CN113189324B - 一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法 - Google Patents
一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113189324B CN113189324B CN202110235565.8A CN202110235565A CN113189324B CN 113189324 B CN113189324 B CN 113189324B CN 202110235565 A CN202110235565 A CN 202110235565A CN 113189324 B CN113189324 B CN 113189324B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- blocking
- calibrator
- blocking reagent
- carrier
- immunoreaction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及免疫测定的技术领域，尤其涉及一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法。本发明的封闭试剂包含以下组分：磷酸盐缓冲液、蛋白、糖、盐类和防腐剂，所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度为10～50mmol/L，pH为7.9±0.1。本发明的封闭试剂不仅能有效对免疫反应载体进行封闭，降低了本底，提高了分辨率、灵敏度、精密度和特异性，还能有效保护了免疫反应载体上抗原或抗体的生物活性，提高了热稳定性和货架期稳定性。该免疫反应载体的封闭方法能缩短封闭时间，进而缩短工期，有效控制了免疫反应的本底值，保证了灵敏度，并有效保护了免疫反应载体上抗原或抗体的活性，提高了免疫反应载体批内和批间的精密度。
Description
技术领域
本发明涉及免疫测定的技术领域，尤其涉及一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法。
背景技术
免疫反应载体的封闭是继抗原或抗体包被在载体上之后，再用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，既往仅为了有效地控制本底或背景，采用封闭操作让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在免疫反应其后的步骤中干扰物质的非特异再吸附。对于一步法试剂盒或间接法免疫测定中几乎是不可缺的。
理想的封闭液应满足以下条件：①抑制待测物质与固相载体表面的非特异性结合；②抑制非特异性蛋白-蛋白相互作用；③不与其后加入的试剂(抗体、蛋白A等)发生交叉反应；④能减少待测物质因相转变而发生的蛋白变性或帮助其复性；⑤与酶及可影响测定结果的其他物质的反应性低；⑥不会引起特异性蛋白或活性分子与固相载体表面的脱结合；⑦与固相载体表面的结合牢固，批间重复性好。
传统方法最常用的封闭试剂是0.05％～3.0％的牛血清白蛋白，或10％全血清(小牛血清、山羊血清等)，或1％～10％的明胶，或0.1％～5％的低(脱)脂奶粉，5％酪蛋白等。目前这些封闭试剂对免疫反应载体封闭后，仍有可能存在本底高，分辨率差，灵敏度低，精密度差，特异性差，载体上的抗原或抗体易失活，热稳定性差，货架期短等问题。特别是免疫反应载体封闭不当反而会使本底升高或者灵敏度降低。因此为了解决以上问题，需要一种优化的封闭试剂和免疫反应载体的封闭方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法，本发明的封闭试剂不仅能有效对免疫反应载体进行封闭，降低了本底，提高了分辨率、灵敏度、精密度和特异性，还能有效保护了免疫反应载体上抗原或抗体的生物活性，提高了热稳定性和货架期稳定性。该免疫反应载体的封闭方法能缩短封闭时间，进而缩短工期，有效控制了免疫反应的本底值，保证了灵敏度，并有效保护了免疫反应载体上抗原或抗体的活性，提高了免疫反应载体批内和批间的精密度。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：提供一种封闭试剂，所述封闭试剂包含以下组分：磷酸盐缓冲液、蛋白、糖、盐类和防腐剂，所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度为10～50mmol/L，pH为7.9±0.1。
优选的，所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度为20mmol/L。
作为本发明所述的封闭试剂的优选实施方式，所述蛋白包括牛血清白蛋白、小牛血清、明胶、低脂奶粉、酪蛋白和蛋白胨中的至少一种。
作为本发明所述的封闭试剂的优选实施方式，所述蛋白胨包括骨肉(牛)蛋白胨、大豆蛋白胨、鱼蛋白胨、胰蛋白胨中的至少一种。
优选的，所述胰蛋白胨为胰骨肉(牛)蛋白胨和胰酪蛋白胨中的至少一种。进一步的，优选胰酪蛋白胨，且胰酪蛋白胨中的氨基氮含量需≥3％，色氨酸含量需≥0.8％，胨含量需≥80％，其使用量为0.5％～10％，优选为1％。
作为本发明所述的封闭试剂的优选实施方式，所述糖包括葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖和山梨醇中的至少一种。
作为本发明所述的封闭试剂的优选实施方式，所述糖为蔗糖和山梨醇的混合物，所述蔗糖的含量为1％～10％，所述山梨醇的含量为1％～10％。进一步的，优选蔗糖的含量为6％，山梨醇的含量为6％。
作为本发明所述的封闭试剂的优选实施方式，所述盐类包括氯化钠、氯化钾和乙二胺四乙酸二钠中的至少一种。
作为本发明所述的封闭试剂的优选实施方式，所述防腐剂包括叠氮钠、硫汞柳酸钠、庆大霉素和ProClin300中的至少一种。优选的，硫汞柳酸钠为20ppm，或ProClin300为30ppm。
作为本发明所述的封闭试剂的优选实施方式，所述封闭试剂还可以根据包被固相载体上的抗原或抗体特性添加维生素、表面活性剂、氨基酸或者还原剂。优选的，维生素为抗氧化性能的维生素C、维生素E等，表面活性剂为0.0016％～0.02％的吐温-20，氨基酸为色氨酸、谷氨酸、亮氨酸、赖氨酸、精氨酸、丙氨酸、缬氨酸等，还原剂为β-巯基乙醇、二硫苏糖醇等。
本发明还提供一种免疫反应载体封闭方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将抗原或抗体包被过的免疫反应载体经含有表面活性剂的洗涤工作液洗涤，优选洗涤1次；
(2)加入适量体积的权利要求1～8任一所述的封闭试剂，优选的，反应微孔中封闭试剂体积应至少比反应体积多20％；
