CN113791205B - 用于异相体系免疫反应的即用型封闭液及制备和应用 - Google Patents
用于异相体系免疫反应的即用型封闭液及制备和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113791205B CN113791205B CN202111062631.2A CN202111062631A CN113791205B CN 113791205 B CN113791205 B CN 113791205B CN 202111062631 A CN202111062631 A CN 202111062631A CN 113791205 B CN113791205 B CN 113791205B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ready
- heterogeneous system
- pvp
- buffer solution
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 32
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 26
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 25
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 22
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims abstract description 21
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 18
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 17
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 14
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 13
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 7
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 7
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 6
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 claims description 5
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 5
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 28
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 abstract description 5
- 238000011165 process development Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- 239000010408 film Substances 0.000 description 16
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 3
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012356 Product development Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000005536 corrosion prevention Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 2
- 125000000914 phenoxymethylpenicillanyl group Chemical group CC1(S[C@H]2N([C@H]1C(=O)*)C([C@H]2NC(COC2=CC=CC=C2)=O)=O)C 0.000 description 2
- 238000012123 point-of-care testing Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及生化免疫检测技术领域，具体公开了一种用于异相体系免疫反应的即用型封闭液及制备和应用。用于异相体系免疫反应的即用型封闭液包括如下质量百分比的成分：糖类物质为5％‑10％，PVP为0.1％‑1.0％，PVA为0.3％‑0.7％，惰性蛋白为0.3％‑1％，山梨醇为0.5％‑1％，防腐剂为0.05％‑0.15％，其余为辅助原料，所述辅助原料为缓冲液，所述缓冲液的浓度为10mM/L‑50mM/L，封闭液具有提高异相反应的检测结果的准确度以及精简工艺开发流程的优点。
