应混合物通过Sephadex G-25柱纯化，所述柱在含10mM组氨酸、250mM甘氨酸、1％蔗糖和0.01％Tween-20、50μM亚硫酸氢钠(pH 5.0)的缓冲液中平衡；并用0.22umPVDF过滤器过滤。如下文所述确定每抗体DGN549的摩尔比(DAR)和总游离DGN549物质的百分比。获得每抗体具有2.7个DGN549分子的huEpCAM23Gv4.2-DGN549c缀合物，其中<1％作为未缀合DGN549存在。
对于DGN缀合物，通过测量280和330nm处的UV/Vis吸光度并根据比尔定律计算[Ab]和[DGN549]来确定DAR。为了确定未缀合的DGN549的量，将缀合物通过双柱系统(TOSOHSEC QC-PAK GFC 300和Agilent Zorbax C18柱)以计算游离DGN549的总AUC。游离DGN549被报告为未缀合的DGN549相对于总DGN549的比率。
huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-DGN549缀合物(赖氨酸连接的)的制备
通过在50mM EPPS(pH 8.0)、15％DMA(v/v)中使相对于2mg/mL的可活化抗体4-5摩尔过量的磺化DGN549-NHS试剂(D2)反应来制备huEpCAM23Gv4.2-DGN549缀合物。反应在25℃下进行3-5小时。将反应混合物通过Sephadex G-25柱纯化，所述柱在含10mM组氨酸、250mM甘氨酸、1％蔗糖和0.01％Tween-20、50μM亚硫酸氢钠(pH 5.0)的缓冲液中平衡；并用0.22um PVDF过滤器过滤。获得每个可活化抗体含2.6个DGN549分子的缀合物，其中<1％作为未缀合的DGN549存在。
huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-DGN549缀合物(赖氨酸连接的)的制备
通过在50mM EPPS(pH 8.0)、15％DMA(v/v)中使相对于2mg/mL的可活化抗体4-5摩尔过量的磺化DGN549-NHS试剂(D2)反应来制备huEpCAM23Gv4.2-DGN549缀合物。反应在25℃下进行3-5小时。将反应混合物通过Sephadex G-25柱纯化，所述柱在含10mM组氨酸、250mM甘氨酸、1％蔗糖和0.01％Tween-20、50μM亚硫酸氢钠(pH 5.0)的缓冲液中平衡；并用0.22um PVDF过滤器过滤。获得每个可活化抗体含2.8个DGN549分子的缀合物，其中<1％作为未缀合的DGN549存在。
huEpCAM23Gv4.2-Ep05-NSUB-DGN549缀合物(赖氨酸连接的)的制备
通过在50mM EPPS(pH 8.0)、15％DMA(v/v)中使相对于2mg/mL的可活化抗体4-5摩尔过量的磺化DGN549-NHS试剂(D2)反应来制备huEpCAM23Gv4.2-DGN549缀合物。反应在25℃下进行3-5小时。将反应混合物通过Sephadex G-25柱纯化，所述柱在含10mM组氨酸、250mM甘氨酸、1％蔗糖和0.01％Tween-20、50μM亚硫酸氢钠(pH 5.0)的缓冲液中平衡；并用0.22um PVDF过滤器过滤。获得每个可活化抗体含2.9个DGN549分子的缀合物，其中<1％作为未缀合的DGN549存在。
huEpCAM23Gv4.2-C442-DGN549缀合物的制备
使用标准程序制备了处于还原状态的带有两个未配对的半胱氨酸残基的huEpCAM23Gv4.2-C442抗体。使用这种中间体以PBS中1mg/mL的最终抗体浓度进行缀合反应，所述PBS含有5mM EDTA(pH 6.0)和10摩尔当量的Mal-DGN549(或D5，作为DMA中的8.2mM储备溶液)与2％v/v DMA和38％v/v丙二醇。缀合反应在25℃下在水浴中进行15-20小时。通过Sephadex G-25柱将缀合物纯化到10mM组氨酸、250mM甘氨酸、1％蔗糖、0.01％Tween-20和50μM亚硫酸氢钠(pH 5.0)缓冲液中，并且通过0.22μm PVDF注射器过滤器过滤。获得每个抗体含2.0个DGN549分子的缀合物，其中<1％作为未缀合的DGN549存在。
实施例12.EpCAM抗体和EpCAM可活化抗体缀合物的体外细胞毒性
使用体外细胞毒性测定测量靶向EpCAM的抗体-药物缀合物(ADC)和可活化抗体-药物缀合物(AADC)杀伤肿瘤细胞的能力。为了评估特异性杀伤，在有和没有封闭抗体的情况下测量抗EpCAM ADC的效力。简言之，将靶细胞以每孔2000个细胞涂铺在ATCC所推荐的100μL完整细胞培养基中。将仅50ul/孔的培养基(非封闭条件)或500nM的裸EpCAM抗体(用于封闭)添加到溶液中。将缀合物在完全细胞培养基中连续稀释，并且每孔添加50μL的每种稀释液。缀合物的最终浓度通常在1.5x10-13M至5x10-8M的范围内。然后将细胞在37℃下在加湿5％CO2孵育箱中孵育5至6天，并且通过比色WST-8测定确定剩余细胞的活力。WST-8被活细胞中的脱氢酶还原为可溶于组织培养基中的橙色甲臜产物，并且所产生的甲臜的量与活细胞的数量成正比。将WST-8添加至最终体积的10％，然后将板在37℃下在加湿5％CO2孵育箱中再孵育2至4小时。通过在多孔板读数器中测量450nm处的吸光度(A450)来分析板，并从所有值中减去仅含培养基和WST-8的孔的背景A450吸光度。通过将每个处理的样品值除以具有未处理细胞的孔的平均值来计算活力百分比。活力百分比＝100*(A450处理的样品–A450背景)/(A450未处理的样品–A450背景)。对于每种处理，在半对数图将活力百分比值相对于抗体浓度作图，通过非线性回归生成剂量反应曲线，并使用GraphPad Prism 6计算每条曲线的EC50值。
EpCAM ADC在NSCLC、CRC和HNC中的体外细胞毒性活性
在表达EpCAM的NSCLC细胞系H1568、H292和H2110、CRC细胞系LoVo和HNC细胞系Detroit562中，在有和没有EpCAM抗体封闭的情况下，评估了huEpCAM23Gv4.2-sSBDP-DM4缀合物的体外细胞毒性。来自细胞毒性测定的结果在图12A-12E中示出。特别地，huEpCAM23Gv4.2-sSBDP-DM4在所有测试的五种细胞系中均具有特异性细胞杀伤。在没有封闭的情况下huEpCAM23Gv4.2-sSPDB-DM4缀合物的EC50值在H1568细胞中为0.06nM，在H292细胞中为0.07nM，在H2110细胞中为0.09nM，在Lovo细胞中为0.02nM，并且在Detroit562细胞中为0.03nM。相比之下，对相同缀合物的EpCAM抗体封闭导致细胞杀伤，EC50值在H1568细胞中为3.9nM，在H292细胞为2.2nM，在H2110细胞中为2.8nM，在Lovo细胞中为20nM，并且在Detroit562细胞中为1.4nM。
另外，DGN549分别在Lys和位点特异性C442位点缀合至huEpCAM23Gv4.2。评估缀合物并将其与具有H2110细胞的非靶向同种型对照IgG1缀合物chKTI-DGN549进行比较。如图12F所示，两种缀合物huEpCAM23Gv4.2-lys-DGN549和-C442-DGN549具有相似的EC50，并且效力比chKTI-DGN549高>100倍。
在另外的实验中，将DM21缀合至huEpCAM23Gv4.2。在有和没有huEpCAM23Gv4.2封闭的情况下，在四种NSCLC细胞系和一种头颈细胞系中测定了huEpCAM23Gv4.2-DM21L缀合物的效力。图12G-12K中所示的结果表明huEpCAM23Gv4.2-DM21L缀合物对所有五种测试的细胞系均有效，并且可通过添加亲本抗体来阻断细胞毒性。
NSCLC和卵巢癌细胞系中EpCAMAADC的体外细胞毒性活性
为了进一步论述在huEpCAM23Gv4.2-sSPDB-DM4、DM21和DGN549缀合物情况下观察到的体外细胞毒性活性，制备了具有相同有效负载的EpCAM AADC。特别地，将sSPDB-DM4和DM21L缀合至可活化抗体huEpCAM-Ep05-3014和huEpCAM-Ep05-2014，并将DGN549缀合至huEpCAM23Gv4.2-3014。在NSCLC细胞系Calu3、EBC-1和H2110中测定了DM4、DM21和DGN549缀合物的活性。此外，在Detroit562细胞中测试了DM21L AADC，并且在OV90细胞中分别测试了DM4和DGN549 AADC。以活化和非活化形式评估AADC的效力，并与它们的对应物靶向EpCAM的ADC或非靶向同种型对照IgG1缀合物chKTI ADC进行比较。如实施例8中所述进行体外AADC活化。来自典型细胞毒性测定的结果示于图13-15中。特别地，DM4缀合物的体外活性在图13A-13D中示出，DM21L缀合物的体外活性在图14A-14D中，并且DGN549缀合物的体外活性在图15A-15D中示出。如所预期，活化的AADC具有与EpCAM特异性ADC相似的活性，并且未活化的AADC对细胞的效力要低得多。sSPDB-DM4 ADC的EC50值在0.06至0.46nM的范围内，并且活化的sSPDB-DM4 AADC的EC50值在0.08nM至1.4nM的范围内(参见表23)。活化的DM21 AADC的EC50在0.3至2nM的范围内(参见表24)。此外，huEpCAM-DGN549 ADC和活化的huEpCAM-Ep05-3014-DGN549 AADC非常有效，EC50值对于ADC在0.006至0.02nM的范围内，并且对于AADC在0.017至0.06nM的范围内(参见表25)。这些结果表明，对于ADC和AADC缀合物两者均观察到良好特异性窗口，从而表明细胞毒性是抗EpCAM抗体与靶细胞结合的结果。
表23.与huEpCAM23Gv4.2抗体和可活化抗体缀合的sSPDB-DM4在NSCLC细胞系Calu3、EBC-1和H2110以及卵巢癌细胞系OV90中的细胞毒性的EC50和特异性窗口。
Figure BDA0003121673050002711
表24.huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-DM21和huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-DM21在NSCLC细胞系Calu3、EBC-1和H2110以及HNC癌细胞系Detroit562中的细胞毒性EC50和特异性窗口。
Figure BDA0003121673050002721
表25.huEpCAM23Gv4.2-DGN549 ADC和huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-DGN549在NSCLC细胞系Calu3、EBC-1和H2110以及卵巢癌细胞系OV90中的细胞毒性的EC50和特异性窗口。
Figure BDA0003121673050002722
还评估了包含另外掩蔽物的huEpCAM23Gv4.2-DGN549 AADC的体外效力，并将其与单独掩蔽物效率进行了比较。如表26所示，huEpCAM23Gv4.2 AADC的体外活性窗口与掩蔽物效率密切相关。
表26.与掩蔽物效率(ME)相比，抗EpCAM AADC的体外活性。
Figure BDA0003121673050002723
Figure BDA0003121673050002731
实施例13：EpCAM ADC和AADC在携带NCI-H2110人NSCLC异种移植物的CB17 SCID小鼠中的活性
在一系列体内研究中评估了不同剂量的包含掩蔽抗体与3014或2014底物的EpCAMG23v4.2-DGN549和huEpCAMG23v4.2-s-SPDB-DM4抗体-药物缀合物(ADC)以及其衍生的可活化抗体-药物缀合物(AADC)的抗肿瘤活性。所述研究在携带NCI-H2110肿瘤的6-8周龄雌性CB17 SCID小鼠(CB17/lcr-PrdxSCID)(一种人NSCLC皮下异种移植物模型)中进行。从Charles River Laboratories获得动物并且在分配至研究前的5天观察期内未显示任何疾病迹象。
从组织培养物中收获NCI-H2110细胞，所述细胞具有一致>98％的细胞活力(通过台盼蓝排除法测定)。通过使用27号针在右侧腹皮下注射，将每只小鼠接种0.1mL的无血清培养基和Matrigel(SFM:Mat)的1:1溶液中的107个NCI-H2110细胞。根据其肿瘤体积(TV)，在施用物品(测试剂和媒介物对照)之前，将小鼠随机分至处理组中。第二天根据个体体重(BW)向动物施用物品。使用配备有27号针的1.0mL注射器，物品作为单一静脉内推注施用。
每周两次在StudyDirector软件中记录肿瘤体积(TV)和体重(BW)测量值。根据卡尺测量值，按照圆柱体积的公式估计肿瘤体积(mm3)，如：TV(mm3)＝(L x W x H)/2，其中L、W和H是各自的正交肿瘤长度、宽度和高度测量值(以mm计)。使用小鼠的体重(g)跟踪所治疗动物的体重变化(BWC)，其表示为相较于治疗前的初始体重(BWi)，在给定测量时间的体重的百分比(BWt)，计算如下：％BWC＝[(BWt/BWi)–1]x 100。
用于评估治疗效果的主要终点是肿瘤生长抑制和肿瘤消退。肿瘤生长抑制(TGI)是对照安慰剂组(C)的中值TV达到接近1000mm3时治疗组(T)的中值TV的比率，并表示为随机分配时的初始TV的百分比，使用下式：TGI＝T/C x 100。根据NCI标准，TGI≤42％是最低抗肿瘤活性水平(标记为A表示活性)，TGI<10％被认为是高抗肿瘤活性水平(标记为HA，表示高活性)，而TGI>42％的治疗被视为无活性(IA)。与治疗时的TV相比，当小鼠的TV降低50％或更大时将小鼠定义为具有部分消退(PR)，当不可检测到可触及的肿瘤时将小鼠定义为完全肿瘤消退(CR)，并且如果在研究结束时(EoS)没有肿瘤，则将小鼠定义为无肿瘤存活者(TFS)。
定义化合物功效的第二终点是肿瘤生长延迟，如通过LCK(对数细胞杀伤)活性和延长的寿命(ILS)来衡量。LCK活性按下式计算：LCK＝(T-C)/(Td x 3.32)，其中T是一组(TFS除外)的中值存活期(天)，C是对照组的中值存活期(天)，并且Td是肿瘤加倍时间(天)，如由对照(媒介物)组的中值TV经过时间所确定。根据NCI标准，LCK>2.8将所述化合物定义为高活性(++++)，LCK在[0.7；2.8]为活性(定义了3种水平)，而LCK<0.7定义为无活性(-)。延长的寿命(ILS)表示为与对照组(C)相比，治疗组(T)(包括所有动物)的中值存活期的百分比，按照下式
ILS＝(T-C)/C x 100。根据NCI标准，ILS≥25％定义最低活性水平，而ILS≥50％表示高水平活性。
如果肿瘤超过1000mm3；如果动物损失超过其初始体重的20％(％BWC<-20％)，这是毒性的粗略指标；如果肿瘤坏死；或者如果在研究过程中的任何时候小鼠垂死，则对小鼠实施安乐死。
huEpCAMG23v4.2-DGN549的体内功效
将小鼠接种，并在接种后6天(dpi)将其随机分配到6只小鼠的组中。每组的平均肿瘤体积(TV)介于118与122.1mm3之间。接种后116天结束研究(EOS＝116dpi)。
治疗组包括施用媒介物(200μl/ms)的安慰剂对照组和分别以0.5、1.5和3μg/kg施用的三个huEpCAMG23v4.2-DGN549 ADC组，所有剂量均是基于药物浓度。
在这项研究中，当对照安慰剂组的中值TV达到1070.4mm3时，在27dpi确定TGI。
所述研究的结果在图16中示出。在所指示剂量下所有治疗均耐受良好，并且未观察到体重减轻。ADC huEpCAM23Gv4.2-DGN549在3μg/kg下具有高活性(HA)，具有1.8％的TGI值、6/6PR、3/6CR和1/6TSF。此外，此组还显示LCK＝1.77，表明所述治疗为活性(++)，以及179％ILS(高活性)，表明良好的肿瘤生长延迟。3μg/kg方案中的肿瘤消退始于ADC施用后的较早时间点，并且导致早在治疗后7天时出现多例局部消退。特别地，1.5μg/kg剂量是有活性的，具有31.6％的TGI值、1/6PR以及46％的ILS(活性)。相比之下，0.5μg/kg剂量huEpCAM23Gv4.2-DGN549没有活性。因此，这些数据表明，在这种肿瘤模型中，用huEpCAM23Gv4.2-DGN549进行治疗引起高肿瘤消退率，并且在低至1.5μg/kg的剂量下产生有效的抗肿瘤活性。
携带Ep02、Ep01-02、Ep11和Ep04掩蔽部分与3014可裂解部分的掩蔽的-EpCAM- DGN549的功效
将小鼠接种，并在接种后6天(dpi)将其随机分配到6只小鼠的组中。每组的平均肿瘤体积(TV)介于105.8与115.4mm3之间。接种后120天结束研究(EOS＝120dpi)。