(3)免疫反应载体轻轻振荡10～60s，置于25℃～37℃条件下孵育2～24h；
(4)将封闭试剂去除，优选采用甩去微孔载体中的封闭液，室温晾干或真空抽干免疫反应载体，优选真空抽干方式。
优选的，步骤(3)所述振荡时间为30s。
作为本发明所述免疫反应载体封闭方法的优选实施方式，步骤(3)中所述孵育为在37℃条件下孵育2～3h，再25℃条件下孵育1h。
本发明的有益效果：
(1)本发明的封闭试剂不仅能有效对免疫反应载体进行封闭，降低了本底，提高了分辨率、灵敏度、精密度和特异性，还能有效保护了免疫反应载体上抗原或抗体的生物活性，提高了热稳定性和货架期稳定性。
(2)本发明的免疫反应载体的封闭方法能缩短封闭时间，进而缩短工期，有效控制了免疫反应的本底值，保证了灵敏度，并有效保护了免疫反应载体上抗原或抗体的活性，提高了免疫反应载体批内和批间的精密度。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
本发明使用的试剂均可通过购买获得。
实施例1
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、牛血清白蛋白、蔗糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；牛血清白蛋白的质量体积比为0.05％～3.0％，优选为1％；蔗糖的质量体积比为6.0％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例2
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、小牛血清、蔗糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；小牛血清白蛋白的体积比为5％～20％，优选为10％；蔗糖的质量体积比为6.0％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例3
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、明胶、蔗糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；明胶的质量体积比为1％～10％，优选为5％；蔗糖的质量体积比为6.0％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例4
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、低脂奶粉、蔗糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；低脂奶粉的质量体积比为0.1％～10％，优选为5％；蔗糖的质量体积比为6.0％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例5
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、酪蛋白、蔗糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；酪蛋白的质量体积比为0.05％～0.5％，优选为0.2％；蔗糖的质量体积比为6.0％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例6
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、骨肉(牛)蛋白胨、蔗糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；骨肉(牛)蛋白胨的质量体积比为0.5％～10％，优选为5％；蔗糖的质量体积比为6.0％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例7
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、大豆蛋白胨、蔗糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；大豆蛋白胨的质量体积比为0.5％～10％，优选为5％；蔗糖的质量体积比为6.0％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例8
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、鱼蛋白胨、蔗糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；鱼蛋白胨的质量体积比为0.5％～10％，优选为5％；蔗糖的质量体积比为6.0％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例9
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、胰骨肉(牛)蛋白胨、蔗糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；胰骨肉(牛)蛋白胨的质量体积比为0.5％～10％，优选为5％；蔗糖的质量体积比为6.0％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例10
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、胰酪蛋白胨、蔗糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；胰酪蛋白胨的质量体积比为0.5％～10％，优选为1％；蔗糖的质量体积比为6.0％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例11
为本发明封闭试剂在免疫反应载体封闭中的应用。以梅毒螺旋体检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)的免疫反应载体的制备为例，梅毒螺旋体基因重组抗原采用包被缓冲液稀释成最适工作浓度包被载体后，经含有吐温-20的洗涤工作液洗涤一次，再分别采用实施例1～实施例8中优选的蛋白含量的封闭试剂进行封闭，本实施例样本反应体积为100μL，在微孔免疫反应载体中加入的封闭试剂体积为150μL，微孔免疫反应载体轻轻振荡30s，置于37℃条件下孵育2h，再25℃条件下孵育1h，甩去微孔免疫反应载体中的封闭液，晾干免疫反应载体。使用二步法、双抗原夹心时间分辨荧光免疫法进行检测校准品(A、B和F)、弱阳性质控品和中阳性质控品、阴性样本，评价免疫反应载体的性能指标：