Description
技术领域
本发明涉及生化免疫检测技术领域，更具体地说，它涉及一种用于异相体系免疫反应的即用型封闭液及制备和应用。
背景技术
POCT是体外诊断行业的一个细分领域，由于其相关产品设计简单、技术创新、检测便捷、能够快速取得诊断结果，所以该行业发展迅速。据有关报告，从免疫层析技术开始，POCT产品在医院、诊所和患者加重开始普及，并且技术更迭，逐渐向精密的微流控技术发展。微流控芯片相对于层析技术，能更少的消耗样品，结果重复性能好，检测范围更广，结果更佳稳定。
但是由于微流控芯片材料、结构和检测原理等方面的原因，一致存在一些较难攻克的技术难题。基于微流控芯片检测平台的生化免疫检测项目以及分子检测项目，多是固液相反应，即异相反应。相对于均相反应，异相反应的接触面积小、反应效率低、干扰因素多，很容易得到假阳性或者假阴性结果。
所以在设计产品时，需要找到增大接触面积、提高反应效率、减少干扰、提高检测结果准确性的方法。增大接触面积需要从芯片本身结构、以及产品原料上着手；提高反应效率和减少干扰、提高检测准确度，方法很多，但是优化时间长，可能还要从原材料、反应体系多方面去一一优化，耗费人力、物力、财力。
所以若能够设计开发一种试剂，直接作用于芯片的靶点上，得到提高反应效率和减少干扰、提高检测准确度的效果，即精简了工艺开发流程，也节约了开发时间，本发明就是一种能够用于异相体系免疫反应的，能够提高反应效率和减少干扰、提高检测准确度的，即用型封闭试剂。当前市面上的多款封闭剂，一般是需要加在生物质原材料溶液中，或者添加在样品垫中，产品开发过程需要多种优化途径，影响生物质原材料活性、影响整个体系稳定、影响液相的流动性质。
发明内容
为了提高异相反应的检测结果的准确度以及精简工艺开发流程，本发明提供一种用于异相体系免疫反应的即用型封闭液。
一种用于异相体系免疫反应的即用型封闭液，包括如下质量百分比的成分：糖类物质为5％-10％，PVP为0.1％-1.0％，PVA为0.3％-0.7％，惰性蛋白为0.3％-1％，山梨醇为0.5％-1％，防腐剂为0.05％-0.15％，其余为辅助原料，所述辅助原料为缓冲液，所述缓冲液的浓度为10mM/L-50mM/L。
通过采用上述技术方案，糖类物质能够增强反应信号，保护抗体作用；惰性蛋白主要降低非特异性吸附，糖类物质和惰性蛋白一起具有成膜作用；PVP大分子在反应体系中起到分散作用和助溶作用，PVA的作用为调节流动性，流动性得到控制后，能够有效阻止位点上形成气泡；山梨醇起到保湿作用，能够保护抗体，起到增强稳定性；防腐剂主要起抑菌防腐的作用，缓冲液的作为普通基质，在大量样本充满固相载体时，对整个体系起到pH缓冲，保持反应环境的稳定性。
优选的，所述糖类物质为海藻糖、蔗糖、葡萄糖的任意一种。
通过采用上述技术方案，可选择其中一种进行反应作用，其中海藻糖增强反应信号的效果最佳。
优选的，所述PVP可由羟乙基纤维素或者PAM替代。
通过采用上述技术方案，羟乙基纤维素或者PAM可替代PVP的效果，从而达到分散作用和助溶作用。
优选的，所述惰性蛋白为BSA、酪蛋白的任意一种。
通过采用上述技术方案，可选择其中一种惰性蛋白进行作用，其中BSA降低非特异性吸附的作用最佳。
优选的，所述防腐剂为PC300、叠氮钠的任意一种。
通过采用上述技术方案，可选择PC300、叠氮钠中的一种进行作用，其中PC300防腐剂的效果最佳，且山梨醇能和PC300起协同作用，提高防腐的效果。
优选的，所述缓冲液为为Hepes缓冲液、PE缓冲液、磷酸缓冲液的一种。
通过采用上述技术方案，可选择其中一种缓冲液进行作用提高本发明测试效果。
优选的，包括如下质量百分比的成分：海藻糖为5％，PVP为0.1％，PVA为0.5％，BSA为0.5％，山梨醇为0.5％，PC300为0.15％，其余为缓冲液。
通过采用上述技术方案，封闭液的反应信号最佳，且其余各项性能均较佳，检测位点反应信号最高、背景信号最低、流动时长符合要求、检测点无气泡干扰、能够保持22天的常温稳定性、封闭效果也最好。
优选的，所述海藻糖与BSA的比值为10：1。
通过采用上述技术方案，海藻糖和BSA一起使用能够提高成膜的效果，当海藻糖和BSA的比值为10：1时，成膜效果最佳。
一种用于异相体系免疫反应的即用型封闭液的制备，包括以下步骤：在辅助原料中添加糖类物质、PVP、PVA、惰性蛋白、山梨醇以及防腐剂，然后进行搅拌配制形成溶液。
通过采用上述技术方案，不需要将添加在生物质原材料中、不需要添加在样品垫中，只需要点加覆盖在固相靶点即可，且用量少，成膜性好，水溶性好，能够充分溶于血液样品、生物质流动性。
一种用于异相体系免疫反应的即用型封闭液的应用，包括以下步骤：将封闭液点加在微流控芯片上的检测位点且覆盖包被的生物质原材料，晾干形成可溶性的薄膜。
通过采用上述技术方案，封闭液覆盖包被的生物质原材料，晾干形成可溶性的薄膜，薄膜能够有效封闭靶点，避免非特异性反应，提高靶点特异性，增强反应效率的效果，增强生物原材料的稳定性。
综上所述，本发明具有以下有益效果：
1.本发明采用了糖类物、PVP、PVA、惰性蛋白、山梨醇、防腐剂、其余为缓冲液，糖类物质能够增强反应信号，保护抗体作用；惰性蛋白主要降低非特异性吸附，糖类物质和惰性蛋白一起具有成膜作用；PVP在反应体系中起到分散作用和助溶的作用，PVA在反应体系中起调节流速的作用流动性得到控制后，能够有效阻止位点上形成气泡；山梨醇起到保湿作用，能够保护抗体，起到增强稳定性；防腐剂主要起抑菌防腐的作用；且制得的封闭液不需要添加在生物质原材料中、不需要添加在样品垫中，只需要在点加覆盖在固相靶点即可，且用量少，成膜性好，水溶性好，能够充分溶于血液样品、生物质流动性；
2.本发明中海藻糖为5％，PVP为0.1％，PVA为0.5％，BSA为0.5％，山梨醇为0.5％，PC300为0.15％，其余为缓冲液，该组分和配比使得本发明的反应信号最佳，且各项性能较佳，封闭效果也最好；
3.本发明中的海藻糖和BSA的比值为10:1，此时，本发明的成膜效果最佳；
4.本发明异相体系免疫反应的即用型封闭液的使用方法，封闭液覆盖包被的生物质原材料，晾干形成可溶性的薄膜，薄膜能够有效封闭靶点，避免非特异性反应，提高靶点特异性，增强反应效率的效果，增强生物原材料的稳定性。
具体实施方式
当前市面上的多款封闭剂，一般是需要加在生物质原材料溶液中，或者添加在样品垫中，产品开发过程需要多种优化途径，有可能影响生物质原材料活性、影响整个体系稳定、影响液相的流动性质。发明人在研究中发现一种封闭液，该封闭液不需要添加在生物质原材料中、不需要添加在样品垫中，只需要在点加覆盖在固相靶点形成薄膜，便能够有效封闭靶点，避免非特异性反应，提高靶点特异性，增强反应效率的效果，增强生物原材料的稳定性。
以下结合实施例对本发明作进一步详细说明。
本发明均为市售。
实施例
实施例1-14
以下实施例1为例进行说明，用于异相体系免疫反应的即用型封闭液，包括以下步骤：
选择辅助原料的种类以及选择合适的浓度，本实施例中选择的辅助原料为Hepes缓冲液且浓度在于10mM/L，在Hepes缓冲液添加蔗糖、PVP、PVA、酪蛋白、山梨醇以及叠氮钠，然后在室温下，用玻璃棒搅拌15分钟，混合均匀形成封闭液，此时蔗糖的质量百分比为5％，PVP的质量百分比为0.1％，PVA的质量百分比为0.3％，酪蛋白的质量百分比为0.5％，山梨醇的质量百分比为0.5％，叠氮钠的质量百分比为0.05％，Hepes缓冲液为余量。
实施例1-14用于异相体系免疫反应的即用型封闭液的原料用量见表1。
表1-实施例1-4的原料用量表
实施例15-19
以下实施例15为例进行说明，用于异相体系免疫反应的即用型封闭液，包括以下步骤：
选择辅助原料的种类以及选择合适的浓度，本实施例中选择的辅助原料为Hepes缓冲液且浓度在于50mM/L，在Hepes缓冲液添加海藻糖、PVP、PVA、BSA、山梨醇以及PC300，然后在室温下，用玻璃棒搅拌15分钟，混合均匀形成封闭液，此时海藻糖的质量百分比为5％，PVP的质量百分比为0.1％，PVA的质量百分比为0.5％，BSA的质量百分比为0.5％，山梨醇的质量百分比为1％，PC300的质量百分比为0.01％，Hepes缓冲液为余量。
实施例15-19用于异相体系免疫反应的即用型封闭液的原料用量见表2。
表2-实施例15-19的原料用量表
对比例
对比例1-3以下对比1为例进行说明，用于异相体系免疫反应的即用型封闭液，包括以下步骤：
选择辅助原料的种类以及选择合适的浓度，本实施例中选择的辅助原料为Hepes缓冲液且浓度在于5mM/L，在Hepes缓冲液添加蔗糖、PVP、PVA、酪蛋白、山梨醇以及叠氮钠，然后在室温下，用玻璃棒搅拌15分钟，混合均匀形成封闭液，此时蔗糖的质量百分比为1％，PVP的质量百分比为0.05％，PVA的质量百分比为0.10％，酪蛋白的质量百分比为0.1％，山梨醇的质量百分比为0.1％，叠氮钠的质量百分比为0.01％，Hepes缓冲液为余量。
对比例1-3用于异相体系免疫反应的即用型封闭液的原料用量见表3。
表3-对比例1-3的原料用量表
应用例
将实施例1-19以及对比例1-3配置的封闭液点加在微流控芯片上的检测点且覆盖包被的生物质原材料，自然晾干形成可溶性的薄膜。
性能检测试验
检测方法/试验方法
将设置有封闭液薄膜的微流控芯片放置在自主研发的荧光免疫分析仪中进行荧光信号检测；
流动时间检测方法：高清摄像头录制流动视频进行计时。
观测气泡检测方法：目测、显微镜观测。
成膜性检测方法：目测、显微镜观测。
稳定性检测方法：将产品放入37℃温度条件下，保存。每天加相同浓度样本于不同放置时长的产品中，收集检测的荧光信号结果，最后对比信号值偏差，信号偏差在15％以内，认为产品性能稳定。偏差大于15％的放置时长的前一天，就是该保护液组分最长的稳定周期。检测结果表4所示：
表4-实施例1-19以及对比例1-3的检测结果表
经过发明人测试，葡萄糖与蔗糖可以等同替换，替换得到的实验效果相同；PVP与羟乙基纤维素或者PAM等同替换，替换得到的实验效果相同；Hepes缓冲液可与PE缓冲液、磷酸缓冲液等同替换，替换得到的实验效果相同。
根据实施例1-19与对比例1-3相比较，当糖类物质为5％-10％，PVP为0.1％-1.0％，PVA为0.3％-0.7％，惰性蛋白为0.3％-1％，山梨醇为0.5％-1％，防腐剂为0.05％-0.15％，缓冲液的浓度为10mM/L-50mM/L这个区间范围内的封闭液在不需要添加在生物质原材料中、不需要添加在样品垫中，只需要在点加覆盖在固相靶点，便可成膜性好，水溶性好，能够充分溶于血液样品、生物质流动性，保存时间长达十五天以上，满足实验所需要求。
根据实施例1-19之间相互对比，可以看出实施例17检测的综合效果相对较佳，当海藻糖为5％，PVP为0.1％，PVA为0.5％，BSA为0.5％，山梨醇为0.5％，PC300为0.15％时，是本发明最佳的配比的选择。
根据实施例13和实施例16相比，两种封闭液的山梨醇的含量相同，防腐剂的含量相同；单独测试时，防腐剂选择叠氮钠或者PC300的两者的防腐效果相似，但是实施例13和实施例16的常温稳定周期的测试结果来看选择PC300的防腐效果会更好一些，本发明发明人发现PC300与叠氮钠两者之间具有协同作用，共同提高封闭液的保存时间。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (7)
1.一种用于异相体系免疫反应的即用成膜型封闭液，其特征在于：包括如下质量百分比的成分：糖类物质为5％-10％，PVP为0.1％-1.0％，PVA为0.3％-0.7％，惰性蛋白为0.3％-1％，山梨醇为0.5％-1％，防腐剂为0.05％-0.15％，其余为辅助原料，所述辅助原料为缓冲液，所述缓冲液的浓度为10mM/L-50mM/L；所述糖类物质为海藻糖、蔗糖、葡萄糖的任意一种；所述惰性蛋白为BSA、酪蛋白的任意一种；所述防腐剂为PC300、叠氮钠的任意一种。
2.根据权利要求1所述的用于异相体系免疫反应的即用成膜型封闭液，其特征在于：所述PVP可由羟乙基纤维素或者PAM替代。
3.根据权利要求1所述的用于异相体系免疫反应的即用成膜型封闭液，其特征在于：所述缓冲液为Hepes缓冲液、PE缓冲液、磷酸缓冲液的任意一种。
4.根据权利要求3所述的用于异相体系免疫反应的即用成膜型封闭液，其特征在于：包括如下质量百分比的成分：海藻糖为5％，PVP为0.1％，PVA为0.5％，BSA为0.5％，山梨醇为0.5％，PC300为0.15％，其余为缓冲液。
5.根据权利要求4所述的用于异相体系免疫反应的即用成膜型封闭液，其特征在于：所述海藻糖:BSA的比值为10：1。
6.权利要求1-5任意一项所述即用成膜型封闭液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：在辅助原料中添加糖类物质、PVP或羟乙基纤维素或PAM、PVA、惰性蛋白、山梨醇以及防腐剂，然后进行搅拌配制形成溶液。
7.权利要求1-5任意一项所述即用成膜型封闭液的应用，其特征在于，包括以下步骤：将封闭液点加在微流控芯片上的检测位点且覆盖包被的生物质原材料，晾干形成可溶性的薄膜。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111062631.2A CN113791205B (zh) | 2021-09-10 | 2021-09-10 | 用于异相体系免疫反应的即用型封闭液及制备和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111062631.2A CN113791205B (zh) | 2021-09-10 | 2021-09-10 | 用于异相体系免疫反应的即用型封闭液及制备和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113791205A CN113791205A (zh) | 2021-12-14 |
| CN113791205B true CN113791205B (zh) | 2024-02-20 |
Family
ID=78880012
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111062631.2A Active CN113791205B (zh) | 2021-09-10 | 2021-09-10 | 用于异相体系免疫反应的即用型封闭液及制备和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113791205B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102331494A (zh) * | 2011-06-16 | 2012-01-25 | 广州艺佳生物科技有限公司 | 一种用于微孔板的封闭稳定剂 |
| CN102426231A (zh) * | 2011-09-15 | 2012-04-25 | 长沙三诺生物传感技术股份有限公司 | 一种免疫层析试条用封闭剂组合物以及一种免疫层析试条 |
| WO2012105612A1 (ja) * | 2011-02-01 | 2012-08-09 | 田中貴金属工業株式会社 | 食品中の動物肉由来タンパク質の免疫クロマト検出方法 |
| CN113189324A (zh) * | 2021-03-03 | 2021-07-30 | 广州市丰华生物工程有限公司 | 一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2537968A1 (en) * | 2003-09-04 | 2005-03-17 | Cedi Diagnostics B.V. | Methods and kits for detection of prion diseases |