治疗组包括施用媒介物(200μl/ms)的安慰剂对照组和基于药物浓度以3和5μg/kg施用的4个掩蔽的-huEpCAMG23v4.2-DGN549AADC组(即，携带与3014底物连接的掩蔽物Ep02、Ep01-02、Ep11和Ep04的AADC)。这项研究中还包括用5μg/kg的huEpCAM23Gv4.2-DGN549 ADC治疗的阳性对照组。
在这项研究中，当对照安慰剂(媒介物)组的中值TV达到1072.4mm3时，在25dpi确定TGI。
所述研究的结果在图17A中示出。在所指示剂量下所有治疗均耐受良好，并且在这项研究中未观察到体重减轻。
ADC huEpCAM23Gv4.2-DGN549在5μg/kg下具有高活性(HA)，具有0.3％的TGI值，6/6PR、6/6CR、6/6动物在研究结束时无肿瘤和120dpi，其产生380％ILS。
Ep01-02-3014-DGN549在5μg/kg下显示最小活性，TGI为34.5％并且ILS为48％。Ep11-3014-DGN549在5μg/kg剂量下具有活性，具有10.1％TGI、1/6PR、0.89LCK(+)和78％ILS，但在更低剂量下无活性。Ep02-3014-DGN549 AADC在3μg/kg下具有活性(38.6％TGI，1/6PR)，并且在5μg/kg下具有高活性(9.9％TGI，2/6PR，66％ILS)。Ep04-3014-DGN549 AADC在3μg/kg下具有活性(19.7％TGI，60％ILS)，并且在5μg/kg下具有高活性(4.2％TGI)，从而引起多例消退(6/6PR，1/6CR)，并显著增加了小组的寿命(LCK＝1.48，ILS144％)。因此，这些数据表明，用Ep04-DGN549 AADC治疗在5μg/kg的剂量下在这种肿瘤模型中非常有效，而用Ep02-和Ep01-02-以及Ep11-3014-DGN549 AADC治疗显示较少的抗肿瘤活性。
携带Ep03、Ep05、Ep07和Ep04掩蔽物与3014可裂解部分的掩蔽的-EpCAM-DGN549的 功效
将小鼠接种，并在接种后6天(dpi)将其随机分配到6只小鼠的组中。每组的平均肿瘤体积(TV)介于98.5与104.8mm3之间。接种后118天结束研究(EOS＝118dpi)。
治疗组包括施用媒介物(200μl/ms)的安慰剂对照组和基于药物浓度以3和5μg/kg施用的4个掩蔽的-huEpCAMG23v4.2-DGN549AADC组(即，携带与3014底物连接的掩蔽物Ep03、Ep05、Ep07和Ep04的AADC)。还包括了施用了携带不可裂解的Ep04掩蔽物(Ep04-NSUB-DGN549)的AADC的阴性对照组，以及用5μg/kg的huEpCAM23Gv4.2-DGN549 ADC治疗的阳性对照组。
在这项研究中，当对照安慰剂(媒介物)组的中值TV达到1293.4mm3时，在25dpi确定TGI。
所述研究的结果在图17B中示出。在所指示剂量下所有治疗均耐受良好，并且在这项研究中未观察到体重减轻。
用作阳性对照的huEpCAM23Gv4.2-DGN549 ADC在5μg/kg下具有高活性(HA)，基于肿瘤生长抑制(TGI＝0.0％)、多例消退(6/6PR，6/6CR和6/6在研究结束时无肿瘤动物，118dpi)和总体肿瘤生长延迟(372％ILS)，与先前的结果一致。
如所预期，不可裂解的Ep04-NSUB-DGN549无活性(TGI＝43.6％，LCK＝0.5)，并且没有引起消退，对肿瘤生长的轻微抑制可能归因于有效负载而不是特异性的、抗原指导的抗肿瘤应答。与先前的结果一致，以5μg/kg施用的Ep04-3014-DGN549 AADC表现出活性，如由肿瘤生长抑制(TGI＝3.2％)和肿瘤生长延迟(LCK＝2.37，+++，和210％ILS)所定义，并且引起多例消退(5/6PR，3/6CR和2/6TFS)。
Ep03-和Ep07-3014-DGN549 AADC在3μg/kg下具有活性，肿瘤生长抑制率分别为21.7％和35.9％，并且LCK值为0.79(+)和44％ILS，但在此剂量下未引起消退。在5μg/kg下，Ep03-和Ep07-3014-DGN549 AADC两者均具有高活性(TGI分别为7.6％和6.4％，LCK＝1.69(++)，94％ILS)，并且引起了一些消退(分别2/6和3/6PR)。
Ep05-3014-DGN549 AADC在3μg/kg下具有活性(17.5％TGI，1/6PR，LCK＝1.4(++)和78％ILS)，并且在5ug/kg下具有高活性，类似于Ep04-3014-DGN549 AADC。具体而言，以5ug/kg施用的Ep05-3014-DGN549 AADC表现出3.7％的肿瘤生长抑制、LCK＝2.4(+++)、134％ILS和多例消退(6/6PR，2/6CR)。因此，这些数据表明，用Ep04-和Ep05-3014-EpCAMAADC治疗在这种模型中在5μg/kg下产生高活性。在这种剂量下，Ep04-和Ep05-3014-DGN549均引起多例肿瘤消退事件，并且在3μg/kg的较低剂量下仍保持活性。
Ep05-2014-DM4和Ep05-2014-DGN549的功效
将小鼠接种，并在接种后7天(dpi)将其随机分配到6只小鼠的组中。每组的平均肿瘤体积(TV)介于96.7与102.3mm3之间。接种后58天结束研究(EOS＝58dpi)。
在这项研究的第1部分中，治疗组包括施用媒介物(200μl/ms)的安慰剂对照组和以及基于药物浓度以5μg/kg施用的两个掩蔽的-huEpCAMG23v4.2-DGN549 AADC组(即携带3014底物具有可裂解掩蔽物的AADC和呈不可裂解的-NSUB(无底物)形式的AADC组)。在这项研究的第2部分中，治疗组包括施用媒介物(200μl/ms)的安慰剂对照组、以15、30和45μg/kg(基于药物浓度)施用的huEpCAMG23v4.2-s-SPDB-DM4 ADC组、两个Ep01-02-2014-s-SPDBAADC组(以45和30μg/kg施用)和不可裂解的变体Ep01-02-NSUB-s-SPDB-DM4组。
在这项研究中，当对照安慰剂(媒介物)组的中值TV达到1156.9mm3时，在23dpi确定TGI。
所述研究的结果在图17C和17D中示出。在所指示剂量下所有治疗均耐受良好，并且在这项研究中未观察到体重减轻。
A.携带Ep05和Ep07掩蔽物的掩蔽的-EpCAM-3014-DGN549AADC的功效。
这项研究的A部分的结果在图17C中示出。根据肿瘤生长抑制(2.9％和3.9％)，以5μg/kg施用的Ep05-3014-DGN549和Ep07-3014-DGN549 AADC具有高活性(HA)，具有多例部分消退(分别6/6和5/6)，但在研究结束时(58dpi)没有CR且没有TFS。中值存活期对于用Ep05-3014-DGN549 AADC治疗的组为>58d，并且对于用Ep07-3014-DGN549 AADC治疗的组为56d，其分别产生2.56和2.41的LCK值(+++活性)，并且相应的ILS分别>152％和143％。如所预期，不可裂解的Ep05-NSUB-DGN549和Ep07-NSUB-DGN549AADC无活性(TGI>70％，LCK＝0.29，并且ILS＝17％)。
B.huEpCAMG23v4.2-s-SPDB-DM4和Ep01-02-2014-s-SPDB-DM4的功效。
这项研究的B部分的结果在图17D中示出。用基于药物以45、30和15μg/kg施用的huEpCAMG23Gv4.2-s-SPDB-DM4 ADC(亲本EpCAM-DM4)测试了美登木素生物碱的功效。亲本EpCAM-DM4 ADC在低至30μg/kg的剂量下具有高活性(TGI<1％，ILS>152％)，并且引起多例消退(对于45和30μg/kg剂量，分别6/6PR、6/6和5/6CR以及TFS)。在15μg/kg的剂量下，亲本EpCAM-DM4 ADC保持活性(TGI＝20.3％，LCK＝1.02)，并且虽然多例PR(6/6)并没有全部进展为CR和TFS(1/6)，但与对照(媒介物)组相比，所述组的寿命增加了70％。还使用Ep01-02掩蔽物和2014动物：Ep01-02-2014-DM4，以AADC格式测试了美登木素生物碱有效负载的功效。根据肿瘤生长抑制(35.6％)，45μg/kg的剂量显示出最小活性，但没有引起任何消退，并且仅稍微延长了所述组的寿命。总体而言，这些数据表明，EpCAM-DGN549 AADC的抗肿瘤活性是肿瘤特异性的(因为含有具有不可裂解的掩蔽物的Ab的AADC是无活性的)，并且可裂解的DM4有效负载在ADC格式中活性非常高，使用Ep01-02掩蔽物和2014底物的AADC格式的DM4有效负载的活性有限。
Ep05-2014-DM4和Ep05-2014-DGN549的功效
将小鼠接种，并在接种后8天(dpi)将其随机分配到6只小鼠的组中。每组的平均肿瘤体积(TV)介于90.8与99.1mm3之间。接种后62天结束研究(EOS＝62dpi)。
治疗组包括施用媒介物(200μl/ms)的安慰剂对照组和两个具有3014底物的Ep05AADC(Ep05-3014-DM4 AADC基于Ab以1.5mg/kg施用(基于药物约25μg/kg)，并且Ep05-3014-DGN549 AADC基于药物以5μg/kg施用)。向两组类似地给予相应的不可裂解的-NSUB AADC，作为阴性对照。另外三组以1.5、2.5和5mg/kg(基于Ab)施用Ep05-2014-DM4 AADC，并且另外两组以3和5μg/kg(基于药物)施用Ep05-2014-DGN549 AADC。在随机分配后5天(13dpi)向所有动物给药。
在这项研究中，当对照安慰剂(媒介物)组的中值TV达到1241.8mm3时，在30dpi确定TGI。
所述研究的结果在图17E和17F中示出。在所指示剂量下所有治疗均耐受良好，并且在这项研究中未观察到体重减轻。
如所预期，所有Ep05-NSUB AADC均无活性，与所使用的有效负载无关。Ep05-2014-DM4 AADC在5mg/kg下具有高活性(TGI＝0％)，在6/6小鼠中诱导CR，全部被定义为在EoS时TFS。基于TGI(7.2％)以2.5mg/kg施用的Ep05-2014-DM4 AADC也具有高活性，但仅诱导3例PR和1例CR，1例TSF。与相同剂量的Ep05-3014-DM4AADC一样，以1.5mg/kg施用的Ep05-2014-DM4 AADC是无活性的(图17E)。Ep05-3014-DGN549 AADC在5μg/kg下具有高活性(HA)(TGI＝5.5％)，但仅诱导2例PR。2014底物化的AADC，Ep05-2014-DGN549在所使用的两种剂量下均无活性，并且不引起肿瘤生长的消退(图17F)。因此，这些数据表明，Ep05 AADC的抗肿瘤活性是肿瘤特异性的，因为含有具有不可裂解的掩蔽物的Ab的AADC无活性，而与有效负载无关。此外，当与3014底物一起使用时，5μg/kg的Ep05-DGN549 AADC具有高活性，但如果使用2014底物，则失去活性。相比之下，携带可裂解的–s-SPDB-DM4有效负载的Ep05-2014-DM4AADC具有高活性，并且以剂量依赖性方式引起多例肿瘤消退。
实施例14：Ep05-3014-DM4和2014-DM4在携带Calu-3 NSCLC异种移植物的C.B-17SCID小鼠中的功效
将6-8周龄的雌性小鼠在右侧腹区域中皮下接种0.2mL SFM:Matrigel中的5x106个Calu-3细胞/小鼠。将小鼠在接种后(dpi)10天随机分配到6只小鼠的组中。每组的平均肿瘤体积(TV)介于97.6与106.4mm3之间。接种后119天结束研究(EOS＝119dpi)。
治疗组包括施用媒介物(200μl/ms)的安慰剂对照组、亲本huEpCAMG23v4.2-s-SPDB-DM4 ADC组作为阳性对照、不可裂解的Ep05-NSUB-DM4 AADC组作为阴性对照、Ep05-3014-DM4 AADC组和Ep05-2014-DM4 AADC组，所有AADC化合物在5和2.5mg/kg(基于可活化抗体浓度)下进行测试。
在这项研究中，当对照安慰剂(媒介物)组的中值TV达到1138mm3时，在73dpi确定TGI。
所述研究的结果在图18中示出。在所指示剂量下所有治疗均耐受良好，并且在这项研究中未观察到体重减轻。
如所预期，Ep05-NSUB-DM4 AADC无活性，而亲本EpCAM-DM4 ADC在5mg/kg的剂量下具有活性，在5mg/kg下TGI＝15.6％，在2.5mg/kg下为21％。此外，EpCAM-DM4 ADC延迟了肿瘤生长，但没有引起任何消退。类似地，使用E05-3014-DM4和Ep05-2014-DM4 AADC也没有观察到消退。Ep05-3014-DM4 AADC在5和2.5mg/kg下具有活性(TGI值分别为15.6％和21％)，而Ep05-2014-DM4 AADC无活性(TGI>40％)。因此，这些数据表明，用EpCAM-DM4 ADC或Ep05-DM4 AADC治疗在Calu-3肿瘤模型中导致一些肿瘤生长延迟，但表现出最小量的总体抗肿瘤活性。
实施例15：Ep05-3014-DM4和2014-DM4在携带NCI-H292 NSCLC异种移植物的C.B-17SCID小鼠中的功效
将6-8周龄的雌性小鼠在右侧腹区域中皮下接种0.1mL SFM中的2.5x106个NCI-H292细胞/小鼠。将小鼠在接种后(dpi)13天随机分配到6只小鼠的组中。每组的平均肿瘤体积(TV)介于88.7与94.1mm3之间。研究在64dpi时终止。
治疗组包括施用媒介物(200μl/ms)的安慰剂对照组、亲本huEpCAMG23v4.2-s-SPDB-DM4 ADC组作为阳性对照、以2.5mg/kg施用的不可裂解的Ep05-NSUB-DM4 AADC组作为阴性对照、以及各自Ep05-3014-DM4 AADC和Ep05-2014-DM4 AADC的两个组(两者均基于可活化抗体浓度以5和2.5mg/kg施用)。
在这项研究中，当对照安慰剂(媒介物)组的中值TV达到939.8mm3时，在28dpi确定TGI。
所述研究的结果在图19中示出。在所指示的剂量下，所有治疗均良好耐受，并且尽管由于体重减轻而不得不处死数只动物，但这归因于异种移植物模型的特征，而不是所述治疗。
如所预期，Ep05-NSUB-DM4 AADC无活性，而亲本EpCAM-DM4 ADC在2.5mg/kg下具有活性，TGI为22.7％。EpCAM-DM4 ADC延迟了肿瘤生长(ILS＝100％(28.5天))，但没有引起任何消退。除了以2.5mg/kg给药的E05-3014-DM4组中的短暂、不可维持的PR外，在此模型中未观察到消退。然而，Ep05-3014-DM4和Ep05-2014-DM4 AADC在低至2.5mg/kg的剂量下均具有高活性(TGI分别为10％和11.45％)，并使相应组的寿命延长超过两倍(100％)。因此，这些数据表明，NCI-H292肿瘤对EpCAM-DM4 ADC以及衍生的Ep05-DM4 AADC敏感。虽然未观察到引起显著肿瘤消退，但是在所治疗组中存在显著肿瘤生长延迟和延长的寿命。此外，对3014底物化的AADC和2014底物化的AADC的反应都相似。
实施例16：Ep05-3014-DM4、Ep05-2014-DM4、Ep05-3014-DM21和Ep05-2014-DM21在携带Detroit 562HNSCC异种移植物的C.B-17SCID小鼠中的功效
将6-8周龄的雌性小鼠在右侧腹区域中皮下接种0.2mL的1:1SFM:Matrigel溶液中的107个Detroit 562细胞/小鼠。将小鼠在接种后(dpi)4天随机分配到8只小鼠的组中。每组的平均肿瘤体积(TV)介于99.2与106mm3之间。研究在90dpi时终止。
治疗组包括施用媒介物(200μl/ms)的安慰剂对照组、以2.5mg/kg施用的Ep05-3014-DM4 AADC组、以2.5mg/kg施用的Ep05-2014-DM4 AADC组、以2.5mg/kg施用的Ep05-3014-DM21L AADC组、以5mg/kg施用的Ep05-3014-DM21L AADC组、以2.5mg/kg施用的Ep05-2014-DM21L AADC组和以5mg/kg施用的Ep05-2014-DM21L AADC组。所有AADC均基于可活化抗体浓度施用。另外，基于抗体浓度，以2.5mg/kg向阳性对照组ADC组施用huEpCAM23Gv4.2-DM21L。
在这项研究中，当对照安慰剂(媒介物)组的中值TV达到1004.2mm3时，在28dpi确定TGI。
所述研究的结果在图20中示出。在所指示的剂量下，所有治疗均耐受良好。
本研究中使用的所有AADC(Ep05-3014-DM4、Ep05-2014-DM4、Ep05-3014-DM21L和Ep05-2014-DM21L)以及huEpCAM23Gv4.2-DM 21L ADC在所有测试的剂量下均具有高活性(除2.5mg/kg的Ep05-3014-DM21L(其具有的TGI为0.7％)外，对于所有组TGI均为0％)，并且使相应组的寿命增加了超过三倍(200％)。除2.5mg/kg的Ep05-2014-DM21L组外，所有组均引起100％的部分消退，这引起87.5％的部分消退。这些局部消退大部分进展为完全消退(即>75％的PR进展为CR)，所述完全消退维持至研究终止，从而产生多个无肿瘤存活者。关于与每个组相关的TGI、PR、CR和TFS的另外细节提供于图20中。
因此，这些数据表明Detroit 562肿瘤对Ep05-DM4 AADC高度敏感，从而使得所治疗组中显著肿瘤消退、肿瘤生长延迟和增加的寿命。
实施例17：Ep05-3014-DM21和Ep05-2014-DM21在携带NCI-H441 NSCLC异种移植物的C.B-17SCID小鼠中的功效
将6-8周龄的雌性小鼠在右侧腹区域中皮下接种0.2mL SFM中的107个NCI-H441细胞/小鼠。将小鼠在接种后(dpi)8天随机分配到8只小鼠的组中。每组的平均肿瘤体积(TV)介于95.1与101.4mm3之间。研究在92dpi时终止。
治疗组包括施用媒介物(200μl/ms)的安慰剂对照组、以2.5mg/kg(基于抗体浓度)给药的亲本huEpCAM23Gv4.2-DM21L ADC组、以2.5mg/kg施用的Ep05-3014-DM21L AADC组、以5mg/kg施用的Ep05-3014-DM21L AADC组、以2.5mg/kg施用的Ep05-2014-DM21L AADC组以及以5mg/kg施用的Ep05-2014-DM21L AADC组。所有AADC均基于可活化抗体浓度施用。
在这项研究中，当对照安慰剂(媒介物)组的中值TV达到1109.7mm3时，在37dpi确定TGI。
所述研究的结果在图21中示出。在所指示的剂量下，所有治疗均耐受良好。
所有治疗具有活性至高活性，所述组的寿命增加了>149％，并且在每组中引起100％PR。达到多例CR，并且一直维持到研究结束，从而产生多例TFS。huEpCAM23Gv4.2-DM21ADC在2.5mg/kg下具有高活性，TGI为7.7％，8/8PR和7/8CR。类似地，Ep05-2014-DM21 AADC在2.5和5mg/kg剂量下均具有高活性，TGI分别为6.2％和4.2％以及分别6/8和5/8CR。Ep05-3014-DM21 AADC在5mg/kg剂量下具有活性，TGI为10.1％和5/8CR。在2.5mg/kg剂量下，Ep05-3014-DM21 AADC具有高活性，TGI为6.3％和6/8CR。
因此，这些数据表明NCI-H441肿瘤对Ep05-DM21L AADC敏感，从而使得所治疗组中显著肿瘤消退、肿瘤生长延迟和增加的寿命。
实施例18：Ep05-2014-DM21在携带OV-90EOC异种移植物的C.B-17SCID小鼠中的功效
将6-8周龄的雌性小鼠在右侧腹区域中皮下接种0.1mL SFM:Matrigel中的107个OV-90细胞/小鼠。将小鼠在接种后(dpi)7天随机分配到各自6只小鼠的组中。每组的平均肿瘤体积(TV)介于92.2与98.5mm3之间。研究在71dpi时终止。
治疗组包括施用媒介物(200μl/ms)的安慰剂对照组、以1.25mg/kg(基于抗体浓度)给药的亲本huEpCAM23Gv4.2-DM21 ADC组、以1.25mg/kg(基于可活化抗体浓度)施用的Ep05-2014-DM21L AADC组、以2.5mg/kg(基于可活化抗体浓度)施用的Ep05-2014-DM21LAADC组、以1.25mg/kg(基于抗体浓度)施用的chKTI-DM21L非靶向阴性对照ADC组以及以2.5mg/kg(基于抗体浓度)施用的chKTI-DM21L非靶向阴性对照ADC组。
在这项研究中，当对照安慰剂(媒介物)组的中值TV达到1436.7mm3时，在34dpi确定TGI。
所述研究的结果在图22中示出。在所指示的剂量下，所有治疗均耐受良好。
本研究中使用的所有EpCAM靶向治疗(1.25mg/kg的huEpCAM23Gv4.2-DM21 ADC以及2.5和1.25mg/kg的Ep05-2014-DM21L AADC组)均具有高活性，TGI<5％，与未治疗的动物相比所述组的寿命增加>109％，以及每组中100％PR。这些组中的所有PR均进展至完全消退(CR)，并维持至研究结束，从而产生TFS。非靶向chKTI-DM21 ADC在2.5和1.25mg/kg下对OV-90肿瘤无活性，TGI>74.5％且无肿瘤消退。
因此，这些数据表明OV-90肿瘤对Ep05-2014-DM21L AADC敏感，从而产生所治疗组中的显著肿瘤消退和延长的寿命。
实施例19：Ep05-2014-DM21在携带Calu-3 NSCLC异种移植物的C.B-17SCID小鼠中的功效
将6-8周龄的雌性小鼠在右侧腹区域中皮下接种0.2mL SFM:Matrigel中的5x106个Calu-3细胞/小鼠。将小鼠在接种后(dpi)6天随机分配到各自6只小鼠的组中。每组的平均肿瘤体积(TV)介于110.3与116.5mm3之间。
治疗组包括施用媒介物(200μl/ms)的安慰剂对照组、以2.5mg/kg(基于抗体浓度)给药的亲本huEpCAM23Gv4.2-DM21L ADC组、以2.5mg/kg(基于可活化抗体浓度)施用的Ep05-2014-DM21L AADC组、以5mg/kg(基于可活化抗体浓度)施用的Ep05-2014-DM21L AADC组、以2.5mg/kg(基于抗体浓度)施用的chKTI-DM21L非靶向阴性对照ADC组以及以5mg/kg(基于抗体浓度)施用的chKTI-DM21L非靶向阴性对照ADC组。
在这项研究中，当对照安慰剂(媒介物)组的中值TV达到963.8mm3时，在62dpi确定TGI。
所述研究的结果在图23中示出。在所指示的剂量下，所有治疗均耐受良好。
2.5mg/kg的huEpCAM23Gv4.2-DM21 ADC具有高活性，在最近测量(75dpi)时，具有7.8％的TGI，6/6PR，5/6CR和1/6小鼠无肿瘤。Ep05-2014-DM21L AADC在5mg/kg下具有高活性，在最近测量(75dpi)时，具有4.4％TGI，5/6PR进展为CR，以及2/6小鼠无肿瘤。Ep05-2014-DM21L AADC在2.5mg/kg下具有活性，具有30.4％TGI和3/6PR。非靶向chKTI-DM21LADC对照组在5和2.5mg/kg下对Calu-3肿瘤无活性，在5mg/kg的剂量下TGI>90％且无肿瘤消退。
因此，这些数据表明Calu-3肿瘤对Ep05-2014-DM21L AADC敏感，从而产生显著肿瘤消退和肿瘤生长延迟。
实施例20：食蟹猴中靶向EpCAM的AADC药代动力学和耐受性的分析
DM4缀合物的药代动力学和耐受性
为了进一步评估与靶向EpCAM的ADC和AADC相关的耐受性和药代动力学，根据表27中所示的研究设计向雄性食蟹猴施用huEp CAM23 Gv4.2-s-SPDB-DM4、huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-s-SPDB-DM4或huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-s-SPDB-DM4。
表27.食蟹猴中的药代动力学和耐受性研究设计。
Figure BDA0003121673050002871
Figure BDA0003121673050002881
在单次静脉内输注ADC或AADC之后，观察食蟹猴28天，并收集样品进行药代动力学分析。特别地，监测猴子的体重变化、临床观察结果和临床病理评价(例如脂肪酶和淀粉酶)。
如图24所示，在食蟹猴中在8mg/kg下靶向EpCAM的AADC耐受良好。特别地，在接受8mg/kg huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-s-SPDB-DM4或huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-s-SPDB-DM4的猴中的临床观察结果限于注射部位皮肤变红，并且粪便输出被认为是正常的。对于接受12mg/kg的huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-s-SPDB-DM 4的猴，获得了类似的结果。相比之下，接受8mg/kg ADC的猴被认为垂死，并且临床观察结果包括步态异常、活动减少、食欲下降、触摸冰冷、轻微皮肤发现(发红或剥落)、稀液状大便和怀疑脱水。
相对于接受靶向EpCAM的DM4 ADC的猴，接受靶向EpCAM的DM4 AADC的食蟹猴也显示出改善的血清化学。特别地，仅在ADC组中观察到白蛋白、TP、A/G比(图25A)、尿素氮(图25B)和肌酸酐(图25C)的变化，并且脂肪酶(图25D)和淀粉酶(图25E)血清浓度增加仅与ADC组类似地相关。
如图26和表28所示，AADC的施用也与改善的缀合物暴露相关。总体而言，这些数据表明，DM4 AADC的有效掩蔽减少EpCAM的正常组织表达对药代动力学和毒性概况的影响。
表28.接受huEpCAM23Gv4.2-s-SPDB-DM4、huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-s-SPDB-DM4或huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-s-SPDB-DM4的食蟹猴的药代动力学概况。
Figure BDA0003121673050002891
DM21缀合物的药代动力学和耐受性
在单独研究中，根据表29中所示的研究设计，向雄性食蟹猴施用huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-DM21L或huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-DM21L。
表29.食蟹猴中的药代动力学和耐受性研究设计。
Figure BDA0003121673050002892
在单次静脉内输注ADC或AADC之后，观察食蟹猴28天，并收集样品进行药代动力学分析。特别地，监测猴子的体重变化、临床观察结果和临床病理评价(例如脂肪酶和淀粉酶)。
如图27所示，在食蟹猴中在12mg/kg下huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-DM21L耐受良好。特别地，临床观察结果限于皮肤发红/变暗、液状粪便和眼睛凹陷(脱水)。相比之下，接受12mg/kg的huEp CAM23Gv4.2-Ep05-3014-DM21L的猴表现出与先前研究中接受huEpCAM23Gv4.2-s-SPDB-DM4的那些猴相似的临床观察结果。
接受12mg/kg huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-DM21L的食蟹猴还显示与先前研究中接受12mg/kg的huEpCAMGv4.2-Ep05-2014-s-SPDB-DM4的猴相似的血清化学。特别地，A/G比(图28A)、尿素氮(图28B)和肌酸酐(图28C)、脂肪酶(图28D)和淀粉酶(图28E)血清浓度的变化对于这两组相似，而huEpCAM23Gv4.2-Ep05-3014-DM21L组的血清化学参数趋向于先前研究中针对DM4 ADC组获得的那些。
如图29和表30所示，与所有其它测试的缀合物(包括DM4和DM21L缀合物)相比，施用huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-DM21L也与改善的缀合物暴露相关。总体而言，这些数据表明，DM21 AADC的有效掩蔽减少EpCAM的正常组织表达对药代动力学和毒性概况的影响。
表30.接受huEpCAM23Gv4.2-Ep05-2014-DM21L的食蟹猴的药代动力学概况。
Figure BDA0003121673050002901
实施例21：EpCAM表达的分析
EpCAM肿瘤表达
为了评估不同适应症之间的EpCAM表达，首先使用ImmunoGen开发的EpCAM免疫组织化学(IHC)测定评估了代表10种不同肿瘤类型的组织微阵列(TMA)，以用于初步研究使用。
所分析的所有肿瘤均为FFPE(福尔马林固定和石蜡包埋的)样品。具体地，对代表10种不同适应症的两种多癌TMA以及代表三阴性乳腺癌(TNBC)、卵巢癌和膀胱癌的适应症特异性TMA进行了分析。还分析了结肠直肠癌(CRC)TMA，以及肺癌和卵巢癌的整个肿瘤组织FFPE块。
使用Ventana Discovery Ultra自动染色仪对EpCAM进行免疫组织化学染色。针对EpCAM的第一抗体是可商购的兔单克隆抗体。所有样品均由经过计分算法培训的、经过董事会认证的病理学家进行评估和评分。评分需要存在至少100个存活肿瘤细胞。染色强度以半定量整数等级从0至3评分，0代表无染色，1代表弱染色，2代表中度染色，并且3代表强染色。记录在每种强度水平下阳性染色的细胞的百分比。评分仅基于EpCAM至细胞膜的定位。将染色结果通过H-得分进行分析，所述H-得分将染色强度的组分与阳性细胞的百分比相结合。它具有介于0与300之间的值，并且定义为：
1*(在1+强度下染色的细胞的百分比)
+2*(在2+强度下染色的细胞的百分比)
+3*(在3+强度下染色的细胞的百分比)
＝H得分
以下表31总结针对多癌TMA的所有10种适应症，基于膜染色的EpCAM的流行率。
表31.基于膜染色，EpCAM在10种不同适应症中的流行率。
Figure BDA0003121673050002911
Figure BDA0003121673050002921
根据多癌TMA的结果，选择了五种适应症特异性TMA进行扩展流行率分析：42例大肠癌(CRC)TMA(40例可评估)、具有37个核心的卵巢癌TMA、具有81个核心的三阴性乳腺癌(TNBC)TMA、具有60个癌核心的膀胱癌TMA以及非小细胞肺癌(NSCLC)TMA具有80个核心腺癌和80个核心鳞状细胞癌(各自评估79个)。图30描述EpCAM表达，其中每种肿瘤适应症内的H得分均细分。
另外，通过IHC分析了NSCLC-腺癌(n＝86)、NSCLC-鳞状细胞癌(n＝19)和卵巢癌(n＝29)的整个肿瘤组织切片的EpCAM表达。对所有这些样品的膜染色进行评分，并且结果总结在表32中。
表32.EpCAM在NSCLC和卵巢癌的另外样品中的流行率。
Figure BDA0003121673050002922
这些初步研究的结果表明，EpCAM在各种各样的实体癌中表达，并支持在许多不同的表达EpCAM的实体瘤中使用抗EpCAM9药物缀合物。
正常人组织中的EpCAM表达
使用相同的抗EpCAM兔单克隆抗体和Ventana Discovery Ultra自动染色剂，通过IHC以与上述类似的方式评估EpCAM的正常人组织表达。
使用代表来自3个单独个体的35个不同器官/解剖部位的多组织微阵列TMA，将所有分析的组织均为FFPE(福尔马林固定和石蜡包埋的)样品。所有样品均由经过计分算法培训的、经过董事会认证的病理学家进行评估和评分。评分需要存在至少100个存活肿瘤细胞。关于肿瘤样品，染色强度以半定量整数等级从0至3评分，0代表无染色，1代表弱染色，2代表中度染色，并且3代表强染色。然而，与肿瘤不同，由于通常在不同组织中发现的各种结构导致H得分无法准确反映染色，因此无法计算H得分。记录病理学家对在每个器官中观察到的任何染色模式的描述，结果总结在表33中。
在许多正常人组织中，尤其是小肠、结肠和直肠中均观察到显著强染色。因此，替代靶向方法(如基于可活化抗体的技术)代表用于克服潜在毒性风险的有吸引力的选择。
表33.EpCAM在正常人组织中的流行率。
Figure BDA0003121673050002931
Figure BDA0003121673050002941
***
Figure BDA0003121673050002942
Figure BDA0003121673050002951
***
应当理解，意图使用具体实施方式部分而非发明内容以及摘要部分来对权利要求进行解释。发明内容和摘要部分可阐明如发明人所构想的本公开的一个或多个但非所有的示例性实施方案，并且因此，并不意图通过任何方式对本公开和所附权利要求书进行限制。
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本公开的广度和范围不应受任何上述示例性实施方案限制，而应仅根据以下权利要求及其等效物定义。
序列表
<110> 伊缪诺金公司(ImmunoGen, Inc.)、
西托姆克斯治疗公司(CytomX Therapeutics, Inc.)
<120> EpCAM抗体、可活化抗体和免疫缀合物及其用途
<130> 6776.0103
<150> US 62/846,297
<151> 2019-05-10
<150> US 62/824,539
<151> 2019-03-27
<150> US 62/751,530
<151> 2018-10-26
<160> 214
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 1
Gln Glu Glu Cys Val Cys Glu Asn Tyr Lys Leu Ala Val Asn Cys Phe
1 5 10 15
Val Asn Asn Asn Arg Gln Cys Gln Cys Thr Ser Val Gly Ala Gln Asn
20 25 30
Thr Val Ile Cys Ser Lys Leu Ala Ala Lys Cys Leu Val Met Lys Ala
35 40 45
Glu Met Asn Gly Ser Lys Leu Gly Arg Arg Ala Lys Pro Glu Gly Ala
50 55 60
Leu Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr Asp Pro Asp Cys Asp Glu Ser Gly
65 70 75 80
Leu Phe Lys Ala Lys Gln Cys Asn Gly Thr Ser Met Cys Trp Cys Val
85 90 95
Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr Asp Lys Asp Thr Glu Ile Thr Cys
100 105 110
Ser Glu Arg Val Arg Thr Tyr Trp Ile Ile Ile Glu Leu Lys His Lys
115 120 125
Ala Arg Glu Lys Pro Tyr Asp Ser Lys Ser Leu Arg Thr Ala Leu Gln
130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Ser Gln Lys Thr Gln Asn Asp Val Asp Ile Ala Asp Val Ala Tyr Tyr
180 185 190
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195 200 205
Asp Leu Thr Val Asn Gly Glu Gln Leu Asp Leu Asp Pro Gly Gln Thr
210 215 220
Leu Ile Tyr Tyr Val Asp Glu Lys Ala Pro Glu Phe Ser Met Gln Gly
225 230 235 240
Leu Lys
<210> 2
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 2
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1 5 10 15
Val Asn Asn Asn Arg Gln Cys Gln Cys Thr Ser Val Gly Ala Gln Asn
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35
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
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1 5 10 15
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Asp Thr Glu Ile Thr Cys
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<210> 4
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 4
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<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa是任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是Y、N、F、S、H、D、L、I、W
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa是I、S或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa是Y或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa是N或D
<220>
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<223> Xaa是N或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa是E或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(17)
<223> Xaa是K或Q
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Trp Xaa Xaa Pro Gly Xaa Val Tyr Ile Gln Tyr Xaa Xaa Lys Phe Lys
1 5 10 15
Xaa
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa是D或E
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是P、A、S、Y、F、G、T、V或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是Y或w
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是Y或W
<400> 8
Xaa Gly Xaa Xaa Phe Ala Tyr
1 5
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是Y或W
<400> 9
Asp Gly Pro Xaa Phe Ala Tyr
1 5
<210> 10
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Xaa是N或D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> Xaa是F或I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> Xaa是Y或S
<400> 10
Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser Xaa Gly Xaa Thr Tyr Leu Xaa
1 5 10 15
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa是A、K或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa是A、L或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是S、G、Y或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是N或W
<400> 11
Xaa Gln Xaa Leu Glu Leu Pro Xaa Thr
1 5
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是S、 G、 Y或N
<400> 12
Ala Gln Xaa Leu Glu Leu Pro Asn Thr
1 5
<210> 13
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 13
Asn Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 14
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 14
Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 15
Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 16
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 16
Ser Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 17
Asn Tyr Asn Ile His
1 5
<210> 18
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 18
Asn Tyr Phe Ile His
1 5
<210> 19
<211> 5
<212> PRT
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 19
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<211> 5
<212> PRT
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 20
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<211> 5
<212> PRT
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 21
Asn Tyr Tyr Met His
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 22
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<212> PRT
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<400> 23
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<223> 合成多肽
<400> 24
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<211> 5
<212> PRT
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 25
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<211> 17
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 26
Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Ser Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
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<220>
<223> 合成多肽
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Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 28
Trp Phe Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 29
Trp Ile Asn Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 30
Glu Gly Pro Trp Phe Ala Tyr
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<211> 7
<212> PRT
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 31
Asp Gly Pro Tyr Phe Ala Tyr
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 32
Asp Gly Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 33
Asp Gly Tyr Trp Phe Ala Tyr
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 34
Asp Gly Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 35
Asp Gly Phe Trp Phe Ala Tyr
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 36
Asp Gly Gly Trp Phe Ala Tyr
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 37
Asp Gly Thr Trp Phe Ala Tyr
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 38
Asp Gly Val Trp Phe Ala Tyr
1 5
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<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 39
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 40
Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 41
Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Asn Thr
1 5
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<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 42
Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 43
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 43
Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 44
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 44
Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 45
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 45
Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Trp Thr
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 46
Gln Gln Asn Leu Glu Leu Pro Asn Thr
1 5
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<211> 9
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 47
Leu Gln Asn Leu Glu Leu Pro Asn Thr
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 48
Ala Gln Tyr Leu Glu Leu Pro Asn Thr
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 49
Ala Gln Gly Leu Glu Leu Pro Asn Thr
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 50
Ala Gln Ser Leu Glu Leu Pro Asn Thr
1 5
<210> 51
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 51
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Asp Tyr Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 52
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 53
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 53
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 54
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 54
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 55
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 55
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 56
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 56
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 57
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 58
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 58
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 59
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 60
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Phe Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 61
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 61
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Ser Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 62
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 62
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 63
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 63
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 64
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 64
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35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成多肽
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35 40 45
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65 70 75 80
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<220>
<223> 合成多肽
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<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 98
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1 5 10 15
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 99
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Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
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<220>
<223> 合成多肽
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Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Gly Ala
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<220>
<223> 合成多肽
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
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Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
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Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
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Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
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Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
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Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
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Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 102
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 102
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
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Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Tyr Ile Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 103
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<223> 合成多肽
<400> 104
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
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<223> 合成多肽
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Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
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Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
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Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
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Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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<223> 合成多肽
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<220>
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<220>
<223> 合成多肽
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<223> 合成多肽
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<220>
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<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 144
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1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
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Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
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Leu Glu Leu Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
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Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
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Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
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Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
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Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 145
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 145
Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser
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65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn
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Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
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Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
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Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 146
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1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Asn
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 147
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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Tyr
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 148
Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser
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Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
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<220>
<223> 合成多肽
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<220>
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His Tyr Cys His Ser Arg Thr Asp Thr Ile Thr His Cys Asn Ala
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Phe Cys Ser Gly Tyr Ser Pro Ser Val Leu Pro Ser Cys Leu Met
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<220>
<223> 合成多肽
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Pro Asn Thr Cys Met Ser Glu Arg Arg Ile Cys Ser Leu Thr Tyr
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Pro Arg Pro His Cys Ala Ile Leu Arg Gln Cys Leu Ala Ala Thr
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 167
Ala Val Gly Leu Leu Ala Pro Pro Gly Gly Leu Ser Gly Arg Ser Asp
1 5 10 15
Asn Ile
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 168
Ser Ile Ser Ser Gly Leu Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile
1 5 10
<210> 169
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 169
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Pro Leu Met Thr Cys Ser Asp Tyr Tyr
1 5 10 15
Thr Cys Leu Asn Asn Leu Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ala Val Gly
20 25 30
Leu Leu Ala Pro Pro Gly Gly Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly
35 40 45
Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr
50 55 60
Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu
65 70 75 80
His Ser Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly
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Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly
100 105 110
Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
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130 135 140
Gln Asn Leu Glu Leu Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu
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Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser
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Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn
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Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
195 200 205
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Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
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Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<211> 269
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 170
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Leu Ser Cys Thr His Ser Arg Tyr Asp
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Met His Cys Pro His Met Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ala Val Gly
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Leu Leu Ala Pro Pro Gly Gly Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly
35 40 45
Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr
50 55 60
Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu
65 70 75 80
His Ser Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly
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Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly
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Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
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Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala
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Gln Asn Leu Glu Leu Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu
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Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 171
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly His Tyr Cys His Ser Arg Thr Asp Thr
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Ile Thr His Cys Asn Ala Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ala Val Gly
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Leu Leu Ala Pro Pro Gly Gly Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly
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Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 172
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Trp Cys Pro Arg Leu Phe Asp Arg Pro
1 5 10 15
Ser Met Gly Cys Pro Thr Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ala Val Gly
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Leu Leu Ala Pro Pro Gly Gly Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly
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His Ser Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly
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Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly
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Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala
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Gln Asn Leu Glu Leu Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu
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Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 173
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Trp Trp Pro Pro Cys Gln Gly Gly Ala
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Trp Cys Glu Gln Arg Ile Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ala Val Gly
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Leu Leu Ala Pro Pro Gly Gly Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly
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50 55 60
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85 90 95
Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly
100 105 110
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115 120 125
Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala
130 135 140
Gln Asn Leu Glu Leu Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu
145 150 155 160
Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser
165 170 175
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn
180 185 190
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
195 200 205
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys
210 215 220
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp
225 230 235 240
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
245 250 255
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 174
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 174
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly His Ser Gly Cys Pro Arg Leu Phe Asp
1 5 10 15
Arg Cys Ser Ala Pro Ala Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ala Val Gly
20 25 30
Leu Leu Ala Pro Pro Gly Gly Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly
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Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr
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Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu
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Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 175
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<220>
<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成多肽
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<223> 合成多肽
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<223> 合成多肽
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<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 182
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<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成多肽
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
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<400> 186
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 187
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225 230 235 240
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
245 250 255
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 188
<211> 265
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 188
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Asp Cys Thr Gly Tyr Ser Pro Ser Val
1 5 10 15
Leu Pro Ala Cys Arg Val Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ile Ser
20 25 30
Ser Gly Leu Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly Gly Ser Asp Ile
35 40 45
Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro
50 55 60
Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser Asp Gly
65 70 75 80
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Leu Leu Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg
100 105 110
Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg
115 120 125
Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu
130 135 140
Leu Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr
145 150 155 160
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
165 170 175
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180 185 190
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
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210 215 220
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
225 230 235 240
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
245 250 255
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 189
<211> 265
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 189
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Phe Cys Ser Gly Tyr Ser Pro Ser Val
1 5 10 15
Leu Pro Ser Cys Leu Met Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ile Ser
20 25 30
Ser Gly Leu Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly Gly Ser Asp Ile
35 40 45
Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro
50 55 60
Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser Asp Gly
65 70 75 80
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Leu Leu Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg
100 105 110
Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg
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130 135 140
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210 215 220
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
225 230 235 240
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<210> 190
<211> 265
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 190
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Ser Lys Pro Cys Ser Tyr Met His Pro
1 5 10 15
Tyr Cys Phe Tyr Asn Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ile Ser
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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100 105 110
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210 215 220
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
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Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
245 250 255
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 191
<211> 265
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 191
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Leu Thr Arg Cys Thr Ile Ala His Pro
1 5 10 15
Tyr Cys Tyr Tyr Asn Tyr Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ile Ser
20 25 30
Ser Gly Leu Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly Gly Ser Asp Ile
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Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser Asp Gly
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Leu Leu Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg
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Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg
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Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
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Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
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Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 192
<211> 265
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 192
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Pro Asn Thr Cys Met Ser Glu Arg Arg
1 5 10 15
Ile Cys Ser Leu Thr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ile Ser
20 25 30
Ser Gly Leu Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly Gly Ser Asp Ile
35 40 45
Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro
50 55 60
Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser Asp Gly
65 70 75 80
Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln
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Leu Leu Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg
100 105 110
Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg
115 120 125
Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu
130 135 140
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Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
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Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
180 185 190
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
195 200 205
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
210 215 220
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
225 230 235 240
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
245 250 255
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 193
<211> 265
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 193
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Pro Arg Pro His Cys Ala Ile Leu Arg
1 5 10 15
Gln Cys Leu Ala Ala Thr Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ile Ser
20 25 30
Ser Gly Leu Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly Gly Ser Asp Ile
35 40 45
Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro
50 55 60
Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser Asp Gly
65 70 75 80
Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln
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Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
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Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
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Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 194
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 194
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Asp Cys Thr Gly Tyr Ser Pro Ser Val
1 5 10 15
Leu Pro Ala Cys Arg Val Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ala Val Gly
20 25 30
Leu Leu Ala Pro Pro Gly Gly Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
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Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala
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180 185 190
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Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp
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Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
245 250 255
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 195
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 195
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Phe Cys Ser Gly Tyr Ser Pro Ser Val
1 5 10 15
Leu Pro Ser Cys Leu Met Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ala Val Gly
20 25 30
Leu Leu Ala Pro Pro Gly Gly Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly
35 40 45
Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr
50 55 60
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His Ser Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly
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100 105 110
Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
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225 230 235 240
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
245 250 255
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 196
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 196
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Ser Lys Pro Cys Ser Tyr Met His Pro
1 5 10 15
Tyr Cys Phe Tyr Asn Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ala Val Gly
20 25 30
Leu Leu Ala Pro Pro Gly Gly Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
His Ser Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly
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100 105 110
Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
115 120 125
Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala
130 135 140
Gln Asn Leu Glu Leu Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu
145 150 155 160
Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser
165 170 175
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn
180 185 190
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
195 200 205
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys
210 215 220
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp
225 230 235 240
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
245 250 255
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 197
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 197
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Leu Thr Arg Cys Thr Ile Ala His Pro
1 5 10 15
Tyr Cys Tyr Tyr Asn Tyr Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ala Val Gly
20 25 30
Leu Leu Ala Pro Pro Gly Gly Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly
35 40 45
Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr
50 55 60
Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu
65 70 75 80
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100 105 110
Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
115 120 125
Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala
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Gln Asn Leu Glu Leu Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu
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Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser
165 170 175
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn
180 185 190
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
195 200 205
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys
210 215 220
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp
225 230 235 240
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
245 250 255
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 198
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 198
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Pro Asn Thr Cys Met Ser Glu Arg Arg
1 5 10 15
Ile Cys Ser Leu Thr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ala Val Gly
20 25 30
Leu Leu Ala Pro Pro Gly Gly Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly
35 40 45
Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr
50 55 60
Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu
65 70 75 80
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100 105 110
Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
115 120 125
Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala
130 135 140
Gln Asn Leu Glu Leu Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu
145 150 155 160
Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser
165 170 175
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn
180 185 190
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
195 200 205
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys
210 215 220
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp
225 230 235 240
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
245 250 255
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 199
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 199
Gln Gly Gln Ser Gly Gln Gly Pro Arg Pro His Cys Ala Ile Leu Arg
1 5 10 15
Gln Cys Leu Ala Ala Thr Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ala Val Gly
20 25 30
Leu Leu Ala Pro Pro Gly Gly Leu Ser Gly Arg Ser Asp Asn Ile Gly
35 40 45
Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr
50 55 60
Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu
65 70 75 80
His Ser Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly
85 90 95
Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly
100 105 110
Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
115 120 125
Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala
130 135 140
Gln Asn Leu Glu Leu Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu
145 150 155 160
Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser
165 170 175
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn
180 185 190
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
195 200 205
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys
210 215 220
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp
225 230 235 240
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
245 250 255
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 200
<211> 1335
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 200
gaggtgaagc tggaggagag cggccccgcc ctggtgaagc ctggagcttc cgtgaggatc 60
agctgtaagg cctctggcta cacctttaca aactactata tccattgggt gaagcagcgg 120
ccaggacagg gcctggacta catcggctgg atctatcccg gcaacgtgta catccagtat 180
aatgagaagt tcaagggcaa ggccaccctg acagctgata agtccagctc taccgctttt 240
atgcagctgt ccagcctgac aagcgaggac tctgccgtgt acttctgcgc tagggatggc 300
ccttggtttg cctattgggg ccagggcacc ctggtgacag tgtcttccgc ttccaccaag 360
ggcccatcag ttttcccctt ggctccaagt tctaaatcca caagcggtgg aacagctgca 420
ctgggatgcc tcgttaaaga ttatttccct gagcctgtga cagtgagctg gaatagcgga 480
gcattgactt caggtgtgca cacttttccc gctgtgttgc agtcctccgg tctgtactca 540
ctgtccagtg tcgtaaccgt cccttctagc agcttgggaa cccagaccta catctgtaac 600
gtcaaccata aaccatccaa cacaaaggtg gataagaagg ttgaaccaaa gagctgtgat 660
aagacacata catgccctcc ttgtcctgca ccagagctcc tcggaggtcc atctgtgttc 720
ctgtttcccc ccaaacccaa ggacactctt atgatctctc gtactccaga ggtcacctgt 780
gttgttgtcg acgtgagcca tgaagatccc gaggttaaat tcaactggta cgtggatgga 840
gtcgaggttc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc aatataattc tacatatcgg 900
gtagtgagcg ttctgaccgt gctccaccaa gattggctca atggaaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggctct tcccgctccc attgagaaaa ctatctccaa agccaagggg 1020
cagccacggg aaccccaggt gtatacattg cccccatcta gagacgagct gaccaagaac 1080
caggtgagtc tcacttgtct ggtcaagggg ttttaccctt ctgacattgc tgtagagtgg 1140
gagtctaacg gacagccaga aaacaactac aagacaactc ccccagtgct ggacagcgac 1200
gggagcttct tcctctactc caagttgact gtagacaagt ctagatggca gcaaggaaac 1260
gttttctcct gctcagtaat gcatgaggct ctgcacaatc actataccca gaaatcactg 1320
tcccttagcc caggg 1335
<210> 201
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 201
gatattgtgc tgacccagac tccattctcc aatcccgtca ctcttggaac atcagcttcc 60
atctcctgca ggtctagtaa gagtctccta catagtgatg gcttcactta tttgtattgg 120
tttctgcaga agccaggcca gtctcctcat ctcctgattt atcagacgtc caaccttgcc 180
tcaggagtcc cagacaggtt cagtagcagt gggtcaggaa ctgatttcac actgagaatc 240
agcagagtgg aggctgaaga tgtgggtgtt tattactgtg ctcaaaatct agaacttccc 300
aacacgttcg gaggggggac caagctggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657
<210> 202
<211> 1335
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 202
caggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggagcttc cgtgaaggtg 60
agctgtaagg cctctggcta caccttcaca aactactata tccattgggt gaggcaggct 120
ccaggacagc ggctggagta catcggatgg atctatcctg gcaacgtgta catccagtat 180
aatgagaagt ttaagggcag ggccaccctg acagctgaca agagcgcctc taccgcttac 240
atggagctgt ccagcctgag atctgaggac acagccgtgt actattgcgc tcgcgatggc 300
ccttggtttg cctattgggg ccagggcacc ctggtgacag tgtcttccgc ttccaccaag 360
ggcccatcag ttttcccctt ggctccaagt tctaaatcca caagcggtgg aacagctgca 420
ctgggatgcc tcgttaaaga ttatttccct gagcctgtga cagtgagctg gaatagcgga 480
gcattgactt caggtgtgca cacttttccc gctgtgttgc agtcctccgg tctgtactca 540
ctgtccagtg tcgtaaccgt cccttctagc agcttgggaa cccagaccta catctgtaac 600
gtcaaccata aaccatccaa cacaaaggtg gataagaagg ttgaaccaaa gagctgtgat 660
aagacacata catgccctcc ttgtcctgca ccagagctcc tcggaggtcc atctgtgttc 720
ctgtttcccc ccaaacccaa ggacactctt atgatctctc gtactccaga ggtcacctgt 780
gttgttgtcg acgtgagcca tgaagatccc gaggttaaat tcaactggta cgtggatgga 840
gtcgaggttc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc aatataattc tacatatcgg 900
gtagtgagcg ttctgaccgt gctccaccaa gattggctca atggaaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggctct tcccgctccc attgagaaaa ctatctccaa agccaagggg 1020
cagccacggg aaccccaggt gtatacattg cccccatcta gagacgagct gaccaagaac 1080
caggtgagtc tcacttgtct ggtcaagggg ttttaccctt ctgacattgc tgtagagtgg 1140
gagtctaacg gacagccaga aaacaactac aagacaactc ccccagtgct ggacagcgac 1200
gggagcttct tcctctactc caagttgact gtagacaagt ctagatggca gcaaggaaac 1260
gttttctcct gctcagtaat gcatgaggct ctgcacaatc actataccca gaaatcactg 1320
tcccttagcc caggg 1335
<210> 203
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 203
gacatcgtgc tgacccagac accactgtct ctgtccgtga ccccaggaca gcctgctagc 60
atctcttgta ggtccagcag gtccctgctg catagcgatg gcttcaccta cctgtattgg 120
tttctgcaga agccaggcca gtctccccag ctgctgatct accagacatc taacctggct 180
tccggcgtgc ctgacaggtt ctcttccagc ggcagcggca ccgacttcac cctgaagatc 240
tctcgggtgg aggctgagga cgtgggcgtg tactattgcg ctcagaacct ggagctgcca 300
aatacctttg gccagggcac aaagctggag atcaagcgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657
<210> 204
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 204
caggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggagcttc cgtgaaggtg 60
agctgtaagg cctctggcta caccttcaca aactaccaca tccattgggt gaggcaggct 120
ccaggacagc ggctggagta catcggatgg atctatcctg gcaacgtgta catccagtat 180
aatgagaagt ttaagggcag ggccaccctg acagctgaca agagcgcctc taccgcttac 240
atggagctgt ccagcctgag atctgaggac acagccgtgt actattgcgc tcgcgatggc 300
ccttggtttg cctattgggg ccagggcacc ctggtgacag tgtcttccgc ttccaccaag 360
ggcccatcag ttttcccctt ggctccaagt tctaaatcca caagcggtgg aacagctgca 420
ctgggatgcc tcgttaaaga ttatttccct gagcctgtga cagtgagctg gaatagcgga 480
gcattgactt caggtgtgca cacttttccc gctgtgttgc agtcctccgg tctgtactca 540
ctgtccagtg tcgtaaccgt cccttctagc agcttgggaa cccagaccta catctgtaac 600
gtcaaccata aaccatccaa cacaaaggtg gataagaagg ttgaaccaaa gagctgtgat 660
aagacacata catgccctcc ttgtcctgca ccagagctcc tcggaggtcc atctgtgttc 720
ctgtttcccc ccaaacccaa ggacactctt atgatctctc gtactccaga ggtcacctgt 780
gttgttgtcg acgtgagcca tgaagatccc gaggttaaat tcaactggta cgtggatgga 840
gtcgaggttc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc aatataattc tacatatcgg 900
gtagtgagcg ttctgaccgt gctccaccaa gattggctca atggaaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggctct tcccgctccc attgagaaaa ctatctccaa agccaagggg 1020
cagccacggg aaccccaggt gtatacattg cccccatcta gagacgagct gaccaagaac 1080
caggtgagtc tcacttgtct ggtcaagggg ttttaccctt ctgacattgc tgtagagtgg 1140
gagtctaacg gacagccaga aaacaactac aagacaactc ccccagtgct ggacagcgac 1200
gggagcttct tcctctactc caagttgact gtagacaagt ctagatggca gcaaggaaac 1260
gttttctcct gctcagtaat gcatgaggct ctgcacaatc actataccca gaaatcactg 1320
tcccttagcc cagggtga 1338
<210> 205
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 205
caggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggagcttc cgtgaaggtg 60
agctgtaagg cctctggcta caccttcaca aactacgaca tccattgggt gaggcaggct 120
ccaggacagc ggctggagta catcggatgg atctatcctg gcaacgtgta catccagtat 180
aatgagaagt ttaagggcag ggccaccctg acagctgaca agagcgcctc taccgcttac 240
atggagctgt ccagcctgag atctgaggac acagccgtgt actattgcgc tcgcgatggc 300
ccttggtttg cctattgggg ccagggcacc ctggtgacag tgtcttccgc ttccaccaag 360
ggcccatcag ttttcccctt ggctccaagt tctaaatcca caagcggtgg aacagctgca 420
ctgggatgcc tcgttaaaga ttatttccct gagcctgtga cagtgagctg gaatagcgga 480
gcattgactt caggtgtgca cacttttccc gctgtgttgc agtcctccgg tctgtactca 540
ctgtccagtg tcgtaaccgt cccttctagc agcttgggaa cccagaccta catctgtaac 600
gtcaaccata aaccatccaa cacaaaggtg gataagaagg ttgaaccaaa gagctgtgat 660
aagacacata catgccctcc ttgtcctgca ccagagctcc tcggaggtcc atctgtgttc 720
ctgtttcccc ccaaacccaa ggacactctt atgatctctc gtactccaga ggtcacctgt 780
gttgttgtcg acgtgagcca tgaagatccc gaggttaaat tcaactggta cgtggatgga 840
gtcgaggttc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc aatataattc tacatatcgg 900
gtagtgagcg ttctgaccgt gctccaccaa gattggctca atggaaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggctct tcccgctccc attgagaaaa ctatctccaa agccaagggg 1020
cagccacggg aaccccaggt gtatacattg cccccatcta gagacgagct gaccaagaac 1080
caggtgagtc tcacttgtct ggtcaagggg ttttaccctt ctgacattgc tgtagagtgg 1140
gagtctaacg gacagccaga aaacaactac aagacaactc ccccagtgct ggacagcgac 1200
gggagcttct tcctctactc caagttgact gtagacaagt ctagatggca gcaaggaaac 1260
gttttctcct gctcagtaat gcatgaggct ctgcacaatc actataccca gaaatcactg 1320
tcccttagcc cagggtga 1338
<210> 206
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列(Artifical Sequence)
<400> 206
caggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggagcttc cgtgaaggtg 60
agctgtaagg cctctggcta caccttcaca aactacgaca tccattgggt gaggcaggct 120
ccaggacagc ggctggagta catcggatgg atctatcctg gcaacgtgta catccagtat 180
aatgagaagt ttaagggcag ggccaccctg acagctgaca agagcgcctc taccgcttac 240
atggagctgt ccagcctgag atctgaggac acagccgtgt actattgcgc tcgcgatggc 300
ccttggtttg cctattgggg ccagggcacc ctggtgacag tgtcttccgc ttccaccaag 360
ggcccatcag ttttcccctt ggctccaagt tctaaatcca caagcggtgg aacagctgca 420
ctgggatgcc tcgttaaaga ttatttccct gagcctgtga cagtgagctg gaatagcgga 480
gcattgactt caggtgtgca cacttttccc gctgtgttgc agtcctccgg tctgtactca 540
ctgtccagtg tcgtaaccgt cccttctagc agcttgggaa cccagaccta catctgtaac 600
gtcaaccata aaccatccaa cacaaaggtg gataagaagg ttgaaccaaa gagctgtgat 660
aagacacata catgccctcc ttgtcctgca ccagagctcc tcggaggtcc atctgtgttc 720
ctgtttcccc ccaaacccaa ggacactctt atgatctctc gtactccaga ggtcacctgt 780
gttgttgtcg acgtgagcca tgaagatccc gaggttaaat tcaactggta cgtggatgga 840
gtcgaggttc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc aatataattc tacatatcgg 900
gtagtgagcg ttctgaccgt gctccaccaa gattggctca atggaaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggctct tcccgctccc attgagaaaa ctatctccaa agccaagggg 1020
cagccacggg aaccccaggt gtatacattg cccccatcta gagacgagct gaccaagaac 1080
caggtgagtc tcacttgtct ggtcaagggg ttttaccctt ctgacattgc tgtagagtgg 1140
gagtctaacg gacagccaga aaacaactac aagacaactc ccccagtgct ggacagcgac 1200
gggagcttct tcctctactc caagttgact gtagacaagt ctagatggca gcaaggaaac 1260
gttttctcct gctcagtaat gcatgaggct ctgcacaatc actataccca gaaatcactg 1320
tcccttagcc cagggtga 1338
<210> 207
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 207
caggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggagcttc cgtgaaggtg 60
agctgtaagg cctctggcta caccttcaca aactactata tccattgggt gaggcaggct 120
ccaggacagc ggctggagta catcggatgg atctatcctg gcaacgtgta catccagtat 180
aatgagaagt ttaagggcag ggccaccctg acagctgaca agagcgcctc taccgcttac 240
atggagctgt ccagcctgag atctgaggac acagccgtgt actattgcgc tcgcgatggc 300
tactggtttg cctattgggg ccagggcacc ctggtgacag tgtcttccgc ttccaccaag 360
ggcccatcag ttttcccctt ggctccaagt tctaaatcca caagcggtgg aacagctgca 420
ctgggatgcc tcgttaaaga ttatttccct gagcctgtga cagtgagctg gaatagcgga 480
gcattgactt caggtgtgca cacttttccc gctgtgttgc agtcctccgg tctgtactca 540
ctgtccagtg tcgtaaccgt cccttctagc agcttgggaa cccagaccta catctgtaac 600
gtcaaccata aaccatccaa cacaaaggtg gataagaagg ttgaaccaaa gagctgtgat 660
aagacacata catgccctcc ttgtcctgca ccagagctcc tcggaggtcc atctgtgttc 720
ctgtttcccc ccaaacccaa ggacactctt atgatctctc gtactccaga ggtcacctgt 780
gttgttgtcg acgtgagcca tgaagatccc gaggttaaat tcaactggta cgtggatgga 840
gtcgaggttc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc aatataattc tacatatcgg 900
gtagtgagcg ttctgaccgt gctccaccaa gattggctca atggaaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggctct tcccgctccc attgagaaaa ctatctccaa agccaagggg 1020
cagccacggg aaccccaggt gtatacattg cccccatcta gagacgagct gaccaagaac 1080
caggtgagtc tcacttgtct ggtcaagggg ttttaccctt ctgacattgc tgtagagtgg 1140
gagtctaacg gacagccaga aaacaactac aagacaactc ccccagtgct ggacagcgac 1200
gggagcttct tcctctactc caagttgact gtagacaagt ctagatggca gcaaggaaac 1260
gttttctcct gctcagtaat gcatgaggct ctgcacaatc actataccca gaaatcactg 1320
tcccttagcc cagggtga 1338
<210> 208
<211> 807
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 208
cagggacagt ctggacaggg atggtggcca ccttgccagg gaggagcttg gtgtgagcag 60
aggatcggag gaggctccag cggaggagct gtgggcctgc tggctccacc aggaggactg 120
tctggcagat ccgacaacat cggcggctcc gatatcgtgc tgacccagac acccctgagc 180
ctgtctgtga cccctggcca gccagcctcc atcagctgca ggtcttcccg gtccctgctg 240
catagcgacg gcttcaccta cctgtattgg tttctgcaga agcccggcca gagccctcag 300
ctgctgatct accagacatc taatctggct tccggcgtgc cagacagatt cagctcttcc 360
ggcagcggca ccgacttcac cctgaagatc tctcgcgtgg aggccgagga tgtgggcgtg 420
tactattgtg ctcagaacct ggagctgccc aatacctttg gccagggcac aaagctggag 480
atcaagcgta cggtggctgc accatctgtc ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg 540
aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg ctgaataact tctatcccag agaggccaaa 600
gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag 660
caggacagca aggacagcac ctacagcctc agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac 720
tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc 780
acaaagagct tcaacagggg agagtgt 807
<210> 209
<211> 795
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 209
cagggacaga gcggacaggg atggtggcca ccttgccagg gaggagcttg gtgtgagcag 60
aggatcggag gaggctccag cggaggctct atctcttccg gcctgctgag cggcagatct 120
gacaacatcg gcggctccga tatcgtgctg acccagacac cactgtccct gagcgtgacc 180
ccaggacagc cagcctctat ctcctgcagg agctctcggt ctctgctgca ttccgacggc 240
ttcacctacc tgtattggtt tctgcagaag cctggccagt ctccacagct gctgatctac 300
cagacaagca atctggcttc tggcgtgccc gacagattct ccagctctgg ctccggcacc 360
gacttcaccc tgaagatcag ccgcgtggag gctgaggatg tgggcgtgta ctattgtgct 420
cagaacctgg agctgcctaa tacctttggc cagggcacaa agctggagat caagcgtacg 480
gtggctgcac catctgtctt catcttcccg ccatctgatg agcagttgaa atctggaact 540
gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc tatcccagag aggccaaagt acagtggaag 600
gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc caggagagtg tcacagagca ggacagcaag 660
gacagcacct acagcctcag cagcaccctg acgctgagca aagcagacta cgagaaacac 720
aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc 780
aacaggggag agtgt 795
<210> 210
<211> 283
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 210
Gln Arg Asp Cys Val Cys Asp Asn Tyr Lys Leu Ala Thr Ser Cys Ser
1 5 10 15
Leu Asn Glu Tyr Gly Glu Cys Gln Cys Thr Ser Tyr Gly Thr Gln Asn
20 25 30
Thr Val Ile Cys Ser Lys Leu Ala Ser Lys Cys Leu Ala Met Lys Ala
35 40 45
Glu Met Thr His Ser Lys Ser Gly Arg Arg Ile Lys Pro Glu Gly Ala
50 55 60
Ile Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr Asp Pro Asp Cys Asp Glu Gln Gly
65 70 75 80
Ser Lys Cys Leu Ala Met Lys Ala Glu Met Thr His Ser Lys Ser Gly
85 90 95
Arg Arg Ile Lys Pro Glu Gly Ala Ile Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr
100 105 110
Asp Pro Asp Cys Asp Glu Gln Gly Leu Phe Lys Ala Lys Gln Cys Asn
115 120 125
Gly Thr Ala Thr Cys Trp Cys Val Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr
130 135 140
Asp Lys Asp Thr Glu Ile Thr Cys Ser Glu Arg Val Arg Thr Tyr Trp
145 150 155 160
Ile Ile Ile Glu Leu Lys His Lys Glu Arg Glu Ser Pro Tyr Asp His
165 170 175
Gln Ser Leu Gln Thr Ala Leu Gln Glu Ala Phe Thr Ser Arg Tyr Lys
180 185 190
Leu Asn Gln Lys Phe Ile Lys Asn Ile Met Tyr Glu Asn Asn Val Ile
195 200 205
Thr Ile Asp Leu Met Gln Asn Ser Ser Gln Lys Thr Gln Asp Asp Val
210 215 220
Asp Ile Ala Asp Val Ala Tyr Tyr Phe Glu Lys Asp Val Lys Gly Glu
225 230 235 240
Ser Leu Phe His Ser Ser Lys Ser Met Asp Leu Arg Val Asn Gly Glu
245 250 255
Pro Leu Asp Leu Asp Pro Gly Gln Thr Leu Ile Tyr Tyr Val Asp Glu
260 265 270
Lys Ala Pro Glu Phe Ser Met Gln Gly Leu Thr
275 280
<210> 211
<211> 282
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 211
Gln Arg Asp Cys Val Cys Asp Asn Tyr Lys Leu Ala Thr Ser Cys Ser
1 5 10 15
Leu Asn Glu Tyr Gly Glu Cys Gln Cys Thr Ser Tyr Gly Thr Gln Asn
20 25 30
Thr Val Ile Cys Ser Lys Leu Ala Ala Lys Cys Leu Val Met Lys Ala
35 40 45
Glu Met Asn Gly Ser Lys Leu Gly Arg Arg Ala Lys Pro Glu Gly Ala
50 55 60
Leu Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr Asp Pro Asp Cys Asp Glu Ser Gly
65 70 75 80
Ala Lys Cys Leu Val Met Lys Ala Glu Met Asn Gly Ser Lys Leu Gly
85 90 95
Arg Arg Ala Lys Pro Glu Gly Ala Leu Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr
100 105 110
Asp Pro Asp Cys Asp Glu Ser Gly Leu Phe Lys Ala Lys Gln Cys Asn
115 120 125
Gly Thr Ser Met Cys Trp Cys Val Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr
130 135 140
Asp Lys Asp Thr Glu Ile Thr Cys Ser Glu Arg Val Arg Thr Tyr Trp
145 150 155 160
Ile Ile Ile Glu Leu Lys His Lys Ala Arg Glu Lys Pro Tyr Asp Ser
165 170 175
Lys Ser Leu Arg Thr Ala Leu Gln Lys Glu Ile Thr Thr Arg Tyr Gln
180 185 190
Leu Asp Pro Lys Phe Ile Thr Ser Ile Leu Tyr Glu Asn Asn Val Ile
195 200 205
Thr Ile Asp Leu Val Gln Asn Ser Ser Gln Lys Thr Gln Asn Asp Val
210 215 220
Asp Ile Ala Asp Val Ala Tyr Tyr Phe Glu Lys Asp Val Lys Gly Glu
225 230 235 240
Ser Leu Phe His Ser Lys Lys Met Asp Leu Thr Val Asn Gly Glu Gln
245 250 255
Leu Asp Leu Asp Pro Gly Gln Thr Leu Ile Tyr Tyr Val Asp Glu Lys
260 265 270
Ala Pro Glu Phe Ser Met Gln Gly Leu Lys
275 280
<210> 212
<211> 282
<212> PRT
<213> 合成多肽(Synthetic Polypeptide)
<400> 212
Gln Glu Glu Cys Val Cys Glu Asn Tyr Lys Leu Ala Val Asn Cys Phe
1 5 10 15
Val Asn Asn Asn Arg Gln Cys Gln Cys Thr Ser Val Gly Ala Gln Asn
20 25 30
Thr Val Ile Cys Ser Lys Leu Ala Ala Lys Cys Leu Ala Met Lys Ala
35 40 45
Glu Met Thr His Ser Lys Ser Gly Arg Arg Ile Lys Pro Glu Gly Ala
50 55 60
Ile Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr Asp Pro Asp Cys Asp Glu Gln Gly
65 70 75 80
Ala Lys Cys Leu Ala Met Lys Ala Glu Met Thr His Ser Lys Ser Gly
85 90 95
Arg Arg Ile Lys Pro Glu Gly Ala Ile Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr
100 105 110
Asp Pro Asp Cys Asp Glu Gln Gly Leu Phe Lys Ala Lys Gln Cys Asn
115 120 125
Gly Thr Ala Thr Cys Trp Cys Val Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr
130 135 140
Asp Lys Asp Thr Glu Ile Thr Cys Ser Glu Arg Val Arg Thr Tyr Trp
145 150 155 160
Ile Ile Ile Glu Leu Lys His Lys Ala Arg Glu Lys Pro Tyr Asp Ser
165 170 175
Lys Ser Leu Arg Thr Ala Leu Gln Lys Glu Ile Thr Thr Arg Tyr Gln
180 185 190
Leu Asp Pro Lys Phe Ile Thr Ser Ile Leu Tyr Glu Asn Asn Val Ile
195 200 205
Thr Ile Asp Leu Val Gln Asn Ser Ser Gln Lys Thr Gln Asn Asp Val
210 215 220
Asp Ile Ala Asp Val Ala Tyr Tyr Phe Glu Lys Asp Val Lys Gly Glu
225 230 235 240
Ser Leu Phe His Ser Lys Lys Met Asp Leu Thr Val Asn Gly Glu Gln
245 250 255
Leu Asp Leu Asp Pro Gly Gln Thr Leu Ile Tyr Tyr Val Asp Glu Lys
260 265 270
Ala Pro Glu Phe Ser Met Gln Gly Leu Lys
275 280
<210> 213
<211> 282
<212> PRT
<213> 合成多肽(Synthetic Polypeptide)
<400> 213
Gln Arg Asp Cys Val Cys Asp Asn Tyr Lys Leu Ala Thr Ser Cys Ser
1 5 10 15
Leu Asn Glu Tyr Gly Glu Cys Gln Cys Thr Ser Tyr Gly Thr Gln Asn
20 25 30
Thr Val Ile Cys Ser Lys Leu Ala Ser Lys Cys Leu Ala Met Lys Ala
35 40 45
Glu Met Thr His Ser Lys Ser Gly Arg Arg Ile Lys Pro Glu Gly Ala
50 55 60
Ile Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr Asp Pro Asp Cys Asp Glu Gln Gly
65 70 75 80
Ser Lys Cys Leu Ala Met Lys Ala Glu Met Thr His Ser Lys Ser Gly
85 90 95
Arg Arg Ile Lys Pro Glu Gly Ala Ile Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr
100 105 110
Asp Pro Asp Cys Asp Glu Gln Gly Leu Phe Lys Ala Lys Gln Cys Asn
115 120 125
Gly Thr Ala Thr Cys Trp Cys Val Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr
130 135 140
Asp Lys Asp Thr Glu Ile Thr Cys Ser Glu Arg Val Arg Thr Tyr Trp
145 150 155 160
Ile Ile Ile Glu Leu Lys His Lys Ala Arg Glu Lys Pro Tyr Asp Ser
165 170 175
Lys Ser Leu Arg Thr Ala Leu Gln Lys Glu Ile Thr Thr Arg Tyr Gln
180 185 190
Leu Asp Pro Lys Phe Ile Thr Ser Ile Leu Tyr Glu Asn Asn Val Ile
195 200 205
Thr Ile Asp Leu Val Gln Asn Ser Ser Gln Lys Thr Gln Asn Asp Val
210 215 220
Asp Ile Ala Asp Val Ala Tyr Tyr Phe Glu Lys Asp Val Lys Gly Glu
225 230 235 240
Ser Leu Phe His Ser Lys Lys Met Asp Leu Thr Val Asn Gly Glu Gln
245 250 255
Leu Asp Leu Asp Pro Gly Gln Thr Leu Ile Tyr Tyr Val Asp Glu Lys
260 265 270
Ala Pro Glu Phe Ser Met Gln Gly Leu Lys
275 280
<210> 214
<211> 283
<212> PRT
<213> 合成多肽(Synthetic Polypeptide)
<400> 214
Gln Glu Glu Cys Val Cys Glu Asn Tyr Lys Leu Ala Val Asn Cys Phe
1 5 10 15
Val Asn Asn Asn Arg Gln Cys Gln Cys Thr Ser Val Gly Ala Gln Asn
20 25 30
Thr Val Ile Cys Ser Lys Leu Ala Ala Lys Cys Leu Val Met Lys Ala
35 40 45
Glu Met Asn Gly Ser Lys Leu Gly Arg Arg Ala Lys Pro Glu Gly Ala
50 55 60
Leu Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr Asp Pro Asp Cys Asp Glu Ser Gly
65 70 75 80
Ala Lys Cys Leu Val Met Lys Ala Glu Met Asn Gly Ser Lys Leu Gly
85 90 95
Arg Arg Ala Lys Pro Glu Gly Ala Leu Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr
100 105 110
Asp Pro Asp Cys Asp Glu Ser Gly Leu Phe Lys Ala Lys Gln Cys Asn
115 120 125
Gly Thr Ser Met Cys Trp Cys Val Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr
130 135 140
Asp Lys Asp Thr Glu Ile Thr Cys Ser Glu Arg Val Arg Thr Tyr Trp
145 150 155 160
Ile Ile Ile Glu Leu Lys His Lys Glu Arg Glu Ser Pro Tyr Asp His
165 170 175
Gln Ser Leu Gln Thr Ala Leu Gln Glu Ala Phe Thr Ser Arg Tyr Lys
180 185 190
Leu Asn Gln Lys Phe Ile Lys Asn Ile Met Tyr Glu Asn Asn Val Ile
195 200 205
Thr Ile Asp Leu Met Gln Asn Ser Ser Gln Lys Thr Gln Asp Asp Val
210 215 220
Asp Ile Ala Asp Val Ala Tyr Tyr Phe Glu Lys Asp Val Lys Gly Glu
225 230 235 240
Ser Leu Phe His Ser Ser Lys Ser Met Asp Leu Arg Val Asn Gly Glu
245 250 255
Pro Leu Asp Leu Asp Pro Gly Gln Thr Leu Ile Tyr Tyr Val Asp Glu
260 265 270
Lys Ala Pro Glu Phe Ser Met Gln Gly Leu Thr
275 280

Claims (108)

1.一种EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)重链CDR1(VH-CDR1)，其包含序列X1YX3X4H，其中X1选自N和S，X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W，并且X4选自I和M(SEQ ID NO:5)；
(b)重链CDR2(VH-CDR2)，其包含序列WX2X3PGX6VYIQYX12X13KFX17G，其中X2选自I和F，X3选自Y和N，X6选自N和D，X12选自N和S，X13选自E和Q，并且X17选自K和Q(SEQ ID NO:7)；
(c)重链CDR3(VH-CDR3)，其包含序列X1GX3X4FAY，其中X1选自D和E，X3选自P、A、S、Y、F、G、T和V，并且X4选自Y和W(SEQ ID NO:8)；
(d)轻链CDR1(VL-CDR1)，其包含序列RSSX4SLLHSX10GX12TYLX16，其中X4选自R和K，X10选自N和D，X12选自F和I，并且X16选自Y和S(SEQ ID NO:10)；
(e)轻链CDR2(VL-CDR2)，其包含序列QTSNLAS(SEQ ID NO:40)；以及
(f)轻链CDR3(VL-CDR3)，其包含序列X1QX3LELPX8T，其中X1选自A、L和Q，X3选自S、G、Y和N，并且X8选自N和W(SEQ ID NO:11)。
2.如权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)重链CDR1(VH-CDR1)，其包含序列NYX3IH，其中X3选自Y、N、F、S、H、D、L、I和W(SEQ IDNO:6)；
(b)重链CDR2(VH-CDR2)，其包含序列WX2X3PGX6VYIQYX12X13KFX17G，其中X2选自I和F，X3选自Y和N，X6选自N和D，X12选自N和S，X13选自E和Q，并且X17选自K和Q(SEQ ID NO:7)；
(c)重链CDR3(VH-CDR3)，其包含序列DGPX4FAY，其中X4选自Y和W(SEQ ID NO:9)；
(d)轻链CDR1(VL-CDR1)，其包含序列RSSX4SLLHSX10GX12TYLX16，其中X4选自R和K，X10选自N和D，X12选自F和I，并且X16选自Y和S(SEQ ID NO:10)；
(e)轻链CDR2(VL-CDR2)，其包含序列QTSNLAS(SEQ ID NO:40)；以及
(f)轻链CDR3(VL-CDR3)，其包含序列AQX3LELPNT，其中X3选自S、G、Y和N(SEQ ID NO:12)。
3.如权利要求1或2所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含具有选自下组的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3：
(a)分别SEQ ID NO:13-15、42、40和41；
(b)分别SEQ ID NO:13-15和39-41；
(c)分别SEQ ID NO:13、26、15和39-41；以及
(d)分别SEQ ID NO:13、24、15、42、40和41。
4.如权利要求1-3中任一项所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段以3.0nM或更小的KD结合至人EpCAM和食蟹猴EpCAM两者。
5.如权利要求4所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段特异性地结合至具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的人EpCAM的细胞外结构域内的表位。
6.如权利要求5所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)VH-CDR1，其包含序列NYYIH(SEQ ID NO:13)；
(b)VH-CDR2，其包含序列WIYPGNVYIQYNEKFKG(SEQ ID NO:14)；
(c)VH-CDR3，其包含序列DGPWFAY(SEQ ID NO:15)；
(d)VL-CDR1，其包含序列RSSRSLLHSDGFTYLY(SEQ ID NO:42)；
(e)VL-CDR2，其包含序列QTSNLAS(SEQ ID NO:40)；以及
(f)和VL-CDR3，其包含序列AQNLELPNT(SEQ ID NO:41)。
7.如权利要求4所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)VH-CDR1，其包含序列NYYIH(SEQ ID NO:13)；
(b)VH-CDR2，其包含序列WIYPGNVYIQYNEKFKG(SEQ ID NO:14)；
(c)VH-CDR3，其包含序列DGPWFAY(SEQ ID NO:15)；
(d)VL-CDR1，其包含序列RSSKSLLHSDGFTYLY(SEQ ID NO:39)；
(e)VL-CDR2，其包含序列QTSNLAS(SEQ ID NO:40)；以及
(f)VL-CDR3，其包含序列AQNLELPNT(SEQ ID NO:41)。
8.如权利要求3所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含选自以下的VH和VL：
(a)具有SEQ ID NO:54的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；
(b)具有SEQ ID NO:54的序列的VH和具有SEQ ID NO:87的序列的VL；
(c)具有SEQ ID NO:55的序列的VH和具有SEQ ID NO:87的序列的VL；
(d)具有SEQ ID NO:56的序列的VH和具有SEQ ID NO:88的序列的VL；
(e)具有SEQ ID NO:55的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；以及
(f)具有SEQ ID NO:56的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL。
9.如权利要求8所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:54的VH和SEQ ID NO:89的VL。
10.如权利要求8所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:54的VH和SEQ ID NO:87的VL。
11.如权利要求8所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含选自以下的重链和轻链：
(a)具有SEQ ID NO:103的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC；
(b)具有SEQ ID NO:103的序列的HC和具有SEQ ID NO:138的序列的LC；
(c)具有SEQ ID NO:105的序列的HC和具有SEQ ID NO:139的序列的LC；
(d)具有SEQ ID NO:106的序列的HC和具有SEQ ID NO:139的序列的LC；
(e)具有SEQ ID NO:105的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC；以及
(f)具有SEQ ID NO:106的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC。
12.如权利要求11所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:103的HC和SEQ ID NO:140的LC。
13.如权利要求11所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:103的HC和SEQ ID NO:138的LC。
14.如权利要求1或2所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含具有选自由以下组成的组的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3：
(a)分别SEQ ID NO:22、14、15、42、40和41；
(b)分别SEQ ID NO:13、14、33、42、40和41；
(c)分别SEQ ID NO:23、14、15、42、40和41；以及
(d)分别SEQ ID NO:25、14、15、42、40和41。
15.如权利要求14所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)VH-CDR1，其包含序列NYHIH(SEQ ID NO:22)；
(b)VH-CDR2，其包含序列WIYPGNVYIQYNEKFKG(SEQ ID NO:14)；
(c)VH-CDR3，其包含序列DGPWFAY(SEQ ID NO:15)；
(d)VL-CDR1，其包含序列RSSRSLLHSDGFTYLY(SEQ ID NO:42)；
(e)VL-CDR2，其包含序列QTSNLAS(SEQ ID NO:40)；以及
(f)VL-CDR3，其包含序列AQNLELPNT(SEQ ID NO:41)。
16.如权利要求14所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)VH-CDR1，其包含序列NYYIH(SEQ ID NO:13)；
(b)VH-CDR2，其包含序列WIYPGNVYIQYNEKFKG(SEQ ID NO:14)；
(c)VH-CDR3，其包含序列DGYWFAY(SEQ ID NO:33)；
(d)VL-CDR1，其包含序列RSSRSLLHSDGFTYLY(SEQ ID NO:42)；
(e)VL-CDR2，其包含序列QTSNLAS(SEQ ID NO:40)；以及
(f)VL-CDR3，其包含序列AQNLELPNT(SEQ ID NO:41)。
17.如权利要求14所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含选自以下的VH和VL：
(a)具有SEQ ID NO:75的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；
(b)具有SEQ ID NO:77的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；
(c)具有SEQ ID NO:76的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL；以及
(d)具有SEQ ID NO:84的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL。
18.如权利要求17所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:75的VH和SEQ ID NO:89的VL。
19.如权利要求17所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:77的VH和SEQ ID NO:89的VL。
20.如权利要求17所述的EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含选自以下的重链和轻链：
(a)具有SEQ ID NO:125的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC；
(b)具有SEQ ID NO:127的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC；
(c)具有SEQ ID NO:126的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC；以及
(d)具有SEQ ID NO:134的序列的HC和具有SEQ ID NO:140的序列的LC。
21.如权利要求20所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:125的HC和SEQ ID NO:140的LC。
22.如权利要求20所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:127的HC和SEQ ID NO:140的LC。
23.如权利要求1-22中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段是鼠抗体、非人哺乳动物抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。
24.如权利要求1-23中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体是全长抗体。
25.如权利要求24所述的全长抗体，其中所述抗体是人IgG1。
26.如权利要求1-23中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体片段是Fab、Fab'、F(ab’)2、Fd、单链Fv或scFv、二硫键连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、胞内抗体、IgGΔCH2、微型抗体、F(ab’)3、四抗体、三抗体、双抗体、单结构域抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2或scFv-Fc。
27.一种可活化抗体，所述可活化抗体包含如权利要求1-26中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述可活化抗体还包含
(a)与抗体或抗体片段偶联的可裂解部分，其中所述可裂解部分是充当蛋白酶的底物的多肽；以及
(b)与所述抗体或抗体片段偶联的掩蔽部分，其中当所述可活化抗体处于未裂解状态时，所述掩蔽部分抑制所述抗体或抗体片段与EpCAM的结合，
其中处于所述未裂解状态的可活化抗体从N末端至C末端具有如下结构排列：(掩蔽部分)-(可裂解部分)-(抗体或抗体片段)或(抗体或抗体片段)-(可裂解部分)-(掩蔽部分)。
28.一种EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含：
(a)EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有选自下组的成员的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3：
(i)分别SEQ ID NO:13-15、42、40和41；
(ii)分别SEQ ID NO:13-15和39-41；
(iii)分别SEQ ID NO:13、26、15和39-41；以及
(iv)分别SEQ ID NO:13、24、15、42、40和41；
(b)与所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段偶联的掩蔽部分，其中当所述可活化抗体处于未裂解状态时，所述掩蔽部分抑制所述抗体或抗体片段与EpCAM的结合；以及
(c)与所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段偶联的可裂解部分，其中所述可裂解部分是充当蛋白酶的底物的多肽；
其中处于所述未裂解状态的可活化抗体从N末端至C末端具有如下结构排列：(掩蔽部分)-(可裂解部分)-(抗体或抗体片段)或(抗体或抗体片段)-(可裂解部分)-(掩蔽部分)。
29.如权利要求28所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:13-15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。
30.如权利要求29所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:54的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL。
31.如权利要求30所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:103的序列的重链和具有SEQ ID NO:140的序列的LC。
32.如权利要求29-31中任一项所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:151-157的氨基酸序列的掩蔽部分。
33.如权利要求32所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含具有SEQ ID NO:155的氨基酸序列的掩蔽部分。
34.如权利要求29-33中任一项所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含可裂解部分，所述可裂解部分包含SEQ ID NO:168或169的氨基酸序列。
35.一种EpCAM可活化抗体，所述EpCAM可活化抗体包含：
(a)EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有选自由以下组成的组的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3：
(i)分别SEQ ID NO:22、14、15、42、40和41；
(ii)分别SEQ ID NO:13、14、33、42、40和41；
(iii)分别SEQ ID NO:23、14、15、42、40和41；以及
(iv)分别SEQ ID NO:25、14、15、42、40和41；
(b)与所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段偶联的掩蔽部分，其中当所述可活化抗体处于未裂解状态时，所述掩蔽部分抑制所述抗体或抗体片段与EpCAM的结合；以及
(c)与所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段偶联的可裂解部分，其中所述可裂解部分是充当蛋白酶的底物的多肽；
其中处于所述未裂解状态的可活化抗体从N末端至C末端具有如下结构排列：(掩蔽部分)-(可裂解部分)-(抗体或抗体片段)或(抗体或抗体片段)-(可裂解部分)-(掩蔽部分)。
36.如权利要求35所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:22、14、15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。
37.如权利要求36所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:75的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL。
38.如权利要求37所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:125的序列的重链和具有SEQ ID NO:140的序列的轻链。
39.如权利要求36-38中任一项所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:151-157和162-167的氨基酸序列的掩蔽部分。
40.如权利要求39所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含具有选自SEQ IDNO:162-167的氨基酸序列的掩蔽部分。
41.如权利要求36-40中任一项所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含可裂解部分，所述可裂解部分包含SEQ ID NO:168或169的氨基酸序列。
42.如权利要求35所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:13、14、33、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。
43.如权利要求42所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:77的序列的VH和具有SEQ ID NO:89的序列的VL。
44.如权利要求43所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段，所述EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段包含具有SEQ ID NO:127的序列的重链和具有SEQ ID NO:140的序列的轻链。
45.如权利要求42-44中任一项所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:151-161的氨基酸序列的掩蔽部分。
46.如权利要求45所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含具有选自SEQ IDNO:158-161的氨基酸序列的掩蔽部分。
47.如权利要求42-46中任一项所述的EpCAM可活化抗体，其中所述可活化抗体包含可裂解部分，所述可裂解部分包含SEQ ID NO:168或169的氨基酸序列。
48.一种细胞，所述细胞产生如权利要求1-26中任一项所述的抗体或EpCAM结合抗体片段或如权利要求27-47中任一项所述的可活化抗体。
49.一种产生EpCAM抗体或EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体的方法，所述方法包括：
(a)培养如权利要求48所述的细胞；以及，
(b)从所述细胞或细胞培养物中分离所述EpCAM抗体、EpCAM结合抗体片段或EpCAM可活化抗体。
50.如权利要求49所述的方法，其中所述细胞是真核细胞。
51.如权利要求50所述的方法，其中所述细胞是CHO细胞。
52.一种诊断试剂，所述诊断试剂包含如权利要求1-26中任一项所述的抗体或抗体片段或如权利要求27-47中任一项所述的EpCAM可活化抗体。
53.如权利要求52所述的诊断试剂，其中所述抗体、抗体片段或可活化抗体被标记。
54.如权利要求53所述的诊断试剂，其中所述标记选自：放射性标记、荧光团、发色团、显像剂和金属离子。
55.一种多核苷酸或多核苷酸的组，所述多核苷酸或多核苷酸的组编码如权利要求1-26中任一项所述的抗体或抗体片段或如权利要求27-47中任一项所述的可活化抗体。
56.一种载体或载体的组，所述载体或载体的组包含如权利要求55所述的多核苷酸。
57.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求55所述的多核苷酸或多核苷酸的组或如权利要求56所述的载体。
58.一种由下式表示的免疫缀合物：
Figure FDA0003121673040000141
其中：
EpBA是根据权利要求1-47中任一项所述的EpCAM抗体、EpCAM抗体片段或EpCAM可活化抗体，其通过赖氨酸残基共价连接至CyL1；
WL是1至20的整数；并且
CyL1由下式表示：
Figure FDA0003121673040000142
或其药学上可接受的盐，其中：
N与C之间的双线
Figure FDA0003121673040000143
表示单键或双键，条件是当它为双键时，X不存在并且Y是-H或(C1-C4)烷基；并且当它为单键时，X是-H或胺保护部分并且Y是-OH或-SO3H或其药学上可接受的盐；
W’是-NRe’，
Re’是-(CH2-CH2-O)n-Rk；
n是2至6的整数；
Rk是-H或-Me；
Rx3是(C1-C6)烷基；
L’由下式表示：
-NR5-P-C(＝O)-(CRaRb)m-C(＝O)-(B1’)；或
-NR5-P-C(＝O)-(CRaRb)m-S-Zs1-(B2’)；
R5是-H或(C1-C3)烷基；
P是氨基酸残基或含有介于2至20个之间的氨基酸残基的肽；
Ra和Rb在每次出现时各自独立地是-H、(C1-C3)烷基或带电荷的取代基或可电离基团Q；
m是1至6的整数；并且
Zs1选自下式中的任一者：
Figure FDA0003121673040000151
Figure FDA0003121673040000152
以及
Figure FDA0003121673040000161
其中q是1至5的整数。
59.如权利要求58所述的免疫缀合物，其中Ra和Rb两者均是H；并且R5是H或Me。
60.如权利要求58或59所述的免疫缀合物，其中P是含有2至5个氨基酸残基的肽。
61.如权利要求58-60中任一项所述的免疫缀合物，其中P选自Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp、Cit、Phe-Ala、Phe-N9-甲苯磺酰基-Arg、Phe-N9-硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO:215)、β-Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO:216)、Gly-Phe-Leu-Gly(SEQ ID NO:217)、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala、D-Ala-D-Ala、Ala-Met、Met-Ala、Gln-Val、Asn-Ala、Gln-Phe和Gln-Ala。
62.如权利要求61所述的免疫缀合物，其中P是Gly-Gly-Gly、Ala-Val、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala或D-Ala-D-Ala。
63.如权利要求58-62中任一项所述的免疫缀合物，其中Q是-SO3H或其药学上可接受的盐。
64.如权利要求58所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物由下式表示：
Figure FDA0003121673040000171
Figure FDA0003121673040000181
Figure FDA0003121673040000191
Figure FDA0003121673040000201
或其药学上可接受的盐，其中
WL是1至10的整数；N与C之间的双线
Figure FDA0003121673040000202
表示单键或双键，条件是当它为双键时，X不存在并且Y是-H；并且当它为单键时，X是-H并且Y是-OH或-SO3H或其药学上可接受的盐。
65.如权利要求58-64中任一项所述的免疫缀合物，其中N与C之间的双线
Figure FDA0003121673040000211
表示双键，X不存在并且Y是-H。
66.如权利要求58-64中任一项所述的免疫缀合物，其中N与C之间的双线
Figure FDA0003121673040000212
表示单键，X是-H，并且Y是-SO3H或其药学上可接受的盐。
67.如权利要求66所述的免疫缀合物，其中Y是-SO3H、-SO3Na或-SO3K。
68.如权利要求66所述的免疫缀合物，其中Y是–SO3Na。
69.一种由下式表示的免疫缀合物：
Figure FDA0003121673040000213
其中：
EpBA是根据权利要求1-47中任一项所述的EpCAM抗体、EpCAM抗体片段或EpCAM可活化抗体，其通过赖氨酸残基共价连接至CyL2；
WL是1至20的整数；
CyL2由下式表示：
Figure FDA0003121673040000214
m’是1或2；
R1和R2各自独立地是H或(C1-C3)烷基；并且
Zs1选自下式中的任一者：
Figure FDA0003121673040000221
其中q是1至5的整数。
70.如权利要求69所述的免疫缀合物，其中m’是1，并且R1和R2两者均是H。
71.如权利要求69所述的免疫缀合物，其中m’是2，并且R1和R2两者均是Me。
72.如权利要求69所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物由下式表示：
Figure FDA0003121673040000231
或其药学上可接受的盐，其中WL是1至10的整数。
73.如权利要求69所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物由下式表示：
Figure FDA0003121673040000241
或其药学上可接受的盐。
74.一种由下式表示的免疫缀合物：
Figure FDA0003121673040000242
或其药学上可接受的盐，其中：
WL是1至10的整数；
EpBA是EpCAM抗体、EpCAM抗体片段或EpCAM可活化抗体，所述EpCAM抗体、EpCAM抗体片段或EpCAM可活化抗体包含分别具有SEQ ID NO:13-15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。
75.如权利要求74所述的免疫缀合物，其中所述分离的抗体或EpCAM结合抗体片段包含分别具有SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:89的序列的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。
76.如权利要求74所述的免疫缀合物，其中所述分离的抗体包含分别具有SEQ ID NO:103和SEQ ID NO:140的序列的重链和轻链。
77.如权利要求74-76中任一项所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物包含可活化抗体，所述可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:151-157的氨基酸序列的掩蔽部分。
78.如权利要求77所述的免疫缀合物，其中所述掩蔽部分具有SEQ ID NO:155的氨基酸序列。
79.如权利要求77或78所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物包含可活化抗体，所述可活化抗体还包含SEQ ID NO:168或SEQ ID NO:169的可裂解部分。
80.一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包含偶联至由以下结构式表示的美登木素生物碱化合物DM21L(也称为LDL-DM)的EpBA：
Figure FDA0003121673040000251
所述偶联经由γ-马来酰亚胺基丁酸N-琥珀酰亚胺基酯(GMBS)或N-(γ-马来酰亚胺基丁氧基)磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-GMBS或sGMBS)接头，其中EpBA是根据权利要求1-47中任一项所述的EpCAM抗体、EpCAM抗体片段或EpCAM可活化抗体。
81.如权利要求80所述的免疫缀合物，其中所述GMBS和磺基-GMBS(或sGMBS)接头由下式表示：
Figure FDA0003121673040000252
82.如权利要求80或81所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物由下式表示：
Figure FDA0003121673040000261
其中：
EpBA通过Lys胺基团连接至所述美登木素生物碱化合物，其中q是1或10的整数。
83.如权利要求80-82中任一项所述的免疫缀合物，其中所述EpBA包含分别包含SEQ IDNO:13-15、42、40和41的序列的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。
84.如权利要求83所述的免疫缀合物，其中所述EpBA包含分别具有SEQ ID NO:54和SEQID NO:89的序列的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。
85.如权利要求84所述的免疫缀合物，其中所述EpBA包含分别具有SEQ ID NO:103和SEQ ID NO:140的序列的重链和轻链。
86.如权利要求83-85中任一项所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物包含可活化抗体，所述可活化抗体包含具有选自SEQ ID NO:151-157的氨基酸序列的掩蔽部分。
87.如权利要求86所述的免疫缀合物，其中所述掩蔽部分具有SEQ ID NO:155的氨基酸序列。
88.如权利要求86或87所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物包含可活化抗体，所述可活化抗体还包含SEQ ID NO:168或SEQ ID NO:169的可裂解部分。
89.如权利要求58-88中任一项所述的免疫缀合物，其中所述药学上可接受的盐是钠盐或钾盐。
90.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1-47中任一项所述的抗体、抗原结合片段或可活化抗体和药学上可接受的载体。
91.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求58-88中任一项所述的免疫缀合物和药学上可接受的载体。
92.一种杀伤癌细胞的方法，所述方法包括使所述癌细胞与有效量的如权利要求1-47中任一项所述的抗体、抗原结合片段或可活化抗体、如权利要求58-88中任一项所述的免疫缀合物或如权利要求90或91所述的药物组合物接触。
93.如权利要求92所述的方法，其中所述癌细胞是上皮癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞、胃癌细胞、结肠直肠癌、前列腺癌细胞、卵巢癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞或癌症干细胞。
94.如权利要求92所述的方法，其中所述癌细胞是卵巢癌细胞、子宫癌细胞、胃癌细胞、胰腺癌细胞或结肠直肠癌细胞。
95.一种治疗表达EpCAM的癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如权利要求1-47中任一项所述的抗体或抗原结合片段、如权利要求58-88中任一项所述的免疫缀合物或如权利要求90或91所述的药物组合物。
96.根据权利要求95所述的治疗方法，其中所述癌症是上皮癌。
97.根据权利要求95所述的治疗方法，其中所述癌症是乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠癌、食道癌、气管癌、胃癌膀胱癌、子宫癌、直肠癌、小肠癌或其转移。
98.根据权利要求95所述的治疗方法，其中所述癌症是卵巢癌、子宫癌、胃癌、胰腺癌、结肠直肠癌或其转移。
99.如权利要求97所述的治疗方法，其中所述癌症是肺癌。
100.如权利要求99所述的治疗方法，其中所述肺癌是非小细胞肺癌。
101.如权利要求100所述的治疗方法，其中所述非小细胞肺癌是非鳞状非小细胞肺癌。
102.如权利要求95所述的治疗方法，其中所述癌症是卵巢癌。
103.如权利要求95所述的治疗方法，其中所述癌症是三阴性乳腺癌。
104.如权利要求95所述的治疗方法，其中所述癌症是结肠直肠癌。
105.如权利要求95所述的治疗方法，其中所述癌症是食道癌。
106.如权利要求95所述的治疗方法，其中所述癌症是胃癌。
107.如权利要求95所述的治疗方法，其中所述癌症是子宫癌。
108.如权利要求95所述的治疗方法，其中所述癌症是胰腺癌。
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4359438A1 (en) * 2021-06-21 2024-05-01 Bristol-Myers Squibb Company Use of sucrose, mannitol and glycine to reduce reconstitution time of high concentration lyophilized biologics drug products
WO2023183888A1 (en) 2022-03-23 2023-09-28 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable antigen-binding protein constructs and uses of the same
WO2023183923A1 (en) 2022-03-25 2023-09-28 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable dual-anchored masked molecules and methods of use thereof
WO2023192606A2 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Cytomx Therapeutics, Inc. Cd3-binding proteins and methods of use thereof
WO2023192973A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable multispecific molecules and methods of use thereof
WO2024015830A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Cytomx Therapeutics, Inc. Epcam immunoconjugates and uses thereof
WO2024030843A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Cytomx Therapeutics, Inc. Protease-cleavable moieties and methods of use thereof
WO2024030858A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Cytomx Therapeutics, Inc. Protease-cleavable substrates and methods of use thereof
WO2024030845A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Cytomx Therapeutics, Inc. Protease-cleavable moieties and methods of use thereof
WO2024030847A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Cytomx Therapeutics, Inc. Protease-cleavable moieties and methods of use thereof
WO2024030850A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Cytomx Therapeutics, Inc. Protease-cleavable substrates and methods of use thereof

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1678625A (zh) * 2002-07-01 2005-10-05 比奥根艾迪克Ma公司 人源化抗淋巴毒素β受体的抗体
CN101448853A (zh) * 2006-03-17 2009-06-03 比奥根艾迪克Ma公司 稳定的多肽组合物
US20100189651A1 (en) * 2009-01-12 2010-07-29 Cytomx Therapeutics, Llc Modified antibody compositions, methods of making and using thereof
WO2010115630A1 (en) * 2009-04-08 2010-10-14 Deutsches Krebsforschungszentrum Amatoxin-armed target-binding moieties for the treatment of cancer
WO2012112687A1 (en) * 2011-02-15 2012-08-23 Immunogen, Inc. Methods of preparation of conjugates
US20160024207A1 (en) * 2013-03-14 2016-01-28 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Monoclonal antibodies targeting epcam for detection of prostate cancer lymph node metastases
WO2017021540A1 (en) * 2015-08-06 2017-02-09 Agency For Science, Technology And Research Il2rbeta/common gamma chain antibodies
CN106661120A (zh) * 2014-08-04 2017-05-10 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性t细胞活化性抗原结合分子
CN108136002A (zh) * 2015-04-13 2018-06-08 辉瑞公司 治疗性抗体和它们的用途
US20180171012A1 (en) * 2015-06-24 2018-06-21 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Anti-Human Transferrin Receptor Antibody Permeating Blood-Brain Barrier

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
AU7378096A (en) 1995-09-28 1997-04-17 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Porcine cell interaction proteins
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
ES2269366T3 (es) 2000-02-11 2007-04-01 Merck Patent Gmbh Mejoramiento de la vida media en circulacion de proteinas de fusion basadas en anticuerpos.
EP2341060B1 (en) 2000-12-12 2019-02-20 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
US7538195B2 (en) 2002-06-14 2009-05-26 Immunogen Inc. Anti-IGF-I receptor antibody
EP1542723B1 (en) 2002-08-16 2011-02-23 ImmunoGen, Inc. Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
CA2545603A1 (en) 2003-11-12 2005-05-26 Biogen Idec Ma Inc. Neonatal fc receptor (fcrn)-binding polypeptide variants, dimeric fc binding proteins and methods related thereto
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US7700099B2 (en) 2005-02-14 2010-04-20 Merck & Co., Inc. Non-immunostimulatory antibody and compositions containing the same
EP1919931A4 (en) 2005-08-31 2010-01-20 Univ California CELLULAR LIBRARIES OF PEPTIDE SEQUENCES (CLIPS) AND METHODS OF USE THEREOF
EP4316465A3 (en) 2006-03-15 2024-04-24 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria patients by an inhibitor of complement
AR060978A1 (es) 2006-05-30 2008-07-23 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados y sus usos
SI2019104T1 (sl) 2007-07-19 2013-12-31 Sanofi Citotoksična sredstva, ki obsegajo nove tomaimicinske derivate, in njihova terapevtska uporaba
US20090304719A1 (en) 2007-08-22 2009-12-10 Patrick Daugherty Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
SG189817A1 (en) 2008-04-30 2013-05-31 Immunogen Inc Potent conjugates and hydrophilic linkers
US8236319B2 (en) 2008-04-30 2012-08-07 Immunogen, Inc. Cross-linkers and their uses
WO2010033279A2 (en) 2008-06-04 2010-03-25 Macrogenics, Inc. Antibodies with altered binding to fcrn and methods of using same
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
EP3360879A1 (en) 2009-02-05 2018-08-15 ImmunoGen, Inc. Benzodiazepine derivatives as cytotoxic agents
GB0909904D0 (en) * 2009-06-09 2009-07-22 Affitech As Product
AU2011239525B2 (en) 2010-04-15 2015-04-09 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
EP2882844B1 (en) 2012-08-10 2018-10-03 Cytomx Therapeutics Inc. Protease-resistant systems for polypeptide display and methods of making and using thereof
JP2017527562A (ja) 2014-09-03 2017-09-21 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞毒性ベンゾジアゼピン誘導体
ES2815353T3 (es) 2014-09-03 2021-03-29 Immunogen Inc Derivados de benzodiazepina citotóxicos
CN108513547A (zh) * 2015-03-12 2018-09-07 维文蒂亚生物公司 用于epcam阳性膀胱癌的治疗方法
CA2984948A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Cytomx Therapeutics, Inc. Anti-cd166 antibodies, activatable anti-cd166 antibodies, and methods of use thereof
LT3313845T (lt) 2015-06-29 2020-12-10 Immunogen, Inc. Cisteino inžinerijos antikūnų konjugatai
US11098131B2 (en) * 2015-07-31 2021-08-24 Sutro Biopharma, Inc. Anti-EpCAM antibodies, compositions comprising anti-EpCAM antibodies and methods of making and using anti-EpCAM antibodies

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1678625A (zh) * 2002-07-01 2005-10-05 比奥根艾迪克Ma公司 人源化抗淋巴毒素β受体的抗体
CN101448853A (zh) * 2006-03-17 2009-06-03 比奥根艾迪克Ma公司 稳定的多肽组合物
US20100189651A1 (en) * 2009-01-12 2010-07-29 Cytomx Therapeutics, Llc Modified antibody compositions, methods of making and using thereof
WO2010115630A1 (en) * 2009-04-08 2010-10-14 Deutsches Krebsforschungszentrum Amatoxin-armed target-binding moieties for the treatment of cancer
WO2012112687A1 (en) * 2011-02-15 2012-08-23 Immunogen, Inc. Methods of preparation of conjugates
US20160024207A1 (en) * 2013-03-14 2016-01-28 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Monoclonal antibodies targeting epcam for detection of prostate cancer lymph node metastases
CN106661120A (zh) * 2014-08-04 2017-05-10 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性t细胞活化性抗原结合分子
CN108136002A (zh) * 2015-04-13 2018-06-08 辉瑞公司 治疗性抗体和它们的用途
US20180171012A1 (en) * 2015-06-24 2018-06-21 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Anti-Human Transferrin Receptor Antibody Permeating Blood-Brain Barrier
WO2017021540A1 (en) * 2015-08-06 2017-02-09 Agency For Science, Technology And Research Il2rbeta/common gamma chain antibodies

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHRISTOPHER R. BEHRENS: "Antibody−Drug Conjugates (ADCs) Derived from Interchain Cysteine Cross-Linking Demonstrate Improved Homogeneity and Other Pharmacological Properties over Conventional Heterogeneous ADCs", 《MOLECULAR PHARMACEUTICS》, pages 3986 *

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