1)免疫反应性：校准品B、校准品F、阳性质控品荧光值越高，校准品A的荧光值越低，校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值和校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，表明免疫反应载体上抗原与样本中抗体的免疫反应性越好。
2)特异度：校准A的荧光值越低，阴性样本的荧光值越低，假阳性越低，表明免疫反应载体的特异度越好。
3)精密度：变异系数CV越低，精密度越好。
4)热稳定性：37℃条件下破坏6天后与4℃条件下保存的免疫反应载体，检测校准品A～F，与4℃条件下保存的免疫反应载体检测结果比较，变化率绝对值越低，表明越稳定，负数为反应性降低，正数为反应性增高。
5)分辨率(灵敏度)：校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值越大，阴性样本的荧光值越低，分辨率越好。
6)线性：校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，线性越宽。
7)外观：以正常视力，在自然光条件下观察封闭后的免疫反应载体的外观，应无明显异常。
综合以上指标情况，选择最佳的封闭蛋白。
表1不同封闭蛋白对指标的影响
从表1中结果可知，含有1％胰酪蛋白胨的封闭试剂封闭的免疫反应载体相对于其他蛋白的封闭试剂封闭的免疫反应载体，其免疫反应性强，特异度好，精密度好，热稳定性良好，分辨率(灵敏度)高，线性宽，外观无异常。因此含有1％胰酪蛋白胨的封闭试剂为最优选。
实施例12
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、胰酪蛋白胨、蔗糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；胰酪蛋白胨的质量体积比为1％；蔗糖的质量体积比为6.0％；Procline300的体积比为30ppm。
胰酪蛋白胨选用下列5种中的一种：1)氨基氮含量2.5％，色氨酸含量0.80％，胨含量80％；2)氨基氮含量3.0％，色氨酸含量需0.75％，胨含量80％；3)氨基氮含量3.0％，色氨酸含量0.8％，胨含量75％；4)氨基氮含量3.0％，色氨酸含量0.80％，胨含量80％；5)氨基氮含量3.5％，色氨酸含量0.85％，胨含量85％。
实施例13
本发明封闭试剂在免疫反应载体封闭中的应用。以梅毒螺旋体检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)的免疫反应载体的制备为例，梅毒螺旋体基因重组抗原采用包被缓冲液稀释成最适工作浓度包被载体后，经含有吐温-20的洗涤工作液洗涤一次，再分别采用实施例12中不同胰酪蛋白胨的封闭试剂进行封闭，本实施例样本反应体积为100μL，在微孔免疫反应载体中加入的封闭试剂体积为150μL，微孔免疫反应载体轻轻振荡30s，置于37℃条件下孵育2h，再25℃条件下孵育1h，甩去微孔免疫反应载体中的封闭液，晾干免疫反应载体。使用二步法、双抗原夹心时间分辨荧光免疫法进行检测校准品(A、B和F)、弱阳性质控品和中阳性质控品、阴性样本，评价免疫反应载体的性能指标：
1)免疫反应性：校准品B、校准品F、阳性质控品荧光值越高，校准品A的荧光值越低，校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值和校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，表明免疫反应载体上抗原与样本中抗体的免疫反应性越好。
2)特异度：校准A的荧光值越低，阴性样本的荧光值越低，假阳性越低，表明免疫反应载体的特异度越好。
3)精密度：变异系数CV越低，精密度越好。
4)热稳定性：37℃条件下破坏6天后与4℃条件下保存的免疫反应载体，检测校准品A～F，与4℃条件下保存的免疫反应载体检测结果比较，变化率绝对值越低，表明越稳定，负数为反应性降低，正数为反应性增高。
5)分辨率(灵敏度)：校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值越大，阴性样本的荧光值越低，分辨率越好。
6)线性：校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，线性越宽。
7)外观：以正常视力，在自然光条件下观察封闭后的免疫反应载体的外观，应无明显异常。
综合以上指标情况，选择最佳的胰酪蛋白胨。
表2不同胰酪蛋白胨对指标的影响
从表2中结果可知，含有1％胰酪蛋白胨(氨基氮含量3.0％，色氨酸含量0.80％，胨含量80％)的封闭试剂封闭的免疫反应载体，与含有1％胰酪蛋白胨(氨基氮含量3.5％，色氨酸含量0.85％，胨含量85％)的封闭试剂封闭的免疫反应载体的性能相当，相对于其他胰酪蛋白胨的封闭试剂封闭的免疫反应载体，其免疫反应性强，特异度好，精密度好，热稳定性良好，分辨率(灵敏度)高，线性宽，外观无异常。因此胰酪蛋白胨的氨基氮含量≥3.0％，色氨酸含量≥0.80％，胨含量≥80％为最优选。
实施例14
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、胰酪蛋白胨、葡萄糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；胰酪蛋白胨的质量体积比为1％(氨基氮含量≥3.0％，色氨酸含量≥0.80％，胨含量≥80％)；葡萄糖的质量体积比为1％～10％，优选为6％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例15
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、胰酪蛋白胨、乳糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；胰酪蛋白胨的质量体积比为1％(氨基氮含量≥3.0％，色氨酸含量≥0.80％，胨含量≥80％)，乳糖的质量体积比为1％～10％，优选为6％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例16
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、胰酪蛋白胨、蔗糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；胰酪蛋白胨的质量体积比为1％(氨基氮含量≥3.0％，色氨酸含量≥0.80％，胨含量≥80％)，蔗糖的质量体积比为1％～10％，优选为6％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例17
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、胰酪蛋白胨、海藻糖和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；胰酪蛋白胨的质量体积比为1％(氨基氮含量≥3.0％，色氨酸含量≥0.80％，胨含量≥80％)，海藻糖的质量体积比为0.05％～0.5％，优选为0.2％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例18
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、胰酪蛋白胨、山梨醇和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；胰酪蛋白胨的质量体积比为1％(氨基氮含量≥3.0％，色氨酸含量≥0.80％，胨含量≥80％)，山梨醇的质量体积比为1％～10％，优选为6％；Procline300的体积比为30ppm。
实施例19
为本发明封闭试剂在免疫反应载体封闭中的应用。以梅毒螺旋体检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)的免疫反应载体的制备为例，梅毒螺旋体基因重组抗原采用包被缓冲液稀释成最适工作浓度包被载体后，经含有吐温-20的洗涤工作液洗涤一次，再分别采用实施例10～实施例14中优选的糖类含量的封闭试剂进行封闭，本实施例样本反应体积为100μL，在微孔免疫反应载体中加入的封闭试剂体积为150μL，微孔免疫反应载体轻轻振荡30s，置于37℃条件下孵育2h，再25℃条件下孵育1h，甩去微孔免疫反应载体中的封闭液，晾干免疫反应载体。使用二步法、双抗原夹心时间分辨荧光免疫法进行检测校准品(A、B和F)、弱阳性质控品和中阳性质控品、阴性样本，评价免疫反应载体的性能指标：
1)免疫反应性：校准品B、校准品F、阳性质控品荧光值越高，校准品A的荧光值越低，校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值和校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，表明免疫反应载体上抗原与样本中抗体的免疫反应性越好。
2)特异度：校准A的荧光值越低，阴性样本的荧光值越低，假阳性越低，表明免疫反应载体的特异度越好。
3)精密度：变异系数CV越低，精密度越好。
4)热稳定性：37℃条件下破坏6天后与4℃条件下保存的免疫反应载体，检测校准品A～F，与4℃条件下保存的免疫反应载体检测结果比较，变化率绝对值越低，表明越稳定，负数为反应性降低，正数为反应性增高。
5)分辨率(灵敏度)：校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值越大，阴性样本的荧光值越低，分辨率越好。
6)线性：校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，线性越宽。
7)外观：以正常视力，在自然光条件下观察封闭后的免疫反应载体的外观，应无明显异常。
综合以上指标情况，选择最佳的封闭糖。
表3不同封闭糖对指标的影响
从表3中结果可知，含有6％蔗糖的封闭试剂或含有6％山梨醇的封闭试剂封闭的免疫反应载体性能相当，其免疫反应性强，特异度好，精密度好，热稳定性良好，分辨率(灵敏度)高，线性宽，外观无异常。含6％葡萄糖、6％乳糖和0.2％海藻糖的封闭试剂封闭的免疫反应载体反应性相对较低，因此含有6％蔗糖的封闭试剂或含有6％山梨醇的封闭试剂为最优选。
实施例20
为本发明封闭试剂的一种实施例，包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、胰酪蛋白胨、蔗糖、山梨醇和Procline300。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；胰酪蛋白胨的质量体积比为1％，蔗糖的质量体积比为1％～10％，山梨醇的质量体积比为1％～10％，Procline300的体积比为30ppm。优选蔗糖的质量体积比为6％，山梨醇的质量体积比为6％。胰酪蛋白胨为最优选的条件下实施。
实施例21
为本发明封闭试剂在免疫反应载体封闭中的应用。以梅毒螺旋体检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)的免疫反应载体的制备为例，梅毒螺旋体基因重组抗原采用包被缓冲液稀释成最适工作浓度包被载体后，经含有吐温-20的洗涤工作液洗涤一次，再采用实施例16优选的蔗糖和山梨醇进行不同含量混合，其蔗糖的质量体积比为1％～10％，山梨醇的质量体积比为1％～10％，用含有以上不同比例的蔗糖和山梨醇混合糖的封闭试剂进行封闭，本实施例样本反应体积为100μL，在微孔免疫反应载体中加入的封闭试剂体积为150μL，微孔免疫反应载体轻轻振荡30s，置于37℃条件下孵育2h，再25℃条件下孵育1h，甩去微孔免疫反应载体中的封闭液，晾干免疫反应载体。使用二步法、双抗原夹心时间分辨荧光免疫法进行检测校准品(A、B和F)、弱阳性质控品和中阳性质控品、阴性样本，评价免疫反应载体的性能指标：
1)免疫反应性：校准品B、校准品F、阳性质控品荧光值越高，校准品A的荧光值越低，校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值和校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，表明免疫反应载体上抗原与样本中抗体的免疫反应性越好。
2)特异度：校准A的荧光值越低，阴性样本的荧光值越低，假阳性越低，表明免疫反应载体的特异度越好。
3)精密度：变异系数CV越低，精密度越好。
4)热稳定性：37℃条件下破坏6天后与4℃条件下保存的免疫反应载体，检测校准品A～F，与4℃条件下保存的免疫反应载体检测结果比较，变化率绝对值越低，表明越稳定，负数为反应性降低，正数为反应性增高。
5)分辨率(灵敏度)：校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值越大，阴性样本的荧光值越低，分辨率越好。
6)线性：校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，线性越宽。
7)外观：以正常视力，在自然光条件下观察封闭后的免疫反应载体的外观，应无明显异常。
综合以上指标情况，选择最佳的封闭蔗糖和山梨醇的混合含量。
表4不同蔗糖和山梨醇的混合含量对指标的影响
从表4中结果可得，含有6％蔗糖的封闭试剂和含有6％山梨醇混合糖的封闭试剂封闭的免疫反应载体相对于其他含量混合糖的封闭试剂封闭的免疫反应载体的反应性要好，特异度好，精密度好，热稳定性要好，因此含有6％蔗糖的封闭试剂和含有6％山梨醇的混合糖封闭试剂为最优选。
实施例22
为本发明免疫反应载体封闭方法的一种实施例，以梅毒螺旋体检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)的免疫反应载体的制备为例，梅毒螺旋体基因重组抗原采用包被缓冲液稀释成最适工作浓度包被载体后，经含有吐温-20的洗涤工作液洗涤一次，再采用实施例16优选的封闭试剂进行封闭，本实施例样本反应体积为100μL，在微孔免疫反应载体中加入的封闭试剂体积为150μL，微孔免疫反应载体轻轻振荡30s，置于25℃条件下孵育1～24h，甩去微孔免疫反应载体中的封闭液，晾干免疫反应载体。使用二步法、双抗原夹心时间分辨荧光免疫法进行检测校准品(A、B和F)、弱阳性质控品和中阳性质控品、阴性样本，评价免疫反应载体的性能指标：
1)免疫反应性：校准品B、校准品F、阳性质控品荧光值越高，校准品A的荧光值越低，校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值和校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，表明免疫反应载体上抗原与样本中抗体的免疫反应性越好。
2)特异度：校准A的荧光值越低，阴性样本的荧光值越低，假阳性越低，表明免疫反应载体的特异度越好。
3)精密度：变异系数CV越低，精密度越好。
4)热稳定性：37℃条件下破坏6天后与4℃条件下保存的免疫反应载体，检测校准品A～F，与4℃条件下保存的免疫反应载体检测结果比较，变化率绝对值越低，表明越稳定，负数为反应性降低，正数为反应性增高。
5)分辨率(灵敏度)：校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值越大，阴性样本的荧光值越低，分辨率越好。
6)线性：校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，线性越宽。
7)外观：以正常视力，在自然光条件下观察封闭后的免疫反应载体的外观，应无明显异常。
综合以上指标情况，选择25℃条件下孵育的最适封闭时间。
表5在25℃条件下孵育时不同封闭时间对指标的影响
从以上结果可得，25℃条件下孵育18～22h封闭的免疫反应载体性能相当，相对于25℃条件下孵育1～17h封闭的免疫反应载体，特异度好，精密性好，热稳定性好。25℃条件下孵育23h封闭的免疫反应载体性，相对于25℃条件下孵育1～22h封闭的免疫反应载体，免疫反应性有所下降。25℃条件下孵育1～3h封闭的免疫反应载体性，相对于25℃条件下孵育4～23h封闭的免疫反应载体，特异度差，精密度较差，热稳定性差。
实施例23
为本发明免疫反应载体封闭方法的一种实施例，以梅毒螺旋体检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)的免疫反应载体的制备为例，梅毒螺旋体基因重组抗原采用包被缓冲液稀释成最适工作浓度包被载体后，经含有吐温-20的洗涤工作液洗涤一次，再采用实施例16优选的封闭试剂进行封闭，本实施例样本反应体积为100μL，在微孔免疫反应载体中加入的封闭试剂体积为150μL，微孔免疫反应载体轻轻振荡30s，置于37℃条件下孵育1～5h，甩去微孔免疫反应载体中的封闭液，晾干免疫反应载体。使用二步法、双抗原夹心时间分辨荧光免疫法进行检测校准品(A、B和F)、弱阳性质控品和中阳性质控品、阴性样本，评价免疫反应载体的性能指标：
1)免疫反应性：校准品B、校准品F、阳性质控品荧光值越高，校准品A的荧光值越低，校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值和校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，表明免疫反应载体上抗原与样本中抗体的免疫反应性越好。
2)特异度：校准A的荧光值越低，阴性样本的荧光值越低，假阳性越低，表明免疫反应载体的特异度越好。
3)精密度：变异系数CV越低，精密度越好。
4)热稳定性：37℃条件下破坏6天后与4℃条件下保存的免疫反应载体，检测校准品A～F，与4℃条件下保存的免疫反应载体检测结果比较，变化率绝对值越低，表明越稳定，负数为反应性降低，正数为反应性增高。
5)分辨率(灵敏度)：校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值越大，阴性样本的荧光值越低，分辨率越好。
6)线性：校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，线性越宽。
7)外观：以正常视力，在自然光条件下观察封闭后的免疫反应载体的外观，应无明显异常。
综合以上指标情况，选择37℃条件下孵育的最适封闭时间。
表6在37℃条件下孵育时不同封闭时间对指标的影响
从以上结果可得，37℃条件下孵育2～3h封闭的免疫反应载体性能相当，相对于37℃条件下孵育1h封闭的免疫反应载体，精密性好，热稳定性好。37℃条件下孵育4h封闭的免疫反应载体性，相对于25℃条件下孵育2～3h封闭的免疫反应载体，校准品A本底升高，反应性有所下降，热稳定性变差。37℃条件下孵育5h封闭的免疫反应载体性，相对于25℃条件下孵育1～4h封闭的免疫反应载体，免疫反应性明显降低。37℃条件下孵育1h封闭的免疫反应载体性，相对于37℃条件下孵育2～5h封闭的免疫反应载体，特异度差，精密度差，热稳定性差。
实施例24
为本发明免疫反应载体封闭方法的一种实施例，以梅毒螺旋体检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)的免疫反应载体的制备为例，梅毒螺旋体基因重组抗原采用包被缓冲液稀释成最适工作浓度包被载体后，经含有吐温-20的洗涤工作液洗涤一次，再采用实施例16优选的封闭试剂进行封闭，本实施例样本反应体积为100μL，在微孔免疫反应载体中加入的封闭试剂体积为150μL，微孔免疫反应载体轻轻振荡30s，置于37℃条件下孵育2.5h，再25℃条件下孵育1h。甩去微孔免疫反应载体中的封闭液，晾干免疫反应载体。使用二步法、双抗原夹心时间分辨荧光免疫法进行检测校准品(A、B和F)、弱阳性质控品和中阳性质控品、阴性样本，评价免疫反应载体的性能指标：
1)免疫反应性：校准品B、校准品F、阳性质控品荧光值越高，校准品A的荧光值越低，校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值和校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，表明免疫反应载体上抗原与样本中抗体的免疫反应性越好。
2)特异度：校准A的荧光值越低，阴性样本的荧光值越低，假阳性越低，表明免疫反应载体的特异度越好。
3)精密度：变异系数CV越低，精密度越好。
4)热稳定性：37℃条件下破坏6天后与4℃条件下保存的免疫反应载体，检测校准品A～F，与4℃条件下保存的免疫反应载体检测结果比较，变化率绝对值越低，表明越稳定，负数为反应性降低，正数为反应性增高。
5)分辨率(灵敏度)：校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值越大，阴性样本的荧光值越低，分辨率越好。
6)线性：校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，线性越宽。
7)外观：以正常视力，在自然光条件下观察封闭后的免疫反应载体的外观，应无明显异常。
综合以上指标情况，选择封闭孵育的方式。
表7不同封闭孵育的方式对指标的影响
从以上结果可得，37℃条件下孵育2.5h，再25℃条件下孵育1h封闭的免疫反应载体，相对于25℃条件下孵育20h或37℃条件下孵育2.5h封闭的免疫反应载体，其批内、批间精密度最佳，热稳定性有一定优势。因此37℃条件下孵育2.5h，再25℃条件下孵育1h封闭的免疫反应载体为优选。
实施例25
为本发明封闭试剂和免疫反应载体封闭方法的一种实施例。
本实施例的封闭试剂包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、胰酪蛋白胨、蔗糖、山梨醇、Procline300和β-巯基乙醇。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；胰酪蛋白胨的质量体积比为1％，蔗糖的质量体积比为6％；山梨醇的质量体积比为6％；Procline300的体积比为30ppm；β-巯基乙醇的体积比为0.1‰。胰酪蛋白胨为最优选的条件下实施。
本实施例的封闭方法为：以丙型肝炎病毒检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)的免疫反应载体的制备为例，丙型肝炎病毒基因重组抗原采用包被缓冲液稀释成最适工作浓度包被载体后，经含有吐温-20的洗涤工作液洗涤一次，再采用本实施例中的以上的封闭试剂进行封闭，本实施例样本反应体积为100μL，在微孔免疫反应载体中加入的封闭试剂体积为150μL，微孔免疫反应载体轻轻振荡30s，置于37℃条件下孵育2h，再25℃条件下孵育1h。甩去微孔免疫反应载体中的封闭液，晾干免疫反应载体。使用二步法、双抗原夹心时间分辨荧光免疫法进行检测校准品(A、B和F)、弱阳性质控品和中阳性质控品、阴性样本，评价免疫反应载体的性能指标：
1)免疫反应性：校准品B、校准品F、阳性质控品荧光值越高，校准品A的荧光值越低，校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值和校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，表明免疫反应载体上抗原与样本中抗体的免疫反应性越好。
2)特异度：校准A的荧光值越低，阴性样本的荧光值越低，假阳性越低，表明免疫反应载体的特异度越好。
3)精密度：变异系数CV越低，精密度越好。
4)热稳定性：37℃条件下破坏6天后与4℃条件下保存的免疫反应载体，检测校准品A～F，与4℃条件下保存的免疫反应载体检测结果比较，变化率绝对值越低，表明越稳定，负数为反应性降低，正数为反应性增高。
5)分辨率(灵敏度)：校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值越大，阴性样本的荧光值越低，分辨率越好。
6)线性：校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，线性越宽。
7)外观：以正常视力，在自然光条件下观察封闭后的免疫反应载体的外观，应无明显异常。
表8是否添加β-巯基乙醇对指标的影响
从以上结果可得，含有1‰β-巯基乙醇的封闭试剂相对于不含β-巯基乙醇的封闭试剂在丙型肝炎病毒检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)的应用，其特异度好，精密度好，热稳定性好，在分辨率和线性性能上也有一定优势。
实施例26
为本发明封闭试剂和免疫反应载体封闭方法的一种实施例。
本实施例的封闭试剂包含以下组分：磷酸盐缓冲液(20mmol/L和pH7.9±0.1)、氯化钠、胰酪蛋白胨、蔗糖、山梨醇、Procline300和吐温-20。
其中，氯化钠的质量体积比为0.85％；胰酪蛋白胨的质量体积比为1％；蔗糖的质量体积比为6％；山梨醇的质量体积比为6％；Procline300的体积比为30ppm；吐温-20的体积比为0.00625％。胰酪蛋白胨为最优选的条件下实施。
本实施例的封闭方法为：以人类免疫缺陷病毒检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)的免疫反应载体的制备为例，人类免疫缺陷病毒基因重组抗原采用包被缓冲液稀释成最适工作浓度包被载体后，经含有吐温-20的洗涤工作液洗涤一次，再采用本实施例中的以上的封闭试剂进行封闭，本实施例样本反应体积为100μL，在微孔免疫反应载体中加入的封闭试剂体积为150μL，微孔免疫反应载体轻轻振荡30s，置于37℃条件下孵育3h，再25℃条件下孵育1h。甩去微孔免疫反应载体中的封闭液，晾干免疫反应载体。使用二步法、双抗原夹心时间分辨荧光免疫法进行检测阴性对照、抗-HIV 1型阳性对照、抗-HIV 2型阳性对照、弱阳性质控品和中阳性质控品、阴性样本，评价免疫反应载体的性能指标：
1)免疫反应性：抗-HIV 1型阳性对照、抗-HIV 2型阳性对照、阳性质控品荧光值越高，阴性对照的荧光值越低，抗-HIV 1型阳性对照荧光值/阴性对照荧光值的比值和抗-HIV2型阳性对照荧光值/阴性对照荧光值的比值越大，表明免疫反应载体上抗原与样本中抗体的免疫反应性越好。
2)特异度：阴性对照的荧光值越低，阴性样本的荧光值越低，假阳性越低，表明免疫反应载体的特异度越好。
3)精密度：变异系数CV越低，精密度越好。
4)热稳定性：37℃条件下破坏6天后与4℃条件下保存的免疫反应载体，检测阴性对照品、抗-HIV 1型阳性对照品、抗-HIV 2型阳性对照品，与4℃条件下保存的免疫反应载体检测结果比较，变化率绝对值越低，表明越稳定，负数为反应性降低，正数为反应性增高。
5)分辨率(灵敏度)：阳性对照荧光值/阴性对照荧光值的比值越大，阴性样本的荧光值越低，分辨率越好。
6)外观：以正常视力，在自然光条件下观察封闭后的免疫反应载体的外观，应无明显异常。
表9是否添加吐温-20对指标的影响
从以上结果可得，含有0.00625％吐温-20的封闭试剂相对于不含吐温-20的封闭试剂在人类免疫缺陷病毒检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)的应用，其免疫反应性强，精密度好，热稳定性好。
实施例27
为本发明免疫反应载体封闭方法的一种实施例，以乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)的免疫反应载体的制备为例，基因重组乙型肝炎病毒表面抗原采用包被缓冲液稀释成最适工作浓度包被载体后，经含有吐温-20的洗涤工作液洗涤一次，再采用实施例16优选的封闭试剂进行封闭，本实施例样本反应体积为100μL，在微孔免疫反应载体中加入的封闭试剂体积为150μL，微孔免疫反应载体轻轻振荡30s，置于37℃条件下孵育2.5h，再25℃条件下孵育1h。甩去微孔免疫反应载体中的封闭液，晾干免疫反应载体后进行真空抽干。使用二步法、双抗原夹心时间分辨荧光免疫法进行检测校准品(A、B和F)、弱阳性质控品和中阳性质控品、阴性样本，评价免疫反应载体的性能指标：
1)免疫反应性：校准品B、校准品F、阳性质控品荧光值越高，校准品A的荧光值越低，校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值和校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，表明免疫反应载体上抗原与样本中抗体的免疫反应性越好。
2)特异度：阴性对照的荧光值越低，阴性样本的荧光值越低，假阳性越低，表明免疫反应载体的特异度越好。
3)精密度：变异系数CV越低，精密度越好。
4)热稳定性：37℃条件下破坏6天后与4℃条件下保存的免疫反应载体，检测校准品A～F，与4℃条件下保存的免疫反应载体检测结果比较，变化率绝对值越低，表明越稳定，负数为反应性降低，正数为反应性增高。
5)分辨率(灵敏度)：校准品B荧光值/校准品A荧光值的比值越大，阴性样本的荧光值越低，分辨率越好。
6)线性：校准品F荧光值/校准品A荧光值的比值越大，线性越宽。
7)外观：以正常视力，在自然光条件下观察封闭后的免疫反应载体的外观，应无明显异常。
表10不同干燥方式对指标的影响
从以上结果可得，采用真空抽干的免疫反应载体较室温晾干的免疫反应载体，精密度好，热稳定性好。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (6)
1.一种封闭试剂，其特征在于，所述封闭试剂包含以下组分：磷酸盐缓冲液、蛋白、糖、盐类和防腐剂；所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度为20mmol/L，pH为7.9±0.1；所述蛋白为胰酪蛋白胨；所述糖为蔗糖和山梨醇的混合物；
所述胰酪蛋白胨中的氨基氮含量≥3％，色氨酸含量≥0.8％，胨含量≥80％；
所述胰酪蛋白胨的含量为1％；
所述蔗糖的含量为6％，山梨醇的含量为6％。
2.根据权利要求1所述的封闭试剂，其特征在于，所述盐类包括氯化钠、氯化钾和乙二胺四乙酸二钠中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的封闭试剂，其特征在于，所述防腐剂包括叠氮钠、硫汞柳酸钠、庆大霉素和ProClin300中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的封闭试剂，其特征在于，所述封闭试剂还可以根据包被固相载体上的抗原或抗体特性添加维生素、表面活性剂、氨基酸或者还原剂。
5.一种免疫反应载体封闭方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将抗原或抗体包被过的免疫反应载体经含有表面活性剂的洗涤工作液洗涤；
(2)加入适量体积的权利要求1～4任一所述的封闭试剂；
(3)免疫反应载体轻轻振荡10～60s，置于25℃～37℃条件下孵育2～24h；
(4)将封闭试剂去除。
6.根据权利要求5所述的免疫反应载体封闭方法，其特征在于，步骤(3)中所述孵育为在37℃条件下孵育2～3h，再25℃条件下孵育1h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110235565.8A CN113189324B (zh) | 2021-03-03 | 2021-03-03 | 一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110235565.8A CN113189324B (zh) | 2021-03-03 | 2021-03-03 | 一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113189324A CN113189324A (zh) | 2021-07-30 |
| CN113189324B true CN113189324B (zh) | 2023-05-23 |
Family
ID=76973080
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110235565.8A Active CN113189324B (zh) | 2021-03-03 | 2021-03-03 | 一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113189324B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113791205B (zh) * | 2021-09-10 | 2024-02-20 | 重庆创芯生物科技有限公司 | 用于异相体系免疫反应的即用型封闭液及制备和应用 |
| CN115494244B (zh) * | 2022-11-21 | 2023-03-24 | 保定佳瑞源生物芯片有限公司 | 一种癌抗原ca724的吖啶酯抗体标记稀释液及其应用 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102323403A (zh) * | 2011-07-22 | 2012-01-18 | 武汉科前动物生物制品有限责任公司 | 一种抗原包被板保护剂及制备方法 |
| CN103308683B (zh) * | 2012-03-14 | 2015-08-26 | 珀金埃尔默医学诊断产品（上海）有限公司 | 糖类抗原19-9时间分辨免疫荧光分析法及试剂盒 |
| CN102662052A (zh) * | 2012-04-19 | 2012-09-12 | 上海蓝怡科技有限公司 | 磁微粒封闭液 |
| CN106610431A (zh) * | 2015-10-22 | 2017-05-03 | 江苏维赛科技生物发展有限公司 | 一种检测苯霜灵的酶联免疫试剂盒及其检测方法 |
| CN108490166B (zh) * | 2018-02-28 | 2020-10-09 | 广州市丰华生物工程有限公司 | 一种改良实验缓冲液及其应用 |
| CN111579772B (zh) * | 2020-05-28 | 2022-04-08 | 珠海丽珠试剂股份有限公司 | 基于免疫磁珠法的检测试剂及其制备方法、试剂盒以及检测方法 |
| CN112051403A (zh) * | 2020-08-27 | 2020-12-08 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | C反应蛋白化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用 |
-
2021
- 2021-03-03 CN CN202110235565.8A patent/CN113189324B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113189324A (zh) | 2021-07-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113189324B (zh) | 一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法 | |
| EP0852009B1 (en) | Buffer composition for reagents for immunoassay | |
| Murakami et al. | Studies on proteinases from the digestive organs of sardine. I. Purification and characterization of three alkaline proteinases from the pyloric caeca | |
| CN109212180A (zh) | 用于小分子抗原与碱性磷酸酶标记结合物的保存液及其制备方法 | |
| US9146232B2 (en) | Method for stabilizing protein | |
| CN108445230B (zh) | 基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂及检测方法 | |
| JP2002512370A (ja) | 還元剤を用いる改良された免疫診断アッセイ | |
| CN106885778A (zh) | 一种提高蛋白浓度测定准确性的快速测定试剂及其测定方法 | |
| Constantinides et al. | Reversible Dissociation of Tetrameric 7.4 S Rabbit Muscle Glyceraldehyde 3-Phosphate Dehydrogenase into 4.4 S Dimers by Ammonium Sulfate and into 3.2 S Monomers by KCl | |
| Kagan et al. | Amidated carboxyl groups in elastin | |
| JP2018124277A (ja) | 粒子含有組成物、免疫測定用試薬、免疫測定方法及び粒子の保存方法 | |
| Jacq et al. | Molecular Weight and Quaternary Structure of Yeast l‐Lactate Dehydrogenase (Cytochrome b2) 1. Minimum Molecular Weight from Amino Acid Analyses | |
| JP3976257B2 (ja) | 蛋白質の安定化方法 | |
| CN107043762A (zh) | 一种提高辣根过氧化物酶保存稳定性的保存稳定剂及其保存方法 | |
| IE851964L (en) | Monoclonal antibody stabilization | |
| CN115541882A (zh) | 一种提高人类免疫缺陷病毒抗体检测试纸条的制备方法、试剂盒 | |
| CN114397460B (zh) | 生物标记物的保存液以及生物标记物试剂 | |
| JP4039590B2 (ja) | ヘモグロビン試料の安定化 | |
| Jin et al. | Use of α-N, N-bis [carboxymethyl] lysine-modified peroxidase in immunoassays | |
| Degli Esposti et al. | Comparative biochemistry of the ubiquinolcytochrome C oxidoreductase (EC 1.10. 2.2) isolated from different heart mitochondria | |
| JP2001033442A (ja) | 修飾ヘモグロビンの修飾基の免疫学的測定法 | |
| JPH0674956A (ja) | 抗体測定用試薬 | |
| CN118130799A (zh) | 丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒及其制备方法 | |
| JP4557571B2 (ja) | フルクトシルペプチドオキシダ−ゼの安定化方法 | |
| Sundhagul et al. | Effect of tryptophan on growth and morphology of Hansenula schneggii cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 510000 No. 6, Yinyi street, economic and Technological Development Zone, Guangzhou, Guangdong Applicant after: Guangzhou Fenghua Biological Co.,Ltd. Address before: 510000 No. 6, Yinyi street, economic and Technological Development Zone, Guangzhou, Guangdong Applicant before: GUANGZHOU FENGHUA BIOENGINEERING Co.,Ltd. |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |