CN113151580A - 一种用于检测新型冠状病毒的三重实时荧光rt-pcr引物、探针及检测方法 - Google Patents

一种用于检测新型冠状病毒的三重实时荧光rt-pcr引物、探针及检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种用于三重实时荧光RT‑PCR核酸扩增技术检测新型冠状病毒(2019‑nCoV)的荧光RT‑PCR引物和荧光探针以及该荧光RT‑PCR引物和荧光探针在检测新型冠状病毒(2019‑nCoV)中的应用，该荧光RT‑PCR引物和荧光探针可以快速、定性检测咽拭子样本中的新型冠状病毒(2019‑nCoV)，同时检测新型冠状病毒(2019‑nCoV)的两个目标基因且能够有效监控采样有效性；该荧光RT‑PCR引物和荧光探针特异性更强、灵敏度更高，完全满足疫情快速诊断和全程监控，为疫情早诊断、早治疗、降低病死率以及控制疫情争取时间。

Description

一种用于检测新型冠状病毒的三重实时荧光RT-PCR引物、探 针及检测方法
技术领域
本发明属于体外核酸检测领域，具体涉及一种用于检测咽拭子样品中新型冠状病毒(2019novel Coronavirus，2019-nCoV)的三重荧光RT-PCR引物、探针和检测方法。
背景技术
新型冠状病毒急性呼吸疾病(2019-nCoV acute respiratory disease)是由新型冠状病毒(2019novel Coronavirus，2019-nCoV)引起的一种较严重的呼吸系统疾病，是继SARS-CoV及MERS-CoV后一种新发现的传播力强、可感染人的冠状病毒。新型冠状病毒(2019-nCoV)主要症状表现为发热、乏力、干咳。少数伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状，与其它呼吸道病毒感染症状类似，很难区分。而且部分患者仅表现为低热、轻微乏力等，无肺炎表现,临床上没有症状，但具有传染性，无疑进一步加大了2019-nCoV病毒的防控难度。目前尚无针对新型冠状病毒(2019-nCoV)感染的有效抗病毒治疗药物以及疫苗。因此，建立快速诊断新型冠状病毒(2019-nCoV)感染的实验室方法显得尤为重要。
传统的检测方法检测周期长，且分离阳性率低，往往会延误病程和疫情的控制。分子生物学诊断方法可以在病毒血症时期检测到病毒的感染，并且快速灵敏，能够应用于新型冠状病毒(2019-nCoV)病毒的检测。目前，用于病毒检测的分子生物学方法主要是实时荧光RT-PCR法，能够实现在2小时内检测确证病毒核酸。同时，样本的质量好坏对于检测结果有很大的影响，尤其是对于咽拭子的采集，需要刮取到足够数量的人体上皮细胞，才能保证检测结果的可靠性，避免检测结果的假阴性出现。
发明内容
本发明目的是提供一种用于多重实时荧光RT-PCR核酸扩增技术检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的三重实时荧光RT-PCR引物和荧光探针以及该荧光RT-PCR引物和荧光探针在检测新型冠状病毒(2019-nCoV)中的应用，该荧光RT-PCR引物和荧光探针可以快速、定性检测咽拭子、鼻拭子、痰液等样本中的新型冠状病毒(2019-nCoV)，并能监控采样的有效性。
本发明提供的三重荧光RT-PCR引物和荧光探针，应用该荧光RT-PCR引物和荧光探针检测新型冠状病毒(2019-nCoV)时，利用不同颜色的荧光标记，在同一个反应管里能够同时检测病毒的Orf1ab基因和N基因，并能够检测人核糖核酶P基因，从而监控采样的有效性，这是目前商品化试剂盒没有的。
本发明可以实现单管多靶标、快速检测新型冠状病毒(2019-nCoV)，与其它检测技术相比具有以下优点：
1、全封闭反应，实时监控荧光数据，无需后续处理，避免污染，保证检测结果的可靠性；2、同时检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的2个目标基因，避免出现假阳性或假阴性结果；3、加入人核糖核酶P基因内对照，有效监控样本质量，避免出现假阴性结果；4、本发明提供的三重荧光RT-PCR引物和荧光探针特异性更强、灵敏度更高，完全满足疫情快速诊断和全程监控，为疫情早诊断、早治疗、降低病死率以及控制疫情争取时间。
附图说明
图1为灵敏度实验结果图。
图2为临床阳性样品1检测结果图。
图3为临床阳性样品2检测结果图
图4本方法测试结果图
图5其他商品化试剂盒比较结果图。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中未作具体说明的分子生物学实验方法，均参照《分子克隆实验指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的三重实时荧光RT-PCR 引物、探针的设计
针对于新型冠状病毒(2019-nCoV)的Orf1ab基因、N基因以及人核糖核酶P基因特异保守区域为靶标区域，设计特异性引物及荧光PCR探针，其序列分别是：
SEQ ID №：1
5′-TGGAAAGGTTATGGCTGTAGTTGTG-3′
SEQ ID №：2
5′-CACTTACACCGCAAACCCGTT-3′
SEQ ID №：3
5′FAM-CAACTCCGCGAACCCATGCTTCAGTC-BHQ1-3′
SEQ ID №：4
5′-ATTGGCCGCAAATTGCACA-3′
SEQ ID №：5
5′-TCTTCTGTCTCTGCGGTAAGGC-3′
SEQ ID №：6
5′HEX-CCCCCAGCGCTTCAGCGTTCTTC-BHQ1-3′
SEQ ID №：7
5′-CTGTTTGGGCTCTCTGAAAGTG-3′
SEQ ID №：8
5′-AGAAGCGCTGCTCGGCA-3′
SEQ ID №：9
5′CY5-CGCCAAGGCTGCGGTGTCCACC-BHQ1-3′
实施例2、一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的三重荧光RT-PCR 方法的建立
(一)三重荧光RT-PCR反应
1)样本RNA的提取：所述样本RNA可以采用德国凯杰生物工程有限公司的viralRNA核酸提取试剂盒，按照试剂盒说明书进行提取。
2)以步骤1)制备的待检测样本RNA为模板，加入深圳联合医学科技有限公司试剂盒Quanti Probe One-Step RT-qPCR kit中的RT-qPCR Buffer反应液、酶混合液等配成三重RT-PCR反应体系，进行扩增反应,。
其中反应体系为25μl，具体如下：
Figure BDA0002733963120000041
Figure BDA0002733963120000051
(二)荧光检测
将上述反应管放置于具有三个荧光通道的荧光PCR检测仪进行荧光检测，具体反应程序如下：
Figure BDA0002733963120000052
阴性对照：FAM、HEX及CY5通道无扩增曲线，无Ct值或Ct值为40；
阳性对照：FAM、HEX及CY5通道有扩增曲线，且Ct值均≤26；
上述对阳性对照和阴性对照的要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需要重新进行实验。
4)样品检测结果判读：
当所检测的样品FAM通道、HEX通道均有扩增曲线，且Ct值≤35，CY5 通道有扩增曲线，可判定新型冠状病毒(2019-nCoV)阳性；
当所检测的样品FAM通道、HEX通道均有扩增曲线，且Ct值在35-40 之间，CY5通道有扩增曲线，需重新检测，如果Ct值仍在35-40之间，可判定新型冠状病毒(2019-nCoV)阳性；
当所检测的样品FAM通道、HEX通道中只有一个通道有扩增曲线，CY5 通道有扩增曲线，则可判定新型冠状病毒(2019-nCoV)疑似；
当所检测的样品FAM、HEX通道均无扩增曲线，且Ct值显示为Undet 或0，CY5通道有扩增曲线，可判定新型冠状病毒(2019-nCoV)阴性；
当所检测的样品cy5通道无扩增曲线，且Ct值显示为Undet或0，则该样品不合格，建议重新采样。
(三)灵敏度实验
该实验验证本检测方法的最低检测限，采用浓度为2.0×109copies/mL、 2.0×108copies/mL、2.0×107copies/mL、2.0×106copies/mL、2.0×105copies/mL、 2.0×104copies/mL、2.0×103copies/mL、2.0×102copies/mL等的质粒阳性对照作为检测限参比品，通过该实验表明该检测方法的FAM通道及HEX通道的检测限均达到200copies/mL，具体实验结果如图1所示。图1中109拷贝、108拷贝、107拷贝、106拷贝、105拷贝、104拷贝、103拷贝、102拷贝分别表示浓度为2.0×109copies/mL、2.0×108copies/mL、2.0×107copies/mL、2.0×106copies/mL、2.0×105copies/mL、2.0×104copies/mL、2.0×103copies/mL、 2.0×102copies/mL的质粒阳性对照扩增曲线，阴性为阴性质控品，横坐标表示 Ct值，纵坐标表示荧光值。图1所示结果表明，该检测方法的检测限达到 200copies/mL。
(四)特异性实验
选择与新型冠状病毒(2019-nCoV)具有相同感染部位的常见病原体作为特异性参考品。特异性参考品分别为甲型H1N1流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒。利用Qigen公司的Viral病毒RNA提取试剂盒提取以上样本中的RNA作为模板进行实验。结果表明，这4种特异性参考品均未有扩增曲线，说明该检测方法的特异。
(五)临床阳性样本检测实验
选择两例经过国家药监局批准的商品化试剂盒检测为新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸阳性的样本核酸对该方法进行检测、验证。具体实验结果如图2，3所示。图2，3中横坐标表示Ct值，纵坐标表示荧光值。图2，3所示结果表明，该检测方法能够检出新型冠状病毒(2019-nCoV)。
序列表
<110> 宁波国际旅行卫生保健中心（宁波海关口岸门诊部）
<120> 一种用于检测新型冠状病毒的三重实时荧光RT-PCR引物、探针及检测方法
<141> 2020-02-10
<160> 9
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
tggaaaggtt atggctgtag ttgtg 25
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
cacttacacc gcaaacccgt t 21
<210> 3
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 3
caactccgcg aacccatgct tcagtc 26
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 4
attggccgca aattgcaca 19
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 5
tcttctgtct ctgcggtaag gc 22
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 6
cccccagcgc ttcagcgttc ttc 23
<210> 7
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 7
ctgtttgggc tctctgaaag tg 22
<210> 8
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 8
agaagcgctg ctcggca 17
<210> 9
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 9
cgccaaggct gcggtgtcca cc 22

Claims (6)

1.一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的引物对，其特征在于，所述引物对包括序列表中SEQ ID №：1、SEQ ID №：2、SEQ ID №：4、SEQ ID №：5、SEQ ID №：7、SEQ ID №：8所示核苷酸序列。
2.一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的探针，其特征在于，所述探针包括序列表中SEQ ID №：3、SEQ ID №：6、SEQ ID №：9所示核苷酸序列。
3.一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的组合物，其特征在于，所述组合物包括下述1)和2)：
1)权利要求1所述的引物对；
2)权利要求2所述的探针；
3)权利要求1和权利要求2所述的引物、探针SEQ ID №：1、SEQ ID №：2、SEQ ID №：3、SEQ ID №：4、SEQ ID №：5、SEQ ID №：6、SEQ ID №：7、SEQ ID №：8、SEQ ID №：9终浓度比例为：4:4:2:4:4:2:4:4:1.5。
4.一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括下述1)-3)所述中的至少一种：
1)权利要求1所述的引物对；
2)权利要求2所述的探针；
3)权利要求3所述组合物。
5.权利要求1所述引物对、权利要求2任一所述探针、权利要求3所述组合物、权利要求4任一所述检测方法在检测新型冠状病毒(2019-nCoV)中的应用。
6.权利要求1所述引物对、权利要求2任一所述探针、权利要求3所述组合物、权利要求4任一所述检测方法在制备检测新型冠状病毒(2019-nCoV)相关产品中的应用。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107557496A (zh) * 2017-10-13 2018-01-09 宁波国际旅行卫生保健中心 一种用于检测MERS‑CoV病毒的荧光RT‑RAA引物、探针及检测方法
CN111057797A (zh) * 2020-01-19 2020-04-24 华中科技大学同济医学院附属同济医院 新型冠状病毒2019-nCoV实时荧光定量PCR检测引物和探针、试剂盒和方法
CN111187860A (zh) * 2020-02-25 2020-05-22 深圳闪量科技有限公司 新型冠状病毒多重pcr快速检测试剂盒
CN111334609A (zh) * 2020-03-04 2020-06-26 河南省儿童医院郑州儿童医院 用于检测2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因对应mRNA的引物组及试剂盒
CN111394519A (zh) * 2020-04-13 2020-07-10 南京实践医学检验有限公司 基于数字pcr的新型冠状病毒的核酸定量检测试剂盒及应用
CN111500776A (zh) * 2020-04-29 2020-08-07 湖南润美基因科技有限公司 新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测引物和探针、试剂盒和方法
CN111621604A (zh) * 2020-06-24 2020-09-04 上海五色石医学研究股份有限公司 一种新型冠状病毒核酸检测引物探针组合物、试剂盒及方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107557496A (zh) * 2017-10-13 2018-01-09 宁波国际旅行卫生保健中心 一种用于检测MERS‑CoV病毒的荧光RT‑RAA引物、探针及检测方法
CN111057797A (zh) * 2020-01-19 2020-04-24 华中科技大学同济医学院附属同济医院 新型冠状病毒2019-nCoV实时荧光定量PCR检测引物和探针、试剂盒和方法
CN111187860A (zh) * 2020-02-25 2020-05-22 深圳闪量科技有限公司 新型冠状病毒多重pcr快速检测试剂盒
CN111334609A (zh) * 2020-03-04 2020-06-26 河南省儿童医院郑州儿童医院 用于检测2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因对应mRNA的引物组及试剂盒
CN111394519A (zh) * 2020-04-13 2020-07-10 南京实践医学检验有限公司 基于数字pcr的新型冠状病毒的核酸定量检测试剂盒及应用
CN111500776A (zh) * 2020-04-29 2020-08-07 湖南润美基因科技有限公司 新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测引物和探针、试剂盒和方法
CN111621604A (zh) * 2020-06-24 2020-09-04 上海五色石医学研究股份有限公司 一种新型冠状病毒核酸检测引物探针组合物、试剂盒及方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YAFEI ZHANG等: "Discrimination of False Negative Results in RT-PCR Detection of SARS-CoV-2 RNAs in Clinical Specimens by Using an Internal Reference", 《VIROLOGICA SINICA》 *
佚名: "SARS-COV-2 MOLECULAR ASSAY EVALUATION: RESULTS", 《FIND》 *

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