-
2021
- 2021-09-10 CN CN202111062631.2A patent/CN113791205B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012105612A1 (ja) * | 2011-02-01 | 2012-08-09 | 田中貴金属工業株式会社 | 食品中の動物肉由来タンパク質の免疫クロマト検出方法 |
| CN102331494A (zh) * | 2011-06-16 | 2012-01-25 | 广州艺佳生物科技有限公司 | 一种用于微孔板的封闭稳定剂 |
| CN102426231A (zh) * | 2011-09-15 | 2012-04-25 | 长沙三诺生物传感技术股份有限公司 | 一种免疫层析试条用封闭剂组合物以及一种免疫层析试条 |
| CN113189324A (zh) * | 2021-03-03 | 2021-07-30 | 广州市丰华生物工程有限公司 | 一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113791205A (zh) | 2021-12-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mascini et al. | Urease coupled ammonia electrode for urea determination in blood serum | |
| US4273867A (en) | Method and reagent for counteracting lipemic interference | |
| Gibbons et al. | Homogeneous enzyme immunoassay for proteins employing β-galactosidase | |
| CN102135535B (zh) | 一种直接进行半定量分析的免疫胶体金属检测技术及其制备方法和用途 | |
| JP4486059B2 (ja) | 免疫測定用ラテックス組成物 | |
| CN102089660A (zh) | 键合有反应性物质的微粒的稳定化方法及含有该微粒的试剂 | |
| Martinek et al. | Simplified estimation of leucine aminopeptidase (LAP) activity | |
| CN113791205B (zh) | 用于异相体系免疫反应的即用型封闭液及制备和应用 | |
| JP4536304B2 (ja) | 診断試験用球体の調製 | |
| CN116087504B (zh) | 免疫磁珠保护液、其制备方法及应用 | |
| Gebauer et al. | Ion selective electrode estimation of avidin and biotin using a lysozyme label | |
| KR900002840B1 (ko) | 안정화된 효소 결합체 조성물 | |
| CN101955538B (zh) | 一种链霉素抗体及其应用 | |
| JPH02194360A (ja) | カルボキシル基含有重合体を含む免疫化学試験用剤 | |
| JPS5836954B2 (ja) | 酵素の安定化剤 | |
| CN109799352B (zh) | 化学发光试剂及其在免疫检测中应用 | |
| EP0103628A1 (en) | Stabilization of diazonium salt solutions | |
| CN107607724B (zh) | 一种用于补体c3测定试剂盒的复合稳定剂及其应用 | |
| US3990946A (en) | Substrate for the determination of desoxy-ribonuclease | |
| CN108918891B (zh) | 与人类蛋白nrf1相互作用的结核蛋白及其应用 | |
| Winkles et al. | Enhanced-latex-agglutination assay for C-reactive protein in serum, with use of a centrifugal analyzer. | |
| JP4163056B2 (ja) | 血中インスリン濃度測定用添加剤組成物及びそれを含む採血管 | |
| CN101290315B (zh) | 一种克伦特罗的酶联免疫检测方法和试剂盒及其制备方法 | |
| JP2749104B2 (ja) | アミンオキシドを含有する免疫化学的アツセイ用の試薬 | |
| JP4371556B2 (ja) | 検査キット |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |